Тест-система [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.02, кандидат ветеринарных наук Бобоев, Гиёсиддин Юнусович

• Бобоев, Гиёсиддин Юнусович
• кандидат ветеринарных наук
• 2012

Оглавление диссертации кандидат ветеринарных наук Бобоев, Гиёсиддин Юнусович

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

2.1. Краткая характеристика ЧМЖЖ.

2.2. Эпизоотология ЧМЖЖ.

2.2.1. Распространение ЧМЖЖ.

2.2.2. Факторы распространения ЧМЖЖ.

2.3. Биологические свойства вируса ЧМЖЖ.

2.4. Физико-химические свойства вируса ЧМЖЖ.

2.5. Антигенные свойства вируса ЧМЖЖ.

2.6. Диагностика ЧМЖЖ.

2.7. Молекулярно-генетические методы диагностики.

2.7.1. Полимеразная цепная реакция.

2.7.2. Применение ПЦР для диагностики ЧМЖЖ.

2.8 .Выводы по обзору литературы.

СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

3.1. Материалы.

3.1.1. Вирусы и вируссодержащие материалы.

3.1.2. Реактивы, растворы и оборудование.

-33.2. Культивирование и титрование вируса ЧМЖЖ.

3.3. Очистка и концентрирование вируса ЧМЖЖ.

3.4. Оценка эффективности методов очистки и концентрирования 41 вируса ЧМЖЖ.

3.5. Электрофоретический анализ белков ЧМЖЖ.

3.6. Электрофоретический анализ вирусного белка в ПААГе.

3.7. Выделение нуклеиновых кислот из очищенных препаратов 42 вирусов, культуральных и органо-тканевых вируссодержащих материалов.

3.7.1. Выделение РНК из очищенных и концентрированных препаратов вируса ЧМЖЖ.

3.8. Сбор данных нуклеотидных последовательностей вируса.

3.9. Сравнительный анализ нуклеотидных последовательностей.

3.10. Конструирование праймеров.

3.11. Синтез и очистка олигонуклеотидов.

3.11.1 Синтез к ДНК на РНК вируса.

3.12. Оптимизация параметров постановки ПЦР при идентификации

3.12.1. Электрофоретический анализ нуклеиновых кислот.

3.12.2. Определение чувствительности и специфичности ПЦР.

3.12.3. Определение диагностической ценности ПЦР.

3.13. Постановка и учет результатов серологических реакций.

3.13.1. Подготовка проб патологического материала.

-43.13.2. Постановка РДП.

3.13.3. Постановка ИФА.

3.14. Статистическая обработка данных.

4. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

4.1. Очистка и концентрирование вируса ЧМЖЖ.

4.1.1. Подбор оптимальных условий культивирования вируса 50 ЧМЖЖ.

4.1.2. Получение очищенных и концентрированных препаратов 51 вируса ЧМЖЖ из вируссодержащих материалов.

4.1.3. Электронномикроскопическое изучение морфологии и 53 структуры вируса ЧМЖЖ.

4.2. Подбор оптимальных методов выделения РНК вируса.

4.3. Определение физико-химических свойств РНК вируса ЧМЖЖ.

4.3.1. Определение константы седиментации РНК вируса ЧМЖЖ.

4.3.2. Определение плавучей плотности РНК вируса ЧМЖЖ.

4.4. Поиск и анализ нуклеотидных последовательностей генома 58 вируса чумы МЖЖ в международных базах данных.

4.5. Разработка метода ПЦР для идентификации вируса ЧМЖЖ.

4.5.1. Подбор праймеров.

4.5.2. Подбор и отработка температурно-временного режима.

4.5.3. Подбор оптимальных условий проведение ПЦР.

-54.5.4. Определение специфичности и чувствительности ПЦР при идентификации ЧМЖЖ.

4.5.5. Тест-система для диагностики ЧМЖЖ на основе ПЦР.

4.6. Комиссионная апробация тест-системы для диагностики 82 ЧМЖЖ на основе ПЦР.

4.7. Эпизоотологический мониторинг и использование метода ПЦР 86 для выявления кДНК вируса ЧМЖЖ в полевых материалах.

5. ОБСУЖДЕНИЕ.

6. ВЫВОДЫ.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Тест-система [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции»

Актуальность проблемы

Среди многих проблем Таджикистана, связанных с интенсификацией животноводства, существует и такая, как разработка и усовершенствование методов и средств борьбы с заразными заболеваниями животных и их профилактика. В значительной мере её решение определяется уровнем знаний биологии и экологии возбудителей заболеваний, климато-географических и биологических факторов местности и их влияния, как на микро-, так и на макроорганизмы.

Однако эпизоотология, экология возбудителей многих социально и экономически опасных заболеваний животных, таких как сибирская язва, эмфизематозный карбункул, энтеротоксемия, контагиозная эктима овец, катаральная лихорадка овец и многие другие в Таджикистане недостаточно изучены. К таким инфекциям относится и чума мелких жвачных животных, тогда, как известно, что без изучения эпизоотологической ситуации и свойств возбудителя немыслима организация эффективных мер борьбы с этой болезнью.

Чума мелких жвачных животных (ЧМЖЖ) - чрезвычайно инфекционное заболевание домашних и диких жвачных животных. Впервые оно было зарегистрировано в Западной Африке (Кот - Дивуаре) в 1942 году. Постепенно было выявлено, несколько клинических одинаковых болезней, возникающих в других частях Западной Африки.

Чума мелких жвачных животных выявлена во многих Африканских странах, расположенных между Атлантическим Океаном и Красным морем.

Последние годы болезнь была зарегистрирована на Ближнем Востоке и Аравийском Полуострове, в таких странах, как Исламская Республика Ирана, Ирак, Израиль, Иордания, Кувейт, Ливан, Оман, Саудовская аравия, Объединенные Арабские Эмираты и Йемен, а также есть серологическое подтверждение в Сирийской арабской Республике и Турции. Известны вспышки ЧМЖЖ в Индии, Непале, Бангладеш, Пакистане и Афганистане. ЧМЖЖ в странах бывшего Советского Союза недостаточно изучены.

В Таджикистане до недавнего времени не имелось сообщений о присутствии вируса ЧМЖЖ. И лишь благодаря болыпым усилиям Службы государственного ветеринарного надзора МСХ РТ, сотрудниками ФАО ООН и сотрудниками Научно-Производственного предприятия «Биологические препараты» Республики Таджикистан и РГП Научно-исследовательского института проблем биологической безопасности Республики Казахстан был проведён в овцеводческих хозяйствах республики эпизоотологический мониторинг степенни зараженности ЧМЖЖ.

В Таджикистане ЧМЖЖ была подтверждена экспертной лабораторией МЭБ.

Экономический ущерб от ЧМЖЖ в Таджикистане значительный. В ряде хозяйств согласно данным ветеринарной отчетности РТ заболеваемость овец и коз в среднем превышало 40%-45%.

Недостаточная изученность заболевания, отсутствие методов диагностики, мер борьбы и специфической профилактики поставили перед нами разрешение следующих вопросов.

Для успешной борьбы с ЧМЖЖ необходимы глубокие знания эпизоотологии болезни, возбудителя болезни циркулирующего в данном регионе, природно-климатических особенностей местности и методов ведения животноводства.

Для диагностики и идентификации вируса ЧМЖЖ на сегодняшний день в мире разработаны и применяются различные серологические и иммунологические методы. Все они имеют различную диагностическую ценность - одни требуют значительных затрат по времени, другие имеют низкую чувствительность и специфичность [133, 134, 135, 136]. Поэтому усовершенствование и разработка более чувствительных и специфичных, а также экспрессных методов диагностики, остается актуальной проблемой.

Метод ПЦР имеет ряд преимуществ - прямое определение ДНК возбудителя, высокая специфичность, высокая чувствительность, универсальность процедуры, простота и удобство проведения анализа, сравнительно небольшие затраты времени на проведение анализа. В зарубежных странах метод ПЦР успешно применяют для диагностики ЧМЖЖ [56, 57, 133, 134]. Разработка эффективных, быстрых и надежных методов диагностики ЧМЖЖ является весьма актуальной проблемой для Таджикистана.

Цель и задачи исследования.

Целью работы являлась разработка тест-системы [набора] для диагностики ЧМЖЖ, с использованием компьютерно-моделированных и синтезированных специфических праймеров.

Для достижения указанной цели поставлены следующие задачи:

1. Отработать оптимальные методы очистки и концентрирования вируса ЧМЖЖ из вируссодержащих материалов с целью получения вирусной РНК;

2. Отработать оптимальные методы выделения РНК из очищенного вируса ЧМЖЖ;

3. Сконструировать, отобрать и синтезировать оптимальные специфические праймеры для амплификации участка геномной кДНК вируса ЧМЖЖ;

4. Отработать оптимальные условия проведения ПЦР (временный и температурный режим реакции, концентрация основных компонентов в реакционной смеси) при выявлении кДНК вируса ЧМЖЖ;

5. Изучить специфичность и чувствительность ПЦР системы при выявлении кДНК вируса ЧМЖЖ.

Научная новизна работы

Впервые сконструированы и синтезированы оригинальные праймеры для амплификации фрагмента гена РНК-полимеразы вируса ЧМЖЖ, имеющие нуклеотидный состав:

- РСЯРРРЛМЗ;

- РСЯРРЮ/гЗ.

Данные праймеры ограничивали участок кДНК вируса ЧМЖЖ размером 274 п.о.

Установлено, что использование подобранных праймеров, позволяет сократить общее время проведения анализа. Показано, что для отжига данных специфических праймеров и наработки ПЦР-продукта размером 274 п.о. достаточно по 60 с.

Разработан и апробирован вариант ПЦР тест-системы для детекции кДНК вируса ЧМЖЖ.

Основные положения, выносимые на защиту:

- сконструированные, отобранные и синтезированные специфические праймеры могут быть использованы для амплификации участка геномной к ДНК вируса ЧМЖЖ размером 274 п.о.;

- предлагаемый температурно-временной режим, обеспечивающий отжиг праймеров и синтез ПЦР-продукта, позволяет уменьшить время постановки диагноза на ЧМЖЖ;

- создан ПЦР тест-системы для детекции кДНК вируса ЧМЖЖ, позволяющий упростить и сократить время постановки диагноза, значительно повысить эффективность обнаружения вируса, в том числе на ранних сроках инфекции.

Практическая значимость работы

Разработана ПЦР тест-система для детекции кДНК вируса ЧМЖЖ, которая является высокочувствительной, простой в исполнении, позволяет поставить диагноз в короткие сроки, включая ранние стадии инфекции.

По результатам исследований разработана и составлена нормативно-техническая документация, включающая:

- Тест-система [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции, СТ 405-1919-04 ГП-050-2012 (28 февраля 2012г.);

- Временная инструкция по изготовлению и контролю тест-системы [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции (28 февраля 2012г.);

- Временное наставление по применению тест-системы [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции (28 февраля 2012г.);

Тавсияхо оид ба гузаронидани тадбирхои зиддиэпизооти ва пешгирикунанда хангоми тоуни чорвои хурди шохдор (Рекомендации по проведению противоэпизоотических мероприятий при чуме мелких жвачных животных (15 марта 2011г.)).

Таким образом, полученные в диссертационной работе результаты позволяют упростить диагностику ЧМЖЖ и повысить её эффективность, что может сократить экономические потери в животноводстве от данного заболевания.

Апробация работы

Основные положения работы доложены и обсуждены на: заседаниях Ученого Совета Научно-производственное предприятие «Биологические препараты» (Среднеазиатского ящурного института) Таджикская Академия сельскохозяйственных наук - 2003-2011гг. Основные положения диссертационной работы изложены и обсуждены на научно -теоретических конференциях в гг. Бишкеке Республики Кыргызстан, в Казани и Москве Российской Федерации.

Публикации по теме диссертации

По теме диссертационной работы опубликовано 12 научных работ, из них три статьи в изданиях, по перечню ВАК Российской Федерации, в которых изложены основные положения и выводы по изучаемым вопросам.

Личный вклад соискателя

Экспериментальные данные получены автором самостоятельно. Теоретическое обоснование, проведение экспериментов, анализ и обработка полученных данных проведена при личном участии автора и сотрудников РГП Научно- исследовательского института проблем биологической безопасности Республики Казахстан. Результаты работы опубликованы и апробированы в производственных условиях.

Автор выражает искреннюю благодарность и признательность за неоценимую помощь, оказанную при выполнении данной работы, критическую оценку и ценные советы при оформлении диссертации сотрудникам РГП Научно- исследовательского института проблем биологической безопасности Республики Казахстан, Ж.К. Кошеметову, С. Нурабаеву, Hi ill «Биологические препараты» ТАСХН Т.К. Висковой, М.И. Косумбекову.

Структура и объем диссертации

Диссертационная работа изложена на 131 странице компьютерного текста (Word) и состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения, выводов, практических предложений и списка литературы. Список используемой литературы включает 138 источников, из которых 114 иностранных. Диссертация иллюстрирована 29 рисунками, 9 таблицами. Приложение на 3 страницах.

Заключение диссертации по теме «Кормление сельскохозяйственных животных и технология кормов», Бобоев, Гиёсиддин Юнусович

6. выводы

По результатам исследований можно сделать следующие выводы:

1. Подобраны оптимальные условия очистки и концентрирования вируса ЧМЖЖ штамма «Темурмалик», позволяющие получать вирус, пригодный для выделения РНК. Очистка и концентрирование через ДЭАЭ-целлюлозы позволил сконцентрировать вирус ЧМЖЖ в 100 раз с о концентрацией вирусных белков (5,26±0,44) мг/см .

2. Подобраны оптимальные условия выделения нативных препаратов геномной РНК из очищенного и концентрированного вируса ЧМЖЖ штамма «Темурмалик», позволяющие получать высокоочищенную и нефрагментированную нуклеиновую кислоту. Обработка вируса протеиназой К в присутствии додецилсульфата натрия и инкубирование при 56оС в течение часа с последующей экстракцией фенол/хлороформом позволяет получать образцы вирусной РНК с выходом 15-25%.

3. Впервые сконструированы и синтезированы специфические праймеры на ген тимидинкиназы для амплификации участка геномной к ДНК вируса ЧМЖЖ, имеющие нуклеотидный состав:

-РСРМРРЯУА;

- РСЯРРЮ/г1.

4. Установлено, что для отжига сконструированных праймеров и синтеза ПЦР-продукта требуется 30; 30 и 60 секунд для каждой стадии. Определен оптимальный состав реакционный смеси при проведении ПЦР по обнаружению кДНК вируса ЧМЖЖ.

5. Предлагаемая ПЦР тест-система позволяет выявлять кДНК вируса ЧМЖЖ в пробах органов взятых от больных и павших животных, при отсутствии у них клинической картины.

7. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Разработана и оформлена научно-техническая документация:

- Тест-система [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции, СТ 405-1919-04 ГП-050-2012 (28 февраля 2012г.);

- Временная инструкция по изготовлению и контролю тест-системы [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции (28 февраля 2012г.);

- Временное наставление по применению тест-системы [набор] для диагностики чумы мелких жвачных животных методом полимеразной цепной реакции (28 февраля 2012г.);

Тавсияхо оид ба гузаронидани тадбирхои зиддиэпизооти ва пешгирикунанда хангоми тоуни чорвои хурди шохдор (Рекомендации по проведению противоэпизоотических мероприятий при чуме мелких жвачных животных (15 марта 2011г.)).

Лабораторный вариант ПЦР тест-системы для детекции кДНК вируса ЧМЖЖ рекомендуется к использованию в ветеринарных лабораториях и животноводческих хозяйствах Республики Таджикистан. Данная тест-система адаптирована к вирусам, циркулирующим на территории Таджикистана.

Результаты данных исследований можно использовать при серийном выпуске тест-систем для диагностики ЧМЖЖ на основе ПЦР.

Список литературы диссертационного исследования кандидат ветеринарных наук Бобоев, Гиёсиддин Юнусович, 2012 год

1. Бакулов И.А. Эпизоотическая ситуация в мире по особо опасным болезням животных к концу XX столетия / Бакулов И.А. // Материалы межд. науч.-практ. конф. 15-16 авг. 2000г., г. Покров 2000г. С. 11-17.

2. Бакулов И.А. Мировая эпизоотическая ситуация по болезням диких животных / Бакулов И.А., Котляров В.М. // Материалы межд. науч. -практ. конф. 16-18 апр. 2002г., г. Покров.

3. Диев В.И. Изучение чувствительных различных клеточных культур к вирусу чумы мелких жвачных животных / Диев В.И., Соколов Л.Н., Мамкова Р.В., Евсеев A.M., Куляшбекова Ш.К. // Вирусные болезни сельскохозяйственных животных. Владимир, 1995. - С.94.

4. Кутумбетов Л.Б. Динамика накопления вируса ЧМЖЖ в органах и тканях больных и павших животных / Кутумбетов Л.Б., Л.В. Половиника, А.Г. Демченко и др.// Ветеринарная вирусология: тез. докл. науч.- теорет.конф. -Гвардейский, 1989. Т.1. С.41-43.

5. Курченко, Г.А. Чума мелких жвачных животных / Г.А. Курченко // Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии: тез.докл. науч. конф. Покров, 1985. С.63-67.

6. Михалкин И.П. Чумы мелких жвачных / Михалкин И.П. // Сибирская язва и другие опасные инфекционные болезни животных. Покров, 2005. - С.159-163.

7. Митин Н.И. Чума мелких жвачных / Митин Н.И. // Карантинные и малоизвестные болезни животных под редакцией И.А.Бакулова М. Колос 1983г.-С.106-108.

8. Мурватуллоев С. А., Шоназар Джилваи Муносиб. О Чуме мелких жвачных животных. \Ветеринария, Душанбе, 2009, №1, С. 28-32.

9. Русанов, P.C. Устойчивость вируса ЧМЖ к различным температурным воздействиям и ультрафиолетовому облучению / P.C. Русанов, Б. Н. Карпов, Г.А. Гуленок // Тез. докл. науч. конф. по вет. вирусологии -Гвардейский, 1983.- С.293-295.

10. Степанов А.В Персистенция вируса чума мелких жвачных в перевиваемых культуре клетке / Степанов A.B. Вишняков И.Ф., Стрижаков А. // Материалы межд. науч. практ. конф. 15-16 авг. 2000г. г. Покров 2000. - С. 206-209.

11. Степанов A.B. Молекулярно-генетический метод диагностики чумы мелких жвачных /Степанов A.B. // Материалы межд. науч.-практ. конф. 15-16 авг. 2000г., г. Покров.

12. Степанов, A.B. Использование полимеразной цепной реакции для выявления вируса чумы мелких жвачных / A.B. Степанов, Я.С. Цыбанов, И.Ф. Вишняков // Научные основы производства ветеринарных биологических препаратов. Щёлково, 200. С. 232-233.

13. Сюрин В.Н. Руководство по ветеринарной вирусологии /Сюрин В.Н.// Москва-1966г. С. 120-127.

14. Сюрин B.H. Диагностика вирусных болезней животных.-М.: Агропромиздат, 1991.-С.90-101.

15. Сюрин В.Н. Вирусные болезни животных / Сюрин В.Н., А.Я. Самуйленко, Б.В. Соловьев, Н.В. Фомина. М.: ВНИТИБП, 1998. - С. 928.

16. Справочник под ред. Д.Ф. Осидзе., М.Агропромиздат./ Инфекционные болезни животных // 1987г. С.73.

17. Abedunde А.А. Excretion of the virus of peste des petits ruminants by goats-Bull / Abedunde A.A, Adu F.D. // Anim. Health Product in Africa, 1977, v. 25,3.307-311.

18. Abu-Elzein EME. Isolation of peste des petits ruminants from goats in Saudi Arabia /Abu-Elzein EME, Hassanien M.M, Al-Afaleq AI, Abdelhadi M.A., Honsawai FMJ.// Vet Rec 1990; 27:309.

19. Ajala O.O. Treatment of peste des petits ruminants (PPR) in pre-weaned West African Dwarf Goat /Ajala O.O., Daneji, A.l, Kumshe H.A. and Oyeyemi M. О.// Kids. Trop. Vet. 1(1997) 15: 39-42.

20. Alcigir G. Tiirkiye'de kuzularda peste des petits ruminants virus enfeksiyonunun patomorfolojik ve immunohistolojik ilk tanimi /Alcigir G., Vural S.A., Toplu N.//Ankara Universitesi Veteriner Fakiiltesi Dergisi 1996;43:181-9.

21. Al-Naeem A.Epizootiological aspects of peste des petits ruminants and rinderpest in sheep and goats in Saudi Arabia /Al-Naeem A, Abu-Elzein EME, Al-Afaleq AI.// Rev Sci Tech (International Office of Epizooties) 2000; 19:855-8.

22. Anderson J. The detection of antibodies against peste des petits ruminants virus in cattle, sheep and goats and the possible implication to rinderpest control programmes /Anderson J. & McKay J.A. // Epidemiol. Infect., (1994).112, 225-234.

23. Appel M.J. Dog lymphocyte cultures facilitate the isolation and growth of virulent canine distemper virus. /Appel M.J., S. Pearce Kelling and B.A. Summers. 1992.//J. Vet. Diagn. Invest. 4:258-263.

24. Awa D.N.Economics of prophylaxis against peste des petits ruminants and gastrointestinal helminthosis in small ruminants in north Cameroon /Awa D.N., Njoya A., Ngo Tama A.C.// Trop Anim Health Prod 2000; 32:391-403.

25. Barrett T. Rinderpest and distemperviruses / Barrett T. // In: R.G Webster and A. Granoff(eds). Encvci. Virol. (1994). 3: 1260-1268.

26. Barrett T. Dolphin and porpoise morbilliviruses are genetically distinct from phocine distemper virus /Barrett T., Visser, I.KG., Mammaev, L., Van Bressem, M.F., Osterhaus, A.D.M.E.// (1993). Virology 193: 1010-1012.

27. Brown C.C. An immunohistochemical study of the pneumonia caused by peste des petits ruminants virus /Brown C.C., Mariner J.C. and Olander H. J.// 1991. Vet. Pathol. 28:166-170.

28. Banyard A. C. A role for virus promoters in determining the pathogenesis of Rinderpest virus in cattle / Banyard A. C., Baron M. D., Barrett T.// (2005). J Gen Virol 86: 1083-1092 Abstract. [Full Text]

29. Baron M.D. The Plowright vaccine strain of Rinderpest virus has attenuating mutations in most genes /Baron M.D., Banyard A.C., Parida S., Barrett T.// (2005).J Gen Virol 86: 1093-1101 Abstract.[Full Text]

30. Bao J, Li L, Wang Z, Barrett T, Suo L, Zhao W, et al. Development of one-step real-time RT-PCR assay for detection and quantization of peste des petits ruminants virus. J. Virol. Methods. 2008; 148:232-236.

31. Braide V.P. Peste des petits ruminants, a review /Braide V.P.//FAO World Animal Review, (1981). 39: 25-28.

32. Bundza A. Experimental peste des petits ruminants (goat plague) in goats and sheep / Bundza A., Afshar A., Dukes T.W., Myers D.J., Dulac G.C. & Becker S.A.W.E.// (1988). Can. J. Vet. Res., 52, 46-52.

33. Bourdin P. Note sur la structure du virus de la Peste des petits ruminants-Rev/Bourdin P., Laurent A.// Elev. Med. Vet. Pays trop, 1967,20, 3, p. 383-386.

34. Bourdin P. Em ploi d'um vaccin antibo vipestigue produit sur cultures cellulaires dans la prophylaxia de la peste des pepits ruminants au Dahomey-Rev /Bourdin P., Rioche M., Laurent A.// Elev. Med. Vet. Pays trop, 1970, v.23, 3, p. 295-300.

35. Bourdin P. La peste des petits ruminants et so prophylaxia an Senegal en Afrique de L'Ouest-Rev / Bourdin P.//Elev. Med. Pays trop, 1967, v.36, 4, p. 71-74.

36. Cilli V. La peste dei piccoli ruminanti. Arcu /Cilli V., Arush M.A.// Vet. Ital., 1980, v.31, 6, p. 147- 154.

37. Couacy-Hymann E. Rapid and sensitive detection of peste des petits ruminants virus by a polymerase chain reac-tion assay /Couacy-Hymann E., Roder F., Hurard C., Guillou J.P., Libeau G.// J. Virol. Meth. -2002. -100. -P. 17-25.

38. Cosby S.L. Characterisation of a seal Morbillivirus /Cosby S.L., S. Mc Quaid, N. Duffy, C. Lyons, B. K. Rima, G. M. Allan, S. J. McCullough S., Kennedy J. A., Smyth F., Mc Neilly, C. Craig and C. Orvell.// 1988.Nature (London) 336:115-116.

39. Couacy-Hymann R.F. Rapid and sensitive detection of peste des petits ruminants virus by a polymerase chain reaction assay /Couacy-Hymann R.F., Hurard C., Guillou J.P., Libeau G. & Diallo. A.// (2002). J. Virol. Methods, 100, 17-25.

40. Croi K.S. Monoclonal antibody- based competitive ELISA for simultaneous detection of rinderpest virus and peste des petits rumi-nants virus antibodies /Croi K.S., Naha J.J., Choi C.U.// Veterinary Microbiology. -2003.-96.-P. 1-16.

41. Dardiri A.H. Response of American goats and cattle to peste des petit ruminants /Dardiri A.H., De Boer C.J, Hamdy F.M.// Vet Lab Diagn 1976;337—344.

42. Dardiri, A.H. Peste des petits ruminants / A.H. Dardiri // Reference Manual. Foreign Animal Disease Courses. 1978. P. 92-102.

43. Diallo A. Resent developments in the diagnosis of rinderpest and peste des petits ruminants /Diallo A., Libeau G., Couacy-Hymann E., Barbron M.// Veterinary Microbi-ology. -1995. -44. P. 307-317.

44. Diallo A. Differentiation of rinderpest and peste des petits ruminants viruses using specific cDNA clones /Diallo A., T. Barrett M., Barbron S. M., Subbarao and W. P.Taylor.// 1989.J. Virol. Methods 23:127-137.

45. Diallo A. Attenuation souche de virus de la peste des petits ruminants: candidat peour un vaccine homologue vivant /Diallo A., Taylor W.P., Zeferve P.C., Provost A.// Revue Elev. Med. Vet. Pays Trop., 1989, №42, №3, p. 311319.

46. Diallo A. Comparison of proteins induced in cells infected with rinderpest and peste des petits ruminants viruses / Diallo A., T. Barrett, P.-C. Lefvevre, and W. P. Taylor.// 1987. J. Gen. Virol. 68:2033- 2038.

47. Durojaiye O.A. Precipitating antibody in sera of goats naturally affected with peste des petits ruminants /Durojaiye O.A.// Trop. Anim. Health Prod., 14,98-100.

48. Durojaiye O.A. (1984). Detection of the antigen of peste des petits ruminants virus in tissues by indirect immunofluorescence technique /Durojaiye O.A.// (1984). Niger. Vet. J., 13, 77-80.

49. Durojaiye O.A. Virological and serological diagnosis of peste des petits ruminants /Durojaiye O.A., Obi T.U. & Ojo O.// (1983).Trop. Vet., 1, 13-17.

50. Durojaiye O.A. Application of counter current immunoelectro-osmophoresis to the serology of peste des petits ruminants /Durojaiye O.A. & Taylor W.P.// (1984). Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop., 37, 272-276.

51. Dunn, S. D. 1986. Effects of the modifications of transfer buffer composition and the renaturation of proteins in gels on the recognition of proteins on Western blots by monoclonal antibodies /Dunn, S. D.// 1986. Anal. Biochem. 157:144-147.

52. El Hag Ali.B. The isolation of peste des petits ruminants virus (PPRV) from the Sudan /El Hag Ali, B., and W. P. Taylor.// 1984. Res. Vet. Sci. 36:1-4.

53. EMPRES (Livestock) Animal Production and Health Division Viale delle Terme di Cara-calla 00100 Rome, Italy 2005.

54. Furley C. W. An outbreak of peste des petits ruminants in a zoological collection /Furley, C. W., W. P. Taylor, and T. U. Obi.// 1987. Vet. Rec. 121:443-447.

55. Gargadennec L. & Lalanne A. (1942). La peste des petits ruminants /Gargadennec L. & Lalanne A.// (1942). Bull. Serv. Zoo. A.O.F., 5, p 15-21.

56. Gould, A.R. Comparison of the deduced matrix and fusion protein sequences of equine morbillivirus with cognate genes of the Paramyxoviridae /Gould, A.R. // (1996) Virus Research, 43, 17-31.

57. Gibbs E.P.L. The isolation of adenoviruses from goats appected with peste des petits ruminants in Nigeria Res /Gibbs E.P.L., Taylor W.P., Lawman M.L.P.//Vet. Sci., 1977, v. 23, 3,p. 331-335.

58. Gibbs E.P.L. Classitication of pesre des petits ruminants virus as the faurth member of the genus Morbillivirus Intervirology /Gibbs E.P.L. Taylor W.P, Lawman M.L.P. Bruanr J.// 1979, 11, p. 268-274.

59. Gilbert E.P.L. Adaptation olu virus de la des petits ruminants aux cultures cellulaires /Gilbert E.P.L., Monnier A.// Note prelimimaire -Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop., 1862, v.15 4, p. 321-325.

60. Haas L. Editing of morbillivirus P gene transcripts in infected animals /Haas L., Baron, M.D., Liess, B. and Barrett, T.// (1995) Veterinary Microbiology, 44, 299-306.

61. Hyatt A.D. Ultrastructure of equine Morbillivirus /Hyatt A.D., and Selleck, P.W.// (1996) Virus Research, 42, 1- 15.

62. Hamdy F. M. Etiology of stomatitis pneumoenteritis complex in Nigerian dwarf goats /Hamdy F. M., A. H. Dardiri, O. Nduaka, S. S. Breese, and E. C. Ihemelandu// 1976. Can. J. Comp. Med. 40:276-284.

63. Hamdy F.M. Response of white-tailed deer to infection with peste des petits ruminants virus /Hamdy F.M. and Dardiri, A.H.// (1976). J. Wildlife Diseases, 12:516-522.

64. Hamdy F.M. Immunological relationship brtween rinder pest and peste des petits ruminants viruses /Hamdy F.M., Dardyry A.H., Brease S.S., De Boer C.L.// Proc. 79-th. An. Med. of the V.S. Anim Heatth Assoc. Portland, Oregon, 1975, p. 168-179.

65. Helder R.S. Some virus diseases of domestic animals in the sultanate of Oman /Helder R.S., Barnett L.T.R., Gray D.F.// Trop Amim HI th Prod, 1980, v.12, 2, p. 107-114.

66. Haffar A. The matrix protein gene sequence analysis reveals close relation ship between peste des petits ruminants virus (PPRV) /Haffar A., Libeau G., Moussa A.// Veterinary Microbiology. -1999. -64. P. 69-75.

67. Imagawa D.T. Relationship among measles, canine distemper and rinderpest-viruses /Imagawa D.T.// Pradr. Med. Virol. 1968, v. 10, p. 160-193.

68. Ismail I.M. and House, J. (1990). Evidence and identification of peste des petits ruminants from goats in Egypt /Ismail I.M. and House, J.// (1990).Archiv fur Experimentelle Veterinärmedizin, 44(3):471-474.

69. Kingsbury D. W. Paramyxoviridae /Kingsbury D. W., M. A. Bratt P. W., Choppin R. P., Hanson Y., Hosaka V. ter Meulen E., Norrby W., Plowright R., Rott and W. H. Wunner.// 1978. Intervirology 10:137-152.

70. Laviada M. D. Detection of African horsesickness virus in infected spleens by a sandwich ELISA using two monoclonal antibodies specific for VP7 /Laviada M. D., M. Babin, J. Dominguez and J. M. Sanchez Vizcaino.// 1992.J. Virol. Methods 38:229-242.

71. Laurent A. Aspects biologigues de la multiplication au virus de la peste des petits ruminants on PPR sur les cultures cellulaires /Laurent A.// Rev. Elev. Med. Vet. Pays trop, 1968, v.21, 3, p. 297-308.

72. Lu W., F. A. Osorio, M. B. Rhodes and R. A. Moxley. 1991 A capture-enzyme immunoassay for rapid diagnosis of transmissible gastroenteritis virus /Lu W., F. A. Osorio, M. B. Rhodes and R. A. Moxley.// 1991J. Vet. Diagn. Invest. 3:119-123.

73. Lefevre P.C. and Diallo A. (1990). Peste des petits ruminants /Lefevre P.C. and Diallo A//(1990). Rev Sei Tech, OIE, 9(4):951-965.

74. Libeau G. Rapid differential diagnosis of rinderpest and peste des petits ruminants using an immunocapture ELISA /Libeau G., Diallo A., Colas F. & Guerre L.// (1994). Vet. Ree., 134, 300-304.

75. Lefevre P.C. Serological evidence of peste des petits ruminants in Jordan /Lefevre PC, Daillo A, Schenkel S, Hussein S, Staak G.//Vet. Rec.- 1991.- P. 110-128.

76. Libeau G. Development of a competitive ELISA for detecting antibod-ies to the peste des petits ruminants virus using a recombinant nucleoprotein /Libeau G. et al.// Vet. Sci. 1995. -58. - P. 50-55.

77. Limo Molecular cloning of the rinderpest virus matrix gene: comparative sequence analysis with other paramyxoviruses /Limo and Yilma// (1990) Virology, 175,323-327.

78. Mahdy M.M. et al (1988). Pathological studies of rinderpest like diseases in deer and goats in the United Arab Emirates /Mahdy M.M. et al// (1988). Egyptian Journal of Comparative Pathology and Clinical Pathology, 1(1):36-44.

79. Mahy B.W.J., Barrett T., Evans S., Anderson E.C., Bostock C.J. (1988). Characterisation of a seal Morbillivirus /Mahy B.W.J., Barrett T., Evans S., Anderson E.C., Bostock C.J.// (1988). Nature 336, 115.

80. Majiyagbe K.A. Rapid diagnosis of PPR infection, application of immuno-electro-osmophoresis (IEOP) technique /Majiyagbe K.A., Nawathe D.R. and Abegunde A.// (1984).Rev. Elev. Med. Vet. Pays Trop., 37, 11-15.

81. McCullough K.C. Identification of epitope (s) on the internal virion proteins of rinderpest virus which are absent from peste des petits ruminants virus (PPRV) /McCullough K.C., Obi T.U.// Veterinary Microbiology. -1991. -26. P. 313-321.

82. Nanda S. K. Rinderpest Virus Blocks Type I and Type II Interferon Action: Role of Structural and Nonstructural Proteins /Nanda S. K., Baron M. D.// (2006). J. Virol. 80: 7555-7568 Abstract.[Full Text].

83. Nawathe D.R., Majiyagbe K.A. and Abegunde, A. 1980. Paper presented at the International Workshop /Nawathe D.R., Majiyagbe K.A. and Abegunde, A.// 1980.Seminar on PPR in Sheep and Goats, September 1980, Ibadan.

84. Nawathe D.R. Experimental infection of domestic pigs with the virus of peste des petits ruminants /Nawathe D.R. and Taylor, W.P. // (1979).Trop Anim Hlth Prod, 11: 120-122.

85. Nawathe D.R. The control of pestedes petits ruminants in Nigeria /Nawathe D.R.// (1984).Prev. Vet.Med. 2: 147-155.

86. New Zealand Ministry of Agriculture and Fisheries (NZMAFF) (1991a). Peste des petits ruminants. Surveillance, 18(3): 19-20.

87. Neumann G., Whitt M. A., Kawaoka Y. (2002). A decade after the generation of a negative-sense RNA virus from cloned cDNA what have we learned /Neumann G., Whitt M. A., Kawaoka Y.// (2002). J Gen Virol 83: 2635-2662 Abstract.[Full Text],

88. Nonda Y.P. Chatterjee A., Purohit A.K., Diallo A. The isolation of peste des petits ruminants virus (PPRV) /Nonda Y.P. Chatterjee A., Purohit A.K., Diallo A.// Veterinary Microbiology. -1996. -51. P. 207-216.

89. Obi T. U., and D. Patrick. 1984. The detection of peste des petits ruminants (PPR) virus antigen by agar gel precipitation test and counter-immunoelectrophoresis /Obi T. U., and D. Patrick.// 1984.J. Hyg. 93:577-586.

90. Obi T. U. Dot enzyme immunoassay for visual detection of peste des petits ruminants virus antigen from infected caprine tissues /Obi T. U., and C. K. Ojeh.// 1989.J. Clin. Microbiol. 27:2096-2099.

91. Osterhaus A.D.M.E. Morbillivirus infections of aquatic mammals: newly identified members of the genus /Osterhaus A.D.M.E., De Smart R.L., Vas H.W., Robs P.S., Kenter M.J.H. and Barrett T.// (1995)Veterinary Microbiology, 44, 219-227.

92. Pandey K. D., M. D. Baron and T. Barrett. 1992. Differential diagnosis of rinderpest and PPR using biotinylated cDNA probes /Pandey K. D., M. D. Baron and T. Barrett.// 1992. Vet. Rec. 131:199-200.

93. Pavathe D.E. Experimental infection of domestic pigs with the virus of peste des petits ruminants Trop /Pavathe D.E., Taylor W.P.// Trop Amim HI th Prod, 1979,v.l 1, p. 120-122.

94. Plowright W. Studies with rinderpest virus in tissue culture. The use of attenuated culture virus as a vaccine for cattle /Plowright W., Ferris R.D.// Res. Vet. Sci., 1962, v.8, p. 172-182.

95. Pronob Dhara, Sreenivasaa B.P., Barrett T., et al. Recent epidemiology of peste des petits ruminants virus (PPRV) /Pronob Dhara, Sreenivasaa B.P., Barrett T., et al.// Veterinary Microbiology.-2002.-88.-P. 153-159.

96. Perl S. Peste des petits ruminants (PPR) of sheep in Israel: case report /Perl S., Alexander A., Yakobson B., Nyska A., Harmelin A., Sheikhat N., Shimshony A., Davidson N., Abramson M. & Rapoport E.// (1994). Israel J. Vet. Med., 49 (2), 59- 62.

97. Rima, B.K. The evolution of morbillivirases: a comparison of nucleocapsid gene sequences including a porpoise morbillivirus / B.K. Rima // Vet. Microbiol. -1995. Vol. 44. P. 127-134

98. Roeder P.L. Peste des petits ruminants in Ethiopian goats /Roeder PL, Abraham G, Kenfe G, Barrett T.// Trop Anim Health Prod 1994;26:69-73.

99. Shaila MS, Purushothaman V, Bhavasar D, Venugopal K, Venkatesan RA. Peste des petits ruminants of sheep in India /Shaila MS, Purushothaman V, Bhavasar D, Venugopal K, Venkatesan R.A.// Vet Rec 1989; 125:602.

100. Shaila M.S. Geographic distribution and epidemiology of peste des petits ruminants viruses Virus Res /Shaila, M.S., Shamaki, D., Morag, A.F., Diallo, A., Goatley, L., Kitching, R.P. and Barrett, T.// (1996). 43: 149-153.

101. Sumption K.J. Detection of peste des petits ruminants antigen in conjunctival smears of goats by indirect immunofluorescence /Sumption K.J., Aradom G., Libeau G. and Wilsmore A.J.// (1998).Vet. Rec., 142, 421-424.

102. Taylor W.P. The epidemiology of peste des petits ruminants in the Sultanate of Oman /Taylor W.P., Albusaidy S. Barrett T.// Vet. Microbiol., 1990. 22. P.-341-352.

103. Taylor, W. P. The isolation of peste des petits ruminants virus from Nigerian sheep and goats /Taylor, W. P., and A. Abegunde.// 1979.Res. Vet. Sci. 26:94-96.

104. Taylor, W. P. The distribution and epidemiology of peste des petits ruminants /Taylor, W. P.// 1984.Prev. Vet. Med. 2:157-166.

105. Taylor W.P. Protection of goats against peste des petits ruminants with attenuated rindesrpest virus /Taylor W.P.// Res. Vet. Sci. 1979, v.29, p. 321324.

106. Taylor W.P. Serological studies with the virus of peste des petits ruminants in Nigeria /Taylor W.P.// (1979). Res. Vet. Sci., 26, 236-242.

107. Worrwall E.E. Xerovac: an ultra-rapid method for the dehydration and preservation of live attenuated rinderpest and peste des petits ruminants vaccines /Worrwall E.E., Litamoi J.K., Seek B.M. & Ayelet G.ll (2001). Vaccine, 19, 834-839.

108. Wosu L.O. Haemagglutination test for diagnosis of peste des petits ruminants disease in goats with samples from live animals /Wosu L.O.// (1991). Small Rumin. Res., 5, 169-171.

109. Wosu L.O. Current status of peste des petits ruminants (PPR) disease in small ruminants-a review article /Wosu L.O.// Stud Res Vet Med 1994;2:83-90.13.

110. Wosu, L.O. (1989), Management of clinical cases of peste des petis ruminants (PPR) disease in goats /Wosu, L.O. // (1989) Beitr. Trop. Landw. Vet. Med. 27 357-361.

111. Zhiliang Wang, Jingyue Bao, Xiaodong Wu, Yutian Liu, et. al. Peste des Petits Ruminants Virus in Tibet, China. EID Journal Home, 2009, V. 15, N. 2.