Выделение и характеристика глутаматных рецепторов из мышцы саранчи тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат химических наук Перестенко, Павел Валерьевич

• Перестенко, Павел Валерьевич
• кандидат химических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат химических наук Перестенко, Павел Валерьевич

Оглавление:

- стр.

Список условных сокращений -

Введение -

1. Глутаматные рецепторы (обзор литературы) -

1.1. Введение -

1.2. Классификация глутаматных рецепторов -

1.2.1. Глутаматные рецепторы ММОА-типа -

1.2.2. Глутаматные рецепторы не-КНУГОА типа -

1.3. Молекулярная биология рецепторов глутамата -

1.3.1. Молекулярная биология рецепторов

АМРА и каината -

1.3.2. Молекулярная биология метаботропных рецепторов глутамата -

1.3.3. Молекулярная биология глутаматных рецепторов ИМОА-типа -

1.4. Глутаматные рецепторы беспозвоночных -

1.4.1. Глутамат-активируемые хлорные каналы беспозвоночных -

1.4.2. Ионотропные возбуждающие глутаматные рецепторы беспозвоночных -

1.5. Заключение -53

2. Материалы и методы -

2.1. оборудование и материалы -

2.1.1. Оборудование -

2.1.2. Расходные материалы и реактивы -

2.2. Методы -

2.2.1. Выделение мембран из мышечной ткани

и нервной системы саранчи -55

2.2.1.1. Определение концентрации белка -

2.2.2. Выделение рецепторных белков -

2.2.3. Реконструкция в липосомах -

2.2.4. Получение поликлональных

кроличьих антител Я13 -

2.2.5. БОБ-ПААГ электрофорез и электроперенос

на РУББ мембраны -

2.2.6. Твердофазный иммуноферментный анализ -

2.2.7. Радиолигандный анализ -

2.2.8. Синтез 3-1М-(карбоксиацетил)-Ь-2,3-диаминопропионовой кислоты -

2.2.9. Электрофизиологическая характеристика рецепторного комплекса -

2.2.10. Триптический гидролиз отдельных белков выделенного рецепторного комплекса, очистка полученных пептидов и изучение

их аминокислотной последовательности -

2.2.11. Выделение мРНК из тканей саранчи -

3, Результаты и обсуждение -

3.1. Выделение глутаматрецепторного комплекса

из мышечных тканей саранчи -

3.1.1. Получение мембранных препаратов из

нервных и мышечных тканей саранчи -

3.1.2. Радиолигандный анализ связывания

Ь-[3Н]01и и Ь-[3Н]Азр с препаратами мембран -

3.1.3. Солюбилизация -

3.1.4. Аффинная хроматография -

3.2. Радиолигандный анализ связывания Ь-[3Н]С1и и Ь-[3Н]Азр с глутаматрецепторным комплексом

из мышечной ткани саранчи -

3.2.1. Реконструкция в липосомах -

3.2.2. Радиолигандный анализ связывания Ь-[3Н]С1и

и Ь-[3Н]Азр с протеолипосомами -

3.2.3. Характеристика участков связывания Ь-[3Н]С1и

с рецепторным комплексом -

3.2.4. Исследование влияния З-Ы-(оо-карбоксиацил)-Ь-2,3-диаминопропионовых кислот на связывание Ь-[3Н]С1и с рецепторным комплексом -

3.2.5. Вытеснение И-фталамоил-Ь-глутаминовой кислотой Ь-[3Н]01и с реконструированного рецепторного комплекса -

3.3. Исследование ионных каналов реконструированного рецепторного комплекса -

3.4. Анализ выделенных рецепторных препаратов

с помошью ЗББ-ПААГ и твердофазного ИФА -

3.5. Анализ первичной стуктуры белков рецепторного комплекса -

3.6. Изучение экспрессии генов глутаматных рецепторов

в тканях саранчи в процессе онтогенеза -

Выводы -

Список литературы -

Список сокращений

ГР - глутаматные рецепторы

ДТТ - дитиотреит

Втах - максимальное число участков связывания лиганда

- константа диссоциации

- константа ингибирования

- центральная нервная система

- Y-D-глутамилглицин

- 0,Ь-3-гидрокси-4,5,6,7-тетрагидроксиоксазоло-[5,4-с]- пиридин-5(7)-карбоновая кислота

- 1-аминоциклобутан-1,3-дикарбоновая кислота

- цис-1-амино-1,3 дикарбоксициклопентан

- а-амино-3-гидрокси-5-метил-4-изоксазолопропионовая кислота

- 1-(4-бромбензоил)пиперидин-2,3-дикарбоновая кислота

- 4-бромгомоиботеновая кислота

9f

CAPS , - З-циклогексиламино-1-пропансульфоновая кислота

- 1-(4-хлорбензоил)пиперидин-2,3-дикарбоновая кислота CGP40116 - [8-(КД)]-[3-[[1-(3,4-дихлорфенил)этил]амино]-2-гидроксипропил]

(циклогексилметил)фосфоновая кислота CGS19755 - 7-трифлуорометил-4-(4-метил-1-пиперазинил)пирроло[1,2-а]-хиноксалин

CGS37849 - 4-[2-[[6-амино-9-(Н-этил-Р-0-рибофурануронамидозил)-

9Н-пурин-2-ил]амино]этил]бензенпропановая кислота CHAPS - 3-[(3-холамидопропил)диметиламмонио]-1-пропансульфоновая кислота

CNQX - 6-циано-7-нитрохиноксалин-2,3-дион СРАА - транс-2-карбоксил-3-пирролидин-2,3-дион CPG - 3,4-циклопропилглутаминовая кислота

СРР - 3-((+/-)-2-карбоксипиперазин-4-ил)-пропил-1-фосфоновая

кислота

D-aAA - D-a-аминоадипиновая кислота

Kd К,

цнс

y-DGG 5-НРСА

ACBD ACPD АМРА BB-PDA

Вг-ШВО

^

CB-PDA

D-AP5 - 0-2-амино-5-фосфонопентановая кислота D-AP7 - В(-)-2-амино-7-фосфоногептановая кислота DNQX - 6,7-динитрохиноксалин-2,3-Дион GABA - у-аминомасляная кислота

GAMS - у -D-гл у там и л ам и н о м ети л сул ь ф о н о в ая кислота

GDEE - диэтиловый эфир глутаминовой кислоты

G1DAP - 3-М-(карбоксиглутарил)-Ь-2,3-диаминопропионовая кислота

GYKI52466 - 1-(4-аминофенил)-4-метил-7,8-метилениокси-5Н-

2,Збензодиазепина гидрохлорид НА-966 - 1-гидрокси-3-аминопирролидин

L-689,560 - транс-2-карбокси-5,7-дихлоро-4-фениламинокарбонил-

амино-1,2,3,4-тетрагидрохинолин L-AP3 - L-2-амино-З-фосфонопропионовая кислота L-AP4 - Ь-2-амино-4-фосфономасляная кислота ls3R-ACPD - 1-аминоциклопентан-18,31^-Дикарбоксиловая кислота MaDAP - 3-К-(карбоксиацетил)-Ь-2,3-Диаминопропионовая кислота МК-801 -(+)-5-метил-10,11 ,дигидро-5Н-дибензо[а,(1]циклопентен-5,10-

иминмалеиновая кислота NAAG - Ы-ацетил-Ь-аспартил-Ь-глутаминовая кислота NBQX - 6-нитро-7-сульфамоилбензо[1]хиноксалин-2,3-дион NMDA - N-метил-О-аспарагиновая кислота ODAP - Р-Ы-оксалил-а-р-диаминопропионовая кислота PCP - фенциклидин

PhGA - Ы-фталамоил-Ь-глутаминовая кислота PMSF - фенилметилсульфонилфлуорид PYDF - поливинилидендифторид SKF-10047 - N-аллил-норметазоцин

SuDAP - 3-М-(карбоксисукцинил)-Ь-2,3-Диаминопропионовая кислота t-2,3-PDA - транс-пиперидин-2,3-дикарбоновая кислота TCP - Ы-[1-(2-тиенил)-циклогексилпиперидин]

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Выделение и характеристика глутаматных рецепторов из мышцы саранчи»

Введение

Синаптическая передача лежит в основе функционирования центральной нервной системы (ЦНС), поэтому исследование её молекулярных аспектов является предметом пристального внимания ученых. Одним из основных возбуждающих нейромедиаторов ЦНС позвоночных животных является Ь-глутамат. Постсинаптические ионотропные глутаматные рецепторы (ГР), которые воспринимают сигнал этого нейромедиатора, широко изучаются. Доказано, что ГР принимают непосредственное участие в развитии нервной ткани, сложной интегративной деятельности головного мозга позвоночных, а нарушение их функционирования приводит к возникновению целого ряда тяжелых заболеваний ЦНС. Большие успехи достигнуты в последнее десятилетие в области молекулярного клонирования генов постсинаптических ГР позвоночных. В то же время, уже более 30 лет назад было открыто, что глутамат играет важнейшую нейромедиаторную роль как в ЦНС, так и в двигательной системе насекомых и других беспозвоночных животных. Электрофизиологические исследования глутаматергических синапсов насекомых показали, что постсинаптические ионотропные ГР в нервно-мышечных соединениях этих животных играют основную возбуждающую роль, которую у высших животных выполняют рецепторы ацетилхолина. При изучении влияния различных известных агонистов на эти рецепторные системы было выявлено несколько подтипов возбуждающих ионотропных ГР в моторной системе насекомых, причем их фармакологический профиль заметно отличался от такового у различных ГР позвоночных. Так, было показано существование Ь-квисквалат-, Ь-аспартат- и иботенат-чувствительных ГР, активация которых приводит к деполяризации мембраны мышечного волокна. Изучение этих рецепторных систем насекомых на молекулярном уровне, выяснение их сходства

и различия с ГР позвоночных позволит не только понять эволюционные аспекты их развития, но и решить проблему создания новых экологически чистых инсектицидов.

С использованием информации о структуре генов ГР позвоночных осуществлено множество попыток клонирования ионотропных ГР насекомых и только некоторые из них оказались успешными. Так были клонированы гены, кодирующие мышечный рецептор БгозорЬПа DgluR-II [811ш1ег, 1991], экспрессируемые в ЦНС мухи 001иЯ-1 [ХЛ^сЬ, 1992] и ОММОАЮ [ШвсИ, 1993]. Все эти субъединицы имели высокую структурную гомологию с соответствующими ГР позвоночных, но при гетерологической экспрессии не проявляли ожидаемого сродства к соответствующим агонистам. Кроме того, ни один из полученных рецепторов не отвечал на воздействие Ь-квисквалата, который считается одним из основных агонистов ГР насекомых.

Для изучения механизма функционирования различных типов ГР широко используются полиаминные токсины из яда паука А^юре 1оЬша - аргиопинины, которые являются специфическими блокаторами ионных каналов ГР [Гришин, 1986; ОтЫи, 1987; М^агашк, 1987]. Данная работа посвящена выделению и характеристике ГР из мышц саранчи с использованием биоспецифической хроматографии на иммобилизованных аргиопининах.

1. Глутаматные рецепторы (обзор литературы)

1.1. Введение

Представление о том, что L-глутаминовая кислота участвует в специфических физиологических и патологических процессах „протекающих^ в центральной

J ' L---5

нервной системе (ЦНС) позвоночных, зародилось из экспериментальных наблюдений, сделанных более 30-ти лет назад. В 1950-х годах было впервые показано, что L-глутамат индуцирует тонические судороги при внутримозговом введении [Hayashi, 1954; Curtis, 1959]. В то время эти данные не вызвали особого интереса, так как трудно было предположить, что L-глутамат играет роль нейропередатчика, являясь широко распространённым внутриклеточным метаболитом. Однако, в течение 1970-х и 1980-х годов было убедительно доказано, что возбуждающие аминокислоты (L - изомеры глутаминовой, аспарагиновой кислот и некоторые из их серусодержащих аналогов) осуществляют внутрисинаптическую передачу в ЦНС [Curtis, 1963; McLennan, 1968; Duggan, 1974]. Эксперименты, проведённые в 1980-х, подтвердили гипотезу, утверждавшую существование нескольких типов специфических мембранных рецепторов возбуждающих аминокислот - глутаматных рецепторов (ГР), и продемонстрировали вовлечённость этих систем рецепции в процессы развития нервной ткани и целого ряда заболеваний ЦНС. С помощью методов электрофизиологии была показана способность глутамата и аспартата вызывать поляризацию нейронов. Были выявлены системы транспорта и утилизации агонистов ГР, механизмы управления ионной проводимостью мембран этими рецепторами и их связь с механизмами вторичного опосредования. Электрофизиологические и фармакологические исследования, проведённые во многих лабораториях мира, подтвердили существование ГР в ЦНС различных видов животных.

Данные, полученные при морфологическом и физиологическом изучении глутаматергических систем, говорили об их участии в сложной интегративной деятельности головного мозга, например, в процессах обучения и запоминания. Это подтверждалось также локализацией основных глутаматергических путей в структурах головного мозга, ответственных за его ассоциативную функцию [Cotman, 1987]. Косвенным доказательством этого являлось также изучение нейротоксического действия глутамата при его локальной или системной аппликации на структуры мозга, которое показывало, что атрофия нервной ткани наступала прежде всего в областях с высокой плотностью глутаматергических синапсов, например в гиппоталамусе, гиппокампе, миндалине и коре [Coyle, 1983; Капо, 1987; Frandsen, 1989]. Такие воздействия, как правило, сопровождались симптомами нарушения поведенческих и вегетативных реакций. Аналогичный эффект оказывали некоторые конкурентные и неконкурентные агонисты глутамата.

Для ГР было показано не только участие в процессах обучения и запоминания [Collingridge, 1991], но также в патогенезе ряда заболеваний ЦНС: эпилепсия, болезнь Альцгеймера [Cowburn, 1989; Collingridge, 1991], хорея Гентингтона, ишемическая нейрональная деградации и др. [Meldrum, 1985; Maragos, 1987; Schwarcz, 1985; Gill, 1987]. Клинические исследования с использованием различных видов животных показывают, что антагонисты ГР могут быть применимы при лечении эпилепсии и нейрональной деградации, как результата травматического повреждения ЦНС. Существуют данные, касающиеся возможности терапевтического применения соответствующих веществ в лечении болезни Паркинсона, шизофрении и хронических нейродегенеративных процессов.

О роли возбуждающих аминокислот в формировании эпилептической гипервозбудимости нейронов ЦНС упоминалось довольно давно. Известно, что экспериментально вызванные у подопытных животных эпилептические припадки высокоэффективно подавлялись аппликацией некоторых антагонистов рецепторов

глутамата [Neuman, 1988; Geng-Chang, 1989; Rogawski, 1992]. И наоборот, активация ГР в норме сопровождается электрическими импульсами, сходными с наблюдаемыми во время судорог в очагах эпилептической активности. Данные некоторых исследований [Urban, 1990], поддерживают теорию, утверждающую, что "молчащие" в норме определенные типы ГР являются компонентами, инициирующими развитие эпилепсии.

В дальнейшем были получены данные, свидетельствующие об избирательной деструкции нейронов, содержащих определенные подтипы рецепторов глутамата, в головном мозге при ишемической и гипогликемической нейрональных деградациях [Meldrum, 1991]. Существует мнение, что избыточное накопление возбуждающих аминокислот при повреждениях, вызванных нарушением мозгового кровообращения, обуславливает начало патологических процессов. В дополнение к способности блокировать повреждения нервной ткани ЦНС, вызванные мозговой ишемией или черепно-мозговой травмой, антагонисты глутаматных рецепторов могут оказаться полезными в лечении хронических нейродегенеративных процессов, в ряду которых стоят такие широко распространённые заболевания, как болезни Паркинсона [Ong, 1997; Bezard, 1997] и Альцгеймера [Thotns, 1997]. Болезни Гентингтона - аутосомно-доминантному заболеванию людей среднего и старшего возраста, сопутствует снижение мест связывания глутамата в некоторых структурах конечного мозга на 93% и 67% соответственно [Young, 1988]. Найдена корреляция между дегенерацией постсинаптических глутаматэргических нейронов и снижением уровня митохондриальной глутаматдегидрогеназы нервных клеток [Tsiotos,1989]. Высказываются предположения о возможности применения антагонистов рецепторов NMDA в качестве адьювантов при лечении болезни Паркинсона [Klockgether, 1989]. В этом случае, очевидно, имеются в виду данные о тесной функциональной и морфологической взаимосвязи [Araneda, 1989] дофаминергической и глутаматергической систем.

Таким образом, к концу 80-х - началу 90-х годов, процесс накопленния знаний о глутаматергической передаче, ускоряемый перспективой их активного применения в медицине, позволил создать достаточно полную картину системы ГР позвоночных, которая в настоящее время постоянно уточняется новыми данными, в первую очередь из области молекулярной биологии.

Несколько иначе обстоит дело с изучением глутаматрецепторной передачи у беспозвоночных. Первые работы, посвященные глутаматным рецепторам насекомых, были выполнены в середине 60-х годов [Kerkut, 1965; Usherwood, 1966], то есть несколько позже открытия глутаматрецепторной передачи у млекопитающих. В этих работах впервые было показано, что глутамат играет роль нейропередатчика как в возбуждающих, так и в тормозных нервно-мышечных синапсах насекомых. Позднее глутаматные рецепторы были найдены и в нервной системе насекомых [Giles, 1985; Wafford, 1986], и, наконец, рецепторы глутамата были обнаружены не только у насекомых, но и у других классов беспозвоночных, таких как нематоды [Maricq, 1995] и моллюски [Jones, 1987; Quinlan, 1991]. В частности, у моллюсков L-глутаминовая кислота играет важную роль в контроле целого ряда биологических функций, например, модуляции пищевого поведения [Jones, 1987; Quinlan, 1991]. Вполне понятно, что эти открытия привлекли внимание исследователей не только с чисто академической точки зрения. Тот факт, что глутамат является основным возбуждающим медиатором нервно-мышечной передачи, делает изучение соответствующей рецепторной системы очень перспективным с точки зрения модельного синтеза новых экологически чистых инсектицидов, способных блокировать двигательную активность насекомых. Кроме того, изучение ГР насекомых необходимо для понимания эволюционного развития соответствующих рецепторных систем.

Судя по всему, основные характеристики глутаматрецепторной передачи сложились до того, как в ходе эволюции произошло разделение на позвоночных и беспозвоночных. Исходя из того, что у позвоночных рецепторы глутамата играют

важную роль в эмбриональном развитии нервной ткани и формировании всей центральной нервной системы, можно предположить их аналогичную роль у беспозвоночных [Douglas, 1995]. Интегративная деятельность ЦНС и ее связь с глутаматергической передачей у млекопитающих несомненно находит своё повторение в формировании сложных поведенческих реакций у беспозвоночных [Jones, 1987; Quinlan, 1991]. В этом случае возможность создания веществ, способных влиять на развитие и поведение беспозвоночных, становится еще более привлекательной.

Несмотря на несомненный интерес к теме, наши знания о глутаматрецепторной передаче беспозвоночных намного меньше тех, что обобщают фактический материал, накопленный при изучении ГР позвоночных. * Даже клонирование нескольких глутаматных рецепторов беспозвоночных в . v последние годы не дало большей информации об их фармакологических свойствах, чем было получено ранее с помощью методов электрофизиологии. До сих пор наши знания о глутаматэргической системе беспозвоночных полны пробелов, заполнение которых требует постоянного обращения к данным, полученным при изучении ГР позвоночных животных. Вот почему подробное описание достижений в области изучения глутаматных рецепторов млекопитающих, которое будет приведено в первой половине литературного обзора, является необходимым для лучшего понимания и систематизации знаний о рецепции глутамата у беспозвоночных.

1.2. Классификация глутаматных рецепторов

Данные, полученные при изучении физиологической активности агонистов и антагонистов различных медиаторов нервной передачи, говорят о множественности форм рецепторных комплексов, с которыми они взаимодейстуют. Так, например, на сегодняшний день известно более 10

подтипов рецепторов ацетилхолина, серотонина и несколько различных рецепторов ГАМК. Не являются исключением и рецепторы глутаминовой кислоты.

Предположение о том, что существует несколько форм рецепторов глутамата возникло еще в 70-е годы. Тогда была зафиксирована различная чувствительность нейронов спинного мозга кошки к возбуждающему эффекту различных аналогов L-глутамата. L-глутамат и каинат преимущественно стимулировали дорсальные ответвления интернейронов, а L-аспартат и Ы-метил-О-аспартат - клетки Реншава. Открытие способности таких веществ, как D-a-аминоадипат (D-aAA), диэтиловый эфир (GDEE), L-глутаминовая кислота и ионы магния, быть антагонистами возбуждающего дейстивия L-глутамата привело к первому классификационному делению соответствующих рецепторов, определив три их класса: NMDA- и D-aAA-чувствительные, квисквалат- и GDEE-чувствительные, каинат-чувствительные. С тех пор эти три подтипа сохраняли за собой названия основных агонистов и именовались, соответственно, как NMDA-, квисквалатный и каинатный подтипы ГР [Watkins, 1981; Foster, 1984]. Наиболее четко определенным подтипом до сих пор остаются рецепторы NMDA, благодаря открытию высокоселективных лигандов, таких как NMDA [Watkins, 1962] и D-2-амино-5-фосфоновалериановая кислота (D-AP5) [Davies, 1981]. Позднее было обнаружено, что квисквалат также обладает способностью активировать связанные с G-белками метаботропные рецепторы глутамата, поэтому, после появления нового агониста глутаматных рецепторов "квисквалатного типа" - а-амино-3-гидрокси-5-метилизоксазол-4-пропионовой кислоты (АМРА), квисквалатные рецепторы стали называть рецепторами АМРА.

Во многих работах ионотропные рецепторы глутаминовой кислоты подразделяют на две группы - NMDA и не-NMDA (вторая объединяет рецепторы АМРА, каината и квисквалата). Все они являются рецептор-канальными комплексами, в которых при активации соответствующими агонистами

открываются катионные каналы, осуществляющие проведение через синаптическую мембрану ионов Na+, К+ и Са2+, причем каналы этих рецепторов не блокируются тетродотоксином.

Эта классификация хорошо укладывалась в экспериментальные данные 80-х годов. В дальнейшем список пополнился новыми подтипами и многочисленными данными о молекулярной гетерогенности каждого подкласса ГР. В последнее десятилетие охарактеризован целый ряд метаботропных ГР, селективными агонистами которых являются, например, L-квисквалат и цис-(+/-)-1-амино-1,3-циклопентандикарбоновая кислота (ACPD). Эти рецепторы связаны через GTP-связывающие белки с внутриклеточной системой вторичного опосредования в постсинаптических нейронах [Sladeczek, 1985; Nikoletti, 1986а,Ь,с]. Механизм их функционирования изучен на модельных системах при экспрессии их генов в ооцитах Xenopus [Sugiyama, 1987], а также с использованием новых синтетических лигандов [Recasens, 1988].

В 1984г. Foster и сотр. [Foster, 1984] обнаружили ГР, чувствительные к L-2-амино-4-фосфонобутановой кислоте (L-AP4), и выделили их в особый подтип. L-АР4-чувствительные рецепторы были обнаружены не только в пост-, но и в пресинаптических мембранах глутамат-чувствительных нервных окончаний, причем пресинаптические ГР этого подтипа подавляли высвобождение L-глутаминовой кислоты из нервных окончаний (Koerner, 1992). ГР со сходной фармакологией был найден также в биполярных клетках сетчатки [Nawy, 1987; Slaughter, 1985]. Данные рецепторы являются G-белок-связанными [Nawy, 1990] и относятся к типу метаботропных.

Постсинаптические потенциалы, возникающие при активации различных подтипов рецепторов, сильно отличаются по своим характеристикам. Так, активация каинатных и АМРА рецепторов приводит к возникновению быстрых постсинаптических потенциалов, тогда как активация рецепторов NMDA - к генерированию медленных и устойчивых потенциалов. Однако, имеются данные

о том, что рецепторы NMDA-типа могут также генерировать и кратковременные потенциалы в нейронах гиппокампа крыс [Anwyl, 1989], а ГР не NMDA-типа могут вызывать длительную многофазную деполяризацию клеток Пуркинье [Joels, 1989].

Использование в работах, проводимых с применением электрофизиологических и фармакологических методов, большого набора агонистов и антагонистов, а также исследование гомо- и гетероолигомерных рекомбинантных ГР, подтвердили существование нескольких основных классов ГР (табл. 1) и дали начало изучению многочисленных изоформ этих рецепторов.

Применявшиеся при разработке классификации ГР аналоги глутаминовой кислоты можно разбить на несколько основных классов, состоящих из определенных стереоизомеров аминодикарбоновых кислот, их сульфоновых, фосфоновых, пяти-шестичленных гетероциклических аналогов и дипептидов. Все вещества, входящие в данные классы, имеют заряженные или поляризованные группы, которые нековалентно взаимодействуют с активным центром рецептора [Foster, 1984]. Две из этих групп - анионные (как правило, это карбокси- или сульфогруппы), третья группа может быть заряжена положительно.

Табл. 1. Классификация и основные лиганды рецепторов глутамата

NMDA-рецепторы

Агонисты NMDA, иботенат, t-2,3-PDA, ACBD, СРАА, L-аспартат, CPG, D-гомоцистеинсульфинат

Антагонисты CGP40116, D-CPP-ены, CGS19755, CGS37849, D-AP5, D-AP7, GAMS

Блокаторы канала Mg2+, МК-801, TCP, РСР, кетамин, SKF10047

Аллостерические активаторы глицин, D-серин, D-аланин, D-циклосерин, y-DGG

Антагонисты мест связывания глицина кинуренат, 7-хлоркинуренат, НА-966,

Каинатный подтип

Агонисты каинат, домоат, 5-бромвиллардин, акромелат А

Антагонисты СИС^Х, ЭИС^Х, ВВ-РОА, вАМБ, кинуренат

АМРА-подтип

Агонисты АМРА, Ь-квисквалат, АТРА, 5-НРСА, Вг-НГОО виллардин, 5-бромвиллардин

Антагонисты вБЕЕ, сис^х, эис^х, ивс^х, СВ-РЭА, ВВ-РЭА, САМБ

Неконкурентные антагонисты СУК1-52466 барбитураты, филантотоксин 433

Метаботропные рецепторы глутамата

Агонисты квисквалат, иботенат, АСРЭ,

Антагонисты Ь-АРЗ, АР5, уЛХЮ, САМБ

Следует отметить, что не только природные, но и многие синтетические агонисты и антагонисты ГР, подобно квисквалату - агонисту рецепторов АМРА, АСРО, и каиновой кислоте, не имеют абсолютной специфичности действия.

Сопоставление констант ионизации а) -кислотных групп некоторых аналогов показывает, что незначительные отличия рКа группы от рД со-карбоксилов глутамата позволяет сохранить высокую специфичность действия, тогда как изменение кислотности оо-групп при замене карбоксилов на сульфо- и сульфиногруппы ведет к снижению селективности и усилению возбуждающего эффекта [Дейко, 1989]. Возможно, это объясняется существованием в ЦНС сульфопроизводных, способных, наравне с Ь-глутаминовой и Ь-аспарагиновой кислотами, взаимодействовать с ГР. Такие агонисты, как Ь-цистеинсульфиновая, цистеиновая, гомоцистеиновая и гомоцистеинсульфиновая кислоты, были найдены в ЦНС млекопитающих и для этих веществ было показано индуцированное калием

Са2+-зависимое высвобождение [Monahan, 1987; Leuhmann, 1988]. Было выяснено, что гомоцистеиновая и гомоцистеинсульфиновая кислоты являются эндогенными лигандами для рецепторов NMDA-типа, так как вызванные ими эффекты в спинальных нейронах крыс блокировали NMDA-специфичные антагонисты: D-АР5 и D-AP7. К эндогенным возбуждающим аминокислотам мозга млекопитающих относят также метаболиты триптофана - хинолиновую кислоту и кинуренин. Хинолиновая кислота проявляет свойства специфического агониста NMDA и по химической структуре относится к циклическим аналогам глутамата [Лапин, 1989].

Большое значение для специфичности и активности аналогов глутамата имеет их стерическое строение. Так, L-изомер N-метил-аспартата имеет на порядок меньшую константу сродства к рецептору чем D-изомер, a L-5-аминофосфонопентоат связывается с активным центром рецептора NMDA-типа почти в 20 раз хуже, чем D-AP5 [Monaghan, 1987]. Молекулы агонистов NMDA-типа, в отличие от соединений, активирующих не-NMDA рецепторы, имеют более жесткое строение. Показано, что метальный радикал в молекуле Ы-метил-О-аспартата препятствует сжатию углеродной цепи. В то же время, агонисты рецепторов каината и АМРА обычно имеют довольно гибкую углеродную цепь. Это означает, что введение каких-либо заместителей в аминогруппу делает молекулу лиганда предпочтительным агонистом (антагонистом) рецепторов NMDA-типа [Пиотровский, 1989].

Интересно отметить, что рецепторы NMDA, в отличии от других классов ГР, имеют аллостерический участок связывания для агонистов, модулирующих работу рецептора: глицина, D-серина и D-аланина [Monahan, 1989; Bonhaus, 1987; Steel, 1989]. 1-Гидрокси-З-аминопирролидин (НА-966), y-D-глутамилглицин (y-DGG), кинуренат и 7-хлоркинуренат конкурируют с глицином за участки связывания и ингибируют NMDA-рецепторы [Nevins, 1989]. Участки связывания глицина в

NMDA-рецепторах являются стрихнин-нечувствительными, что отличает их от участков связывания агониста у тормозных глициновых рецепторов.

Электрофизиологическими методами изучены специфические блокаторы рецепторов NMDA-типа. К ним относятся ионы Mg2+, Zn2+, а также такие вещества как (+)-5-метил-10,11,дигидро-5Н-дибензо[а,с1]циклопентен-5,10-имин малеат (МК-801), Ы-[1-(2-тиенил)-циклогексилпиперидин] (TCP), фенциклидин (PCP) и кетамин [Monahan, 1989], причем Zn2+, в отличие от Mg2+, блокирует каналы, управляемые этими рецепторами, независимо от мембранных потенциалов.

В середине 90-х годов из ядов пауков и одиночных ос были выделены полиаминные токсины, способные достаточно селективно блокировать ионные каналы ГР. Хотя эти токсины способны взаимодействовать с калиевыми каналами, ионными каналами никотиновых и ацетилхолиновых рецепторов, их

сродство к ГР гораздо выше, почему эти токсины и начали интенсивно ;

■■ ' ' ' К/

использовать для изучения ГР. Целый ряд полиаминных токсинов, относящихся

к блокаторам каналов рецепторов глутамата, выделен из яда пауков семейства

Araneidae [Гришин, 1986; Grishin, 1987; Magazanik, 1987], причем эти токсины

способны взаимодействовать с открытыми и закрытыми каналами ГР. Так

аргиопин - компонент яда паука Argiope lobata, эффективно снижал синаптическую

передачу с афферентных волокон на мотонейроны лягушки в концентрации 10"7М

[Магазаник, 1989]. В целом, полиаминные токсины обладают способностью

блокировать каналы разных типов глутаматных рецепторов с разной

эффективностью [Кискин, 1989; Davies, 1992].

Сведений о других канальных маркерах ГР имеется в настоящее время очень мало. Известно, что соли барбитуровой кислоты блокируют каналы рецепторов каината и АМРА, но из-за низкой аффинности и плохой селективности не вызывают большого интереса [Lodge, 1991]. Таким образом, можно сказать, что специфичных антагонистов каналов рецепторов He-NMDA-типа не обнаружено.

1.2.1 Глутаматныерецепторы NMDA-muna

В общей сложности, в рецепторах NMDA обнаружено пять различных участков связывания [Wong, 1991; Fagg, 1991]. На внеклеточной поверхности рецепторного комплекса располагается участок распознавания агонистов и

и

I \ _алщкжрический участок связывания коагониста - глицина. Внутри рецепторного

J ! ' * ' ......"

канала находятся участки связывания Mg2+ и таких блокаторов ионных каналов, как МК-801, TCP, кетамин и N-аллил-норметазоцин (SKF10047). _Место ! расположения на молекуле рецептора ещё двух участков (для ионов Zn2+ и ji полиаминов) до сих пор остаётся неясным. Участок связывания ионов Zn2+, судя по всему, находится в устье ионного канала, где он может быть задействован в регулировании катионной селективности. Есть данные, что связывание полиаминов может происходить с внутриклеточной стороны мембраны. Таким образом, рецептор NMDA представляет собой сложный рецепторно-ионофорный комплекс, основными особенностями которого являются одновременная хемо- и потенциал-чувствительность, медленная динамика активации с определённой частотной характеристикой, способность к временной суммации и усилению вызванного потенциала [Jose, 1996] ,

К неселективным эндогенным агонистам рецепторов NMDA-типа относят L-глутаминовую и L-аспарагиновую кислоты, один из продуктов метаболизма

.....ч

триптофана - хинолиновую кислому [Lapin. 1990], а также цистеинсульфиновую и

\

гомоцистеинсульфиновую кислоты. К ряду природных агонистов принадлежит и иботеновая кислота, аналог мусцимола. NMDA является единственным селективным агонистом этих рецепторов. Получен также ряд синтетических соединений, способных активировать рецепторы NMDA: транс-пиперидин-2,3-дикарбоновая (trans-2,3-PDA), (1 S,3R)-1 -аминоциклобутан-1,3-дикарбоновая кислоты (ACBD), (1 R,3R)-1 -аминоциклоггентан-1,3-дикарбоновая кислота (ACPD) и другие (табл. 1). На рис. 1 приведены структурные формулы ряда лигандов

он

н

ноос1

—соон

nhch3

ноос

n

Н

ноос

so3 nh2

NM D A

nh2

Иботенат

D-HCSA

ноос,

н

н

ноос

н

н соон

соон

h2n соон

1S,3R-ACBD

nh,

2R,3S,4S-CPG

1. Агонисты глутаматсвязывающего участка

ноос' /NHCH3

/ \ hn n

h2n соон

1RJRACPD

,р03н2

н соон

D-AP5 D-CPP

2. Антагонисты глутаматсвязывающего участка

-о

I

NH

у

о

h2n

соон

N^COOH

I ОН

Gly D-циклосерин 7-С1-кинуренат

3. Агонисты и антагонисты глицинсвязывающего участка

МК-801

4. Неконкурентные антагонисты

РСР

Рис. 1. Некоторые лиганды рецепторов NMDA

NMDA-рецепторов. В целом, для агонистов NMDA рецепторов характерны: небольшое расстояние между терминальными кислотными группами, частое замещение атома азота аминогруппы и D-конфигурация хирального центра. Активность агонистов определяется природой со-кислотной функции и убывает в ряду C00H>S03H>P03H2 [Пиотровский, 1987]. В настоящее время стали известны также соединения с несколько отличной схемой расположения активных групп, / например, N-фталамоил-Ь-глутаминовая кислота (PhGA) [Kiskin, 1991]. В отличие ✓ от большинства других агонистов рецепторов глутамата, молекула PhGA содержит только три отрицательно и ни одной положительно заряженной группы.

Список лигандов, проявляющих антагонистические свойства для рецепторов NMDA, самый обширный среди всех ГР. Он включает в себя дикарбоновые аминокислоты и циклические соединения. К антагонистам первого поколения относятся D-AP5 и 0-2-амино-7-фосфоногснтановая кислота (D-AP7) [Johnson, 1988]. Второе поколение включает такие вещества, как DL-3-(2-карбоксипиперазин-4-ил)пропил-1-фосфоновая кислота (СРР), 0Ь-цис-4-фосфонометилпиперидин-2-карбоновая кислота (CGS19755). Наконец, недавно разработаны вещества третьего поколения - оптические изомеры агонистов предыдущей группы.

Роль глицина, как коактиватора рецепторов NMDA, была открыта в начале 80-х годов при изучении мембранных потенциалов, вызванных агонистами не-

Заключение диссертации по теме «Биоорганическая химия», Перестенко, Павел Валерьевич

Выводы

1. Разработан метод получения фракций плазматических мембран мышечной и нервной тканей саранчи содержащих натрий-независимые центры связывания агонистов постсинаптических глутаматных рецепторов.

2. Из мышц саранчи Shistocerca gregaria с использованием биоспецифической хроматографии на иммобилизованных аргиопининах выделен белковый комплекс со свойствами возбуждающих глутаматных рецепторов. Полученные рецепторные препараты обладают одним типом участков связывания L-[3H]Glu (Kd 0,47мкМ; Bmax 2300пмоль/мг) и L-[3H]Asp (Kd 0,65мкМ; Bmax 1870пмоль/мг).

3. С помощью электрофизиологических методов и радиолигандного анализа показано, что выделенный рецепторный комплекс содержит компоненты, взаимодействующие не только с L-глутаматом, но также L-аспартатом, L-квисквалатом и иботенатом.

4. По данным электрофоретического анализа рецепторный комплекс содержит триплет белков с м.м. 94-97кДа с участками связывания агониста, а также белки 54, 51 и 45кДа. Установлено полное или частичное строение 9 триптических фрагментов глутаматсвязывающего белка 95кДа.

5. Исследовано содержание ГР и мРНК в тканях саранчи на различных стадиях онтогенеза.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Перестенко, Павел Валерьевич, 1999 год

Список литературы

1. Вейгандт К. (1950) Методы эксперимента в органической химии M.-T2.-C.194.

2. Волкова Т.М., Аветисян H.A., Галкина Т.Г.. Куделин А.Б.. Махмудова Э.М., Соловьев М.М., Ташмухамедов Б.А., Гришин Е.В. аргиопининсвязывающий белок из мембран коры мозга быка. // Биоорг. Химия.-1989.-15.-N.8.-С. 1022-1029.

3. Гринштейн Д., Винниц М. (1965) Химия аминокислот и пептидов, М.

4. Гришин Е.В., Волкова Т.М., Арсеньев A.C., Решетова О.С., Оноприенко В.В., Магазаник Л.Г., Антонов С.М., Фёдорова И.М. (1986) Структурно-функциональная характеристика аргиопина - блокатора ионных каналов из яда паука Argiope lobata. Биоорган. Хим. 12. 8. с. 1121-1124.

5. Гришин Е.В., Волкова Т.М., Арсеньев A.C., Решетова О.С., Оноприенко В.В.,Магазаник Л.Г., Антонов С.М., Федорова И.М. Структурно-функциональная характеристика аргиопина - блокатора ионных каналов из яда паука Argiope lobata //Биоорг. Химия.-1986.-12.-К8.-С.1121-1123.

6. Дейко Л.И., Варлыго К.В. (1989) Структурные факторы, определяющие взаимодействие дикарбоновых альфа-аминокислот с глутаматными рецепторами. Физиология и биохимия глутаматергических синапсов. Л: Наука, с. 17-24.

7. КискинН.И., Крыпггаль O.A., Цындренко А.Я., Волкова Т.М., Гришин Е.В. (1989) Аргиопин, аргиопинины и псевдоаргиопинины - блокаторы глутаматных рецепторов в нейронах гиппокампа. Нейрофизиология. 21. 6. с.748-756.

8. Кискин Н.И., Крыпггаль O.A., Цындренко А.Я., Волкова Т.М.,Гришин Е.В. Аргиопин, аргиопинины и псевдоаргиопинины - блокаторы глутаматных рецептлоров в нейронах гиппокампа. // Нейрофизиология.-1989.-21.-N6.-С.748-756.

9. Корешёнков О.Н., Перестенко П.В., Думпис М.А., Пиотровский Л.Б. (1995а) Взаимодействие структурных аналогов N-фталамоил-Ь-глутаминовой кислоты с синаптическими мембранами гиппокампа человека. Хим.-Фарм. журн. 29, с.3-6.

10. Корешёнков О.Н., Перестенко П.В., Думпис М.А., Пиотровский Л.Б. (1995в) Взаимодействие 3-Н-(а>карбоксиацил)-Ь-2,3-диаминоиропионовых кислот с синаптическими мембранами гиппокампа. Хим.-Фарм. журн. 29, с.3-6.

11. Лапин И.П., Рыжов И.В. (1989) Нейроактивные кинуренины и родственные дикарбоновые возбуждающие аминокислоты. Физиология и биохимия глутаматергических синапсов. Л., Наука, с.25-36.

12. Магазаник Л.Г. Ионные каналы, активируемые глутаматом, как объект фармакологического воздействия. (1989) Физиология и биохимия глутаматергических синапсов. Л., Наука, -с.99-109.

13. Магазанник JI.Г., Антонов С.М., Федорова И.М., Волкова Т.М., Гришин Е.В. , Действие яда паука Argiope lobata и его низкомолекулярного компонента - j / аргиопина на постсинаптические мембраны. »______ "7 u

14. Пиотровский Л.Б., Думпис М.А. (1989) Возбуждающие аминокислоты. Связь структура-активность в рядах агонистов и антагонистов. Физиология человека и животных (серия "Итоги науки и техники").ВИНИТИ. 36.-с. 112-147.

15. Abe Т., Sugihara Н., Nawa Н., Shigemoto R., Mizuno N.. Nakanishi S. (1992) Molecular characterization of a novel matabotropic glutamate receptor mGluR5 coupled to inositol phosphate/Ca2+ signal transduction. J. Biol. Chem. 267, pp. 13361-13368.

16. Akaike N., Kawai N., Kiskin N.J. (1987) Spider toxin blocks excitatory amino acid responses in isolated hippocampal pyramidal neurons. Neurosci. Lett. 79, pp.326-330.

17. Anantharam V., Panchal R.G., Wilson A., Kolchine V.V., Treistman S.N., Bayley H. (1992) Combinational RNA splicing alters the surface charge on the NMDA receptor. FEBS Lett. 305, pp.27-30.

18. Anderson W.W., Lewis D.A., Swartzwelder H.S. (1987) Magnesium-free medium activates seizure-like events in the rat hippocampal slice. Brain Res. 57, pp. 1-21.

19. Antonov S.M., Grishin E.V., Magazanik L.G., Shupliakov O.V., Vesselkin N.P.,Volkova T.M. Argiopin blocks the glutamate responses and sensorimotor transmission in motoneurons of isolated frog spinal cord. // Neurosc. Lett.-1987.-83.-P.179-184.

20. Anwyl R., Mulkeen D., Rowan M.J. (1989) The role of N-methyl-D-aspartate receptors in the generation of short-term potentiation in the rat hippocampus. Brain Research. 503, pp. 148-151.

21. Aramori I., Nakanishi S. (1992) Signal transduction and pharmacological characteristics of a metabotropic glutamate receptor, mGluRl, in transfected CHO cells. Neuron 8, pp.757-765.

22. Araneda R., Bustos G. (1989) Modulation of dendritic release of dophamine by N-methyl-D-aspartate receptors in rat substancia nigra. J.Neurochem. 52, pp.962-970.

23. Arena J.P., Liu K.K., Paress P.S., Schaeffer J.M. Cully D.F. (1992) Expression of a glutamate-activated chloride current in Xenopus oocytes injected with Caenorhabditis elegans RNA: evidence for modulation with avermectin. Molecular Brain Res. 15, pp.339-348.

24. Arena J.P., Liu K.K., Paress P.S.,Frazier E.G., Cully D.F., Mrozik H., Schaeffer J.M. (1995) The mechanism of action of avermectins in Caenorhabditis elegans: correlation

between activation of glutamate-sensitive chloride current, membrane binding, and biological activity. J. Parasitology 81, pp.286-294.

25. Arena J.P., Liu K.K., Paress P.S., Cully D.F. (1991) Avermectin-sensitive chloride currents induced by Caenorhabditis elegans RNA in Xenopus oocytes. Molecular pharmac. 40, pp.368-374.

26. Ascher P., Nowak L. (1988) The role of divalent cations in the N-methyl-D-aspartate responses of mouse central neurones in culture. J. Physiol. 399, pp.247-267.

27. Ascher P., Nowak L. (1988) Quisqualate- and kainate-activated channels in mouse central neurones in culture. J.Physiol. 399, pp.227-245.

28. Ashford M.L.J., Boden P., Ramsey R.L., Usherwood P.N.R. (1989) Enhansement of desensitization of quisqualate-type glutamate receptor by the dissociative anaesthetic ketamine J.Exp.Biol. 141, pp.73-86.

29. Baron B.M., Harrison B.L., McDonald I.A., Meldrum B.S., Palfreyman M.G., Salituro F.G., Siegel B.W., Slone A.L., Turner J.P., White H.S. (1992) Potent indole-and quinoline-containing N-methyl-D-aspartate antagonists acting at the strychnine-insensitive glycine binding site. J. Pharmacol. Exp. Ther. 262, pp.947-955.

30. Bespalov A.Yu., Dumpis M.A., Piotrovsky L.B., Zvartau E.E. (1994) Pharmacol. Commun. 4, pp.46-53.

31. Bettler B., Egebjerg J., SharmaG., Pecht G., Hermans-Borgmeyer I., moll C., Stevens C.F., Heinemann S. (1992) Cloning of a putative glutamate receptor: a low affinity kainate-binding subunit. Neuron. 8, pp.267-265.

32. Bettler B., Boulter J., Hermans-Borgmeyer I., O'Shea-Greenfield A., Deneris E.S., Moll C., Borgmeyer U., Hollman M., Heinemann S. (1990) Cloning of a novel glutamate receptor subunit, GliR5: expression in the nervous system during development. Neuron. 5, pp.583-595.

33. Bezard E., Boraud T., Bioulac B., Gross C.E. (1997) Compensatory effects of glutamatergic inputs to the substsntia nigra pars compacta in experimental Parkinsonism. Neuroscience 81, pp.399-404.

34. Bicker G., Schafer S., Ottersen O.P., Storm-Mathisen J. (1988) Glutamate-like immunoreactivity in identified neuronal populations of insect nervous systems. J.Neurosci. 8 pp.2108-2122.

35. Birch P.J., Grossman C.J., Hayes A.C. (1988) 6,7-Dinitro-quinoxaline-2,3-dion and 6-nitro,7-cyano-quinoxaline-2,3-dion antagonise responses to NMDA in the rat spinal cord via an action at the strychnine-insensitive glycine receptor. Eur. J. Pharmacol. 156, pp.177-179.

36. Blekman D., Schoepp D.D., Ballyk B., Bufton H., Sharpe E.F.,Thomas K., Ornstein P.,Kamboj R.K. (1996) Pharmacological discrimination of GluR5 and GluR6 kainate receptor subtypes by (3S,4aR,6R,8aR)-6-[2-(l(2)H-tetrazole-5-yl)ethyl]decahyd roisdoquinoline-3 carboxylic-acid. Mol. Pharm. 49, pp.581-585.

37. Bolshakov V.Y., Gapon S., Magazanik L.G. (1991) Different type of glutamate receptors in isolated and identified neurons of the mollusc Planorbarius corneus. Journal of Physiology (London) 439, pp. 15-35.

38. Bonhaus D.W., Burge B.C., McNanara J.O. (1987) Biochemical evidence that glycine allosterically regulates an NMDA receptor-coupled ion channel. Eur. J. Pharm. 142, pp.489-490.

39. Boulter J., Hollmann M., O'Shea-Greenfield A., Hartley M., Deneris E., Maron C., Heinemann S. (1990) Molecular cloning and functional expression of glutamate receptor subunit genes. Science.-1990.-249.-p. 1033-2562.

40. Bridges R.S., Stevens D.R., Kahle L.S. (1989) Structure-function studies on N-oxalyl-diamino-dicarboxylic acids and excitatory amino acid receptors: evidence that beta-L-ODAP is a selective non-NMDA agonist J. Neurosci. 9, pp. 2073-2079.

41. Brodfuehrer P.D., Cohen A.H. (1990) Initiation of swiming activity in the medicinal leech by glutamate, quisqualate and kainate. J.Exp.Biol. 154, pp.567-572.

42. Carter C., Benavides J., Dana C., Shoemaker H., Perrault G., Sanger D., Scatton B. (1991) In: Excitatiry amino acid antagonists.-Ed. Meldrum B.S. pp.l30-163.-Blackwell Scientific Publications, Oxford.

43. Chavis P., Shinozaki H., Bockaert J., Fagni L. (1994) The metabotropic glutamate receptor types 2/3 inhibit L-type calcium channels via a Pertuiss toxin-sensitive G-protein in cultured cerebellar granule cells. J.Neurosci. 14, pp.7067-7076.

44. Clark R.B., Gration K.A.F., Usherwood P.N.R. (1979) Responces to DL-ibotenic acid at locust glutamatergic neuromuscular junction. British Journal of Pharmacology 66, pp.267-273.

45. Cleland T.A., Selverston A.I. (1995) Glutamate-gated inhibitory currents of central pattern generator neurones in the lobster stomatogastric ganglion. J. Neurosci. 15, pp.6631-6639.

46. Collingrige G., Singer W. (1991) Excitatory amino acid receptors and synaptic plasticity. The pharmacology of excitatory amino acids, a TIPS special report Trends in pharmacological sciens (Eds. Lodge D., Collingrige G.), pp.42-48.

47. Collins G.G.S. (1982) Some effects of excitatory amino acid receptor antagonists on synaptic transmission in the rat olfactory cortex slice. Brain Res. 244, pp.311-318.

48. Cotman C.W., Monaghan D.T., Offersen O.P. (1987) Anatomical organization of excitatory amino acid receptors and their pathways. TINS. 10, N7, pp.273-279.

49. Cowburn R.F., Hardy J.A., Briggs R.S., Roberts P.J. (1989) Characterization, dencity, and distribution of kainate receptors in normal and Alzheimer's deseased human brain. J.Neurochem. 52, pp. 140-147.

50. Coyle J.T. Neurotoxic action of kainic acid. (1983) Neurochemistry. 41, N1, pp. 1-11.

51. Cull-Candy S.G., (1976) Two types of extrajunctional L-glutamate receptors in locust muscle fibers. Journal of physiology 255, pp.449-464.

52. Cull-Candy S.G., Usherwood P.N.R. (1973) Two populations of L-glutamate receptors on locust muscle fibres. Nature, New Biology 246, pp.62-64.

53. Cull-Candy S.G., Usowicz M.M. (1987) lutamate and aspartate-activated channels and excitatiry synaptic currents in large cerebellar neurons in culture. Brain.Res. 402, pp. 182-187.

54. Cully D.F., Vassilatis D.K., Liu K.K., Paress P.S., Van Der Ploeg L.H.T., Schaeffer J.M., Arena J.P. (1994) Cloning of an avermectin-sensitive glutamate-gated chloride channel from Caenorhabditis elegans. Nature 371, pp.701-711.

55. Cully D.F., Paress P.S., Liu K.K., Schaeffer J.M., Arena J.P. (1996) Identification of a Drosophila melanogaster glutamate-gated chloride channel sensitive ti the antiparasitic agent avewrmectin. J.Biol.Chem. 271, pp.20187-20191.

56. Cully D.F., Vassilatis D.K., Liu K.K., Paress P.S., Van Der Ploeg L.H.T., Schaeffer J.M. Arena J.P. (1994) Cloning of an avrmactin-sensitive glutamate-gated chloride channel from Caenorhabditis elegans. Nature 371, pp.707-711.

57. Currie D.A., Truman J.W., Burden S.J. (1995) Drosophila glutamate receptor RNA expression in embrionic and lavar muscle fibres. Developmental Dynamics 203, pp.311316.

58. Curtis D.R., Watkins J.C. (1963) Acidic amino acids with strong excitatory actions on mammalian neurones. J. Physiol. (Lond.) 166, pp. 1-14.

59. Curtis D.R., Phillis J.W., Watkins J.C. (1959) Chemical excitation of spinal neurones. Nature 183, p.611.

60. Daoud M.A.R., Usherwood P.N.R. (1975) Action of kainic acid on a glutamatergic synapse. Comp. Biochem. Physiol. C52, pp.51-53.

61. Darlison M.G., Stuhmer T., Harvey R.J., Dautzenberg F.M., Kim H.-C., Zimmermann K., Amar M., Bermudez I., Minnen J.V. (1994) Molecular characterization and functional expression of molluscan ion-channel receptors that can be activated by either y-aminobutyric acid or L-glutamate. Netherlands J. Of Zoology 44, p.473-485.

62. Davies M.S., Baganoff M.P., Grishin E.V., Lanthorn T.H., Volkova T.M., Watson G.B., Wiegand R.C. (1992) Polyamine spider toxins are potent un-competitive antagonists of rat cortex excitatory amino acid receptors. Eur.J.Pharm. 227.-pp. 51-56.

63. Davies J., Francis A.A., Jones A.W., Watkins J.C. (1981) 2-amino-5-phosphonovaleriate (2APY), a potent and selective antagonist of amino acid-induced and synaptic excitation. Neurosci.Lett. 21, pp.77-81.

64. Davies J., Watkins J.T. (1982) Actions of D and L forms of 2-amino-5-phosphonovalerate and 2-amino-4-phosphonobutyrate in the cat spinal cord. Brain Res. 235, pp.378-386.

65. Deldago R., Barla R., Latorre L., Labarca P. (1989) L-Glutamate activates excitatory and inhibitory channels in Drosophila larval muscle. FEBS Letters 243, pp.337-342.

66. DentJ.A., Davis M.W., AveryL. (1997) Avr-15 encodes a chloride channel subunit that mediates inhibitory glutamatergic neurotransmission and ivermectin sensitivity in Caenorhabditis elegans. EMBQ Journal 16, pp.5867-5879.

67. Dingledine R., Hume R.I., Heinemann S.F. (1992) Structural determinants of barium permeation and rectification in non-NMDA glutamate receptor channels. J. Neurosci. 12, pp.4080-4087.

68. Duce I.R., Budd T.C., Richardson P.J. (1991) The of anti-ideotypic antibodies as a strategy for studying glutamate receptors. Biochem.Soc.Transactions 19, pp. 143-146.

69. Duce I.R., Scott R.H. (1985) Actions of dihydroavermectin Bla on insect muscle. British Journal of Pharmacology 85, pp.395-401.

70. Duce I.R., Budd T.C., Richardson P.J. (1991) The of anti-ideotypic antibodies as a strategy for studying glutamate receptors. Biochem.Soc.Transactions 19, pp. 143-146.

71. Dudel J., Franke C., Hatt H., Usherwood P.N.R. (1989) Chloride channels gated by extrajunctional glutamate receptors (H-receptors) on locust leg muscle. Brain Research 481, pp. 215-220.

72. Dudel J., Franke C., Hatt H., Ramsey R.L., Usherwood P.N.R. (1990) Glutamatergic channels in locust muscle show a wide time range of desensitization characteristics. Neurosci.Lett. 114, pp.207-212.

73. Duggan A.W. (1974) The differential sensitivity to L-glutamate and L-aspartate of spinal interneurones and Renshaw cells. Exp.Brain.Res. 19, pp.522-528.

74. Durand G.M., Gregor P., Zheng X., Bennet M.V.L., Uhl G.R., Zukin R.S. (1992) Cloning of an apparent splice variant of the rat N-methyl-D-aspartate receptor NMDAR! With altered sensitivity to polyamines and activators of protein kinase. C.Proc. Natn. Acad. U.S.A. 89, pp.9359-9363.

75. Duvoisin R.M., Zhang C., Ramonell K. (1995) A novell metabotropic glutamate receptor expressed in the retina and olfactory bulb. J.Neurosci. 15, pp.3075-3083.

76. Eaton S.A., Birse E.F., Wharton B. (1993) Eur. J. Neurosci. 5, pp. 186-189.

77. Etter A., Cully D.F., Schaeffer J.M., Liu K.K. Arena J.P. (1996). An amino acid substitutionin the pore region of glutamate-gated chloride channel enables the coupling of ligand binding to channel gating. J.Biol. Chem. 271, pp. 16035-16038.

78. Fagg G.E., Massieu L. (1991)In: Excitatiry amino acid antagonists.-Ed. Meldrum B.S. pp.39-63.-Blackwell Scientific Publications, Oxford.

79. Fagg G.E., Massieu L. (1991) In: Excitatiry amino acid antagonists.-Ed. Meldrum B.S. pp.39-63.-Blackwell Scientific Publications, Oxford.

80. Fairman W.A., Vandenberg R.J., Arriza J.L., Kavanaugh M.P., Amara S.G. (1995) An excitatiry amino acid transporter with properties of a ligand-gated chloride channel. Science 375, pp.599-603.

81. Foster A.C., Fagg G.E. (1984) Acidic amino acid binding sites in mammalian neuronal membranes: their characteristics and relationship to synaptic receptors. Brain Res. 7. Pp. 103-164.

82. Foster A.C., Fagg G.E. (1984) Acidic amino acid binding sites in mammalian neuronal membranes: their characteristics and relationship to synaptic receptors. // Brain Res.-Rev. 7, pp. 103-164.

83. Foster A.C., Donald A.E., Grimwood S., Leeson P.D., Williams B.J. (1991) Br. J. Pharmacol. 102, pp.64.

84. Foster A.C., Fagg G.E. (1984) Acidic amino acid binding sites in mammalian neuronal membranes: their characteristics and relationship to synaptic receptors. Brain Res.-Rev. 7, pp. 103-164.

85. Foster A.C. Kemp J.A., Leeson P.D., Grimwood S., Donald A.E., Marshall G.R., Priestley T., Smith J.D., Carling R.W. (1992) J. Pharmacol. Exp. Ther. 41, pp.914-922.

86. Frandsen A., Drejer J., Schousboe A. (1989) Direct Evidence that excitoxity in cultured neurons is mediated via N-methyl-D-aspartate (NMDA) as well as non-NMDA receptors. J.Neurochemistry. 53, pp.297-299.

87. Franke C., Hatt H., Dudel J. (1986) The inhibitory chloride channel activated by glutamate as well as g-aminobutiric acid (GABA). Single channel recordings from crayfish muscle. J. Of comparative Physiology A159, pp.591-609.

88. Frazer S.P., Djamgoz M.B.A., Usherwood P.N.R., O'Brien J., Darlison M.G., Barnard E.A. (1990) Amino acids receptors from insect muscle: electrophysiological characterization in Xenopus oocytes following expression by injection of mRNA. Molecular Brain Res. 8, pp.331-341.

89. Gabellini N.. Manev R.M., Candeo P., Favaron M., Manev H. (1993) Carboxyl domain of glutamate receptor directs its coupling to metabolic pathways. NeuroReport 4, pp.531-534.

90. Geng-Chang Y., Bonhaus D.W., Nadler J.V., McNamara J.O. (1989) N-methyl-D-aspartate receptors plasticity in kindling: quantitative and qualitative alteration in the N-methyl-D-aspartate receptor-channel complex. Neurobiol. 86, pp.8157-8160.

91. Giles D., Usherwood P.N.R. (1985) The effects of putative amino acids neurotransmitters on somata isolated from neurons of the locust central nervous system. Comp. Biochem. Physiol. 80C, pp231-236.

92. Giles D., Usherwood P.N.R. (1985) The effects of putative amino acids neurotransmitters on somata isolated from neurons of the locust central nervous system. Comp. Biochem. Physiol. 80C, pp.231-236.

93. Gill. R., Foster A.C., Woodruff G.N. (1987) Systemic administration of MK-801 protects against ischemia-induced hippocampal neurodegeneration in the gerbil J. Neurosci. 7, pp.3343-3349.

94. Grant G.B., Dowling J.E. (1995) A glutamate-activated chloride current in cone driven ON bipolar cells of the wite pearch retina. J.Neurosci. 15, pp.3852-3862.

95. Gregor P., Mano I., Maoz I. (1989) Molecular structure of chick cerebellar kainate-binding protein of a putative glutamate receptor. Nature. 342, pp.689.

96. Gregor P., Reeves R., Jabs E.W., Yang X., Dackowski W., Rochelle J.M., Brown R.H., Haines J.L., O'Hara B.F., Uhl G.R., Seldin M. (1993) Chromosomal localization of glutamate receptor genes: relationship of familial amyotrophyc lateral sclerosis and other neurological disoders of mice and humans. Proc.Acad.Sci,U.S.A. 90, pp.30533057.

97. Grishin E.V., Yolkova T.M., Arseniev A.S. (1989) Isolation and structure analysis of components from venom of the spider Argiope lobata. // Toxicon. 27, pp.541-549.

98. Hart A.C., Sims S., Kaplan J.M. (1995) Synaptic code for sensory revealed by C.elegans GLR-1 glutamate receptor. Nature 378, pp.82-85.

99. Harvey R.J., Stuhmer T., van Minnen J., Darlison M.G. (1997) Differential patterns of expression of two novel invertebrate (Lymnaea stagnalis) ionotropic glutamate receptor genes. Neurosci.Res.Comm. 20, pp.31-40.

100. Hawkes R., Niday E., Gordon J. (1982) A dot immunobloting assay for monoclonal and other antibodies. Analyt.Biochem. 119, pp. 142-147.

101. Hayashi T. (1954) Effects of sodium glutamate on the nervous system. KeioJ.Med. 3, p.183.

102. Hayashi Y., Tanabe Y., Aramori I., Masy M., Shimamoto K., Ohfune Y., Nakanishi S. (1992) Agonist analysis of 2-(carboxyciclopropyl)glycine isomers for cloned metabotropic glutamate receptor subtypes expressed in Chinese hamster ovary cells. Br. J. Pharmacol. 107, pp.539-543.

103. Herb A., BurnashevN., Werner P., Sakmann B., Wisden W., Seeburg P.H. (1992) The KA-2 subunit of excitatory amino acid receptors shows widespread expression in brain and forms ion channels with distantly related subunits. Neuron 8, pp.775-785.

104. Hollmann M., Hartley M., Heinemann S. (1991) Ca2+ permeability of KA-AMPA-gated glutamate receptor channels depends on subunit consumption. Science. 252, pp.851-853.

105. Hollmann M., O'Shea-Greenfield A., Rogers S.W., Heinemann S. (1989) Cloning by functional expression of a member of the glutamate receptor family. Nature. 342, pp.643-648.

106. Holmann M., O'Shea-Greenfield A., Rogers S.W., Heinemann S. (1989) cloning by functional expression of a member of the glutamate receptor family. Nature 342, pp.643-648.

107. Houamed K.M., Kuijper J.L., Gilbert T.L., Haldemann B.A., O'Hara P.J., Mulvihill E.R., Aimers W., Hagen F.S. (1991) Cloning, expression, and gene structure of a G-protein-coiupled glutamate receptor from rat brain. Science 252, pp. 1318-1321.

108. Hume R.L., Dingledine R., Heinemann S. (1991) Identification of a site in glutamate receptor subunits that controls calcium permeability. Science 253, pp. 1028-1031.

109. Idriss M., Albuquerque E.X. (1985) Phenciclidine blocks glutamate-activated postsynaptyc currents. FEBS 189, pp. 150-156.

110. Ikeda K., Nagasawa M., Mori H., Araki K., Sakimura K., Watanabe M., Mishina M. (1992) Cloning and expression of the e4 subunit of the NMDA receptor channel. FEBS Lett. 313, pp.34-38.

111. Ikemoto Y., Akaike N. (1988) The glutamate-induced chloride channel current in Aplysia neurons lacks pharmacological properties seen fo rexcitatory responses. European J. Pharmac. 150, pp.313-318.

112. Ishii T., Moriuoshi K., Sugihara H., Sakurada K., Kadotani H., Yokoi M., Akazawa C., Shigemoto R., Mizuno N., Masu M., Nakanishi S., (1993) Molecular characterization of the family of the N-methyl-D-aspartate receptor subunits. J. Biol. Chem. 268, pp.2863-2843.

113. Ishimaru H., Kamboj R., Ambrosini A., Henley J.M., Soloviev M.M. et al (1996) A unitary non-NMDA receptor short subunit from Xenopus: DNA cloning and expression. Receptors and Channels 4, pp.31-49.

114. Joels M., Yool A.J., Gruol D.L. (1989) Unique properties of non-N-methyl-D-aspartate excitatory responses in cultured Purkinje neurons. Neurobiology. 86, pp.3404-3408.

115. Johnson J.W., Ascher P. (1987) Glycine potenciates the NMDA response in cultured mouse brain neurons. Nature. 325, pp.529-531.

116. Johnson R.L., Koerner J.E. (1988) Excitatory amino acid neurotransmission. J. Med. Chem. 31, pp.2057-2066.

117. Jonas P. Sakmann B. (1992) Glutamate receptor channels in isolated patches from CA1 and CA3 pyramidal cells of rat hippocampal clieses. J.Physiol 455, pp. 143-171.

118. Jones M.C., Anis N.A., Lodge D. (1990) Philanthotoxin blocks quisqualate-, AMPA-and kainate-, but not NMDA-, induced excitation of rat brainstem neurones in vivo. Br. J. Pharmacol. 101, pp.968-970.

119. Jones P.G., Rosser S.J., Bulloch A.G.M. (1987) Glutamate supression of feeding and the underlying output of effector neurons in helisoma. Brain.Res. 437, pp.56-68.

120. Kamboj R.K., Schoepp D.D., Nutt S., Shekter L., Korczak В., True R.A., Rampersad V., Zimmermann D.M., Wosnick M.A. (1994) Molecular cloning, expression and

pharmacological characterization of HUMEAA1, a human kainate receptor subunit. J. Neurochem. 62, pp,l-9.

121. Kano M., Kato M. (1987) Quisqualate receptors are specifically involved in cerebellar synaptic plasticity. Nature. 325, N1, pp.276-279.

122. Karst H., Piek T. (1991) structure-activity relationship of philantotoxins-II. Effects on glutamate gated ion channels of the locust muscle fibre membrane. Comp.Biochem.Physiol. 98C, pp.479-489.

123. Keinanen K., Wisden W., Sommer B., Werner P., Herb A., Yerdoon T.A., Sakmann B., Seeburg P.H. (1990) A family of AMPA-selective glutamate receptors. Science. 249, pp.556-560.

124. Keinanen K., Wisden W., Sommer B., Werener P., Herb A., Verdoon T.A., Sakmann B., Seeburg P.H. (1990) A family of AMPa-selective glutamate receptors. Science 249, pp. 556-560.

125. Kemp J.A., Priestley T., Marshall G.R., Leeson P.D., Williams B.J. (1991) Br. J. Pharmacol. 102, pp.65.

126. KerkutG.A., Shapira A., Walker R.J. (1965) The effect of acetylholyne, glutamic acid and GABA on the perfused cockroach leg. Comp.Biochem.Physiol. 16, pp.37-48.

127. Kerry C.J., Ramsey R.L., Sansom M.S.P. Usherwood P.N.R. (1987) single-channel studies of the action of (+)-tubocurarine on locust muscle glutamate receptors. J.exp.Biol. 127, pp.121-134.

128. King W.M., Carpenter D.O. (1989) Voltage-clamp characterization of CI" conductance gated by GABA and L-glutamate in single neurons of AplysiaJ. Neurophysiol. 61, pp.892-899.

129. Kiskin N.I. Tsyndrenko A.Ya., Piotrovsky L.B. (1991) A novel selective NMDA agonist, N-phthalamoyl-L-glutamic acid (PhGA). Neuroreport 2, pp.29-32.

130. Kleckner N.W., Dingledine R. (1988) Requirement for glycine in activation of NMDA-receptors expressed in Xenopus oocytes. Science. 241, pp.835-837.

131. Klockgether T., Turski L. (1989) Excitatory amino acids and the basal ganglia: implications for the therapy of Parkinson's disease. TINS. 12, pp.285-286.

132. Koerner J.F., Johnson R.L. (1992) L-AP4 receptor ligands. In: Excitatory amino acids receptors; Design of Agonists and Antagonists (Krogsgaard-Larsen P., Hansen J.J., Eds), pp.308-330. Ellis Horwood Limited, West Sussecs, U.K.

133. Kohler M., Burnashev N., Sakmann B., Seeburg P.H. (1993) Determination of Ca2+ permeability in both TM1 and TM2 of high-affinity kainate receptor channels, diversity by RNA editing. Neuron 10, pp.491-500.

134. Kohler M., Burnashev N., Sakmann B., Seebyrg P.H. (1993) determination of Ca2+permeability in both TM1 and TM2 of high-affinity kainate receptor channels, divercity DNA by editing. Neuron 10, pp.491-500.

135. Kuryatov A., Laube B., Betz H., Kuhse J. (1994) Mutational analysis of the glycine-binding site of the NMDA receptor: structural similarity with bacterial amino acid-binding proteins. Neuron 12, pp. 1291-1300.

136. Kuryatov A., Laube B., Betz H., Kuhse J. (1994) Mutational analysis of the glycine-binding site of the NMDA receptor: structural similarity with bacterial amino acid-bunding proteins. Neuron 12, pp.1291-1300.

137. Kutsuwada T., Kashiwbuchi N., Mori H., Sakimura K., Kushiya E., Araki K., Meguro H., Masaki H., Kumanishi T., Arakawa M., Mishina M. (1992) Molecular diversity of the NMDA receptor channel. Nature 358, pp.36-40.

138. Laemmli U.K. (1970) Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature 227, pp.680-685.

139. Lambolez B., Audinat E., Bochet P., Grepel F., Rossier J. (1992) AMPA receptor subunits expressed by single Purkinje cells. Neuron. 9, pp.247-258.

140. Lea T.J., Usherwood P.N.R. (1973) Effect of ibotenic acid on chloride permeability of insect muscle fibres. Comparative General Pharmacology 4, pp.351-63.

141. Lehmann J.,Tsai C., Wood P.L. (1988) Homocysteic acid as a putative excitatory amino acid neurotransmitter: I. Postsynaptic characteristics at N-methyl-D-aspartate-type receptors on striatal cholinergic interneurons. J.Neurochem. 51, pp. 1765-1770.

142. Lester R.A.J., Jahr C.E. (1990) Quisqualate-receptor mediated depression of calcium currents in hippocampal neurones. Neuron 4, pp.741-749.

143. Lodge D., Johnson K.M. Noncompetitive excitatory amino acid receptor antagonists. (1991) The pharmacology of excitatory amino acids, a TIPS special report Trends in pharmacological sciens/ Eds. Lodge D., Collingrige G. pp.13-18.

144. Lomeli H., Wisden W., Kohler M., Keinanen K., Sommer B., Seeburg P.H. (1992) High-affinity kainate and domoate receptors in rat brain. FEBS Lett 307, pp. 139-143.

145. Lowry O.H., Rosebrough N.J., Farr A.L., Randall R.J. (1951) Protein measurement with the Folin phenol reagent. J.Biol.Chem. 193, pp. 265-275.

146. Magazanik L.G., Antonov S.M., Fedorova I.M., Volkova T.M., Grishin E.V. Argiopin - a naturally occuring blocker of glutamate-sensitive synaptic channels / Receptors and ion channels.-Ed. Ovchinnikov Y.A., Huho F.-1987.-P.305-312.

147. Magazanik L.G., Antonov S.M., Fedorova I.M., Volkova T.M., Grishin E.V. (1986) Effects of the spider Argiope lobata crude venom and its low molecular weight component, argiopine, on the postsynaptic membrane. Biol.Membr. 3, pp.1204-1219.

148. Magazanik L.G., Antonov S.M., Fedorova I.M. (1987) Receptors and Ion Channels, Ed.Ovchinnikov Y.A., Hucho F..-1987, Walter de Gruyter & Co.,Berlin-New-York.-p.305-312.

149. Marder E., Paupardin-Tritsch D. (1978) The pharmacological properties of some crustacean neuronal, acetylholine, GABA, and L-glutamate responses. Journal of Physiol. (London) 280, pp.213-236.

150. Maricq A.V., Peckol E., Driscoll M., Bargmann C.I. (1995) Mehanosensory signalling in C.elegans mediated by the GLR-1 glutamate receptor. Nature 378, pp.78-81.

151. Martin L.J., Blackstone C.D., Levey A.I., Hungair R.L., Price D.L. (1993) AMPA glutamate receptor subunit are differentially distributed in rat brain. Neuroscience 53, pp.327-358.

152. Masu M., Tanabe Y., Tsuchida K., Shigemoto R., Nakanishi S. (1991) Sequence and expression of a metabotropic glutamate receptor. Nature 349, pp.760-765.

153. Mat Jais A.M., Kerkut G.A., Walker R.J., (1984) The ionic mechanisms associated with excitatory response ofkainate, L-glutamate, quisqualate, ibotenate, AMPA, and methyl tetrehydrofolate on leech Retzius cells. Comparative Biochemistry and Physiology 11C, pp. 115-126.

154. Mayer M.L., Westbrook G.L. (1987) Permeation and block of N-methyl-D-aspartic acid receptor channels by divalent cations in mouse cultured central neurons. J.Physiol 394, p.501.

155. Mayer M.L., Westbrook G.L. (1987) The physiology of excitatory amino acids in the vertebrate central nervous system. Progr. Neurobiol. 28, pp. 197-276.

156. McLennan H., Huffman R.D., Marshall K.C. (1968) Patterns of excitation of thalamic neurones by amino acids and by acetylholine. Nature 219, pp.387-388.

157. McNamara J.O., Eubanks J.H., McPherson J.D., Wasmuth J.J., Evans G.A., Heinemann S. (1992) Chromosomal localisation of human glutamate receptor genes. J. Neurosci. 12, pp.2555-2562.

158. Meldrum B., Garthwaite J. (1991) Excitatory amino acid neurotoxity and neurodegenerative disease. The pharmacology of excitatory amino acids, a TIPS special report Trends in pharmacological sciens (Eds. Lodge D., Collingrige G.) pp.54-62.

159. Meldrum B. (1985) Possible therapeutic application of antagonists of excitatory amino acid neurotransmitters. Clin. Sci. 68, pp.113-122.

160. Miljkovic Z., MacDonald J.F. (1986) Voltage-dependent block of excitatory amino acid currents by pentobarbital. Brain Res. 376, pp.396-399.

161. Miller R.J. (1991) Metabotropic excitatory amino acid receptors reveal their true colors. Trends Pharmacol. Sci.-12.-p.365-367.

162. Minakami R., Katsuki F., Sugiyama H. (1993) A variant of metabotropic glutamate receptor subtype 5: an evolutionary conserved insertion with no termination codon. Biochem.Biophys.Res.Commun. 194, pp.622-627.

163. Monaghan D.T., Bridges R.J., Cotman C.W. (1989) The excitatory amino acid receptors: their classes, pharmacology, and distinct properties in the function of the central nervous system. Ann.Rev.Pharmocol.Toxicol. 29, pp.365-402.

164. Monahan J.B., Michel J. (1987) Identification and characterisation of an N-methyl-D-aspartate specific L[3H]-glutamate recognition site in synaptic plasma membranes. J.Neurochemistry 48, pp. 1699-1708.

165. Monahan J.B., Corpus V.M., Hood W.F., Thomas J.W., Compton R.P. (1989) characterization of a [3H]-glycine recognition site as a modulatory site of the N-methyl-D-aspartate receptor complex. J.Neurochem. 53, pp.370-375.

166. Monahan J.B., Michel J. (1987) Identification and characterisation of an N-methyl-D-aspartate specific L[3H]-glutamate recognition site in synaptic plasma membranes. J.Neurochemistry. 48, pp. 1699-1708.

167. Monyer H., Sprengel R., Schoepher R., Herb A., Higuchi M., Lomeli H, Burnashev N., Sakmann B., Seeberg P.H. (1992) Heteromeric NMDA receptors: molecular and functional distinction of subtypes. Science 256, pp. 1217-1220.

168. Mori H., Yakamura T., Masaki H., Mishina M. (1993) Involvment of the carboxyl-terminal region in modulation by TPA of the NMDA receptor channel. NeuroReport 4, pp.519-522.

169. Moriyoshi K., Masu M., Ishil T., Shigemoto R., Mizuno N., Nakanishi S. (1991) Molecular cloning and characterization of the rat NMDA receptor. Nature 354, pp.3137.

170. Nakajima Y., Iwakabe H., Akazawa C., Nawa H., Shigemoto R., Mizuno N., Nakanishi S. (1993) Molecular characterization of a novel retinal metebotropic glutamate receptor mGluR with a high agonist selectivity for L-2-amino-4-phosphonobutyrate. J.Biol.Chem. 268, pp.11868-1 1873.

171. Nawy S., Copenhagen D.R. (1987) Multiple classes of glutamate receptor on depolarizing bipolar cells in retina. Nature 325, pp.56-58.

172. Nawy S., Jahr C.E. (1990) Supression by glutamate of cGMP-activated conductance in retina bipolar cells. Nature 346, pp.269-271.

173. Neuman R., Cherubini E., Ben.Ari J. (1988) Epileptiform bursts elicited in CA3 hippocampal neurons by a variety of convulsants are not blocked by N-methyl-D-aspartate antagonists. Brain Res. 459, pp.268-274.

174. Nevins M.E., Arnolde S.M. (1989) A comparison of the anticonvulsant effects of competitve and non-competitive antagonists of the N-methyl-D-aspartate receptor. Brain Res. 503, pp. 1-4.

175. Nikoletti F., Wroblewski J.T., Novelli A., Alho H., Guidotti A., Costa E. (1986c) The activation of inositol phospholipid metabolism as a signal-transduction system for excitatory amino acids in primary cultures of cerebellar granule cells. J. Neurosci. 6, pp. 1905-1911.

176. Nikoletti F., IadarolaM.J., Wroblewski J.T., Costa E. (1986a) Excitatory amino acid recognition sites coupled with inositol phospholipid metabolism:developmental changes and interaction with al-adrenoreceptors. Proc.Natn.Acad.Sci. U.S.A. 83, pp. 1931-1935.

177. Nikoletti F., MeekJ.L., Iadarola M.J., Chuang D.M., Roth B.L., Costa E. (1986b) Coupling of inositol pospholipid metabolism with excitatory amino acid recognition sites in rat hippocampus. J. Neurochem. 46, pp.40-46.

178. Nomura A., Shigemoto R., Nakamura Y., Okamoto N., Mizuno N., Nakanishi S. (1994) Developmentally regulated postsynaptic localization of a metabotropic glutamate receptor in rat rod bipolar cells. Cell 77, pp.361-369.

179. Okamoto N., Hori S., Akazawa C., Hayashi Y., Shigemoto R., Mizuno N., Nakanishi S. (1994) Molecular characterization of a new metabotropic glutamate receptor mGluR7 coupled to inhibitory cyclic AMP signal transduction. J.Biol. Chem. 269, p.1231-1236.

180. Ong W.Y., He Y., Garey L.J. (1997) Localization of glutamate receptors in the substantia nigra pars compacta of the monkey. J. Brain Res. 38, pp.291-298.

181. Ozawa S., lino M., Tsuzuki K. (1991) Two types of kainate responses in cultured rat hippocampal neurones. J.Neurobiol. 66, pp.2-11.

182. O'Hara P., Sheppard P.O., Thogersen H., Yenezia D., Haldeman B.A., McGrane V., Houamed K.H., Thomsen C., Gilbert T.L., Mulvihill E.R. (1993) The ligand-binding domain in metabotropic glutamate receptors is realed to bacterial periplasmic binding domains. Neuron 11, pp.41-52.

183. Parmentier M.L., Pin J.P., Bockaert J., Grau Y. (1996) Cloning and functional expression of a Drosophila metabotropic glutamate receptor expressed in the embryonic CNS. J.Neurosci. 16, pp.6687-6694.

184. Paschen W., Blackstone C.D., Huganir R.L., Ross C.A. (1994) Human GluR6 kainate receptor (GRIK2)-Molekular cloning, expression, polymorphysm and chromosomal assignment. Genomics 20, pp.435-440.

185. Pearlstein E., Marchard A.R., Clarac F. (1994) Inhibitory effects of L-glutamate on central processes of crustacean leg motoneurons. Eur.J.Neurosci. 6, pp. 1445-1.452.

186. Pickering D.S., Thomsen C., Suzdack P.D., Fletcher E.J., Robitaille R. (1993) A comparison of two alternatively splicing forms of a metabotropic glutamate receptor coupled to phosphinositide turnover. J.Neurochem. 61, pp.85-92.

187. Pin J.P., Waeber C., Prezeau L., Bockaert J., Heinemann S.F. (1992) Alternative splicing generetes metabotropic glutamate receptors including different patterns of calcium release in Xenopus oocytes. Proc.Natn.Acad.U.S.A. 89, pp. 10331-10335.

188. Piotrovsky L.B. Dumpis M.A., Garyaev A.P., Zaitsev Yu.Y. (1992) Trends in Medicinal Chemistry'90 (Sarel S. et al. eds.) Blackwell Scientific Publications, pp. 183189.

189. Prezeau L., Carette J., Helpap B., Curry K., Pin J.-P., Bockaert J (1994) Pharmacological characterization of metebotropic glutamate receptors in several types of brain cells in primary cultures. Molec.Pharmac. 45, pp.570-577.

190. Prezeau L., Manzoni O., Homburger V., Sladczek F., Curry K., Bockaert J. (1992) Characterization of metabotropic glutamate receptor: direct negative coupling to adenylate cyclase and involvement of a pertussis toxin-sensitive G protein. Proc.Natn. Acad.Sci U.S.A. 89, pp.8040-8044.

191. Puranam R.S., Eubanks J.H., Heinamann S.F., McNamara J.O. (1993) Chromosomal localization of the gene for human glutamate receptor subunit-7. Somatic Cell Molec. Genet. 19, pp.581-588.

192. Quinlan E.M., Murphy A.D. (1991) Glutamate as a putative neurotransmitter in the buccal central pattern generetor of Helisoma-trivolvis. J.Neurophysiol. 66, pp. 12641271.

193. Ransom R.W., Stec N.L. (1988) Cooperative modulation of [3H]MK-801 binding to the N-methyl-D-aspartate receptor-ion channel complex by L-glutamate, glycine, and polyamines. J. Neurochem. 51, pp.830-836.

194. Recasens M., Guiramand J., Nourigat A., Sassetti I., Devilliers G. (1988) A new quisqualate receptor subtype (sAA2) responsible for the glutamate-induced inositol phosphate formation in rat brain synaptoneurosomes. Neurochem. Int. 13, pp.463-467.

195. Reynolds I.J., (1990) Arcaine is a competitive antagonist of the polyamine site on the NMDA receptor. Eur. J. Pharm. 177, pp.215-216.

196. Robinson N.L. (1982) Anomalous resistance changes following application of the neurotransmitter L-glutamate in insect muscle. J.comp.Physiol. 148, pp.281-285.

197. Roche K.W., Raymond L.A., Blakstone C., Huganir R.L. (1994) Transmembrane topology of the glutamate receptor subunit GluR6. J.Biol.Chem. 269, pp. 11679-11682.

198. Rogawski M.A. (1992) The NMDA receptor, NMDA antagonists and Epilepsy therapy. Drugs. 44. pp.279-292.

199. Rogers M. Dani J. (1995) Comparison of quantitative calcium flux through NMDA, ATP, and ACh receptor channels. Biophys. J. 68, pp.501-506.

200. Ross S.M., Roy D.N., Spencer P.S. (1989) Beta-N-oxalylamino-L-alanine action on glutamate receptors. J. Neurochem. 53, pp.710-715.

201. Saitoe M., Tanaka S., Takata K., Kidokoro Y. (1997) Neuronal activity affects distribution of glutamate receptors during neuromuscular junction formation in Drosophila embrious. Development Biol. 184, pp.48-60.

202. Sakurada K., Masu M., Nakanishi S. (1993) Alteration of Ca2+permeability and sensitivity to Mg2+ and channel blockers by a single amino acid substitution in the N-methyl-D-aspartate receptor. J. Biol. Chem. 268, pp.410-415.

203. Saugstad J.A., Kinzie J.M., Mulvihilli E.R., Segerson T.P. Westbrook G.L. (1994) Cloning and epression of a new member of the L-2-amino-4-phosphonobutyric acid-class of metabotropic glutamate receptors. Molec.Pharmac. 45, pp.367-372.

204. Sawada M., HaraN., Maeno T. (1984) Ionic mehanisms of hyperpolarizing glutamate effect on two identified neurons in the buccal ganglion of Aplysia. J. Neurosci. Res. 11, pp.91-103.

205. Saywell K., Singh L., Oies R.J., Vass C., Leeson P.D., Williams B.J., Tricklebank M.D. (1991) Br. J. Pharmacol. 102, pp.66.

206. Schoepp D.D., Smith C.L., Lodge D. (1991) D,L-(tetrazol-5-yl) glycine: a novel and highly potent NMDA receptor agonist. Eur. J. Pharmacol. 203, pp.237-243.

207. Schuster C.M., Ultsch A., Schmitt B., Betz H. (1993) Molecular analysis of Drosophila glutamate receptors. In "Comparative Molecular Neurobiology" (Edt Pichon Y.), pp.234-249. Birkhauser, Basel.

208. Schuster C.M., Ultsch A., Schloss P., Cox J.A., Schmitt B„ Betz H. (1991) Molecular cloning an invertebrate glutamate receptor subunit expressed in Drozophila muscle. Science 254, pp.112-114.

209. Schwarcz R., Meldrum B. (1985) Excitatory aminoacid antagonists provide a therapeutic approach to neurological disorders. Lancet 2, pp. 140-143.

210. Seeburg P.H. (1996) The role of RNA editing in controlling glutamate receptor channel properties. J. Neurochem. 66, pp. 1-5.

211. Sheardown M.J., Nielsen E.O., Hansen A.J., Jacobsen P., Honore T. (1990) 2,3-Dihydroxy-6-nitro-7-sulfamoyl-benzo(F)quinoxaline: a neuroprotectant for cerebral ishaemia. Science.-247, pp.571-574.

212. Sheng M., Cummings J., Rodlan L.A., Jan Y.N., Jan L.Y. (1994) Changing subunit composition of heteromeric NMDA receptors during development of rat cortex. Nature 368, pp. 144-147.

213. Shiells R.A., Falk G. (1990) Glutamate receptors of rod bipolar cells are linked to a cyclic GMP cascade via a G-protein. Proc.R.Soc.Lond., Biol. 242, pp.91-94.

214. Simoncini L., Haldeman B.A., Yamagiva T., Mulvihill E. (1993) Functional characterization of metabotropic glutamate receptor subtypes. Biophys.J. 64, p.A84.

215. Sladeczek F., Pin J.-P., Recasens M., Bockaert J., Weiss S. (1985) Glutamate stimulates inositol phosphate formation in striatal neurones. Nature. 317, pp.717-719.

216. Slaughter M.M., Miller R.F. (1985) Identification of a distinct synaptic glutamate receptor on horizontal cells in mudpuppy retina. Nature 314, pp.96-97.

217. Smith S.E., Meldrum B.S. (1992) Cerebroprotective effect of a non-N-methyl-D-aspartate antagonist, GYKI 52466, after focal ishaemia in the rat. Stroke. 23, pp.861864.

218. Smith S.E., Duermuller N., Meldrum B.S. (1991) The non-N-methyl-D-aspartate receptor antagonists, GYKI 52466 and NBQX are anticonvulsant in two animal models of reflex epilepsy. Eur. J. Pharmacol. 201, pp. 179-183.

219. Soloviev M.M., Brierley M.J., Shao Z.Y., Mellor I.R., Volkova T.M. et al (1996) Functional expression of a recombinant unitary glutamate receptor from Xenopus, which contains N-methyl-D-aspartate (NMDA) and non-NMDA receptor subunits. J. Biol. Chem. 271, pp.32572-32579.

220. Sombati S., Hoyle G. (1984) Glutamatergic central nervous transmission in locusts. J.Neurobiol. 15, pp.507-516.

221. Sommer B., Keinanen K., Verdoorn T.A., Wisden W., Burnashev N., Herb A., Kohler M., Takagi T., Sakmann B., Seeburg P.H. (1990) Flip and flop: a cell-specific functional switch in glutamate-operated channels of the CNS. Science. 249, pp. 15801585.

222. Sommer B., Kohler M., Sprengel R., Seeburg P.H. (1991) RNA editing in the brain controls in the brain controls a determinant og ion flow in glutamate-gated channels. Cell 67, pp.11-19.

223. Sommer B., Kohler M., Sprengel R., Seeburg P.H. (1991) RNA editing in the brain controls a determinant of ion flow in glutamate-gated channels. Cell 67, pp.11-19.

224. Sommer B., Burnashev N., Verdoorn T.A., Keinanen K., Sakmann B., Seeburg P.H. (1992) A glutamate receptor channel with high affinity for domoate and kainate. EMBO 11, pp.1651-1556.

225. Standley С., Norris T.M., Ramsey R.L., Usherwood P.N.R. (1993) Gating kinetics of the quisqualate-sensitive glutamate receptor of locust muscle studied using agonist concentration jumps. Biophys.J. 65, pp. 1379-1386.

226. Steel J.E. Palmer A.M., Stratmann G.C., Bowen D.M. (1989) The N-methyl-D-aspartate receptor complex in Alzheimer's disease: reduced regulation by glycine but not zinc. Brain Res. 500, pp.369-373.

227. Stuhmer Т., Amar M., Harvey R.J., Bermudez I., van Minnen, Darlison M.G. (1996) Structure and pharmacological properties of an molluscan glutamate-gated cation channel and its likely role in feeding-behaviour. J.Neurosci 16, pp.2869-2880.

228. Sugihara H., Moriuoshi K., Ishii Т., Masu M., Nakanishi S. (1992) Structures and properties of seven isoforms of NMDA receptor genereted by alternative splicing. Biochem. Biophys. Res.Commun. 185, pp.826-832.

229. Sugiyama H., Ito I., Hirono C. (1987) A new type of glutamate receptor linked to inositol phospholipid metabolism. Nature 325, pp.531 -533.

230. Suzdak P.D., Thomsen C., Kristensen P. (1994) Neuropschypharmacology 10, p.622S.

231. Swartz K.J., Bean B.P. (1992) Inhibition of calcium channels in rat CA3 pyramidal neurons by a metabotropic glutamate receptor. J.Neurosci. 12, pp.4358-4371.

232. Tanabe Y., Masu M., Ishii Т., Shigemoto R., Nakanishi S. (1992) A family of metabotropic glutamate receptors. Neuron 8, pp. 169-179.

233. Tanabe Y., Nomura A., Masu M., Shigemoto R., Mizuno N., Nakanishi S. (1993) Signal transduction, pharmacological properties, and expression patterns of two rat metabotropic glutamate receptors, mGlur3 and mGluR4. J.Neurosci 13, pp. 1372-1378.

234. Taverna F.A., Wang L.-Y., MacDonald J.F. Hampson D.R. (1994) A transmembrane model for an ionotropic glutamate receptor predicted on the basis of the location of asparagine-linked oligosaccharides. J.Biol.Chem. 269, pp. 14159-14164.

235. Tazaki K., Chiba C. (1994) Glutamate, acetyiholine and g-aminobutyric acidas transmitters in the pyloric system of the stomatogastric ganglion of a stomatopod, squilla oratoria. Journal of comparative Physiol. A175, pp.487-504.

236. Thomsen C., Suzdak P.D. (1993) Eur. J. Pharmacol. 245, pp.299-301.

237. Thorns V., Mallory M., Hansen L., Masliah E. (1997) Alterations in glutamate receptor 2/3 subunits and amyloid precursor protein expression during

238. Tingley W.G., Roche K.W., Tompson A.K., Huganir R.L. (1993) Regulation of NMDA receptor phosphorylation by alternative splicing of the C-terminal domain. Nature 364, pp.70-73.

239. Towbin H., Staehelin T., Gordon J. (1979) Electrophoretic transfer of proteins from SDS and acid/urea polyacrilamide gels to nitrocellulose sheets: procedure and some applications. Proc.Nat'l. Acad. Si, US, 76, pp.4350-4354.

240. Trombley P.Q. Westbrook G.L. (1992) L-AP4 inhibits calcium currents and synaptic transmission via a G-protein-coupled glutamate receptor. J.Neurosci. 12, pp.2043-2050.

241. Tsiotos P., Plaitakis., Mitsacos A., Voukelaton G., Michalodimitrakis M., Kouvelas E.D. (1989)L-glutamate binding sites of normal and atrophic human cerebellum. Brain Res. 481, pp.87-96.

242. Uchino S., Sakimura K., Nagahari K., Mishina M. (1992) Mutations in a putative agonist binding region of the AMPA-selective glutamate receptor channel. FEBS Lett. 308, pp.253-257.

243. Ultsch A., Schuster C.M., Laube B., Schloss P., Schmitt B., Betz H. (1992) Glutamate receptors of Drosophila Melanogaster. cloning of kainate-sencitive subunit expressed in the central nervous system. Proc.Natl.acad.Sci. USA 89, pp. 10484-10488.

244. Ultsch A., Schuster C.M., Laube B., Schmitt B., Betz H. (1993) Glutamate receptors of Drosophila Melanogaster primary structure of a putative NMDA receptor protein expressed in the head of adult fly. FEBS 324, pp.171-177.

245. Usherwood P.N.R. (1994) Insect glutamate receptors. Adv. in insect physiol. 24, pp.309-341.

246. Usherwood P.N.R. (1984) From synapce to receptor: a survey of chemical transmission. In "Neurobiology of pain" (Eds Holden A.V., Winlow W.), pp.29-58. Manchester University Press. Manchester.

247. Usherwood P.N.R. (1988) Comments on the action of polyamine spider toxins on insects with particular reference to argiotoxin-636. In "Neurotox'88: Molecular basis of drug and pesticide action" (Ed. Lunt G.G.), pp.383-392. Excerpta Medica, Elseiver, Amsterdam.

248. Usherwood P.N.R., Machili P. (1966) Chemical transmission of the excitatory neuromuscular synapse. Nature 210, pp.634-636.

249. Yerdoorn T.A., Burnashev N., Monnyer H., Seeburg P.H., Sakmann B. (1991) Structural determinants of ion flow through recombinant glutamate receptor channels. Science. 252, pp. 1715-1718.

250. Vyklicky L., Patneau D.K., Mayer M.L. (1991) Modulation of excitatory synaptic transmission by drugs that reduce desensitization at AMPA/kainate receptors. Neuron. 7, pp.971-984.

251. Wada K, Dechesne C.J., Shimasaki S. (1989) Sequence and expression of a frog brain complementary DNAencoding a kainate-binding protein. Nature 342, p.684.

252. WaffordK.A., Satelle D.B. (1986) Effects of amino acid neurotransmitter candidates on an identified insect motoneurones. Neurosci.Lett. 63, pp. 135-140.

253. Wafford K.A., Satelle D.B. (1986) Effects of amino acid neurotransmitter candidates on an identified insect motoneurone. Neurosci.Lett. 63, pp. 135-140.

254. Wafford K.A., Satelle D.B. (1986) Effects of amino acid neurotransmitter candidates on an identified insect motoneurones. Neurosci.Lett. 63, pp. 135-140.

255. Watkins J.C, Krogsgaard-Larsen P., Honore T. (1990) Structure-activity relationships in the development of excitatory amino acid receptor agonists and competitive antagonists. Trends Pharmacol. Sci. 11, pp.508-515.

256. Watkins J.C. (1962) The synthesys of some acidic amino acids possessing neuropharmacological activity. J.Med.Pharm.Chem. 5, pp.1187-1 199.

257. Watkins J.C., Evans R.H. (1981) Excitatory amino acid transmitters. Annu. Rev. Pharm. Toxicol. 21, pp. 165-204.

258. Watson A.H.D. (1988) Antibodies against GABA and glutamate label neurons with morphologically distinct synaptic vesicles in the locust central nervous system. Neuriscience 26, pp.33-34.

259. Wenthold R.J., Yokoyani N., Doi K., Wada K. (1992) Immunochemical characterisation of the non-NMDA glutamate receptor using subunit-specific antibodies. J. Biol. Chem. 267, pp.501-507.

260. Wo Z.G., Oswald R.E. (1994) Transmembrane topology of two kainate receptor subunits revealed by N-glycosylation. Proc. Natn. Acad.Sci U.S.A. 91, pp.7154-7158.

261. Wo Z.G., Oswald R.E. (1995) Unraveling the modular design of glutamate-gated ion channels. Trend Neurosci. 18, pp. 161 -168.

262. Wong E.H.F., Kemp J.A. (1991) Sites for antagonism on the N-methyl-D-aspartate receptor channel complex. Annu. Rev. Pharmocol. Toxicol. 31, pp.401-425.

263. Yakamura T., Mori H., Masaki H., Shimoji K., Mishina M. (1993) Different sensitivities of NMDA receptor channel subtypes to non-competitive antagonists. NeuroReport 4, pp.687-690.

264. Yamazaki M., Mori H., Araki K., Mori K.J., Mishina M. (1992)Cloning, expression and modulation of a mouse NMDA receptor subunit. FEBS Lett. 300, pp.39-45.

265. Young A.B., Greenamyre J.T., Hollingsworth Z., Albin R., D'Amato C., Shoulson J., Penney J.B. (1988) NMDA receptors losses in Putamen from patients with Huntington's disease. Science. 241, pp.981-983.

266. Zorumski C.F., Yamada K.A., Price M.T. Olney J.W. (1993) Glutamate stimulates inositol phosphate formation in striatal neurones. Neuron 10, pp.61-67.