Структурно-аналитическое исследование церулоплазмина белых крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Захарова, Елена Тихоновна

• Захарова, Елена Тихоновна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Захарова, Елена Тихоновна

ВВЕДЕНИЕ . б

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА I. ГЕНЕТИЧЕСКИ ОБУСЛОВЛЕННЫЕ НАРУШЕНИЯ ОБМЕНА " МЕДИ ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

1.1. Биологическая роль.меди.и.медьсодержащие. белки . Ю

1.2. Нарушения обмена меди

1.3. Открытие.ЦП,.его.распространение в животном мире

ГЛАВА П. ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ЦП ЧЕЛОВЕКА И ЖИВОТНЫХ

2.1. Молекулярная масса и другие физик о-химичес-г кие параметры ЦП.

2.2. Каталитическая /оксидазная/ активность ЦП

2.3. Влияние ионов на каталитическую активность.

2.4. Структурная организация молекулы ЦП человека: одняцепочечная структура и доменное строение

2.5.'Генетический полиморфизм. Структурные.варианты ЦП.

2.6. Молекулярная гетерогенность ЦП.

2.6.1. Углеводы в составе молекулы ЦП

2.7. Аминокислотный состав ЦП.

2.8. Типы ионов.меди,медьсвязывающие.сайты.Эво-. люция ЦП.

2.9. Иммунологический анализ ЦП

ГЛАВА Ш. БИОЛОГИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ ЦП

3.1. Ферроксидазная активность ЦП (КФ.1.16.3.1).

3.2. Медьтранспортная функция ЦП

3.3. Антиоксидантные свойства ЦП

3.4. Регуляция уровня биогенных аминов

3.5. Роль ЦП в гомеостазе меди

3.6. По ли функциональность ЦП.

ГЛАВА 1У. ОБМЕН ЦП В НОРМЕ И ПАТОЛОГИИ

4.1. Биосинтез,регуляция и катаболизм ЦП

4.2. Молекулярная организация гена ЦП крысы

4.3. Последовательность реакций котрансляционного созревания ЦП крысы

4.4. Дефект синтеза,созревания и структуры ЦП при ГЛД 63 ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА У. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

5.1. Выделение ЦП крысы и человека

5.2. Седиментационный анализ ЦП

5.3. Электрофоретический анализ ЦП

5.4. Определение оксидазной активности ЦП

5.5. Получение апо-ЦП

5.6. Получение.специфических антител к ЦП крысы и человека

5.7. Иммунодиффузия.

5.8. Иммуноэлектрофорез

5.9. Восстановление и карбоксиметилирование ЦП

5.10. Пептидные карты ЦП крысы и человека

5.11. Получение йодированных.производных белков и их фрагментов

5.12. Тонкослойные.пептидные карты йодированных белков

5.13. Аминокислотный анализ белков

5.14. Определение N-концевых аминокислотных остатков

5.15. Определение содержания триптофана и тирозина

5.16. Определение свободных сульфгидрильных групп.

5.17. Определение углеводного состава

5.18. Определение содержания меди

5.19. Определение содержания белка

5.20. Выделение фракции аппарата Гольджи.из.клеток . печени крысы

5.21. Иммунологический анализ ЦП из аппарата Гольджи.

5.22. Анализ ЦП методом ЭПР-спектроскопии.

ГЛАВА У1. ВЫДЕЛЕНИЕ И ШЗИКО-ХИМИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА ЦЕРУЛОПЛАЗМИНА КРЫСЫ

6.1. Выделение и очистка ЦП крысы.

6.2. Определение.удельной оксидазной активности.ЦП . крысы.

6.3. Определение молекулярной массы ЦП крысы

6.4-. Идентификация апо-форыы белка в препаратах ЦП крысы .1046.5. Химический состав ЦП крысы

6.6. Сравнительный анализ ЦП крысы и ЦП.человека методом пептидных карт на бумаге

6.7. Исследование ЦП крысы и ЦП человека и фрагментов этих белков методом тонкослойных.пептидных карт, йодированных гидролизатов

6.8. Каталитически активная форма.ЦП.из.аппарата.Гольдки печеночных клеток крысы

6.9. Ферментативные свойства ЦП крысы

6.10. Иммунохимический анализ ЦП крысы, ЦП человека и ЦП крысы из аппарата Гольджи

ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Структурно-аналитическое исследование церулоплазмина белых крыс»

Актуальность проблемы. В Лаборатории биохимической генетики НИИЭМ АМН СССР под руководством члена-корреспондента АМН СССР профессора С.А.Нейфаха проводятся всесторонние исследования молекулярных механизмов развития тяжелого наследственного заболевания человека - болезни Вильсона-Коновалова или гепатолентику-лярной дегенерации (ГЛД). Это заболевание характеризуется моногенным наследованием и ярко выраженными нарушениями обмена меди, в результате чего соли меди в токсических количествах откладываются в различных органах больных, в том числе в печени и тканях головного мозга. Нарушения обмена меди непосредственно связаны с дефицитом медьсодержащего гликопротеида плазмы крови - церуло-плазмина (ЦП), белка, ответственного за межорганный транспорт меди.

Исследования, проводимые в Лаборатории биохимической генетики НИИЭМ, с убедительностью показывают, что в печени больных ГЛД нарушены пути биосинтеза и созревания ЦП /8,14,36/. Кроме того, продемонстрировано, что в плазме некоторых больных циркулирует ЦП с измененной структурой /28,29/.

Весьма вероятно, что все эти изменения обусловливают дефицит ЦП в крови больных ГЛД, следствием чего является отложение солей меди в токсических концентрациях в клетках внутренних органов и это в свою очередь служит причиной развития симптомов заболевания.

Детальное исследование всех закономерностей биосинтеза и созревания ЦП в норме и при патологии требует, чтобы непосредственно изучалась та живая ткань, которая синтезирует этот белок, то есть ткань печени. Но живая ткань печени человека может быть получена для исследования только при особых обстоятельствах и притом в очень ограниченных количествах путем биопсии. Все это крайне осложняет возможности исследования на здоровых и больных людях. В связи с этим анализ закономерностей биосинтеза и созревания ЦП наиболее целесообразно производить на модельных системах, то есть на животных. Такой модельной системой может служить ткань и культура клеток печени крысы. При использовании этой модельной системы уже получена ценная информация о природе мРНК, кодирующей ЦП /16/, о молекулярной организации гена ЦП /15,45/, о путях биосинтеза, внутриклеточной миграции, котрансляционных и посттрансляционных модификациях и секреции ЦП крысы /31,34/.

Изучение закономерностей биосинтеза ЦП в модельной системе прежде всего требует детальной физико-химической и структурной характеристики данного белка и выяснения общности строения церу-лоплазминов крысы и человека, так как конечной целью проводимых исследований является изучение молекулярной патологии ЦП человека и разработка рациональных способов диагностики и лечения болезни Вильсона-Коновалова у человека.

Цель и задачи исследования. Целью настоящего исследования было дать всестороннюю характеристику физико-химических свойств ЦП крысы. Исходя из поставленной цели основными задачами исследования являлись:

I/ получение очищенных препаратов ЦП крысы;

2/ доказательство гомогенности получаемых препаратов ЦП;

3/ определение основных физико-химических параметров и элементов структурной организации ЦП крысы; 4/ сравнительный анализ свойств и строения ЦП крысы и человека; 5/ получение специфических антител к ЦП крысы, которые могли бы быть использованы в дальнейших исследованиях по биосинтезу и обменным превращениям этого белка.

Научная новизна работы. Ранее в Лаборатории биохимической генетики НИИЭМ уже предпринималась попытка изучения свойств ЦП крысы /2/. В этой работе были охарактеризованы основные параметры белка, но, в целом, работа носила предварительный характер. В то время как физико-химические свойства ЦП человека достаточно хорошо охарактеризованы, и имеется обширная литература по этому вопросу, ЦП крысы до сих пор изучен явно недостаточно. В литературе опубликовано всего несколько единичных работ, посвященных этому белку, результаты которых к тому же носят противоречивый характер /83,123,132/. Таким образом, дальнейшее исследование и уточнение закономерностей строения и анализ свойств ЦП крысы представляется актуальным.

Научно-практическое значение полученных результатов. Получение гомогенных препаратов ЦП крысы и моноспецифических антител к ним явились основой для работ по выделению ЦП-мРНК и изучению механизмов созревания ЦП в гепатоцитах, проводимых в Лаборатории биохимической генетики НИИЭМ АМН СССР.

Полученные результаты по сравнительному исследованию ЦП позволяют определить особенности строения и свойств ЦП крысы и показывают, что ЦП - синтезирующая система печени крысы может служить адекватной моделью для изучения биосинтеза и обмена ЦП человека, выяснение которых необходимо для расширения наших знаний о молекулярных механизмах развития ГЛД.

Структура диссертации:

Работа изложена на 186 страницах машинописного текста, содержит 37 рисунков, II таблиц. Диссертация состоит из введения,

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Захарова, Елена Тихоновна

- 161 -выводы

1. Разработана модификация способа получения препаративных количеств ЦП крысы с высоким выходом. Этим способом выделен гомогенный белок с высокой удельной оксидазной активностью.

2. Изучены физико-химические свойства ЦП крысы. Найдено» что ЦП крысы является гликопротеидом с МВ 132 кЛ. Охарактеризован аминокислотный и углеводный состав этого белка. Определены оптические параметры, а также ферментативные и электрофорети-ческие свойства ЦП крысы. Установлен N -концевой аминокислотный остаток, представленный лейцином.

3. В сравнительном аспекте исследованы церулоплазмины крысы и человека. Выявлено тождество основных физико-химических параметров этих белков. Методом пептидных карт установлены небольшие видовые отличия ЦП крысы и ЦП человека.

4. Исследована доменная организация ЦП крысы. Отмечены сходство путей протеолитической деградации церулоплазминов крысы и человека, и более высокая устойчивость ЦП крысы к действию протеаз. На основании данных исследований пептидных набо^ ров обнаружен факт внутримолекулярной гомологии для ЦП крысы.

5. Методом анализа пептидных карт и по данным оксидазной активности исследован ЦП из элементов аппарата Гольджи гепатоци-тов крысы. Высказано предположение о природе этой формы ЦП. Делается заключение о сходстве промежуточных компонентов биосинтеза и созревания ЦП человека и ЦП крысы.

6. Разработан способ иммунизации кроликов, препаратами ЦП крысы, дополнительна очищенными с помощью электрофореза. Получены высокоспецифичные моновалентные антисыворотки с высоким титром, которые могут быть использованы для изучения закономерностей биосинтеза и обмена ЦП в организме крысы. 7. Сравнительные исследования показали, что организм крысы может служить адекватной моделью для изучения биосинтеза,созревания и обмена ЦП человека с целью выяснения молекулярных механизмов дефекта биосинтеза ЦП при болезни Вильсона-Коновалова (гепатолентикулярной дегенерации).

-КЗ

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Захарова, Елена Тихоновна, 1984 год

1.'Абелев Г.И., Соколенко A.A. Высокочувствительный элек« тро-иммунодиффузионный метод определения антигенов на ацетат-целлюлозных пленках. Бюлл. экспер. биол. и мед., 1977, т. 84, № 7, с. I21-123.

2. Василец И.М., Шавловский М.М., Муха Г.В. Физико-химические свойства и гетерогенность церулоплазмина белых крыс. Биохимия, 1970, т. 35, б, с. II39-II45.

3. Василец И.М., Шавловский М.М. Структурные особенности молекулярных форм церулоплазмина человека. Биохимия, 1972, т. 37, № I, с. 40-45.

4. Василец И.М. Церулоплазмины, их молекулярная структураи биологические функции. В кн,: Успехи биолог, химии, М., 1973, 14, с. 172-201.

5. Василец И.М., Машкова Е.Т.( Захарова ), Тетерина З.К., Рафальсон Д.И.', Шавловский М.М., Нейфах С.А. Генетические варианты церулоплазмина среди населения Ленинграда. Генетика, 1974, т. 10, № 12, с. 144-15I.

6. Васильев В.Б., Шавловский М.М., Нейфах С.А., Прозоровский В.Н., Рашковецкий Л.Г. Внутримолекулярная гомология церулоплазмина человека. Биоорг. химия, 1979, т. 5, № 7, с.1045-1052.

7. Васильев В.Б., Захарова Е.Т., Шавловский М.М. Анализ видовых различий радиоактивно меченных церулоплазмина и альбумина с помощью пептидных карт. Вопросы мед. химии, 1983, т. 29,3, с. 70-74.

8. Вахарловский В.Г. Соматические проявления и особенности течения гепатолентикулярной дегенерации /болезни Вильсона-Коновалова/. Канд. дисс. . канд.мед.нздгк, Л., 1976.

9. Вахарловский В.Г., Мошков К.А., Шавловский М.М., Нейфах С.А. Клинический полиморфизм и варианты церулоплазмина при гепатолентикулярной дегенерации. Генетика, 1977, т.13, № 7, с.1294-1304.

10. Воронина О.В., Монахов Н.К. Индукция образования под влиянием эстрадиола полирибосомного комплекса, синтезирующего церулоплазмин у крыс. Биохимия, 1980, т.45, № 6, с.1010-1016.

11. Воронина О.В., Гайцхоки B.C., Монахов Н.К., Пучкова Л.В., Шварцман A.JI. Молекулярные механизмы регулирования синтеза церулоплазмина под действием эстрадиола. Мол. биол., 1981, т.15, № I, с. 199-207.

12. On the defect of synthesis ceruloplasmin in the liver polyribosomes in Wilson's disease. Biochem. Genet,, 1975, v.13, К 9/1О, P. 533-550.

13. Гайцхоки B.C., Воронина O.B., Львов B.M., Монахов H.K., Пучкова Л.В., Тимченко Л.Т., Шварцман А.Л., Брага Э,М*, Носиков В.Н., Скобелева H.A., Фролова Л.Ю. Структурный ген церулоплазмина организация, экспрессия, регуляция. Тез. докл. УП

14. Зайцев В.Н., Мошков К.А., Шавловский М.М., Нейфах С.А. Рентгенографическое изучение церулоплазмина человека и его модифицированных форм. Биоорг. химия, 1975, т.1, № 10, с.1521-1527

15. Захарова Е.Т., Васильев В.Б., Горбунова В.Н., Шавловский М.М.1, Лакатош Ж., Шайго М. Выделение и физико-химическая характеристика церулоплазмина плазмы крови белых крыс. Биохимия, 1983, т.48, № 10, с.1709-1720.

16. Коннова Л.А. Гетерогенность и четвертичная структура церулоплазмина человека в норме и при гепатолентикулярной дегенерации. Канд. дисс., Л., 1969.

17. Коннова Л.А., Василец И.М., Шавловский М.М. N- и С-концевые аминокислоты церулоплазмина человека. Биохимия, 1969, т.34, № 5, с.1008-1014.

18. Коновалов Н.В. Гепато-церебральная дистрофия. М., Мед-гиз, I960.-16623. Мехтиев Н.Х., Шалимов Ю.П., Риш М.А. Биохимический полиморфизм церулоплазмина каракульских овец. Докл. АН СССР, 1971, т. 198, с.457-460.

19. Нейфах С.А., Шавловский M.M. Генетически обусловленные нарушения обмена меди при гепатолентикулярной дегенерации.-167В сб.: Прогресс в медицинской генетике. Под общ. ред.Н.Бочкова. М. : Медицина, 1978, с. 106-150.

20. Нейфах С.А., Алейникова Т.Д., Гайцхоки B.C., Монахов Н.К., Пучкова Л.В. Внутриклеточные белки предшественники церу-лоплазмина. - Докл. АН СССР, 1979, т. 244, № I, с.238-240.

21. J. Peptide Protein Res., 1982, v. 19, p. 40-5334. Puchkova L.V., Gaitshoki V.S., I^vov V.M., Monakhov

22. Puchkova L.V., Gaitskhoki V.S., Monakhov N.K., Timchenko L.T., Neifakh S.A. Prepr о ceruloplasmin is a primary product of cell-free translation of ceruloplasmin messenger RNA. Mol. Cell. Biochem., 1981, v. 35, p. 159-169."

23. Пучкова Л.В., Гайцхоки B.C., Вахарловский В.Г., Монахов Н.К., Шварцман A.I., Шульман В.Ш., Форкампф-Лауэ М.В., Нейфах С.А. Молекулярный дефект синтеза и созревания,церулоплазми-на при болезни Вильсона-Коновалова. Генетика, 1982, т.18, №5, с.703-712.

24. Samsonidze T.G., Moshkov К.А., Kisselev N.A., Neifakh

25. S.A. Electron microscope study on human ceruloplasmin. Int. J. Peptide Ecotein Res., 1979, v. 14, p. 161-169.

26. Шавловский M.M. О молекулярной структуре церулоплазми-на человека по данным пептидных карт. Канд.дисс., Л., 1970.• • • t-, -г

27. Шавловский М.М., Василец И.М. Пептидные карты восстановленного карбоксиметилированного церулоплазмина человека. ~ Биохимия, 1970, т.35, № 5, с.1032-1039.

28. Шапошников A.M., Муха Г.В., Здродовская Е.П. Об общих свойствах церулоплазмина обезьяны и человека. Биохимия, 1967, т.32, № 5, с.908-912.

29. Шапошников A.M., Монахов Н.К. Синтез церулоплазмина в срезах печени обезьян. Биохимия, 1968, т.32, № 2, с.314-318.

30. Шапошников A.M., Монахов Н.К. Органная и внутриклеточная локализация биосинтеза церулоплазмина. Биохимия, т.33,3, с.629-634.

31. Schaposhnikov A.M., Zubzhitski Yu.N., Shulman V.S. Identification of ceruloplasmin in human liver cells by fluorescent antibodies and absence of this protein in Wilson's disease. Esqperientia, 1969, v. 25, p. 424-426.

32. Schwartzman A.L., Gaitskhoki V.S., L'vov V.M., Nosikov V.V., Braga E.M., Frolova L.Yu., Scobeleva N.A., Kisselev L.L., Neifakh S.A. Complex molecular structure of the gene coding for rat ceruloplasmin. Gene, 1980, v. 11, N 1-2, p. 1-11.

33. Adman E.T., Stenkamp R.E., Sieker L.C., Jensen L.H.

34. A cry st allograph., c model for' azurin at resolution, J. Mol« Biol., 1978, v. 123, p. 35-47.47» Adman E.T., Jensen L.H. Structural features of azurin at 2.7 i resolution. Israel J. of Chem., 1981, v. 21, p.8-12.

35. Aisen P., Morell A.G. Physical and chemical studies on ceruloplasmin. III. A stabilizing copper-copper interaction in ceruloplasmin. J. Biol. Chem., 1965, v. 240, N 5, p.1974-1978.

36. Al-Timimi D.J., Dormandy T.L. Inhibition of lipid anti-oxidation by human ceruloplasmin. Biochem. J., 1977, v. 168, p. 235-288.

37. Andreasson L.E., "Vanngard T. Evidence of a specific copper (II) in human ceruloplasmin as a binding site for inhibitory anions. Biochim. Biophys. Acta, 1970, v. 200, N 2, p.247-257.

38. Arima M., Kamoshita S., Komia H. Genetical studies of Wilson's disease. III. Genetical and epidemiological studies of Wilson's disease in Mikura Island. Paediat. Univ. Tokyo, 1964,10, p. 5-10.

39. Ashwell G., Morell A.G. The role of surface carbohydrates in the hepatic recognition and transport of circulating glycoproteins. Adv. Enzymol., 1974, v. 41, p. 99-128.

40. Azzi A. Cytochröm c oxidase. Towards clarification of its structure, interactions and mechanism. Biochim. Biophys. Acta, 1980, v. 594, p. 231-252.

41. Barras B.C., Coult D.B. Interaction of some centrally active drugs with ceruloplasmin. Biochem. Pharmacol., 1972, v. 21, p. 677-685.

42. Blobel G., Sabatini D.D. Controlled proteolysis of nascent polypeptides in rat liver cell fractions. Biomembranes, 1971, N 2, p. 193-195.

43. Blobel G., Dobberstein B. Transfer of proteins across membranes. Presence of proteolytically processed and unprocessed nascent immunoglobulin light chains on membrane bound riboso-mes of murine myeloma. J. Cell. Biol., 1975, v. 67, p.835-851.

44. Boulard M., Blume E.G., Beutler E. The effect of copper on red cell enzyme activities. J. Clin. Invest., 1972, v. 51, p. 459-461•

45. Bremner I. Absorption, transport and distribution of copper. In: Biological Roles of Copper. Excerpta Medica, Amsterdam, (Ciba Found. Symp. 79), 1980, p. 23-48.

46. Broman L. Separation and characterization of two ceru-loplasmins from human serum. Nature, 1958, v.182, N 4650,p. 1655-1657.

47. Broman L. Chromatographic and magnetic studies of human ceruloplasmin. Acta Soc. Med. Upsaliensis, 1964, v.69, suppl.7.

48. Broman L., Kjellin H. A rapid semi-continuous method for purification of ceruloplasmin from human serum. Biochim. Biophys. Acta, 1964, v. 82, N 1, p. 101-109.

49. Calabrese L., Malaatesta P., Barra D. Purification and properties of "bovine caeruloplasmin. Biochem. J., 1931, v.199,p.667-673.

50. Cass A.E.G., Hill H.A.O. Copper proteins and copper enzymes. In: Biological Roles of Copper. Excerpta Medica, Amsterdam, (Ciba Found. Symp. 79), 1980, p. 71-91.

51. Co M.S., Hodgson K.O. Copper site of molluscan oxyhemo-cyanins. Structural evidence from X-ray absorption spectroscopy. J. Am. Chem. Soc., 1981, v. 103, p. 934-986.

52. Colman P.M., Freeman H.C., Guss T.M., Murata M., Norris Y.A., Ramsham J.A.M., Ventatappa M.P. X-ray crystal structure analysis of plastocyanin at 2.7 & resolution. Nature (Lond.), 1978, v. 272, p. 319-324.

53. Cordano A., Placko R.P., Graham G.G. Hypocupremia and neutropenia in copper deficiency. Blood, 1966, v. 28, p. 280283.

54. Curzon: G. The effect of some ions and chelating agents on the oxidase activity of ceruloplasmin. Biochem. J., 1960, v. 77, N 1, p. 66-73.

55. Curzon G. Some properties of coupled iron-ceruloplasmin oxidations systems. Biochem. J., 1961, v. 79, N 3, p. 656-663.73« Curzon G. The inhibition of the oxidase activity of ceruloplasmin by azide. Biochem. J., 1965, v. 96, N 1, p. 14-15.

56. Dische Z. General colour reactions. Methods Carbohydrate Chem., Academic Press, N.Y., 1962, 1, 3-4, p.478-481.

57. Dormandy T.L. Free-radical oxidation and antioxidants. Lancet, 1978, v. 1, p. 647-650.

58. Dwulet F.E., Putnam F.W. Internal duplication in the structure of human ceruloplasmin. In: Protides of the Biological Fluids, 1980, p. 83-86.

59. Ellman G.L. Tissue sulfhydryl groups. Arch. Biochem. Biophys., 1959, v. 82, IT 1, p. 70-77.

60. Erickson J.O., Gray R.D., Frieden E. Sulfhydryl groups in the reconstitution of ceruloplasmin. Proc. Soc. Exptl. Biol. Med., 1970, v. 134, IT 1, p. 117-121.

61. Evans G.W., Majors P.P., Cornatzer W.E. Induction of ceruloplasmin synthesis "by copper. Biochem. Biophys. Res. Communs, 1970, IT 5, p. 1120-1125.

62. Evans G.W. The "biological regulation of copper homeostasis in the rat. World Rev. Nutr. Diet, 1973, v.17, p.225-249.

63. Evans G.W. Copper gomeostasis in the mammalian system. Physiol. Rev., 1973, v. 53, N 3, p. 535-570.93» Fleischer B., Fleischer S. Preparation and characterization of Goldgi membranes from rat liver. Biochim. Biophys. Acta, 1970, v. 219, p. 301-319.

64. Gregoriadis G., Morell A.G., Sternlieh I., Scheinberg I.H. Catabolism of desialylated ceruloplasmin in the liver. -J. Biol. Chem., 1970, v. 245, N 21, p. 5835-5857.

65. Hickman J., Ashwell G., Morell A.G., Van den Hamer

66. Ingram V.M. The haemoglobins in genetics and evolution. Columbia Univ. Press, N.Y., 1963.

67. Kingston I.B., Kingston B.L., Putnam F.W. Chemical evidence that proteolytic cleavage causes the heterogeneitypresent in human ceruloplasmin preparations. Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 1977, v. 74, N 12, p. 5377-5381.

68. Kingston I.B., Kingston B.L., Putnam F.W. Complete amino acid sequence of a histidine-rich proteolytic fragment of human ceruloplasmin. Proc. Nat. Acad. Sei. USA, 1979, v. 76, N 4, p. 1668-1672.

69. Laurie S.H., Mohammed E.S. Caeruloplasmin: the enigmatic copper protein. Coord. Chem. Rev., 19S0, v. 33, P«279-312.

70. Legras B., Durou M.R., Cottencin M., Esvant J.Y., Cloarec L. Isolement et propriétés physico-chimiques de la ce-ruloplasmine de rat. C.R.Soc. Biol., 1980, v. 174, N 1, p.82-86.

71. Linder M.C., Moor J.R. Plasma ceruloplasmin. Evidence for its presence in and uptake "by heart and other organs of the rat. Biochim. Biophys. Acta, 1977, v. 499, p. 329-556.

72. Linder M.C., Houle P.A., Isaacs E. et al. Copper regulation of ceruloplasmin in copper-deficient rats. Enzyme, 1979, v. 24, N 1, p. 25-25.

73. Lowenstein H. Immunochemical investigation of human ceruloplasmin. Partial explanation of the "heterogeneity". -Int. J. Peptide Protein Res., 1975, v. 7, N 1, p. 1-9.

74. Lowry O.H., Rosebrough N.Y., Earr A.L., Randall R.I. Protein measurement with the Folin phenol reagent. J". Biol. Chem., 1951, v. 195, N 1, p. 265-275.

75. I\yko J. Serum ceruloplasmin levels in healthy persons and in certain pathologic conditions. Acta Med. Fol., 1967» v.' 6, N 5, P. 269-277.

76. Mancini G., Nash D.R., Heremans J.?. Further studies of single radial immunodiffusion. Qualities analysis of related and unrelated antibodies. Immunochemistry, 1970, v. 7, p.261-264.

77. Manolis A., Cox D.W. Purification of rat ceruloplasmin : characterization and comparison with human ceruloplasmin. Prepar. Biochem., 1980, v. 10, N 2, p. 121-132.

78. Marceau N., Aspin N. The intracellular distribution of the radio copper derived from ceruloplasmin and from albumin. Biochim. Biophys. Acta, 1973, v. 293, P- 338-350.

79. McCosker P.J. Paraphenilendyamine oxidase activity and copper-levels in mammalian plasmas. Nature, 1961, v.190, N 4779, p. 887-889.

80. McDermott J.N., Huber C.T., Osaki S., Frieden E. Role of iron in the oxidase activity of ceruloplasmin. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 151, N 3, p. 541-557.

81. Milne D.B., Matrone G. Forms of ceruloplasmin in developing piglets. Biochim. Biophys. Acta, 1970, v. 212, N 1, p. 43-49.

82. Morell A.G., Irvine R.A., Sternlieb I., Scheinberg I.H., Ashwell G. Physical and chemical studies on ceruloplasmin. J. Biol. Chem., 1968, v. 243, К 1, p. 155-156.

83. Morell A.G., Gregoriadis G., Scheinberg I.H., Hickman J., Ashwell G. The role of sialic acid in determining the survival of glycoproteins in the circulation. J. Biol. Chem., 1971, v. 246, N 5, p. 1461-1467.

84. Morell A.G., Van den Hamer C.J.A., Scheinberg I.H. Physical and chemical studies on ceruloplasmin. VI. Preparation of human ceruloplasmin crystals. J. Biol. Chem., 1969,v. 244, N 13, p. 3494-3496.

85. Mukasa H., Kajiyama S., Sugiyama K., Funakubo K., Iton M., Nosoh Y., Sato T. The subunit structure of porcine ceruloplasmin. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 168, N 1, p. 132-142.

86. Mukasa H., Nosoh Г., Sato T. Reversible dissociation of porcine ceruloplasmin into subunits. Biochim. Biophys. Acta, 1968, v. 168, N 3, P. 483-489.

87. Ortel L.T., Takahashi N., Putnam F.W. Structural model of human ceruloplasmin based on internal triplication, hyd-rophilic, hydrophobic character and secondary structure of domains. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1984, v. 81, N 15, p.4761-4765.

88. Osaki S., Johnson D.A. Mobilization of liver iron by ferroxidase (ceruloplasmin). J. Biol. Chem., 1969» v. 244, N 40, p. 5757-5758.

89. Osaki S., Johnson D.A., Topham R.W., Frieden E. Ferroxidase: a physiological role of ceruloplasmin. Fed. Proc., 1970, v. 29, N 2, p. 695-698.

90. Ouchterlony 0. Antigen-antibody reactions in gels. -Acta Pathol, et Microbiol. Scand., 1949, v. 26, N 1, p. 4-12.

91. Owen J.A., Smith H. Detection of ceruloplasmin after zone electrophoresis. Clin. Chim. Acta, 1961, N 6, p.441-444.

92. Palade G. Intracellular aspects of the process of protein synthesis. Science, 1975, v. 189, p. 347-358.

93. Palmiter R.D. Quantitation of parameters that determine the rate of ovalbumin synthesis. Cell, 1975, Np. 189-197.

94. Peters R., Walshe J.M. Studies on the toxicity of copper. Proc. R. Soc. (Biol.), 1966, v. 166, p. 273-294.

95. Poulik M.D. Electrophoretic and immunological studies of structural subunits of human ceruloplasmin. Nature, 1962, v. 194, N 4831, p. 842-344.

96. Poulik M.D. Heterogeneity and structure of ceruloplasmin. Ann. N.Y. Acad. Sci., 1968, v. 151, N 1, p.476-501.

97. Reinhammar B. The copper-containing oxidases. Ini Adv. in Inorg. Biochem. (Ed. "by G.L.Eichorn, L.G.Marzilli). El-sevier/North-Holland, N.Y., 1979, v. 1, p. 91-118.

98. Roeser H.P., Lee G.R., Nacht S., Cartwright G.E. The role of ceruloplasmin in iron metabolism. J. Clin. Invest., 1970, v. 49, N 2, p. 2408-2417.

99. Ryden L. Single-chain structure of human ceruloplasmin. Eur. J. Biochem., 1972, v. 26, N 3, p. 380-386.

100. Ryden L. Comparison of polypeptide-chain structure of four mammalian ceruloplasmin "by gel filtration in guanidine hydrochloride solutions. Eur. J. Biochem., 1972, v. 28, N 1,p. 46-50.

101. Ryden L. Model of the active site in the blue oxidases on the ceruloplasmin-plastocyanin homology. Proc. Nat. Acad. Sci., 1982, v. 79, p. 6767-6771.

102. Scheinberg I.H., Sternlieb I. Wilson's disease. Ann. Rev. Med., 1965, v. 16, p. 119-134.

103. Scheinberg I.H. The effects of heredity and environment on copper metabolism. The Med. Clin, of North America, 1976, v. 60, N 4, p. 705-712.

104. Shokeir M.H.K., Shreffler D.C. Cytochrome oxidase deficiency in Wilson's disease: a suggested ceruloplasmin function. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1969, v. 62, N 3, p. 867-872.

105. Shokeir M.H.K., Shreffler D.C. Two new ceruloplasmin variants in Negroes data on three populations. - Biochim. Genet., 1970, v. 4, N 5, p. 517-528.

106. Shreffler D.C., Brewer G.J., Gall J.C., Honeyman M.S. Electrophoretic variation in human serum ceruloplasmin: a new genetic polymorphism. Biochim. Genet., 1967, v. 1, N 2, p.101-115.

107. Twedt D.C., Sternlieb I., Gibberston S.R. Clinical, morphologic and chemical studies on copper toxicosis of Bedling-ton terriers. J. Amer. Vet. Med. Assoc., 1979, v. 175, p. 269275.

108. Vanngard T. Some properties of ceruloplasmin copper as studies by ESR spectroscopy. In: Magnetic Resonances in Biological Systems (ed. by E.Ehrenberg, E.C.Malmstr6'm and T.Vanngard), Pergamon Press, Oxford, 1967, p. 213-219.

109. Walter P., Ibrahimi I., Blobel G. Translocation of proteins across the endoplasmatic reticulum. J. Cell. Biol., 1981, v. 91, p. 545-550.203« Walshe J.M. Wilson's disease. Neworal therapy. Lancet, 1956, v. 7, N 6906, p. 25-26.

110. Walshe J.M. The physiology of copper in man, it's relation to Wilson's disease. Brain, 1967, v. 90, p. 149-152.

111. Walshe J.M. Wilson's disease. Biochem. J., 1969,v. Ill, N 3, P. 8-9.

112. Walshe J.M. Copper chelation in patients with Wilson's disease: a comparison of penicillamine and triethylene tetramine dihydrоchloride. Q. J. Med., 1973, v. 62, N 167, p.441-452.

113. Walshe J.M. Brief observation on the management of Wilson's disease. Proc. Roy. Soc. Med., 1977, v. 70, Ж 3, p. 1-3.

114. Wilson S.A.K. Progressive lenticular degeneration:a familial nervous disease associated with cirrhosis of the liver. Brain, 1912, v. 34, p. 295-509.

115. Winterburn P.J., Phelps С .P. The significance of glycosylated proteins. Nature, 1972, v. 236, N 5343, p. 147-151.

116. Zgirski A., Witwicki J., Hilewicz-Grabska M., Witas H. A simple and rapid procedure for isolation of ceruloplasmin from porcine and bovine blood serum. Acta Biochim. Polon., 1978, v. 25, N 4, p. 561-368.