ВЛИЯНИЕ ДЕЛЬТА-СОН ИНДУЦИРУЮЩЕГО ПЕПТИДА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВИДАХ СТРЕССА тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Белых Андрей Евгеньевич

• Белых Андрей Евгеньевич
• кандидат наук
• 2017

Оглавление диссертации кандидат наук Белых Андрей Евгеньевич

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1 СТРЕСС И РЕГУЛЯТОРНЫЕ ПЕПТИДЫ

(ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 Современные представления о механизмах повреждающего действия стресса

1.2 Печень как орган-мишень при стресс-реакциях

1.3 Понятие о регуляторных пептидах

1.4 Дельта-сон индуцирующий пептид: отдельные биологические эффекты и механизмы их развития

Глава 2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Экспериментальные животные

2.2 Препарат

2.3 Моделирование эмоционально-болевого стресса

2.4 Моделирование иммобилизационного стресса

2.5 Методика выведения животных из эксперимента и забора биологического материала

2.6 Определение содержания показателей системы перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты

2.7 Определение данных биохимического анализа крови, отражающих состояние функции печени

2.8 Морфологические методы исследования

2.9 Статистическая обработка данных

Глава 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на морфофункцио-нальное состояние печени крыс при эмоционально-болевом стрессе

3.1.1 Изменения биохимических показателей в сыворотке крови и го-могенате печени на фоне введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях эмоционально-болевого стресса

3.1.2 Морфологические изменения печени при введении дельта-сон индуцирующего пептида в условиях эмоционально-болевого стресса

3.2 Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на морфофункцио-нальное состояние печени крыс при иммобилизационном стрессе

3.2.1 Изменения биохимических показателей в сыворотке крови и го-могенате печени на фоне введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях иммобилизационного стресса

3.2.2 Морфологические изменения печени при введении дельта-сон индуцирующего пептида в условиях иммобилизационного стресса

3.3 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях различных видов стресса

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «ВЛИЯНИЕ ДЕЛЬТА-СОН ИНДУЦИРУЮЩЕГО ПЕПТИДА НА МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНОЕ СОСТОЯНИЕ ГЕПАТОЦИТОВ ПРИ РАЗЛИЧНЫХ ВИДАХ СТРЕССА»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

В настоящее время в литературе имеется значительный объем информации о функциональных и структурных изменениях, развивающихся в организме в результате стрессорного воздействия. Одним из органов-мишеней, реагирующих на воздействие стрессоров изменением функционирования, является печень. Так, под действием стресса перестраивается метаболизм печеночных ферментов, принадлежащих к семье цитохрома Р450 (СТР) [194] и производных кофермента А [159], развивается фиброз [215], стеатоз и неалкогольная жировая болезнь печени с увеличением в ней содержания триглицеридов, общего холестерина, уровней ИЛ-6 и ФНО [152]. Более того, стресс, стимулирующий синтез альфа-галактозилцерамида, может запускать апоптоз гепатоцитов за счет увеличения экспрессии Fas-рецепторов и усиления миграции натуральных киллеров в этот орган [173]. Учитывая, что патология печени, имеющей значимую роль в поддержании гомеостаза, способна оказывать системное негативное воздействие на весь организм, представляется важным изучение механизмов ее стрессорного повреждения, а также путей их коррекции [208, 231].

Необходимо отметить, что при общей стереотипности стрессорных реакций, качество, сила и продолжительность воздействия того или иного стрессорного агента могут модулировать характер ответной реакции организма и ее выраженность [21, 65, 129]. На последствия стрессорного воздействия существенное влияние оказывает и состояние стресс-лимитирующих систем организма. К их числу относятся, в частности, ГАМК- и опиоидэргическая системы на уровне целостного организма, а также тонкокоординированная система белковых и неферментативных антиоксидантов - на локальном уровне [81, 129]. При этом важнейшим звеном механизма гуморальной регуляции гомеостаза в организме является продукция и секреция ряда клеточных медиаторов, объединенных общим названием

«регуляторные пептиды», участвующих в большом количестве биологических реакций, в том числе и стресс-лимитирующих [8, 53, 128 и др.].

К эндогенным регуляторным пептидам с выраженными стресс-протекторными свойствами относится дельта-сон индуцирующий пептид (ДСИП), обладающий широким спектром физиологических эффектов, в том числе антиноцицептивными, антиоксидантными, анксиолитическими, анальгетически-ми, стресс-лимитирующими, нейромодулирующими и мембраностабилизирую-щими эффектами [10, 27, 55, 67, 77, 114, 115, 209, 228, 230]. Пептид способствует замене и переводу стресс-реакции на более эффективные и экономичные адаптационные стратегии, способствуя значительному увеличению выживаемости животных после эмоционально-болевого стресса [38, 114, 122]. Данные свойства пептида были использованы при создании на его основе лекарственных препаратов «Дельтаран» и «Дельталицин».

Множественные эффекты ДСИП легли в основу фармакологических препаратов, применяемых для коррекции и профилактики стресс-индуцированных состояний (реакции на стресс и нарушения адаптации), посттравматических стрессовых расстройств, дисфории и нарушений сна, нарушений эмоционального равновесия, повышения возбудимости, затруднения концентрации внимания, раздражительности, расстройств приспособительных реакций, симптомов истощающего стрессового перенапряжения - тревоги, беспокойства, депрессии, снижения памяти, умственной работоспособности, а также при лечении первичного патологического влечения к алкоголю, вегетативных и аффективных проявлений (субдепрессивных и дисфорических) алкогольного абстинентного синдрома, при алкогольной и наркотической интоксикациях [35].

В то же время до настоящего момента многие аспекты биологических эффектов ДСИП и механизмов их реализации имеют малоизученный и одновременно явно противоречивый характер. Так, в литературе имеются неоднозначные данные относительно характера влияния пептида на уровни АКТГ [115, 161, 163, 187, 209], катехоламинов [25, 86, 140], глюкозы [16, 168], а также действия на мембраны клеток [26, 86, 153, 230] и на активность прооксидантных [13] и анти-

оксидантных ферментов [16, 24, 29, 134, 230] при различных видах стресса. С другой стороны, некоторые особенности описанных независимыми авторами стресорных изменений, возникающих в организме, также нередко не согласуются между собой [57, 79, 106, 120, 182, 196].

При этом комплексного изучения влияния ДСИП на морфофункциональное состояние гепатоцитов в условиях стресса с оценкой механизмов перекисного окисления и антиоксидантной защиты в гепатоцитах, их протеинсинтетической функции, цитолитических и репаративно-восстановительных процессов до настоящего времени не проводилось.

Диссертационное исследование (№ государственной регистрации 01201282247) выполнено по основному плану научно-исследовательской работы Курского государственного медицинского университета.

Цель исследования - изучить влияние дельта-сон индуцирующего пептида на морфофункциональное состояние гепатоцитов при иммобилизационном и эмоционально-болевом стрессе.

Задачи исследования

1. Изучить влияние введения дельта-сон индуцирующего пептида на изменение в сыворотке крови и гомогенате печени биохимических показателей сос -тояния гепатоцитов в условиях острого и хронического эмоционально-болевого стресса.

2. Исследовать морфологические изменения печени при введении дельта-сон индуцирующего пептида в условиях острого и хронического эмоционально-болевого стресса.

3. Изучить влияние введения дельта-сон индуцирующего пептида на изменение в сыворотке крови и гомогенате печени биохимических показателей состояния гепатоцитов в условиях острого и хронического иммобилизационного стресса.

4. Исследовать морфологические изменения печени при введении дельта-сон индуцирующего пептида в условиях острого и хронического иммоби-лизационного стресса.

5. Определить корреляционные взаимосвязи показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях различных видов стресса.

6. Определить патофизиологическое значение установленных эффектов дельта-сон индуцирующего пептида.

Научная новизна

В работе впервые проведено комплексное исследование влияния ДСИП на механизмы перекисного окисления и антиоксидантной защиты в гепатоцитах, их протеинсинтетическую функцию, цитолитические и репаративно-восстано-вительные процессы. Установлено, что выраженность и направленность эффектов пептида зависят от величины используемой дозы, вида стрессорного воздействия и его продолжительности.

Впервые определены дозы ДСИП, обладающие наиболее выраженным адап-тогенным и стресс-лимитирующим действием на морфофункциональное состояние гепатоцитов в условиях иммобилизационного и эмоционально-болевого стресса.

Впервые с использованием корреляционного анализа изучено влияние ДСИП на взаимосвязи показателей морфофункционального состояния гепатоци-тов в условиях различных видов стресса.

В работе установлены особенности изменения показателей перекисного окисления и антиоксидантной защиты в гепатоцитах, их протеинсинтетической функции, цитолитических и репаративно-восстановительных процессов и их корреляционные взаимоотношения при различных видах стресса.

Практическая значимость работы

Экспериментально показано влияние ДСИП на морфофункциональное состояние гепатоцитов в условиях стресса, которое следует учитывать при разработке патогенетически обоснованных методов коррекции стресс-индуцированных патологических сдвигов в печени, а также использовании фармакологических препаратов на основе данного пептида.

На основании результатов исследования получены патенты «Применение дельта-сон индуцирующего пептида для гепатопротекторного воздействия при хроническом эмоционально-болевом стрессе» (патент на изобретение № 2537032 от 27.12.2014 г.) и «Применение дельта-сон индуцирующего пептида для гепато-протекторного воздействия при хроническом иммобилизационном стрессе» (патент на изобретение № 2538686 от 10.01.2015 г.).

Полученные данные расширяют существующие представления о роли регу-ляторных пептидов в организме, полифункциональном характере их биологических эффектов.

Внедрение результатов исследования в практику

Материалы диссертации используются в лекционных курсах кафедр патофизиологии и нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета; патологической физиологии Гомельского государственного медицинского университета; общей патологии и физиологии Медицинского института Орловского государственного университета имени И.С. Тургенева; патологической физиологии Военно-медицинской академии имени С.М. Кирова.

Основные положения, выносимые на защиту

1. ДСИП оказывает существенное влияние на морфофункциональное состояние гепатоцитов при различных видах стресса за счет влияния на процессы пере-

кисного окисления и механизмы антиоксидантной защиты в гепатоцитах, их про-теинсинтетическую функцию, цитолитические и репаративно-восстановительные процессы.

2. Выраженность и направленность установленных эффектов ДСИП зависят от величины используемой дозы, вида стрессорного воздействия и его продолжительности.

3. Изменение показателей морфофункционального состояния гепатоцитов при введении ДСИП стрессированным животным сопровождается значительными изменениями корреляционных взаимосвязей, изначально вызванных стрессорным воздействием.

4. Установленные эффекты ДСИП в зависимости от вида и продолжительности стрессорного воздействия имеют адаптогенный и стресс-лимитирующий характер.

Степень достоверности и апробация работы

Степень достоверности определяется достаточным числом экспериментальных животных, формированием подопытных, интактных и контрольных групп, полнотой и широтой литературно-библиографической справки, общепринятыми в мировой и российской практике и адекватными задачам диссертационного исследования методами создания экспериментальных моделей, получения материала для исследований и определения искомых показателей, а также статистической обработки.

Основные положения диссертации представлены и обсуждены на 79-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», посвященной 79-летию КГМУ (Курск, 2014), 80-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность», посвященной 80-летию КГМУ (Курск, 2015), 81-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная

наука и современность», посвященной 81-летию КГМУ (Курск, 2016), научно-практической конференции «Павловские чтения», посвященной 80-летию кафедры нормальной физиологии Курского государственного медицинского университета (Курск, 2016), X Юбилейной Международной научно-практической конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2016), Международной научно-практической конференции «Университетская наука: взгляд в будущее», посвященной 81 -летию Курского государственного медицинского университета и 50-летию фармацевтического факультета (Курск, 2016), I научно-практической конференции аспирантов, преподавателей, ученых «Научные исследования и перспективные проекты - 2016» (Уфа, 2016), Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Современные теоретические и практические аспекты клинической медицины», посвященной 150-летию со дня рождения академика Даниила Кирилловича Заболотного (Одесса, 2016), XI Международной (ХХ Всероссийской) Пироговской научной конференции студентов и молодых ученых (Москва, 2016).

Апробация диссертации состоялась на заседании кафедры патофизиологии федерального государственного бюджетного учреждения высшего образования «Курский государственный медицинский университет» Министерства здраво -охранения Российской Федерации с участием сотрудников кафедр фармакологии; нормальной физиологии; патологической анатомии; гистологии, эмбриологии, цитологии; судебной медицины; микробиологии, вирусологии, иммунологии; биологической химии.

Публикации

По материалам диссертации в центральной и региональной печати опубликовано 15 работ, из них 5 - в изданиях, рекомендованных ВАК Министерства образования Российской Федерации, 2 - патенты на изобретения. В публикациях содержится полный объем информации по теме диссертации.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.03.03 - патологическая физиология. Результаты проведенного исследования соответствуют области исследования специальности, конкретно - пунктам 2, 7, 8 и 10 паспорта специальности.

Личный вклад автора

Личный вклад автора осуществлялся на всех этапах работы в форме планирования экспериментов (85%), их непосредственного выполнения на всех этапах (95%), обработки полученных результатов (100%), анализа отечественной и зарубежной литературы (100%), обсуждения и трактовки результатов (85%), написания статей и тезисов (85%), написания диссертации и автореферата (90%).

Структура и объем работы

Диссертация состоит из введения, обзора данных литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственных материалов исследования, заключения, выводов, практических рекомендаций, списка сокращений, приложения и списка литературы, включающего 242 источника, в том числе 136 отечественных и 106 зарубежных. Диссертация изложена на 191 странице машинописного текста, содержит таблиц - 28, рисунков - 40.

Глава 1 СТРЕСС И РЕГУЛЯТОРНЫЕ ПЕПТИДЫ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

1.1 СОВРЕМЕННЫЕ ПРЕДСТАВЛЕНИЯ О МЕХАНИЗМАХ ПОВРЕЖДАЮЩЕГО ДЕЙСТВИЯ СТРЕССА

В настоящее время в медицине под термином «стресс» подразумевается состояние организма после воздействия на него различных экстремальных факторов физической, биологической и психогенной природы, включающее в себя неспецифический набор психофизиологических реакций. Традиционно принято различать «острый» и «хронический» стресс [60, 65, 222].

Направленность стрессорных сдвигов определяется в первую очередь скоростью действия и видом стрессорного воздействия [44]. Среди большого числа факторов, способных вызывать стрессорную реакцию организма, особое значение имеют стимулы и ситуации, провоцирующие эмоциональный стресс. С позиций фармакологического подхода к проблеме стресса выделяют две качественно различные категории факторов: одни воздействуют на ткани непосредственно вызывая их изменения (так называемый физический стресс), другие действуют психо-генно, вызывая эмоционально-психические изменения, которые и являются источником стресс-реакций [118, 119, 129].

По своей биологической природе стресс - адаптивная реакция, возникающая под влиянием необычных, чрезвычайных или экстремальных воздействий на организм человека, способствующая приспособлению организма к новым условиям. Однако при достаточно сильном и длительном воздействии на организм стрессорного фактора может наступить срыв приспособительных (компенсаторных) реакций и нарушение гомеостаза с развитием состояния дистресса [17, 60, 65, 222].

Например, избыток катехоламинов при экстремальных состояниях опасен резкой централизацией кровообращения и нарушением перфузии различных органов (в первую очередь - паренхиматозных). Развивается гипоксия и метаболический ацидоз, что приводит к необратимому повреждению клеточных мембран с

последующим нарушением функции органов. Эти отклонения становятся настолько выраженными, что сами начинают поддерживать стресс, т.е. возникает порочный круг [65].

Важнейшим механизмом стрессорного повреждения клеток и тканей является увеличение интенсивности СРО. В основе его модифицирующего влияния на липидный бислой лежит реакция радикалов кислорода (АФК) с ненасыщенными жирными кислотами фосфолипидов и образование в мембранах полярных гидроперекисей [44, 94, 129]. Под влиянием АФК изменяется вязкость мембран, инак-тивируются рецепторы и ферменты, увеличивается неспецифическая проницаемость для ионов кальция, освобождаются лизосомальные энзимы (протеазы и нуклеазы). Как цитотоксические соединения АФК вызывают окисление липидных компонентов клетки и различных макромолекул (белков, нуклеиновых кислот, углеводов, гликозаминогликанов), а также ковалентное (и/или иное) связывание биополимеров, разрыв полипептидных связей, повреждение ДНК [66, 230]. При прогрессировании СРО накопление окисленных ненасыщенных фосфолипидов приводит к образованию перекисных кластеров или упорядоченных групп фосфо-липидов, между которыми образуются каналы ионной проводимости, способствующие повышению проницаемости и разрушению мембран [94, 129].

В настоящее время доказано, что процесс ПОЛ начинается с реакции инициирования цепи, вследствие которой образуются супероксидный и гидро-ксильный радикалы. Вблизи клеточной мембраны он имеет тенденцию реагировать с ПНЖК с образованием свободного радикала углерода в мембране, который, в свою очередь, способен образовывать пероксильный радикал. В случае отсутствия соответствующего антиоксиданта пероксид липида «извлекает» водород из другой ближайшей ПНЖК с образованием гидропероксида и нового углеродного радикала. Эта реакция начинает новый этап свободнорадикального цепного процесса, когда гидроперекиси разлагаются, инициируя новые цепи. Обрыв последних возможен при взаимодействии радикалов друг с другом, когда образуются неактивные продукты, а также при взаимодействии с металлами переменной валентности и антиоксидантами [78, 82].

В результате самоускоряющейся реакции СРО образуется множество продуктов ПОЛ, к которым относятся гидроперекиси липидов (первичные продукты ПОЛ - неустойчивые вещества, которые легко подвергаются дальнейшим превращениям), диеновые конъюгаты, шиффовы основания, МДА и др. Последний наиболее часто используется для оценки интенсивности ПОЛ. Его повышение является методом раннего выявления метаболических нарушений в организме, даже на доклинической стадии заболевания [78, 82].

Поскольку формирующаяся как ответ на действие стрессора адаптация организма не всегда срабатывает, возникают патологические состояния, называемые иногда «болезнями адаптации». Например, к таким расстройствам, которые наиболее часто ассоциируются с чрезмерным стрессом, относятся гипертоническая болезнь, ИБС и ее осложнение - инфаркт миокарда, аритмии, язвенная болезнь желудка и двенадцатиперстной кишки, бронхиальная астма, неврозы, депрессивные реакции и т.д. [17, 65, 116, 129].

Важно, что одновременно с основными механизмами стресса происходит также активация так называемых «стресс-лимитирующих систем», препятствующих повреждению тканей под влиянием избыточной концентрации катехолами-нов и глюкокортикоидов в организме, а также ограничивающих стресс-реакцию и обеспечивающих ее адаптивный механизм и защитный эффект в восстановлении гомеостаза [7, 60, 65, 156, 157, 200, 222, 229].

Одним из важных механизмов адаптации к стрессорным воздействиям является активация центральных регуляторных механизмов, которые при действии эмоциональных, болевых и других чрезвычайных раздражителей тормозят выход рилизинг-факторов и, как следствие, - выход катехоламинов и глюкокортикоидов. Реализуются эти механизмы через синтез и выделение в головном мозге таких медиаторов, как ГАМК (угнетает высвобождение КТРГ и процессы ПОЛ, обладает симпатоингибирующим действием [88]), дофамин, серотонин (ограничивает возбуждение адренергических центров), глицин, опиоидные пептиды (способствующие повышению порога болевой чувствительности, снижению активности симпатической нервной системы) и др. Именно эти системы ограничивают

стресс-реакцию и играют значительную роль в адаптации организма к повреждающим ситуациям. Аналогичным образом на периферии действуют не менее важные регуляторные системы: адениннуклеотидная, простагландиновая, антиокси-дантная, которые, выступая в роли модуляторов, могут ограничивать чрезмерные эффекты катехоламинов и предупреждают тем самым стрессорные повреждения [65, 129].

Антиоксидантная система включает неферментативные (соединения низкомолекулярной и белковой природы) и ферментативные составляющие (каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза), имеющие определенную специализацию по отношению к конкретным видам радикалов и перекисей [78, 82]. В настоящее время выпускается значительное количество препаратов, обладающих антиоксидантными свойствами: кудесан, синергин, аевит, элькар, кардикон и др. Включение их в комплекс терапии помогает повысить эффективность лечебно-реабилитационных и профилактических программ на всех этапах медицинской помощи [78, 116]. В то же время нерегулируемое увеличение тканевого содержания веществ с выраженными антиокислительными свойствами в определенных условиях может привести к активизации побочных реакций с образованием токсических продуктов, прооксидантов и даже АФК [77]. Поэтому целесообразно создание и изучение новых видов лекарственных препаратов, способных оказывать мягкое регулирующее воздействие на антиоксидантное звено стресс-лимитирующей системы, стимулируя эндогенные механизмы антирадикальной защиты.

При универсальности описанных механизмов, некоторые проявления различных видов стресса могут иметь свои специфические особенности, а результаты, полученные независимыми авторами, - иметь противоречивый характер. Например, есть данные, что при иммобилизационном стрессе в крови крыс Ви-стар уровень МДА повышался, активность СОД и восстановленного глутатиона снижалась, а изменения уровня каталазы не достигали достоверных значений [59]. Холодовой стресс в крови крыс увеличивал содержание продуктов ПОЛ (МДА, диеновые конъюгаты, гидроперекиси) на фоне снижения компонентов АОС (ка-

талаза, церулоплазмин, витамин Е) [57]. В то же время пятиминутная иммобилизация вела к достоверному понижению уровня МДА в плазме крови крыс, а также повышению уровней СОД и каталазы на фоне снижения концентрации глутатион-редуктазы, но не влияла достоверно на уровень ОАА и активность церулоплазми-на [120]. Показано, что иммобилизационный стресс способствует развитию гипо-тиреоидного состояния путем уменьшения концентрации Т3 и Т4 у крыс [136], снижения уровней ТТГ [44], в то время как классическим является их стрессорное повышение [65] и т.д.

Таким образом, в настоящее время имеются достаточно обширные данные литературы о патофизиологических механизмах развития стрессорной реакции организма с участием стресс-реализующих и стресс-лимитирующих систем на различных уровнях организации организма. Данное обстоятельство позволяет проводить целенаправленные обоснованные исследования по поиску наиболее оптимальных и эффективных путей коррекции негативных последствий стрессор-ного воздействия.

1.2 ПЕЧЕНЬ КАК ОРГАН-МИШЕНЬ ПРИ СТРЕСС-РЕАКЦИЯХ

Печень является жизненно важным органом с многообразными функциями, участвующим в поддержании гомеостаза в организме. В ней осуществляется синтез всех альбуминов и некоторых глобулинов крови, почти всех факторов свертывания крови и транспортных белков. Она является центральным органом метаболизма углеводов, липидов, лекарственных препаратов, служит депо витаминов, выполняет экскреторную, детоксикационную и барьерную функции [65, 105].

Доказано, что патология печени способна оказывать системное негативное воздействие на весь организм, вызывая нарушения иммунологической толерантности и иммунодефициты, заболевания сердечно-сосудистой системы (например, атеросклероз), опорно-двигательного аппарата (такие как остеодистрофия, остеомаляция) и других органов и систем [208, 231].

Исследования показали, что центральный нейробиологический механизм нарушений функции печени и селезенки тесно взаимосвязан с гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой осью, осью «мозг-кишечник», огромным количеством центральных нейротропных факторов, нейротрансмиттеров, нейропептидов и гормонов и их рецепторов, включая многие области мозга, такие как гипоталамус, гиппокамп, кора, миндалины и т.д. [148].

Оксидативный стресс является неспецифическим механизмом, включающимся при различных воздействиях на печень [83, 105, 191, 206, 217, 241].

Так, экспериментально вызванный путем лигирования желчных протоков холестаз у крыс вызывает системную активацию свободнорадикального окисления [191]. Многие гепатотоксичные вещества реализуют свое деструктивное воздействие на печень прежде всего через активацию свободнорадикального окисления. Примером может являться алкоголь, вызывающий также повреждение мито-хондриальной ДНК, накопление липидов в клетках [206].

Высокая чувствительность печени к стрессорным воздействиям проявляется даже в таких неочевидных ситуациях, как изменение гомеостаза организма при проведении хирургических вмешательств. Так, срединная лапоротомия ведет к

увеличению уровня МДА на 40%, тогда как ни в почках, ни в поджелудочной железе или сыворотке крови данный показатель не меняется [124].

Действие кортикостерона в печени, сердце и мозге вызывает значительное снижение показателей антиоксидантной защиты (каталазы, СОД, глутатион-трансферазы, глутатион-редуктазы и др.) при повышении концентрации продуктов ПОЛ и карбонилирования белков. Показано, что окислительный стресс является основным патологическим механизмом в дезадаптации к хроническому стрессу, а гормоны стресса (в частности, кортикостерон) играют причинную роль в возникновении окислительных процессов, вызываемых адаптивным ответом. Это может иметь большое значение для фармакологической коррекции антиокси-дантных механизмов как перспективной стратегии защиты организма от окислительного повреждения при различных психиатрических и непсихических заболеваниях, вызванных физическим или психологическим стрессом [241].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Белых Андрей Евгеньевич, 2017 год

•р Л

VI

©

° ф < л $ ¥ 9

л _ л в в в

#

£ * *

еда

• . , р.-

д.

щ — V7 л *

Л ■

$

в 1Г

V ,

<4 9

^ Г ^

Нм^ 90 #

, Ьщ9

19 Ф Л

• ф в ^ /;• ®

» ГИд *

1

I

•3

ш У

о

ф

о'

7>.

с*=

9 0

л

• -

я, в

о

в

Рисунок 19 - Морфология печени у крыс при остром иммобилизационном стрессе (гиалиново-капельная и гидропическая дистрофия гепатоцитов более выражена в центральных отделах долек (б), чем перипортально (а)) и при остром иммобилизационном стрессе на фоне введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг (в - гистологическая структура ткани сохранена, нередки двухъядерные гепатоциты). Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение а-в - х200.

Острый иммобилизационный стресс вызывал снижение на 27% (р<0,01) индекса массы двухъядерных клеток, что указывает на нарастание текущей интенсивности репаративных процессов гепатоцитов за счет расходования двухъядер-ных резервов. Уменьшение средней площади среза гепатоцита на 25% (р<0,001) у стрессированных животных не имеет самостоятельного значения в морфологической оценке ткани печени, так как оно не сопровождалось одновременным уменьшением масс-митотического индекса (рисунки 20, 21). Изменения последнего показателя наряду с функциональным кариоклеточным индексом были недостоверными.

Дисперсионный анализ при сравнении внутри всех исследуемых групп показал наличие достоверных различий между всеми исследуемыми показателями (р<0,01-0,001) за исключением масс-митотического индекса (р>0,05).

ДСИП оказывал значительное влияние на вышеуказанные стресс-индуцированные сдвиги в виде увеличения сниженных под действием стресса показателей. Так, введение пептида дозе 40 мкг/кг вело к существенному повышению паренхиматозной плотности на 21% (р<0,01), функциональной клеточной массы - на 60% (р<0,001), ядерной массы - на 65% (р<0,001), индекса массы двухъядерных клеток - на 63% (р<0,01) по сравнению с контрольными животными. При увеличении дозы ДСИП до 120 мкг/кг все отмеченные эффекты проявлялись еще более выраженно: паренхиматозная плотность возрастала на 29% (р<0,001), функциональная клеточная масса - на 97% (р<0,01), ядерная масса - на 105% (р<0,001) и индекс массы двухъядерных клеток - на 88% (р<0,001). При гистологическом исследовании печени у стрессированных животных, получавших ДСИП в дозах 40 и 120 мкг/кг, гистоархитектоника ткани не нарушена, дистрофические изменения в гепатоцитах не обнаруживались, нередко определялись двухъядерные гепатоциты (рисунок 19 - в).

%

120 100 80 60 40 20 0 -20 -40

Контроль

ДСИП, 40 мкг/кг

ДСИП, 120 мкг/кг

ДСИП, 360 мкг/кг

ИФКМ □ ЯМ ИИМДК 0ММИ

Рисунок 20 - Морфометрические показатели печени у животных различных групп в условиях острого иммобилиза-ционного стресса.

Примечание — условные обозначения достоверности различий: * - р<0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 - р<0,05-0,001 по сравнению с интактной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.

%

40 30 20 10 0 -10 -20 -30

Контроль

-йй-й-■-Й-Й-Й" ■-й-й-й' ■-Й-Й-Й^ ■-й-й-й" ■-й-й-й'

ДСИП, 40 мкг/кг

ДСИП, 120 мкг/кг

ДСИП, 360 мкг/кг

1 р

* ^

ИПП □ ФККИ ИСПСГ ИОМП

Рисунок 21 - Морфометрические показатели печени у животных различных групп в условиях острого иммобилиза-ционного стресса.

Примечание — условные обозначения достоверности различий: * - р<0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 - р<0,05-0,001 по сравнению с интактной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.

Дальнейшее повышение вводимой дозы пептида до 360 мкг/кг также сопровождалось сходными с предыдущими дозами сдвигами, однако их величина была самой наименьшей среди всех подопытных групп животных: паренхиматозная плотность и функциональная клеточная масса повышались на 15% (р<0,001), ядерная масса - на 16% (р<0,05), индекс массы двухъядерных клеток - на 31% (р<0,05).

Данные результаты свидетельствуют об увеличении паренхиматозно-стромального соотношения (повышении функционального объема паренхимы), уменьшении полнокровия, застойных явлений и холестаза, снижении дегенеративных и деструктивных процессов в печеночной ткани, а также ограничении расходования двухъядерных резервов. Кроме того, в дозах 40 и 120 мкг/кг отмечалась тенденция к активации пролиферативных процессов, нарастанию интенсивности функционирования ткани печени и накапливанию ее потенциальных ре-паративных резервов.

Также в дозах 40 и 120 мкг/кг наблюдалось достоверное увеличение функционального кариоклеточного индекса, являющегося маркером интенсификации процессов и увеличения репаративного резерва, соответственно на 3% (р<0,01) и 4% (р<0,001).

Противоположные по направленности эффекты ДСИП были отмечены в дозах 120 и 360 мкг/кг в отношении средней площади среза гепатоцита. После введения пептида в дозе 120 мкг/кг средняя площадь среза гепатоцита уменьшалась на 14% (р<0,05), однако данный факт не может быть использован для оценки восстановительных процессов печени в силу отсутствия одновременного повышения масс-митотического индекса. В случае введения пептида в дозе 360 мкг/кг средняя площадь среза гепатоцита, напротив, увеличивалась на 14% (р<0,05), что, с учетом отмеченного ранее увеличения индекса массы двухъядерных клеток в данной группе животных, может свидетельствовать об увеличении глубины репа-ративных процессов.

Следует отметить, что острый иммобилизационный стресс вызывал достоверное уменьшение относительной массы печени на 6% (р<0,05). При этом обра-

щает внимание, что введение ДСИП в дозах 40 и 120 мкг/кг усиливало снижение данного показателя соответственно на 30% (р<0,0001) и 27% (р<0,0001) (таблица 11, рисунок 21). Дисперсионный анализ также выявил наличие достоверных изменений в исследуемых показателях относительной массы печени.

Как видно из таблицы 12, хронический иммобилизационный стресс оказывал менее выраженное влияние на исследованные морфометрические показатели в печени. Однако и в данном случае, как при остром стрессорном воздействии, отмечалось достоверное уменьшение паренхиматозной плотности на 19% (р<0,0001), индекса массы двухъядерных клеток - на 19% (р<0,05), а также средней площади среза гепатоцита - на 36% (р<0,0001) (рисунки 22, 23). Данные результаты свидетельствует об уменьшении паренхиматозно-стромального соотношения за счет расширения кровеносных сосудов и печеночных капилляров, а также нарастании текущей интенсивности репаративных процессов за счет расходования двухъядерных резервов.

Таблица 12 - Влияние ДСИП на морфологические показатели печени при хроническом иммобилизационном стрессе (M±m)

^Х^Группа Показатель Интактные животные Действие стресса

Контроль Введение ДСИП в дозе:

40 мкг/кг 120 мкг/кг 360 мкг/кг

1111 0,61±0,01 0,49±0,011 0,55±0,02* 0,54±0,02* 0,53±0,02*

ФКМ 106,9±5,7 110,9±7,6 159,6±14,5* 144,9±11,0* 122,1±9,2

ЯМ 118,3±6,6 123,3±8,2 180,5±15,8* 164,5±12,2* 137,7±9,9

ИМДК 0,21±0,02 0,17±0,011 0,23±0,01* 0,23±0,02* 0,22±0,02*

ММИ 0,010±0,001 0,008±0,001 0,008±0,001 0,009±0,001 0,007±0,002

ФККИ 1,11±0,01 1,11±0,01 1,13±0,01* 1,14±0,01 1,13±0,01

СПСГ 354,2±10,1 225,3±13,91 195,8±9,3* 202,3±5,3 236,0±10,7

ОМП 38,9±1,0 27,0±1,11 27,9±1,6 25,5±0,5 26,0±0,9

Примечание — условные обозначения достоверности различий: * - р<0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 - р<0,05-0,001 по сравнению с интактной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.

%

50 40 30 20 10 0 -10 -20 -30

Контроль

ДСИП, 40 мкг/кг

ДСИП, 120 мкг/кг

ДСИП, 360 мкг/кг

■ ФКМ □ ЯМ ИИМДК 0ММИ

Рисунок 22 - Морфометрические показатели печени у животных различных групп в условиях хронического иммоби-лизационного стресса.

Примечание — условные обозначения достоверности различий: * - р<0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 - р<0,05-0,001 по сравнению с интактной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.

%

20 10 0 -10 -20 -30 -40

Контроль

1

ДСИП, 40 мкг/кг

ДСИП, 120 мкг/кг

■"■ ■"■ ■"■

ДСИП, 360 мкг/кг

ИПП □ ФККИ ИСПСГ 0ОМП

Рисунок 23 - Морфометрические показатели печени у животных различных групп в условиях хронического иммоби-лизационного стресса.

Примечание — условные обозначения достоверности различий: * - р<0,05-0,001 по сравнению с контрольной группой крыс, подвергавшихся стрессу; 1 - р<0,05-0,001 по сравнению с интактной группой крыс, не подвергавшихся стрессу.

*

Гистологически, в отличие от животных с острым иммобилизационным стрессом, в ткани печени развивалась центролобулярная гиалиново-капельная дистрофия гепатоцитов, местами обнаруживались мелкоочаговые коагуляцион-ные некрозы с лимфогистиоцитарной инфильтрацией, а в перипортальных отделах долек в гепатоцитах выявлялась зернистая дистрофия (рисунок 24 - а-в).

Пептид во всех использованных дозах повышал показатели паренхиматозной плотности и индекса массы двухъядерных клеток: в дозе 40 мкг/кг соответственно на 11% (р<0,05) и 39% (р<0,01), в дозе 120 мкг/кг - на 9% (р<0,05) и 39% (р<0,01), в дозе 360 мкг/кг - на 8% (р<0,05) и 32% (р<0,05). Характер изменения данных показателей указывает на увеличение паренхиматозно-стромального соотношения (расширение «полезного» объема паренхимы), а также уменьшение текущей интенсивности репаративных процессов за счет снижения расходования двухъядерных резервов.

Наряду с этим, после введения пептида в дозах 40 и 120 мкг/кг отмечалось увеличение функциональной клеточной массы, являющейся маркером преобладания пролиферативных процессов, соответственно на 44% (р<0,01) и 31% (р<0,05), а также повышение ядерной массы, характеризующей общую тенденцию развития процесса в сторону нарастания интенсивности функционирования ткани печени, соответственно на 46% (р<0,01) и 33% (р<0,05).

Кроме того, в дозе 40 мкг/кг введение пептида вызывало небольшое увеличение функционального кариоклеточного индекса как показателя интенсификации процессов и увеличения репаративного резерва на 2%. Также при этом отмечалось достоверное снижение средней площади среза гепатоцита на 13%, однако в данном случае подобное изменение не может быть использовано в качестве критерия оценки восстановительных процессов печени в силу отсутствия одновременного увеличения масс-митотического индекса.

Рисунок 24 - Морфология печени у крыс при хроническом иммобилизационном стрессе (центролобулярная гиалиново-капельная дистрофия гепатоцитов (а), мелкие коагуля-ционные некрозы с очаговой лимфогистиоцитарной инфильтрацией (б), перипортальная зернистая дистрофия гепатоцитов (в)) и при хроническом иммобилизационном стрессе на фоне введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг (г - зернистая дистрофия гепатоцитов в центре дольки, нередки двухъядерные гепатоциты). Окраска гематоксилин-эозином. Увеличение а-г - х200.

На гистологических препаратах печени у стрессированных животных, получавших ДСИП в дозах 40 и 120 мкг/кг, структурные изменения в ткани печени не обнаруживались, в центролобулярных отделах долек гепатоциты были в состоянии зернистой дистрофии, что указывает на их высокую функциональную активность, нередко встречались двухъядерные гепатоциты (рисунок 22 - г).

Хронический иммобилизационный стресс, как и острый, вызывал уменьшение относительной массы печени на 31% (р<0,0001) (таблица 12, рисунок 24). ДСИП не оказывал достоверно значимых изменений относительной массы печени. Дисперсионный анализ не выявил достоверных различий при сравнении между группами стрессированных крыс по данному показателю.

Таким образом, при использовании ДСИП в условиях острого и хронического иммобилизационного стресса у крыс установлены гепатопротекторные эффекты в виде увеличения «полезного» объема паренхимы и глубины ее репара-тивного резерва, нивелирования застойных процессов, нарастания интенсивности функционирования ткани печени взамен дегенеративных и деструктивных процессов. Данные эффекты проявляются во всех исследованных дозах ДСИП при наибольшей выраженности при остром стрессорном воздействии.

3.3 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния

печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях различных видов стресса

Известно, что одна из конечных целей научного исследования, в том числе и медико-биологического, состоит в нахождении связей (зависимостей) между изучаемыми переменными. Один из важных методологических аспектов заключается в том, что не существует иного способа представления знания, кроме как в терминах зависимостей между количествами или качествами, выраженными какими-либо переменными. Исследование корреляций по существу и состоит в измерении таких зависимостей непосредственным образом [48].

С целью выявления эффектов ДСИП с использованием различных моделей стресса в отдельных группах исследованных показателей (в сыворотке крови, го-могенате печени и при ее морфометрии) нами были использованы адекватные в данном случае методы вариационной статистики и факторного анализа. При этом для выявления взаимосвязей между всеми исследованными показателями в совокупности полученных данных и определения их направленности и силы применяют многомерный статистический анализ. С учетом количества вариант и характера их распределения в статистической выборке нами был выполнен корреляционный анализ с помощью коэффициента ранговой корреляции Спирмена.

3.3.1 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях острого эмоционально-болевого стресса

Корреляционные взаимосвязи между исследуемыми показателями функционального состояния печени и ее морфологическими изменениями в условиях острого эмоционально-болевого стресса представлены на рисунках 25-28 и в таблицах 1-4 приложения А.

Как видно из рисунка 25, в условиях острого эмоционально-болевого стресса наблюдались достоверно значимые взаимосвязи между многими исследуемыми показателями. Так, между уровнями АлАТ в сыворотке крови и СОД в гомогенате печени была обнаружена сильная отрицательная связь (г8 = -0,82).

Рисунок 25 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у контрольных животных в условиях острого эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения: непрерывная линия - положительная (прямая) корреляция; пунктирная линия - отрицательная (обратная) корреляция; широкая линия - связь сильная (г>0,70); тонкая линия - связь средняя (умеренная) (0,30<г8<0,70).

Концентрация общего белка в сыворотке крови имела сильную обратную взаимосвязь (г8 = -0,75) с относительной массой печени, которая, в свою очередь, сильно прямо коррелировала с уровнем МДА в гомогенате печени (г8 = 0,71).

Корреляционные взаимосвязи между биохимическими и морфологическими показателями были отмечены только для каталазы и ОАА: активность каталазы имела среднюю отрицательную взаимосвязь с ядерной массой (г8 = -0,67), а ОАА - сильную отрицательную со средней площадью среза гепатоцита (г8 = -0,85).

При сравнении морфометрических показателей количество достоверных взаимосвязей было существенно большим. Так, паренхиматозная плотность имела сильную обратную связь с масс-митотическим индексом (г8 = -0,73), а также сильные прямые связи с ядерной массой (г8 = 0,88), с индексом массы двухъядерных клеток (г8 = 0,77) и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,77), а также с функциональной клеточной массой (г8 = 0,87). Последний показатель сильно и положительно коррелировал с ядерной массой (г8 = 0,98), индексом массы двухъядерных клеток (г8 = 0,73) и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,73). При этом масс-митотический индекс был связан с функциональной клеточной массой умеренно отрицательно (г8 = -0,68). Ядерная масса одинаково сильно (г8 = 0,77) прямо коррелировала как с индексом массы двухъядерных клеток, так и с функциональным кариоклеточным индексом. Кроме того, сильная прямая связь отмечена между индексом массы двухъядерных клеток и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 1,00).

При сравнении остальных исследуемых показателей достоверных взаимосвязей обнаружено не было.

При введении ДСИП в дозе 40 мкг/кг стрессированным животным отмеченные выше взаимосвязи претерпевали значительные изменения (рисунок 26). Так, уровень СОД одинаково умеренно положительно (г8 = 0,63) коррелировал с концентрацией сывороточной АсАТ и содержанием МДА в гомогенате печени.

Рисунок 26 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг в условиях острого эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Необходимо отметить, что из изученных биохимических показателей только АлАТ коррелировала с морфометрическими характеристиками ткани печени. При этом отмечены сильные положительные связи с величинами индекса массы двухъядерных клеток (г8 = 0,77) и функционального кариоклеточного индекса.

В сравнении с биохимическими показателями морфологические индексы оценки состояния печеночной ткани имели большее количество взаимосвязей, од-

нако их количество было меньше, чем в группе контрольных стрессированных животных. Так, паренхиматозная плотность сильно положительно связана с функциональной клеточной (г., = 0,84) и ядерной (г., = 0,85) массами, которые также сильно положительно коррелировали между собой (^ = 0,99). Два данных показателя имели средние прямые взаимосвязи с индексом массы двухъядерных клеток (г, = 0,61 для функциональной клеточной массы и г, = 0,62 - для ядерной массы). Кроме того, индекс массы двухъядерных клеток был связан сильной положительной корреляцией с функциональным кариоклеточным индексом (г, = 0,75). Других достоверных корреляционных взаимосвязей между исследуемыми показателями отмечено не было.

При увеличении дозы ДСИП до 120 мкг/кг количество достоверных связей также увеличивалось (рисунок 27). Так, уровень СОД с умеренной силой положительно коррелировал с величиной относительной массы печени (г, = 0,57), которая, в свою очередь, со средней силой отрицательно коррелировала с уровнем ка-талазы (^ = -0,56). Кроме того, активность данного антиоксидантного фермента была связана умеренной отрицательной связью с уровнем АсАТ (г, = -0,58).

Морфометрические показатели в данной подопытной группе, как и в предыдущей, имели большее количество достоверных корреляционных взаимосвязей между собой, чем в контрольной группе стрессированных животных. При этом только один из них - средняя площадь среза гепатоцита - коррелировал с исследуемыми биохимическими маркерами: умеренная отрицательная связь была отмечена с уровнем общего белка (^ = -0,60), а сильная положительная - с величиной АлАТ (^ = 0,73). При этом взаимосвязи с другими гистологическими показателями данный индекс не имел. АлАТ также имела сильную обратную связь с уровнем относительной массы печени (^ = 0,71).

Паренхиматозная плотность имела сильные положительные связи одинаковой величины (^ = 0,71) с функциональной клеточной и ядерной массами, которые были связаны между собой сильно положительно (^ = 0,96). С функциональной клеточной и ядерной массами были прямо связаны также индекс массы двухъядерных клеток (умеренно в первом случае (^ = 0,64) и сильно - во втором

(rs = 0,76)) и функциональный кариоклеточный индекс (умеренно в обоих случаях - rs = 0,55 и 0,67 соответственно). Данные индексы (массы двухъядерных клеток и функциональный кариоклеточный) также сильно положительно коррелировали между собой (rs = 0,96). Между остальными исследуемыми показателями достоверных корреляционных взаимосвязей установлено не было.

Рисунок 27 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг в условиях острого эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

При введении ДСИП стрессированным животным в дозе 360 мкг/кг было отмечено наличие еще большего количества достоверных корреляционных взаимосвязей (рисунок 28). Так, уровень АлАТ сыворотки крови имел сильную прямую связь с концентрацией общего белка (г8 = 0,88). Введение пептида в указанной дозе также активировало наибольшее в сравнении с предыдущими подопытными группами количество взаимосвязей между биохимическими и морфологическими показателями. В частности, концентрация АсАТ умеренно отрицательно коррелировала с масс-митотическим индексом (г8 = -0,63). Уровень СОД был умеренно положительно связан с показателями паренхиматозной плотности (г8 = 0,68), индекса массы двухъядерных гепатоцитов (г8 = 0,66) и средней площади среза гепатоцита (г8 = 0,62), а также с концентрацией МДА (г8 = 0,62). Уровень МДА при этом коррелировал с гистологическими показателями и имел средние умеренные связи с функциональной клеточной (г8 = -0,68) и ядерной (г8 = -0,66) массами и сильную прямую - со средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,76).

Индекс массы двухъядерных клеток имел умеренную положительную связь с функциональной клеточной массой (г8 = 0,62) и сильную положительную - с ядерной массой (г8 = 0,66), которые, в свою очередь, сильно положительно коррелировали друг с другом (г8 = 0,99). Кроме того, данный индекс также сильно положительно коррелировал с паренхиматозной плотностью (г8 = 0,72). Прямые взаимосвязи с рядом морфометрических показателей были отмечены и для функционального кариоклеточного индекса, который умеренно коррелировал с ядерной массой (г8 = 0,62) и паренхиматозной плотностью (г8 = 0,60) и сильно - с индексом массы двухъядерных клеток (г8 = 0,94). Среди остальных исследованных показателей достоверных корреляционных связей найдено не было.

Рисунок 28 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 360 мкг/кг в условиях острого эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

3.3.2 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях хронического эмоционально-болевого стресса

Корреляционные взаимосвязи между исследуемыми показателями функционального состояния печени и ее морфологическими изменениями в условиях хронического эмоционально-болевого стресса представлены на рисунках 29-32 и в таблицах 5-8 приложения А.

Как видно из рисунка 29, в условиях хронического эмоционально-болевого стресса уровни сывороточной АлАТ и МДА в гомогенате печени имели между собой среднюю отрицательную корреляционную связь (^ = -0,63). Между остальными биохимическими показателями не было отмечено ни одной достоверной корреляции.

При этом в данной группе наблюдалось достаточно большое количество взаимосвязей между морфометрическими и биохимическими показателями. Так, активность АсАТ умеренно прямо коррелировала с функциональной клеточной (^ = 0,68) и ядерной (г, = 0,68) массами, а также сильно прямо - с индексом массы двухъядерных гепатоцитов (г., = 0,84) и с функциональным кариоклеточным индексом (^ = 0,92). Значения активности АлАТ сильно положительно коррелировали с показателями средней площади среза гепатоцита (г, = 0,80). С данным критерием среднюю прямую связь имела и СОД (^ = 0,56), коррелирующая, кроме того, аналогичным образом и с масс-митотическим индексом (г. = 0,54). С этим индексом был связан и уровень МДА, однако их взаимоотношения имели умеренную отрицательную силу (г. = -0,58).

Среди морфологических индексов корреляционные взаимосвязи наиболее часто наблюдались со значениями паренхиматозной плотности, которая имела сильную положительную связь с функциональной клеточной (г. = 0,78) и ядерной (г, = 0,81) массами и умеренную положительную связь одинаковой выраженности (^ = 0,56) - со средней площадью среза гепатоцита и с индексом массы двухъ-

ядерных клеток. Последний показатель также имел сильную положительную связь с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,95) и средние прямые связи с ядерной (г8 = 0,57) и функциональной клеточной (г8 = 0,54) массами. Данные морфометрические индексы сильно положительно коррелировали и между собой (г8 = 0,99). Среди остальных исследуемых показателей достоверных корреляционных взаимосвязей отмечено не было.

Рисунок 29 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у контрольных животных в условиях хронического эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

После введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг животным в условиях хронического эмоционально-болевого стресса общее количество корреляционных связей несколько уменьшилось (рисунок 30). Однако при этом увеличивалось число взаимосвязей внутри подгруппы биохимических показателей. Так, сывороточные уровни АлАТ сильно и положительно коррелировали с величинами общего белка (г8 = 0,86) и АсАТ (г8 = 0,73), которая, в свою очередь, имела умеренную обратную связь (г8 = -0,64) со значениями СОД в гомогенате печени. С активностью СОД сильным положительно (г8 = 0,82) коррелировала и активность каталазы. В данной группе также были отмечены связи между биохимическими и морфологическими показателями: индекс массы двухъядерных гепатоцитов сильно и положительно коррелировал с каталазой (г8 = 0,76) и СОД (г8 = 0,74), тогда как последняя была средне и прямо связана с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,67).

Паренхиматозная плотность имела сильную положительную связь с функциональной клеточной массой (г8 = 0,80) и умеренную положительную - с ядерной (г8 = 0,67). Кроме того, данные показатели были сильно и прямо взаимосвязаны между собой (г8 = 0,93). Сильные положительные корреляции были обнаружены между средней площадью среза гепатоцита и масс-митотическим индексом (г8 = 0,73), а также между индексом массы двухъядерных клеток и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,90). Достоверных корреляционных взаимосвязей между остальными исследуемыми показателями обнаружено не было.

Рисунок 30 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг в условиях хронического эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

После введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг стрессированным животным среди биохимических показателей была обнаружена только одна достоверная взаимосвязь: уровень каталазы гомогената печени умеренно положительно коррелировал с содержанием МДА (г, = 0,65). При этом отмечено полное отсутствие достоверных взаимосвязей между морфометрическими и биохимическими показателями (рисунок 31).

Рисунок 31 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг в условиях хронического эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Паренхиматозная плотность печени имела положительные связи с исследуемыми показателями: среднюю - с функциональным кариоклеточным индексом (^ = 0,54), сильные - с функциональной клеточной (^ = 0,81) и ядерной (^ = 0,83) массами, а также с индексом массы двухъядерных клеток (г. = 0,73). Данный индекс, в свою очередь, положительно сильно коррелировал с функциональным ка-риоклеточным индексом (г. = 0,92), положительно умеренно - с масс-

митотическим индексом (г8 = 0,56), средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,56), функциональной клеточной (г8 = 0,62) и ядерной (г8 = 0,66) массами. Последние два показателя имели сильную прямую взаимосвязь между собой (г8 = 0,99). Средняя площадь среза гепатоцита прямо сильно коррелировала с масс-митотическим индексом (г8 = 0,75) и умеренно - с относительной массой печени (г8 = 0,55). Достоверных корреляционных взаимосвязей между исследуемыми признаками в данной группе животных найдено не было.

Увеличение вводимой дозы ДСИП до 360 мкг/кг приводило к увеличению в сравнении с предыдущей подопытной группой количества взаимосвязей между биохимическими показателями (рисунок 32). Так, концентрация общего белка сыворотки крови умеренно отрицательно коррелировала с уровнем СОД гомогената печени (г8 = -0,61). Величина АсАТ имела средние обратные корреляции со значениями общего белка в сыворотке крови (г8 = -0,62) и ОАА в гомогенате печени (г8 = -0,59).

При анализе взаимосвязей между биохимическими и морфометрическими показателями необходимо отметить сильную положительную связь АсАТ с паренхиматозной плотностью (г8 = 0,71) и средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,85), отрицательную умеренную - с индексом массы двухъядерных клеток (г8 = -0,68), отрицательную сильную - с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = -0,77). Кроме того, умеренная отрицательная связь была между уровнем АлАТ и величиной функциональной клеточной массы (г8 = -0,62).

Среди морфологических индексов сильную прямую связь между собой, как и в предыдущих группах, имели функциональная клеточная и ядерная массы (г8 = 0,93). Достаточно большое количество взаимосвязей было обнаружено у показателя средней площади среза гепатоцита, который умеренно положительно коррелировал с масс-митотическим индексом (г8 = 0,62) и сильно положительно - с паренхиматозной площадью (г8 = 0,81), а также умеренно отрицательно - с индексом массы двухъядерных клеток (г8 = -0,64) и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = -0,68). Последние два индекса имели сильную прямую взаимосвязь

друг с другом (г. = 0,98). Достоверных корреляционных взаимосвязей между остальными исследуемыми показателями выявлено не было.

Рисунок 32 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 360 мкг/кг в условиях хронического эмоционально-болевого стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

3.3.3 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях острого иммобилизационного стресса

Корреляционные взаимосвязи между исследуемыми показателями функционального состояния печени и ее морфологическими изменениями в условиях острого иммобилизационного стресса представлены на рисунках 33-36 и в таблицах 9-12 приложения А.

Как видно из рисунка 33, при остром иммобилизационном стрессе наблюдалось значительное количество достоверных корреляционных взаимосвязей между исследованными показателями. При этом необходимо отметить, что их количество было больше, чем при остром или хроническом эмоционально-болевом стрессе. Так, в сыворотке крови уровень общего белка умеренно положительно коррелировал с активностью АлАТ (г8 = 0,61) и АсАТ (г8 = 0,68), которые прямо сильно коррелировали между собой (г8 = 0,81). Содержание МДА в гомогенате печени имело сильную обратную связь с уровнями АлАТ сыворотки крови (г8 = -0,74) и ОАА печеночной ткани (г8 = -0,95), а также сильную положительную - с активностью СОД (г8 = 0,81). Данный антиоксидантный фермент также сильно отрицательно коррелировал с ОАА (г8 = -0,90).

Биохимические показатели помимо связей между собой имели их также и с морфометрическими индексами. Так, концентрация общего белка сильно коррелировала с паренхиматозной плотностью (г8 = -0,78), индексом массы двухъядер-ных гепатоцитов (г8 = -0,78), масс-митотическим индексом (г8 = -0,88), средней площадью среза гепатоцита (г8 = -0,70) и умеренно - с функциональным карио-клеточным индексом (г8 = -0,68). При этом все перечисленные связи носили отрицательный характер. Сильные обратные связи были установлены для активности АлАТ с масс-митотическим индексом (г8 = -0,82), индексом массы двухъядерных гепатоцитов (г8 = -0,80) и функциональным кариоклеточным индексом (г8 = -0,87).

Кроме того, последние два индекса отрицательно коррелировали с активностью АсАТ при средней величине (соответственно г. = -0,65 и г. = -0,68).

Рисунок 33 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у контрольных животных в условиях острого иммоби-лизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Индекс массы двухъядерных гепатоцитов имел сильные прямые связи с масс-митотическим индексом (г, = 0,78), а также с функциональной клеточной (г. = 0,75) и ядерной (г. = 0,75) массами, между которыми отмечалась полная положительная связь (^ = 1,00). Функциональный кариоклеточный индекс также

сильно положительно коррелировал с функциональной клеточной (г8 = 0,78) и ядерной (г8 = 0,78) массами, масс-митотическим индексом (г8 = 0,82) и индексом массы двухъядерных гепатоцитов (г8 = 0,93). Сильная прямая связь наблюдалась и между паренхиматозной плотностью и средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,81).

После введения ДСИП стрессированным животным в дозе 40 мкг/кг общее количество достоверных корреляционных связей уменьшалось (рисунок 34). Так, внутри подгруппы биохимических показателей было отмечено только две корреляции: сильная прямая между активностью АлАТ и АсАТ (г8 = 0,71) в сыворотке крови и умеренная обратная между ОАА и МДА (г8 = -0,68) в гомогенате печени.

При этом в данной подгруппе наблюдалось значительное количество связей между биохимическими и морфологическими показателями. АсАТ имела одинаково сильные положительные связи с масс-митотическим индексом и со средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,85). ОАА сильно отрицательно коррелировала с индексом массы двухъядерных гепатоцитов (г8 = -0,97), функциональной клеточной и ядерной массами (г8 = -0,87 для обоих индексов). Последние два показателя имели одинаковые по силе обратные связи с СОД (г8 = 0,85). Сильная положительная связь (г8 = 0,86) отмечена для значений МДА и функционального ка-риоклеточного индекса. Кроме того, величина относительной массы печени прямо сильно коррелировала с уровнями общего белка (г8 = 0,86) и ОАА (г8 = 0,81).

Паренхиматозная плотность с одинаковой силой положительно (г8 = 0,87) коррелировала с ядерной и функциональной клеточной массами, которые имели между собой полную положительную связь (г8 = 1,00). Подобный характер связи был отмечен между средней площадью среза гепатоцита и масс-митотическим индексом (г8 = 1,00). Индекс массы двухъядерных гепатоцитов имел сильные отрицательные взаимосвязи с величиной относительной массы печени (г8 = -0,84).

Рисунок 34 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг в условиях острого иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

При увеличении дозы ДСИП до 120 мкг/кг отмечалось уменьшение общего количества достоверных взаимосвязей по сравнению с предыдущей группой (рисунок 35). Так, уровень МДА в гомогенате печени имел сильную отрицательную связь с активностью АлАТ в сыворотке крови (г8 = 0,94), а концентрация каталазы печеночной ткани сильно положительно коррелировала со значениями АсАТ (г8 =

0,75). При этом уровни указанных аминотрансфераз сильно прямо коррелировали между собой (г8 = 0,75).

Рисунок 35 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг в условиях острого иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Наличие взаимосвязей биохимических показателей с морфологическими было отмечено в основном для антиоксидантных ферментов. Так, концентрация каталазы в гомогенате печени сильно положительно коррелировала со значениями

паренхиматозной плотности (г8 = 0,86), функциональной клеточной массы (г8 = 0,79) и ядерной массы (г8 = 0,82). Уровень СОД имел сильную прямую связь с масс-митотическим индексом (г8 = 0,96). Из используемых биохимических показателей АсАТ сильно отрицательно коррелировала с относительной массой печени (г8 = -0,93).

Морфометрические показатели между собой имели только четыре значимые связи, которые были сильными и положительными: паренхиматозная плотность коррелировала с функциональной клеточной (г8 = 0,93) и ядерной (г8 = 0,96) массами, имевшими сильную прямую связь между собой (г8 = 0,96). Функциональный кариоклеточный индекс был связан с индексом массы двухъядерных гепатоцитов (г8 = 0,82). Остальные исследуемые показатели не имели при сравнении между собой достоверных корреляционных взаимосвязей.

Введение наибольшей использованной в работе дозы ДСИП 360 мкг/кг в условиях острого иммобилизационного стресса сопровождалось наибольшим количеством достоверных взаимосвязей исследованных показателей (рисунок 36). Так, АлАТ и АсАТ имели сильную положительную связь (г8 = 0,82). Уровень общего белка сыворотки крови сильно и обратно коррелировал с активностью ката-лазы в гомогенате печени (г8 = -0,72), умеренно и прямо - со значениями ОАА (г8 = 0,62), которые, в свою очередь, имели сильную отрицательную связь с активностью каталазы (г8 = -0,88). Содержание МДА в гомогенате печени отрицательно коррелировало с общим белком сыворотки крови (связь носила умеренный характер - г8 = -0,60) и с ОАА печеночной ткани (связь носила сильный характер - г8 = -0,97), а также имел сильную положительную связь с каталазой (г8 = 0,92).

Все исследуемые биохимические показатели, за исключением общего белка и СОД, имели корреляционные взаимосвязи с используемыми морфометрически-ми индексами. Так, АсАТ сильно обратно коррелировал с функциональной клеточной (г8 = -0,78) и ядерной (г8 = -0,70) массами. Данные показатели также имели отрицательные связи с АлАТ: умеренную в случае с функциональной клеточной массой (г8 = -0,65) и сильную - с ядерной массой (г8 = -0,72). ОАА имела одинаковые умеренные прямые корреляции с обоими из указанных морфометрических

показателей (г8 = 0,66), а также сильно отрицательно коррелировала со средней площадью среза гепатоцита (г8 = -0,70). Данные связи имели обратный характер в случае с МДА, который умеренно отрицательно коррелировал с ядерной (г8 = -0,61) и функциональной клеточной (г8 = -0,60) массами, но сильно и положительно - со средней площадью среза гепатоцита (г8 = 0,75). С указанным индексом также умеренно и прямо коррелировала активность каталазы (г8 = 0,64).

Рисунок 36 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 360 мкг/кг в условиях острого иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Умеренные положительные связи паренхиматозной плотности обнаруживались с масс-митотическим индексом (г8 = 0,62) и функциональной клеточной массой (г8 = 0,65). Последняя имела сильную положительную связь с ядерной массой (г8 = 0,96). Средняя площадь среза гепатоцита сильно и прямо коррелировала с масс-митотическим индексом (г8 = 0,75), но сильно и обратно - с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = -0,71). Данный показатель имел сильную положительную связь с индексом массы двухъядерных клеток (г8 = 0,93).

3.3.4 Корреляционная взаимосвязь показателей функционального состояния печени и ее морфологических изменений после введения дельта-сон индуцирующего пептида в условиях хронического иммобилизационного стресса

Корреляционные взаимосвязи между исследуемыми показателями функционального состояния печени и ее морфологическими изменениями в условиях хронического иммобилизационного стресса представлены на рисунках 37-40 и в таблицах 17-20 приложения А.

Как видно из рисунка 37, в условиях хронического иммобилизационного стресса наблюдалось меньшее, чем при острой иммобилизации, количество корреляционных взаимосвязей между исследуемыми величинами, при этом было меньше связей и в подгруппе биохимических показателей. Так, как и при остром стрессе, было отмечено наличие сильной прямой связи между уровнями амино-трансфераз (г8 = 0,89). Концентрация каталазы в гомогенате печени сильно положительно коррелировала со значениями общего белка в плазме крови (г8 = 0,81), а внутрипеченочные уровни МДА и ОАА имели сильную отрицательную связь (г8 = -0,79).

Ряд биохимических показателей имел корреляционные взаимосвязи с гистологическими маркерами состояния ткани печени. Так, содержание МДА в го-могенате печени сильно и положительно коррелировало с величиной паренхиматозной плотности (г8 = 0,79), функциональной клеточной (г8 = 0,89) и ядерной мас-

сами (г8 = 0,82). С паренхиматозной плотностью прямую положительную связь имела и активность СОД (г8 = 0,75). Сильные отрицательные связи были выявлены между уровнями общего белка и индекса массы двухъядерных клеток (г8 = -0,75), а также между значениями каталазы и относительной массы печени

(г8 = -0,86).

Рисунок 37 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у контрольных животных в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Наибольшее количество морфологических показателей (паренхиматозная плотность, функциональная клеточная масса, ядерная масса, индекс массы двухъ-ядерных гепатоцитов, относительная масса печени) коррелировало с величиной ОАА, причем все связи имели сильный отрицательный характер (г8 = -0,83, г8 = -0,90, г8 = -0,83, г8 = -0,81 и г8 = -0,83 соответственно).

При хроническом стрессе, в отличие от острого, паренхиматозная плотность сильно прямо коррелировала с относительной массой печени (г8 = 0,71), а также с функциональной клеточной (г8 = 0,86) и ядерной (г8 = 0,81) массами, которые, как и ранее, имели сильную положительную связь между собой (г8 = 0,95). Индекс массы двухъядерных гепатоцитов также имел сильные и прямые корреляционные связи с ядерной массой (г8 = 0,86) и функциональным кариоклеточным индексом

(г8 = 0,82).

Достоверных корреляционных взаимосвязей между остальными исследуемыми показателями выявлено не было.

Введение ДСИП в дозе 40 мкг/кг на фоне хронического иммобилизационно-го стресса вызывало уменьшение общего количества корреляционных взаимосвязей (рисунок 38). Так, при анализе биохимических показателей имели место только сильные положительные связи между двумя парами признаков: МДА и катала-зой в гомогенате печени (г8 = 0,73), а также АсАТ и АлАТ в сыворотке крови (г8 = 0,88).

Уровни аминотрансфераз коррелировали и с рядом морфометрических показателей. АлАТ имела сильные отрицательные связи с паренхиматозной плотностью (г8 = -0,87) и функциональной клеточной массой (г8 = -0,78), умеренные обратные - с ядерной массой (г8 = -0,65), сильные положительные - с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,70). АсАТ так же, но с меньшей выраженностью, сильно обратно коррелировала с паренхиматозной плотностью (г8 = -0,83) и функциональной клеточной массой (г8 = -0,75), умеренно прямо - с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = 0,68). Концентрация общего белка сыворотки крови и активность СОД гомогената печени имели сильные отрицательные

взаимосвязи с величиной относительной массы печени (г8 = -0,70 и г8 = -0,73 соответственно).

Рисунок 38 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Паренхиматозная плотность сильно прямо коррелировала с функциональной клеточной (г8 = 0,88) и ядерной (г8 = 0,83) массами, которые, как и в предыдущих подопытных группах животных, были сильно положительно связаны между собой (г8 = 0,97). Сильная прямая корреляция была обнаружена между средней

площадью среза гепатоцита и масс-митотическим индексом (г8 = 0,75). Функциональный кариоклеточный индекс имел умеренные положительные связи одинаковой силы (г8 = 0,68) с индексом массы двухъядерных клеток и относительной массой печени. Среди других исследуемых показателей достоверных корреляционных взаимосвязей выявлено не было.

Увеличение вводимой дозы ДСИП до 120 мкг/кг способствовало еще большему уменьшению общего количества достоверных корреляционных взаимосвязей, однако число корреляций внутри подгруппы биохимических показателей при этом увеличилось (рисунок 39). Так, уровень общего белка сыворотки крови сильно отрицательно коррелировал с концентрацией каталазы в печеночной ткани (г8 = -0,72). Содержание МДА в гомогенате печени имело сильную отрицательную связь с активностью АлАТ (г8 = -0,71), умеренную обратную - с ОАА (г8 = -0,67) и сильную положительную - с активностью каталазы (г8 = 0,72).

С морфометрическими показателями оценки функции печени была связана лишь активность СОД, которая умеренно отрицательно коррелировала с функциональным кариоклеточным индексом (г8 = -0,68).

Как и в большинстве случаев ранее, паренхиматозная плотность имела одинаково сильные положительные связи с функциональной клеточной и ядерной массами (г8 = 0,90), которые имели полную связь между собой (г8 = 1,00). Все вышеуказанные показатели показателя прямо коррелировали с относительной массой печени: паренхиматозная плотность сильно (г8 = 0,88), функционально клеточная (г8 = 0,65) и ядерная массы - умеренно (г8 = 0,65). Также была отмечена сильная положительная корреляция между функциональным кариоклеточным индексом и индексом массы двухъядерных клеток (г8 = 0,85). Остальные исследованные показатели не имели между собой достоверных корреляционных взаимосвязей.

Рисунок 39 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Введение пептида в наибольшей использованной дозе 360 мкг/кг вызывало увеличение общего количества взаимосвязей (рисунок 40). При биохимическом исследовании достоверные корреляции были отмечены только для показателей, определяемых в гомогенате печени. Так, ОАА имела сильную отрицательную связь с каталазой (г8 = -0,76), которая, в свою очередь, сильно положительно кор-

релировала с концентрацией МДА (г8 = 0,90), которая имела также сильную прямую связь с активностью СОД (г8 = 0,74).

Рисунок 40 - Корреляционная взаимосвязь показателей морфофункцио-нального состояния печени у животных после введения ДСИП в дозе 360 мкг/кг в условиях хронического иммобилизационного стресса.

Примечание — условные обозначения представлены на рисунке 25.

Сравнивая биохимические и морфологические показатели, можно отметить, что общий белок сильно отрицательно коррелировал с паренхиматозной плотностью (г8 = -0,90), а также с функциональной клеточной (г8 = -0,93) и ядерной (г8 = -0,86) массами. АсАТ и ядерная масса имели полную отрицательную связь

(г8 = -1,00). ОАА одинаково сильно положительно коррелировала (г8 = 0,85) с индексом массы двухъядерных клеток и функциональным кариоклеточным индексом. Сильные отрицательные связи были обнаружены при сравнении величины относительной массы печени с уровнями АлАТ (г8 = -0,81), МДА (г8 = -0,79) и ка-талазы (г8 = -0,75), активность которой имела также сильную обратную корреляцию с величиной средней площади среза гепатоцита (г8 = -0,82).

Величина паренхиматозной плотности сильно положительно коррелировала с функциональной клеточной (г8 = 0,88) и ядерной (г8 = 0,77) массами. Последние два индекса, как и в большинстве случаев ранее, имели сильные положительные связи между собой (г8 = 0,96). Сильная положительная связь подобной величины (г8 = 0,96) была установлена между индексом массы двухъядерных гепатоцитов и функциональным кариоклеточным индексом.

Таким образом, на основании результатов выполненного корреляционного анализа можно сделать следующие заключения. Прежде всего обращает внимание, что при различных условиях стрессорного воздействия, несмотря на существующие представления о неспецифичности и однотипности стрессорной реакции, имеется ряд отличительных особенностей в корреляционных взаимоотношениях исследованных показателей. Данное обстоятельство может являться следствием как различной силы и характера воздействия, так и различной его продолжительности. Введение ДСИП стрессированным крысам при всех использованных в работе моделях стресса оказывало выраженное влияние на количество значимых связей между исследованными показателями, их направленность и силу. При этом корреляционные зависимости были установлены как в отдельности внутри групп биохимических или морфометрических показателей, так и между этими данными в целой совокупности. В целом результаты корреляционного анализа во многих случаях явились подтверждением выявленных с помощью методов вариационной статистики стресс-лимитирующих и адаптогенных эффектов ДСИП в отношении печени, проявляющихся изменениями направленности и количества стресс-индуцированных связей, а также образованием новых.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выполненный в работе комплекс биохимических и морфологических методов исследования позволил установить важные патофизиологические эффекты влияния ДСИП на морфофункциональное состояние гепатоцитов при различных видах стрессорного воздействия. При выборе экспериментальных моделей стресса у крыс мы исходили из тех обстоятельств, что, согласно современным представлениям, отсутствует абсолютная стереотипность стрессорной реакции. При действии стрессоров на организм могут развиваться как специфические изменения, обусловленные качеством действующего фактора, так и неспецифические, общие при действии различных стрессоров и которые рассматриваются как проявления собственно стрессорной реакции [21, 65, 129]. Поэтому для изучения эффектов ДСИП в условиях стресса, обладающего выраженной полифункциональной биологической активностью и возможностью оказывать влияние на специфические и неспецифические компоненты воздействия на организм, представлялось целесообразным использование нескольких стрессорных моделей, отличающихся качеством, силой и продолжительностью.

Кроме того, с позиций патофизиологического подхода к проблеме стресса выделяют две качественно различные категории стрессоров: психогенные, вызывающие эмоционально-психические изменения, которые и являются источником стресс-реакций, и физические (средовые), воздействующие на ткани и органы непосредственно [129]. Учитывая анальгетические и анксиолитические свойства ДСИП, его способность оказывать влияние на эмоциогенные структуры мозга, нам представилось интересным изучение его влияния на состояние гепатоцитов при эмоционально-болевом стрессе, который реализуется преимущественно через рецепторный аппарат, не вызывая непосредственного повреждения органов и тканей. При этом эффекты пептида могли проявить свое модулирующее воздействие на самых ранних этапах взаимодействия стрессора с организмом. Несмотря на присутствие эмоционального компонента при иммобилизации, ее влияние на организм проявляется в значительной мере через прямое механическое воздействие

на органы и ткани и изменения гемодинамики, поэтому при данном виде стресса возможно в большей степени оценить периферические эффекты ДСИП.

Учитывая, что ответ организма на воздействие стрессоров сопровождается сменой нескольких качественно различающихся стадий (тревоги, резистентности и истощения), разделение стрессорных влияний на острые и хронические позволило наблюдать развитие изменений в ткани печени в динамике.

Необходимо отметить, что эксперименты выполнены на крысах-самцах Ви-стар, для которых характерна относительно низкая устойчивость к стрессорному воздействию по сравнению с другими, в частности, с линией Август [71, 100, 135].

Использованные в работе дозы пептида были выбраны на основании данных литературы, в которых наибольший эффект ДСИП наблюдался в дозе 100120 мкг/кг [23, 38, 77, 86, 87, 114, 168, 170]. Для более объемного представления о направленности и механизмах действия пептида мы расширили рамки исследования выяснением его активности в троекратно увеличенной и уменьшенной дозе (40 и 360 мкг/кг соответственно).

Для оценки повреждающего действия стрессора на гепатоциты нами определялась активность сывороточных аминотрансфераз. В частности, активность АлАТ является чувствительным и специфичным индикатором цитолитического синдрома и гепатоцеллюлярного повреждения (некроз и воспаление гепатоцитов, почти всегда сопровождающееся фиброгенезом) [85, 89, 239]. При этом уровень АсАТ имеет более сильную корреляционную связь с фиброзом печени, чем уровень АлАТ. Сочетанное определение активности АсАТ и АлАТ применяется для дифференциации патологии печени от повреждений мышц [18, 89].

Учитывая, что в печени происходит синтез всех альбуминов и некоторых глобулинов крови, почти всех факторов свертывания крови и транспортных белков, а также белков острой фазы [65, 93], для интегральной оценки ее функции нами определялась сывороточная концентрация общего белка.

В силу того, что одним из основных неспецифических механизмов повреждения гепатоцитов является активация СРО [105, 191, 206, 217, 240], нами были изучены показатели перекисного окисления и антиоксидантной защиты непосред-

ственно в гомогенате печени. При этом для комплексного представления о данных процессах на всех основных этапах их развития мы исследовали характеризующие их как начальные, так и конечные звенья.

Так, первой линией защиты от свободных радикалов являются ферменты СОД и каталаза, активность которых была измерена в нашей работе. СОД - индуцируемый фермент, т.е. синтез его увеличивается, если в клетках активируется перекисное окисление. Супероксидный анион, преобразующийся в дальнейшем под действием изоферментов СОД в перекись водорода, образуется обычно первым из активных форм кислорода при утечке электронов из дыхательной цепи. Следующим этапом метаболизма АФК является разложение пероксида водорода, контролируемое каталазой. Показано, что совместное применение СОД и катала-зы значительно эффективнее защищает клетки от окислительного стресса, чем назначение ферментов по отдельности [11, 69, 82].

Одним из общепринятых интегральных показателей оценки интенсивности процессов ПОЛ в сыворотке, моче или гомогенатах тканей является МДА [69, 82, 137]. Так, накопление эпитопов МДА играет ведущую роль в формировании воспаления в печени [197]. Изменения концентрации МДА коррелируют с содержанием остальных продуктов ПОЛ (гидроперекиси липидов, диеновые конъюгаты, шиффовы основания), образующихся в результате реакции СРО [78, 82, 108].

Известно, что система антиоксидантной защиты включает в себя множество ферментативных и неферментативных компонентов, поэтому в работе использовали ОАА как интегративный показатель оценки суммарного действия присутствующих в гомогенате печени ингибиторов пероксидации липидов [62, 121].

С целью верификации полученных биохимических результатов нами было исследовано морфологическое состояние гепатоцитов. Использованный в работе способ морфометрической оценки отличается малой субъективностью за счет определения ограниченного числа простых и достаточно однозначных показателей еще на стадии работы с гистологическими препаратами, а также способностью оценить с его помощью репаративные возможности печеночной ткани, а следовательно, спрогнозировать течение и исход патологических процессов [112].

Кроме того, полученные данные позволяют использовать широкий спектр методов статистической обработки, а сам способ включает строго определенные варианты трактовки изменения каждого из показателей. Наряду с этим, нами был вычислен индекс относительной массы печени, который также является критерием оценки эффектов стресса и пептида [34, 174].

Исходя из того, что, по мнению ряда авторов [52, 180], наибольшую информацию о степени адаптации популяции к экстремальным или просто изменившимся условиям несут корреляционные взаимосвязи между физиологическими параметрами, которые намного чувствительнее к адаптационному напряжению, чем абсолютные величины этим параметров, нами был выполнен корреляционный анализ.

Выполненный комплекс биохимических и морфологических исследований позволил провести комплексную оценку морфофункционального состояния гепа-тоцитов как в условиях воздействия стрессоров различной природы и продолжительности, так и оценить на данных экспериментальных моделях эффекты введения различных доз ДСИП.

Так, в условиях острого эмоционально-болевого стресса не было отмечено значимых сдвигов исследуемых показателей цитолиза, белоксинтетической функции печени, а также антиоксидантного потенциала гепатоцитов за исключением достоверного увеличения содержания МДА в гомогенате печени стрессированных животных в сравнении с показателями нестрессированных крыс. Характер полученных данных может являться следствием невысокой выраженности по силе и продолжительности (в течение 30 минут) стрессорного воздействия. Отмеченное при этом увеличение концентрации МДА может свидетельствовать о достаточно высокой чувствительности данного показателя к активации процессов ПОЛ на ранних их этапах [78]. Следствием активации ПОЛ в печени может являться морфологически выявленное развитие дегенеративных и деструктивных процессов в виде гиалиново-капельной и гидропической дистрофии гепатоцитов.

Отмеченные морфологические изменения в печени при остром стрессорном воздействии могли быть вызваны активацией автономной нервной системы [21],

что могло обусловить относительно быструю в сравнении с биохимическими сдвигами сосудистую реакцию в печени. Ее развитие проявилось в уменьшении паренхиматозно-стромального соотношения (снижение «полезного» объема паренхимы) за счет расширения кровеносных сосудов и печеночных капилляров, наличием застойных явлений, полнокровия и холестаза. Кроме того, острый эмоционально-болевой стресс вызывал увеличение текущей интенсивности функционирования печени при снижении глубины репаративных процессов, а также повышение пролиферативной активности печеночной ткани. Данное изменение может являться частью компенсаторной адаптационной реакции, развивающейся при эустрессе в случае воздействия раздражителя с небольшой силой и продолжительностью [7, 21].

Таким образом, при остром эмоционально-болевом воздействии наблюдались относительно небольшие изменения исследованных показателей, свидетельствующие о развитии как патологических, так и защитно-приспособительных реакций.

Введение пептида во всех используемых дозах сопровождалось снижением активности каталазы без достоверного изменения остальных показателей антиок-сидантной защиты. При этом концентрация МДА в гомогенате печени уменьшалась после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг до уровня нестрессированных крыс и не менялась в остальных дозах. При анализе возможных механизмов данных сдвигов необходимо отметить, что каталаза относится к ферментам, которые наиболее длительно сохраняют свою высокую активность, почти не требуют энергии активации, а скорость реакции этого энзима лимитируется лишь скоростью диффузии субстрата к активному центру [82]. В связи с этим уменьшение активности данного фермента может быть обусловлено отсутствием субстрата для его работы. Учитывая, что содержание остальных компонентов АОС не изменялось по сравнению с контролем, можно предположить, что в условиях введения ДСИП образующиеся в клетке АФК выполняют в данном случае не деструктивные, а адаптационные сигнальные и регуляторные функции [30, 82]. Подтверждением данного предположения может являться отсутствие при этом повышения

концентрации продуктов ПОЛ, которое могло бы иметь место в том случае, если бы активность системы антиоксидантной защиты не соответствовала интенсивности СРО. Однако, напротив, при введении пептида в дозе 120 мкг/кг отмечалось снижение содержания МДА.

При некоторых видах стресса также показано появление дисбаланса в соотношении уровней каталазы и СОД, с преобладанием последней, что может объяснить увеличение ПОЛ тканей, приводящее к их окислительному повреждению и способствующее изменениям в структуре и функции. Тем не менее авторы указывают, что незначительное повреждение тканевых структур, выполняющее роль клеточного стимула, необходимо для содействия адаптации [151, 237].

Указанные факты согласуются с появившимися в последнее время данными о не только повреждающей, но и регулирующей роли АФК. В организме человека ПОЛ имеет большое значение для обновления липидов клеточных мембран и регуляции их структурного гомеостаза. Так, существует гипотеза, согласно которой супероксидный анион прежде всего служит как мембранный модулятор, изменяющий физико-химические свойства фосфолипидного бислоя и тем самым облегчающий другим БАВ доступ к гидрофобной части мембраны, а также повышающий ее вязкость. В нефагоцитирующих клетках супероксидный анион и пероксид водорода играют преимущественно регуляторную, сигнальную роль, нежели ци-тотоксическую, активируя киназные механизмы передачи клеточного сигнала, важные для контроля пролиферации, апоптоза, ангиогенеза, тонуса воздухоносных путей и сосудов. АФК участвуют в контроле клеточной энергетики, микроциркуляции, экспрессии генов, активности внутриклеточных ферментов и нервной регуляции жизненно важных функций. Показано, что низкие и умеренные уровни АФК необходимы для нормальной работы клеток, но высокое их содержание способствует дисфункции. И только в определенных, как правило, патологических, ситуациях АФК становятся токсичными для клетки [82, 151, 166, 210].

Снижение концентрации МДА после введения ДСИП в дозе 120 мкг/кг за счет уменьшения АФК в данных условиях может вызывать уменьшение регулирующих, сигнальных и адаптогенных влияний, что нашло отражение в наимень-

шей коррекции стрессорных изменений исследуемых гистологических показателей печени в отличие от остальных доз. Неизменный по сравнению с стрессиро-ванными животными уровень МДА после введения пептида в дозах 40 и 360 мкг/кг может свидетельствовать о поддержании под действием ДСИП необходимого для адаптации уровня метаболизма. Это согласуется с мнением, что МДА может являться клеточным стимулом для развития адаптации [151].

Так, морфометрически адаптогенный эффект ДСИП в дозе 360 мкг/кг проявлялся уменьшением полнокровия, застойных явлений и холестаза, а также значительным ослаблением дегенеративных и деструктивных процессов в печени. Гистологически это отражалось в сохранении гистоархитектоники ткани печени, четкой балочной структуры, отсутствии расширения синусоид и изменения гепа-тоцитов в центролобулярных отделах, а также в слабовыраженной гиалиново -капельной дистрофии гепатоцитов в периферических отделах долек.

Адаптогенные эффекты при введении ДСИП в дозе 40 мкг/кг проявлялись синергичным со стрессом увеличением относительно кратковременной интенсивности функционирования гепатоцитов и снижением глубины репаративных резервов ткани печени по сравнению с контролем. Увеличение интенсивности функционирования в данных условиях согласуется с повышением под влиянием указанной дозы пептида уровня АсАТ, как следствие напряжения и ускорения процессов адаптации. Это подтверждается мнением ряда авторов о возможности адаптивного повышения АсАТ как маркера активации митохондрий, интенсификации конечных путей катаболизма, стимуляции трансмембранного переноса и контроля над ферментами цикла трикарбоновых кислот, т.к. известна ферменте-мия без цитолиза и объективных клинико-физиологических проявлений [43, 101, 102]. При этом совокупные изменения остальных показателей свидетельствуют об общем расширении объема репаративных резервов печени.

Необходимо отметить, что введение пептида во всех использованных дозах вызывало увеличение паренхиматозно-стромального соотношения (повышение функционального объема паренхимы печени) по сравнению с контрольными животными.

Таким образом, в условиях острого эмоционально-болевого воздействия в виде однократного непродолжительного раздражения попарно сгруппированных крыс током небольшой силы эффекты влияния ДСИП на морфофункциональное состояние гепатоцитов имели преимущественно адаптивный характер.

Повторные воздействия данного раздражителя на протяжении нескольких дней вызывали более выраженные изменения исследованных биохимических показателей. Так, у стрессированных контрольных животных по сравнению с не-стрессированными отмечалось достоверное повышение активности АлАТ и снижение концентрации общего белка, а также увеличение содержания продуктов ПОЛ в гомогенате печени на фоне снижения показателей антиоксидантной защиты (каталазы, СОД, ОАА). Данные изменения свидетельствуют об активации под действием стресса процессов СРО деструктивного характера, что проявилось снижением протеинсинтетической функции гепатоцитов и активацией их цитолиза. Уменьшение активности компонентов АОС в данном случае могло быть проявлением описанного для СОД и каталазы феномена истощения, наблюдаемого при активно текущих процессах утилизации АФК [224].

Активация ПОЛ сочеталась с развитием дегенеративных и деструктивных процессов в ткани печени, гистологически представленных выраженной гидропи-ческой и гиалиново-капельной дистрофии с некрозом отдельных клеток и нарушением балочной структуры ткани. При этом увеличение текущей (относительно кратковременной) интенсивности функционирования и снижение глубины репа-ративных резервов печени свидетельствуют о напряжении и истощении адаптационных механизмов. Кроме того, нельзя исключить и роль сосудистых реакций в формировании стресс-индуцированных изменений в печеночной ткани, о чем свидетельствует наличие полнокровия, застойных явлений и холестаза. Данный факт может быть косвенно подтвержден увеличением относительной массы печени, которое также является маркером оксидативного стресса и повреждения [176, 213]. Кроме того, увеличение относительной массы печени связывают с накоплением триглицеридов и холестерина за счет окислительного повреждения митохондрий в гепатоцитах и, как следствие, снижения митохондриального окисления

Таким образом, при использованной в работе модели хронического эмоционально-болевого стресса наблюдались выраженные изменения морфофункцио-нального состояния гепатоцитов, свидетельствующие об истощении в них адаптивных механизмов и развитии стресс-индуцированных изменений.

Характер влияния пептида на состояние гепатоцитов был достаточно неоднозначным и в высокой степени зависел от использованной дозы. Так, эффект ДСИП в дозе 40 мкг/кг можно рассматривать как гепатопротекторный. При этом наблюдалось увеличение активности каталазы и СОД на фоне снижения концентрации МДА, а также повышение концентрации общего белка, свидетельствующее о нормализации протеинсинтетической функции печени. При анализе данных результатов необходимо учитывать, что время вывода из эксперимента животных соответствует развитию стадии резистентности [32, 117], в которой эффекты ДСИП обрели стресс-лимитирующий характер.

В то же время при введении пептида в остальных дозах происходило изменение адаптационных стратегий. Так, несмотря на увеличение активности катала-зы и СОД под действием ДСИП, в дозах 120 и 360 мкг/кг наблюдалось еще большее увеличение концентрации МДА по сравнению с контролем. Кроме того, при введении пептида в дозе 120 мкг/кг наблюдалось снижение ОАА как показателя общей емкости АОС. Вероятно, в данном случае, как и при остром стрессе, образование АФК, являющихся причиной повышения ПОЛ, может служить регуля-торным и сигнальным функциям, необходимым для более быстрой и эффективной адаптации [82, 151, 166, 210]. Однако введение ДСИП в указанных дозах, как и в дозе 40 мкг/кг, вызывало достоверное увеличение содержания общего белка. Более того, в отличие от дозы 40 мкг/кг, ДСИП во всех остальных дозах вызывал достоверное уменьшение активности АлАТ, что свидетельствует о снижении ци-толитических процессов, индуцированных стрессом, и протекторных эффектах пептида.

Увеличение клеточного метаболизма и продукции АФК при введении ДСИП в дозе 120 мкг/кг морфометрически может отражаться в тенденции к нарастанию интенсивности функционирования ткани печени и активации восстановительных пролиферативных процессов, а также накоплению ее репаративных резервов. При этом гистологически отмечалось отсутствие стресс-индуцированных явлений гидропической и гиалиново-капельной дистрофии, структура ткани печени сохранена, балочная структура и границы синусоид четкая, в средних отделах долек гепатоциты в состоянии так называемой «зернистой дистрофии», являющейся признаком высокой функциональной активности [90].

Столь неоднозначные эффекты пептида в отношении биохимических показателей состояния гепатоцитов могут являться следствием полифункциональности его биологических эффектов и активации в различных дозах различных патофизиологических механизмов, участвующих в процессах адаптации и ограничении повреждающего действия стресса. Подобный характер эффектов является достаточно характерным для регуляторных пептидов [9, 128]. Важно также отметить, что для исследованных биохимических показателей характерна высокая лабильность вследствие того обстоятельства, что на них может оказывать влияние значительное количество различных факторов, в том числе и тех, которые значительно изменяются как под действием стресса, так и под влиянием полифункционального ДСИП.

При этом независимо от использованной дозы ДСИП вызывал сходные изменения морфометрических показателей: уменьшение вызванных стрессорным воздействием дегенеративных и деструктивных процессов, снижение застойных явлений в печеночной ткани, снижение относительной массы печени, что свидетельствует о его адаптогенной и стресс-лимитирующей активности [174, 213].

Таким образом, в условиях хронического эмоционально-болевого стресса ДСИП проявлял выраженные адаптогенные эффекты, которые носили стресс-лимитирующий и гепатопротекторный характер в дозе 40 мкг/кг.

В целом при анализе данных, полученных в условиях острого и хронического эмоционально-болевого стресса, следует отметить, что длительность стрессор-

Различия в адаптационных стратегиях, развивающихся под действием ДСИП в условиях многократного эмоционально-болевого воздействия, могут быть объяснены возможной мягкостью использованной модели стресса, балансирующей между эустрессом и дистрессом в традиционномом понимании. Поэтому в одном случае пептид способствовал ограничению стрессорных сдвигов, лимитируя их дальнейшее развитие, а в другом - напротив, действовал иногда синер-гично, ускоряя адаптацию за счет определеного перенапряжения ряда внутриклеточных механизмов (так называемая «аллостатическая нагрузка») [60, 80].

Наряду с эмоционально-болевым в работе использовали и стрессорное воздействие в виде иммобилизации животных, которую проводили в положении на спине. Следует отметить, что данное положение тела является неестественным для крыс, у которых имеется закрепленный на уровне мозжечка рефлекс переворачивания, поддерживающий в норме естественное положение «спиной вверх» [103, 113]. Данное обстоятельство вызывает значительное психоэмоциональное напряжение и развитие стресса. Кроме того, длительная иммобилизации в подобном положении способна вызывать в организме специфические изменения нарушения кровообращения в виде застойных явлений, в том числе и в печени [28].

Острый иммобилизационный стресс по сравнению с острым эмоционально-болевым оказывал более выраженное влияние на исследованные биохимические показатели. При этом в сыворотке повышалась активность АсАТ и АлАТ на фоне снижения концентрации общего белка, в гомогенате печени стрессированных крыс увеличивалась концентрация продуктов ПОЛ и активность каталазы и СОД. Данные изменения отражают активацию СРО, способствующего повреждению гепатоцитов и ответной активации компонентов антиоксидантной защиты. Более значительное по сравнению с острым эмоционально-болевым стрессом количество значимых изменений может свидетельствовать о том, что интенсивность данного вида стрессорного воздействия выше. При этом данные морфологическо-

го исследования при данной модели стресса существенно не отличались от предыдущей. Так, в печени проявлялись дегенеративные и деструктивные процессы с развитием гиалиново-капельной и гидропической дистрофии гепатоцитов и нарушением балочного строения ткани. Отмеченное нарастание текущей интенсивности репаративных процессов гепатоцитов за счет расходования двухъядер-ных резервов, а также уменьшение относительной массы печени могут являться отражением развивающихся адаптационных процессов [174, 213]. Однако, как и при остром эмоционально-болевом стрессе, в данном случае необходимо учитывать, что уменьшение «полезного» объема паренхимы могло происходить за счет сосудистой реакции, застойных явлений и холестаза, что согласуется с данными литературы [117].

Таким образом, однократная иммобилизация вела к развитию стресс-индуцированных изменений морфофункционального состояния гепатоцитов, свидетельствующих о напряжении адаптивных механизмов и развитии деструктивных процессов.

ДСИП в дозе 40 мкг/кг усиливал вызванные стрессом изменения процессов СРО, повышая активность каталазы, СОД и уровень МДА на фоне значимого снижения ОАА. В остальных дозах эффекты пептида в большинстве случаев не достигали достоверных различий с контрольными значениями. Однонаправленные с острым иммобилизационным воздействием эффекты пептида проявились в дозах 40 и 120 мкг/кг в виде снижения относительной массы печени как адаптационной реакции [174, 213].

Установленный однонаправленный характер изменений исследованных показателей под действием острой иммобилизации и при введении ДСИП может быть объяснен тем обстоятельством, что оба воздействия на данном этапе развития стрессовой реакции активируют срочные механизмы адаптации [80]. Данное предположение в определенной степени подтверждается результатами морфомет-рического исследования. Так, введение ДСИП во всех дозах вызывало снижение дегенеративных и деструктивных процессов в печеночной ткани, ограничение расходования двухъядерных резервов, уменьшение полнокровия и застойных яв-

лений, повышение функционального объема паренхимы. При гистологическом исследовании печени в отличие от группы контроля у стрессированных животных, получавших ДСИП, гистоархитектоника ткани не нарушена, дистрофические изменения в гепатоцитах не обнаруживались, нередко определялись двухъядер-ные гепатоциты. Указанные изменения в наибольшей степени проявлялись в дозах 40 и 120 мкг/кг. В дозе 360 мкг/кг данные эффекты были наименее выраженными, однако при этом наблюдалось увеличение глубины репаративных процессов.

Таким образом, влияние пептида на морфофункциональное состояние гепа-тоцитов при остром иммобилизационном стрессе проявлялось в активации про-лиферативных процессов, нарастании интенсивности функционирования, накапливании потенциальных репаративных резервов ткани печени и имело адаптоген-ную направленность при наибольшей выраженности в дозах 40 и 120 мкг/кг.

Хроническая иммобилизация крыс также сопровождалась сдвигами исследованных биохимических показателей, однако их выраженность была несколько ниже, чем при остром воздействии. Так, у стрессированных контрольных животных по сравнению с интактными в сыворотке крови отмечалось повышение активности АсАТ и достоверное снижение концентрации общего белка, в гомогена-те печени - увеличение концентрации продуктов ПОЛ на фоне снижения ОАА, повышения активности каталазы и СОД.

Преобладание достоверных изменений АсАТ над АлАТ обычно свидетельствует о развитии фиброза печени [18, 89]. В нашей работе подобный характер изменения данного показателя, наиболее вероятно, может отражать повреждения в мышечной ткани [73], в том числе скелетной мускулатуры вследствие длительной иммобилизации и определенного сдавления. При этом цитолиз не всегда является причиной повышения АсАТ, которое может быть «функционально оптимальным», отражая активацию адаптационных процессов за счет активации митохондрий, усиления катаболизма и стимуляции трансмембранного переноса [43, 101, 102]. О развитии адаптации в условиях хронического иммобилизационного

стресса может свидетельствовать и наблюдавшееся уменьшение относительной массы печени [174, 213].

Состояние адаптационных механизмов в условиях хронического иммобили-зационного стресса отразилось и в виде определенных морфологических изменений. Так, по сравнению с острой, хроническая иммобилизация оказывала менее выраженное влияние не только на биохимические, но и на морфометрические показатели печени. Однако и в данном случае отмечалось уменьшение паренхима-тозно-стромального соотношения за счет расширения кровеносных сосудов и печеночных капилляров, а также нарастание текущей интенсивности репаративных процессов за счет расходования двухъядерных резервов, что согласуется с данными литературы [117]. В отличие от животных с острым иммобилизационным стрессом, в ткани печени развивалась гиалиново-капельная и зернистая дистрофия гепатоцитов, местами обнаруживались мелкоочаговые коагуляционные некрозы с лимфогистиоцитарной инфильтрацией.

Эффекты ДСИП в условиях хронического иммобилизационного стресса в ряде случаев имели направленность, противоположную таковой при острой иммобилизации. Наиболее выраженно данное различие наблюдалось после введения пептида в дозе 40 мкг/кг в виде коррекции стресс-индуцированной активации ПОЛ. При этом снижалась активность каталазы и СОД на фоне уменьшения концентрации МДА и увеличения ОАА. Увеличение дозы до 120 мкг/кг ДСИП вызывало ослабление его эффектов, а в дозе 360 мкг/кг отмечалось их полное нивелирование. Наблюдавшееся при этом снижение уровня каталазы и СОД может являться как следствием их расходования на фоне активно текущих процессов утилизации АФК [224], так и отсутствием субстратов для их активности [82]. Характер данных эффектов позволяет предполагать их стресс-лимитирующую направленность.

Подтверждением данного предположения может являться и увеличение концентрации общего белка и снижение активности АсАТ после введении в дозе 120 мкг/кг. Содержание общего белка не изменялось после введения ДСИП в дозе 40 мкг/кг, однако при этом по данным морфометрического исследования в печени

наблюдалась интенсификация репаративных процессов, при которых ресурсы ге-патоцитов используются для восстановления. Также при этом пептид в данных дозах в целом повышал интенсивность функционирования печени и пролифера-тивных процессов.

Стресс-лимитирующие эффекты ДСИП в дозах 40 и 120 мкг/кг проявлялись и в почти полном нивелировании в печени стресс-индуцированных структурных изменений. При этом гепатоциты были в состоянии зернистой дистрофии, что указывает на их высокую функциональную активность [90], нередко встречались двухъядерные гепатоциты. Кроме того, введение пептида во всех использованных дозах вызывало расширение «полезного» объема паренхимы, а также уменьшение текущей интенсивности репаративных процессов за счет снижения расходования двухъядерных резервов.

Таким образом, пептид в условиях хронической иммобилизации проявлял адаптогенные стресс-лимитирующие эффекты, выраженность которых была максимальной в наименьших использованных дозах 40 и 120 мкг/кг и уменьшалась при возрастании величины вводимой дозы до 360 мкг/кг.

В целом при анализе данных, полученных в условиях острого и хронического иммобилизационного стресса, наиболее выраженные изменения морфофунк-ционального состояния гепатоцитов наблюдались при однократном, а не многократном стрессорном воздействии. Полученные нами результаты согласуются с данными литературы о том, что при иммобилизационном стрессе максимальное повреждение структуры печени развивается в конце стадии тревоги, а в стадию резистентности паренхима восстанавливается в 3 раза активнее стромы [117].

Эффекты пептида, установленные с использованием методов вариационной статистики, во многом нашли свое подтверждение в результатах корреляционного анализа полученных данных. Во всех экспериментальных сериях с использованием различных видов стрессорного воздействия введение ДСИП стрессированным животным оказывало значительное дозозависимое влияние на корреляционные взаимоотношения исследованных показателей. При этом разрывались многие из сформировавшихся в условиях стресса взаимосвязи, появлялись новые или про-

исходило изменение направленности выявленных ранее, а также уменьшалось их общее количество. Сопоставление установленных корреляционных взаимоотношений между различными исследованными показателями позволяет полагать, что выявленные эффекты ДСИП имели адаптогенный и стресс-лимитирующий характер.

При этом характер корреляционных взаимосвязей имеет существенные различия в зависимости от вида и продолжительности стрессорного воздействия. В условиях иммобилизационного стресса отмечалось наличие большего количества достоверных взаимосвязей по сравнению с эмоционально-болевым. Значительная часть значимых корреляционных связей при всех видах стресса обнаружена внутри группы морфометрических показателей. Хронические стрессорные воздействия по сравнению с острыми активируют большее количество взаимосвязей между группами биохимических и морфологических показателей.

При анализе полученных данных с позиций системного анализа и корреляционной адаптометрии необходимо отметить, что корреляции между физиологическими параметрами в ходе адаптации выше, чем в адаптированном состоянии [31, 52, 180]. Таким образом, большее количество корреляционных взаимосвязей, выявленных в условиях стресса, свидетельствует о напряжении адаптационных механизмов. Напротив, уменьшение количества корреляций при введении ДСИП указывает на более успешную под его влиянием адаптацию, что и было показано в ходе проведенных исследований. Кроме того, данный факт может свидетельствовать об увеличении экономичности функционирования организма [19], а также о переходе стресс-реакции под действием ДСИП на более эффективные и экономичные адаптационные стратегии [38, 114].

Представляется очевидным, что различия в характере корреляционных взаимодействий между исследуемыми признаками при разных видах стрессорного воздействия могут быть обусловлены особенностями его природы и воздействия на организм. В частности, наиболее выраженные корреляционные взаимосвязи среди использованных моделей наблюдались при иммобилизации животных. Данные результаты могут быть обусловлены относительно большей продолжи-

тельностью стрессорного воздействия, а также наличием при этом не только психогенного фактора вследствие ограничения подвижности и неестественного положения на спине, но и в результате механического воздействия и гемодинамиче-ских нарушений [28, 103, 113]. Увеличение же корреляций при острой иммобилизации по сравнению с хронической согласуется с полученными результатами об интенсификации различных процессов в ткани печени и напряжении адаптационных механизмов.

Важно отметить, что полученные в работе результаты в значительной степени согласуются с современной концепцией об аллостазе - процессе, посредством которого организм достигает поддержания необходимых для выживания параметров внутренней среды через изменение своего состояния («оставаться стабильным, изменяясь») [60, 198, 221, 227]. Представления об аллостазе расширяют и дополняют существующее понятие гомеостаза как динамического постоянства внутренней среды организма, для поддержания которого организм стремится восстановить нарушенный баланс. Под аллостазом понимается более сложная форма адаптации, которая запускается в результате повреждения или изменения параметров функционирования организма, т.е. при нарушении сложившегося гомеостаза, а его признаком является сверхактивация регуляторных систем [60, 199, 220].

Концепция аллостаза предполагает наличие множества аллостатических состояний, которые сменяются достижением равновесия на ином уровне, при иных параметрах внутренней среды, за счет формирования новых систем нейроэндо-кринной регуляции, освоения новых форм поведения и новых стратегий адаптации. При этом переход из одного состояния в другое возможен при наличии определенного внешнего воздействия или мобилизации внутренних резервов организма [60]. Возможность развития различных стратегий ответа организма на стресс на различных его моделях под действием различных доз ДСИП показана и в нашем исследовании. При этом за приспособление к неблагоприятным психосоциальным или физическим ситуациям организм вынужден заплатить определенную цену, называемую «аллостатической нагрузкой» [60, 80, 198, 219].

В то же время полученные данные не противоречат классической концепции стресса, имеющего двойственные последствия: способность привести как к истощению адаптационных резервов и развитию заболевания (дистресс), так и к повышению устойчивости организма к неблагоприятным воздействиям (эустресс). При этом в описании общего адаптационного синдрома Г. Селье подчеркивал адаптивный характер реакции на стресс. Только после длительного воздействия стресса может возникнуть сбой адаптации и организм достигнет фазы истощения с неблагоприятными последствиями [60, 222]. Результаты исследований, в которые стресс оказывал не только негативное влияние, но и повышал адаптационные возможности человека [156, 157, 200, 229], позволили разработать методику «активационной терапии» [7].

Достаточно разнообразные по выраженности и патофизиологическому значению эффекты ДСИП, полученные в нашем исследовании, согласуются с результатами других работ. Так, показана возможность развития под действием пептида различных адаптационных стратегий, в том числе и синергичных со стрессом [29, 38, 114]. Также примером амбивалентного характера его эффектов, проявляющихся в зависимости от той или иной ситуации, может служить влияние на НАДН-дегидрогеназу, являющуюся важным источником АФК в организме. При этом показано, что пептид может как увеличивать, так и снижать (обеспечивая при этом достаточную выработку АТФ и нормальное функционирование) активность данного фермента в зависимости от потребности клеток [13].

Выявленная нами более значительная выраженность эффектов ДСИП при хронических стрессорных воздействиях по сравнению с острыми согласуется с данными о том, что влияние пептида наиболее ярко проявляется при длительных и выраженных экстремальных ситуациях и патологических состояниях организма [67].

В основе установленных в работе адаптогенных и стресс-лимитирующих эффектов ДСИП могут находиться его влияние на патофизиологические механизмы развития и ограничения стрессорной реакции как на центральном, так и на периферическом уровнях. Так, к центральным механизмам реализации эффектов

пептида могут относиться его способность модулировать функционирование различных отделов гипоталамо-гипофизарно-надпочечниковой системы [16, 115, 147, 163, 188, 209, 218], возможность активировать тормозные процессы в структурах мозга как за счет структурной модуляции [86, 140], так и путем влияния на медиаторный баланс [12, 14, 15, 16, 27, 165], способность оказывать влияние на активность эмоциогенных зон гипоталамуса [33, 179], анальгетическое [115, 218, 240] и анксиолитическое действие [27, 67].

Среди возможных периферических механизмов действия ДСИП можно рассматривать его способность изменять экспрессию генов (с-Боб [175, 233], Sodl и Орх1 [170]), физико-химические свойства клеточных мембран [26, 91, 229] и уровень белкового синтеза в клетках [49, 77, 201, 104, 110]. Однако данных о прямом действии пептида на гепатоциты нами в литературе не обнаружено.

При этом следует отметить, что к настоящему времени не установлены специфические рецепторы ДСИП и кодирующие их гены [8, 55, 193]. Однако, показано, что ДСИП способен влиять на другие рецепторные системы, в частности, снижать чувствительность «быстрых» ионотропных ММОА-рецепторов к глута-мату [232, 234].

На основании вышеизложенного можно заключить, что характер описанных в литературе биологических эффектов ДСИП позволяет ему оказывать существенное влияние на развитие патофизиологических реакций в условиях стрес-сорного воздействия на организм, в том числе и на морфофункциональное состояние гепатоцитов. С учетом того обстоятельства, что ДСИП является пептидом эндогенного происхождения, полученные в работе данные являются очередным свидетельством его важной роли в функционировании механизмов адаптации и ограничения стрессорной реакции.

Таким образом, установленное влияние ДСИП на морфофункциональное состояние гепатоцитов в условиях различных видов стресса может способствовать разработке патогенетически обоснованных методов коррекции стресс-индуцированных патологических сдвигов в печени с учетом адаптивной и стресс-лимитирующей направленности эффектов пептида. Важным результатом работы

являются установленные изменения исследованных показателей у стрессирован-ных животных, не получавших пептид. Их выраженность и направленность свидетельствуют о том, что печень активно вовлекается в развитие адаптивных реакций организма на их начальных этапах даже при достаточно непродолжительном воздействии раздражителя, в частности, на примере полученных данных в условиях острого стресса. Кроме того, результаты корреляционного анализа показали характер взаимосвязей между структурными и функциональными изменениями в печени и гепатоцитах, что способствует пониманию механизмов развивающегося при этом комплекса реакций на стрессорное воздействие. Полученные результаты также позволяют полагать, что эндогенный ДСИП может иметь важное значение в функционировании механизмов достижения адаптивного результата и ограничения повреждающего воздействия стрессоров как на печень, так и на организм в целом.

1. ДСИП в условиях стресса оказывает существенное влияние на морфо-функциональное состояние гепатоцитов за счет изменения активности свобод-норадикального окисления, механизмов антиоксидантной защиты, протеинсин-тетической функции, цитолитических и репаративно-восстановительных процессов. Выраженность и направленность данных эффектов пептида зависят от величины используемой дозы, вида стрессорного воздействия и его продолжительности.

2. В условиях острого и хронического эмоционально-болевого стресса пропорционально длительности стрессорного воздействия развиваются изме -нения морфофункционального состояния гепатоцитов, свидетельствующие о напряжении и истощении адаптивных механизмов. Влияние ДСИП на состояние гепатоцитов во всех дозах было преимущественно адаптогенным, а в дозе 40 мкг/кг при хроническом стрессе имело и стресс-лимитирующий характер.

3. При остром и хроническом иммобилизационном стрессе изменения морфофункционального состояния гепатоцитов в виде напряжения адаптивных механизмов и развитии деструктивных и дегенеративных процессов были более выраженными при остром стрессорном воздействии. ДСИП в дозах 40 и 120 мкг/кг оказывал адаптогенное влияние на состояние гепатоцитов независимо от продолжительности стрессорного воздействия. При хронической иммобилизации эффекты пептида также имели и стресс-лимитирующий характер.

4. Характер корреляционных связей между исследованными показателями зависит от вида и продолжительности стрессорного воздействия и отражает напряжение адаптационных механизмов в гепатоцитах. В сравнении с эмоционально-болевым стрессом при иммобилизации имело место большее количество достоверных взаимосвязей. При этом биохимические и морфологические показатели чаще коррелировали между собой при хронических стрессорных воздействиях.

5. Введение ДСИП стрессированным животным оказывало выраженное дозозависимое влияние на корреляционные взаимоотношения исследованных показателей за счет изменения их направленности, количества и образования новых связей. Характер установленных изменений может являться отражением адапто-генных и стресс-лимитирующих эффектов пептида.

6. Печень активно вовлекается в развитие стрессорной реакции с самых начальных ее этапов даже при достаточно непродолжительном воздействии раздражителя за счет комплекса морфофункциональных изменений.

1. При разработке патогенетически обоснованных методов коррекции стресс-индуцированных изменений в организме и клиническом применении фар -макологических препаратов на основе ДСИП в условиях стресса учитывать влияние пептида на морфофункциональное состояние гепатоцитов.

2. Использовать в учебном процессе медицинских и биологических вузов данные о воздействии ДСИП в условиях стресса на патогенетические механизмы перекисного окисления и антиоксидантной защиты в гепатоцитах, их протеин-синтетическую функцию, цитолитические и репаративно-восстановительные процессы как пример биологической полифункциональности регуляторных пептидов.

АКТГ - адренокортикотропный гормон

АлАТ - аланинаминотрансфераза

АОС - антиоксидантная система

АсАТ - аспартатаминотрансфераза

АФК - активные формы кислорода

ГАМК - у-аминомасляная кислота

ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота

ДОФА - Ь-диоксифенилаланин

ДСИП - дельта-сон индуцирующий пептид

ИБС - ишемическая болезнь сердца

ИЛ - интерлейкин

ИМДК - индекс массы двухъядерных клеток

ОМП - индекс относительной массы печени

КТРГ - кортикотропин-рилизинг-гормон

МАО - моноаминоксидаза

МДА - малоновый диальдегид

ММИ - масс-митотический индекс

НАДН - никотинамидадениндинуклеотид

ОАА - общая антиокислительная активность

ОМП - индекс относительной массы печени

ПНЖК - полиненасыщенные жирные кислоты

ПОЛ - перекисное окисление липидов

ПП - паренхиматозная плотность

РНК - рибонуклеиновая кислота

СОД - супероксиддисмутаза

СПСГ - средняя площадь среза гепатоцита

СРО - свободнорадикальное окисление

СТГ - соматотропный гормон

ТТГ - тиреотропный гормон

ФККИ - - функциональный кариоклеточный индекс

ФКМ - функциональная клеточная масса

цАМФ - - циклический аденозинмонофосфат

ЦНС - центральная нервная система

ЯМ - ядерная масса

AMPA a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazolepropionic acid

NMDA - - N-methyl-D-aspartate

1. Адаптогенный эффект дельтарана в модели окклюзии сонных артерий / А. М. Менджерицкий [и др.] // Нейрохимия. - 2007. - Т. 24, № 2. - С. 166-171.

2. Антипенко, Е. А. Антиоксидантная терапия при дисциркуляторной энцефалопатии / Е. А. Антипенко, А. В. Густов // Журн. неврологии и психиатрии им. С. С. Корсакова. - 2010. - Т. 110, № 7. - С. 53-55.

3. Антипенко, Е. А. Клинико-нейропсихологическая характеристика и особенности медицинской реабилитации при дисциркуляторной энцефалопатии у лиц старшей возрастной группы : автореф. дис. ... канд. мед. наук // Е. А. Антипенко. - Н. Новгород, 1997. - 37 с.

4. Антипенко, Е. А. Роль стресс-протективной терапии в течении хронической ишемии головного мозга / Е. А. Антипенко, М. Ю. Максимова, П. А. Солдатов // Соврем. технологии в медицине. - 2015. - Т. 7, № 3. - С. 95-102. - ёо1: 10.1769Шш2015.7.3.14

5. Антипенко, Е. А. Хроническая ишемия головного мозга (клинико-экспериментальное исследование) : автореф. дис. ... д-ра мед. наук // Е. А. Антипенко. - Н. Новгород, 2015. - 41 с.

6. Антипенко, Е. А. Эффективность препарата дельтаран при хронической ишемии головного мозга / Е. А. Антипенко, А. В. Густов, Е. М. Хватова // Medline.Ru. - 2008. - Т. 9, № 1. - С. 124-132.

7. Антистрессорные реакции и активационная терапия. Реакция активации как путь к здоровью через процессы самоорганизации : в 2 ч. / Л. Х. Гаркави [и др.]. - Екатеринбург : Филантроп, 2003. - Ч. 1. - 196 с. ; Ч. 2. - 340 с.

8. Ашмарин, И. П. Структурно-функциональная классификация регуля-торных пептидов. Что включать в нее для минимальной ориентации широкого круга нейрохимиков и нейрофизиологов, аспирантов и студентов старших курсов? / И. П. Ашмарин // Нейрохимия. - 2007. - Т. 24, № 2. - С. 180-185.

9. Ашмарин, И. П. Регуляторные пептиды, функционально-непрерывная совокупность / И. П. Ашмарин, М. Ф. Обухова // Биохимия. - 1986. - Т. 51, № 4. -С. 531-545.

10. Белякова, Е. И. Влияние пептида дельта-сна на моноаминергические системы мозга крыс в начальный период ноцицептивного воздействия / Е. И. Белякова, Т. С. Колмакова // Нейрохимия. - 2007. - Т. 24, № 2. - С. 156-160.

11. Биохимия : учебник / под ред. Е. С. Северина. - 5-е изд., испр. и доп. -М. : ГЭОТАР-Медиа, 2016. - 768 с.

12. Бондаренко, Т. И. Влияние пептида дельта-сна на активность моно-аминооксидаз и содержание гистамина в мозгу и крови крыс при действии холо-дового стресса / Т. И. Бондаренко, А. А. Кричевская, И. А. Горошинская // Нейро-химия. - 1986. - Т. 5, № 4. - С. 408-412.

13. Бондаренко, Т. И. Влияние пептида дельта-сна на активность ферментов электрон-транспортной цепи митохондрий разных тканей крыс при старении организма / Т. И. Бондаренко, Д. С. Кутилин, И. И. Михалёва // Успехи геронтологии. - 2014. - Т. 27, № 3. - С. 496-502.

14. Бондаренко, Т. И. Влияние пептида дельта-сна на содержание гомо-карнозина в мозгу крыс при действии холодового стресса / Т. И. Бондаренко, А. А. Кричевская, И. Г. Папакина // Физиол. журн. СССР. - 1989. - Т. 75, № 12. -С. 1788-1790.

15. Бондаренко, Т. И. Гомокарнозин в головном мозгу крыс при холодо-вой адаптации / Т. И. Бондаренко, А. А. Кричевская, Г. Х. Кощий // Физиол. журн. СССР. - 1985. - Т. 71, № 3. - С. 333-336.

16. Бондаренко, Т. И. Молекулярные эффекты дельта-сон индуцирующего пептида в регуляции гомеостаза при стрессе / Т. И. Бондаренко, Т. А. Шустанова // Вопр. биол., мед. и фармацевт. химии. - 2010. - Т. 8, № 12. -С. 45-63.

17. Бузунов, А. Ф. Формирование соматических последствий адаптационного синдрома. Цена цивилизации / А. Ф. Бузунов. - М. : Практ. медицина, 2010. - 352 с.

18. Вельков, В. В. Неинвазивные биомаркеры фиброза печени: до свиданья, биопсия? / В. В. Вельков // Клин.-лаб. консилиум. - 2009. - № 5. - С. 34-44.

19. Взаимосвязь параметров иммунной и прооксидантно-антиоксидант-ной систем при физиологическом старении / Т. А. Гвозденко [и др.] // Клин. геронтология. - 2014. - Т. 20, № 3-4. - С. 17-20.

20. Влияние глюкокортикоидного антагониста на карбонилирование белков в печени крыс при ежедневных одночасовых иммобилизациях /

B. Э. Цейликман [и др.] // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 2013. - Т. 156, № 7.

- С. 38-40.

21. Влияние иммобилизации на показатели стресс-реакции у крыс и собак / Т. А. Томова [и др.] // Вестн. Томск. гос. ун-та. Сер. Биология. - 2014. - № 1 (25).

- С. 183-198.

22. Влияние некоторых нетрадиционных методов лечения на выраженность цефалгического синдрома у пожилых больных с дисциркуляторной энцефалопатией / Е. А. Антипенко [и др.] // Боль и ее лечение. - 1997. - № 6. - С. 4-6.

23. Влияние неокиоторфина и дельта-сон-индуцирующего пептида на ректальную температуру крыс в норме, при гипотермии и в период самосогревания / И. Ю. Павлов [и др.] // Бюл. эксперим. биол. и медицины. - 1998. - № 7. -

C. 113-115.

24. Влияние пептида дельта-сна на свободнорадикальные процессы в головном мозгу и печени мышей при различных световых режимах / В. Б. Войтенков // Успехи геронтологии. - 2008. - Т. 21, № 1. - С. 53-55.

25. Влияние пептида дельта-сна на содержание адреналина в тканях крыс в норме и при действии холодового стресса / Т. И. Бондаренко [и др.] // Укр. био-хим. журн. - 1990. - Т. 62, № 5. - С. 34-38.

26. Влияние пептида дельта-сна на состояние мембран мозга при действии холодового стресса / А. А. Кричевская [и др.] // Физиол. журн. СССР. -1986. - № 6. - С. 843-845.

27. Влияние препарата пептида дельта-сна «Дельтаран» на продолжительность жизни, физиологические показатели и канцерогенез у мышей //

B. Б. Войтенков [и др.] // Успехи геронтологии. - 2009. - Т. 22, № 4. - С. 646-654.

28. Влияние электромагнитного излучения терагерцового диапазона частотой молекулярного спектра оксида азота 150+0,75 ГГц на морфофункциональ-ные нарушения микроциркуляции у белых крыс в состоянии острого и длительного стресса / И. О. Бугаева [и др.] // Саратов. науч.-мед. журн. - 2009. - Т. 5, № 4. -

C. 511-516.

29. Войтенков, В. Б. Радиопротекторные свойства пептида, индуцирующего дельта-сон / В. Б. Войтенков, А. В. Карташев // Медицина экстрем. ситуаций. - 2016. - № 4 (58). - С. 45-49.

30. Волыхина, В. Е. Супероксиддисмутазы: структура и свойства // В. Е. Волыхина, Е. В. Шафрановская // Вестн. Витебск. гос. мед. ун-та. - 2009. -Т. 8, № 4. - С. 6-12.

31. Горбань, А. Н. Динамика корреляций между физиологическими параметрами при адаптации и эколого-эволюционный принцип полифакториальности / А. Н. Горбань, В. Т. Манчук, Е. В. Петушкова // Проблемы эколог. мониторинга и моделирования экосистем. - 1987. - Т. 10. - С. 187-198.

32. Городецкая, И. В. Влияние йодсодержащих тиреоидных гормонов на интенсивность перекисного окисления липидов в печени и крови крыс при стрессе / И. В. Городецкая, Е. А. Гусакова. // Вестн. Витеб. гос. мед. ун-та. - 2014. -Т. 13, № 3. - С. 35-42.

33. Григорчук, О. С. Влияние пептида дельта-сна на активность нейронов дорсального гиппокампа в условиях стимуляции вентромедиального гипоталамуса / О. С. Григорчук, П. Е. Умрюхин // Рос. мед.-биол. вестн. им. И. П. Павлова. -2012. - № 1. - С. 8-14.

34. Гусакова, Е. А. Повышение устойчивости организма к стрессу йодсо-держащими тиреиодными гормонами / Е. А. Гусакова // Вестн. Витеб. гос. мед. ун-та. - 2015. - Т. 14, № 4. - С. 15-26.

35. Дельтаран - лекарственный препарат на основе пептида дельта-сна [Электронный ресурс] / Междунар. неврол. журн. - 2006. - Т. 5, № 9. - Режим доступа: http://www.mif-ua.com/archive/article/2400, свободный (дата обращения: 15.03.2016).

36. Дельтаран облегчает ишемию головного мозга при стрессорных нагрузках: экспериментальное исследование / Е. В. Коплик [и др.] // Курск. науч.-практ. вестн. «Человек и его здоровье» . - 2009. - № 2. - С. 11-18.

37. Доведова, Е. Л. Активность ферментов обмена некоторых биогенных аминов в структурах мозга крыс линии Август при действии пептида дельта-сна / Е. Л. Доведова, Д. А. Хрусталев // Нейрохимия. - 2005. - № 1. - С. 44-48.

38. Доведова, Е. Л. Действие дельта-сон индуцирующего пептида на метаболизм моноаминов при экспериментальной эпилепсии / Е. Л. Доведова, Н. Д. Ещенко // Вестн. СПбГУ. Серия 3: Биология. - 2011. - № 2. - С. 68-74.