Влияние природных вариантов факторов инвазии на проникновение Listeria monocytogenes в эукариотические клетки» тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат наук Собянин Константин Александрович

• Собянин Константин Александрович
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Собянин Константин Александрович

Введение

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Биология, экология и патогенность L. monocytogenes

1.1.1 Общие сведения о листериях

1.1.2. Распространение листериоза среди людей

1.1.3. Листериоз домашних животных

1.1.4. Распространение листерий в природных очагах

1.2 Основные механизмы внутриклеточного размножения

1.3 Структурно-функциональная характеристика факторов инвазии семейства интерналинов

Глава 2. Материалы и методы

2. 1 .Материалы

2.2 Микробиологические методы

2.2.1 Условия культивирования

2.2.2 Подготовка компетентных клеток для электропорации

2.2.3. Подготовка культуры для инфицирования эукариотических

клеток

2.2.4. Подотовка культуры для инфицирования мышей

2.2.5. Приготовление лизатов L. monocytogenes для ПЦР

2.2.6. Электропорация

2.3. Молекулярно-генетические методы

2.3.1. Праймеры, использованные в работе

2.3.2. Полимеразная цепная реакция

2.3.3 Выделение фрагментов ДНК из геля и подготовка к секвенированию

2.3.4 Определение нуклеотидной последовательности

2.3.5. Рестрикция

2.3.6. Лигирование

2.4. Биологические методы

2.4.1. Клеточные линии и условия их культивирования

2.4.2. Определение эффективности инвазии

2.4.3. Экспериментальная модель листериоза с внутривенным путем

инфицирования

2.4.4 Экспериментальная модель листериоза с интрагастральным путем инфицирования

2.4.5 Экспериментальная модель листериоза с внутрибрюшинным путем инфицирования

2.5. ¡шШш методы

2.5.1. Анализ нуклеотидных последовательностей

2.5.2. Построение дендрограм

2.5.3. Анализ нуклеотидного разнообразия

2.5.4. Статистические методы

Глава 3. Результаты собственных исследований

3.1 Характеристика штаммов, использованных в работе

3.2 Аллельный анализ тШ

3.3 Анализ аллельного разнообразия фрагмента гена т^, кодирующего интерналиновый домен

3.4 Замены аминокислот в природных вариантах факторов инвазии

3.5 Структурные различия между природными вариантами интерналинового домена InlB

3.6 Конструирование изогенных штаммов L. monocytogenes для анализа функциональных различий между природными вариантами InlB

3.7 Различия в эффективности инвазии изогенных штаммов L. monocytogenes в клетки человека и мышей

3.8 Различия в эффективности и динамике инфекции мышей линии Balb/c

Глава 4. Обсуждение

Выводы

Список литературы

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние природных вариантов факторов инвазии на проникновение Listeria monocytogenes в эукариотические клетки»»

Актуальность темы и степень ее разработанности.

Структура инфекционной патологии человека продолжает претерпевать изменения, что в первую очередь связано с проникновением в человеческую популяцию возбудителей новых, так называемых эмерджентных инфекций (emerging infectious diseases). Распространение этих инфекций чаще всего связано с деятельностью человека, изменяющего окружающую среду, и создающего условия для формирования антропургических очагов инфекции (Пушкарева В.И. и др., 2014). Особую опасность в этом отношении представляют возбудители сапронозов, являющиеся сочленами природных почвенных и водных экосистем, способными существовать в сапрофитической фазе, и характеризующихся экологической пластичностью, позволяющей занимать разнообразные экологические ниши и эффективно приспосабливаться к изменяющимся внешним условиям (Литвин В.Ю. и др., 1998). Характерной чертой, которая делает возбудителей сапронозов особенно опасными при контакте с человеческой популяцией, является полипатогенность, т.е. способность вызывать патологический процесс в чрезвычайно широком круге хозяев.

За последние 30 лет L. monocytogenes приобрела весомое значение в структуре инфекционной патологии человека как один из самых опасных возбудителей пищевых инфекций. Несмотря на относительно низкую, по сравнению с сальмонеллезом и кампилобактериозом, встречаемость, инфекция, вызываемая L. monocytogenes, отличается тяжестью проявлений и высокой летальностью, достигающей 30 %, а в случаях эпидемий

перинатального листериоза - 80%, от числа заболевших (Тартаковский И.С. и др., 2001).

Вид L. monocytogenes делится на 4 филогенетические линии и характеризуется выраженной клональностью. Более 90% эпидемических вспышек и до 50% спорадических случаев листериоза вызваны штаммами, относящимися к нескольким клонам I филогенетической линии, характеризующимся принадлежностью к серовару 4b (Ragon et al., 2008). Большая часть оставшихся случаев листериоза вызваны штаммами, относящимися ко II филогенетической линии, доминирующей среди пищевых изолятов (Kathariou., 2002; Карпова Т.И. и др., 2003).

Анализ штаммов возбудителя, распространенных на территории Российской Федерации, выявил как штаммы, относящиеся к широко распространенным в мире эпидемическим клонам, так и новые клональные группы (Zaytseva et al., 2007; Adgamov et al., 2012). Впервые было доказано, что специфическим маркером, характерным для штаммов, ответственных за вспышки перинатального листериоза, является определенный аллель гена inlA, кодирующего фактор инвазии интерналин А (InlA) (Зайцева Е.А. 2010). Изучение листерий, выделенных от диких мелких мышевидных грызунов, установил консерватизм другого фактора инвазии, интерналина B (InlB), среди штаммов, относящихся к разным клональным группам.

Белки семейства интерналинов InlA и InlB, необходимы для инвазии листерий в эпителиальные клетки млекопитающих. Интерналины InlA и InlB опосредуют ключевой этап развития генерализованной инфекции -пересечение листериями эпителиального барьера кишечника, - необходимый для проникновения возбудителя, попавшего в организм с контаминированной пищей, в лимфатические сосуды, кровоток и внутренние органы (Lecuit, 2005). Интерналины InlA и InlB взаимодействуют с консервативными эукариотическими рецепторами Е-кадхерином и с-Met,

соответственно. Было предположено, что выявленная природная вариабельность интерналинов InlA и InlB, может влиять на эффективность инвазии листерий, и, следовательно, на вирулентность возбудителя (Ермолаева С.А. и др., 2010). Однако экспериментальных доказательств этой гипотезы до настоящего времени получено не было.

Цель работы: изучение роли природных вариантов интерналинов InlA и InlB в инвазии и вирулентности Listeria monocytogenes.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Проанализировать спектр аллелей генов, кодирующих интерналины InlA и InlB, у штаммов L. monocytogenes, выделенных от человека, диких млекопитающих, включая мелких мышевидных грызунов, копытных и гидробионтов.

2. Провести биоинформационный анализ степени сходства природных аллелей генов интерналинов inlA и inlB.

3. На основе шаттл-вектора pTRKH2, создать вектор, обеспечивающий равный уровень экспрессии аллелей гена inlB в L. monocytogenes.

4. Клонировать наиболее распространенные аллели, кодирующие природные варианты интерналина Inffi, в созданный вектор, и ввести плазмиды в штамм L. monocytogenes, лишенный хромосомной копии гена inlB.

5. Определить эффективность инвазии полученных изогенных рекомбинантных штаммов L. monocytogenes на культурах клеток человека и мышей.

6. Определить эффективность и динамику размножения изогенных рекомбинантных штаммов L. monocytogenes на модели экспериментального листериоза лабораторных мышей.

Положения выносимые на защиту

1. Широкому распространению некоторых штаммов листерий среди диких животных обитающих в природных очагах листериоза, способствует наличие у этих штаммов определенных аллелей гена фактора инвазии интерналина В, наиболее эффективно взаимодействующих с рецепторами клетки хозяина.

2. Для объективной оценки вирулентности природных вариантов интерналина В, необходима экспериментальная модель листериоза имитирующая естественные условия. Такими свойствами обладает модель с интрагастральным способом инфицирования. Модель с интрагастральным способом инфицирования лабораторных животных является наиболее адекватной моделью для изучения различий в функциональной активности природных вариантов факторов инвазии Listeria monocytogenes.

Научная новизна.

1. Выявлены доминантные аллели гена inlB, кодирующего фактор инвазии интерналин В, гиперпредставленные среди штаммов коллекции и штаммов L. monocytogenes, депонированных в GenBank.

2. Впервые получена коллекция изогенных штаммов L. monocytogenes, экспрессирующих отличающиеся природные варианты InlB.

3. Показано, что природные варианты InlB, выявленные в штаммах, выделенных от мелких мышевидных грызунов и других животных в природных очагах листериоза, обеспечивают максимальную бактериальную нагрузку во внутренних органах, на лабораторной модели листериоза с интрагастральным путем инфицирования.

4. Экспериментально подтверждена гипотеза о том, что природные варианты InlB влияют на эффективность инвазии листерий в клетки человека и мышей.

Практическая значимость

Разработан вектор, позволяющий осуществлять экспрессию любых встроенных в него вариантов факторов инвазии на одинаковом уровне, и обеспечивающий их равную представленность на поверхности бактерии. Такой вектор позволяет анализировать функциональную активность вариантов факторов инвазии в зависимости только от последовательности функциональных доменов.

Разработана методика перроральной инфекции лабораторных мышей L. monocytogenes. Подготовлены методические рекомендации «Создание вектора для клонирования и экспрессии поверхностных белков в грамположительной патогенной бактерии Listeria monocytogenes», утвержденные на заседании совета по внедрению протокол №04 от «13»января 2016г.

Глава 1. Обзор литературы 1.1 Биология, экология и патогенность L. monocytogenes

1.1.1 Общие сведения о листериях

Listeria monocytogenes относится к роду грамположительных неспосрообразующих бактерий, который включает 6 видов, большинство из которых считаются сапрофитами. Только два вида, L. monocytogenes и L. ivanovii, являются патогенными. Причем последний до настоящего времени был выявлен исключительно у животных (Vazqiez-Boland et al., 2001). Напротив, L. monocytogenes вызывает заболевание как у животных, так и у человека. L. monocytogenes является убиквитарной бактерией и широко распространена в окружающей среде. Сообщалось о выделении листерий из почвы, растительных остатков, ила, фекалий диких и домашних животных (Зайцева и др., 2006; Welshimer and Donker-Voet, 1971). Попадая в антропогенный ландшафт, листерии формируют антропургические очаги, связанные с пищевыми производствами и агропромышленными комплексами (Пушкарева и др., 2015; Wiedman, 2005).

Листерии характеризуются высокой адаптабельностью и способностью расти в широком диапазоне условий. Так, в лабораторных условиях, листерии демонстрируют экспоненциальный рост в диапазоне рН от 5,5 до 8,5, а стационарная культура выдерживает несколько часов при рН 3,5 (Juneja et al., 1998; O'Driscoll et al., 1996). Листерии достаточно устойчивы к высоким концентрациям соли, демонстрируя устойчивый рост в диапазон от до 15% NaCl (Conner et al., 1986). Также толерантны листерии к температурам, демонстрируя рост при низких положительных температурах (4-10°С) и выдерживая нагревание до 55°С (Conner et al., 1986; Juneja et al., 1998; Hadjilouka et al., 2016). Способность эффективно размножаться при

низких положительных температурах, называемое психрофильностью, характерно не только для листерий, но и для других возбудителей сапронозов (см. ниже).

L. monocytogenes относится к числу факультативных внутриклеточных паразитов и способна эффективно размножаться как во внешней среде, так и внутри эукариотической клетки. Способность проникать и размножаться внутри эукариотических клеток является центральной особенностью листерий, лежащей в основе вирулентности этой патогенной бактерии (Ермолаева, 2001; Vazquez-Boland et al., 2001). В результате инфекции, у пациентов и восприимчивых животных развивается поражение центральной нервной системы, имеющие формы менингитов, менингоэнцефалитов и ромбэнцефалитов (Disson and Lecuit, 2012). Среди человеческой популяции листериозу особенно подвержены группы риска - пожилые и иммунокомпрометированные лица, дети. У беременных женщин, листериоз может проникать бессимптомно, но способность листерий к пересечению плацентарного барьера (см. ниже) приводит к развитию перинатальной инфекции, в значительном проценте случаев вызывающей мертворождения: в среднем 15 %-ная летальность, доходящая до 80 % в отдельных вспышках (de Noordhout et al., 2014).

1.1.2. Распространение листериоза среди людей

Заболевание листериозом среди людей регистрируются относительно давно: с середины 1950-х гг. (Тартаковский и др., 2001). До 1980-хх листериоз рассматривался как весьма редкое профессиональное заболевание, характерное для работников животноводческих и птицеводческих хозяйств, и связанное с распространением листерий в агрокомплексах. Однако, начиная с 1980-х гг. ситуация изменилась: вспышки и спорадические случаи

листериоза стали регистрироваться преимущественно в развитых странах (Тартаковский и др., 2001; Kathriou, 2002). Значительный рост заболеваемости листериозом был связан с внедрением в повсеместную практику продуктов, готовых к употреблению и предназначенных для длительного хранения в холодильнике. С учетом описанной выше психрофильности листерий, длительное хранение продуктов в холодильнике приводит к накоплению листерий, даже если исходная нагрузка была невелика (Conner et al., 1986; Luo et al., 2015; Hadjilouka et al., 2016). При эпидемических вспышках листериоза степень контаминации продуктов питания составляла от 100 до более 1 биллиона КОЕ на грамм (Farber J. M., et all 1991). Недаром листериоз в открытой печати стали называть «болезнью холодильников».

Значение пищевого пути передачи листериоза хорошо иллюстрируют данные Центра по контролю и профилактики заболеваний США (CDC), показавшие, что 11% всех продуктов, хранящихся в домашних холодильниках, контаминированы листериями. В 33% случаев выделенные штаммы L.monocytogenes от больных, а также из продуктов, хранившихся в холодильнике, имели идентичный молекулярно-генетический профиль при рестрикционном анализе пульс-электрофорезом. Более 30% спорадических случаев листериоза в США было связано с хранившимися в холодильнике мягкими сырами или полуфабрикатами мясных продуктов (Schuchat A., et all 1992).

Проблема пищевого листериоза помимо медицинского приобретает существенное социально - экономическое значение. Изъятие зараженных партий из торговли, ограничение ввоза и вывоза продуктов, остановка производства наносят ущерб в сотни миллионов долларов США и

европейским странам-экспортерам сыра и мясных продуктов (Костенко Ю. Г. и др., 1997; Low J. C. et all, 1997; Lowry P. D.,).

Самые крупные вспышки листериоза регистрировались преимущественно в 1980-2000х гг., до того как в большинстве стран, включая Россию, были введены жесткие санитарно-гигиенические нормы, регламентирующие наличие возбудителя в продуктах питания. В России такие правила были впервые введены в 2002 г. согласно ГОСТ Р 51921-2002 -Продукты пищевые. Методы выявления и определения бактерий Listeria monocytogenes. До этого момента в РФ, как и в других странах продукты на листерии не исследовались.

Имевшие место в этот период многочисленные эпидемические вспышки и спорадические случаи листериоза в высокоразвитых странах мира - США, Великобритании, Швейцарии, Канаде, Франции - были связаны с употреблением готовых продуктов пищевой индустрии (сыры, особенно мягкие, мясные полуфабрикаты, салаты и т. п.) (Тартаковский И.С.1994; Farber J. M., et all 1991; Gellin B. G., 1989). Именно после этого данное заболевание стали рассматривать как одну из важнейших пищевых инфекций. Крупнейшей и наиболее известной является вспышка листериоза в 1985 г. в Лос-Анджелесе (США), связанная с употреблением в пищу сычужного мексиканского сыра, контаминированного L.monocytogenes, серотип 4b. Всего было выявлено 142 больных листериозом, из них 48 человек умерли, у 130 отмечалась перинатальная и неонатальная патология. Эта и другие вспышки, менее значительные по масштабам, но также с высокой летальностью исходов (20-44%), показали, что в самой технологии приготовления ряда продуктов содержится опасность контаминации листериями и их размножения до высоких концентраций. Заражающие дозы листерий, поступающие с пищей, неизвестны, но в эксперименте на приматах

требовалось не менее 109 КОЕ L.monocytogenes для воспроизведения инфекции (Карликанова Н. Р. и др., 1999; Farber J. M.,et all 1991; Slutsker L. et all 2000).

И до и после 2000 г. листериоз не является широко распространенной инфекцией. По данным ВОЗ, в 2010 г. в мире было зарегистрировано 23 150 случаев листериоза. По данным 2014 г. в Европе в среднем регистрировалось 2,55 случаев листериоза на 100 000 населения, в Новой Зеландии - 5,24 случаев на 100 000 населения (de Noordhaurt et al., 2014). В Российской Федерации заболеваемость листериозом официально регистрируется с 1992 г. Число выявленных больных невелико - 40 - 100 случаев ежегодно. Как правило, диагностика листериоза связана с работой ветеринарных специалистов либо энтузиазмом отдельных исследователей.

По количеству выявленных случаев листериоз значительно уступает сальмонеллезам и кампилобактериозам, но превосходит их по тяжести клинического течения и проценту летальных исходов. Так, из 2 518 больных листериозом, выявленных в США в 1997 г., в 20% случаев имел место летальный исход, а госпитализация требовалась в 92% случаев (Mead P.S., et all 1999). В 2010 г. от листериоза погибло 5463 человек во всем мире (de Nordhaurt et al., 2014).

Из всех зарегистрированных в 2000-2014 гг. случаев листериоза, 20,7% составляет перинатальная инфекция (de Noordhaurt et al., 2014). Листериозная инфекция может развиваться на протяжении всего периода беременности, хотя большая часть случаев приходится на третий триместр. Болезнь протекает как гриппоподобная инфекция средней тяжести. У рожениц, имевших в анамнезе нарушения функции иммунной системы, листериоз протекает особенно тяжело (диарея со спазмами мышц живота,

рецидивирующими болями) и приводит к гибели плода. Парадоксально, но поражение центральной нервной системы - наиболее распространенная клиническая форма листериоза - у беременных выявляется крайне редко. Более 20% случаев перинатального листериоза завершается внутриутробной гибелью плода.

При неонатальном листериозе выделяют листериоз с ранним и поздним началом. Листериоз с ранним началом, как результат

внутриутробной инфекции, проявляется в 1-2-е сутки после рождения в форме сепсиса. Аспирация инфицированной амниотической жидкости может привести к поражению легких. Летальность достигает 50%.

Листериоз с поздним началом развивается в среднем через 10-12 дней после рождения и протекает, как правило, в форме менингита. Это форма наиболее характерна при внутрибольничных вспышках листериоза в родильных домах. Летальность при перинатальном листериозе достигает 80 % (Тартаковский и др., 2001), но в среднем меньше. В 1991 г. средняя летальность составляла около 25% (Gellin B. G., et all 1991). Через 25 лет -14,5 % (de Noordhaurst et al., 2014).

1.1.3. Листериоз домашних животных

Murray E. впервые описал заболевание у лабораторных животных, вызванное L.monocytogenes. Традиционно листериоз рассматривается как ветеринарная проблема. У млекопитающих L.monocytogenes вызывает аборты и менингоэнцефалиты, а эпизоотии листериоза наблюдали у коров и овец задолго до того, как эпидемические вспышки этой инфекции были выявлены у людей (Бакулов И. А. и др. 1994; Бакулов И. А. 1967; Гершун В. И. 1981; Seeliger H. 1958; Wesley I. 1999). Здоровые животные могут быть носителями L.monocytogenes, представляя потенциальную опасность для

людей и животных. Частота выделения листерий из фекалий коров после аборта, вызванного листериозом, составляла 24% для здоровых животных, из зараженного стада - 6,7% и для незараженного стада - 1,7% (Бакулов И. А. 1967). Частота выделения листерий из фекалий животных зависит от качества силоса. В неблагополучных животноводческих хозяйствах, где выявлены аборты у крупного рогатого скота и овец, главным источником листерий является травяной силос плохого качества с высоким значением рН (Котляров В. М. 1999). Случаи аборта у овец и крупного рогатого скота происходят через 3 недели после начала использования некачественного силоса. Задержка плаценты и вагинальных выделений имеет место у 70% абортирующих коров, что приводит к дальнейшему распространению листерий в окружающей среде. 25% абортирующих коров выделяют листерии с фекалиями в течение 3-12 месяцев, а молоко остается зараженным в 16% случаев в течение 1-12 месяцев после выкидыша. При этом в 41, 5 % случаев количество листерий в молоке настолько мало, что выделение возможно только после процедуры обогащения (септицимию у телят выявляют очень редко). Энцефалит выявляют преимущественно у нетельных животных разного возраста с марта по июнь около 50% в стойловый и 50% в пастбищный период.

Причиной листериоза у крупного рогатого скота может быть и зараженный силос, и зараженная подстилка из бройлерских хозяйств (Гершун В. И. 1981, 1988; Котляров В. М. и др. 2001). Возбудитель выделяют из 37-40% проб травяного силоса. Септическую форму листериоза выявляют у ягнят в течение первой недели после рождения. Ягнята заражаются через молоко, фекалии, загрязненную среду и погибают в течение суток (Бакулов И. А. 1967, SeeHger Н. 1961.).

1.1.4. Распространение листерий в природных очагах

L. monocytogenes относится к числу возбудителей сапронозов. Возбудители сапронозов в окружающей среде является частью природных микробных экосистем, характерными чертами возбудителя сапронозов являются убиквитарность - способные жить в широком диапазоне экологических условий и полипатогенность. Высокая метаболическая пластичность листерий обусловливает возможность перехода от сапрофитической фазы к паразитической и наоборот. Механизмы, позволяющие осуществить перенос возбудителей из природных очагов в антропургические, связаны с хозяйственной деятельности человека и развитием новых ранее не существовавших экологических условий обеспечивающих эффективное размножение возбудителя.

Другой характерной чертой возбудителей сапронозов являются полигостальность, т.е. способность колонизировать широкикй круг хозяев, и полипатогенность, т.е. способность вызывать патологический процесс в широком круге хозяев. Листерии в полной мере характеризуются этими понятиями. Японскими исследователями в период с 1991 по 1993 было исследовано содержимое кишечника 623 млекопитающих (11 видов) и 996 птиц (18 видов) добытых в 10 префектурах Японии. Было выделено 38 (6,1%) изолятов рода Listeria из 7 видов млекопитающих: японская макака (20%), красная лисица (13,3%), енотовидная собака (11,5%), гималайская цивета (9,1%), японская куница (3,9%), дикий кабан (2,7%), пятнистый олень (1,1%). Среди выделенных изолятов доля L.monocytogenes составила 1,0%.

На территории Дальнего Востока РФ, т.е. в регионе, географически близком Японии также были выявлены природные очаги листериоза. Так, в совместной работе ФГБУ «ФНИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России

и ФГБНУ «НИИЭМ им. Г.П. Сомова» были выделены изоляты L.monocytogenes из объектов окружающей среды и продуктов питания, от диких животных, мышевидных грызунов, гидробионтов. Было исследовано 654 образца биоматериала от диких грызунов, L.monocytogenes была обнаружена в 1,1% проб. Из 986 образцов, полученных от гидробионтов, листерии обнаружены в 1,4%. В пробах воды L.monocytogenes выделена из 4,9% образцов. В пищевых продуктах листерии были обнаружены в 0,4% морепродуктов, 1,4% в мясе, 0,6% молочных продуктов, 2,0% мясе птицы. (Zaytseva et al, 2007). В европейской части России так же найдены несколько очагов листериоза. В результате исследований фекалий животных установлено, что дикие парнокопытные, обитающие на территориях Тверской, Московской, Калужской и Владимирской областей являются носителями в желудочно-кишечном тракте листерий - Listeria monocytogenes и Listeria innocua. На территориях ГПЗФЗ «Таруса» и НП «Завидово», расположенных в Калужской, Тверской, Московской областях, где выполняются все необходимые профилактические мероприятия, листерионосительство пятнистым оленем составило 5,5 и 8,7 %, кабаном - 6,6 и 7,8 %, а маралом - 0 и 6,0 %, соответственно. Аналогичные показатели для пятнистого оленя и кабана, обитающих на территории Суздальского ГООХ Владимирской области, где не имеется возможности проведения в полном объеме ветеринарно-санитарных и охото-устроительных мероприятий, составили 34,5 и 24,0 %, соответственно. (Егорова И. Ю.,2013).

Значительная роль в распространении листериоза принадлежит грызунам. Описаны многочисленные случаи выделения листерий от серых крыс, домовых мышей, рыжих полевок, землероек, а также от гамазовых клещей и вшей, очесанных с грызунов на территории Москвы и Московской

области в 60-е годы. Анализ частоты выделения листерий от грызунов показал, что листериями заражено 0,14% особей. Более пораженными оказались грызуны, отловленные в овощехранилищах и различных коммунальных объектах. В овощехранилищах в 1981-1984 гг. исследовали 1 547 проб и выделили 51 или 3,25% штамм листерий.

Таким образом, приведенные данные показывают, что листериоз является тяжелым заболеванием с высокой летальностью, а листерии -убиквитарными бактериями, широко распространенными в природных и антропургических очагах. Для контроля этой инфекции необходимо глубокое понимание механизмов ее развития и особенно, деталей взаимодействия листерий с эукариотической клеткой - местом размножения возбудителя в ходе инфекции.

1.2 Основные механизмы внутриклеточного размножения

Взаимодействие листерий с эукариотической клеткой достаточно хорошо изучено. Первый этап включает взаимодействие листерий со специфическими рецепторами эукариотической клетки. Возбудитель взаимодействует с мембраной фагоцитирующей клетки через соответствующие рецепторы (Bonazzi, М. et а1 2011).

На втором этапе происходит активная индукция фагоцитоза, в результате которой бактерия оказывается в первичной фагосоме, окруженная однослойной мембраной. В этом процессе участвуют интерналины А и В. Способность листерий к активному фагоцитозу, особенно важна для проникновения в непрофессиональные фагоциты, прежде всего эпителиальные или эндотелиальные клетки.

Третий этап включает лизис первичной вакуоли и последующую репликацию листерий в цитоплазме. Вакуоль лизируется в течение 20-30

минут. На данном этапе важную роль играет листеризин О, тиолзависимый гемолизин. Выявлено, что мутанты дефектные по продукции гемолизина, и дикий штамм не отличались по способности проникать в клеточные линии, но мутантные штаммы не были способны к лизису фагосомы и репликации в цитоплазме. Низкие значения рН фагосомы благоприятны для активности листеризина О, способствуя максимальному проявлению мембранолитических возможностей фермента (Mounier, J., et all 1990)

Последующие исследования показали, что на этапе лизиса первичной вакуоли должны участвовать и другие факторы. Так, мутанты по гемолитической активности L monocytogenes могли размножаться в ряде линий культур клеток.

Вторым ферментом, определяющим лизис первичной вакуоли, является фосфатидилиназитол - специфичная фосфолипаза (PlcA). Показано, что деления в гене, детерминирующем синтез PlcA, влияет на выход L monocytogenes из фагосомы. В ряде исследований показана возможность непосредственного участия PlcA в лизисе мембраны эукариотической клетки возможно в кооперации с листеризином О.

Но узкий спектр субстратной специфичности фосфолипазы затрудняет интерпретацию мембранолитической активности PlcA, как следствие исключительно ферментативной активности.

Очищенная PlcA индуцирует лизис липосомы, не зависимый от гидролиза фосфолипида, тогда как аналогичный фермент, выделенный из Bac. thuringiensis, не оказывал влияния на лизис липосомы. Относительно низкие концентрации PlcA и листеризина О, добавляемые по отдельности, индуцировали медленный лизис мембраны. При совместном внесении эффект был выражен намного сильнее. Механизм образования пор в

мембране с помощью листериозной PlcA остается пока неясным, и существуют разные гипотезы, объясняющие их образование (Vazquez-Boland J.A. et all 2001). Следующий этап включает передвижение бактерии по цитоплазме с образованием характерного «актинового» хвоста и проникновение в соседнюю клетку путем продавливания мембраны и образование «пальцеобразной» инвагинации в соседнюю клетку (Cossart, P. 2000). Передвижение по цитоплазме эукариотической клетки зависит от способности L.mononcytogenes индуцировать полимеризацию актина эукариотической клетки в «кометообразный» хвост, расположенный на одном из концов бактериальной клетки, и «облако», окружающее бактерию. Полимеризация актина обеспечивает быстрое поступательное движение бактерии по цитоплазме со скоростью 1-1,5 мкм/с. На заключительном этапе движения бактерия связывается с мембраной эукариотической клетки и образует «пальцеобразную» инвагинацию в соседнюю клетку путем продавливания мембраны. Поверхностный белок ActA является основным продуктом листерий, участвующим в полимеризации актина. Ясно, что и другие, неизвестные пока, белки листерий необходимы для активного передвижения листерий по цитоплазме. Об этом свидетельствует наличие мутантных штаммов L. mononcytogenes, не способных к образованию «кометообразного» хвоста, но способных индуцировать полимеризацию актина (Yoshikawa, Y. et al. 2009).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Собянин Константин Александрович, 2016 год

Список литературы

1. Адгамов, Р.Р. Эколого-генетические аспекты формирования эпидемически значимых вариантов возбудителей сапронозных инфекций / Адгамов Р.Р., Тимченко Н.Ф., Зайцева Е.А., и др. // Успехи современной биологии. -2012. - Т.132, №6. - С.551-567

2. Бакулов И. А. Листериоз сельскохозяйственных животных. М., «Колос» 1967

3. Бакулов, И. А. Листериоз как пищевая инфекция / Бакулов И. А., Васильев Д. А. // Вопросы диагностики и профилактики, Ульяновск, 1991.

4. Бакулов, И. А. Эпидемиологические и эпизоотологические аспекты листериоза / Бакулов И. А., Котляров В. М., Шестиперова Т. И. // Журн. Микробиология. 1994.- №5.- С.100-105.

5. Гершун В. И. Листериоз сельскохозяйственных животных. Алма-Ата, 1981.

6. Гершун В. И. Экология листерий и пути их циркуляции в природном очаге. В сб. : Экология возбудителей сапронозов. М., 1988. - С.80-85

7. Егорова И. Ю. «Листерии в фауне Центрального региона России» Автореферат диссертации доктора биологических наук, Покров. 2013.

8. Ермолаева, С.А. Вариабельность функциональных доменов факторов патогенности как молекулярная основа полигостальности возбудителей сапронозов/ Ермолаева С.А., Зайцева Е.А, Тимченко Н.Ф., Адгамов Р.Р. // Тихоокеан. Мед. Ж. - 2010. - № 4. - С. 24-28.

9. Зайцева, Е.А. Микробиологическая характеристика Listeria monocytogenes, изолированных из различных источников в приморском крае./ Зайцева Е.А., Сомов Г.П.// Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии. 2006 - № 2 - С. 3-6

10. Карликанова, Н. Р. Листерии в молоке и молочных продуктах / Карликанова, Н. Р., Куваева И. Б., Карликанова Н. С. // Москва-Углич, 1999.

11. Карпова, Т.И. Типирование Listeria monocytogenes на основе полиморфизма генов факторов патогенности / Карпова Т.И., Фирсова Т.Е., Родина Л.В., и др. // Клиническая микробиология и антимикробная химиотерапия. 2003.- Т. 5 - №3- С. 251-258

12. Коренберг, Э. И. Преадаптивное происхождение возбудителей природноочаговых зоонозов / Коренберг, Э. И. // Успехи современной биологии. - 2005. - Т. 125, N 2. - С. 131-139.

13. Котляров В. М., Бакулов И. А. Листериоз - инфекция животных и людей. В сб. Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтцфельдт - Якоба и др. прионные болезни; листериоз; болезни Ауески, болезнь Тешена. Покров. 2001. С. 105-112.

14. Котляров В. М. Проблемы листериоза на рубеже тысячелетий. Материалы международного симпозиума / Котляров В. М. // В сб. Листериоз на рубеже тысячелетий. Покров. 1999. С.48-52.

15. Костенко, Ю. Г. Листерии - критерий безопасности мясных продуктов / Костенко Ю. Г., Шагова Т. С., Янковский К. С. // Мясн. Индустрия. 1997.-№3 - С.23-24.

16. Литвин, В.Ю. Сапронозы как природно-очаговые болезни / Литвин В.Ю., Сомов Г.П., Пушкарева В.И. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2010. - №1(50).С.10-16

17. Тартаковский, И. С. Листерии в инфекционной патологии человека -современная концепция / Тартаковский И. С. Палей О. С. Опочинский Э. Ф., и др. // ЗниСО. 1994.- №3 - С.1-4.

18. Профилактика и борьба с заразными болезнями, общими для человека и животных. Сб. Сан. Вет. Правил. Москва, 1996.

19. Пушкарева, В.И. Listeria monocytogenes- взаимодействие с агрокультурами и стадии формирования биопленки / Пушкарева В.И., Диденко Л.В., Годова Г.В., и др. // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. 2013. - № 1 (68) - С.42-49

20. Ряпис, Л.А. Сапронозы, классификация и номенклатура / Ряпис Л.А. // Журнал Эпидемиология и инфекционные болезни. 2003. - №6 - С. 8-11.

21. Сомов Г.П. Дальневосточная скарлатиноподобная лихорадка.-М.Медицина, 1979

22. Adgamov R., Zaytseva E., Thiberge J.-M., Brisse S., Ermolaeva S. Genetically Related Listeria Monocytogenes Strains Isolated from Lethal Human Cases and Wild Animals in the book "Genetic Diversity in Microorganisms", ISBN 978-95351-0064-5, 2012 (ed. Mahmut Caliskan)

23. Brembeck, FH. Essential role of BCL9-2 in the switch between p-catenin's adhesive and transcriptional functions / Brembeck FH, Schwarz-Romond T, Bakkers J, et all // Genes & Development. 2004. - Vol.18(18). -Р.2225-2230.

24. Bonazzi, M. Successive post-translational modifications of E-cadherin are required for InlA-mediated internalization of Listeria monocytogenes / Bonazzi, M., Veiga, E., Pizarro-Cerda, J. and Cossart, P. // Cellular Microbiology. 2008.-Vol. 10. - P.2208-2222.

25. Bonazzi, M. Clathrin phosphorylation is required for actin recruitment at sites of bacterial adhesion and internalization / Bonazzi M, Vasudevan L, Mallet A, et al

// The Journal of Cell Biology. 2011. - Vol. 195(3). - P.525-536.

26. Birchmeier, W. Essential role of BCL9-2 in the switch between p-catenin's adhesive and transcriptional functions / Birchmeier W. // Genes & Development. 2004. - Vol.18(18). - P.2225-2230.

27. Bierne, H. InlB, a surface protein of Listeria monocytogenes that behaves as an invasin and a growth factor / Bierne H., Cossart P., // Journal of Cell Science. 2002. - Vol.115. - P. 3357-3367

28. Breitsprecher, D. Crystal structure of an engineered YopM-InlB hybrid protein / Breitsprecher D, Gherardi E, Bleymuller W, Niemann H. // BMC Structural Biology. 2014. - Vol.14:12. Published online 2014 Mar 27. doi: 10.1186/14726807-14-12

29. Bunney, T. Phosphoinositide signalling in cancer: beyond PI3K and PTEN / Bunney T., Katan M. // Nature Reviews Cancer. 2010. - Vol.10. - P. 342-352

30. Cabanes, D. Animal Models of Listeria Infection / Cabanes, D., Lecuit, M. and Cossart, P. // Current Protocols in Microbiology. Published Online: 1 AUG 2008 DOI: 10.1002/9780471729259.mc09b01s10

31. Carvajal, A. Fatal endocarditis due to Listeria monocytogenes / Carvajal A. & Frederiksen W. // Rev. Infect. Dis. 1988. - Vol.10. - P. 616-623.

32. Condotta S., Martin J. Richer, Vladimir P. Badovinac, John T. Harty, Chapter 5 - Probing CD8 T Cell Responses with Listeria monocytogenes Infection, In: Emil R. Unanue and Javier A. Carrero, Editor(s), Advances in Immunology, Academic Press, 2012. - Vol. 113. - P.51-80

33. Conner, D.E. Effect of temperature, sodium chloride, and pH on growth of Listeria monocytogenes in cabbage juice / Conner DE, Brackett RE, Beuchat LR.

// Applied and Environmental Microbiology. 1986. - Vol.52(1). - P.59-63

34. Cossart P. Endocytosis of Viruses and Bacteria / Cossart P. and Helenius A. // Cold Spring Harb Perspect Biol. 2014. - Vol.1;6(8). pii: a016972. doi: 10.1101/cshperspect.a016972. Published Online.

35. Cossart, P. Non-classical use of clathrin during bacterial infections / Cossart P. and Viega E. // Journal of Microscopy. 2008. - Vol. 231. - P.524-528.

36. Den Bakker H. C. Lineage specific recombination rates and microevolution in Listeria monocytogenes / Den Bakker HC, Didelot X, Fortes ED, Nightingale KK, Wiedmann M. // BMC Evolutionary Biology. 2008;8:277. Published online 2008 Oct 8. doi: 10.1186/1471-2148-8-277.

37. Deng, X. Probing the pan-genome of Listeria monocytogenes: new insights into intraspecific niche expansion and genomic diversification / Deng, X., Phillippy, A. M., Li, Z., Salzberg, S. L., & Zhang, W. // BMC Genomics. 2010. Vol. 11, 500. http://doi.org/10.1186/1471-2164-11-500

38. Dietz, M. S. Single-molecule photobleaching reveals increased MET receptor dimerization upon ligand binding in intact cells / Dietz, M. S., HaBe, D., Ferraris,

D. M., et all //BMC Biophysics. 2013. Vol.6, 6. http://doi.org/10.1186/2046-1682-6-6

39. Disson, O. Modeling human listeriosis in natural and genetically engineered animals / Disson O, Nikitas G, Grayo S, et all. // Nature Protocols. 2009. - Vol.4. - P. 799 - 810.

40. Disson, O. Targeting of the central nervous system by Listeria monocytogenes / Disson O, Lecuit M. // Virulence. 2012. - Vol.3(2). - P.213-221.

41. Doumith, M. New Aspects Regarding Evolution and Virulence of Listeria monocytogenes Revealed by Comparative Genomics and DNA Arrays / Doumith M, Cazalet C, Simoes N, et al. // Infection and Immunity. 2004. - Vol.72(2). -P.1072-1083.

42. O'Driscoll, B. Adaptive acid tolerance response in Listeria monocytogenes: isolation of an acid-tolerant mutant which demonstrates increased virulence / O'Driscoll B, Gahan CG, Hill C. //Applied and Environmental Microbiology. 1996. - Vol.62(5). - P.1693-1698.

43. Durand, M. L. Acute bacterial meningitis in adults: a review of 493 episodes / Durand M. L., Calderwood S. V., Weber D. J., k et al // N. Engi. J. Med. 1993. -Vol.328. - P. 21-28.

44. Farber, J. M. Feeding trials of Listeria monocytogenes with a nonhuman primate model / Farber J. M., Daley E., Caotes F., et all // J. Clin. Microbiol. 1991. - Vol.29. - P. 2606-2608.

45. Farber, J. M. Listeria monocytogenes, a food-bome patyhogen. / Farber J. M., & Peterkin P. I. // Microbiol. Rev. 1991. - Vol. 55. - P.476-511.

46. Ferraris, D. Ligand-Mediated Dimerization of the Met Receptor Tyrosine Kinase by the Bacterial Invasion Protein InlB / Ferraris D., Ermanno Gherardi, Ying Di, et all. // Journal of Molecular Biology. 2010. - Vol. 395. - Is. 3. - P. 522532.

47. Fujita, Y. Hakai, a c-Cbl-like protein, ubiquitinates and induces endocytosis of the E-cadherin complex / Fujita Y., Krause G., Scheffner M., et all. // Nature Cell Biology. 2002. - Vol.4. - P. 222 - 231.

48. Gase, G. E. Heat resistence of Listeria monocytogenes in homogenates of chicken, beef steak and carrot / Gase G. E., Brown G. D., Gaskell D. E., Banks J. D // Food Microbiol. 1989. - Vol. 6. - P. 251-259.

49. Gellin, B. G. The Epidemiology of listeriosis in the United States - 1986 / Gellin B. G. , Broome C. V., Bibb W. F., et all // Am. J. Epidemiol. 1991. - Vol. 1133. - P. 392-401.

50. Gellin, B. G. Listeriosis. / Gellin B. G., Broome C. V. // JAMA. 1989. - Vol. 261. - P. 1313-1320.

51. Gessain, G. PI3-kinase activation is critical for host barrier permissiveness to Listeria monocytogenes / Gessain G, Tsai Y-H, Travier L, et al. // The Journal of Experimental Medicine. 2015. - Vol. 212(2). - P.165-183.

52. Gregory, S. H. Internalin B promotes the replication of Listeria monocytogenes in mouse hepatocytes / Gregory S. H., Sagnimeni A. J., Wing E. J. // Infection and Immunity. 1997. - Vol.65(12). - P. 5137-5141.

53. Hadjilouka, A. Expression of Listeria monocytogenes key virulence genes during growth in liquid medium, on rocket and melon at 4, 10 and 30 °C / Hadjilouka A., Molfeta C., Panagiotopoulou O., et al. // Food Microbiology. - Vol. 55. - P.7-15.

54. Hain, T. Comparative genomics and transcriptomics of lineages I, II, and III strains of Listeria monocytogenes / Hain T, Ghai R, Billion A, et al. // BMC Genomics. 2012. - Vol.13:144. Published online 2012 Apr 24. doi: 10.1186/14712164-13-144.

55. Hudson, R. R. Test of Neutral Molecular Evolution Based on Nucleotide Data / Hudson RR, Kreitman M, Aguade M. A // Genetics. 1987. - Vol. 116(1). - P.153-159.

56. Ivanek, R. Markov chain approach to analyze the dynamics of pathogen fecal shedding—Example of Listeria monocytogenes shedding in a herd of dairy cattle / Ivanek R., Yrjö T. Gröhn, Alphina Jui-Jung Ho, Wiedmann M. // Journal of Theoretical Biology. 2007. - Vol. 245. - Is.1. - P. 44-58.

57. Ireton, K. The Listeria monocytogenes Protein InlB Is an Agonist of Mammalian Phosphoinositide 3-Kinase / Ireton K., Payrastre B. and Cossart P. // J Biol Chem. 1999. - Vol. 274(24). - P.17025-32.

58. Jiwani, S. Identification of Components of the Host Type IA Phosphoinositide 3-Kinase Pathway That Promote Internalization of Listeria monocytogenes. / Jiwani S, Wang Y, Dowd GC, et al. // Infection and Immunity. 2012. - Vol. 80(3). - P. 1252-1266.

59. Jonquieres, R. The inlA Gene of Listeria monocytogenes LO28 Harbors a Nonsense Mutation Resulting in Release of Internalin / Jonquieres R, Bierne H, Mengaud J, Cossart P. // Infection and Immunity. 1998. - Vol.66(7). - P. 34203422.

60. Juneja, Vijay K. Heat Resistance and Fatty Acid Composition of Listeria monocytogenes: Effect of pH, Acidulant, and Growth Temperature / Juneja, Vijay K.; Foglia, Thomas A.; Marmer, Benne S. // Journal of Food Protection. 1998. -Vol. 6. - P. 657-775.

61. Kaufmann S. H. E. Immunity to intracelluiar bacteria / Kaufmann S. H. E. // Annu. Rev. Immunoi. 1993. - Vol.11. - P. 129-163.

62. Kathariou, S. Listeria monocytogenes Virulence and Pathogenicity, a Food Safety Perspective / Kathariou S. // Journal of Food Protection. 2002. - Vol.11. -P. 1687-1829.

63. Khelef, N. Species specificity of the Listeria monocytogenes InlB protein / Khelef, N., Lecuit, M., Bierne, H. and Cossart, P. // Cellular Microbiology. 2006. - Vol. 8. - P. 457-470.

64. Lecuit, M. Internalin of Listeria monocytogenes with an intact leucine-rich repeat region is sufficient to promote internalization / Lecuit M, Ohayon H, Braun L, et al. // Infection and Immunity. 1997. - Vol. 65(12). - P.5309-5319.

65. Lee J. Y., Overexpression, crystallization and preliminary X-ray crystallographic analysis of the variable lymphocyte receptor 2913 ectodomain fused with internalin B / Lee J. Y., Kim H. S., Baek I. W., et al. // Acta Crystallographica Section F: Structural Biology and Crystallization Communications. 2013. - Vol. 69(Pt 1). - P.39-41.

66. Lecuit, M. A single amino acid in E-cadherin responsible for host specificity towards the human pathogen Listeria monocytogenes / Lecuit M, Dramsi S, Gottardi C, et al. // The EMBO Journal. 1999. - Vol.18(14). - P.3956-3963.

67. Lecuit, M. Molecular basis of Listeria monocytogenes fetoplacental tropism / Lecuit M., Cossart P. // Med Sci (Paris). 2005. - Vol.21(1). - P.17-19.

68. Lorber B. Listeriosis / Lorber B. // Clin. Infect. Dis. 1997. - Vol.24. - P. 1-11.

69. Low, J. C. A review of Listeria monocytogenes and listeriosis / Low J. C. & Donachie W. // Vet. J. 1997. - Vol.153. - P. 9-29.

70. Lowry, P. D. The incidence of Listeria monocytogenes in meat and meat products - factors affecting distribution / Lowry P. D., & Tiongt I. // Proceedings of the 34th International Congress of Meat Science and Technology, Part B. Brisbane, Australia. - P. 528-530.

71. Machner, M. P., ActA from Listeria monocytogenes can interact with up to four Ena/VASP homology 1 domains simultaneously / Machner MP, Urbanke C, Barzik M, et al. // J Biol Chem. 2001. - Vol. 276(43). - P.40096-103.

72. MacKaness G. B. Cellular resistance to infection / MacKaness G. B. // J. Exp. Med. 1962. - Vol. 116. - P.381-406.

73. MacKaness G. B Resistence to intracellular infection / MacKaness G. B // J. Infect. Dis. 1971. - Vol. 123. - P. 439-445.

74. Mead, P.S.Food-related illness and death in the United States / Mead P.S., Slutsker L., Dietz V., et al. // Emeng. Infect. Dis. 1999. - Vol. 5. - P. 607- 625.

75. Marino, M. A framework for interpreting the leucine-rich repeats of the Listeria internalins / Marino M, Braun L, Cossart P, Ghosh P. // Proceedings of

the National Academy of Sciences of the United States of America. 2000. - Vol. 97(16). - P. 8784-8788.

76. Milon, G. Listeria monocytogenes in laboratory mice: a model of short-term infectious and pathogenic processes controllable by regulated protective immune responses / Milon G. // Immunological Reviews. 1997. - Vol.158. - P. 37-46.

77. Mounier, J. Intracellular and cell-to-cell spread of Listeria monocytogenes involves interaction with F-actin in the enterocytelike cell line Caco-2 / Mounier, J., Ryter, A., Coquis-Rondon, M. and Sansonetti, P.J. // Infect. Immun. 1990. -Vol. 58. - P. 1048-1058.

78. Murray E. A disease of rabbits characterised by a large mononuclear leucocytosis, caused by a hitherto undescribed bacillus Bacterium monocytogenes (n.Sp.) / Murray E., Webb R., Swann M. // Journal of Pathology and Bacteriology. 1926. - Vol.29(4). - P.407-439.

79. Niemann, Hartmut H. et al. Structure of the Human Receptor Tyrosine Kinase Met in Complex with the Listeria Invasion Protein InlB / Niemann, Hartmut H. et al. // Cell. 2007. - Vol. 130. - Is. 2. - P.235 - 246.

80. Nightingale, K. K. Evolution and Molecular Phylogeny of Listeria monocytogenes Isolated from Human and Animal Listeriosis Cases and Foods / Nightingale KK, Windham K, Wiedmann M. // Journal of Bacteriology. 2005. -Vol.187(16). - P.5537-5551.

81. Nightingale, K. K. Ecology and Transmission of Listeria monocytogenes Infecting Ruminants and in the Farm Environment / Nightingale K. K., Schukken

Y. H., Nightingale C. R., et al. // Applied and Environmental Microbiology. 2004. - Vol. 70(8). - P.4458-4467.

82. De Noordhout C. M. The global burden of listeriosis: a systematic review and meta-analysis / De Noordhout C. M., Devleesschauwer B, Angulo F. J., et al. //

The Lancet Infectious diseases. 2014. - Vol. 14(11). - P.1073-1082.

83. Orsi, R. H. Listeria monocytogenes lineages: Genomics, evolution, ecology, and phenotypic characteristics / Orsi R. H., Henk C. den Bakker, Wiedmann M. // International Journal of Medical Microbiology 2011. - Vol. 301. - Is. 2. - P.79-96.

84. Organ S. L. An overview of the c-MET signaling pathway / Organ SL, Tsao M-S. // Therapeutic Advances in Medical Oncology. 2011. - Vol.3(1 Suppl). P.S7-S19.

85. Paterson J. S. The antigenic structure of organisms of the genus Listeria / Paterson J. S. // I. Pathol. Bacteriol. 1940. - Vol.51. - P. 427-436.

86. Piffaretti, J. C. Genetic characterization of clones of the bacterium Listeria monocytogenes causing epidemic disease / Piffaretti JC, Kressebuch H, Aeschbacher M, et al. // Proceedings of the National Academy of Sciences of the United States of America. 1989. - Vol. 86(10). - P. 3818-3822.

87. Pentecost, M. Listeria monocytogenes Invades the Epithelial Junctions at Sites of Cell Extrusion / Pentecost M., Otto G., Theriot J. A., Amieva M. R. // PLoS Pathogens. 2006. Published online 2006 Jan 27. doi: 10.13 71/journal .ppat.0020003.

88. Pentecost, M. Listeria monocytogenes Internalin B Activates Junctional Endocytosis to Accelerate Intestinal Invasion / Pentecost M., Kumaran J., Ghosh

P., Amieva M. R. // PLoS Pathogens. 2010. Published online 2010 May 13. doi: 10.1371/iournal.ppat.1000900.

89. Pizarro-Cerda, J. Distinct protein patterns associated with Listeria monocytogenes InlA- or InlB-phagosomes / Pizarro-Cerda, J., Jonquieres, R., Gouin, E., et al. // Cellular Microbiology. 2002. - Vol.4. - P.101-115.

90. Ragon, M. A New Perspective on Listeria monocytogenes Evolution / Ragon M, Wirth T, Hollandt F, et al. // PLoS Pathogens. 2008. Published online 2008 Sep 5. doi: 10.1371/journal.ppat. 1000146.

91. Riedo, F. X. A point-source foodborne listeriosis outbreak: documented incubation period and possible mild illness / Riedo F. X., Pinner R. W., de Lourdes Tosca M., et al. // J. Inaect. Dis. 1994. - Vol. 170. - P. 693-696.

92. Stephen, H. G. Complementary Adhesion Molecules Promote Neutrophil-Kupffer Cell Interaction and the Elimination of Bacteria Taken Up by the Liver / Stephen H. Gregory, Leslie P. Cousens, Nico van Rooijen, et al. // The Journal of Immunology. 2002. - Vol. 168 №1. - P. 308-315.

93. Schuchar, A. Epidemiology of human listeriosis. I. Case-conntrol study of dietary risk factors / Schuchar A., Swaminathan B., Broome C. V. // JAMA. 1992. - Vol. 267. - P. 2041-2045.

94. Seeliger H. P.R. Listeriosis. 1961. Kanger, New York, NY.

95. Seeliger H. P. R. Listeriosen. 1958. Springer- Verlag K.G., Berlin.

96. Slutsker L., Evans M. C., Schuchat S. 2000 Listeriosis, p. 83-106. In: Emerging Disease 4. W. M. Scheld, W. A. Graig, J. M. Hughes (ed.). ASM. Press, Washington, D. C.

97. Schuchat, A. Role of foods in sporadic listeriosis I. Case-control study of dietary risk factors / Schuchat A., Deaver K. A., Wenger J. D. er. al. // JAMA. 1992. - Vol. 267. - P. 2041-2045.

98. Sousa, S. Unconventional myosin VIIa and vezatin, two proteins crucial for Listeria entry into epithelial cells / Sousa S., Cabanes D., Aziz El-Amraoui, et al. // Journal of Cell Science. 2004. - Vol. 117. - P.2121-2130.

99. Schubert, W. Internalins from the human pathogen Listeria monocytogenes combine three distinct folds into a contiguous internalin domainl / Schubert W., Gero Göbel, Meikel Diepholz, et al. // Journal of Molecular Biology. 2001. - Vol. 312. - Is. 4. - P. 783-794.

100. Timchenko, N. F. Far East Scarlet-Like Fever Caused by a Few Related Genotypes of Yersinia pseudotuberculosis., Russia. / Timchenko N. F., Adgamov R. R., Popov A. F., et al. // Emerging Infectious Diseases. 2016. - Vol.22(3). - P. 503-506.

101. Troyanovsky, S. Cadherin dimers in cell-cell adhesion / Troyanovsky S. // European Journal of Cell Biology. 2005. - Vol.84. - No. 2/3. - P. 225-233.

102. Témoin, S. Multiple point mutations in virulence genes explain the low virulence of Listeria monocytogenes field strains / Témoin S., S. M. Roche1, O. Grépinet1, et al. // Microbiology. 2008. - Vol. 154. - Is.3. - P. 939-948.

103. Vazquez-Boland, J. A. Listeria Pathogenesis and Molecular Virulence Determinants / Vazquez-Boland JA, Kuhn M, Berche P, et al. // Clinical Microbiology Reviews. 2001. - Vol.14(3). - P.584-640.

104. Voronina, O. Diversity and Pathogenic Potential of Listeria monocytogenes Isolated from Environmental Sources in the Russian Federation / Voronina O., Ryzhova N., Kunda M., et al. // International Journal Of Modern Engineering Research. 2015. - Vol.5. - Is.3. - P.5-12.

105. Wesley I. V. Listeriosis in animals, p. 39-73. In. E. T. Ryser and E. H. Marth (ed.) Listeria, listeriosis and food safety. 2nd ed. 1999 Marsel Dekker Inc. New York, NY.

106. Wing, E. Listeria monocytogenes: Clinical and Experimental Update / Wing E., Stephen H. // J Infect Disease. 2002. - Vol. 185 (Sup. 1). - P. S18-S24.

107. Yoshikawa, Y. Listeria monocytogenes ActA-mediated escape from autophagic recognition / Yoshikawa Y, Ogawa M, Hain T, et al. // Nature Cell Biology. 2009. - Vol. 11. - P. 1233 - 1240.

108. Zhang, C. Genome Diversification in Phylogenetic Lineages I and II of Listeria monocytogenes: Identification of Segments Unique to Lineage II Populations / Zhang C, Zhang M, Ju J, et al. // Journal of Bacteriology. 2003. -Vol. 185(18). - P.5573-5584.

109. Zaytseva, E. Low genetic diversity and epidemiological significance of Listeria monocytogenes isolated from wild animals in the far east of Russia / Zaytseva E., Ermolaeva S., Somov G. // Infection, Genetics and Evolution. 2007. - Vol. 7. - Is. 6. - P. 736-742.