Влияние дезамидирования на антиокислительные свойства лактоферрина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Белизи, Саид

• Белизи, Саид
• кандидат биологических наук
• 1998

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Белизи, Саид

СОДЕРЖАНИЕ

В ВЕДЕНИЕ

Глава 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1. 1. Лактоферрин в организме человека и животных,

1.2. Свободнорадшальные процессы в биологических системах

1.3. Посттрансляционые модификации и их роль в функционировании белков

Глава 2. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Материалы исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Получение Лактоферрина

2.2.2. Критерии чистоты и физико-химических свойств исследуемого белка

2.2.2.1. Спектрофотометрический метод определения белка

2.2.2.2. Определение количества белка методом Оедма-

ка

2.2.2.3. Количественное определение белка методом радиальной иммунодиффузии в агарозном геле

2.2.2.4. Определение спектра поглощения лактоферрина

2.2.2.5. Электрофорез белков е градиентном полиакре-ламидном геле в присутствии SDS

2.2.2.6. Определение N-концевых аминокислот

2.2.2.7. Аминокислотный анализ

2.2.2.8. Получение спектров флуоресценции препаратов

лактоферрина

2.2.2.9. Насыщение лактоферрина железом

2.2.2.10. Содержание железа в препаратах лактоферрина

2.2.3. Изучение антиоксидантных свойств лактоферрина

2.2.3.1. Приготовление и инкубация растворов белка

2.2.3.2. Определение содержания амидных групп в белках

2.2.3.3. Определение ТХУ-растворимых фолин-положительных продуктов

2.2.4. Статическая обработка результатов исследования----66

Глава 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И

И X ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Выделение лактоферрина из женского молозива----

3.2. Антиоксидантные свойства лактоферрина

3.3. Влияние посттрансляционного дезамидирования лактоферрина на его антиокислительные свойства

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В Ы В ОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЯ

АКМ активные кислородные метаболиты

АпоЛФ лактоферрин несодержащий железо

АФК активные формы кислорода

гп глутатионпероксидаза

ГР глутатионредуктаза

гт глутатионтрансфераза

жлп желточные липопротеины

ЛАГ легкогидролизуемые амидные группы

ЛФ лактоферрин

ЩА малоновый диальдегид

МеШЬ метгемоглобин

нь гемоглобин

Н202 перекись водорода

02~ супероксидный анион радикал

102 синглетный кислород

ОН' гидроксильный радикал

пол перекисное окисление липидов

сод супероксиддисмутаза

САГ суммарные амидные группы

ТАГ трудногидролизуемые амидные группы

ХЛ хемшюминесценция

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Влияние дезамидирования на антиокислительные свойства лактоферрина»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность проблемы. ЛФ- один из важных компонентов женского молока, который выполняет многообразные физиологические функции такие, как антимикробное действие, регуляция клеточной пролиферации, стимуляция неспецифического иммунного ответа,, пищевая значимость для новорожденных и участие в метаболизме железа [413= ЛФ, открытый в молоке, обнаружен и в других биологических жидкостях организма [81,66,86], Во многих современных публикациях, посвященных ЛФ, делается акцент на применение его в качестве добавок к искусственным заменителям молока» При этом в качестве аргументов приводится широкий спектр действия ЛФ, поступающего с молоком в организм новорожденного. Существующие способы получения ЛФ имеют ряд методических сложностей, что затрудняет их воспроизведение [41,66,103,190].

Важнейшей биологической функцией ЛФ является способность связывать ионы железа. Он служит одним из специфических белков, транспортирующих железо и обеспечивающих высокую степень его усвояемости из женского молока £41,66,1391. Связывание ЛФ железа, обладающего, как известно, высоким прооксидантным потенциалом, определяет, очевидно, и его роль в свободнорадикальных реакциях, в том числе процессах перекисного окисления липидов биомембран. Литературные данные об участие ЛФ в регуляции уровня свободнорадикальных процессов противоречивы: Имеются указания на его анти-оксидантные [94,123] и прооксидантнные [£09] свойства. Другие авторы считают, что присутствие ЛФ не влияет на окислительные процессы [102].

Степень связывания ионов железа с белками, в том числе с ЛФ5 среди многих факторов может определяться и посттрансляционными модификациями аминокислотных радикалов его молекул.

Одной из важнейших посттрансляционных модификаций является дезамидирование остатков аспарагина, и глутамина, которые обеспечивают формирование и поддержание пространственной структуры белка [84,£143 - Универсальный процесс посттрансляционного деза-мидирования является началом структурных преобразований, облегчающих атаку белка протеолитическими ферментами [72,2293 и может явиться причиной нарушения функций белковых молекул [174,230]. Можно предположить, что дезамидирование способно изменить активность белков, участвующих в свободнорадикальных процессах.

Цель и задачи исследования. Целью исследования явилось установление действия ЛФ на интенсивность свободно-радикальных процессов и возможность изменения его эффективности при посттрансляционном дезамидировании, а также разработка относительно простого способа препаративного получения ЛФ из женского молозива.

В работе были поставлены следующие задачи:

1. Разработать способ препаративного получения ЛФ из женского молозива,

2. Получить очищенный препарат ЛФ из женского молозива модифицированным способом,

3. Идентифицировать полученный препарат ЛФ по иммунохими-ческим характеристикам и физико-химическим свойствам.

4. Установить динамику дезамидирования ЛФ в условиях, моделирующих физиологические.

5. Изучить влияние ЛФ на интенсивность свободнорадикальных процессов в модельных системах.

6. Установить влияние неферментативного дезамидирования ЛФ на его антиокислительные свойства.

Научная новизна работу;

Разработана новая простая экономичная модификация выделения высокоочищенного препарата ЛФ из женского молозива.

Впервые показаны антиокислительные свойства ЛФ в модельных системах, которые реализуются разными способами.

Впервые установлена динамика дезамидирования ЛФ из женского молозива е условиях, моделирующих физиологические, и определено его влияние на антирадикальный эффект ЛФ.

Основные положение, выносимые на защиту:

1. Разработан модифицированный способ препаративного выделения ЛФ из женского молозива. Полученный препарат идентифицирован по физико-химическим и иммунологическим характеристикам.

Е. Установлена антиокислительная активность ЛФ в модельных системах реакции Фентона и в системе желточных липопротеинов в присутствии родамина 61, которая реализуется разными способами.

3. Установлено неферментативное дезамидирование ЛФ в условиях, моделирующих физиологические (рН-7, Ь=37°, НаС1-0,9%).

4. Дезамидирование белка сопровождается изменением его антиокислитель ной активности и способности связывать ионы железа.

Теоретическая и практическая значимость работы

Полученные в работе данные представляют существенный интерес., с одной стороны, для промышленного получения лактоферрина, с другой стороны, для понимания механизмов его антирадикального действия,

Обнаруженные антирадикальные свойства ЛФ,которые усиливаются, в процессе спонтанного дезамидирования в физиологических условиях позволяют считать ЛФ компонентом сложной системы эндогенных антиоксидантов, поддерживающих уровень свободнорадикальных процессов на безопасном для биологических структур уровне.

Предложенный модифицированный метод позволяет, без специального оборудования, получить хорошо очищенный препарат ЛФ из женского молозива,, что дает возможность использовать белок в качестве пищевых добавок или лекарственных средств, в том числе и при состояниях организма, связанных с избыточной генерацией свободных радикалов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Белизи, Саид

ВЫВОДЫ

1. Разработан модифицированный способ препаративного получения ЛФ из молозива женщин, предусматривающий использование ионообменной хроматографии на колонке с Зегуасе! 0М-52 и гель-фильтрацию на колонке с Тоуореаг! Ш-55. Установлено,, что внесенные изменения позволяют существенно упростить и сократить во времени базовый метод, не нанося ущерба биологической активности и степени чистоты препарата.

2. Полученный препарат ЛФ идентифицирован методами ДДС-электрофореза в ШАГ, радиальной иммунодиффузией в агарозном геле по Манчини, гель-фильтрацей, определением аминокислотного состава и Ы-концевой аминокислоты (01у).

3. Молекулярная масса полученного ЛФ, определенная методом электрофореза в градиентном ПААГ в денатурирующих условиях, составила 80,5 кДа.

4. Методом ХЛ установлено, что ЛФ из молозива человека ин-гибировал свободнорадикальные процессы в модельных системах: реакции Фентона, суспензии желточных липопротеинов - родамина 61.

5. Антирадикальная активность ЛФ снижается в процессе его насыщения железом.

6. В процессе инкубации препарата ЛФ в условиях, моделирующих физиологические(рН-7, 1=37^, Ма01-0}9 %) в течение 28 суток происходит спонтаное дезамидирование, которое сопровождается уменьшением количества САГ на 12 1, ЛАГ на 18 1 и фрагментацией полипептидной цепи.

7. Дезамидирование ЛФ сопровождается увеличением его антиокислитель ной активности.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Лактоферрин молока человека является неотъемлемым функциональным компонентом металлотрэнспортной, антитоксической и антимикробной систем организма [1503, Эти функции ЛФ в значительной мере обусловлены его способностью связывать железо с высокой по сравнению с другими ферропротеидами, степенью прочности,

В настоящей работе получены новые данные о важной биологической роли ЛФ - его антиокислительной функции.

Антиоксидантные свойства ЛФ были установлены косвенным методом по железоиндуцируемой хемилюминесценции желточных липопро-теинов, в модельной системе реакции Фентона и объясняются его способностью связывать Fe'~i+} препятствуя реакции регенерации Fe*+. В пользу этого свидетельствует факт снижения эффективности ЛФ в процессе его насыщения железом,

Добавление в систему реакции Фентона гистидина и мэннитола показало, что ЛФ оказался более эффективным, чем традиционные ловушки свободных радикалов, что подтверждает, что кроме способности связывать железо, ЛФ снижает уровень ОН- радикалов в системе.

Универсальные для всех белков посттрансляционные взаимосвязанные модификации дезамидирование - фрагментация активируют антирадикальные свойства ЛФ в отличие от других белков - антиокси-дантов,

Обнаруженные антирадикальные свойства ЛФ позволяют считать его компонентом сложной системы эндогенных антиоксидантов, поддерживающей уровень сЕободнорадикальных процессов на безопасном для биологических структур уровне.

Таким образом, в результате наших исследований был разработан модифицированный способ получения ЛФ из молозива женщин, позволяющий в лабораторных условиях в короткие сроки получить высокоочищенный ЛФ. Нами было получено около 400 мг белка. Установлено, что внесенные изменения позволяют существенно упростить базовый метод, не нанося ущерба степени чистоты препарата, Полученный нами ЛФ оказался идентичен стандартам по М-концевой амно-кислоте,аминокислотному составу,молекулярной массе и оптическим свойствам. Выделенный ЛФ обладал антиоксидантными свойствами, которые усиливались при неферментативном дезамидировании в условиях, моделируюших физиологические, Это позволяет рекомендовать упрощенный метод выделения ЛФ для его промышленного производства в качестве лекарственных препаратов и пищевых добавок, к искусственным заменителям молока,, в том числе и при состояниях организма, связанных с избыточной генерацией свободных радикалов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Белизи, Саид, 1998 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Айеен П.-В кн.: Неорганическая биохимия. //Под ред. Г,Зйхгорн.- М.- 1978.- Т.1.- С. 331-360.

2. Альперович Д.В. Взаимосвязь дезамидирования, деструкции и иммунологической активности препаратов иммуноглобулинов. Авто-реф. Дисс. канд. биол. наук. Ростов-на-Дону.- 1985,- 20 с.

3. Афанасьев И,Б, Анион-радикал кислорода О?" в химических и биологических процессах. //Успехи химии,- 1979.- Т.48., N 6,0. 977-1014,

4. Афанасьев И.Б. Кислородные радикалы в биологических процессах. //Хим.фарм.журнал.- 1985.- 1.- С. 11-23.

5. Афанасьев И,Б. Свободные кислородные радикалы и процессы жизнедеятельности. //В сб.: Кислородные радикалы в химии и биологии,- Минск, Наука и техника,- 1984.- С. 13-29.

6. Арчаков А,И. Микросомальное окисление.- М.:Наука.-1975.-С. 330.

7. Еейли М. Статические методы в биологии,- М.- 41.- 1962.260 с.

8. Еиленко М.В. Ишемические и реперфузнойные повреждения органов.- М.: Медицина.- 1989,- С, 368.

9. Еурлакова Е.Б., Алексеенко А. В., Молочкина Е.М.» Пальми-на Н.П.. Храпова Н.Г. Биоантиоксиданты при лучевом поражении и злокачественном росте.,- М. .* Наука.- 1975.- 214 с.

10. Вельтищев Ю.Е,5 Харькова З.М. Биологические активные факторы грудного молока, жур.Вопросы материнства и детства, ".-N6,- 1991.

11. Владимиров Ю.А., Арчаков А.Н. Перекисное окисление ли-пидов в биологических мембранах.- М.: Наука.- 1972.

12. Владимиров Ю.А., Сергеев П. В,., Сейфулла Р. Д., Руднев Ю.Н. //Молек.биология.- 1973.- Т.7, № 3.- С. 247-254.

13. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н., Рощупкин Д.И. Свободные радкалы в живых системах . Итоги науки и техники. //Биофизика.- 1991.- 29.- 250 с.

"14. Владимиров Ю.А. Своболнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного бислоя биологических мембран. /7 Биофизика.- 1987.- 32.- в. 5.- С. 830-840.

15. Владимиров Ю.А., Оленев В.И., Суслова Т.Е., Потапенко А.Я. Механизм перекисного окисления липидов и его действие на биологические мембраны. //Итоги науки и техники. Биофизика.- М.-1975.- Т.5.- С, 56-117.

16. Владимиров Ю.А. Кинетика реакций перекисного окисления липидов и механизм регуляции этого процесса в клетке. //V Всес. биохим. съезд. Тез. симпоз. докл.- М.- 1985.- T.I.- С. 300.

17. Владимиров Ю.А. Свободнорадикальное окисление липидов и физические свойства липидного слоя биологических мембран. //Биофизика.- 1987.- Т.32, вып.5.- С. 830-844.

18. Владимиров Ю.А., Шеретнев М.П. Хемилюминесценция клеток животных. //Итоги науки и техники. Биофизика.- М.- 1989.- Т.24.-0,176,

19. Владимиров Ю.А., Азизова O.A., Деев А.И., Козлов A.B., Осипов А.Н.5 Рощупкин Д.И. Свободные радикалы в живых системах. //Итоги науки и техники. Биофизика.- М.- 1991,- Т.29,- С. 252,

20. Вознесенский О.Н. Антиоксидантная система, онтогенез и

старение. //Всес. сими.: "Молекул, и клеточ. механизмы старения. 1981. Тез. докл." Киев.- 1981. -С. 38-38.

21. Гершенович З.С., Кричевская A.A., Херавимова В,А, Некоторые черты онтогенеза азотистого метаболизма головного мозга птиц и млекопитающих. //Проблемы нейрохимии.- М.: Л.: Наука.-1966 - С. 75-87.

22. Говорова Н,Ю, , Шаронов Б.П., Лызлова С.Н. Окислительное повреждение эритроцитов миелопероксидазой, Защитное дйествие сывороточных белков. //Вюл. зкспер, биол. и медицины.-

23. Гоготов И.Н., Кулакова С.М. Функции и свойства суперок-сиддисмутаз микроорганизмов. /"/"Успехи микробиол. - 1981.- N 16.-С. 30-55.

24. Грубан 3.5 Рехцигл М. Микротельца и родственные им структуры.- М. : Мир.- 1972,- 0, 310.

25. Гукасов В.М., Федоров В. К, Роль изменения структуры мембран в клеточной патологии,- М,- 1977,- С. 8-12.

26. Гусев В,А.. Брусов O.G., Панченко Л.Ф. //Вопр.мед.химии.- 1980,- № 3.- С. 29:1-301,

27. Давиденкова Е.Ф., Шафран М.Г, //Вести.АМН ССОР.- 1989.-№ 3.- С. 10-18.

28. Давиташвили Н.Г., Ерин А.Н., Прилопко Л.Л, //Биохимия,-1986 Вып. 3,- С, 472-477,

29. Ефуни С.Н., Каплан Е.Я.. Лукаш А.И. и др. //Еюллет, экспер. биол, и медиц,- 1984,- N.7, -С. 42-43,

30. Журавлев А,И, Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии,- М,- 1982,- С, 3-36,

31. Журвалев A,PL., Понтюшенко В.Т. Свободнорадикальная био-

логия,-М,- 1989.- 60 с.

32. Забродина Л,В,, Серебреникова O.A., Гапонова Е.Б., Горохова Л. Г., Долгих М.И., Заблина Т.В, Сосояние перекисного окисления липидов и антиокислительной системы у новорожденных. //Педиатрия.- 1990.- N.4.- С. 34-37.

33. ¡Венков Н.К., Меньшикова Е.Б. Активированные кислородные метаболиты в биологических системах, //Успехи соврем, биологии,-1993,- Т.113, вып.3.- С,286-296.

34. Каган И.Е.} Орлов Q.H., Прилипко Л.Л. Проблема анализа эндогенных продуктов перекисного окисления липидов. Итоги науки и техники, //Биофизика.- 1986,- 18,- 135 с.

35. Каган В.Е., Шведова А,А,, Новиков К.Н, //Биофизика.- 1978,- Т.23, № 2.- С, 279-284.

36. Кесельман Э.В. Свободно-радикальный механизм взаимодействия ксантиноксидазы и лактопероксидазы в антибактериальной системе молока. Дис. ... канд.биол.наук.- Ростов.- 1993.- 138 с.

37. Клебанов Г,И., Владимиров Ю.А., Бенов Л.Д., Рибаров С.Р. //Бюлл.экспер.биол.- 1988,- Ш 6.- С, 674-677,

38. Клебанов Г.И., Крейнина М.В., Владимиров BD. А, Взаимосвязь перекисного окислении липидов и активация полиморфноядерных лейкоцитов крови, //Тез,докл. 3 Всес. совещ, по хемиллюминесце-ции.- Рига,- 1990,- 68 с,

39. Коган А.X., Кудрин А.Н., Николаев С.М. Свободно-радикальное окисление липидов в норме и патологии,- М,- 1986,- С. 68-71.

40. Кокряков В.Н,, Алешина Г,М., Слепенков С.В., Яковлева М,Ф., Пигаревский В.Е. О степени структурной гомологии лактофер-

ринов молока и нейтрофильных гранулоцитов. //Биохимия.- Т.53, вып. 11.- 1988.

41. Конь И.Я.. Ладодо К.С, Биологическая роль лактоферрина и его значение в питании детей раннего возраста. //Педиатрия. -N2.- 1992.

42. Козлов Ю,П.. Данилов B.C., Каган В.Е., Ситковский М.В. Свободно-радикальное окисление липидов в биологических мембранах. -М., МГУ.- 1972.- С. 88,

43. Красновский A.A. Синглетный молекулярный кислород; механизмы образования и пути дезактивации в фотосинтетических системах. //Биофизика.- 1994.- Т.39., вып.2.- С. 236-250.

44. Кричевская A.A. Лукзш А.И, Броновицкая З.Г. Биохимические механизмы кислородной интоксикации. Ростов-на-Донуг РГУ.-1980.- 116 с.

45. Кричевская A.A., Лукаш А.И., Пушкина Н. В, , Шерстнев К,Б. Спонтанное дезамидирование гамма-глобулина, //Borip, мед, химии,- 1978, -Т. 24. N 2.- С, 160-163.

46. Кричевская A.A., Лукаш А.И., Пушкина Н.В. Значение де-замидирования в посттрансляционных модификациях белков. Известия ОКНЦ Bill, Естественные науки,- 1980,- N 3.

47. Кулинский В,И,. Колесниченко Л.С, Обмен глутатиона. // Успехи биол. химии.- 1990.- Т.31.- С, 157-179.

48. Ланкин В.З. Метаболизм липоперекисей в тканях млекопитающих. / В кн.: Биохимия липидов и их роль в обмене веществ.-М.: Наука.- 1981.- С,75-95,

49. Лакин Г.Ф. Биометрия,- М: Высшая школа.- 1973,- 343 с.

50. Лукаш А,И.3 Горошинская И.А., Виноградов А.Ю. Содержа-

ние и биологическая активность молекул средней массы в плазме крови при разных режимах оксигенации /У Еюлл. гипербар. биол. и мед. - 1994. - Т.2.- N1-2.- С. 85.

51. Лукаш А.И., Кизельштейн А.Л., Пушкина Н.В. Растепление дезамидированных белков протеиназами тканей. Укр. биохим. журн,-1985.- Т. 57.- С. 8-12.

52. Лукаш А.И., Пушкина Н.В., Климова И. А.Назарова И.Н., Беспалова Е.Р. Посттрансляционные модификации белков в механизме развития сахарного диабета. Биохимия.- 1996,- N 1.

53. Лукаш А.И., Пушкина Н.В. } Климова И.А., Назарова, И.Н. Взаимосвязь неферментативных посттрансляционных процессов глико-зилирования и дезамидирования в препаратах гамаглобулина и инсулина. //Вопр. мед. химии. - 1995.- Т.41, выпус. 6.

54. Лукаш А.И., Пушкина, Н.В., Климова, И. А,, Назарова И. Н. Роль посттрансляционных модификаций в регуляции скорости старения дрожжей Saccharornyces paradoxus. /"/"Биополимеры и клетка.-1994.- Т.57.- С. 8-12.

55. Лукьянова Л.Л. Кислородзависимые процессы в клетке и ее функциональное состояние.-М.- 1982.

56. Мазуров В,И, Биохимия коллагеновых белков. -М.г Медицина.- 1974.- 284 с.

57. Маянский Д.Н. Хроническое воспаление. -М.- 1991.

58. Мид Дж. Свободнорадикаяьные механизмы повреждения липи-дов и их значение для клеточных мембран. / В кн.: Свободные радикалы в биологии, под ред. Прайора У.- М.: Мир.- 1979.- Т.1.-Гл,2.- С.68-87.

59. Михельсон В.А,, Клевко В.А,, Мухин В.Х,, Азизова

O.A. //Вести.АН ССОР.- 1988.- № 9.- С. 56-61.

60. Никитин В.H.s Петрук H.И., Стефанович А.H. Перераспределение фракции альбумина в сыворотке крови белых крыс разного возраста. //Докл. АН СССР.- 1977.- Т. £37.- N 6.- С. 1522-1524.

61. Николаев A.A.} Аншакова Н.И. Иммунохимическзя и физико-химическая характеристики лактоферрина биологических жидкостей человека. //Вопр. мед. хммии.- N3.- 1985.

62. Нонхибел Д.., Теддер Дж., Уолтон Дж. Радикалы.- М. гМир.-1982.- С. 274.

63. Носков С.Н.. Козлов Г.С., Широкова, Л.Ю. //Ревматология,- 1988.- M 4.- С, 72-76.

64. Олехнович Л.П., Пушкина Н.В., Жданов А.Ю. , Лукаш А,И.., Кричевская A.A., Алахов Ю.Б. Аспарагинзависимая фрагментация белка на примере рибонуклеазы. Доклады АН СССР,- 1985.- Т. 281,-N 1.

65. Осипов А.Н., Азизова O.A.. Владимиров Ю,А. Активные формы кислорода и их роль в организме. //Успехи биол. химии,- 1990.- 31,- С, 180-208,

66. Ott В.Д., Дюкарева C.B., Мельников O.P. Лактоферрин и перспективы его использования в злиментарной профилактике анемий, //Вопросы питания.- N1,- 1993.

67. Петрович Ю.А., Подорожная Р.П. Селеноэнзимы и другие селенопротеиды, их биологическое значение, //Успехи совр. биологии,- 1981,- Т.91, вып.1.- С,127-144,

68. Петровский В.Н., Ефуни С.Н, Демуров Б,А,, Родионов В.В. Гипербарическая оксигенация и сердечно-сосудистая система,-Mi Наука,- 1987,- 325 с.

69. Погосян Н.Р.. Налбандян P.M. //Биохимия.- 1983.- № 7.-С. 1129-1134.

70. Птицын О.Б. Распределение аминокислотных остатков между спиральными и неспиральными участками в глобулярных белках. // Молекул, биол.- 1969.- Т.З.- N 4.- С. 627-634.

71. Пушкина Н.В. Амидированность белков при старении. // Укр, биох. ж.- 1979. 51, N 6.- С. 680-683,

72. Пушкина Н.В, Неферментативное дезамидирование и автофрагментация белков в условиях, моделирующих физиологические, /7 Укр, Биох. ж.- 1988.- Т, 60, N 4.- С, 9-14,

73. Пушкина Н.В,, Лукаш А,И. Легко- и трудногидролизуемые амидные группы в белках. //Известия СКНЦ ВШ. Естеств. НАуки, -1976.- N2.-0 95-97.

74. Пушкина Н.В., Шепотиновская И.В,, Климова И.А,, Назарова И. Н., Лукаш А.И, Гипогликемическая активность инсулина при его неферментативном гликировании и дезамидировании. //Проблемы старения и долголетия.- Киев.- 1992.- N 4.- С. 465-474.

75. Оалихов Т.А., Бугланов А.А, Химия природных соединений, 1984.- N2.- 0. 139-151.

76. Овистунова О.П., Титов В.Н. Гликозилироваяные белки сыворотки крови: тест фруктозамин (обзор), //Клин, лаб. диагностика,.- 1992,- N 11-12.- 0, 22-28.

77. Силин О.П. Скорость обновления белков мышц в онтогенезе. //Проблемы возрастной физиологии и биохимии.- Харьков: ХГУ.-1960.- Т. 29,- С. 54-60.

78. Свободные радикалы в биологии/Под ред.И.В.Фридови-ча.- М.- 1979,

79. Оедмак А. Общие методы анализа. Лекарственное и растительное сырье.- М.: Мир. - 1990.- Вып.2. - О. 400=

80. Оыромятникова Н.В., Гончарова В.А., Котенко Т.В, Метаболическая активность легких,- Л.- "1987,

81. Шепотиновская И.В., Уманская Н.Я. Прикладная биохимия и микробиология,- 1994,- Т.30, вып. 4-5,- С, 709-716.

82. Шепотиновская И.В. Дезамидирование белков в процессе хранения. Автореферат дисс. канл, биол, наук.- Ростов-на-Дону,-1982,- 27 с,

83. Шерстнёв М.П. Аденилатциклазная система регуляции хеми-люминесцентного ответа фагоцитов, / Вопросы хемилюминесценции,~

1990,- N 1,- 0, 1-7,

84. Шульц Г., Шиммер Р, Принципы структурной организации белков,- М.: Мир,- 1982,- 356 с.

85. Здман. Практическая химия белка,- М.: Мир,- 1989,- С.

366.

86. Якубовская Р.И., Немцова Е,Р,., Коханова И. Д., Дума В.Н., Александер С,К, Лактоферрин человека: получение высокоочи-щенных препаратов из молока женщин, некоторые физико-химические свойства и распределение в нормальных и опухолевых тканях. //Вопр.мед, химии,- N6,- 1986,

87. Active Oxygen and Medicine, //Ed.A.Autor.- 1980.

88. Aisen P., Leibman A, //Biochem. biophys. Acta.- 1972.-vol.257.- P. 314-318,

89. Arnold M., Waldbilling R. Advanced glycosilation aid production in pacient with diabetic nephropaty. //N-Eng. J. Med,

1991,- vol.196, N. 325 (12),- P, 836-842.

90. Arnold Roland R. , Rassel J ernes E,, Champion Will am J,, Brewer Micael, Ga,uthier Joseph J. Bactericidal activiti of" human 1actoferrin: from the stasis of iron deprivation. "Infec. aid Immun." 1982, 35, N3, p. 792-799,

91. Azari P. j Baugh R,F, //Arch, biochern, and biophys,-1987,- vol, 118.- P. 138-144.

92. Baez S., Segura-Aguilar J. Formation of" reactive oxygen species during: one-electron reduction of" noradrenochrome catalyzed by NADPH-cytochrome P-450 reductase, //Redox Report.- 1994,-Vol.l, N 1,- P. 65-70,

93. Baker M.S. Feigan J., Lowther D.A. //J. Rheum,- 1988, -Vol.15, N 4,- P, 670-677.

94. Baldwins D., Henny E., Aisrn, //J. biol. ehem.- 1984,-vol.259.- P. 13391-13394.

95. Basaga H.S, Biochemical aspects of free radicals. //Blochen. Cell. Biol.- 1990,- 88, N 4,- P, 68-69.

96. Bann i st er J.V., Banni st er W,H,, Hill H,A,0,, Thornal1ey P.J, Enhanced production of hydroxy1 radicals by xanthine -xanthine oxidase reaction in the presense of" lactoferrin. //Biochim. et biophys, acta,- 1982,- 715, N1.- P, 116-120,

97. Beckwith A.C., Wall J.C., Dimler R.J. Amide Groups as Interaction Sites in Wheat Gluten Proteins: Effects of" Amide-Ester Conversion, //Arch, Biochern, Biophys.- 1963,- V. 103.- N 3.-P, 318-330,

98. Biernond P., A,J,G, SwaaJk, H.G, van Ei.lk, J.F.Kocter, .// Free Radical Biol, Med,- 1988.- 4,- P. 185-198.

99. Birrgens Henrik S, The interaktion of lactoferrin with

human monocytes. Dan. Med. Bui1.-1991,- 38, N3.- P. 244-252.

100. Buc-Calderon P., Barvais C., Blave I., Vasseir Ch., Roberfroid M. New experimental evidences which support a role for superoxide anion in NADFH-dependent microsomal lipid peroxidation. /"/"Arch. int. phvsiol. et biochirn.- 1988.- Vol. 98.- N 1,- P. B13.

lui. Buettner G.R. //Bioelectrochern. Bioenergetics,- 1987,18,- P, 29-36.

102. Burtal L.. Paden S., Passwell J. //Pediat. Res.- 1987. vol.21.- P. 54-57.

103. Carlsson A., Bjorck L., Persson K. Lactoferrin aid Iv-sozyme in milk during' acute mastitis and their inhibitory effect in Delvotest P. J. Dairy Sci.~ 1989.- V.72, N12,- P. 3166-3175,

104. Carrnicael Alasdair, Vincent James S. Low pH binding: of vanadyl to bovine lactoferrin. Electron spin resonance studies. //FEES Lett.- 1979.- 105, N2.- P. 349-352.

105. Chance B., Sies H., Boveris A, Hydroperoxide metabolism in mammalian organs. /"/'Physiol. Rev.- 1979.- Vol.59, N 3.-P. 527-605.

106. Charche S., Fox J., McCardy P., Kazaziah H., Wislow R. // J. Clin. Invest.- 1997.- vol.59, N4.- P. 652-658,

107. Chexson B.D., Sies H., Boveris A, //Physiol.Rev.-1979.- Vol.- 59, N 3.- P. 527-605.

108. Chi ou Shy h-Horns:. DNA - and protein-scission activités of ascorbatein the presence of" copper ion and a copper-peptide complex. //J.Biochem.- 1983,- N 4.- P. 1259-1267.

109. Chock P.B., Rhee S.G., Stadtman E.R. Interconvertible

enzyme cascads in cellulur regilation. // Annu. Rev. Biochem. -1980,- V. 49,- P, 813-843.

110, Cunningham G,, Headon D,R., Conneely Ü.M. Structural organization of the mouse lactorerrin gene // Bloche, and Biop-hys. Res, Cornrnun, - 1992, - T, 189, - N 3, - P, 1725-1731,

111, Devasagayam T.P.A. Senescence-associated decrease of" NADPH-induced lipid peroxidation in rat liver microsomes. //FEBS Lett.- 1986.- vol,205,- P. 246-250,

112, Dougherty H.W., Sadowski S.J., Baker E.E. A new iron-containing superoxide dismutase from Escherichia coli, //J. Biol. Chem.- 1978.- Vol,253,- P. 5220-5223,

113, Devi A.S., Das ivLR.. Pandit M.W, Lactoferrin contains structural motifs of ribonuclease. //Biochem. et biophys. acta. Protein struc. and Mol, EnzymoL- 1994,- T, 1205, N 2,- P, 275-281,

114, Ena J.M., Castello H., Sanchez L., Calvo M. Isolation of human lactoferrin uzing insolubilized bovine ß - lactoglobu-lin. //J. Chromatogr. Biomed, Appl.- 1990.- 525, N2,- P.442-446,

115, Fiatmark B.V. Multiple molecular forms of" Bovin Heart Cytochrome C. //J, Biol. Chem.- 1967,- V,242, N 10,- P. 2454-2459,

116, Flige1 S.E.G., Lee E.S., McCay J,P. et.all. //Ann.Genet, - 1984,- Vol.115,- P. 253-256.

117, Flohe L, Glutathione peroxidase brought into focus, //Free Radicals in Biol.- 1982,- Vol.5,- P, 223-254.

118, Free radicals and Arthritis Diseases, //Ed. A. J.G.Swa-ak.- Rioswink,- 1986,- P, 13-21.

119, Frei B. , Stocker R., Arnes B. //Proc. Natl. Âcad. Sei, USA.- 1988,- vol.85, N,24,- P. 9748-9752,

120, Beizer T., Clarck S. //Biochem.- 1991,- N,12(45),-P, 6534-6543,

121, German! A., Vlassara H., Brownlee M. Role of" nonenzy-rnatic glucosylation in the atherog'enesis, //J, Otll biochem,-1986, - T, 30, N. 2,- P. 111-120.

122, Gershon D,, Glassy G,, Lavie L., Rezniknikck A., Ih-pund S. Enzyme alteration in aging', //Biol. Cell.- 1982,- V. 45, P. 3391,

123, Gutteridg'e J,, Patterson S., Segal A. et al. //Biochem. J.- 1981.- vol,199,- P. 251-261.

124, Fujii H,, Kretsch W,K,, Yoshita A. A singl amino acid substitution (Asp-Asn) in a phosphoglycerate kinase variant (PGK München) associated with enzyme deficiency // J, Biol. Chern, -

125, Guttenberg T., Haneberg B,, Jorgensen T. //Europ, J. Pediat.- 1984,- vol,143,- P, 37-42,

126, Gutteridge J,, Patterson S,, Segal A. et al, //Biochem, J,~ 1981,- vol.199. - P. 251-261.

127, Gutteridge J.M.C, //FEBS Lett.-1986,-201,- P, 291-295,

128, Gutteridge J.M.C. //FEBS Lett,- 1983,- Vol,157,- M 1,-P, 37-40,

129, Hadden J.M., Baemendal M., Haris P.I., Srai Surjit

K.S., Chapman LI, Fourier trancform infrared spectroscopy arid differential searming calorimetry of" tranferrins: Human serum transferrin, rabbit serum transferrin and human lactoferrin, //Biochem, et bioph. acta, Protein struct, and Mol, Enzymol. -

1994=- T. 1205,- N 1.- P. 59-67=

130. Halliwell B. //Amer. J. Med.- 1991.- vol.91, su.ppl.3c. -P. 14-22.

131. Harrington John P., Stuart Jan, Jones Arlene. Unfoling of Iron and cooper complexes of" human 1 act. of err in and transferrin. //Int.J.Biochem.- 1987.- 19, N10.- P. 1001-1008,

132. Hutchens T. William, Magnuson I, Scott, Yip Tai-Tang.Rapid purification of" porcine colostral whey lactofer-rin by affinity chromatogrpy on snigle-stracted DNA-agarose, Chracterization, amino acid compozition and amino acid sequence. //Biochim. et biophys, acta, Protein Struct, and Mol. Enzymol.-1989,- 999, N3,- P. 323-329.

133. Jackrnan H., Tan F., Tamei H. //J. Biol, Ohern,- 1990.-vol.5, N.265(19),- P, 2565-2572,

134. .Jolles Jacqueline, Donda Alenka, Ami que t Patrick, Jol-les Pierre, Mare lactoferrin: purification, analysis and N~terminal sequence determination, //FEBS Lett,- 1984.- 176, N1.-P. 185-188.

135. Jozwiak Z,, Jasnowska B. Changes in oxygen metabolising enzymes and lipid peroxidation in human erithrocyt.es at a function of age of donor, //Mech. Ageing and Dev.- 1985,- V. 32, N 1,- P, 77-83,

136. Kanner J=, Harel S. Initiation of" membranal lipid pe-roxidational by acti-vated metrnyoglobin and metrnyoglobin, Arch, Biochem, and Biophys,- 1985,- Vol. 237, N 2.- P, 314-321.

137. Karatha V.N. Krishnamurhy S. //Int.J.Nutr.Res.- 1978,48, N 1,- P, 38-43,

138, Kawakami H,, Dosako S., Nakajima J. Effect of lctofer-rin oniron solubility under neutral conditions, // Biosci. Bio-technol. and Biochern.- 1993,- T, 53,- N 1,- P, 43-50,

139, Kawakarni Hiroshi, Hiratsuka iviakiko, Dosako Shun'iehi. Effects of iron-saturated lactoferrin on iron absorbtion. // Agr and Biol. Chem,- 1988,- 52, N4,- P. 903-908,

140, Kawasaki Y., I soda H., Tanimoto M., Dosako S., I dot. a,, Ahiko K. Inibition by lactoferrin and K-casein giycorriacropepti.de of" binding of" cholera toxin to its receptor, //Biosc. Biotech-nol, and Biochem,- 1992,- T. 56,- N 2,- P. 195-198,

141, Klebanoff S.F, //Inflammation: Basic principals and clinical correlates, -N.Y.: Raven Press,- 1992,- P, 541-588,

142, Knobloch L,M,, Blondin G.A., Lyford S.D., Harein J.M.A. rapid bioassayfor chemicals chemicals that induce prooxi-dant states, //J. of Appllied Toxicology.- 1990.- vol,10, N 1,-P, 1-5.

143, Learnmli U.K. Cleavage of" structural proteins during: assembly of the head of" bacteriophage T4. //Nature,- 1970,- V, 227, N. 5259,- P, 680-685.

144, Legrand Dominique, Mazurler Joel, Metz-Bontque Marie-Helene, Jolles Jacqueline, Jolles Pierre, Mont.reuil Jean, Spik Genevieve, Characterization and legalization of" an iron-binding 18 kDa giycopeptide isolated from the N-terminal half of human lactoferrin. //Biochim. et biophys. acta: Protein Struct, and Mol, Enzyrnol.- 1984,- 787, N1,- P, 90-96,

145, Lima Maria F, Kierszenbaum Felipe, Lactoferrin effects on phagocytic cell function ,I, Increased uptake and killing of

an intracellular parasite by rnyrine macrophages and human monocytes, //J.Immunol,- 1985,- 134, N6,- P. 4178-4183,

148, Lowry J. Rosenbrougti N., Farr L,, Randall R. Protein measurement with the Folin phenol reagent. //J.Biol. Chem,-1951.- vol,193, N.I.- P. 285-275.

147. Makino Y., Nishimura S. Highperforrnance liquid chromatographic separation of" human apolactoferrin and rnonoferric and difernic lactof"errins. //J, ChromatogT. Biomed. Appl.- 1992,- T, 579, N 2,- P, 346-349,

148. Malmquist J., Thorell J., Woliheim F.A. //Acta med. Scand,- 1977,- V, 202.- P. 313-318.

149. Mane in i G., Carbonara A,, Herernas I, /7 Immunochem. -1965.- V. 2, N,3,~ P. 235-254,

150, Masson P,L, //La laktoferrine. Proteine des secretions externes et des leucocytes neutrophiles, Bruxelles: Arscia,-1970.- 232 p.

151, Mbernba F,, Houblon A., Raes M,, Rernacle J, Subcellular localization and modification with of glutathione, glutathione peroxidase and reductase activities in human fibroblasts, //Bi-ochim. Biophys. Acta,,- 1985,- Vol,838, N 2,- P. 211-220,

152, McCord J,M,, Day E.D. //FEBS Lett,- 1978,- Vol,86,- P. 139-142,

153, McCord JJ/L, Fridovich I, Superoxide disrnutase. An en-z.imic function for erythrocuprein (hemocuprein), //J, Biol, Chem.- 1969,- Vol,244,- P. 6049-8055,

154. MeCay P.B., Poyer J.L,In: The Enzymes in Biological Membranes, Ed.A.Martonosi. New-York.- 1976,- Vol. 4,- P.239-256,

155. Metz-Bantque Marie-Helene,Jolles Jacqueline. Mazurier Joel} Shoentgen Francoise,Montreu.il Jean, Jolles Pierre. Human lactotransferrin; amino acid sequence and stracturial comparisons with other transferrins. //Eur.J.Biochem.- 1984.- 145, N3.~ P. 859-678.

156. Miller D., Buettens G.R., Aust S.D, Transition metals as catalysisof "autoxidation" reactions. //Free Radic. Biol, and Med.- 1990.- vol.5, N 1.- P. 95-108.

157. Minotti B., Aust S.D. //J.biol.Chem.- 1987.- Vol.£62, N 3.- P. 1098-1140.

158. Mogulllevskv N., Retegui L.A., Masson P.L. //Biochern. J.- 1985.- V. 229, N.2.- P. 353-359.

159. Molloy Annemarie L., winterbourn Christine C. Relese of" iron from phagocytosed Esherichia, coli and uptake by neutrophil lactoferrin. //Blood,- 1990.- 75, N4.- P. 984-989.

160. Monnard 0., Varnet M. //Path, Biol. (Paris).- 1988=-vol. 36, N.2.- P. 933-935,

161. Motohashi N., Mori I. //FERS Lett.- 1983.- V. 157, N.l. -P. 197-199.

162. Nakamura Masao. Lactoferrin-mediated formation of" oxygen radicals by NADF-cytochrome P-450 reductase system. //J.Biochern. - 1990.- 107, N3.- P. 395-399,

163. Naldu A.S. Lactoferrin and the preimmune host defence., //Acta microbiol. hung.- 1991.- 38, N34.- P, 245

164. NaiduA.S,, Andersson M., Forsgren A, Identification of" a human lactoferrin-binding protein in Stapvlococcus aureus, //J. Med. Microbiol.- 1992.- 36, N3.- P. 177-183.

165, Naidu S.S., Erdei J,, Czirok E, , (3ado I=, Toth I,, Forsgren A., Naidu A.S. Lactoferrin binds to Esherichia coli and ather Gram-negative bacteria assoshietid with human intestinal infections. //Acta microbial, hung,: Abstr pap, and Post,-1991,- 38, N 3-4,- P, 246,

166, Nohl H,, Hegner P., Summer K.H, The mechanism of" toxic action of hyperbaric oxygenation on the mitochondria of rat heart cells. //Am. Rev,Respir,Dis,- 1981,- Vol,30, N 13,- P. 1753-1757.

167, O'Connell M.J., Peters T.J. //Chem. and Phys, Lipids.-1987.- V, 45, N.2-4,- P, 241-249.

168, Pat el K,, Borchardt R. Chemical pathwais of" peptide degradation, Kinetic of desamination of an asparaginyl residue a, model hexapeptide. //Pharm, Res,- 1990 (a),- V 7,- P. 703-711,

169, Puppo A,,Halliwell B. //Free Radio.Res.Commun.- 1988,-Vol. 4,- P, 415-422,

170, Reiter B, Brök LH,, Steel E.D. Inhibition of" E, coli by Bovine colostrum aid pust-colostrum milk II The bacteriostatic effect of" lactoferrin on a serum susceptible strain of" E, coli, //Immunology.- 1975.- 28, 1,- P. 83-95.

171, Rheumatoid arthritis and selenium, //Nutr.Rev,- 1988,-Vol.46, N 8,- P. 284-286,

172, Robinson A.B., McCerrow J.H., Gary P. Controlled desa-midation of peptides and proteins. An experimental Hazard and possible Biological Timer. //Proc. Nat, Acad. Sei. USA.- 1970,-V, 66, N. 3.- P, 753-757,

173, Robinson A.B., Schotchler J.W. Sequence dependet desa,-

¡nidation rates for model peptides of histone IV. //Int. J. Peptide and protein Res,- 1974,- V. 16, N. 5.- P, 279-282.

174, Robinson A., Robinson R, //Proc, Mat. Sci.- 1991,- V. 15j N.88,- P, 8800-8804,

175, Roiron-Lagroux D. s Figarelia C, Further evidence of" different lactoferrin and transferrin, fucose and cathepsin G, Comparison with transferrin. //Biochem, et biophys. acta, Moll, Cell, Res,- 1994.- T. 1224, N 3.- P. 441-444.

176, Roots R,, Okada S, Estimation of life times and diffusion distances of" radicals involed in X-ray-induced DMA strand breaks or killing of mammalian cells, //Radiat. Res,- 1975.-Vol.84.- P.306-320.

177, Routh ,, Tourok B,, Zsoldos T,, Matkovics B, //Daslc Res,Cardiol,- 1985,- Vol,80.- P, 530-536,

178, Rowley B,, Sweeney G.D. //Can, J, Biochem. Cell, Biol,- 1984. 62,- P. 1293-1300.

179, Sadrzadeh S.M.H., Graf E., Panter S.S., Halliway P.E,, Eaton J.W. Hemoglobin. A biologic Fenton reagent, //J.Biol. Chem.- 1984.- Vol,259, N 23,- P,14354-14360,

180, Saito M,, Morehouse L.A., Aust S.D. //J. Free Radicals Biol. Med,- 1986,- 2,- P, 99-105,

181, Saran M,, Bors W, Radical reactions in vivo (an overview), //Radical and Environ. Biophys.- 1990,- Vol,29, N 4,- P, 249-262.

182, Slater T.F. Free-radical mecanisms in tissue injury. Biochem, J.- 1984,- Vol, 222,- P. 1-15,

183, Soukka T., Lumikari M., Tenovuo J, Combined bacterial

effect of" human iactoferrin and lysozyme against Streptococcus mutants serotype C. //Microb. EcoL Health and Disease.- 1991.-N5.- p. 259-284,

184, Spik S, Comparative studu of" the iron-binding" properties of human transferrins. I, Complete and sequetial iron saturation and desaturation of the lactotransferrin. //Biochim. et biophys, acta,- 1980,- 629, N2,- P, 399-408,

185, Spik Genevieve, Strecker Gerard., Fourent Bernard, Bo-uelet Stephane, Montreuil Jean, Primary stracture of the glycans from human Iactoferrin, //Eur,J.Biochem,- 1982,- 121, N2,- P. 413-419,

186, Stadtman T,C, Selenium biochemistry, //Annu. Rev, Bi-ochem.- 1990,- Vol, 59,- P, 111-127,

187, Sugawara K., Oyama F. //J, Biochem.- 1981,- N,5,- P,

rfrjM A

i s 1 - f i 4,

188, Tenovuo J,, Moldoveanu Z., Mestecky J,, Prutt K.M., Rahemtulla B.M, Interaction of" specific and innate factors of" immunity: IgA enhances the antimicrobial effect of the lactope-roxidase system against Streptococcus rnutans, //J. Immunol,-1982,- V.128, N2,- P, 726-731,

189, Thomast J,P,, Maiorino M., Ursini F,, Girotti A,W, Protective action of" phospholipid hydroperoxide glutathione peroxidase against membrane-damaging lipid peroxidation, //J. Biol, Ohem,- 1990,- Vol, 265, N 1,- P, 454-461,

190, Tornita Marrioru, Bellamy Wayne, Takase Mitsuori, Yamachi Koj i, Wakabayashi Hiroyuki, Kawase Kouzou, Potent antibacterial peptides generated by pepsin digestion of" bovine Iactoferrin,

//J.Dairy Sei.- 1991.- 74, N12,- P, 4147-4142,

191, Torrielli M,V.j Dianzani M.U. //Free Radicals in Molecular Biology, Aging, and Disease, - N.Y.- 1984,- P. 355-379,

192, Van Asbeck B.S. Involvement of oxygen radicals and blood cells in the pathogenesis of ARDS by endotoxin and hypero-xia, //Appl. Cardiopulmonary Pathophys,- 1991,- Vol. 4,- P, 127-137.

193, Van Berkel P.H.C., Van Veen H.A., Geerts M.E.J., de Boer H.A.j Nuijens J.H. Hetergeneity in utilization of N-glyco-sylation sites Asne2<t and ksnloQ in human lactoferrin: a study with glycoztlation-site mutants, //Biochem.J.- 1998,- Vol.319, part,1, -P, 117-122,

194, Van Berkel P.H.C,, Van Veen H.A., Geerts M.E.J., Kooi-mam P.M., Pieper F.R., de Boer H.A., Nui.iens J.H. Glycosylated and unglycosylated human 1actoferrins both bind iron an show identical affinities towards humans lysozyme and bacterial lipo-polysaccharide but differ in susceptibilities towards tryptic proteilysis. //Biochem,J,- 1995,- Vol,312,. part. 1.- P, 1(37-114,

195, Van Shick J,, Masson P., Heremas J. //J. Exp, Med.-1974,- V, 140,- P 1068-1084.

196, Vickery H.B., the history of the discovery of the ami-noacids. //Adv. Protein ehem.- 1972,- V, 26,- P, 82-162=

197, Vidik A, Connective tissues - possifil implications of the temporal changes for aging process, //Mech, Ageing and develop,- 1973,- N. 3-4,- P, 267-285,

198, Vladimirov Y.A, //Free Radicals, Aging and Degeneration Dieseases, - New York, London: Alan R. Liss Inc.- 1986,- P,

141-195.,

199. Vigh R., user L., Kilar F., Simon J. Different segmental flexibility of" human serum transferrins and lactoferrin.-//Arch. Biochem. and Biophys.- 1989.- 275, N1.- P. 131-184.

200. Wang Chi-Sun, Chan Wai-Yee, Kloer Hans U., Comparative studies on the chemical aid immunochemical properties of" human milk, human pancreatic juice aid bovine milk lactoferrin, //Comp. Biochem. and Physyol.- 1984.- B78, N3.- P. 575-580.

201. Watala C., Bryszewska M., Stefaniak B,, Nowak S, //0y-tobios.- 1986.- Vol. 476, N189.- P. 101-105.

202. Weber G, The rnesurement of oxygen-derived free radicals and ralated substances in medicine. //J. Clin.chem.Clin.Biochem. - 1990.- Vol. 28.- P. 569-603.

203. Weiner A.M, Platt T., Weber R, Amino-terminal sequence analysis of proteins purified on a nanomide scale by gel electrophoresis. //J. Biol. Chem.- 1972.- V, 247, N. 10.-P.3242-3251.

204. Weiss S. Oxygen, ischemia and inflammation. //Acta, Physiologica Scandinavica.- 1986.- Vol.126, (Suppl.548).-

P.9-37.

205. Wiederanders B., Ansorge S., Bohley P., Kirschke H., Langer J., Hanson H., Changes in the intracellular proteolesis in the liver during aging process. //5-th European Symp. on Bar sis Research in gerontology. - Wiemar.- 1975.- P. 599-605.

206. Wolf F. In vivo chemical modification of proteins (posttranslational modification). //Ann. Rev. Biochem.- 1981.-V. 50.- P. 783-814,

£07, Willson R.L. In:Free Radicals, Lipid Peroxydation and Ganser Eds D.C.H. McBrien, T.F,Slater, London-New-York, Acad,Press,- 1982.- P, 275-302,

208, Уайт А,» Хендлер Ф,, Смит Э. и др. Основы биохимии, М., Мир,- 1981.- Т.2.- С.614,

209, Ambruso D., Jonston R, //J. Clin. Invest,- 1981.- vol. 67,- P.352-357.

210, Синичкин A,A.. Медведева И.A.. Маслова M.H, Влияние восстановленной и окисленной форм экзогенного альбумина на активность NaJК-аденозинтрифосфотазы мембран эритроцитов крыс при иммобилизированном стрессе in vitro и in vivo, //Киев, Биоанти-оксиданты.- 1997.- С, 17-18,

211, Синичкин A.A. Сывороточный альбумин как биоантиокси-дант, //Киев, Биоантиоксиданты.- 1997,- С, 19,

212, Скоуп O.P. Методы очистки белков. //М. Мир,- 1985,- С, 312-314,

213, Тарусов В.Н., Колье O.P. Биофизика. М., Высшая школа.-1968,- С. 468,

214, Троицкий Г«В, Дефектные белки: постсинтетическая модификация, К: Наук, думка,- 1991,- 232 с,

215, Троицкий Г,В, Постсинтетическая модификация белков. //Укр. биохим. ж,- 1985,- N 3,- С, 81-98.

216, Троицкий Г,В, Электрофорез белков, - Харьков: Изд-во Харьков Ун-та,- 1962,- 324 с.

217, Умзнская H.H. Влияние дезамидирования и гликирования на активность некоторых белков с антиоксидантными свойствами. Автореферат дисс, к.б.н. Ростов н/Д.- 1995,- 19 с.

£18, Фридович И. Радикалы кислорода, пероксид водорода и токсичность кислорода, //В кн.г Свободные радикалы в биологии, под ред. Прайора У,, М.: Мир.- 1979,- Т.1.- Гл.6.- С, 272-314,

219, Хыоз Р, Гликопротеины,- М.: Мир,- 1985,- 140 с,

220, Шарон Н. Гликопротеины, //Перспективы биохимических исследований,- М.: Мир,- 1987, - С, 180-186»

221, Osman R,, Basch Н, On the mechanism of action of superoxide dismutase: a theoretical study, //J, Am, Ohern, Soc.-1984.- Vol.106.- P. 5710-5714,

222, Оэриу С, Изменения на молекулярном уровне - важный фактор в процессах старения // 9-ый Международный конгресс геронтологов. Секционные заседания. Тезисы докладов,- Киев,-1972.- Т, 3,- С, 41,

223, Олехнович Л,П,, Лукаш А,И,, Пушкина Н.В.5 Жданов А.Ю. Особенности кинетики неферментативного гидролиза амидов в белках. Известия ОКНЦ ВШ, Естественные науки, 1984, N 1,

224, Wearne S., Creighton Т, Effect of protein conformati-onrate of desamidatiom ribonuclease. //Proteis,- 1989,-N,5(1),- P, 8-12,

225, Geiger T,, Olarck S. Desamdation and Racemisation small peptides. //Biochem.- 1991,- N. 12 (45).- P. 6534-6543.

226= Птицын O.B.j Филькенштейн А,В, Связь вторичной структуры глобулярных белков с их первичной структурой. //Биофизика.-1970,- Т. 15, N 5,- С, 757-767.

227, Густинов Т.М,, Насибов Э,М,, Джэфаров А.И, Участие селена в регуляции перекисного окисления липидов биомембран и активность глутатионпероксидазы. //Биохимия,- 1990,- Т.55, вып.

3.- и= 499-508=

228, Теселкин Ю.О., Вабенкого И.В., Любицкий О.Б., Клебанов Г.И., Владимиров Ю.А. Ингибирование сывороточными антиоксиданта-ми окисления люминола, в присутствии гемоглобина и пероксида водорода, //Вопр. мед, химии,- 1996,- N.5.- 0, 87-93,

229, Toilefsbol Т.О., Grasy R.W.//Bioscience. 1983, -Т, 33, -Р, 634-639,

230, Whright Т, Sequence and structure determination of" no-nenszmatic deamidation of" the asparaglnyl and glutaminyl residu-ses in proeins, //Protein Eng.- 1991 (b)V.4, T.4.- P,283-294,

Выражаю глубокую благодарность

научным руководителям Наталье Владимировне Пушкиной, Александру Павловичу Шепелеву, а также заведующему кафедры биохимии Александру Ивановичу Лукашу - за всестороннюю помощь и критические замечания при выполнении работы; Ирине Алексеевне Климовой, Ирине Николаевне Назаровой и Игорью Валериевичу Корниенко за помощь, поддержку и постоянное внимание к моей работе.:

Виктору Николаевичу Прокофьеву - за помощь в выполнении

хемилюминесцентного анализа и Михаилу Викторовичу Кения - за,

помощь в оформлении работы:

а, также декану биолого-почвенного факультета

Виталию Николаевичу Думбаю и всем сотрудникам кафедры биохимии

за бескорыстную помощь и поддержку в течение всего периода работы.