Белковые маркеры в сортовой идентификации риса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.05, кандидат биологических наук Дубина, Елена Викторовна

• Дубина, Елена Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2003

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Дубина, Елена Викторовна

ВВЕДЕНИЕ '

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1 Понятие молекулярного маркера

1.1.1 Белковые маркеры сельскохозяйственных культур

1.1.2 Запасные белки злаков как маркеры 13 1. 1. 3 Виды запасных белков

1.1.4 Проламины и их свойства

1.1.5 Проламины зерновки риса 21 1.2 История изучения белковых систем растений электрофоретическими методами ; '

1. 3 Методы исследования белковых систем

1. 3. 1 Электрофорез как метод сортовой идентификации т 1.3.2 Иммунохимические методы исследования белковых систем

1. 3. 3 Изоэлектрофокусирование как наиболее информативный метод изучения полиморфизма проламинов риса на уровне сорта

2 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

2. 1 Материал исследований

2.2 Методы исследований. '

2.2. 1 Методика изоэлектрофокусирования '

• 2.2.2 Методика вертикального электрофореза (одномерного) в кислом (ацетатном, рН 3,1) буфере

2.2.3 Методика вертикального одномерного ЭБЭ - электрофореза

2.3 Математическая обработка данных

3 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ: РЕЗУЛЬТАТЫ ОПЫТОВ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1 Сортовая идентификация риса методом изоэлектрофокусированием

3. 1. 1 Составление белковых формул сортов риса по спектрам спирторастворимых белков (проламинов) зерновки

3.1.2 Выявление биотипного состава проламинов зерновки риса методом ИЭФ сортов выращенных в условиях Краснодарского края

3. 2. Составление эталонных белковых формул сортов риса по спектрам общего белка зерновки методом электрофореза (одномерного) в кислом (ацетатном, рН 3,2) буфере

3. 3 Сортовая идентификация риса методом БОБ-электрофореза (одномерного)

3. 4 Расчет экономически выгодного электрофоретического метода для проведения сортовой идентификации риса

3. 5 Электрофоретические методы в выявлении зависимости между признаками «структура запасных белков» и «окрашенный перикарп» "

3.6 Кластеризация сортов риса '

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Белковые маркеры в сортовой идентификации риса»

Рис занимает значительное место среди возделываемых сельскохозяйственных культур в России и является самой стабильной по урожайности зерновой культурой. Промышленная реализация потенциала сорта риса возможна только при условиях высоких посевных и сортовых качеств семенного материала риса. Получение чистосортных семян - залог хорошего урожая. Для их получения разработана специальная система семеноводства, позволяющая эффективно бороться с сортовыми примесями. Однако, в последнее время, при возделывании риса высокую актуальность приобрела проблема краснозерных форм, особенно фенокопий районированных сортов риса в производственных и семеноводческих посевах, которые не обнаруживаются при сортовых прополках. Информацию о ней можно получить, используя методы молекулярного маркирования. Перспективным методом в решении этих проблем многих сельскохозяйственных культур является использование в качестве генетических маркеров полиморфных запасных белков семян [Конарев, 1983; Созинов, 1985].

В ответ на изменяющиеся условия окружающей среды Запасные белки злаков претерпевают минимальные изменения по сравнению с другими белковыми системами (ферменты) [Иванова, 1983; Иванова, 1987; Конарев, 1983; Конарев В.Г., 1998; Созинов, 1985].

Электрофоретический анализ белков семян различных сельскохозяйственных культур в связи с проблемами селекции, семеноводства и семенного контроля показал возможность идентифицировать сорта, линии, биотипы по белковому фенотипу; оценивать чистоту и подлинность сорта, генотипическую структуру естественных и сортовых популяций и регистрировать их в виде белковых формул [Созинов, 1985].

На основании данных литературы [Hibino, 1989; Kim, 1988; Masumura, 1989] и результатов собственных исследований высокой разрешающей способностью среди электрофоретических методов, которые позволяют проводить сортовую дифференциацию Oryza sativa L. запасных белков семян обладают изоэлектрофокусирование (ИЭФ), электрофорез (одномерный) в кислом (рН 3,1) буфере. Эти методы позволяют идентифицировать морфологически неразличимые биотипы запасных белков семян, выделять их и поддерживать исходный состав сорта в процессе семеноводства.

Вместе с тем, характеризуя эти методы сортовой идентификации, следует учитывать, что они ни в коей мере не умаляют значение других полевых и лабораторных методов идентификации сортовой принадлежности, а являются ценным дополнением к ним.

Данные, полученные лабораторией семеноводства и семеноведения ВНИИ риса, показывают, что .каждый процент примеси красных зерен в семенах снижает урожай на 1,5 - 2,3%. [Методические рекомендации, ВНИИ риса,-2002 г.]. Растения этих форм легко поражаются пирикулярией и зачастую служат источником заболевания районированных сортов, отрицательно влияя на продуктивность сортов и значительно ухудшают качество крупы.

Ввиду высокой актуальности проблемы засоренности производственных посевов риса краснозерными формами для ее решения необходим комплексный научно-производственный подход, который предполагает глубокое знание генетических причин возникновения краснозерности. Особое значение здесь приобретает технология молекулярного маркирования. Создание белковых маркеров, тесно сцепленных с признаком «окрашенный перикарп», позволит проводить массовый скрининг растений- родоначальников семей в первичном семеноводстве, повысив эффективность контроля краснозерной примеси.

Основной целью настоящего исследования является изучение полиморфизма запасных белков зерновки российских сортов риса электрофоретическими методами для использования этих белков в качестве генетических маркеров в сортовой идентификации и разработать оптимальную систему сортовой идентификации и оценки сортовой чистоты на основе электрофоретических методов запасных белков семян. '

Для достижения указанной цели необходимо было решить следующие задачи: 1. Провести эмпирический поиск оптимальной и дешевой электрофоретической методики, основанной на изучении полиморфизма запасных белков зерновки для идентификации российских сортов риса. 2. Составить эталонные белковые формулы сортов pиca^ с которыми ведется семеноводческая работа в Краснодарском крае.

3. Выявить биотипный состав проламинов зерновки сортов риса методом ИЭФ.

4. Изучить зависимость между признаками «структура запасных белков» и «окраска перикарпа зерновки».

Научная новизна. При изучении полиморфизма запасных белков зерновки риса электрофоретическими методами [ИЭФ, одномерный БОБ- электрофорез и электрофорез (одномерный) в кислом (ацететном, рН 3,2) буфере] найден оптимальный наиболее дешевый метод сортовой идентификации риса -одномерный электрофорез.в кислом (рН 3,2) буфере. '

В рамках данного исследования впервые проведена паспортизация районированных в Краснодарском крае сортов риса с привлечением методов молекулярного маркирования, определен биотипный состав проламинов зерновки этих сортов методом ИЭФ. Составлены эталонные белковые формулы изученных в данной работе сортов методами ИЭФ и электрофореза (одномерного) в кислом (ацетатном, рН 3,1) буфере.

Апробирование методов ИЭФ и электрофореза в кислом (рН 3,2) буфере запасных белков позволило впервые идентифицировать зону ИЭФ-спектра проламинов зерновки и зону ЭФ- спектра общего белка ((электрофорез в кислом буфере), специфичную для краснозерных форм риса:

Практическая значимость. Эталонные белковые формулы используемых в данной работе сортов риса на основе ИЭФ-анализа и электрофореза в кислом буфере запасных белков зерновки позволят контролировать сортовую чистоту риса, как в системе первичного семеноводства, так и в условиях производственного выращивания (посевов).

Апробация работы. Основные результаты исследований доложены на: заседаниях методической комиссии селекционного центра ВНИИ риса (2000 -2003 г.г.); 111 съезде биохимического общества России (Россия, г. Санкт-Петербург, 26. 06. - 1.07. 2003 г.); Международной научно - практической конференции «Трансгенные растения - новое направление в биологической защите растений» (Россия, г. Краснодар, ВНИИ БЗР, 1.06, 2002 г.); Международном симпозиуме по генетическим ресурсам и селекции риса в Европе и странах с умеренным климатом (Краснодар, ВНИИ риса, 3 — 8.09.2001); Международной научной интернет- конференции (г. Ставрополь, СГАУ, июнь - август, 2002 г.).

Публикации. По материалам представленной работы опубликовано 8 печатных работ.

Объем и структура диссертации. Диссертация изложена на 114 страницах машинописного текста и состоит из введения, трех глав, выводов и предложений для селекции и семеноводства. Работа иллюстрирована 59 рисунками, 16 таблицами. Список литературы включает 144 наименования, в том числе 81 -иностранных авторов. '

Заключение диссертации по теме «Селекция и семеноводство», Дубина, Елена Викторовна

выводы

1. Подтверждена полиморфная природа спирторастворимых белков зерновки риса у отечественных сортов риса при сравнительном изучении их методами изоэлектрофокусированием и электрофорезом в кислом (рН 3,2) буфере.

2. Показана возможность идентификации сортов риса на основе высокой степени внутривидового полиморфизма спирторастворимых белков зерновки по специфичности их ИЭФ спектров и общего белка по специфичности электрофоретического спектра методом электрофореза в кислом (рН 3,2) буфере.

3. Найдена оптимальная экономически выгодная система сортовой идентификации риса на основе электрофореза запасных белков зерновки в кислом (рН 3,2) буфере.

4. Составлены эталонные белковые формулы проламинов (методом ИЭФ) и общего белка (методом электрофореза в кислом буфере) зерновки сортов, районированных в Краснодарском крае.

5. Установлено, что все изученные в данной работе сорта, на основе ИЭФ — анализа проламинов зерновки, совмещают в себе белковые признаки обоих подвидов indica и japónica, независимо от подвидовой принадлежности по морфологическим признакам.

6. Установлено, что изученные сорта риса гетерогенны по составу проламинов. Определены преобладающие биотипы для каждого изученного сорта в условиях Краснодарского края.

7. Впервые методами изоэлектрофокусирования и электрофорезом в кислом буфере идентифицированы зоны спектра запасных белков зерновки специфичные для краснозерных форм риса

8. Установлена зависимость между признаками «окраска перикарпа» и «состав проламинов» по результатам ИЭФ и электрофореза в кислом (рН 3,2) буфере, проведенных на сортах селекции ВНИИ риса и их краснозерных «фенокопиях».

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ПРАКТИЧЕСКОГО ИСПОЛЬЗОВАНИЯ

Использовать эталонные белковые формулы сортов риса для оценки сортовой чистоты в системе первичного семеноводства и производственных посевах.

Использовать полиморфизм запасных белков зерновки для маркирования агрономически важных признаков.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Дубина, Елена Викторовна, 2003 год

1. Алексеенко А. Ю., Сичкарь В. И., Тимохина Е. А. и др. Консервативность субъединичного состава глицинина у разных образцов сои культурной и дикой уссурийской // Генетика.- 1985. XXI.-№7.-С. 1185-1191.

2. Алексеенко А. Ю., Седова Т. С., Николаев И. В. и др. Полиморфизм запасных белков многолетней сои подрода Glycine // Генетика.- 1987. XXIII.-№ 1.-С. 135- 142. ' ,- «

3. Аверкина Р. Ф. Приготовление антигенов и получение иммуносывороток / В кн. лабораторные методы исследования в неинфекционной иммунологии. М., 1967.- С. 55 — 56.

4. Баранов О. К. Иммунохимический анализ эволюции белков. //Усп. совр. биол., 1972.- № 4 (6).- С. 420 438.

5. Барнаков Н. В. Научные основы семеноводства зерновых культур. Новосибирск, 1982.- 249с.

6. Вавилов Н. И. Селекция как наука/ Избран, произ. Л., 1967.- Т. 1.- С. 328 -342.- «

7. Вальков В. Ф., Штомпель Ю. А., Трубилйн И. Т, Котляров Н. С., Соляник Г. М. Рисовые почвы // В кн. почвы Краснодарского края их использование и охрана.- Ростов — на Дону, 1996.- 344с.

8. Войлоков А. В. Генетический контроль изоферментов высших растений// Успехи современной генетики.- 1978.- Т. 4.- С. 150 — 170.

9. Гаврилюк И. П., Губарева Н. К., Конарев В .Г. Выделение, фракционирование и идентификация белков, используемых в геномном анализе культурных растений //. Тр. по прикл бот., ген. и сел.- 1973. № 1.- С. 249-281. /

10. Гусев А. Н., Цветков В. С. К технике постановки реакции преципитации в агаре // Лабораторное дело.- 1961.- №2.- С. 43 45.

11. Доспехов Б. А. Планирование полевого опыта и статистическая обработка его данных.- М.: Колос, 1972.- 207с.

12. Доспехов Б. А. Методика полевого опыта (с осйовами статистической обработки результатов исследований). — 5-é изд., доп. и перераб. М.: Агропромиздат, 1985.-351с.

13. Журбицкий 3. И. Теория и практика вегетационного опыта.- М.: Наука, 1968.- 260 с.

14. Иванов Н. Н Проблема белка в растениеводстве. М., 1947.- 112с.

15. Иванова Д. И. Иммунохимическое изучение водо солерастворимых белков зерновки риса в связи с вопросами эволюции и таксономии культурных видов рода Oryza L. // Тр. по прикл. бот., ген. и сел.- 1979. № 3.-С. 135-144. • '

16. Иванова Д. И. Идентификация генома А у 'представителей рода Oryza по белкам зерновки // Вестн. с. — х. науки,- 1980. №9.- С. 63 — 67.

17. Иванова Д. И. Подвидовая дифференциация Oryza sativa L. по результатам иммунохимического анализа белков зерна // С. — х. биология, 1980. XV.- №6.- С. 874 877.

18. Иванова Д.И. Полиморфизм спирторастворимого белка зерновки риса и перспективы его использование в оценке внутривидового разнообразия Oryza sativa L. // С. х. биолошя.- 1983. №4.- С. 41 - 45.

19. Иванова Д. И. Идентификация геномов, субгеногЛов и подвидов риса по белкам зерновки // С. х. биология.- 1986. №7,- С. 3- 9.

20. Иванова Д. И. Идентификация геномов, субгеномов и подвидов риса по водорастворимым белкам зерновки // С.-х. биология.- 1987а. №2.- С.27-34.

21. Иванова Д. И. Идентификация геномов, субгеномов и подвидов риса по щелочерастворимым белкам зерновки // С.-х. биология.- 1987в. №3.-С. 13- 18.

22. Иванова Д. И. Полипептидный состав проламина и глютелина в изучении генофонда культурного риса // С. — х. биология.- 1992. №3.- С.71.79. ' ' 'i

23. Иванова Д.И. Идентификация и регистрация сортов риса по спирторастворимым белкам зерновки // Метод, указ.- С Пб, 2000.- С. 90-97.

24. Иванова Д. И., Репьев С. И. Глобулины зерновки риса и подвидовая дифференциация Oryza sativa L. // Физиол. и биохим. культ, раст.- 1981.Т. 13.-С. 394-398.

25. Имшенецкий Е.И. Сравнительное изучение белков зерна пленчатых и голозерных сортов ячменя. // Науч. техн. бюл. ВСТИ.- 1971. Вып. 15.1. С. 66-67. ' 'i

26. Комплексная система эффективных мер борьбы с краснозерными формами риса / Рекомендации. Краснодар, 1986.- 18 с.

27. Конарев В.Г. Н.И. Вавилов и проблема биохимической генетики растений // Н.И. Вавилов и сельскохозяйственная наука.- М.: Колос, 1969. С. 252-261.

28. Конарев В.Г. Белки, нуклеиновые кислоты и проблемы прикладной ботаники, генетики и селекции // Тр. по прикл. бот., ген. и сел.- 1973а. Т. 52.- вып. 1.- С. 4 — 28.

29. Конарев В.Г. Принцип белковых маркеров в' геномном анализе иiсортовой идентификации пшеницы // Тр. по прикл. бот., ген. и сел.-19736. Т. 49.- вып. 3.- С. 46 58.

30. Конарев В.Г. Проблема пищевой и кормовой ценности растительных белков / Растительные белки и их биосинтез. -М.: Наука, 1975.- С. 5 -20.

31. Конарев В.Г., Гаврилюк И.П. Принцип белковых маркеров и его использование в анализе исходного и селекционного материала, сортовой идентификации и регистрации растительных ресурсов // С. — х. биология.- 1977. №5.- С. 677 684.

32. Конарев В.Г Белки пшеницы,- М, 1980.- 350 с.

33. Конарев В.Г. Белки растений как генетические маркеры. М.: Колос, 1983.- 245 с.

34. Конарев В.Г. Морфогенез и молекулярно — биологический анализ растений. С Пб; 1998.- 357 с. '

35. Конарев В.Г. Молекулярно — биологические исследования генофонда культурных растений в ВИРе (1967 1997). С-Пб, 1998.- 298 с.

36. Конарев A.B. Использование молекулярных маркеров в работе с генетическими ресурсами растений // С. х. биология.- 1998. №5.- С. 3 — 24.

37. Конарев В.Г. Белковые маркеры в сортовой идентификации и регистрации генофонда культурных растений / Метод, указ.- С. — Пб., 2000.- 182 с.

38. Конарев В.Г., Гаврилюк И.П., Губарева Н.К/, Пенева T.PJ. Белки растений как генетические маркеры в решении проблем прикладной ботанике, генетики и селекции // Вест. с. — х. науки.- 1986. №12.- С. 45 — 50.

39. Кочетков Е.А. Определение подлинности семян пшеницы лабораторным методом // Тр. по прикл. бот., ген. и сел.- 1971. Т. 44.-вып.З.-С 5-49.

40. Корочкин Л.И. Простой ультромикрометод электрофоретического разделения в полиакриламидном геле белков и изоферментов из изолированных клеток//Цитология.- 1972. Т. 14.-'№5.- С. 670 — 674.

41. Маурер Т. Диск электрофорез. М.: Мир, 1971.- 247с.

42. Идентификация сортов и регистрация генофонда культурных растений по белкам семян // Методические указания.- С- Пб, 2000.- 220 с.

43. Молекулярно — биологические аспекты прикладной ботаники, ^генетики и селекции / В сб. теоретические основы селекции.- М., 1993. 116 с.

44. Мосина С.Б., Иванова Д.И. Генетически детерминированный полиморфизм проламинов зерновки высокопродуктивных сортов риса и их белковые формулы // Научные основы современной технологии возделывания риса.- Кранснодар, 1991. С. 9 — 27.

45. Н.И Вавилов и сельскохозяйственная наука. М.: Колос., 1969.- С: 252 — 260.

46. Основные морфологические и апробационные признаки сортов и гибридов зерновых, зернобобовых, крупяных и' масличных растений. Краснодар: Советская Кубань, 2000.- 512 с.

47. Особенности агротехники новых сортов риса (рекомендации). — Краснодар, 2000.- 15 с.

48. Перуанский Ю. В., Савич И. М. Способ распознования генотипов риса // Авторское свидетельство СССР № 1164274, 1990.

49. Перуанский Ю. В., Савич И. М. Доклады ВАСНИЛ, 1990. № 4.- С. 2024.

50. Ракипов Н.Г. Биохимическая характеристика белков зерна высоколизинового ячменя хайпроли возделываемых сортов // Двтореф. дис. канд. биол. наук. М.: ТСХА, 1975.- 17с.

51. Ригетти П. Изоэлектрическое фокусирование. Теория, методы и применение. М.: Мир, 1986.- 398 с.

52. Руководство по количественному иммуноэлектрофорезу. Методы и применение. М.: 1977.- С. 57 77, 89 - 102.

53. Савич И.М. Состав проламина зерна риса // Физиол. и биохим. культурных раст.- 1980. № 12,- С. 404 408.

54. Сафанов В.И., Сафанова М.П. Исследование белков и ферментов растений методом электорофореза в полиакриламидном геле // В кн. Биохимические методы в физиологии растений.- М.: Наука, 1971.- С. 113-136.

55. Серов O.JI. Генетика изозимов.- Генетика.- 1968.- Т. 4.- №10.- С. 134 —145. ' .i

56. Созинов A.A. Полиморфизм белков и его значение в генетике и селекции. М.: Наука, 1985.- 245с.

57. Стрельченко П.П. Внеклеточный синтез как один из подходов к изучению генетической системы запасных белков пшеницы // Тр. по прикл. бот. ген. и сел.- 1981.- Т. 70.- вып.2.- С. 48 52.

58. Титов А.Ф. Генетика растительных изоферментов // Успехи современной биологии.- 1978.- Т. 85.- №3.- С. 325 339.

59. Туманьян Н.Г. Теория краснозерности риса.- Краснодар, 2001.- 95 с.

60. Шиловский В.Н., Харитонов Е.М., Шеуджен А.Х. Селекция и сорта риса на Кубани. -Майкоп, 2001.- 34 с.Яаска В.Э. Изоферменты как молекулярно- генетические маркеры в селекции растений. Институтзоологии и ботаники АН ЭССР, Тарту, 1977.- С. 251 266.

61. Autran J.A., Bourdet A.L. L' identification des varieties • de ble: Establissement d' un tableau general de determination fonde sur le diagramme electrophoretique des gliadines du grain // Ann. Amelior. Plant.-1975.- Vol. 25.- P. 277-301.

62. Belitz H.D., Lynen F. Proteolitic activity of wheat // Chem., Vikrobiol., technol. Lebensm.- 1974.- Vol. 3.- P. 60 64.

63. Biez J.A., Wall J.S. Wheat gluten subunits: Molecular weights determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis // Cereal chem.- 1972.-Vol. 49.- P. 416-430.

64. Bietz J.A., Huebner F.R. Structure of glutenin: Achievement at the northern regional research center.// Ann. Technol. Agr.- 1980.- Vol. 29.- P. 249 277.

65. Biochemical identication of varieties// Materials III Inter. Symp. ISTA.-Leningrad, USSR 1988.- 258 P.

66. Bushuk W., Zillman R.R. Wheat cultivar identification by gliadin electrophoregrams. Apparaus, method and nomenclature // CanadJ. Plant Sci.- 1978.-Vol. 58.- P. 505-515.

67. Chen L.F.O., Chen L.C. Interitance of two endosperm protein loci in rice (Oryza sativa L.) // Theor. Appl. Genet.- 1989.- Vol. 6.- P. 788 792.

68. Consden R., Gordon A.H., Martin A.J.P. Ioniphoresis in silica jelly: A methods for the separetion of amino acids and peptides // Biochem. J.-1946.-3 40.- P. 33-41.

69. Cooke R.J. The characterization and identification of crop cultivars by electriphoresis// Electrlphoresis.- 1984.- Vol. 5.- P. 59 72.

70. Du Cros D.L., Wrigley C.W. Identificaton of recently registered wheat cultivars I I J. Austral. Inst. Agr. Sci.- 1978.- Vol. 44.- P. 125 128.

71. Enari T. Composition of albumins and globulins of barley // Cfereal Sci. Today.- 1965.- Vol. 10.- P. 594 597.

72. Ewart J.A.D. Further studies on SS bonds in cereal glutenins // J. Sci. Food and Agr.- 1972. Vol. 323.- P. 567 579.

73. Feillet P., Bourdet A. Isoelement par chromatographic sur DEAE cellulose et electrophorese preparative d' une albumine du electrophoretequement homogene // C.r. Acod. Sci. D.- 1968a.- Vol. 266.- P. 2237 - 2239.

74. Feillet P., Bardet A. Les proteins solubles du ble. 1. Isolement at caracherisation des albumines et des globulines // Ann. technol. agr.- 1968b.-Vol. 17.-P. 217-225.

75. Fish W.W., Abott D.C. Isolation and characterization of a watersoluble wheat protein // J. Sci. Food and Agr.- 1969.- Vol 20.- P. 723 730.

76. Foster J.F., Yang J.T., Yui N.M. Extraction and electrophoretic analysis of protein of corn // Cereal chem.- 1950.- Vol 27.- P. 477 487.

77. Fulgiuolo G., Spaynoletti Z. Assesting durum wheat genetic diversity using nonparametric metrhods. Genetic resources and Crop Evolution.- 1987 (in press).

78. Hayward m.D., Balls T. Isozyme polimorphism in natural populations of lolium perenne // Rep. Welsh plant Breed Sta.- 1978.- P. 43 45.

79. Hibiko K., Kizu T. Amino asid composition of rice prolamin polypeptides// Agr. Biol. Chem.- 1989.- Vol 53.- P. 513 518

80. Hieb S.V. Amylase isoenzymes in seeding of Avena and Oiyza sativa L. // C. r. Acad. Bulg. Sci.- 1973.- Vol 21.- P. 117 120. ^• *

81. Hintum Th., Hodgkin Т. Applying molecular markers to ex sitti collection // New letter for Europe.- IPGRI, 1997.- Vol 12.- P. 4.

82. Hitpshi S., Eizo M. Характеристика и сортовые различия изозимов а -амилазы в тканях каллуса риса // Proc. Crop. Sei. Soc. Jap.- 1973.- Vol 42.-P. 307-314.I

83. Holmcomb J., Tolbert D.M., Jain S.K. A diversity analisis of genetic resources in rice // Euphytica, 1977.- Vol. 26.- P. 441 450.

84. Hussein K.R.F., Stegamann H. Comparison of proteins from wheat kernels by various electrophoretic methods in Polyacrylamide // Ztschr. Acker Pflanzenbau.-1978.- Vol. 146.- P. 68 78.I

85. Ingversen J., Koie В., Doll H. Induced seed protein mutant öf barley// Experientra.- 1973.- Vol. 29.- P. 1151 1152.

86. Jaaska V., Jaaska V. Isoenzymes of arimatic alcohol dehydrogenase in rye and triticale // Biochem. Und Physiol. Pflanz.- 1984.- vol.1.- P. 21 30.

87. Jamagata H., Tamura K., e.a. Cell free synthesis of rice prolamin //. Plant Cell Physion.- 1986a.- Vol.27.- P. 1419 - 1422.

88. Jamagata H., Sugimobo Т., Tanaka K. e.a. Biosynthesis of storage proteins in developing rice seed. -Plant Physiol.- 1982.- Vol.70.- P. 1094-1100.

89. Johnson B.L. Confirmation of the genjme donors of Aegilops CylindricalI

90. Nature.- 1967.-Vol. 216.-P. 859-862.

91. Johnson B.L. Protein electrophoretic profiles and the origin of the В genome of wheat // Proc. Nat. Acod. Sei., USA.- 1972.- Vol. 69.- P.1398 1402.

92. Johnson B.L. Identificational of the apparent В genome donor of wheat // Can. J. Genet. Cytol.- 1975.- vol. 17,1.- P. 21 - 39.

93. Karp A., Edwards K. Molecular techniques in the analysis of the extent and distribution of genetic diversity. Molecular genetic techniques for plant genetic resources.- Report of an IPGRI.- Italy, 1997.- P. 11 22.

94. Kennedy S.J., Gardiner S.J., Gilliland T.J. e.a. the use of electrophoretic techniques to distinguish perennial ryegrass cultivars when sown in mixtures //J. gric.Sci.- 1985.-vol.104.-P. 1-9.

95. Kim T.K., Okita T.W. Structure, expression and heterogeneity of the riceseed prolamines //. Plant Physiol.- 1988.- Vol. 88.- P. 649 655.i

96. Konarev A.V., Vvedenskaya I.O., Nasonova E.A., e.a. Use of prolamine polymorphism in studing genetic resources of forage grasses // Genetic resources and Crop Evolution, 1995.- Vol. 42.- P. 197 209.

97. Koundal K.R., Sidding E.A., Mehta S.L. Changes in soluble proteins and isoenzymes in rice (O. sativa) during germination // Indian J. Exp. Biol.-1977.- Vol. 15.- P. 388-390.

98. Kreis M., Shewry P.R., Forde B.G., Miflin B.J. Structure and evolution of seed storage proteins and their genes with particular reference to those of wheat, barley and rye // Oxford surveys of plant molecular and biology.-1985.-Vol. 2.-P. 253-317. '

99. Kreis M., Shewry P.R., Forde B.G., e.a. Structure and evolution of seed storage proteins and their genes with particular reference to those of whrat, barley and rye // Oxford. Surv. of plant md. and cell boil.- 1985.- Vol. 2.- P. 253-315.

100. Kresovich S., Mc Ferson J., Westman A. Using molecular markers in genbanks: identity, duplication, contamination and regeneration // Molecular genetic techniques for plant genetic resources. Report of an IPGRI. Rome, Italy, 1997.-P. 23-38.i

101. Kumamaru T., Saton H., Iwata N. e.a. Mutans for rice storage proteins. I. Screening of mutans for rice storage proteins of protein bodies in the starch endosperm // Theor. Appl. Genet.- 1988.- Vol. 7;6.- P. 11 16.

102. Kumamuru T., Saton H., Omura T. e.a. Mutans for rice storage proteins. IV. Mamernally inhevited mutants for storage proteins of protein bodies in the starchy endosperm // Heredity.- 1990.- Vol. 64.- P.9 15.

103. Laemly U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4 // Nature.- 1970.- Vol. 227.- P. 680 685.

104. Lawrence G.I., Shepherd K.W. Variation in glutenin protein subunits of wheat // Austral. J. Biol. Sci.- 1980.- Vol. 33.- P. 221 233.

105. Luthe D.S. Storage protein accumulation in developing rice (Oryza sativa L.) seeds // Plant sci. Let.- 1983.- Vol. 32.;- P. 1 2, 147 - 153.

106. Mandae B.E., Juliano B.O. Properties of prolamine in mature and developing rice grain // Phytochemistry.- 1978.- Vol.17.- P.611-614.

107. Markert C.L., Moller F. Multiple forms of enzymes: Tissue, ontogenetic and species patterns // Proc. Nat. Acad. Sci. Us.- 1959.- Vol.45.- P. 753 -763.

108. Masumura T., Shibata D., Hibino T. e.a. CDNA coining of an mRNA encoding a sulphur rich 10 kD prolamin polypeptide in rice seeds // Plant Molec. Biol.- 1989.- Vol.12.- P.*123 - 130.i

109. Mazeron P., Krischer J., Hopn P. Fractionnement des' proteins hydrosolubles de V orge // Bull. Soc. chim. biol.- 1966.- Vol. 48.- P. 239 -246.

110. Mazeron P., Krischer J., Hopn P. Fractionnement des proteins hydrosolubles de 1' orge // Bull. Soc. chim. biol.- 1967.- Vol. 49.- P. 791 -804.

111. Mikola J. Kirsi M. DiFFerences between endospermal and embryonal trypsin inhibitors in barley, wheat and rye // Acta chem. Scand.- 1972.- Vol. 26.-P. 787-795./- «

112. Nummi M. Fraction of arley globulins on dextran gelcollumns // Acta chem., scand.- 1963,- Vol. 17.- P. 527 533.• «

113. Osborne T.B. The proteins of the wheat kernels. Wash. (D.C.): Carnegie Inst., 1907.

114. Osborne T.B. The vegetable proteins. 2nd ed. L.: Longmans, Green and Co, 1924.

115. Palanichamy K., Sidding E.A. Study of interrelationship among A — genome species of the genus Oryza through isoenzyme variation // Theoret. Appl. Genetics.- 1977.- Vol. 50.- P. 201 210.

116. Pawar V.S., Gupta V.P. Peroxidase isoenzymes in development of talland dwart cultivars of rice // Ann. Bot.- 1975.- Vol. 39.- P. Ill 783.

117. Paulis J.W., Wall J.S. Albumins and globulins in exstracts of corn grain parts // Cereal Chem.- 1969.- Vol. 46.- P. 265 273.

118. Paulis J.W., Biets J.A., Wall J.S. Corn protein subunits: Molecular weights determined by sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrohoresis // J. Agr. And Food chem.- 1975.- Vol.23.- P. 197 - 201.

119. Quensel O. Untersuchung Uber die Gerstenglobuline: Diss.// Levin. Of Uppsala, 1942.- 96 p.

120. Raymond S., Weintrau L. Acrylamide gel as a supporting medium for zone electrophoresis.// Science/- 1959.- Vol. 20.- P. 427 432.

121. Sidding E.A., Nerkar Y.S., Mehta S.L.-Intra and inter subspecific variation in soluble proteins of Oryza sativa L. // Theoret. And Appl. Genetics.- 1972.- vol. 42.- P.351 356.

122. Shewry P.R., Ellis J.R.S., Pratt H.M., Miftin B.J. F comporison of methods for the extraction and separation of hordein fractions from 29 barley varieties // J. sci. Food. And Agr.- 1978a.- Vol. 29.- P. 433 441.

123. Stegeman H. Refrospect on 25 years of cultivar identification by protein patterns and prospects for the future // Proc. ISTA symposium on biochemical tests for cultivar identification. Conbridge, 1983.- P. 20 31.

124. Stegamann H., Francksen. H., Macko V. Potato proteins: genetic and physiological changes, evaluated by one and two dimensional PAG - gel -techniques // Zeitchrift Naturforschung, -1985.- Vol. 28.- P. 722 - 732.

125. Taddei G. Ricerche sul glutine del frumento // G. Fis., chem., e stor. Nature. Brugnatelli.-1981.- Vol. 2.- P. 360 361.

126. Tanaka K., Sugimoto T., Ogawa M. e.a. Isolation and characterization of two types of protein bodies in the rice endosperm // Agr. Biol., Chem.- 1980.-Vol. 44.- P. 1633- 1639.

127. Teeson E.N.S., Esmama B.V., Lontok L.P. e.a. Studies on the extraction of rice endosperm glutenin and.prolamin // Cereal Chem.- 1971.- Vol. 48.-P. 168-181.

128. Tkachuk R., Tipples K.H. Wheat beta amylases.- Cereal Chem.- 1966.-Vol. 43.- P. 62-79.

129. Vvedenskaya I.O., Alpotyeva N.V., gubareva N.K e.a. Use of storage protein electrophoresis in the analysis of genetic resources of some cereals.-Cereal Chem.- 1993.- vol.25.- P. 187 201.

130. Wand X.F., Kuoblaunch R. and Leist N. Identification of varieties and testing of hybrid purity of rice by ultrathin layei isoelectric focusing of seed protein.- 1986.-P. 60-66.

131. Ward, J. H. Hierarchical grouping to optimize an objective function // Journal of the American Statistical Association,' 1963.- Vol.58.- 236 P.

132. Weising K., Nybom H., Wolff K. e.a. DNA fingerprinting in plants and fungi. CRC Press, 1995.

133. Weising V., Nybon H., Wolff K. e.a. DNA fingerprinting in plants and fungi. CRC. Press., 1999. '

134. Wrigley C.W., Mcintosh R.A. Genetic control of factors regulating the phenjl reaction of wheat and rye grain // Wheat Inform. Serv.- 1975.- Vol. 40.-P. 6.

135. Woychik J.H., Huebner F.R., Dimler R.J. Reduction and starch gel electrophoresis of wheat gliadin and glutenin // Arch. Biochem. And biophys.-1964.-Vol. 105.-P. 151-155.