Сравнительный анализ фенотипических и молекулярно-генетических свойств холерных вибрионов эльтор, выделенных до начала и в период седьмой пандемии холеры тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, кандидат медицинских наук Нефедов, Константин Сергеевич

• Нефедов, Константин Сергеевич
• кандидат медицинских наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Нефедов, Константин Сергеевич

СПИСОК ПРИНЯТЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ И СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1 Мобильные генетические элементы Vibrio cholerae биовара эльтор, связанные с вирулентностью.

1.1.1 Бактериофаги.20

1.1.2 Острова патогенности и пандемичности.26

1.1.3 Суперинтегроны и интегроны V.cholerae.33

1.2. Изменения генома V.cholerae биовара эльтор в процессе эво

ЛЮЦИИ.'.

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

2.1 Бактериальные штаммы.42

2.2 Питательные среды и реактивы.45

2.3. Методы.

2.3.1. Культивирование штаммов.

2.3.2. Определение продукции растворимой гемагглюти-нин/протеазы.

2.3.3 Определение подвижности.

2.3.4. Определение продукции 01 антигена.

2.3.5 Определение чувствительности к холерным диагностическим бактериофагам.

2.3.6 Определение продукции маннозо-чувствительных гемагг-лютинирующих пилей адгезии.

2.3.7 Определение способности формировать биопленку.47

2.3.8 Определение продукции холерного токсина.48

2.3.9 Определение конкурентных способностей.

2.3.10 Электрофорез в полиакриламидном геле.

2.3.11 Выделение экзополисахарида и количественное определение его содержания.

2.3.12 Полимеразная цепная реакция.51

2.3.13 Выделение хромосомной ДНК.

2.3.14 Секвенирование ДНК.

2.3.15 Компьютерный анализ нуклеотидных последовательностей 56

2.3.16 Внутрикишечное заражение модельных животных.

2.3.17 Гибридизация хромосомной ДНК по Саузерну и риботипирование штаммов V.cholerae биовара эльтор.

ГЛАВА 3. СРАВНИТЕЛЬНЫЙ ФЕНОТИПИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ШТАММОВ V.CHOLERAE БИОВАРА ЭЛЬТОР, ВЫДЕЛЕННЫХ ДО НАЧАЛА И В РАЗНЫЕ ПЕРИОДЫ СЕДЬМОЙ ПАНДЕМИИ ХОЛЕРЫ.58

3.1. Изучение серологических свойств, чувствительности к диагностическим фагам и гемолитической активности.59

3.2. Изучение основных биохимических свойств, связанных с вирулентностью.65

3.3. Сопоставление устойчивости к лекарственным препаратам у предпандемических и пандемических штаммов.59.-7 ^

ГЛАВА 4. СТРУКТУРНЫЙ И ФУНКЦИОНАЛЬНЫЙ АНАЛИЗ ГЕНОМА ПРЕДПАНДЕМИЧЕСКИХ ШТАММОВ ХОЛЕРНЫХ ВИБРИОНОВ ЭЛЬТОР.

4.1. Распространение профагов и островов патогенности среди природных штаммов, выделенных до начала седьмой пандемии холеры.72

4.2. Выяснение присутствия в геноме предпандемических штаммов регуляторных генов, контролирующих экспрессию основных генов вирулентности.77

4.3. Сравнение нуклеотидных последовательностей основных структурных и регуляторных генов вирулентности пред-пандемических штаммов.82

4.4. Определение токсигенности и вирулентности предпандеми-ческих штаммов.85

4.5. Определение присутствия острова персиситенции у пред-пандемпческих штаммов и изучение их способности к образованию биопленки.88

ГЛАВА 5. МОЛЕКУЛЯРНО-ГЕНЕТИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ШТАММОВ V.CHOLERAE БИОВАРА ЭЛЬТОР, ВЫ

ЗВАВШИХ 7-Ю ПАНДЕМИЮ ХОЛЕРЫ.

5.1. Выявление в геноме пандемических штаммов новых мобильных элементов - островов пандемичности VSP-1 и VSP-2.95

5.2. Сравнительный анализ жизнеспособности предпандемических и пандемических штаммов V.cholerae биовара эльтор 99

5.3. Молекулярное типирование штаммов холерных вибрионов эльтор, выделенных до и во время седьмой пандемии.100

ГЛАВА 6. ГЕНЕТИЧЕСКОЕ РАЗНООБРАЗИЕ ПРИРОДНЫХ ШТАММОВ V.CHOLERAE БИОВАРА ЭЛЬТОР ВЫДЕЛЕННЫХ ВО ВРЕМЯ 7-ОЙ ПАНДЕМИИ ХОЛЕРЫ.

6.1. Выявление природных штаммов с дефектными геномными островами, связанными с вирулентностью или паидемичностью.108

6.2. Вариабельность геномов профагов СТХср и RSlcp.111

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Сравнительный анализ фенотипических и молекулярно-генетических свойств холерных вибрионов эльтор, выделенных до начала и в период седьмой пандемии холеры»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ. Механизм эволюции патогенных бактерий - одна из центральных проблем медицинской микробиологии. Решение этой проблемы позволяет выяснить причины генетического разнообразия возбудителей инфекционных болезней и провести прогнозирование появления новых эпидемически опасных вариантов. Vibrio cholerae, имеющий повышенную эпидемическую значимость, является возбудителем' холеры, острого диарейного заболевания с массивной дегидратацией, унесшего миллионы человеческих жизней за семь известных пандемий: Распространение холеры во многих странах мира определяет реальную возможность ее завоза на территорию России.' Непосредственным напоминанием об этой угрозе являются недавние эпидемические вспышки холеры* в Дагестане (1994 г., 1998 г.), Дальнем-Востоке и Приморье (1999 г.), Татарстане (2001 г.), Ростовской области (2005 г.), а также спорадические случаи заболевания^ (Челябинск, 2000 г.; Калмыкия, 2002 г.; Башкортостан, 2004 г., 2008 г; Тверская область 2005 г.; Мурманск, 2006 г.). Согласно современным представлениям, в пределах вида V. cholerae образовалось три эпидемически опасных варианта: холерные вибрионы 01-серогруппы классического биовара, вызвавшие; видимо, первые 6 пандемий азиатской холеры (1817-1923 гг.), холерные вибрионы Ol-серогруппы биовара эльтор - возбудитель текущей, 7-ой, пандемии (с 1961 г. по настоящее время) и внезапно появившийся в 1992 г. высоковирулентный штамм V. cholerae 0139-серогруппы, с которым связывали начало 8-ой пандемии холеры.

Поскольку в современный период продолжается 7-ая пандемия холеры, ее возбудитель остается в центре внимания многих исследователей. Секвенирование генома V. cholerae биовара эльтор< (Heidelberg J.F et al., 2000) позволило выявить следующие его основные особенности: а) в отличие от многих других патогенов в клетках V. cholerae имеется 2 кольцевые хромосомы, различающиеся по размеру и функции; б) основные гены вирулентности возбудителя входят в состав различных мобильных генетических элементов (двух профагов и пяти геномных островов), локализованных в основном на большой хромосоме.

Мобильность этих элементов и нестабильность их геномов, а также изменение в настоящее время экологии if иммунного статуса человека во многих регионах мира, включая- Россию, - все это создает предпосылки для образования штаммов с ранее неизвестными свойствами. Такая ситуация» диктует необходимость выяснения основных направлений эволюции возбудителя холеры эльтор в современный период. Однако для получения такой информации необходимы полные сведения об-эволюции генома этого возбудителя в недалеком прошлом. В этой' связи очевидна актуальность исследований, направленных на решение этой проблемы. Несмотря на большой интерес исследователей к этому вопросу, пока нет единой точки зрения на происхождение возбудителя холеры эльтор. При анализе 2-х предпандемических и 3-х пандемических- штаммов выявлены лишь особенности генетической организации этих изолятов (Dziejman М. et al., 2002). Полученные ранее сведения о структуре и функции генома предпандемических штаммов явно недостаточны. Практически отсутствуют данные о функции островов пандемичности VSP-1 и VSP-2, имеющихся в геноме клинических штаммов, выделенных во время 7-ой пандемии холеры. Информация о геномных вариациях природных штаммов V. cholerae биовара эльтор, циркулирующих на разных территориях в период эпидемического неблагополучия по холере, является также неполной. Получение новых фундаментальных сведений о фенотипических и генетических особенностях штаммов, выделенных до и во время 7-ой пандемии холеры эльтор, позволит получить более полную картину об эволюции этого возбудителя и выяснить механизмы, лежащие в основе адаптации этого патогена к меняющимся условиям внешней среды. Эти сведения будут служить основой для решения такой важной прикладной задачи, как паспортизация штаммов Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб", а также для разработки новых средств диагностики и дифференциации штаммов с разным эпидемическим потенциалом.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ - выявление фенотипических и генетических особенностей предпандемических и пандемических штаммов V. cholerae биовара эльтор.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ:

1. Провести сравнительный анализ различных фенотипических свойств предпандемических и пандемических штаммов холерных вибрионов биовара эльтор.

2. Изучить распространенность профагов и геномных островов, связанных с вирулентностью и персистентностью, среди предпандемических штаммов V. cholerae биовара эльтор.

3. Исследовать экспрессию генов вирулентности и персистенции, локализованных в геноме предпандемических штаммов.

4. Изучить распространенность островов пандемичности VSP-1 и VSP-2 среди различных пандемических изолятов; определить роль последних в жизнеспособности этих штаммов.

5. Провести молекулярное типирование штаммов V. cholerae биовара эльтор, выделенных до и в период 7-ой пандемии холеры, для определения их филогенетических связей.

6. Изучить генетическое разнообразие природных штаммов V. cholerae биовара эльтор, выделенных на разных территориях во время эпидосложнений по холере.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА:

Показано, что предпандемические штаммы V. cholerae биовара эльтор, независимо от времени их выделения (1910 г. и 1937 г.) и вирулентности, не отличались от штаммов, изолированных во время 7-ой пандемии, по серологическим, биохимическим свойствам и резистентности к диагностическим холерным бактериофагам. Вместе с тем впервые выявлено, что предпандемические штаммы, в отличие от пандемических, не имели устойчивости к изученным антибиотикам.

При сравнительном анализе геномов предпандемических и пандемических штаммов обнаружено, что регуляторные гены toxR, luxX, hixS, hns и pep А, входящие в состав различных систем регуляции, являются наиболее древними. Впервые определено присутствие в геноме всех изученных предпандемических штаммов острова персистенции в окружающей среде EPI, что указывает на его древнее происхождение. Установлено наличие в геноме вирулентных предпандемических штаммов двух копий профага СТХф и дефектного острова патогенности VPI-2, лишенного одного (гер1803) или двух (папН, гер1803) тестируемых генов. Показано широкое распространение двух островов пандемичности VSP-1 и VSP-2 среди штаммов V. cholerae биовара эльтор, выделенных во время 7-ой пандемии холеры, что подтверждает их важную роль в формировании пандемического потенциала у этого возбудителя. Новыми являются данные о генетическом разнообразии природных клинических штаммов, связанном с нестабильностью геномов VPI-2, а также VSP-1 и VSP-2. Впервые обнаружено, что риботипирование и RAPD-ПЦР-типирование позволяют дифференцировать предпандемические и пандемические штаммы V. cholerae биовара эльтор.

Приоритетное значение имеют результаты, полученные при анализе функций геномов мобильных элементов. Выявлен высокий уровень экспрессии генов msh, локализованных в составе EPI, что свидетельствует об участии этого геномного острова в образовании биопленки предпандемическими штаммами. Впервые экспериментально доказана более высокая жизнеспособность пандемических штаммов в водной среде по сравнению с предпандемическими изолятами, что с высокой вероятностью связано с присутствием в геноме первых островов пандемичности VSP-1 и VSP-2.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ:

Создан комплекс мультиплексных ПЦР, предназначенных для выявления в геноме штаммов V, cholerae основных генов вирулентности и персистенции. На основе разработанных тест-систем оформлены методические рекомендации "Мультиплексный ПЦР-анализ для изучения генетического разнообразия и выявления атипичных штаммов Vibrio cholerae биовара эльтор", которые одобрены Ученым Советом РосНИПЧИ «Микроб» (протокол № 10 от 18 декабря 2007 г.) и утверждены директором института 18 декабря 2007 г.

Создана коллекция, состоящая из 18 авторских штаммов V. cholerae биовара эльтор, которая включает штаммы с различным набором генов вирулентности и пандемичности. Эти штаммы могут быть использованы для выяснения и уточнения роли мобильных элементов в проявлении вирулентных свойств штаммов и их адаптации к меняющимся условиям окружающей среды. Штаммы коллекции депонированы в Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб".

Полученная информация о наличии или отсутствии в геноме 124 природных штаммов 20-25 различных генов будет использована для геномной паспортизации штаммов из Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб". ч

ОСНОВНЫЕ ПОЛОЖЕНИЯ, ВЫНОСИМЫЕ НА ЗАЩИТУ:

1. Штаммы V. cholerae биовара эльтор, выделенные до начала и в разные периоды седьмой пандемии холеры, не различаются по продукции 01-антигена, термолабильного гемолизина, растворимой гемагглютинин/протеазы, белков внешней мембраны OmpU и ОшрТ, а также чувствительности к холерным диагностическим эльтор и классическим бактериофагам. Вместе с тем предпандемическне штаммы имеют выраженные отличия от пандемических относительно их резистентностик изученным антибиотикам.

2. В геноме авирулентных и вирулентных предпандемических штаммов присутствуют общие структурные (hapA, rtxA, attRS) и регуляторные (toxR, hvcO, luxS, hns, pepA) гены, а также» остров персистенции в окружающей среде EPI. Предпандемическне штаммы способны образовывать биопленку, что связано с эффективной экспрессией генов, контролирующих подвижность (mot), биосинтез экзополисахарида (eps) и маннозочувствительных пилей адгезии (msh), последние из которых входят в состав EPI.

3. Геном вирулентных предпандемических штаммов содержит две копии профага СТХф, а также два острова патогенности YPI-1 и YPI-2, из которых последний молодых учёных и специалистов "Окружающая среда и здоровье" (Суздаль, 2005 г.) и Всероссийской конференции "Фундаментальная наука и клиническая медицина" (Санкт-Петербург, 2007 г.).

ПУБЛИКАЦИИ:

По теме диссертации опубликовано 13 научных работ, из них 4 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК.

СТРУКТУРА И ОБЪЕМ ДИССЕРТАЦИИ:

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, 4 глав собственных исследований, заключения, выводов и списка использованных источников, включающего 219 цитируемых работ, из них 54 отечественных и 165 зарубежных. Общий объем диссертации составляет 153 страницу. Текст иллюстрирован 14 таблицами и 15 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Нефедов, Константин Сергеевич

ВЫВОДЫ

1 .Авирулентные и вирулентные штаммы V. cholerae биовара эльтор, выделенные до начала 7-ой пандемии, не отличаются от пандемических изолятов по серологическим и биохимическим свойствам, а также резистентности к холерным диагностическим бактериофагам. Вместе с тем сравниваемые штаммы имеют разную чувствительность к изученным лекарственным препаратам.

2.В геномах авирулентных и вирулентных предпандемических штаммов холерных вибрионов эльтор содержатся общие регуляторные гены toxR, luxO, luxS, hns, рерА, а также мобильный генетический элемент - остров персистенции EPI, что свидетельствует об их древнем происхождении.

3.Впервые показано, что предпандемическне штаммы, содержащие EPI, способны формировать биопленку, что указывает на возможность сохранения их во внешней среде в течение длительного периода.

4.Выявлспы значительные различия между геномами авирулентных и вирулентных предпандемических штаммов. В геноме вирулентных штаммов, в отличие от авирулентных, присутствуют дополнительные мобильные элементы: две копии профага СТХф и два острова патогенности VPI-1 и VPI-2, из которых последний является дефектным. Эффективная экспрессия ключевых генов патогенности ctxAB и tcpA, входящих в состав соответственно СТХф и VPI-1, определяет способность этих штаммов вызывать экспериментальную холерную инфекцию у биомоделей.

5.Показано широкое распространение островов пандемичности VSP-1 и VSP-2 среди штаммов V. cholerae биовара эльтор, выделенных во время 7-ой пандемии холеры. Впервые обнаружен более высокий уровень выживаемости в водной среде пандемических штаммов по сравнению с предпандемическими, что подтверждает роль VSP-1 и VSP-2 в формировании пандемического потенциала у возбудителя холеры эльтор.

6.Генетическое разнообразие изученных пандемических штаммов, выделенных в эпидемически опасные периоды, выражается в присутствии в природных популяциях изолятов, не имеющих либо таких мобильных элементов, как СТХф, 1181ф, VSP-1 или VSP-2, либо отдельных генов СТХф и VPI-2. Кроме этого при анализе нуклеотидных последовательностей обнаружены штаммы, содержащие VPI-1 с гибридным геном tcpA. Показано, что в основе изменения вирулентных свойств различных штаммов лежит вариабельность генома профага СТХф.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В данной работе впервые проведен комплексный сравнительный анализ фенотипических и генетических свойств 25 предпандемических и пандемических штаммов V. cholerae биовара эльтор для углубления наших знаний об эволюции генома этого патогена. Необходимость проведения такой работы была связана с тем, что, несмотря на многочисленные исследования в этом направлении, до сих пор нет единой точки зрения относительно происхождения возбудителя 7-ой пандемии холеры (Faruque S.F., Nair G.B., 2008; О'Shea Y.A., 2004b; Yoon S.S., Mekalanos J.J., 2006). Понимание эволюционных преобразований генома V. cholerae биовара эльтор в прошлом необходимо для выяснения механизмов и направления эволюции в современный период. Поучение таких сведений является основой для прогнозирования появления патогенных клонов с новыми диагностически значимыми и вирулентными свойствами, что необходимо для своевременной разработки адекватных диагностических и профилактических средств.

Основным итогом исследований фенотипических свойств явилось выявление идентичных серологических и биохимических свойств, а таюке резистентности к холерным диагностическим бактериофагам у всех изученных штаммов, независимо от времени выделения (1910 г., 1937 г., 1962 - 2005 гг.), их вирулентности и пандемического потенциала. Предпандемическне штаммы отличались от пандемических лишь появлением у последних устойчивости к изучаемым антибиотикам.

Генетический анализ предпандемических штаммов показывает присутствие в их геноме общих с пандемическими штаммами структурных и регуляторных генов (attRS, hapA, rtxA; toxR, luxO, luxS, hns, рерА), а также мобильного элемента EPI. Несомненно, что эти гены и геномный остров EPI имеют древнее происхождение. Впервые показано, что предпандемические штаммы, как и пандемические изоляты, способны формировать биопленку в условиях in vitro. Это свойство указывает на возможность сохранения их во внешней среде в течение длительного периода. Вместе с тем выявлены и подтверждены различия между геномами вирулентных предпандемических и пандемических штаммов. Показано, что в отличие от клинических изолятов, выделенных в 1937 г. и содержащих в геноме профаг СТХф, а также ОП VPI-1 и дефектный ОП VPI-2, пандемические штаммы имели дополнительные мобильные элементы — профаг RS^ и острова пандемичности VSP-1 и VSP-2. Эти данные полиостью согласуются с результатами других исследователей. Кроме того, впервые установлено, что пандемические штаммы, имеющие VSP-1 и VSP-2, характеризуются большей выживаемостью bi водной среде по сравнению с вирулентными предпандемическими изолятами, лишенными этих геномных островов. Выявленные различия в выживаемости между сравниваемыми штаммами подтверждают участие VSP-1 и VSP-2 в формировании пандемического потенциала у возбудителя последней пандемии холеры.

Полученная информация о фенотипических и генетических особенностях предпандемических и пандемических штаммов, а также данные риботипирования и RAPD-ПЦР-типирования свидетельствует в пользу предположения о следующих этапах эволюции генома возбудителя холеры эльтор: авирулентные предпандемические ш гаммы V. cholerae eltor —» вирулентные предпандемические штаммы V. cholerae eltor —> вирулентные пандемические штаммы V. cholerae eltor.

Это означает, что происходило поэтапное обогащение генома авирулентного штамма-предшественника различными МГЭ, связанными с вирулентностью и пандемичностью.

Самостоятельный интерес представляют также данные о генетическом разнообразии 99 природных штаммов V. cholerae биовара эльтор, выделенных в период 7-ой пандемии холеры во время эпидосложнений. В результате выявлено 20 групп природных штаммов, отличающихся от типичных отсутствием того или иного мобильного элемента (профагов СТХср, RSlcp, островов пандемичности VSP-1 и VSP-2) либо отдельных генов, входящих в состав СТХф и/шиг VPI-2. Вместе с тем на основе секвенирования гена tcpA из ОП VPI-1 и анализа полученных данных были обнаружены штаммы холерных вибрионов эльтор с гибридным' геном tcpA, имеющим значительную область гомологии с геном tcpA холерных вибрионов классического биовара. Хотя'частота встречаемости таких изолятов невелика, тем не менее эти данные свидетельствуют о том, что в современный период происходит горизонтальный перенос генов вирулентности от V. cholerae cholerae к V. cholerae eltor. В целом, из анализа представленных данных очевидно, что утрата генетического материала играет ведущую роль в- формировании генетически измененных штаммов. Следует особо отметить тот факт, что клинические штаммы также оказались генетически неоднородными из-за нестабильности геномных островов VPI-2, VSP-1 и VSP-2. Выявленное генетическое разнообразие природных штаммов свидетельствует о продолжающихся изменениях генома возбудителя холеры эльтор, в результате которых могут сформироваться новые варианты патогенных клонов с новыми диагностически значимыми и вирулентными свойствами.

Полученные фундаментальные данные являются основой для решения ряда прикладных вопросов. Показана возможность использования риботипирования и RAPD-ПЦР-типирования для дифференциации предпандемических и пандемических штаммов, первые из которых до сих пор выделяются как от больных диареей, так и из внешней среды. Кроме того, полученные данные о наличие (или отсутствии) в геноме более 124 природных штаммов, выделенных на разных территориях и в различные годы (1910-2005 гг.), 20-25 структурных и регуляторных генов, локализованных как в коровой части хромосомы так и на мобильных элементах, будут использованы для генетической паспортизации штаммов V. cholerae биовара эльтор, хранящихся в Государственной коллекции патогенных бактерий "Микроб".

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Нефедов, Константин Сергеевич, 2009 год

1. Адамов А. К., Наумшина М. С. Холерные вибрионы. Саратов. -1984. -328 с.

2. Андрусенко ИТ., Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Подосинникова Л.С., Иванова С.М. Холерные вибрионы 01 и 0139 серогрупп: чувствительность к антибиотикам в период седьмой пандемии // Журн. микробиол. 2008. -№ 3. - С. 107-114.

3. Бароян О.В. Холера Эль-Тор. Москва. -1971. - 254 с.

4. Гинцбург A.M., Ильина Т.С., Романова Ю.М. "Quorum sensing" или социальное поведение бактерий // Журн. микробиол. 2003. - № 5. - С. 86-93.

5. Ерошепко Г.А. Молекулярно-генетический анализ штаммов Vibrio cholerae 0139: Дисс. . док. биол. наук. Саратов. - 2004.-298 с.

6. Жуков-Вережников Н.Н., Мусабаев И.К., Завьялова Н.К. Клиника, лечение и профилактика холеры. Ташкент. - 1966. - 438 с.

7. Заднова С.П., Лозовский Ю.В. Механизмы секреции грамотрицательныхбактерий // Пробл. особо опасных инф. 2005. — Вып. 90. - С. 11-16.

8. Ильина Т.С., Смирнов Г.Б. Мигрирующие генетические элементы и их роль в эволюции // Итоги науки и техники. 1979. — № 10. - С. 99-153.

9. Ильина Т.С. Транспозоны бактерий и способы их перемещений // Генетика. 1986.-Т. 22. -№ 11.-Р. 2572-2582.

10. Ильина Т.С. Структурная организация и механизмы перемещений генных кассет, кодирующих резистентность к антибиотикам и факторы вирулентности бактерий // Молекул, генетика. — 2001. № 1. - С. 3-12.

11. Ильина Т.С., Романова Ю.М. Геномные острова бактерий: организация, функции, роль в эволюции // Молекул, биол. 2002. - Т. 36. - № 2. - С. 228-239.

12. Ильина Т.С. Механизмы горизонтального переноса генов: роль бактериофагов и интегронов в эволюции патогенных бактерий // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. 2003. - № 4. - С. 3-10.

13. Ильина Т.С., Романова Ю.М., Гинцбург A.J1. Биопленки как способ существования бактерий в окружающей среде и организме хозяина: феномен, генетический контроль и системы регуляции их развития // Генетика. 2004. - Т. 40. - № 11. - С. 1445-1456.

14. Ильина Т.О. Суперинтегроны бактерий источники новых генов с адаптивными функциями // Генетика. - 2006. - Т. 42. - № 11. - С. 15361546.

15. Инструкция по контролю специфической стерильности экспериментальных препаратов, приготовленных из культур чумного и холерного микробов. Утверждено ГУКИ МЗ СССР. Москва. - 1982 г.

16. Ковалевская Н.П. Мобильные генные кассеты и интегроны // Молекулярная биология. 2002. - Т. 36. - № 2. - С. 261-267.

17. Кутырев В.В., Смирнова Н.И. Эпидемически опасные штаммы холерного вибриона: молекулярно-генетические аспекты их происхождения и эволюции // Пробл. особо опасных инф. 2004. - Вып. 88. - С. 5-9.

18. Лабораторная диагностика холеры. Методические указания МУ 4.2.221807. Москва. - 2007.

19. Литвин В.Ю. Экосистемный пусковой механизм эпидемического проявления сапронозов (на примере холеры эльтор) // Журн. микробиол. -1996. — № 3. С. 11-15.

20. Литвин В.Ю., Марамович А.С., Гинцбург А.Л. Стратегия адаптивной изменчивости холерных вибрионов в природных водоемах // Вестник РАМН. -2001. -№ 11. -С. 20-25.

21. Ломов Ю.М. Эволюция возбудителя холеры и прогноз по этой инфекции на ближайшее будущее // Эпидемиол. и инфекц. болезни. 2004. - № 1. — Р. 7-12.

22. Ломов Ю.М. Холера и проблемы биотерроризма // Эпидемиол. и инфекц. болезни 2008. - № 2. - С. 4-6.

23. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Молекулярное клонирование. Пер с анг. Москва. - 1984. - 480с.

24. Марамович А.С., Погорелов В.И., Урбанович Л.Я., Шкаруба Т.Т. Холера эльтор в Латинской Америке // Журн. микробиол. 2001. - № 5. - С. 82-90.

25. Марамович А.С., Урбанович Л.Я., Миронова Л.В., Куликалова Е.С. Эволюция эпидемиологии холеры // Журн. микробиол. 2006. - № 6. - С. 63-71.

26. Миндлин С.З., Петрова М.А., Басс И.А., Горленко Ж.М. Происхождение, эволюция и миграция генов лекарственной устойчивости // Генетика. -2006.-Т. 42. -№ 11.-С. 1495-1511.

27. Монахова Е.В., Мнхась И.К., Смоликова Л.М., Мишанькин Б.Н. Изучение генетических детерминант токсинов кассеты вирулентиости и нейраминидазы холерных вибрионов с помощью молекулярного зондирования // Журн. микробиол. 2001. - № 2. - Р. 25-29.

28. Монахова Е.В., Писанов Р.В. Токсины холерных вибрионов // Молекул, генетика.-2005.-№ 1.-С. 7-18.

29. Монахова Е.В., Писанов Р.В., Гончарова Л.А., МИхась Н.К., Непомнящая Н.Б., Асеева Л.Е., Каграманов B.C. Клонирование и экспрессия гена гемагглютинин/протеазы (hapA) Vibrio cholerae в Escherichia coli И Биотехнология. 2006. - № 6. - С. 8-15.

30. Монахова Е.В., Ломов Ю.М., Михась Н.К., Писанов Р.В. Структура и изменчивость неполного СТХ-элемента холерных вибрионов // Проблемы особо опасных инфекций. 2007. - Вып. 93. - С. 58-61.

31. Москвитина Э.А. Современные тенденции в развитии седьмой пандемии холеры // Пробл. особо опасных инф. 2008. - Вып. 95. - С. 22-26.

32. Никитина Г.П., Урюпина Н.В. Методические особенности применения гемолитического теста для дифференциации биотипов холерных вибрионов // Пробл. особо опасных инф. 1974. - Вып. 40. - С. 88-92.

33. Онищенко Г.Г., Ломов Ю.М., Москвитина Э.А., Федоров Ю.М., Подосинникова Л.С., Горобец А.В. Холера в начале XXI века. Прогноз // Журн. микробиол. 2005. - № 3. - С. 44-48.

34. Осин А.В., Ерошенко Г.А., Лозовский Ю.В., Смирнова Н.И. Сравнительный ПЦР-анализ структуры генома вирулентных и авирулентных штаммов Vibrio cholerae серогруппы 0139 // Пробл. особо опасных инф. Саратов, 2003. - № 85 - С. 97-103.

35. Остерман Л.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультра-центрифугирование. Москва, -1981. - 288 с.

36. Писанов Р.В., Гончаров Е.К., Монахова Е.В., Алексеева Л.П., Мишанькин Б.Н. Клонирование и экспресиия гена zot (zonula occludens toxin) Vibrio cholerae в Escherichia coli И Молекул, генетика. 2005. — № 1. - С. 28-32.

37. Подосинншсова J1. С. Холерные вибрионы, выделенные на территории СССР в период седьмой пандемии: Автореф. дис. д-ра мед. наук. -Саратов,-1993.-44 с.

38. Романова Ю.М., Ильина Т.С., Гинцбург А.Л. Мобильные генетические элементы и их роль в эволюции патогенных бактерий // Вестник РАМН. — 2001.-№ 11.-С. 15-20.

39. Савостина Е.П., Попов Ю.А., Каштанова Л. Анализ геномного полиморфизма типовых и атипичных штаммов возбудителя чумы сиспользованием ПЦР с универсальными праймерами // Молекул, генетика,микробиол. и вирусол. 2004. - № 1. - С. 23-31.

40. Смирнов Г.Б. Механизмы приобретения и потери генетической информации бактериальными геномами // Успехи современной биологии. -2008. Т. 128. - № 1. - С. 52-76.

41. Смирнова Н.И. Возбудитель холеры новой 0139-серогруппы: молекулярно-геиетические особенности и происхождение // Молекул, генетика. 2002. - № 3. - С. 23-33.

42. Смирнова Н.И., Костромитина Е.А., Челдышова Н.Б., Кутырев В.В. Отличия в составе генов вирулентности в штаммах Vibrio cholerae eltor, выделенных из разных источников на территории Туркменистана. // Молекул, генетика. 2002. - № 4. - С. 2-18.

43. Смирнова Н.И., Кутырев В.В. Эволюция генома возбудителя холеры // Молекул, генетика. 2004. - № 4. - С. 3-13.

44. Смирнова Н.И., Кутырев В.В. Сравнительный анализ молекулярно-генетических особенностей геномов и их эволюционных преобразований у возбудителя холеры, чумы и сибирской язвы // Молекул, генетика, микробиол. и вирусол. 2006. - № 2. - С. 9-19.

45. Стогова А.Г. Стандартная методика определения гемолитической активности холерных вибрионов эльтор И 12-я межресп. науч.-практ. конф. противочумн. учрежд. Сред. Азии и Казахстана по профилакт. чумы. — Алма-Ата, 1985. - С. 285-286.

46. Телесманич Н.Р. Общебиологическая роль гемолизина холерныхвибрионов // Int. J. Immunorehabilitation. 2002. - Т. 4. - № 2. - С. 222-227.

47. Тудор В., Страти И. Оспа. Холера. Бухарест. -1981. - 360 с.

48. Хесин Р.Б. Непостоянство генома. Москва. -1984. — 472 с.

49. Челдышова Н.Б. Дифференциация штаммов Vibrio cholerae 01 с различной эпидемической значимостью на основании четырех генов вирулентности: ctxA, tcpA, toxR и hapA: Дисс. . канд. мед. наук. Саратов, - 2002. - 173 с.

50. Attridge S.R., Voss Е., Manning Р.А. The role of toxin co-regulated pili in the pathogenesis of Vibrio cholerae 01 EbTor // Microb. Pathog. — 1993. Vol. 15. -P. 421-431.

51. Beck N.A., Krukonis E.S., DiRita V.J. TcpH Influences virulence gene expression in Vibrio cholerae by inhibiting degradation of the transcription activator TcpP // J. Bacteriol. 2004. - Vol. 186, N 24. - P. 8309-8316.

52. Behari J., Stagon L., Calderwood S.B. pepA, a gene mediating pH regulation of virulence genes in Vibrio cholerae // J. Bacteriol. 2001. - Vol. 183, N 1. - P. 178-188.

53. Benitez J.A., Silva A.J., Finkelstein R.A. Environmental signals controlling production of hemagglutinin/protease in Vibrio cholerae // Infect. Immun. -2001. Vol. 69, N-10. - P. 6549-6553.

54. Bhaskaran К., Rouley D., Nutritional stadies on Vibrio cholerae II Gen. Microbiol. 1956. - Vol. 15, N 2. - P. 417 - 422.

55. Bik E.M., Bunschoten A.E., Gouw R.D., Mooi F.R. Genesis of the novel epidemic Vibrio cholerae 0139 strain: evidence for horizontal transfer of genes involved in polysaccharide synthesis // The EMBO Journal. 1995. - Vol. 14, N 2.-P. 209-216.

56. Bina J., Zhu J., Dziejman M., Faruque S., Calderwood S., Mekalanos J. ToxR regulon of Vibrio cholerae and its expression in vibrios shed by cholera patients // Proc. Natl. Acad. Sci. 2003. - Vol. 100, N 5. - P. 2801-2806.

57. Biscri L., Bouvier M., GuMrout A.-M. Boisnard S., Mazel D. Comparative study of class 1 integron and Vibrio cholerae superintegron integrase activites // J. Bacterid.- 2005. -Vol. 185, N5.-P. 1740-1750.

58. Booth B.A., Boesman-Finkelstein M., Finkelstein R.A. Vibrio cholerae hemagglutinin/protease nicks cholera enterotoxin // Infect. Immun. 1984. -Vol. 45.-P. 558-560.

59. Boyd E.F., Waldor M.K. Evolutionary and functional analyses of variants of the toxin-coregulated pilus protein TcpA from toxigenic Vibrio cholerae non-01/non-0139 serogroup isolates // Microbiol. 2002. - Vol. 148. - P. 16551666.

60. Carroll P.A., Tashima K.T., Rogers M.B., DiRita V.J., Calderwood S.B. Phase variation in tcpH modulates expression of the ToxR regulon in Vibrio cholerae // Mol. Microbiol. 1997.-Vol. 25, N6.-P. 1099-1111.

61. Chastel C. The centenary of the discovery of the Vibrio El Tor (1905) or dubious beginnings of the seventh pandemic of cholera // Hist. Sci. Med. 2007. - Vol. 41, N 1. -P. 71-82.

62. Chattopadhyay K., Bhattacharyya D., Banerjee K.K. Implication of amphiphilicity and lipid-induced conformational change for its pore-forming activity // Eur. J. Biochem. 2002. - Vol. 269. - P. 4351-4358.

63. Chen Y., Stine O.C., Morris J.G., Johnson J.A. Genetic variation of capsule/LPS biogenesis in two serogroup 031 Vibrio cholerae isolates // FEMS Microbiol. Lett.-2007.-Vol. 273.-P. 133-139.

64. Chiavelli D.A., Marsh J.W., Taylor R.K. The mannose-sensitive hemagglutinin of Vibrio cholerae promotes adherence to zooplankton // Appl. and Envir. Microbiol. 2001. - Vol. 67, N. 7. - P. 3220-3225.

65. Clark Ch.A., Purins L. Kaewracon P. The Vibrio cholerae 01 chromosomal integron // Microbiol. 2000. - Vol. 146. - P. 2605-2612.

66. Cotter P.A., DiRita V.J. Bacterial virulence gene regulation: an evolutionary perspective // Annu. Rev. Microbiol. 2000. - Vol. 54. - P. 519-565.

67. Crawford J.A., Kaper J.B., DiRita V.J. Analysis of ToxR-dependent transcription activation of ompU, the gene encoding a major envelope protein in Vibrio cholerae II Mol. Microbiol. 1998. - Vol. 29. - P. 235 - 246.

68. Dalsgaard A., Forslund A., Tam N.V., Vinh D.X., Cam P.D. Cholera in

69. Vietnam: changes in genotypes- and emergence of class Is integrons containing aminoglycoside resistance gene cassettes in Vibrio cholerae 01- strains isolated from 1979 to 1996// J. Clinical Microbiol. 1999. -Vol. 37, N 3. - P. 734-741.

70. Dalsgaard A., Forslund A., Serichantalergs O., Sandvang D. Distribution and' content of class 1 integrons in different- Vibrio cholerae O-serotype strains isolated in Thailand;// AAC. 2000. — Vol. 44, N 5. — P. 1315-132L

71. Davis B.M., Lawson E.H., Sandkvist M., Ali A., Sozhamannan S., Waldor M:K. Convergence of the secretory pathways for cholera toxin and< the filamentousiphage, CTXcp // Science. 2000. - Vol. 288. - P: 333-335.

72. Davis B.M., Kimsey H.Hi, Kane A.V., Waldor M.K. A satellite phage-encoded antirepressor induces repressor aggregation and cholera, toxin, gene transfer // The EMBO Journal. 2002. - Vol. 21; N 16. - P. 4240-4249.

73. Davis B.M., Waldor M.K. Filamentous phages linked to virulence of' Vibrio cholerae // Current Opinion in Microbiol: 2003. - Voir 6. - P. 35-42.

74. Dutta N.K., Habbu M.K. Experimental'cholera in infant rabbits: a method4 for chemotherapeutic investigation // Brit. J. Pharmacol. 1955. — Vol. 256, N 23. -P. 12252 - 12256.

75. Dziejman M., Balon E., Boyd D.- Fraser C.M., Heidelberg J.F., Mekalanos J.J: Comparative genomic analysis of Vibrio cholerae: Genes that correlate with cholera endemic and pandemic disease // Proc. Natl. Acad. Sci. 2002. - Vol. 99.-P. 1556-1561'.

76. Farfan M., Minana-Galbis D., Fuste M.C., Loren J.G. Allelic diversity and population structure in Vibrio cholerae 0139 Bengal based' on nucleotidesequence analysis//J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184, N5.-P. 1304-1313.

77. Faruque S.M., Albert M.J., Mekalanos J.J. Epidemiology, genetics, and ecology of toxigenic Vibrio cholerae H Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998a. - Vol. 62, N. 4.-P. 1304-1314.

78. Faruque S.M., Asadulghani, Rahman M.M., Waldor M.K., Sack D.A. Sunlight-induced propagation of the lysogenic phage encoding cholera toxin // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68, N 8. - P. 4795-4801.

79. Faruque S.M., Biswas K., Udden S.M.N, Ahmad Q.S., Sack D.A., Nair G.B., Mekalanos J.J. Transmissibility of cholera: In vivo-formed biofilms and their relationship to infectivity and persistence in the environment // Proc. Natl. Acad.

80. Sci. USA. 2006. - Vol. 103, N. 16. - P. 6350-6355.

81. Faruque S.F., Nair G.B. Vibrio cholerae Genomics and Molecular Biology. -Norfolk, UK 2008. - 218 p.

82. Figueroa-Arredondo P., Heuser J.E., Akopyants N.S., Morisaki J.H., Giono-Cerezo S., Enriquez-Rincon F., Berg D.E. Cell vacuolation caused by Vibrio cholerae hemolysin // Infect. Immun. 2001. - Vol. 69, N 3. - P. 1613-1624.

83. Fields P. I., Popovic Т., Wachsmuth K., Olsvik O. Use of polymerase chain reaction for detection of toxigenic Vibrio cholerae Ol strains from the Latin American cholera epidemic // J. Clin. Microbiol. 1992. - Vol. 30. - P. 2118— 2121.

84. Fiore A.E., Michalski J.M., Russell R.G., Sears C.L., Kaper J.B. Cloning, characterization, and chromosomal mapping of a phospholipase (lecithinase) produced by Vibrio cholerae II Infect. Immun. 1997. - Vol. 65, N 8. - P. 31123117.

85. Flemming H.C., Neu T.R., Woznaik D.J. The EPS matrix: the "house of biofilm cells" // J. Bacteriol. 2007. - Vol. 189, N 22. - P. 7945-7947.

86. Fluit A.C., Schmitz F.J. Resistance integrons and super-integrons // Clin. Microbiol. Infect. 2004. - Vol. 10. - P. 272-288.

87. Fogel M.A., Waldor M.K. Distinct segregation dynamics of the two Vibrio cholerae chromosomes // Mol. Microbiol. 2005. - Vol. 55. - P. 125-136.

88. Franzon V.L., Barker A., Manning P.A. Nucleotide sequence encoding the mannose-fucose-resistant hemagglutinin of Vibrio cholerae О1 and construction of a mutant //Infect. Immun. 1993. - Vol. 61, N 7. - P. 3032-3037.

89. Freter R., O'Brien P.C., Macsai M.S. Role of ehemotaxis in the association of motile bacteria with intestinal mucosa: in vivo studies // Infect. Immun. — 1981. — Vol. 34.-P. 234-240.

90. Galen J.E., Ketley J.M., Fasano A., Richardson S.H., Wasserman S.S., Kaper J.B. Role of Vibrio cholerae neuraminidase in the function of cholera toxin // Infect. Immun. 1992. - Vol. 60, N 2. - P. 406-415.

91. Gardel C.L., Mekalanos J.J. Alterations in Vibrio cholerae motility phenotypes correlate with changes in virulence factor expression // Infect. Immun. 1996. -Vol. 64, N6.-P. 2246-2255.

92. Garg P., Aydanian A., Smith D., Morris G., Nair G.B., Stine O.C. Molecular epidemiology of 0139 Vibrio cholerae: mutation, lateral gene transfer, and founder flush II Emerging Infectious Diseases. 2003. - Vol. 9, N 7. - P. 810814.

93. Guidolin A., Manning P.A. Genetics of Vibrio cholerae and its bacteriophages I I Microbiol. Rev. 1987. - Vol. 51, N 2. - P. 285-298.

94. Hacker J., Blum-Oehler G., Miihldorfer I., Tschape H. Pathogenicity islands of virulent bacteria: structure, function and impact on microbial evolution // Mol. Microbiol. 1996. - Vol. 23, N 6. - P. 1089-1097.

95. Hacker J., Kaper J.B. Pathogenicity islands and the evolution of microbes // Annu. Rev. Microbiol. 2000. - Vol. 54. - P. 641-679.

96. Hall R.M., Stokes H.W. Integrons: novel DNA elements which capture genes by site-specific recombination // Genetica. 1993. - Vol. 90. - P. 115-132.

97. Hammer B.K., Bassler B.L. Quorum sensing controls biofilm formation in Vibrio cholerae // Mol. Microbiol.-2003. Vol. 50. № l.-P. 101-114.

98. Hanne L.P., Finkelstein R.A. Characterization' and distribution of the hemagglutinins production by Vibrio cholerae II Infect. Immun. 1982. - Vol. 36. - P. 209-214.

99. Hartley D.M., Morris Jr. J.G., Smith D.L. Hyperinfectivity: a critical element in the ability of V. cholerae to cause'epidemics?'// PLoS Medicine. 2006. - Vol. 3.-P. 0063-0069.

100. Hase C.C., Finkelstein R.A. Cloning and' nucleotide sequence of the Vibrio cholerae hemagglutinin/protease (HA/protease) gene and construction of an HA/protease-negative strain // J. Bacteriol. 1991. - Vol. 173. - P. 3311 - 3317.

101. Heilpern A.J., Waldor M.K. pIIICTX, a predicted СТХф minor coat protein, can expand the host range of coliphage fd to include Vibrio cholerae // J. Bacteriol. -2003.-Vol. 185, N3.-P. 1037-1044.

102. Hitchcock P.J., Brown T.M.1 Morphological heterogeneity among Salmonella lipopolysaccharide chemotypes in silver-stained polyacrylamide gels // J. Bacteriol.- 1983.-Vol. 154, N l.-P. 269-277.

103. Holmgren J. Action of cholerae toxin and the prevention and treatment of cholerae. //Nature 1981. - Vol. 292, N 5822. - P. 413-417.

104. Jermyn W.S., Boyd E.F. Characterization of-a noveb Vibrio pathogenicity island (VPI-2) encoding neuraminidase (nanH) among toxigenic Vibrio cholerae isolates //Microbiol. 2002. - Vol. 148. - P. 3681-3693.

105. Jermyn W.S., Boyd E.F. Molecular evolution of Vibrio pathogenicity island-2 (VPI-2): mosaic structure among Vibrio cholerae and Vibrio mimicus naturalisolates//Microbiol. 2005. - Vol. 151.-P. 311-322.

106. Johnson S.R., Liu B.C., Romig W.R. Auxotrophic mutations induced by Vibrio cholerae mutator phaga VcAl // FEMS Microbiol. Lett. 1981. - Vol. 11, N 1. -P. 13-16.

107. Johnson G., Holmgren J., Svennerholm A. Analysis of expression of toxin-coregulated pili in classical and El Tor Vibrio cholerae 01 in vitro and in vivo II Infect. Immun. 1992. - Vol. 60, N 10. - P. 4278-4284.

108. Johnson J.A., Morris J.G., Kaper J.B. Gene encoding zonula occludens toxin (zot) does not occur independently from cholera enterotoxin genes (ctx) in Vibrio cholerae // J. Clinical Microbiol. 1993. - Vol. 31, N 3. -P. 732-733.

109. Karaolis D.K., Johnson J.A., Bailey C.C., Boedeker E.C., Kaper J.B., Reeves P.R. A Vibrio cholerae' pathogenicity island associated with epidemic and pandemic strains // Proc. Natl. Acad. Sci. 1998. - Vol. 95. - P. 3134-3139.

110. Kato J., Zhu J., Liu C., Moss J. Enhanced Sensivity to Cholera Toxin in ADP-Ribosylarginine Hydrolase-Deficient Mice // Mol. Cell. Biol. 2007. - Vol. 27, N 15.-P. 5534-5543.

111. Keasler S. P., Hall R.N. Detecting and biotyping V. cholerae 01 with multiplex polimerase chain reaction //Lancet. 1993 - Vol. 341. - P. 1661.

112. Keymer D.P., Miller M.C., Schoolnik G.K., Boelim A.B. Genomic and phenotypic diversity of coastal Vibrio cholerae strains is linked to environmental factors I I Appl. and Envir. Microbiol. 2007. - Vol. 73, N 11. - P. 3705-3714.

113. Kirn Т.J., Jude В.A., Taylor R.K. A colonization factor links Vibrio cholerae environmental survival and human infection // Nature. 2005. - Vol. 438. - P. 863-866.

114. Kirn T.J., Taylor R.K. TcpF is a soluble colonization factor and protective antigen secreted by El Tor and classical 01 and 0139 Vibrio cholerae serogroups // Infect. Immun. 2005. - Vol. 73, N 8. - P. 4461-4470.

115. Krishnan H.H., Ghosh A., Paul K. Chowdhury R. Effect of anaerobiosis on expression of virulence factors in Vibrio cholerae II Infect. Immun. — 2004. — Vol. 72, N7.-P. 3961-3967.

116. Krukonis E.S., Yu R.R., DiRita V.J. The Vibrio cholerae ToxR/TcpP/ToxT virulence cascade: distinct roles for two membrane-localized transcriptional activators on a single promoter // Mol. Microbiol. 2000. - Vol. 38, N 1. - P. 67-84.

117. Kumar S., Tamura K., Nei M. MEGA3: Integrated software for Molecular Evolutionary Genctics Analysis and sequence alignment // Briefings in Bioinformatics. 2004. - Vol. 5. - P. 150-163.

118. Labbate M., Boucher Y„ Joss M.J., Michael C.A., Gillings M.R., Stokes H.W. Use of chromosomal integrons arrays as a phylogenetic typing system for Vibrio cholerae pandemic strains // Microbiol. 2007. - Vol. 153. - P. 1488-1498.

119. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T // Nature. 1970. - Vol. 227. - P. 680 - 685.

120. Lan R., Reeves P.R. Pandemic spread of cholera: genetic diversity andrelationships within the seventh pandemic clone of Vibrio cholerae determined by amplified fragment length polymorphism // J. Clinical Microbiol. 2002. -Vol. 40, N 1.-P. 172-181.

121. Lazar S., Waldor M.K. ToxR-independent expression of cholera toxin from die replicative form of СТХф // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66, N 1. - P. 394-397.

122. Li C.C., Merrell D.S., Camilli A., Kaper J.B. ToxR interferes with CRP-dependent transcriptional activation of ompT in Vibrio cholerae II Mol. Microbiol. 2002. - Vol. 43, N 6. - P. 1577 - 1589.

123. Liu Z., Stirling F.R., Zhu J. Temporal Quorum-Sensing Induction RegulatesI

124. Vibrio cholerae Biofilm Architecture // Infect. Immun. 2007. - Vol. 75, N 1. -P. 122-126.

125. Marsh J.W., Taylor R.K. Genetic and transcriptional analyses of the Vibrio cholerae mannose-sensitive hemagglutinin type 4 pilus gene locus // J. Bacteriol.- 1999. Vol.181, N 4. - P.l 110-1117.

126. Mazel D., Dychinco В., Webb V.A., Davies J. A distinctive class of integrons in the Vibrio cholerae genome // Science. 1998. - Vol. 187, N 5. - P. 1740-1750.

127. Mazel D. Integrons: agents of bacterial evolution // Nature Rev. Microbiol.2006.-Vol.4.-P. 608-620.

128. McLeod S.M., Waldor M.K. Characterization of XerC- and XerD-dependent CTX phage integration in Vibrio cholerae И Mol. Microbiol. 2004. - Vol. 54, N4.-P. 935-947.

129. McLeod S.M., Kimsey H.H., Davis B.M., Waldor M.K. СТХф and Vibrio cholerae: exploring a newly recognized type of phage-host cell relationship // Mol. Microbiol. 2005. - Vol. 57, N 2. - P. 347-356.

130. Mekalanos J.J., Moseley S.L., Murphy J.R., Falkow S. Isolation of enterotoxin structural gene deletion mutations in Vibrio cholerae induced by two mutagenic vibriophages I I Genetics. 1982. - Vol. 79. - P. 151-155.

131. Mekalanos J.J., Rubin E.J., Waldor M.K. Cholera: molecular basis for emergence and pathogenesis // FEMS Immun. Med. Microbiol. 1997. - Vol. 18.-P. 241-248.

132. Miller M.B., Skorupski K., Lenz D.H., Taylor R.K., Bassler B.L. Parallel quorum sensing systems converge to regulate virulence in Vibrio cholerae П Cell.-2002.-Vol. 110.-P. 303-314.

133. Mitra S.N., Mukhopadhyay R., Ghosh A.N., Ghosh R.K. Conversion of Vibrio eltor MAK757 to classical biotype: role of phage PS 166 // Virology. 2000. -Vol. 273.-P. 36-43.

134. Mooi F.R., Bik E.B. The evolution of epidemic Vibrio cholerae strains // Trends Microbiol. 1997. - Vol. 5, N 4. - P. 161-165.

135. Moorthy S., Watnick P.I. Genetic evidence that the Vibrio cholerae monolayer is a distinct stage in biofilm development // Mol. Microbiol. 2004. - Vol. 52. - P. 573-587.

136. Moshioni M., Tombola F., Bernard M., Coelho A., Zitzer A., Zoratti M., Montecucco C. The Vibrio cholerae haemolysin anion channel is required for cell vacuolation and death // Cell. Microbiol. 2002. - Vol. 4. - P. 397-409.

137. Murley Y.M., Carroll P.A., Skorupski K., Taylor R.K., Calderwood S.B. Differential transcription of the tcpPH operon confers biotype-specific control of the Vibrio cholerae ToxR virulence regulon // Infect. Immun. 1999. - Vol. 67, N 10.-P. 5117-5123.

138. Murphy R.A., Boyd E.F. Three pathogenicity islands of Vibrio cholerae canexcise from the chromosome and form circular intermediates // J. Bacteriol. -2008. Vol. 190, N 2. - P. 636-647.

139. Nandi В., Nandy R.K., Vicente A.C.P., Ghose A.C. Molecular characterization of a new variant of toxin-coregulated pilus protein (TcpA) in a toxigenic non-01/non-0139 strain of Vibrio cholerae // Infect. Immun. 2000. - Vol. 68, N 2. -P. 948-952.

140. Nye M.B., Taylor R.K. Vibrio cholerae H-NS domain structure and function with respect to transcriptional repression of ToxR regulon genes reveals differences among H-NS family members // Mol. Microbiol. 2003. - Vol. 50, N2.-P. 427-444.

141. O'Shea Y.A., Boyd E.F. Mobilization of the Vibrio pathogenicity island between Vibrio cholerae isolates mediated by CP-T1 generalized transduction // FEMS Microbiol. Letters.-2002.-Vol. 214.-P. 153-157.

142. Olson R., Gouaux E. Vibrio cholerae cytolysin is composed of an a-hemolysin-like core // Protein Science, 2003. - Vol. 12. - P. 379-383.

143. Ottemann K.M., Miller J.F. Roles for motility in bacterial-host interactions // Mol. Microbiol. 1997.-Vol. 24.-P. 1109-1117.

144. Parsot C., Mekalanos J.J. Expression of Vibrio cholerae gene encoding aldehyde dehydrogenase is under control of ToxR the cholera toxin transcriptional activator//J. Bacteriol. 1991.-Vol. 173, N. 9.-P. 2842-2851.

145. Prouty M.G., Osorio C.R., Klose K.E. Characterization of functional domains of the Vibrio cholerae virulence regulator ToxT // Mol. Microbiol. 2005. - Vol. 58, N 4. - P. 1143-1156.

146. Pruzzo C., Vezzulli L., Colwell R.R. Global impact of Vibrio cholerae interactions with chitin // Envir. Microbiol. 2008. - Vol. 10, N 6. - P. 14001410.

147. Quinones M., Kimsey H.H., Waldor M.K. LexA cleavage is required for CTX prophage induction // Mol. Cell. -2005. Vol. 17. - P. 291-300.

148. Reidl J., Klose K.E. Vibrio cholerae and cholera: out of the water and into the host // FEMS Microbiol. Rev. 2002. - Vol. 26. - P. 125-139.

149. Requera G., Kolter R. Virulence and the environment: a novel role for Vibrio cholerae toxin-coregulated pili in biofilm formation on chitin // J. Bacteriol. -2005.-Vol. 187, N 10.-P. 3551-3555.

150. Rollenhagen J.E., Kalsy A., Cerda F., John M., Harris J.B., LaRocque R.C., Qadri F., Calderwood S.B., Taylor R.K., Rayn E.T. Transcutaneous immunization with toxin-coregulated pilin a induces protective immunity against

151. Vibrio cholerae 01 El Tor challenge in mice // Infect. Immun. 2006. - Vol. 74, N 10.-P. 5834-5839.

152. Rowe-Magnus D.A., Guerout A.-M., Ploncard P., Dychinco В., Davies J., Mazel D. The evolutionary history of chromosomal super-integrons provides an ancestry for multiresistant integrons // Proc. Natl. Acad. Sci. 2001. - Vol. 98, N2.-P. 652-657.

153. Rowe-Magnus D.A., Guerout A.-M., Mazel D. Bacterial resistance evolution by recruitment of super-integron gene cassettes // Mol. Microbiol. 2002. - Vol. 43, N6.-P. 1657-1669.

154. Salles C. A., Momen H., Vicente A. C. P., Coelho A. Vibrio cholerae in South America: polymerase chain reaction and zymovar analysis // Trans R. Soc. Trop. Med. Hyg. 1993. - Vol. 87. - P. 272.

155. Sanger F., Nicklen S., Coulson A.R. DNA sequencing with chain-terminating inhibitors // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1977. - Vol. 74 - N. 12. - P.5463-5467.

156. Silva A.J., Leitch G.J., Camilli A., Benitez J.A. Contribution of hemagglutinin/protease and motility the pathogenesis of El Tor biotype cholera // Infect. Immun. 2006. - Vol. 74, N 4. - P. 2072-2079.f I

157. Sinha S., Chakraborty R., De K., Khan A., Datta S., Ramamurthy Т., Bhattacharya S.K., Takeda Y., Nair G.B. Escalating association of Vibrio cholerae 0139 with cholera outbreaks in India // J. Clinical Microbiol. 2002. -Vol. 40, N 7. - P. 2635-2637.

158. Sperandio V., Bailey C., Giron J.A., DiRita V.J., Silveira W.D., Vettore A.L., ' Kaper J.B. Cloning and characterization of the gene encoding the OmpU outermembrane protein of Vibrio cholerae II Infect. Immun. 1996. - Vol. 64, N 12. - P. 5406 - 5409.

159. Svennerholm A.-M., Wiklund G. Rapid GMi-enzyme-linked immunosorbent assay with visual reading for identification of Escherichia coli heat-labile enterotoxin // J. Clin. Microbiol. 1983. - Vol. 17. - P. 262 - 270.

160. Tagami Y., Ikigai H., Oishi Y. AFM observations of (DMPC/cholesterol) mixed monolayer on agueous solution of Vibrio cholerae hemolysin // Physicochem. Eng. Aspects. 2006. - Vol. 284. - P. 475-479.

161. Tagomori K., Iida Т., Honda T. Comparison of genome structures of vibrios, bacteria possessing two chromosomes // J. Bacteriol. 2002. - Vol. 184, N 16. -P. 4351-4358.

162. Tamayo R., Schild S., Pratt J.T., Camilli A. Role of cyclic Di-GMP during El Tor biotype Vibrio cholerae infection: characterization of the in v/vo-induced cyclic Di-GMP phosphodiesterase CdpA // Infect.Immun. 2008. - Vol. 76, N 4.-P. 1617-1627.

163. Terashima H., Fukuoka H., Yakushi Т., Kojima S., Homma M. The Vibriomotor proteins, MotX and MotY, are associated with the basal body of Na+-driven flagella and required for stator formation // Mol. Microbiol. 2006. - P. 1-11.

164. Thelin K.H., Taylor R.K. Toxin-coregulated pilus, but not mannose-sensitive Hemagglutinin, is required for colonization by Vibrio cholerae 01 El Tor biotype and 0139 Strains // Infect. Immun. 1996. - Vol. 64, N 7. - P. 28532856.

165. Trucksis M., Galen J.E., Mishalski J., Fasano A., Kaper. JB. Accessory cholera enterotoxin (Ace), the third toxin of a Vibrio cholerae virulence cassette // Proc. Notl. Acad. Sci. USA. 1993.-Vol. 90.-P. 5267-5271.

166. Vance R.E., Zhu J. Mekalanos J.J. A constitutively active variant of the quorum-sensing regulator LuxO affects protease production and biofilm formation in Vibrio cholerae II Infect. Immun. 2003. - Vol. 71, N 5. - P. 2571-2576.

167. Waldor M.K., Colwell R., Mekalanos J.J. The Vibrio cholerae 0139 serogroup antigen includes an O-antigen capsule and lipopolysaccharide virulence determinants//Microbiol. 1994.-Vol. 91.-P. 11388-11392.

168. Waldor M.K., Mekalanos J.J. Lysogenic Conversion by a filamentous phage encoding cholera toxin // Science. 1996. - Vol. 272. - P. 1910-1914.

169. Waldor M.K., Tschape H., Mekalanos J.J. A new type of conjugative transposon encodes resistance to sulfamethoxazole, trimethoprim, and streptomycin in Vibrio cholerae 0139 // J. Bacteriology. 1996. - Vol. 178, N 14. - P. 41574165.

170. Waldor M.K., Rubin E.J., Pearson G.D.N., Kimsey H., Mekalanos J.J. Regulation, replication, and integration functions of the Vibrio cholerae CTXcp are encoded by region RS2 // Mol. Microbiol. 1997. - Vol. 24, N 5. - P. 917926.

171. Waldor М.К., Lazar S., Kimsey H., Williams J., Mekalanos J.J. СТХф: a novel filamentous phage encoding cholera toxin // Bacterial Protein Toxins: Eighth European Workshop. 1998. - Vol. 29. - P. 363-371.

172. Watnick P.I., Kolter R. Steps in the development of a Vibrio cholerae El Tor biofilm // Mol. Microbiol. 1999. - Vol. 34. - P. 586-595.

173. Watnick P.I., Lauriano C.M., Klose K.E., Croal L., Kolter R. The absence of a flagellum leads to altered colony morphology, biofilm development and virulence in Vibrio cholerae 0139 // Mol Microbiol. 2001. - V. 39. - P. 223235.

174. Withey J.H., DiRita V.J. Activation of both acfA and acfD transcription by Vibrio cholerae ToxT requires binding to two centrally located DNA sites in an inverted repeat conformation // Mol. Microbiol. 2005. - Vol. 56, N 4. - P. 1061-1077.

175. Yamaichi Y., Fogel M.A., Waldor M.K. par genes and the pathology of chromosome loss in Vibrio cholerae // Proc. Natl. Acad. Sci. 2007. - Vol. 104, N2.-P. 630-635.

176. Yoon S.S., Mekalanos J.J. 2,3-butanediol synthesis and the emergence of the Vibrio cholerae El Tor biotype // Infect. Immun. 2006. - Vol. 74, N 12. - P. 6547-6556.

177. Yoon S.S., Mekalanos J.J. Decreased potency of the Vibrio cholerae sheathed flagellum to trigger host innate immunity // Infect. Immun. 2008. - Vol. 76, N 3.-P. 1282-1288.