Теоретическое и экспериментальное обоснование подходов к стандартизации иммуноглобулина человека против COVID-19 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Смолянова Татьяна Ивановна

• Смолянова Татьяна Ивановна
• кандидат наук
• 2023

Оглавление диссертации кандидат наук Смолянова Татьяна Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Обзор эпидемиологической ситуации, вызванной новой коронавирусной инфекцией и терапевтических средств для лечения COVID-19

1.2. Анализ современного состояния проблемы оценки уровня антител, специфичных

к вирусу SARS-CoV-2 для оценки показателя специфической активности

1.3. Состояние проблемы разнообразия ИФА тест-систем для определения антител к SARS-CoV-2

1.4. Номенклатура лекарственных препаратов специфических иммуноглобулинов человека и обзор методик оценки уровня специфической активности

1.4.1. Номенклатура лекарственных препаратов специфических иммуноглобулинов

1.4.2. Обзор методик оценки уровня специфической активности в лекарственных препаратах иммуноглобулинов человека

1.4.3. Реакция вируснейтрализации на модели животных

1.4.4. Реакция вируснейтрализации на культуре клеток

1.4.5. Определение уровня специфической активности в реакции торможения гемагглютинации

1.4.6. Иммуноферментный метод

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Материалы

2.1.1. Объекты исследования

2.1.2. Реактивы и материалы

2.1.3. Оборудование, средства измерения, материалы

2.2. Методы

2.2.1. Наработка вируса, определение инфекционного титра и подтверждение методом ПЦР

2.2.2. Определение титра вируснейтрализующих антител (ВНА) методом РВН

2.2.3. Определение уровня иммуноглобулинов класса G специфичных к SARS-CoV-2 методом ИФА

2.3. Изучение фармакокинетики препарата КОВИД-глобулин

2.4. Статистические методы

ГЛАВА 3. ВЫБОР МЕТОДА ОЦЕНКИ СОДЕРЖАНИЯ ВИРУСНЕЙТРАЛИЗУЮЩИХ АНТИТЕЛ К SARS-COV-2 В ОБРАЗЦАХ ПЛАЗМЫ И ЛЕКАРСТВЕННЫХ ПРЕПАРАТАХ ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ COVГО-19

3.1. Разработка научно-методических подходов к выбору метода определения специфической активности противовирусных иммуноглобулинов

3.2. Исследование образцов лекарственных препаратов Иммуноглобулина человека нормального на содержание вируснейтрализующих антител, специфичных к SARS-CoV-2, в РВН и методом ИФА

3.3. Создание Банка образцов

3.4. Исследование Банка образцов на содержание антител в РВН и методом ИФА

3.4.1. Определение титра вируснейтрализующих антител в образцах Банка образцов

3.4.2. Определение чувствительности и специфичности тест-систем ИФА на выборке образцов Банка образцов

3.5. Определение процентного содержания образцов, содержащих вируснейтрализующие антитела к SARS-CoV-2 в группе здоровых доноров

3.6. Оценка коррелятивной связи между титрами антител в образцах, полученными в РВН, и результатами исследования антител, полученными методом ИФА с использованием различных наборов реагентов, в образцах плазмы

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 4. РАЗРАБОТКА МЕТОДИКИ КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К SARS-COV-2 В ФАРМАЦЕВТИЧЕСКОЙ СУБСТАНЦИИ (ПЛАЗМЕ

КРОВИ ЧЕЛОВЕКА)

4.1 Разработка первичного стандартного образца предприятия для количественного

определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции

4.1.1 Лиофильное высушивание

4.1.2 Оценка показателей качества первичного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции

4.1.3 Определение количества антител к SARS-CoV-2 в СОП-ФС-1

4.2. Валидация методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 в

фармацевтической субстанции методом ИФА с использованием наборов

реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ

4.2.1. Валидация методики определения концентрации антител к SARS-СоV-2 методом

ИФА с использованием тест-системы ИФА ГНЦ

4.2.2. Валидация методики определения концентрации антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции методом ИФА с использованием набора реагентов ИФА ЕИ

4.3. Аттестация полученного СОП-ФС-1 с использованием референс-панели ВОЗ №BSC 20/268

4.4. Изучение стабильности СОП-ФС-1 и установление срока годности

4.5. Получение вторичного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции

4.6. Аттестация вторичного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции по показателю специфической активности в антиковидных единицах

4.7. Применение разработанных стандартных образцов количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА СТАНДАРТНОГО ОБРАЗЦА ДЛЯ КОЛИЧЕСТВЕННОГО

ОПРЕДЕЛЕНИЯ АНТИТЕЛ К SARS-СОV-2 В ЛЕКАРСТВЕННОМ ПРЕПАРАТЕ

ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ COVID-19

5.1. Разработка первичного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19

5.1.1. Оценка качества разработанного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19

5.1.2. Определение количества антител к SARS-CoV-2 в СОП-1

5.2. Валидация методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина против COVID-19 методом ИФА с использованием наборов реагентов ИФА ГНЦ и ИФА ЕИ

5.2.1. Валидация методики количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 методом ИФА с использованием наборов реагентов ИФА ГНЦ

5.2.2. Валидация методики определения концентрации антител к SARS-СоV-2 методом ИФА в препаратах иммуноглобулинов с использованием набора реагентов ИФА

ЕИ

5.3. Гармонизация значения специфической активности СОП-1, выраженного в АКЕ/мл, со значениями референс-панели ВОЗ NIBSC 20/268, охарактеризованной

в единицах связывания ВАи/мл

5.4. Изучение стабильности первичного стандартного образца количественного определения антител к SARS-CoV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина против COVID-19

5.5. Получение вторичного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2

5.6. Применение разработанных первичного и вторичного стандартных образцов для количественного определения антител к SARS-CoV-2

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ГЛАВА 6. ИСПОЛЬЗОВАНИЕ РАЗРАБОТАННОЙ МЕТОДИКИ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СПЕЦИФИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРИ ИЗУЧЕНИИ ФАРМАКОКИНЕТИКИ

ИММУНОГЛОБУЛИНА ЧЕЛОВЕКА ПРОТИВ COVID-19

6.1. Изучение селективности ИФА ГНЦ

6.2. Исследование фармакокинетических параметров препарата иммуноглобулина против COVID-19

ВЫВОДЫ К ГЛАВЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ А

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ПРИЛОЖЕНИЕ В

ПРИЛОЖЕНИЕ Г

ПРИЛОЖЕНИЕ Д

ПРИЛОЖЕНИЕ Е

ПРИЛОЖЕНИЕ Ж

ПРИЛОЖЕНИЕ З

ПРИЛОЖЕНИЕ И

ПРИЛОЖЕНИЕ К

ПРИЛОЖЕНИЕ Л

ПРИЛОЖЕНИЕ М

ПРИЛОЖЕНИЕ Н

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Теоретическое и экспериментальное обоснование подходов к стандартизации иммуноглобулина человека против COVID-19»

Актуальность темы исследования

Всемирная организация здравоохранения (ВОЗ) 11 марта 2020 г. официально признала вспышку инфекции COVID-19, вызванную вирусом SARS-CоV-2, пандемией [1]. В сложившейся эпидемиологической ситуации потребовалось создание эффективных и специфических лекарственных препаратов (ЛП) для лечения и профилактики новой коронавирусной инфекции.

Одним из первых решений систем здравоохранения во всем мире было использование плазмы, содержащей антитела к SARS-CоV-2, для лечения заболевания. Указанный метод лечения применялся при вспышках различных инфекционных заболеваний в прошлом, начиная со времен «испанского» гриппа [2-5]. Результаты нескольких исследований подтверждают положительный эффект использования плазмы, содержащей антитела к SARS-CoV-2, для лечения пациентов с COVID-19 на разных стадиях заболевания [6-16]. В то же время использование плазмы крови человека всегда сопряжено с риском посттрансфузионных осложнений различного характера, в том числе заражением гемотрансмиссивными инфекциями, повышенным риском тромбообразования, риском развития неконтролируемой продукции цитокинов, факторов свертывания крови и других молекул, которые могут вызвать нежелательные побочные реакции у пациента-реципиента [17-23].

В связи с этим применение лекарственного препарата иммуноглобулина человека (ЛП ИГЧ), содержащего антитела, специфичные к SARS-CoV-2, представлялось более безопасным для пациентов.

Способы производства препаратов крови, включая фракционирование плазмы, последующие этапы очистки продукта и специализированные процедуры, направленные на инактивацию или удаление вирусов, обеспечивают большую безопасность пациентов при использовании ЛП ИГЧ по сравнению с использованием плазмы для переливания [24-29].

Интерес к вопросу создания таких лекарственных препаратов (ЛП) продемонстрировали ведущие мировые производители препаратов крови, которые начали разработку иммуноглобулинов против COVID-19 [30-38].

Кроме того, технология получения ЛП ИГЧ предполагает использование плазмы большого числа доноров, что обеспечивает широкий спектр специфичности антител в отношении различных эпитопов антигена. Следовательно, ЛП ИГЧ против COVID-19, полученный из большого пула плазмы, может быть эффективным против различных изолятов SARS-CoV-2 [3943].

Одним из важнейших показателей, определяющих качество специфических противовирусных ЛП ИГЧ, является содержание антител, нейтрализующих вирус, - показатель специфической активности. Для определения специфической активности используют ограниченный набор методов. Одним из традиционных методов определения титра нейтрализующих антител (ВНА) является реакция вируснейтрализации (РВН). Применительно к SARS-CoV-2 использование РВН является достаточно трудоемким и сложным методом, требующим наличия специальной лаборатории, обладающей соответствующей лицензией на работу с патогенами II группы и, конкретно, с вирусом SARS-CoV-2. Это не позволяет применять РВН массово, поэтому представлялось целесообразным оценить возможность использования другого, более доступного метода.

Соответствующие монографии отечественных и зарубежных фармакопей устанавливают требования к противовирусным ЛП ИГЧ и предлагают различные методы оценки специфической активности: определение титра в реакции торможения гемагглютинации, реакции нейтрализации на культуре клеток или в животных, реакции нейтрализации гемолитических свойств или в реакции пассивной гемагглютинации, также для оценки специфической активности рекомендован метод иммуноферментного анализа (ИФА).

Наиболее функциональным для этих целей представлялся метод иммуноферментного анализа (ИФА), обладающий достаточной чувствительностью и специфичностью.

В связи с этим возникла необходимость разработки унифицированного метода ИФА для количественного определения антител к вирусу SARS-CoV-2, характеризующегося информативностью и приемлемой корреляцией с РН, простотой, минимальными затратами времени и удовлетворительной прецизионностью.

Таким образом, для создания современного и эффективного ЛП ИГЧ против COVID-19 было необходимо осуществить выбор метода, использование которого позволило определить подходы к стандартизации фармацевтической субстанции, представляющей собой образцы плазмы человека для фракционирования, содержащей антитела к SARS-CoV-2, и ЛП, включая количественное определение специфической активности.

Степень разработанности темы исследования. На момент начала разработки иммунобиологические ЛП для лечения COVID-19 отсутствовали, как и рекомендации для отбора исходного сырья, требования к уровню специфической активности фармацевтической субстанции (специфической плазмы для фракционирования), полученного из нее ЛП ИГЧ против COVID-19, а также предназначенные для этих целей стандартные образцы (СО).

С момента официальной регистрации вспышки COVID-19, вызванной SARS-CoV-2, производители диагностических тест-систем ИФА начали разработку методов определения специфических антител к SARS-CoV-2. В связи с этим большая часть научной литературы

посвящена вопросам применения ИФА тест-систем для диагностики COVID-19. С использованием ИФА выявляются вирусоспецифические антитела, однако протективный эффект обеспечивается преимущественно вируснейтрализующими антителами, которые определяются в реакции нейтрализации. При этом лишь единичные работы посвящены изучению вопросов корреляции результатов уровня специфических антител к SARS-CoV-2, определенных методом ИФА и методом РВН.

Немаловажным обстоятельством является тот факт, что после вступления в силу с 1 января 2015 года Договора о Евразийском экономическом союзе требования к качеству препаратов крови были актуализированы в связи с необходимостью их гармонизации в рамках единого фармацевтического рынка ЕАЭС. Однако, несмотря на наличие ряда нормативных документов Комиссии ЕАЭС, регламентирующих качество биологических ЛП, остается еще достаточное количество вопросов, требующих решения на этапе планирования фармацевтической разработки нового биологического ЛП, в том числе специфических противовирусных ЛП ИГЧ.

В настоящее время единые методические подходы к стандартизации противовирусных ЛП ИГЧ находятся в состоянии разработки, что проявляется в отсутствии сформулированных требований к характеристике исходного сырья по содержанию в нем специфических антител, нормируемых значений уровня антител, специфической активности ЛП. Перечисленные обстоятельства указывают на необходимость разработки СО для количественного определения антител к SARS-CoV-2, аттестованного в ИФА и РВН для оценки показателя специфической активности в плазме крови человека и ЛП ИГЧ против COVID-19.

Целью исследования является теоретическое и экспериментальное обоснование подходов к стандартизации фармацевтической субстанции и лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVГО-19.

Задачи исследования:

1. Провести анализ современного состояния проблемы стандартизации лекарственных препаратов специфических иммуноглобулинов. Разработать научно-методические подходы к выбору метода определения специфической активности противовирусных иммуноглобулинов.

2. Выбрать оптимальный метод для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции и лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19.

3. Разработать стандартный образец и методику количественного определения антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции, представляющей собой плазму человека для фракционирования, содержащую антитела к SARS-CoV-2, а также провести валидацию методики

количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции с использованием этого стандартного образца.

4. Гармонизировать значение показателя специфической активности стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции, выраженного в АКЕ/мл, со значениями референс-панели ВОЗ, охарактеризованной в единицах связывания BAU/мл.

5. Разработать стандартный образец и методику для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19, а также провести валидацию методики количественного определения антител к SARS-CoV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 с использованием этого стандартного образца.

6. Гармонизировать значение показателя специфической активности стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19, выраженного в АКЕ/мл, со значениями референс-панели ВОЗ, охарактеризованной в единицах связывания BAU/мл.

7. Провести апробацию разработанной методики оценки специфической активности иммуноглобулина человека против COVID-19 с применением разработанного стандартного образца для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 в исследовании фармакокинетических параметров препарата.

Научная новизна

Впервые разработаны научно-методические подходы к выбору метода оценки содержания антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции - плазме человека для фракционирования, и в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19.

Впервые показана возможность замены метода РВН на метод ИФА с применением коммерческих наборов реагентов для ИФА при отборе исходного сырья для формирования фармацевтической субстанции для производства, а также при оценке показателя специфической активности лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19.

Разработаны стандартные образцы для количественного определения антител к SARS-СоV-2 в фармацевтической субстанции и лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19, аттестованные в РВН и ИФА.

Впервые введен показатель специфической активности количественного содержания антител к SARS-CoV-2, выраженный в антиковидных единицах (АКЕ), гармонизированный с единицами связывания референс-панели ВОЗ (BAU/мл).

Впервые проведено исследование фармакокинетических параметров лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19 с использованием разработанной методики.

Приоритетность исследования подтверждена заявкой на выдачу Евразийского патента «Способ получения иммуноглобулина против COVГО-19», номер евразийской заявки 202290695.

Теоретическая и практическая значимость работы и внедрение результатов исследования

Теоретическая значимость работы определяется обоснованием рациональных подходов к стандартизации специфических иммуноглобулинов.

Практическая значимость работы состоит в том, что выбранные подходы для оценки основных критериев стандартизации и последующего контроля качества позволили провести разработку нового ЛП ИГЧ против COVID-19.

На основе предложенных критериев определения специфической активности фармацевтической субстанции с использованием разработанного и валидированного метода оценки показателя специфической активности проведен отбор сырья для фармацевтической разработки и последующего производства ЛП ИГЧ против COVГО-19, что позволило существенно расширить сырьевую базу для получения фармацевтической субстанции.

Разработаны стандартный образец количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции и стандартный образец для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в ЛП иммуноглобулина, которые используются при определении уровня специфической активности при производстве ЛП ИГЧ против COVID-19.

На основе предложенных критериев определения специфической активности в фармацевтической субстанции и ЛП с использованием валидированного метода оценки показателя специфическая активность обоснован выбор единиц специфической активности (АКЕ/мл).

Показатели единиц специфической активности стандартного образца предприятия АКЕ/мл гармонизированы с единицами специфической активности контрольной панели ВОЗ BAU/мл.

Разработанные методики включены в нормативный документ на ЛП ИГЧ против COVID-19 (Приложение А) и соответствующую ФС 3.3.2.0007.15 «Специфический иммуноглобулин против COVГО-19» (Приложение Б).

Методология и методы исследования

Методология исследования заключается в обосновании критериев отбора исходного сырья для формирования фармацевтической субстанции, а также выбора оптимальной методики

определения содержания специфических антител в фармацевтической субстанции и ЛП ИГЧ против COVID-19.

В ходе выполнения работы был использован комплекс физико-химических, биофармацевтических, иммунохимических, иммунологических методов исследования, а также статистические методы исследования и обработки результатов.

Степень достоверности и апробация полученных результатов

Достоверность полученных результатов обусловлена достаточным количеством экспериментальных исследований, обеспечивающих статистическую достоверность и репрезентативность выборок, с применением современных методик анализа и статистической обработки материала в соответствии с требованиями Государственной Фармакопеи РФ.

Апробация результатов исследования

Результаты исследований представлены на научно-практической конференции «ИммуноБиотех-2021» (Томск, 2021), научно-практической конференции «Разработка и регистрация ЛП» (Москва, 2022), II международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы и перспективы фармацевтической науки и практики» (Кемерово, 2022).

Публикация материалов исследования

По теме диссертации опубликовано 9 работ, из них 5 статей - в рецензируемых научных изданиях, 4 тезиса докладов в сборниках трудов научных конференций, а также оформлена заявка на выдачу Евразийского патента «Способ получения иммуноглобулина G против COVID-19», номер заявки 202290695.

Личный вклад автора в проведенное исследование и получение научных результатов

Результаты экспериментов, представленные в диссертации, получены лично автором или при его непосредственном участии. Автором проведен спектр исследований, включая разработку методик, анализ и статистическую обработку полученных данных, подготовку материалов к публикации, написание диссертационной работы. Исследования проводились в лабораториях АО «НПО «Микроген».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения диссертации соответствуют паспорту специальности 14.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия, а именно пункту 2 «формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств», пункту 3 - «разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах разработки, производства и потребления».

Положения, выносимые на защиту

1. Обоснование научно-методического подхода, заключающегося в выборе метода оценки специфической активности, заменяющего реакцию вируснейтрализации (РВН), для формирования фармацевтической субстанции - специфической плазмы для фракционирования, с целью разработки лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19.

2. Разработка методики количественного определения антител к SARS-CoV-2 в фармацевтической субстанции и стандартный образец для определения специфической активности в фармацевтической субстанции с аттестованным значением 20 АКЕ/мл для производства лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19.

3. Разработка стандартного образца для количественного определения антител к SARS-CoV-2 в лекарственном препарате иммуноглобулина человека против COVID-19 с аттестованным значением 320 АКЕ/мл.

4. Разработка фармакопейной методики определения специфической активности лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19, обеспечивающая получение достоверных и сопоставимых с международными стандартами значений специфической активности.

5. Апробация методики количественного определения антител к SARS-CoV-2 с целью изучения фармакокинетических параметров лекарственного препарата иммуноглобулина человека против COVID-19.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа изложена на 216 страницах компьютерного текста, иллюстрирована 26 рисунками и 73 таблицами, состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов, 4 глав экспериментальных исследований, заключения, выводов, списка литературы, включающего 174 источника (из них 93 на иностранных языках), включая 13 приложений на 5 3 страницах.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Обзор эпидемиологической ситуации, вызванной новой коронавирусной инфекцией и терапевтических средств для лечения СОУГО-19

В конце декабря 2019 года в Китае (г. Ухань), было зафиксировано появление новой опасной вирусной инфекции, которая быстро распространилась по всему миру. Было установлено, что возбудителем этой инфекции является новый тип коронавируса, родственный коронавирусу SARS-CoV-1, вызывающий тяжелый острый респираторный синдром. По этой причине, он был назван SARS-CoV-2 [1, 44, 45].

11 марта 2020 г. ВОЗ официально признала вспышку новой коронавирусной инфекции COVID-19, вызванной вирусом SARS-CoV-2, пандемией. К 10 июня 2021 года в мире было зарегистрировано более 175 миллионов лабораторно подтвержденных случаев заражения SARS-CoV-2 и более 3,5 миллионов смертей [1].

Сложившаяся эпидемиологическая ситуация срочно требовала эффективных и специфических лекарственных препаратов и как следствие активизировала научный поиск средств диагностики и эффективного лечения по всему миру.

Самой эффективной лечебной стратегией при инфекционной патологии по праву считается этиотропная терапия. Существует тенденция ограничивать понятие этиотропной терапии инфекций исключительно лечением при помощи противомикробных химиопрепаратов. Однако, к этиотропной терапии относится также эффективный метод лечения с применением лечебных препаратов специфических иммуноглобулинов - антител к антигенам тех или иных возбудителей инфекционных болезней. Терапия при помощи лечебных препаратов специфических иммуноглобулинов имеет ряд бесспорных преимуществ по сравнению с современной химиотерапией и должна занимать достойное место в алгоритмах лечения различных инфекционных болезней человека [24-26].

Иммуноглобулинотерапия не имеет альтернатив при необходимости быстрого ограничения эпидемии инфекционной болезни, к возбудителю которой отсутствует специфическая вакцина [24-26].

Почти с самого начала пандемии COVID-19 появились сообщения об использовании плазмы реконвалесцентов (ПР), как перспективном методе лечения [6-13]. Опыт лечения больных, полученный во время предыдущих эпидемий, вызванных (SARS-CoV, MERS-CoV), позволяет рассматривать как потенциально эффективный терапевтический подход трансфузию плазмы реконвалесцентов [2-5].

Результаты нескольких исследований подтверждают положительное влияние ПР на лечение пациентов с COVID-19 на различных стадиях заболевания [6-13].

Результаты завершенных исследований кажутся противоречивыми в отношении эффективности и преимуществ ПР. В настоящее время, согласно международным рекомендациям по терапии ПР с высоким титром антител к SARS-CoV-2 (высокотитрованной ПР) разрешена в соответствии с Emergency Use Authorizations (EUA) для лечения госпитализированных больных с COVID-19 и лиц с ослабленным иммунитетом [14-16].

По результатам многоцентрового обсервационного когортного исследования, в котором проводили анализ эффективности/безопасности применения реконвалесцентной плазмы у пациентов с COVID-19 в зависимости от сроков введения и титра антител в стационарах Департамента здравоохранения г. Москвы, оптимальные результаты применения ПР достигнуты с применением плазмы с высоким титром специфических антител. [12].

Проведенный анализ кажущихся противоречивыми результатов клинических испытаний показал, что использование ПР с высоким титром антител к SARS-CoV-2 (RBD домену S белка) на ранней стадии заболевания (предпочтительно в течение 3 дней с момента появления симптомов) может снизить смертность и прогрессирование COVID-19 [19].

Основная проблема терапии ПР — контроль её качества и стандартизация. Существует ряд ограничений в применении, связанных с необходимостью применения плазмы с высоким титром специфических антител для обеспечения эффективности терапии. Классическим методом определения вируснейтрализующей активности является реакция вируснейтрализации (РВН), которая имеет ряд ограничений в рутинном использовании и может привести к невозможности стандартизации используемой ПР.

При этом, использование ЛП ИГЧ, полученного из плазмы, содержащей очищенные антитела к SARS-CoV-2, может иметь ряд преимуществ.

Гипериммунные иммуноглобулины давно доказали свою эффективность и являются основным способом экстренной профилактики и лечения бешенства, столбняка, клещевого энцефалита и ряда других бактериальных и вирусных инфекций [24-29].

Интерес к таким разработкам продемонстрировали ведущие мировые производители препаратов крови, которые приступили к созданию ПЛ ИГЧ против COVID-19: израильская компания Камада в сотрудничестве с итальянской компанией Кедрион объявили о своем сотрудничестве 28 апреля 2020 года, а 4 ведущих мировых производителя CSL Behring, Takeda, Emergent BioSolutions и Grifols организовали альянс для работы по данному проекту 6 апреля 2020 года [32-34].

Общие методы фракционирования плазмы с этапами очистки и удаления вирусов обеспечивают безопасность ЛП гипериммунных ИГЧ по сравнению с используемой для этих же целей ПР [41]. При производстве препаратов иммуноглобулинов обеспечивается и

контролируется также содержание специфической активности, что позволяет стандартизовать ЛП [21, 22, 23].

Вандеберг с соавторами описал производство нескольких партий ЛП ИГЧ, содержащих антитела к SARS-CoV-2 и показал, что характеристики продукта были аналогичны характеристикам для препарата ЛП ИГЧ «^атипех», и соответствовали высокоочищенному продукту, который сохраняет специфическую активность иммуноглобулинов класса G, обнаруженную в исходной плазме [36, 37].

Цель фармацевтической разработки - создать качественный, эффективный и безопасный ЛП, и обосновать процесс его производства для того, чтобы постоянно выпускать продукт с требуемыми свойствами (характеристиками).

Таким образом, начало разработки нового препарата специфического внутривенного анти-COVГО-19 гипериммунного глобулина требует в первую очередь разработки и стандартизации критерия, характеризующего основной параметр качества разрабатываемого ЛП - специфическая активность.

Фармацевтическая разработка специфических иммуноглобулинов (СИГ), полученных из плазмы крови человека, включает выбор фармацевтической субстанции, способа (метода) промышленного выделения основного действующего вещества (ОДВ), состава и вида лекарственной формы, первичной и вторичной (потребительской упаковки), показателей качества и методов их оценки для обоснования свойств ЛП, программ (объема) доклинических и клинических исследований и показаний к медицинскому применению.

Одним из важнейших показателей, определяющих качество специфических противовирусных ЛП ИГЧ, является содержание антител, нейтрализующих вирус, - показатель специфической активности. Однако в настоящее время получают противоречивые результаты исследований различных наборов для иммунологического анализа. Исследования показывают, что серологическая оценка SARS-CoV-2 с помощью одной тест-системы требует осторожности не только при выявлении инфекции, но и при оценке иммунологического статуса [46-49].

Требования к показателям качества сырья и ЛП, полученных из плазмы крови человека, и методам их оценки определены и описаны в государственных фармакопеях США, ЕС и РФ [5052].

В условиях отсутствия фармакопейных стандартов качества на препараты ИГЧ производители самостоятельно разрабатывают нормативные документы по качеству ЛП, содержащие перечень показателей качества, критерии и методы их оценки. Поэтому перед началом разработки показателей качества специфической активности иммуноглобулина против COVID-19 и метода его оценки требуется провести анализ возможных методов оценки специфической активности.

1.2. Анализ современного состояния проблемы оценки уровня антител, специфичных к вирусу SARS-CoV-2 для оценки показателя специфической активности

При создании и внедрении в практику ЛП специфических ИГЧ одной из основных задач является разработка критериев для оценки их качества, а в препаратах для профилактики и лечения инфекционных заболеваний в первую очередь — это разработка методов оценки специфической активности, которая напрямую связана с эффективностью данных ЛП [53,54]. Так как разработка препарата ЛП ИГЧ против COVID-19 проводилась одновременно с разработкой подобных препаратов другими производителями препаратов крови, отсутствовал общепринятый подход к оценке уровня специфической активности. Для разработки принципа оценки специфической активности ЛП ИГЧ против COVID-19 следовало изучить применяемые методики и подходы для оценки уровня специфических антител к вирусу SARS-CoV-2 и оценить, могут ли какие-либо из используемых подходов быть применены для оценки специфической активности ЛП ИГЧ против COVID-19.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Смолянова Татьяна Ивановна, 2023 год

- 20 с.

141. ГОСТ 8.315-97 ГСИ. Стандартные образцы состава и свойств веществ и материалов. Основные положения. - М.: Стандартинформ, 2019. - 20 с.

142. Стандартные образцы как средство метрологического обеспечения аналитических методов контроля медицинских иммунобиологических препаратов (МИБП) / И.В. Борисевич, В.Г. Петухов, Р.А. Волкова [и др.] // Биопрепараты. Профилактика. Диагностика. Лечение. -2010. - Т. 4, № 40. - С. 8-10.

143. Актуальные вопросы стандартных образцов в сфере обращения биологических лекарственных средств / Р.А. Волкова, О.В. Фадейкина, В.И. Климов [и др.] // БИОпрепараты. Профилактика, диагностика, лечение. - 2016. - Т. 16, № 4. - С. 229-236.

144. Оценка состояния проблемы аттестации и применения отраслевых стандартных образцов медицинских иммунобиологических препаратов / Р.А. Волкова, О.В. Фадейкина, И.В. Борисевич [и др.] // Стандартные образцы. - 2013. - № 3. - С. 58-61.

145. Современные проблемы стандартных образцов лекарственных средств в Российской Федерации / Р.А. Волкова, О.В. Фадейкина, О.Б. Устинникова [и др.] // Фармация. - 2020. - Т. 69, № 2. - Р. 5-11. - DOI 10/29296/25419218-2020-02-01.

146. Фармакопейные стандартные образцы и практика их применения в отечественной системе стандартизации лекарственных средств / В.А. Меркулов, Е.И. Саканян, Р.А. Волкова [и др.] // Химико-фармацевтический журнал. - 2016. - Т. 50, № 4. - Р. 40-43.

147. ОФС.1.1.0007.18. Стандартные образцы биологического происхождения // Е-Досье: сайт. - URL: https://e-ecolog.ru/tech/docs/i1SAF4PopsePGDpTLcOJ_.pdf (дата обращения: 12.02.2023).

148. Global Plasma Leaders Collaborate to Accelerate Development of Potential COVID-19 Hyperimmune Therapy // Better health, brighter future: web site. - URL: https://www.takeda.com/newsroom/newsreleases/2020/global-plasma-leaders-collaborate-to-accelerate-development-of-potential-covid-19-hyperimmune-therapy/ (access date: 12.02.2023).

149.Kedrion and Kamada announce collaboration for anti COVID-19 IGG // Kedrion biopharma: web site. - URL: https://www.kedrionbiopharma.ru/ kedrion-and-kamada-announce-collaboration-anti-covid-19-igg?language=en-us (access date: 12.02.2023).

150.The first Chinese national standards for SARS-CoV-2 neutralizing antibody / L. Guan, Y. Yu, X. Wu [et al.] // Vaccine. - 2021. - Vo. 39, Is. 28. - P. 3724-3730. - ISSN 0264-410X. - DOI 10.1016/j.vaccine.2021.05.047.

151.Establishment of the WHO international standard and reference panel for anti-SARS-CoV-2 antibody / G. Mattiuzzo, E.M. Bentley, M. Hassall [et al.] // World Health Organization: web site. -URL: https://www.who.int/docs/default-source/biologicals/ecbs/bs-2020-2403-sars-cov-2-ab-ik-17-nov-2020.pdf?sfvrsn=662b46ae_2 (access date: 12.02.2023).

152.WHO International Standard for anti-SARS-CoV-2 immunoglobulin / P.A. Kristiansen, M. Page, V. Bernasconi [et al.] // Lancet. - 2021. - Vol. 397, № 10282. - Р. 1347-1348. - DOI 10.1016/S0140-6736(21)00527-4. - PMID: 33770519. - PMCID: PMC7987302.

153.WHO expert committee on biological Standardization. Annex 2 Recommendation for the preparation, characterization, and establishment of international and other biological reference standards // WHO Technical Report Series. - 2006. - № 932. - P. 73-131.

154.ГОСТ Р 53079.4-2008. Технологии лабораторные клинические. Обеспечение качества клинических лабораторных исследований. Часть 4. Правила ведения преаналитического этапа. -М.: Стандартинформ, 2009. - 80 с.

155.ГОСТ Р 52623.4-2015. Технологии выполнения простых медицинских услуг инвазивных вмешательств. - М.: Стандартинформ, 2015. - 46 с.

156.ФС.3.3.2.008.15 «Иммуноглобулин человека нормальный для внутривенного введения» // Центральная научная медицинская библиотека: сайт. - URL: http://resource.rucмл.ru/feмл/pharmacopia/14_4/HTМЛ/ 577/index.hmn (дата обращения: 12.02.2023).

157. Иммуноглобулин человека нормальный: ФС.3.3.2.0007.15 // Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. Т. IV // Центральная научная медицинская библиотека: сайт. - URL: http://resource.rucмл.ru/feмл/pharmacopia/14_4/HTМЛ/571/index.htмл (дата обращения: 12.02.2023).

158.ОФС.1.8.2.003.15 «Иммуноглобулин человека» // Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. Т. II // Центральная научная медицинская библиотека: сайт. -URL: http://resource.rucмл.ru/feмл/ pharmacopia/14_2/HTМЛ/1271/index.htмл (дата обращения: 12.02.2023).

159.Молекулярно-эпидемиологический анализ геновариантов SARS-CoV-2 на территории Москвы и Московской области / Е.Н. Ожмегова, Т.Е. Савочкина, А.Г. Прилипов [и др.] // Вопросы вирусологии. - 2022. - Т. 67, № 6. - C. 496-505. - DOI 10.36233/0507-4088-146.

160.Detection of 2019 novel coronavirus (2019-nCoV) by real-time RT-PCR / V.M. Corman, O. Landt, M. Kaiser [et al.] // Eurosurveillance. - 2020. - Vol. 25, № 3. - Р. 2000045.

161.ОФС.1.1.0013.15 «Статистическая обработка результатов химического эксперимента» Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. Т. II // Фармакопея: сайт. - URL: https://pharmacopoeia.ru/wp-content/uploads/2016/11/OFS.1.1.0013.15-Statisticheskaya-obrabotka-rezultatov-eksperimenta.pdf (дата обращения: 12.02.2023).

162.Петри, А. Наглядная медицинская статистика: учебное пособие для вузов / А. Петри, К. Сэбин; пер. с англ. под ред. В.П. Леонова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2019. - 214 с.

163.ОФС.1.1.0014.15 «Статистическая обработка результатов. определения специфической фармакологической активности лекарственных средств биологическими методами» Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. Т. IV // Фармакопея: сайт. - URL: https://docs.rucмл.ru/feмл/pharma/v14/vol1/319/ (дата обращения: 12.02.2023).

164.Гланц, С. Медико-биологическая статистика / С. Гланц; пер. с англ. - М.: Практика, 1999. - 459 с.

165.ФС.3.3.2.0001.19. Фармакопейная статья. Плазма человека для фракционирования: Приказ Министерства здравоохранения РФ от 29 марта 2019 г. № 185 // Минпромторг России: сайт. - URL: https://minpromtorg.gov.ru/ storage/797ced43-043d-4b4e-b72b-3d36984adbc7/documents/d55f15f1-b989-4986-9701-86b7ebdf4b42/348ff1e4-cace-46b7-8d6e-582c5da1714a.pdf (дата обращения: 12.02.2023).

166. Итоги эпидсезона 2017/18 гг. по гриппу и острой респираторной вирусной инфекции. Особенности этиотропной терапии / Е.П. Селькова, Т.А. Гренкова, Н.В. Гудова, А.С. Оганесян // РМЖ. Медицинское обозрение. - 2018. - Т. 2, № 11. - Р. 49-53.

167.Сыров, А.В. Диагностика COVID-19 в амбулаторных условиях / А.В. Сыров, Н.В. Стуров, В.Е. Колупаев // Трудный пациент. - 2020. - № 5. - С. 6-9. - DOI 10.24411/2074-19952020-10031.

168.Самитова, Э.Р. Клинико-эпидемиологические особенности течения COVID-19 у детей в периоды подъема заболеваемости в Москве в 2020-2022 годы / Э.Р. Самитова // Эпидемиология и вакцинопрофилактика. - 2022. - № 5. - С. 38-48. - DOI 10.31631/2073-3046-2022-21-5-38-48.

169.Low serum neutralizing anti-SARS-CoV-2 S antibody levels in mildly affected COVID-19 convalescent patients revealed by two different detection methods / B. Bosnjak, S.C. Stein, S. Willenzon [et al.] // Cellular & molecular immunology. - 2021. - Vol. 18. - Р. 936-944. - DOI 10.1038/s41423-020-00573-9.

170.Annex 5 Guidelines for stability testing of pharmaceutical products containing well established drug substances in conventional dosage forms // WHO Technical Report Series. - 1996. -№ 863. - 13 р. // World Health Organization: web site. - URL: https://apps.who.int/iris/handle/10665/62169 (access date: 12.02.2023).

171. Об утверждении Правил проведения исследований биологических лекарственных средств Евразийского экономического союза: Решение Совета Евразийской Экономической Комиссии от 3 ноября 2016 г. № 89 // Евразийский экономический союз: сайт. - URL: http://docs.cntd.ru/ document/456026116 (дата обращения: 12.02.2023).

172.Методические подходы к экспертной оценке доклинических и клинических исследований препаратов иммуноглобулинов человека / В.Б. Иванов, В.Д. Мосягин, Э.Ю. Кудашева [и др.] // Медицинская иммунология. - 2017. - Т. 19, № 5. - С. 615-628.

173. Современные подходы к экспертной оценке результатов доклинических и клинических исследований препаратов иммуноглобулинов человека нормального для подкожного введения / В.Б. Иванов, Э.Ю. Кудашева, В.Д. Мосягин [и др.] // Медицинская иммунология. - 2017. - Т. 19. - С. 268 - 269.

174. Об утверждении Правил проведения исследований биоэквивалентности лекарственных препаратов в рамках Евразийского экономического союза: Решение Совета Евразийской Экономической Комиссии от 3 ноября 2016 г. № 85 // Евразийский экономический союз: сайт. - URL: https://docs.eaeunion.org/docs/ru-ru/01411942/cncd_21112016_85 (дата обращения: 12.02.2023).

ПРИЛОЖЕНИЕ А

Регистрационное удостоверение и нормативный документ на лекарственный препарат «КОВИД-глобулин» иммуноглобулин человека против COVID-19, раствор для инфузий 100 мг/мл.

ПРИЛОЖЕНИЕ Б

ФС 3.3.2.0007.15 «Специфический иммуноглобулин против COVID-19»

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Иммуноглобулин ФС.3.3.2.0007.15

человека нормальный Вводится взамен ФС 42-3198-95

Настоящая фармакопейная статья распространяется на препараты иммуноглобулина человека нормального для внутримышечного или подкожного введения.

Иммуноглобулин человека нормальный представляет собой иммунологически активную белковую фракцию, содержащую широкий спектр антител, выделенную из плазмы крови человека, основным активным компонентом которой является иммуноглобулин в С), обладающий активностью антител различной специфичности в отношении различных антигенов.

Препараты иммуноглобулина человека нормального не содержат консерванты и антибиотики.

ПРОИЗВОДСТВО

Сырьем для производства иммуноглобулина человека является плазма крови, полученная не менее чем от 1000 здоровых доноров, которая протестирована на наличие маркеров инфекций, передающихся с кровью, в индивидуальных донациях и пулах и соответствующая требованиям ФС «Плазма человека для фракционирования».

Иммуноглобулин человека нормальный очищают и концентрируют модифицированным спиртовым методом фракционирования сывороточных белков при низких температурах.

Производство иммуноглобулина человека нормального должно осуществляться с соблюдением установленных требований правил

ПРИЛОЖЕНИЕ В

Серии лекарственных препаратов иммуноглобулина человека нормального,

использовавшиеся в работе.

№ п/п Наименование препарата иммуноглобулина Серия/номер образца

1 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У1/У461219, 01.01.2023

2 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У2/У461219, 01.01.2023

3 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У3/У461219, 01.01.2023

4 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У142/У421019, 01.11.2022

5 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У148/У431119, 01.12.2022

6 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У149/У441119, 01.12.2022

7 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У150/У441119, 01.12.2022

8 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У151/У441119, 01.12.2022

9 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У152/У451119, 01.01.2023

10 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У153/У451119, 01.01.2023

11 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У154/У451119, 01.01.2023

12 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П60, 01.11.2021

13 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П61, 01.11.2021

14 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П62, 01.11.2021

15 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П63, 01.11.2021

16 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П64, 01.11.2021

17 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П66, 01.11.2021

18 Иммуноглобулин нормальный в/м, 100 мг/мл, ампула 1,5 мл №10, пачка картонная П67, 01.11.2021

19 Имбиоглобулин (Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий) П1

20 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П543

21 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П546

22 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П557

23 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П558

24 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П561

25 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П11

26 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П12

27 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П19

28 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П24

29 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П25

30 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П34

31 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П35

№ п/п Наименование препарата иммуноглобулина Серия/номер образца

32 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П38

33 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П40

34 Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для внутримышечного введения П48

35 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н256

36 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н257

37 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н258

38 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н259

39 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н260

40 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н261

41 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н262

42 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н263

43 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н264

44 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н265

45 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н266

46 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н267

47 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н268

48 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н269

49 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н270

50 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н271

51 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н272

52 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н273

53 Иммуноглобулин человека нормальный Иммуноглобулин человека нормальный, раствор для инфузий, 50 мг/мл Н274

54 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У4

55 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У5

56 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У6

57 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У7

58 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У8

59 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У9

60 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У10

61 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У11

62 Иммуновенин®, бут. 25 мл в комплекте с растворителем У12

ПРИЛОЖЕНИЕ Г

Паспорт вируса SARS-CoV-2 hCoV-19/Russia/Moscow_PMVL-1/2020.

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

федеральное государственное бюджетное учреждение «Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф. Гамалеи» Минздрава России)

123098, Москва, ул. Гамалеи, 18

_ № -

от _

На*.

г

Те.т 8 499- 193-30-01 Факс: 8 49»-193-61-83

hflp^Avww.gamaleya org E-mail: inftxögamaleyajorg

И

Паспорт штамма SS*/

1. Наименование штамма: штамм "ГК2020/1вируса SARS-CoV-2 • возбудитель коронавирусиой инфекции COVID-19, род Beiacoronavirus подсемейство Coronavirtdae. семейство Caronaviridae.

2. Родословная штамма (место,год выделения штамма):

выделен от больного коронавирусиой инфекцией COVID-19 в 2020 г. Заболевание сред ней тяжести, пациент- мужчина. 28 лет, прилетел юРима 15.03.2020,17.03 2020 помещен в ГБУЗ г. Москвы «ГКБ №40 Департамента здравоохранения города Москвы». 18.03 2020 из смыва носовой полости выделен вирус.

3. Количество пассажей: 3

4. Характеристика штамма (культуральные, молекулярно-генетические свойства). Высокочувствительной к репликации штамма "ПС2020/1" вируса SARS-CoV-2 является линия клеток Уего-Еб. Размножение вируса в этой культуре сопровождается выраженным цитопатическим эффектом и накоплением вируса в среду-поддержки в титре до 6 lg ТЦИД50. Генетически подтвержден с использованием прайм еров для диагностики инфекции, вызванной SARS-CoV-2, рекомендованных ВОЗ и С DC (гены Е, ORF 1 b, N и RdRP).

5. Штамм пассирован в марте 2020 г в культуре клеток Vero-E6.

& Авторы штамма: Гущин В.А., Ботиков АГ., Должикова И.В., Никифорова М.А., Щетинин AM., Кузнецова НА., Гроусова Д.М, Логунов Д.Ю., Гинцбург А.Л.

Руководитель референс-центра по коронавирусиой инфекции ФГБУ «НИЦЭМ им. Н.Ф.Гамалеи» М июдрава России

/ШшШ^

Дрфекюр

ФГБУ «НИЦЗМ им. Н.Ф. Гамалеи» МиймЙ*«* Роефк А падем нк РАН. професс ор WÄ* \ iiv'^i

Т-

Xi'

ВА. Г\щин

ПРИЛОЖЕНИЕ Д

Инструкция к набору реагентов "8АЯ8-СоУ-2-1§0-ИФА", РЗН 2020/10219, от 30.04.2020производитель ФГБУ «НМИЦ гематологии» МЗ РФ, Россия

ИНСТРУКЦИЯ

по применению Набора реагентов для иммуноферментного определения IgG антител к антигену SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови «SARS-CoV-2-IgG-ИФА»

1. ОБЩАЯ ИНФОРМАЦИЯ

1.1. Назначение.

Набор реагентов для иммуноферментного определения IgG антител к антигену SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» предназначен для качественного и полуколичественного определения IgG антител к антигену SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови методом твердофазного иммуноферментного анализа.

1.2. Введение.

Коронавирусы типов а и в являются патогенными только для млекопитающих; вирусы типа у в основном вызывают инфекции у птиц. Коронавирусы передаются контактным или воздушно-капельным путем, не исключается также фекально-оральный механизм передачи инфекции. На сегодняшний день существует семь типов коронавируса человека (НСоУ), которые вызывают респираторные заболевания: HCoV-229E, HCoV-NL63, HCoV-OC43, HCoV-HKU1, SARS-CoV, MERS-CoV и новый коронавирус SARS-CoV-2. SARS-CoV-2 был обнаружен в 2019 году в Ухане, Китай. Клинические проявления заболевания - лихорадка, усталость, кашель, и другие симптомы, которые могут быстро перерасти в тяжелую пневмонию, дыхательную недостаточность, септический шок, полиорганную недостаточность, тяжелые нарушения кислотно-щелочного обмена и т. д. что может привести к летальному исходу.

1.3. Набор предназначен для диагностики ин витро. Набор может использоваться для скрининга потенциальных доноров плазмы для лечения пациентов с СОУТО-19, а также в качестве вспомогательного метода для определения анамнестического заражения вирусом SARS-CoV-2 всех групп населения.

1.4. Область применения - клиническая лабораторная диагностика.

2. ХАРАКТЕРИСТИКИ НАБОРА

2.1. Набор реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» выпускается в 2 вариантах комплектации: Комплект 1 рассчитан на 96 определений, включая контроли.

Комплект 2 рассчитан на 480 определений, включая контроли__

Состав Описание 96 анализов 480 анализов

Планшет 96-луночный полистироловый, стрипированный, на внутренней поверхности лунок планшета иммобилизован рекомбинантный антиген SARS-CoV-2, готов к использованию. 1 шт 5 шт

Отрицательный контроль инактивирован, на основе сыворотки крови человека, не содержащей IgG-антител к антигену SARS-CoV-2, бесцветная жидкость, готов к использованию. 1 флакон (1,0 мл) 1 флакон (4,0 мл)

Положительный контроль №1 инактивирован, на основе сыворотки крови человека, содержащей IgG-антитела к антигену SARS-CoV-2, прозрачная жидкость красного цвета, готов к использованию 1 флакон (2,0 мл) 1 флакон (10,0 мл)

Положительный контроль №2 инактивирован, на основе сыворотки крови человека, содержащей IgG- антитела к антигену SARS-CoV-2, прозрачная жидкость красного цвета, готов к использованию. 1 флакон (1,0 мл) 1 флакон (4,0мл)

Конъюгат прозрачная жидкость красного цвета, готов к использованию 1 флакон (14 мл) 1 флакон (70 мл) или 2 флакона по 35 мл

ИФА-Буфер прозрачная жидкость синего цвета, готов к использованию 1 флакон (100 мл) 2 флакона (250 мл) или 10 флаконов по 50 мл

Субстратный раствор тетраметилбензидина (ТМБ) прозрачная бесцветная жидкость, готов к использованию. 1 флакон (14 мл) 1 флакон (70мл)

Концентрат отмывочного раствора прозрачная бесцветная жидкость, 26-кратный концентрат 1 флакон (22 мл) 1 флакон (150мл) или 3 флакона по 50 мл

Стоп-реагент прозрачная бесцветная жидкость, готов к использованию. 1 флакон (14 мл) 1 флакон (70 мл) или 2 флакона по 35 мл

Бумага для заклеивания планшета - 2 шт 10 шт

Инструкция по применению 1 шт 1 шт

Паспорт контроля качества (аналитический паспорт) - 1 шт 1 шт

2.2. Принцип работы Набора.

Определение IgG-антител против антигена SARS-CoV-2 основано на использовании непрямого варианта твердофазного иммуноферментного анализа. На внутренней поверхности лунок планшета иммобилизован рекомбинантный антиген SARS-CoV-2 - рецептор связывающий домен (RBD) гликопротеина S (Spike, S-белка). Антитела из образца связываются с антигеном на поверхности лунки.

Образовавшийся комплекс выявляют с помощью конъюгата мышиных моноклональных антител к IgG человека с пероксидазой хрена. В результате образуется связанный с пластиком комплекс, содержащий пероксидазу. Во время инкубации с субстратным раствором тетраметилбензидина (ТМБ) происходит окрашивание растворов в лунках.

Интенсивность окраски прямо пропорциональна содержанию IgG-антител к антигену SARS-CoV-2 в исследуемом образце сыворотки (плазмы) крови. Индекс позитивности (ИП) IgG-антител к антигену SARS-CoV-2 в сыворотке (плазме) крови рассчитывается по формуле, приведенной в Инструкции по применению. Титр антител, определенный данным набором на основании индекса позитивности либо прямым титрованием, демонстрирует позитивную корреляцию с титром нейтрализующих антител.

3. АНАЛИТИЧЕСКИЕ И ДИАГНОСТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ

3.1. Аналитическая специфичность.

Перекрестная реактивность оценена по результатам испытаний образцов сыворотки (плазмы) крови пациентов, имевших в анамнезе другие типы коронавируса, HBV, HCV, HIV-1, HIV-2, Adenovirus, Human Metapneumovirus (hMPV) , Parainfluenza virus 1-4, Influenza A, Influenza B, Enterovirus 71, Respiratory syncytial virus, Rhinovirus, Chlamydia pneumoniae , Streptococcus pneumonia, Mycobacterium tuberculosis, Mycoplasma pneumoniae, EBV. Ни одна из испытанных проб не показала наличие перекрёстной реактивности.

3.2. Воспроизводимость.

Внутрисерийный коэффициент вариации определения IgG-антител к антигену SARS-CoV-2 в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с использованием Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» не превышает 8,0%.

Межсерийный коэффициент вариации определения IgG-антител к антигену SARS-CoV-2 в одном и том же образце сыворотки (плазмы) крови с использованием Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» не превышает 8,0%

3.3. Специфичность.

При проверке на панели предприятия, состоящей из нативных образцов, достоверно не содержащих IgG-антитела к антигену SARS-CoV-2, диагностическая специфичность Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» составляет 98%.

3.4. Чувствительность.

При проверке на панели предприятия, состоящей из нативных образцов, достоверно содержащих IgG-антитела к антигену SARS-CoV-2, диагностическая чувствительность Набора реагентов «$Л£.$-СоУ-2-^0-ИФА» составляет 95%.

3.5. Интерференция.

На результаты анализа не оказывало влияния использование антикоагулянтов ЭДТА, гепарина и цитрата натрия, а также присутствие гемоглобина, триглицеридов, холестерина, билирубина и общего белка в концентрациях, не превышающих нормальные клинические значения.

4. МЕРЫ БЕЗОПАСНОСТИ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ НАБОРА

4.1. Потенциальный риск применения Набора - класс 2б.

4.2. Сыворотки крови человека, используемые при приготовлении контрольных проб, инактивированы и не содержат антитела к вирусу гепатита С, антитела к ВИЧ 1, 2 и антигена р24 ВИЧ-1, антиген вируса гепатита В (НВsAg).

4.3. Набор предназначен только для профессионального применения.

4.4. Все компоненты Набора в используемых концентрациях являются нетоксичными.

4.5. При работе с Набором необходимо использовать индивидуальные средства защиты: халат, головной убор, резиновые или пластиковые перчатки, специальную обувь, защитные очки или щиток), так как образцы сыворотки или плазмы крови следует рассматривать как потенциально инфицированный биоматериал.

4.6. Работу следует проводить в специально оборудованном помещении лаборатории, отвечающей требованиям СП 1.3.2322-08 «Безопасность работы с микроорганизмами III-IV группы патогенности (опасности) и возбудителями паразитарных болезней». При работе с Набором требуется соблюдать «Инструкцию по мерам профилактики распространения инфекционных заболеваний при работе в клинико-диагностических лабораториях лечебно-профилактических учреждений», утвержденную Минздравом СССР 17 января 1991 года; ГОСТ Р 52905 (ИСО 15190:2003) «Лаборатории медицинские. Требования безопасности».

4.7. Все использованные одноразовые материалы подвергать обработке дезинфицирующими средствами с последующей утилизацией (см. МУ-287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения»).

4.8. Все отмывочные растворы следует собирать в специальный контейнер и обрабатывать дезинфицирующими средствами, разрешенными для применения на территории РФ в установленном порядке.

4.9. Все твердые отходы следует собирать в специальный контейнер, обеззараживать и утилизировать в соответствии с требованиями СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами».

4.10. Лабораторную посуду многоразового использования и расходные материалы, контактирующие с исследуемыми и контрольными образцами, следует обеззараживать с использованием дезинфицирующих средств, не содержащих активный кислород и хлор, оказывающих негативное воздействие на качество ИФА.

4.11. Инструменты, оборудование, а также рабочие поверхности столов необходимо протирать 70% раствором этилового спирта.

4.12. При использовании согласно инструкции по применению изделие является безопасным (не несет физических, экологических и иных рисков).

4.13. Набор реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» не содержит лекарственных средств для медицинского применения.

4.14. Показания к применению медицинского изделия: применять в соответствии с назначением.

4.15. Противопоказания к применению медицинского изделия: Противопоказаний в рамках установленного назначения не имеет. Не применять не по назначению.

5. ОБОРУДОВАНИЕ, МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ, НЕОБХОДИМЫЕ ПРИ РАБОТЕ С НАБОРОМ

- фотометр вертикального сканирования, позволяющий измерять оптическую плотность содержимого лунок планшета при длине волны 450 нм;

- термостат, поддерживающий температуру +37±3°С;

- дозаторы со сменными наконечниками, позволяющие отбирать объемы в диапазоне 10-250 мкл;

- цилиндр мерный вместимостью 1000 мл;

- вода бидистиллированная (или деионизованная);

- перчатки резиновые или пластиковые;

- бумага фильтровальная

- планшет для предварительного разведения образцов

6. АНАЛИЗИРУЕМЫЕ ОБРАЗЦЫ

В качестве анализируемого образца используется сыворотка (плазма) крови.

6.1. Процедура получения анализируемого материала.

Сбор образцов крови человека проводить в соответствии с текущей практикой методом венепункции, соблюдая стандартные лабораторные процедуры. Для анализа использовать неразведённую сыворотку (плазму) крови.

6.2. Подготовка анализируемых образцов.

Во избежание гемолиза необходимо как можно быстрее отделить плазму от эритроцитов или сыворотку от сгустка. Выбор пробирок для получения сыворотки или плазмы, подготовку, центрифугирование, хранение и транспортировку образца производить согласно правилам проведения преаналитического этапа, утвержденным для лаборатории. Рекомендуемое соотношение антикоагулянта и биоматериала, а также способы подготовки образца и режимы центрифугирования описаны в инструкции по применению пробирок, используемых лабораторией.

6.2.1. Приготовление анализируемых образцов сывороток крови пациентов.

Кровь отобрать венепункцией, дать полностью свернуться, отделить сыворотку центрифугированием при комнатной температуре.

6.2.2. Приготовление анализируемых образцов плазмы.

Сбор крови производить в пробирки, содержащие антикоагулянты, согласно утвержденной процедуре сбора плазмы. В качестве антикоагулянтов использовать ЭДТА, гепарин и цитрат натрия.

6.3. Если анализ проводится не в день взятия, образцы сыворотки, плазмы крови, следует хранить при температуре +2-8°С не более 7 суток или при температуре -20°С не более 2 месяцев. Допускается однократное размораживание/замораживание образцов. При использовании замороженной гепаринизированной плазмы пробы необходимо повторно центрифугировать после оттаивания для удаления повторно образовавшихся сгустков. Повторное замораживание-оттаивание образцов сыворотки (плазмы) крови не допускается.

6.4. Образцы с гемолизом, гиперлипидемией или бактериальным проростом исследованию не подлежат, а также исследуемые образцы, содержащие азид натрия в качестве консерванта.

6.5. Перед проведением анализа исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови, следует выдержать при комнатной температуре +18-25°С не менее 30 мин.

7. ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ ДЛЯ АНАЛИЗА

7.1. Перед проведением анализа компоненты Набора и исследуемые образцы сыворотки (плазмы) крови следует выдержать при комнатной температуре +18-25°С не менее 30 мин.

7.2. Подготовка планшета.

Вскрыть пакет с планшетом и установить на рамку необходимое количество стрипов.

Оставшиеся неиспользованными стрипы чтобы предотвратить воздействие на них влаги тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета.

7.3. Приготовление отмывочного раствора.

Содержимое флакона с концентратом отмывочного раствора (22 мл) перенести в мерный цилиндр вместимостью 1000 мл, добавить 550 мл дистиллированной воды и тщательно перемешать. В случае дробного использования Набора следует отобрать необходимое количество концентрата отмывочного раствора и развести дистиллированной водой в 26 раз (1 мл концентрата отмывочного раствора +25 мл дистиллированной (деионизованной) воды).

8. ПРОВЕДЕНИЕ АНАЛИЗА

8.1 Поместите в рамку необходимое количество стрипов — исследуемые образцы и 4 лунки для контрольных сывороток.

8.2 Разбавьте образцы сыворотки (плазмы) крови в 101 раз, используя ИФА-Буфер. Пример: 10 мкл образца + 1 мл ИФА-Буфера.

Внимание! Контрольные сыворотки не разбавлять.

8.3. Внесите в соответствующие лунки в дубликатах по 100 мкл контролей - Отрицательный контроль - 1 лунка, Положительный контроль №1 -2 лунки, Положительный контроль №2 - 1 лунка). В остальные лунки внесите по 100 мкл разбавленных исследуемых образцов сыворотки (плазмы) крови. Внесение контролей и исследуемых образцов необходимо произвести в течение не более, чем 10 минут.

8.4. Аккуратно перемешайте содержимое планшета круговыми движениями по горизонтальной поверхности, заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета.

Инкубируйте планшет в течение 30 минут при температуре +37°С.

8.5. По окончании инкубации удалите содержимое лунок аспирацией (например, с помощью водоструйного насоса) или декантированием и отмойте лунки 3 раза. При каждой отмывке добавьте во все лунки по 250 мкл отмывочного раствора, встряхните планшет круговыми движениями по горизонтальной поверхности с последующей аспирацией или декантированием. Задержка при отмывке (замачивание лунок) не требуется. При каждом декантировании необходимо тщательно удалять остатки жидкости из лунок.

8.6. Внесите во все лунки по 100 мкл конъюгата.

8.7. Заклейте планшет бумагой для заклеивания планшета и инкубируйте планшет в течение 30 минут при температуре +37°C. По окончании инкубации удалите содержимое лунок и отмойте лунки 5 раз.

8.8. Внесите во все лунки по 100 мкл субстратного раствора тетраметилбензидина (ТМБ). Внесение субстратного раствора тетраметилбензидина (ТМБ) в лунки необходимо произвести в течение 2-3 минут. Инкубируйте планшет в темноте при комнатной температуре +18-25°C в течение 10 - 20 минут в зависимости от степени развития синего окрашивания.

8.9. Внесите во все лунки с той же скоростью и в той же последовательности, как и субстратный раствор тетраметилбензидина (ТМБ), по 100 мкл стоп-реагента, при этом содержимое лунок окрашивается в ярко-желтый цвет.

8.10. Измерьте величину оптической плотности (ОП) содержимого лунок планшета на фотометре вертикального сканирования при длине волны 450 нм. Измерение ОП содержимого лунок планшета необходимо произвести в течение 15 минут после внесения стоп-реагента. Бланк фотометра выставляйте по воздуху.

9. УЧЕТ РЕЗУЛЬТАТОВ. КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА

9.1. Рассчитайте среднюю ОП положительного контроля №1;

ОП (К1)Ср = {ОП1(К1) + ОП2(К1)}/2

Результаты анализа считать достоверными, если:

- ОП отрицательного контроля не выше 0,15 оптических единиц (ОЕ);

- средняя ОП положительного контроля №1 не ниже 0,35 оптических единиц (ОЕ);

- ОП положительного контроля №2 + не ниже 1,0 оптических единиц (ОЕ);

9.2. Рассчитайте уровень граничного значения (Cut-off) для этого умножьте среднее значение ОП положительного контроля №1 на коэффициент А.

Граничное значение (Cut-off) = A* ОП (К1)Ср

Значение коэффициента А указано в паспорте контроля качества (аналитический паспорт).

9.3. Рассчитайте индекс позитивности (ИП, %) для каждого исследуемого образца, для этого ОП образца разделите на значение Cut-off :

ИП = ОПобразца/Cut-off

10. ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ При ИП > 1,1 - образец положительный. При ИП < 0,9 - образец отрицательный.

При значении ИП, лежащем в промежутке от 0,9 до 1,1- результат в пограничной зоне (+/-). Такие сыворотки рекомендуется исследовать повторно. Если повторный полученный результат будет неопределенным, то следует провести тестирование сыворотки, полученной через 1 -2 дня. В случае получения неопределенных результатов такие образцы считать отрицательными.

Использование индекса позитивности позволяет проводить сравнительный анализ уровня специфических антител в парных сыворотках крови. ИП в пределах 1,1-7,0 пропорционален содержанию специфических антител класса IgG. Это позволяет проводить исследование парных сывороток, полученных от пациентов с интервалом в 1-2 дня. Если ИП образца составляет выше 7,0 для корректной оценки относительно содержания специфических антител, рекомендуется провести повторный анализ образца, предварительно разведенного ИФА-Буфером в 10 раз. При определении индекса позитивности следует умножить полученное значение ИП на 10.

Такой способ интерпретации результатов анализа позволяет определять динамику специфических IgG-антител к SARS-CoV-2, а также сравнивать различные образцы по содержанию IgG-антител к SARS-CoV-2. Альтернативой данному методу является титрование сыворотки методом последовательного разведения образцов в 2 раза.

Пример разведения: Рекомендуется использовать планшет для предварительного разведения образцов (не входит в комплект), в лунки которого добавлено по 100 мкл буфера для разведения сывороток. В одну из лунок вносится 100 мкл образца, разведенного в 50 раз, содержимое лунки (суммарный объем 200 мкл) перемешивается. Разведение образца в данной лунке теперь 1.100. Затем 100 мкл из этой лунки переносится в другую лунку, содержащую 100 мкл буфера и перемешивается (разведение 1.200). Далее эту процедуру повторить до достижения желаемого разведения (рекомендуется 1.800). Перенести 100 мкл разведенного образца из каждой лунки в лунки планшета, входящего в комплект Набора. Провести анализ образцов согласно разделу 8 инструкции. Титром сыворотки следует считать последнее разведение сыворотки, демонстрирующее положительный результат в тесте. Некоторые сыворотки с высоким титром могут потребовать повторного титрования.

11. ОГРАНИЧЕНИЕ МЕТОДА

11.1 Набор реагентов «SARS-CoV-2-IgG-H®A» предназначен для диагностических целей, однако окончательный диагноз не должен основываться только на результатах данного теста.

11.2 Отрицательный результат тестирования не исключает инфицирования вирусом SARS-CoV-2.

11.3 Диагноз должен быть поставлен врачом после полного клинического и лабораторного обследования пациента.

11.4 Для достижения максимальной воспроизводимости методики анализ необходимо проводить в одних и тех же условиях (температура, время инкубации с ТМБ). При использовании Набора для проведения нескольких независимых серий анализов рекомендуется подбор оптимальных условий путем постановки контролей, входящих в состав Набора. Условия необходимо выбирать, ориентируясь на показатели ОП положительного контроля №1 близкие к значению 0.4. При значительном изменении условий инкубации (изменение температуры, освещенности) или значительном (более 25%) изменении значения ОП положительного контроля №1 рекомендуется провести повторный подбор условий инкубации с ТМБ.

12. УСЛОВИЯ ТРАНСПОРТИРОВКИ, ХРАНЕНИЯ И ЭКСПЛУАТАЦИИ НАБОРА

Информация, об особенностях транспортирования должна учитываться всеми лицами, участвующими в хранении, перевозке и утилизации (уничтожении) этого изделия.

12.1. Транспортирование.

12.1.1. Транспортирование Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» должно производиться всеми видами крытого транспорта в соответствии с требованиями и правилами, установленными на данном виде транспорта, при температуре (+2-8)°С. Допускается транспортировка Набора при температуре до +25°С не более 15 суток. Не допускается замораживание целого набора.

12.1.2. Транспортирование изделий при температурах, требующих соблюдения "Холодовой цепи", обеспечивающей сохранность температурного режима, должно осуществляться в термоконтейнерах одноразового пользования, содержащих хладоэлементы, или в термоконтейнерах многократного применения с автоматически поддерживаемой температурой или в авторефрижераторах с использованием термоиндикаторов.

12.1.3. Изделия, транспортированные с нарушением температурного режима, применению не подлежат.

12.2. Хранение.

Хранение изделий и/или компонентов при температуре от +2-8°C должно осуществляться в холодильных камерах или в холодильниках, обеспечивающих регламентированный температурный режим с ежедневной регистрацией температуры. Хранение светочувствительных изделий и/или компонентов должно осуществляться в темном месте.

12.2.1. Набор реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» должен храниться в упаковке предприятия изготовителя при температуре +2-8°С в течение всего срока годности, указанного на упаковке Набора. Допускается хранение Набора при температуре до +25°С не более 15 суток. Не допускается замораживание целого Набора.

12.2.2. В случае дробного использования набора компоненты следует хранить следующим образом:

- оставшиеся неиспользованными стрипы, чтобы предотвратить воздействие на них влаги, тщательно заклеить бумагой для заклеивания планшета и хранить при температуре +2-8°C в течение всего срока годности Набора.

- конъюгат, ИФА-буфер, субстратный раствор тетраметилбензидина (ТМБ), стоп-реагент после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2-8°C в течение всего срока годности Набора;

- положительные контроли и отрицательный контроль после вскрытия флаконов следует хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора.

- оставшийся неиспользованным концентрат отмывочного раствора следует хранить при температуре +2-8°С в течение всего срока годности Набора.

- приготовленный отмывочный раствор хранить при температуре +2-8°C не более 45 суток, допускается хранение при комнатной температуре +18-25°C не более 15 суток.

Примечание. После использования реагента немедленно закрывайте крышку флакона. Закрывайте каждый флакон своей крышкой.

12.2.3. Изделия, хранившиеся с нарушением регламентированного режима, применению не подлежат.

12.2.4. Срок годности Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» - 24 месяца.

12.3. Эксплуатация.

Все варианты комплектаций набора предназначены для ручной постановки и для постановки на автоматических анализаторах для иммуноферментного анализа открытого типа с возможностью, как дробного использования планшета (набора), так и для постановки целого планшета (набора). Общее количество повторов определяется квалификацией персонала и рекомендациями GLP.

Рекомендуется постановка исследуемых образцов в дубликатах. Разрешается проведение анализа в монопликатах. Производитель гарантирует сохранение всех технических характеристик Набора и достоверность результатов. Потенциальный потребитель - врачи клинико-диагностических лабораторий. Профессиональная квалификационная группа "Врачи и провизоры" всех уровней (Приказ №526 от 06.08.2007 г «Об утверждении профессиональных квалификационных групп должностей медицинских и фармацевтических работников»). Медицинский персонал клинико-диагностических лабораторий должен иметь документированное подтверждение проведенного обучения, связанного с потенциальным риском, сочетающимся с работой с любым медицинским (клиническим) лабораторным устройством.

12.3.1. При использовании набора необходимо придерживаться следующих правил:

- не использовать Набор после окончания срока годности;

- не использовать Набор реагентов, если упаковка повреждена;

- не смешивать компоненты наборов разных серий, кроме унифицированных неспецифических реагентов (концентрат отмывочного раствора, стоп-реагент, субстратный раствор тетраметилбензидина (ТМБ));

- тщательно перемешивать реагенты при подготовке и проведении анализа;

- использовать для приготовления реагентов химически чистую посуду, обработанную дистиллированной водой;

- использовать только оборудование, прошедшее метрологическую поверку;

- исключить прямое воздействие солнечных лучей на планшет во время проведения исследования;

- не допускать присутствия паров перекиси водорода и хлора в помещении при проведении иммуноферментного анализа;

- после использования реагента немедленно закрывайте крышку флакона. Закрывайте каждый флакон своей крышкой;

12.3.2. Не допускается использование положительных контролей, если раствор во флаконе мутный, наблюдается осадок или неприятный запах.

12.3.3. Все компоненты Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» при соблюдении требований данной Инструкции стабильны в течение всего срока годности. Срок годности набора указан на внешней стороне упаковки.

12.3.4. Неправильное обращение с образцами и изменение процедуры проведения анализа могут повлиять на результаты. Для получения надежных результатов необходимо строгое соблюдение Инструкции по применению.

12.3.5. Не использовать компоненты из других Наборов.

12.3.6. Разрешается проведение анализа в монопликатах. Производитель гарантирует сохранение всех технических характеристик Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» и достоверность результатов.

12.3.7. Изделия и/или компоненты Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» ремонту и техническому обслуживанию не подлежат.

12.4. Утилизация.

12.4.1. Изделия, пришедшие в непригодность, в том числе в связи с истечением срока годности, подлежат утилизации.

12.4.2. Медицинские отходы класса Б. Утилизацию или уничтожение наборов реагентов следует проводить в соответствии с СанПиН 2.1.7.2790-10 «Санитарно-эпидемиологические требования к обращению с медицинскими отходами» и МУ-287-113 «Методические указания по дезинфекции, предстерилизационной очистке и стерилизации изделий медицинского назначения».

12.4.3. Утилизация проводится специализированными организациями, которые имеют лицензию на право утилизации медицинских отходов.

Предприятие-изготовитель гарантирует стабильность компонентов и Набора «SARS-CoV-2-IgG-ИФА», а также соответствие Набора «SARS-CoV-2-IgG-ИФА» требованиям Технических условий при соблюдении условий транспортирования, хранения и применения.

По вопросам, касающимся качества Набора реагентов «SARS-CoV-2-IgG-ИФА», следует обращаться в ФГБУ «Национальный медицинский исследовательский центр гематологии» по адресу: 125167, Москва, Новый Зыковский проезд, д. 4., тел/факс [phone]._

Символ Значение символа

Производитель

Дата производства

ПЕР Номер по каталогу

ЮТ Номер серии

V, Содержимого достаточно для проведения п количества исследований

2 Использовать до (год-месяц)

X Ограничение температуры

1 ™ 1 Только для ин витро диагностики

А Осторожно! Обратитесь к инструкции по применению

с® Обратитесь к инструкции по применению

Беречь от влаги

■ Не допускать воздействия солнечного света

■И',Щ/ ■ ¿¿Sf В состав входят «раздражающие» вещества. Не являются едкими.

SORB MTP Планшет

CONTROL - Отрицательный контроль

CONTROL №1 Положительный контроль №1

CONTROL №2 Положительный контроль №2

гаШ HRP Конъюгат

DIL ИФА-Буфер

SUBS TMB Субстратный раствор тетраметилбензидина (ТМБ)

BUF WASH n-X Концентрат отмывочного раствора

STOP Стоп-реагент

Я

>>

я о

Он

ю W

св

и н о

и о и со Я О Он

с

С т

нч

<М >

0 О

1

О) %

т

о

CS

о

CS

о

CS

о °

00 On

С

<

я о н

Я <о и cd <и

Он Он

о ю

cd

X «

w я

я «

Он

н о

я S

о т О

о CS о <м

к

го Рн

о?" я я

cd

S л <и

[-Н

X ю

cd И Я и о о я и

cd Я И

о. о ю

cd

ч

(D

Э

я я я я я

И <и

Регистрационное удостоверение РЗН 2020/10309 от 12.05.2020 г.

Набор реагентов для определения антител IgG к коронавирусу SARS-CoV-2 (Anti-SARS-CoV-2 ELISA (IgG))

Иммуноферментный тест для определения lgG-антител к SARS-CoV-2 в сыворотке крови человека

№ Антиген Класс Ig Субстрат Формат

EI2606-9601G SARS-CoV-2 IgG Лунки микропланшета, иммобилизованные антигеном 96 х 01(96)

НАЗНАЧЕНИЕ

Иммуноферментный анализ (ИФА) обеспечивает полуколичественное определение in vitro человеческих антител класса IgG к вирусу SARS-CoV-2 в сыворотке и плазме крови (ЭДТА, гепарин или цитрат) для подтверждения диагноза инфекции, вызванной SARS-CoV-2. Этот тест служит в качестве дополнения к методам прямого обнаружения патогена, а также может использоваться в эпидемиологических исследованиях. Набор предназначен только для диагностики in vitro. Анализ может быть также проведен в автоматическом режиме.

КЛИНИЧЕСКОЕ ЗНАЧЕНИЕ

.Коронавирус типа 2 (SARS-CoV-2. ранее называвшийся 2019-nCoV). вызывающий тяжёлый острый респираторный синдром, относится к семейству коронавирусов и. как и SARS-CoV, к роду Betacoronavirus [1]. Новый коронавирус появился в Китае в городе Ухань провинции Хубэй. Его появление вызвало волну инфекционных заболеваний, которая быстро распространилась по стране и всему миру [2. 3]. Спустя всего несколько дней после первого сообщения о пациентах с пневмонией неясного происхождения, возбудитель был идентифицирован как SARS-CoV-2 [2-4].