Ультрафиолетовая спектрометрия жидких биологических сред и разработка методов анализа поликомпонентных сред тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 05.11.07, кандидат технических наук Коноплев, Георгий Асадович

• Коноплев, Георгий Асадович
• кандидат технических наук
• 2005

Оглавление диссертации кандидат технических наук Коноплев, Георгий Асадович

Содержание.

Введение.

1. Современные методы анализа жидких биологических сред.

1.1. Краткая характеристика жидких биологических сред человека.

1.2. Существующие методы клинико-биохимического анализа.

1.3. Количественный абсорбционный спектральный анализ жидких биологических сред в УФ области.

1.3.1. Электронные спектры поглощения органических молекул. Основные принципы лежащие в основе УФ спектрофотометрии.

1.3.2. Примеры использования прямой УФ спектофотометрии для анализа поликомпонентных ЖБС.

1.3.3. Спектрофотометры для клинико-биохимических исследований. 32 Ф 1.4. Методы контроля состава жидких биологических сред в процессе детоксикационных мероприятий.

1.4.1. Перитонеальный диализ. Тест перитонеального равновесия.

1.4.2. Исследование состава диализата хроматографическими и масс-спектрометрическими методами.

1.4.3. Применение спектрального анализа для контроля состава диализата.

1.5. Постановка задач исследования.

Выводы по главе 1:.

2. Разработка метода спектрофотометрического анализа ЖБС.

2.1. Основные требования, предъявляемые к математической модели поглощения ЖБС в УФ области спектра.

2.2. Спектральный анализ однокомпонентных сред в ультрафиолетовой области.

2.2.1. Математическая модель поглощения однокомпонентных сред.

2.2.2. Методика проведения градуировки.

2.2.3. Методика расчета концентрации по спектру.

2.3. Спектральный анализ многокомпонентных сред в УФ области.

Выводы по главе 2:.

3. Применение метода для анализа однокомпонентных сред.

3.1. Автоматизированный многоканальный спектроанализатор.

3.2. Применение разработанной методики для количественного спектрального анализа растворов глюкозы.

3.3. Применение разработанной методики для количественного спектрального анализа растворов сывороточного альбумина.

3.4. Применение разработанной методики для количественного спектрального анализа цианкобаламина.

3.5. Применение разработанной методики для количественного спектрального анализа растворов мочевой кислоты.

• 3.6. Применение разработанной методики для количественного анализа препарата содержащего гидрохинон.

Выводы по главе 3:.

4. Количественный анализ перитонеального диализата методом УФ абсорбционной спектрометрии.

4.1. Разработка методики регистрации спектров экстинкции перитонеального диализата.

• 4.2. Исследование формы спектральной кривой.

4.3. Обоснование принципиальной возможности применения количественного спектрального анализа в УФ области для исследования состава диализата.

4.4. Учет влияния светорассеяния на спектр экстинкции диализата.

4.5. Исследование динамики процесса выведения веществ различной молекулярной массы через перитонеальную мембрану.

4.6. Определение концентрации мочевой кислоты и креатинина в перитонеальном диализате методом УФ спектрофотометрии.

Выводы по главе 4:.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Ультрафиолетовая спектрометрия жидких биологических сред и разработка методов анализа поликомпонентных сред»

Актуальность исследований. Метод абсорбционного спектрального анализа широко используется в науке и технике. Преимуществами данного метода являются оперативность, высокая воспроизводимость, малый объем пробы, неинвазивность, возможность реализации мониторинга состава среды в проточном режиме, сравнительно невысокая стоимость используемой аппаратуры, отсутствие необходимости в использовании реактивов, низкая трудоемкость и возможность автоматизации. Особое место спектральные методы анализа занимают в биомедицинских исследованиях, где в более чем 30% аналитических методик используется оптическая регистрация. Отметим лишь несколько основных направлений этих исследований - контроль экологического состояния среды обитания человека, клинико-лабораторные биохимические исследования нативных жидких биологических сред (ЖБС) организма, мониторинг процессов при проведении эфферентной терапии, фармакологические исследования, контроль качества пищевых продуктов.

Наиболее информативной для спектрального анализа ЖБС является ультрафиолетовая (УФ) область, где, с одной стороны, лежат электронные полосы поглощения многих хромофорных групп, а с другой, располагается «окно прозрачности» воды, которая является растворителем во всех жидких средах естественного происхождения. Современные УФ спектрофотометры построены на основе многоэлементных приемников излучения, полностью автоматизированы, передают спектры непосредственно на компьютер, что дает возможность проводить анализ в реальном масштабе времени.

Количественный абсорбционный анализ базируется на законе Бугера-Ламберта-Бера, устанавливающем линейную зависимость спектрального показателя поглощения однородной среды от концентрации, и принципе аддитивности, согласно которому показатель поглощения смеси равен сумме показателей поглощения отдельных компонентов. Многими исследователями показано, что закон Бера и принцип аддитивности соблюдаются лишь для слабоконцентрированных сред. Кроме того, обычно анализ проводится на одной или нескольких дискретных длинах волн, как правило, соответствующих максимумам характеристических полос поглощения компонентов среды, в то время как информация о составе ЖБС рассредоточена в широком спектральном интервале. Поэтому, применение классического абсорбционного спектрального анализа для исследования ЖБС и жидких лекарственных форм, когда концентрация может изменяться в широких пределах, в случае однокомпонентных сред приводит к значительным погрешностям, а для поликомпонентных сред практически исключено.

Цель настоящей работы - разработка и исследование методов спектрального анализа ЖБС и их компонентов в УФ области спектра, снимающих ряд ограничений классической абсорбционной спектрофотометрии применительно к поликомпонентным средам.

Основные задачи, которые необходимо решить для достижения указанной цели включают в себя следующее: построение математической модели, описывающей зависимость спектральных характеристик поглощения ЖБС в УФ области спектра от концентрации компонентов; разработка методики определения параметров модели для конкретной ЖБС и расчета концентрации компонентов по спектру; оценка эффективности модели применительно к анализу однокомпонентных биологических сред в широком диапазоне концентраций; экспериментальное исследование разработанных моделей для анализа поликомпонентных сред - перитонеального диализата больных, страдающих хронической почечной недостаточностью (ХПН), и поликомпонентных жидких лекарственных сред.

Методы исследований.

Для решения поставленных задач использовались методы абсорбционного спектрального анализа по электронным спектрам поглощения, аналитические методы аппроксимации функций многих переменных, методы оптимизации, статистические методы оценки степени достоверности результатов. Научная новизна работы состоит в следующем: Сформулирована математическая модель, описывающая спектральные характеристики поглощения ЖБС и их компонентов в УФ области при изменении концентрации в широких пределах.

Разработана новая методика анализа однокомпонентных сред с учетом нелинейной зависимости показателя поглощения от концентрации в пределах информативной области спектра.

Разработан метод спектрофотометрического определения концентрации доминирующего компонента в поликомпонентных средах.

Впервые обнаружены индивидуальные особенности УФ спектров экс-тинкции перитонеального диализата больных страдающих ХПН, и предложена методика классификации спектров диализата по форме кривой пропускания.

Практическая значимость работы заключается в следующем: Разработанная методика может быть использована в клинико-биохимических лабораториях учреждений практического здравоохранения при анализе жидких поликомпонентных сред, а также для оперативного контроля эффективности детоксикационных мероприятий.

Результаты работы подтверждены актами внедрения Городского центра гемокоррекции г. Санкт-Петербурга и научно-исследовательской лаборатории фармакологических исследований СПб химико-фармацевтической академии.

Научные положения выносимые на защиту: - Математическая модель, описывающая спектральные характеристики поглощения ЖБС и их компонентов в УФ области, должна учитывать возможное несоблюдение закона Бера и принципа аддитивности путем введения в разложение показателя поглощения по концентрации членов высших порядков.

- Количественный спектрофотометрический анализ ЖБС в УФ области спектра должен проводится в пределах всего информативного для исследуемой среды спектрального диапазона.

- Методика спектрального анализа, основанная на предлагаемых принципах, позволяет существенно повысить точность анализа однокомпо-нентных сред в широком диапазоне изменения концентрации, а также дает возможность проводить анализ сложных поликомпонентных сред по доминирующему компоненту.

Апробация работы.

Основные результаты диссертационной работы были представлены на следующих конференциях:

- Вторая международная конференция молодых ученых и специалистов "0птика-2001", Санкт-Петербург, 2001.

- Международный оптический конгресс «Оптика-XXI век», Санкт-Петербург, 2002.

- VIII Санкт-Петербургская международная конференция «Региональная информатика-2002», Санкт-Петербург, 2002.

- IX Санкт-Петербургская международная конференция «Региональная информатика-2004», Санкт-Петербург, 2004.

- VI Международная конференция «Прикладная оптика», Санкт-Петербург, 2004.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, из них - 2 статьи, тезисы к 7-ми докладам на международных и национальных научно-технических конференциях.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, четырех глав, заключения, списка литературы, включающего 73 наименования и одного приложения. Основная часть работы изложена на 109 страницах машинописного текста. Работа содержит 68 рисунков и 21 таблицу.

Заключение диссертации по теме «Оптические и оптико-электронные приборы и комплексы», Коноплев, Георгий Асадович

Выводы по главе 4:

1. При регистрации спектров поглощения перитонеального диализата в кварцевых кюветах оптической толщиной d = 5 мм оптимальное пропускание образца достигается при разведении диализата дистиллированной водой в пропорции 1:4.

2. Имеет место тесная корреляционная связь между уровнем поглощения диализата и концентрацией креатинина и мочевой кислоты, что говорит о наличии принципиальной возможности прямого спектрофотометрическо-го определения концентрации данных компонентов.

3. Форма спектрограммы диализата в информативной УФ области носит выраженный индивидуальный характер, и значительно изменяется от больного к больному, но остается постоянной для каждого конкретного больного как при увеличении длительности обмена в рамках одного сеанса (растет только общий уровень поглощения), так и при длительных наблюдениях (год и более). Для спектральной области 240.320 нм, где изменения в форме кривых были существенными, визуально можно выделить несколько характерных типов кривых пропускания, которые условно обозначены как типы «А», «В» и «С».

4. Обнаруженные индивидуальные особенности могут быть объяснены вариациями относительного содержания двух компонентов, имеющих полосы собственного поглощения в спектральных областях АЯ/= 255 .265 нм и AXj=" 288.298 нм, предположительно мочевой кислоты и адено-зина.

5. Статистический анализ показал, что распределение числа больных по количественному параметру, характеризующему форму кривой, математически может быть описано нормальным законом, т.е. носит случайный характер.

6. По предложенной методике была проведена градуировка и рассчитана концентрация мочевой кислоты и креатинина в перитонеальном диализате для группы больных. При сопоставлении с данными биохимического анализа относительная погрешность определения концентрации мочевой кислоты не превышает 8%, креатинина - 18%; коэффициент корреляции между результатами биохимического и спектрофотометрического анализа составляет pAcUr = 0.95 для мочевой кислоты и рСг =0.86 для креатинина, что говорит о достоверности получаемых с помощью разработанного метода результатов.

Заключение

Целью настоящей работы явились разработка и исследование методов спектрального анализа ЖБС и их компонентов в УФ области спектра, снимающих ряд ограничений классической абсорбционной спектрофотометрии применительно к поликомпонентным средам.

В ходе достижения цели работы предварительно были проанализированы данные о составе и существующих методах исследования состава однокомпонентных и поликомпонентных ЖБС, в том числе особенности контроля состава ЖБС в процессе детоксикационных мероприятий. Рассмотрен опыт применения классической абсорбционной УФ спектрометрии в клинико-лабораторном анализе; выполнены экспериментальные исследования УФ спектров поглощения ряда однокомпонентных сред - жидких лекарственных форм (растворы альбумина, глюкозы, мочевой кислоты, витамина Bj2), и поликомпонентной ЖБС - перитонеального диализата. Проведенные исследования позволили сформулировать ряд требований, предъявляемых к методам количественного абсорбционного УФ спектрального анализа ЖБС:

S Учет вероятного несоблюдения закона Бугера-Ламберта-Бера и принципа аддитивности;

Возможность проведения анализа при сильном перекрытии спектров поглощения отдельных компонентов;

S Широкий рабочий диапазон концентраций;

S Использование для анализа всей информативной спектральной области;

S Возможность определения одного или нескольких компонентов в присутствии множества других, концентрация и молярный показатель поглощения которых неизвестны.

В рамках решения поставленных задач получены следующие результаты:

1. Разработана математическая модель, описывающая зависимость спектрального показателя поглощения однокомпонентных и поликомпонентных ЖБС в УФ области в условиях несоблюдения линейного закона Бугера-Ламберта-Бера и принципа аддитивности. Предложенная модель базируется на следующих принципах:

Учет нелинейного характера зависимости спектрального показателя поглощения от концентрации компонентов путем аппроксимации зависимости к{Х) полиномом второго порядка, введение матрицы молярных спектральных показателей поглощения второго порядка;

Замена недиагональных элементов матрицы показателей поглощения второго порядка поправками к диагональным элементам (предварительное суммирование по строкам) на основании экспериментальных данных, согласно которым для исследуемой группы сред форма спектральной кривой меняется незначительно;

Учет влияния компонентов с неизвестной концентрацией и молярным показателем поглощения путем введения в зависимость к(Л) эмпирических поправочных коэффициентов.

2. Разработана методика расчета молярных показателей поглощения второго порядка для однокомпонентных сред и многокомпонентных сред для случая отдельного определяемого компонента. Методика дает возможность рассчитать молярные показатели поглощения второго порядка по спектрам поглощения набора проб среды, концентрация компонентов в которых предварительно была измерена одним из биохимических методов.

3. Предложена методика количественного спектрофотометрического анализа ЖБС с помощью разработанной модели в широком спектральном диапазоне, в основе которой лежит определение концентрации с помощью оптимизационных методов. На примере однокомпо-нентных сред показано, что в условиях изменения концентрации в широких пределах (более чем на порядок) использование данной методики позволяет снизить относительную погрешность спектрофото-метрического определения концентрации более чем в 3 раза по сравнению с классическими методиками. Подтверждено, что для каждой из исследуемых сред погрешность 5С/С не превышает 10. 15% во всем рабочем диапазоне концентраций.

4. Исследованы спектры экстинкции перитонеального диализата для большой группы больных страдающих хронической почечной недостаточностью. В ходе исследований установлены следующие факты: >^При использовании для регистрации спектров кварцевых кювет оптической толщиной 5 мм, для расширения информативного спектрального диапазона и достижения оптимального, с точки зрения минимизации погрешности измерений, уровня пропускания пробы можно рекомендовать разведение диализата дистиллированной водой в пропорции 1:3. ^Между уровнем поглощения диализной жидкости в интервале длин волн 220.350 нм и концентрацией ряда компонентов существует тесная корреляционная связь, что указывает на принципиальную возможность применения абсорбционной спектрометрии для анализа перитонеального диализата. ^Имеют место индивидуальные особенности формы спектра пропускания диализата, присущие каждому больному; спектры условно классифицированы на три типа. Введен количественный параметр, характеризующий изменения формы спектра у разных больных. Установлено, что больные в исследуемой группе (42 чел) распределены по данному параметру в соответствии с нормальным законом. Сделано предположение, согласно которому обнаруженные индивидуальные особенности обусловлены вариациями относительного содержания двух компонентов: мочевой кислоты и аденозина в плазме крови больных.

5. Предложенный метод спектрофотометрического анализа использован для определения концентрации мочевой кислоты и креатинина в пе-ритонеальном диализате. Имеет место тесная корреляция полученных результатов с данными биохимического анализа: по мочевой кислоте РAcUr ~ 0-95, по креатинину = 0.86. Относительная погрешность определения концентрации мочевой кислоты не превышает 8%, креатинина- 18%.

Разработанный метод может быть использован в биохимических лабораториях диагностики учреждений практического здравоохранения при анализе поликомпонентных жидких биологических сред по доминирующему компоненту, для оперативного контроля эффективности детоксикационных мероприятий, при исследовании состава сточных вод, в фармакологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат технических наук Коноплев, Георгий Асадович, 2005 год

1. Бабко А.К. Фотометрический анализ / А.К. Бабко, А.Т. Пилипенко. М.: Химия, 1968.-386 с.

2. Бабушкин, А.А. Методы спектрального анализа / А.А. Бабушкин, П.А. Бажулин, Ф.А. Королев и др. М.: Изд-во МГУ, 1962. - 510 с.

3. Беликов, В.Г. Анализ лекарственных веществ фотометрическими методами. Опыт работы отечественных специалистов / В.Г. Беликов // Рос. хим. журнал. 2002. - Т. XLVI, № 4. - С. 52-56.

4. Берштейн, И.Я. Спектрофотометрический анализ в органической химии / И.Я. Берштейн, Ю.Л. Каминский. Л.: Химия, 1986. - 198 с.

5. Василевский, A.M. Применение ультрафиолетовой спектрофотометрии для анализа перитонеального диализата / A.M. Василевский, Г.А. Коноплев // Оптический журнал. 2004 - Т.71, №3. - С. 64-66.

6. Василевский, A.M. Исследование спектров поглощения альбумина и мочевой кислоты в УФ области спектра / A.M. Василевский, Г.А. Коноплев, Н.В. Корнилов // Оптический журнал. 2001 - Т.68, №1. - С.76-78.

7. Венкстерн, Т.В. Спектры поглощения минорных компонентов и некоторых олигонуклеотидов рибонуклеиновых кислот / Т.В. Венкстерн, А.А. Баев. -М.: Наука, 1967.- 80 с.

8. Гиллер, А. Электронные спектры поглощения органических соединений / А. Гиллер, Е. Штерн М.: Взд-во иностр. лит., - 1957. - 387 с.

9. Малогабаритные многоканальные оптические спектрометры / В.В. Городецкий и др. // Оптический журнал. 1995. - №7. - с.3-9.

10. Перитонеальный диализ в таблицах и схемах / А.К. Гуревич и др. -СПб.:Иизд-во СПбМАПО, 2003. 55 с.

11. Гуревич, К.Я. Перитонеальный диализ: Методические рекомендации для врачей / К.Я. Гуревич и др. СПб.: Изд-во СПбМАПО, 2003. - 98 с.

12. Демченко, А.П. УФ спектрофотометрия и структура белков / А.П. Демченко. Киев: Наукова Думка, 1981. - 210 с.

13. Справочник биохимика / Р. Досон и др. М.: Мир, 1991. - 544 с.

14. Компьютерная спектрофотометрия в медицинской диагностике / А.А. Елисеев и др. // Вестник Томского гос. ун-та. 2000. - №269. - с. 113117.

15. Зайдель, А.Н. Основы спектрального анализа / А.Н. Зайдель. М.: Наука, 1965.-324 с.

16. Зайдель, А.Н. Техника и практика спектроскопии / А.Н. Зайдель, Г.В. Островская, Ю.И. Островский М.: Наука, 1976. - 392 с.

17. Камышников, А.С. Справочник по клинико-биохимической диагностике: в 2 т. / А.С. Камышников. Минск: Беларусь, 2000.

18. Карнаухова, Л.И. УФ-спектроскопия биологических макромолекул (учебно-методическое пособие) / Л.И. Карнаухова, Е.Н. Тупицын. Саратов: изд-во Саратовского гос. ун-та, 2002. - 15 с.

19. Коптюг, В.А. Атлас спектров: ИК-, УФ-, КР- и ПМР спектры растворителей / В.А. Коптюг, ред. Новосибирск: ИОХ; НИЦ МС, 1978. -136 с.

20. Костюченко, А.Л. Интенсивная терапия послеоперационных осложнений / А.Л. Костюченко, К.Я. Гуревич, М.И. Лыткин. СПб: Спецлит, 2000. - 575 с.

21. Лавренчик, В.Н. Постановка физического эксперимента и статистическая обработка его результатов / В.Н. Лавренчик. М.: Энергоатомиз-дат, 1986.-272 с.

22. Биохимия человека: в 2 т. / Р. Мари и др. -М. Мир, 1993 Т. 1. -414 с.

23. Моран, Р. Лабораторная оценка снабжения тканей кислородом: газы крови и СО оксиметрия (лекция) / Р. Моран // Клиническая лабораторная диагностика. - 1998. - №2. - С.25 - 32.

24. Островский, П.М. Экспериментальная витаминология: справочник / П.М. Островский. Минск: Наука и техника, 1978. - 550 с.

25. Пейсахсон, И.В. Оптика спектральных приборов / И.В. Пейсахсон. Л.: Машиностроение, 1975. - 312 с.

26. Рубин, В.И. Биохимические методы исследования в клинике / В.И. Рубин, Э.Г. Ларский, Л.С. Орлова Саратов: изд-во Саратовского ун-та, 1980.-320 с.

27. Свердлова, О.В. Электронные спектры в органической химии / О.В. Свердлова. JL: Химия, 1985 - 248с.

28. Сидоренко, В.М. Молекулярная спектроскопия биологических сред / В.М. Сидоренко М.: Высшая школа, 2004. - 191 с.

29. Чупрасов, В.Б. Программный гемодиализ / В.Б. Чупрасов. СПб: Фолиант, 2001.-256 с.

30. Якушенков, Ю. Г. Теория и расчет оптико-электронных приборов / Ю.Г. Якушенков. М.: Логос, 2004. - 470 с.

31. Beaven, G.H. Ultraviolet Absorption spectra / G.H. Beaven, E.R. Holiday // Advanced Protein Chemistry. 1951. - Vol.7. - P. 380-384.

32. Bergstrom, J. Uraemic toxins / J. Bergstrom, P. Furst // Replacement of renal function by dialysis / Ed. J.F. Maher. 3rd ed. - Dordrecht: Kluwer Academic, 1989.- P. 354-389.

33. Bland, J.M. Statistical methods for assessing agreement between two methods of clinical measurement / J.M. Bland, D.G Altman. // The Lancet. 1986. -№ 8. -P. 307-310.

34. Churchill, D.N. Practical methods for assessing dialysis efficiency during peritoneal dialysis / D.N. Churchill // Kidney Int. 1994. - Vol. 46, Suppl. 48.-P. S7-S13.

35. Contreras, P. Molecules in the middle molecular weight range: Critical review of methods of separation from fluids of uremic patients / P. Contreras, R. Later, J. Navarro //Nephron. 1982. - Vol .32. - P. 193-201.

36. Davis, W. Determination of urinary constituents in solutions by least-square resolution of ultraviolet spectrums / W. Davis, E. Schonfeld, A.H. Kibbey // Clin. Chem. 1968. - Mol. 14. №8. - P. 310-325.

37. Fasman, G.D. Nucleic Acids / G.D. Fasman (ed.). New-York: CRC Press, 1975.-Vol. l.-P. 121-156.

38. Fridolin, I. On-line monitoring of solutes in dialysate using absorption of ultraviolet radiation: technique description. / I. Fridolin, M. Magnusson, L.-G. Lindberg // Int. J. Artif. Organs. 2002. - Vol. 25, №8. - P. 748-761.

39. Fridolin, I. On-line monitoring of solutes in dialysate using wavelength-dependent absorption of ultraviolet radiation /1. Fridolin, L.-G. Lindberg // Med. Biol. Eng. Comput. -2003. Vol. 41. - P. 263-270.

40. Hue, N. V. Manganese toxicity in a hawaiian oxisol affected by soil pH and organic amendments / N. V. Hue, S. Vega, J. A. Silva // Soil Science Society of America J. 2001. - Vol. 65. - P. 153-160.

41. Gal, G. Continuous monitoring of the efficiency of hemodialysis by recording the UV transmittance of the dialysis solution / G. Gal, J. Grof, E. Kiss // Acta Chir. Hung. 1983 - Vol. 24, №4 - P. 231-239.

42. Gal, G. Continuous UV photometric monitoring of the efficiency of hemodialysis / G. Gal, J. Grof// Int. J. Artif. Organs. 1980. - Vol. 3, № 6. - P. 338-341.

43. Groves, W.E. Sperctrophotometric determination of microgram quantities of protein without nucleic acid interference / W.E. Groves, C.F. Davis, B.H. Sells / Anal. Biochem. 1968. - Vol.22. - P. 195-210.

44. Kandoussi, A. Quantification of /^-microglobulin and albumin on plasma and peritoneal dialysis fluid by a noncompetitive immunoenzymometric assay / A. Kandoussi, C. Cachera, D. Pagniez // Clin. Chem. 1993. - Vol. 39, №1, - P. 93-96.

45. Kirschenbaum, D.M. Molar absoptivity and Aj^ values for protein at selected wavelengths of the ultraviolet and visible regions / D.M. Kirschenbaum // Anal. Biochem. 1973. - Vol.55, №1 - P. 340-343.

46. Knudson, E.J. Time-concentration studies by high-performance liquid chromatography of metabolites removed during hemodialysis / E.J. Knudson, Y.C. Lau, D.A. Dayton // Clin. Chem. 1978. - Vol. 24, №4. - P. 686-691.

47. Kupcinskas, R. A Method for optical measurement of urea in effluent hemo-dialysate: Dissertation for PhD degree / R. Kupcinskas: Worcester Polytechnic Institute. Worcester, 2000. - 128 p.

48. McNichols, R.J. Optical glucose sensing in biological fluids: an overview / R.J. McNichols, G.L. Cote // J. of Biomedical Optics. 2000. - Vol. 5, № 1. -P. 5-16.

49. Oreopoulos, D.G. Peritoneal dialysis: Where is it now and where is it going? / D.G. Oreopoulos, T. Lobbedez, S. Gupta // The Int. J. Artif. Organs. 2004. -Vol. 27, №2. -P. 88-94.

50. Ringoir, S. An update on Uremic Toxins / Ringoir S. // Kidney Int. 1997. -Vol. 52, Suppl. 62. - P. S2-S4.

51. Roggan, A. Optical Properties of Circulating Human Blood in the Wavelength Range 400 2500 nm. / A. Roggan, M. Friebel, K. Dorschel // J. of Biomedical Optics. - 1999. - Vol. 4. - P. 36 - 46.

52. Scopes, R.K. Measurement of protein by spectrophotometry at 205 nm / R.K. Scopes // Anal. Biochem. 1974. - Vol.59, № 1. - P. 277-282.

53. Sennfal, K. Comparison of hemodialysis and peritoneal dialysis — a cost-utility analysis / K. Sennfalt, M. Magnusson, P. Carlsson // Peritoneal Dialysis Int. 2002. - Vol. 22. - P. 39-47.

54. Smat, R.D. p-Cresol and uric acid: Two old uremic toxins revisited / R.D. Smat, G. Glorieux, Hsu Chen, R.C. Vanholder // Kidney Int. 1997. -Vol.52, Suppl.62. - P. S8-S11.

55. Toshimitsu, N. Mass spectrometry in the search for uremic toxins / N. To-shimitsu // Mass Spectrometry Reviews. 2001. - Vol. 16. - P. 307-332.

56. Uhlin, F. Estimation of delivered dialysis dose by on-line monitoring of the ultraviolet absorbance in the spent dialyzate / F. Uhlin, I. Fridolin, L.-G. Lindberg // Am. J. Kidney Dis. 2003. - Vol. 41, №5. - P. 1026-1036.

57. Vanholder, R.C. Assessment of urea and other uremic markers for quantification of dialysis efficacy / R.C. Vanholder, R.V, De Smet, S.M. Ringoir // Clin. Chem. 1992. - Vol. 38, №8. - P. 1429-1436.

58. Webster, G.C. Comparison of direct spectrophotometric methods for measurement of protein concentration / G.C. Webster // Biochemistry et biophysics acta. 1970. - Vol. 207, №.2. - P. 371-373.

59. Winder, A.F. Correction of light-scattering errors in spectrophotometric protein determination / A.F. Winder, W.L.G. Gent // Biopolymers. 1971. -Vol.10, №7.- P. 1243-1251.

60. Wollenberger, A. Ultraviolet absorption of creatinine / A. Wollenberger // Acta Chem. Scand. 1953. - Vol. 7, №2. - P. 445-446.

61. Woods, A.H. Absorption of proteins and peptides in the far ultraviolet / A.H. Woods, P.R. O'Bar//Science.-Vol. 167.-P. 179-181.