Специфические показатели гуморального иммунитета у больных раком молочной железы тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.14, кандидат медицинских наук Гадецкая, Нина Александровна

• Гадецкая, Нина Александровна
• кандидат медицинских наук
• 2008

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Гадецкая, Нина Александровна

ВВЕДЕНИЕ.

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ.

ЗАДАЧИ.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. ГУМОРАЛЬНЫЙ ПРОТИВООПУХОЛЕВЫЙ

ИММУНИТЕТ ПРИ РАКЕ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ.

Гуморальный противоопухолевый иммунитет при раке молочной железы. (Общие положения).

Углеводные детерминанты опухолевых клеток.

Муцины.

Изменения углеводов муцинов при опухолях.

Клиническое применение опухолеассоциированных углеводных антигенов.

Иммунный ответ на углеводные антигены.

Gal (31-3 GlcNAc (Lec ).

ГЛАВА 2.ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫХ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ.

ГЛАВА 3.Субпопуляции В-лимфоцитов у больных раком молочной железы: Le°специфичные В-клетки.

ГЛАВА 4. Взаимосвязь субпопуляционного состава В-лимфоцитов с клиническими показателями и антительным ответом на Lec у больных первичным операбельным раком молочной железы.

4.1. Показатели гуморального противоопухолевого иммунитета у больных первичным операбельным раком молочной железы.:.

4.2. Взаимосвязь наличия высокоаффинных к Lec В-лимфоцитов с субпопуляциями В-клеток.

4.3. Взаимосвязь между уровнями MUC1 и антител к MUC1 (анти-Le0) в сыворотке крови больных операбельным раком молочной железы.

Глава 5. Антитела к Lec - детерминанте антигена MUC1 в сыворотке крови больных раком молочной железы на различных стадиях наблюдения и лечения.

5.1. Взаимосвязь между концентрацией в крови опухоле-ассоциированного антигена СА 15.3 (углеводная детерминанта MUC1) и специфическими показателями связывания Lec (другая углеводная детерминанта MUC1) сывороткой крови больных раком молочной железы (наличием антител к Lec).

5.2. Взаимосвязь наличия антител к Le° с концентрацией иммуноглобулинов различных классов в сыворотке крови больных раком молочной железы.

5.3. Взаимосвязь между уровнями анти-Ьес и группами крови больных раком молочной железы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Специфические показатели гуморального иммунитета у больных раком молочной железы»

АКТУАЛЬНОСТЬ ТЕМЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Иммунные механизмы противоопухолевой защиты чрезвычайно многообразны. Главными эффекторами, осуществляющими цитотоксическое действие в отношении опухолевых клеток, считаются Т-киллеры (CD8+) и NK-клетки. Т-лимфоциты реализуют свое действие через распознавание посредством TCR (Т-клеточного рецептора) опухолеассоциированных пептидов в контексте молекул HLA на мембране злокачественных клеток. Поскольку иммунизация Т-клеток осуществляется профессиональными АГПС (антигенпрезентирующими клетками), то большое внимание в современных исследованиях уделяется дендритным клеткам и вакцинам на их основе. Реализация цитотоксического действия примированных Т-киллеров возможна только в отношении опухолевых клеток, экспрессирующих молекулы HLA-I класса. Напротив, действие NK-клеток возможно в отношении клеток с видоизмененными или утраченными молекулами HLA.

Т-клетки и NK-клетки не распознают углеводные детерминанты опухолевых клеток. Вместе с тем, значительная часть опухолеассоциированных антигенов - это углеводные (карбогидратные, отсюда аббревиатура С А) антигены. На их определении во многом основаны диагностика и мониторинг опухолевого процесса по сывороточным маркерам (СА 15-3, СА 125, СА 19-9 и т.д.). Углеводные детерминанты опухолевых клеток эффективно распознаются антителами - то есть эффекторами гуморального иммунитета.

В последние годы гуморальный иммунитет не изучался столь интенсивно, как клеточный иммунитет у больных раком молочной железы. Вместе с тем, накоплен большой фактический материал, указывающий на важную роль В-клеточного звена иммунитета у больных раком молочной железы:

1. В-лимфоциты так же, как и Т-лимфоциты инфильтрируют опухолевую ткань и характеризуются функциональной активностью, проявляющейся в формировании фолликулоподобных структур со светлыми центрами.

2. В-клетки, инфильтрирующие ткань молочной железы, олигоклональны, могут иметь специфичность к опухолеассоциированным антигенам.

3. У части больных раком молочной железы отмечается массивная плазмоклеточная инфильтрация опухоли, иммуноглобулины этих клеток олигоклональны, часть клонов специфична к опухолевым антигенам. 4. В эксперименте внутривенное введение небольшого числа раковых клеток иммунным животным не сопровождается развитием опухоли. Эти клетки эффективно элиминируются антителопосредованными иммунными механизмами.

5. При наличии микрометастазов рака молочной железы в костном мозге выявляются кластеры плазматических клеток.

6. Существуют опухолеассоциированные углеводные детерминанты (выявляемые антителами LU-BCRU-G7), экспрессия которых клетками рака молочной железы ассоциирована с неблагоприятным прогнозом. Учитывая их высокую иммуногенность и возможность индукции специфического антительного ответа, эти молекулы могут явиться потенциальными мишенями противоопухолевой иммунотерапии.

Все выше сказанное дает основание для проведения исследований В-клеточного звена иммунитета на современном уровне с учетом углубленного субпопуляционного состава и клональности В-лимфоцитов, а также плазмоцитов крови и костного мозга, оценки наличия специфических антител к опухолеассоциированным детерминантам в сыворотке крови больных.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Характеристика показателей В-клеточного звена иммунитета у больных раком молочной железы.

ЗАДАЧИ

1 Охарактеризовать субпопуляции и клональность В-кпеток периферической 1 * крови у больных раком молочной железы. vGal P 1-3 GclNAc в сыворотке крови больных и здоровых доноров. ^/Изучить особенности связывания опухолеассоциированного дисахарида Gal Р 1-3 GclNAc В-клетками у больных раком молочной железы. Сопоставить показатели гуморального иммунитета с клинико-морфологическими характеристиками рака молочной железы.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые детально изучены субпопуляции В-лимфоцитов периферической крови больных раком молочной железы. Особенностью иммунофенотипа В-лимфоцитов у больных раком молочной железы в сравнении с донорской группой является более высокая экспрессия антигена CD23. В 67% случаев рака молочной железы среди В-лимфоцитов крови присутствуют высокоаффинные к Le° В-клетки, которые включают 2 популяции - CD5+ и CD5-. Выраженный антительный ответ на Lе° наблюдается у 30% больных раком молочной железы. Высокие титры анти-Lе° антител находятся в реципрокных взаимоотношениях с сывороточными уровнями опухолеассоциированного антигена С А 15-3 и практически не наблюдаются при высоких концентрациях маркера. У больных с высокими титрами анти-Le0 отмечаются повышенные концентрации сывороточного IgM.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЦЕННОСТЬ

Полученные в работе результаты могут иметь практическую значимость как для клинической онкоиммунологии, так и для онкологии.

Значимость для онкоиммунологии определяется тем, что разработан алгоритм для более точной оценки содержания анти-Le0 специфичных В-клеток в периферической крови больных раком молочной железы. Отличием этих клеток от В-лимфоцитов, неспецифически связывающих Le° за счет галектинов, является высокая аффинность и экспрессия антигена CD5.

Результаты работы позволили уточнить роль В-клеточного звена в противоопухолевом иммунитете у больных раком молочной железы. Выделены группы больных с наличием антительного ответа на опухолеассоциированный антиген Gal(31-3GclNAc. Случаи с отсутствием гуморальной иммунной реакции на опухолеассоциированный дисахарид могут рассматриваться как группа больных, подлежащих дальнейшему изучению на предмет возможной иммунизации (вакцинации) или адоптивной терапии соответствующими моноклональными антителами.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Гадецкая, Нина Александровна

ВЫВОДЫ: J Особенности гуморального иммунитета у больных раком молочной железы заключаются в наличии В-лимфоцитов и антител, специфичных к опухоле-ассоциированному дисахариду Lec. £ J^^^At^- $ iff? 7

X) Высокоаффинные к Lec В-лимфоциты выявляются у 67% больных операбельным раком молочной железы с невысокой частотой (<5% В-клеток).

Значительную пропорцию Ьес-специфичных В-лимфоцитов составляют CD5-позитивные клетки, относящиеся к лимфоцитам естественного иммунитета. Особенностей субпопуляционного состава Ьес-специфичных В-лимфоцитов не обнаружено.

Концентрация антител к Lec достоверно более высокая в сыворотках крови здоровых женщин в сравнении с больными операбельным раком молочной железы.

Уровни антител к Lec взаимосвязаны с концентрацией опухоле-ассоциированного маркера СА15.3. Достоверно более высокие значения анти- Lec наблюдаются при нормальном содержании маркера в сравнении со случаями с повышенным уровнем СА15.3 (р=0,004).

Высокая активность анти- Lec в сыворотках крови больных раком молочной железы ассоциируется с повышением концентрации иммуноглобулинов крови, в основном IgM-класса.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ.

В настоящей работе нами предпринята попытка изучения особенностей специфического гуморального иммунитета у больных раком молочной железы.

В качестве мишени противоопухолевого иммунитета избран дисахарид Gaip 1-3 GlcNAc (Lec). Данный антиген присутствует в составе высокомолекулярных муцинов MUC1 и не экспрессирован в клетках нормального эпителия молочных желез. При раке молочной железы антиген выявляется в 56,872% случаев. Что особенно важно, экспрессия антигена ассоциируется с неблагоприятным прогнозом при ранних стадиях рака молочной железы. Последнее было подтверждено норвежскими учеными (Rye et al., 1993) и результатами работ российских онкологов при раннем (pTl-2N0M0) раке молочной железы (Шинкарев С.А., 2004).

Дисахарид является иммуногенным, и к нему получены моноклональные антитела LU-BCRU-G3 (Rye et al., 1993).

Мы оценили 2 типа проявлений специфического В-клеточного иммунитета в отношении антигена GaJ(31-3GlcNAc: на уровне В-лимфоцитов и на уровне антител сыворотки крови больных.

Здесь очень важно отметить, что оценка гуморального иммунитета в отношении углеводных детерминант является чрезвычайно сложной задачей. Это обусловлено тем, что помимо специфических антител существует другой класс соединений - лектинов, способных связываться с сахарами. Применительно к исследуемому нами антигену - Gaipi-3GlcNAc, в состав которого входит галактоза, - это лектины, связывающие галактозу, или галектины.

Галектины могут присутствовать как на мембране клеток, так и растворимой форме в сыворотке крови. Их концентрация может возрастать при инфекциях или иной патологии. Наиболее типичным примером является маннозосвязывающий лекгин, продуцируемый, как и С-реактивный белок, гепатоцитами в ответ на провоспалительный цитокин интерлейкин-6 при инфекциях.

Для оценки того, насколько специфичны мембранные рецепторы В-лимфоцитов к дисахариду Galpl-3GlcNAc, а не к галактозе, входящей в его состав, мы провели сравнение связывания с В-лимфоцитами двух флуоресцентно-меченых дисахаридов - Gaipi-3GlcNAc (Lec) и Gaipi-4GlcNAc (лактозамин). Различия между этими дисахаридами касаются лишь связей между галактозой и N-ацетил-глюкозамином: pi-З и pi-4. pjj f ' Как показали наши исследования, представленные в главе 3, наряду со Ф сходством, имеются и существенные различия в связывании этих дисахаридов В-клетками.

Общий процент Ьес-позитивных В-клеток находился в прямой корреляционной связи с пропорцией CD19+CD5+ лимфоцитов, с процентом В-лимфоцитов, связывающих лактозамин, а также с относительным содержанием CD5+ В-лимфоцитов, связывающих Lec. Корреляционные связи между процентным содержанием лимфоцитов, специфичных к Lec и к лактозамину, свидетельствуют о возможном вкладе галектинов во взаимодействие В-лимфоцитов с Gaipi-3GlcNAc (Lec). Вместе с тем, коэффициент корреляции был невысок (0,439), однако, связь между признаками носила достоверный характер (р=0,046).

Нами не установлено взаимосвязи между процентом В-лимфоцитов, связывающих лактозамин, и процентом CD5+ В-лимфоцитов, связывающих Gaipi

3GIcNAc (Lec), R=0,246; p=0,377. Кроме того, не отмечено корреляции относительно содержания CD5+ В-клеток, связывающих лактозамин, с общим процентом Lec -специфичных В-лимфоцитов (R=0,173; р=0,537), а также с процентом Ьес-специфичных CD5+ В-лимфоцитов (R=0,198; р=0,479). Эти данные убедительно свидетельствуют о том, что связывание лактозамина и Lec за счет галектинов может иметь место только на популяции СБб-негативных Влимфоцитов. Напротив, специфическое связывание L ес мембранными иммуноглобулинами с наибольшей долей вероятности осуществляется CD5позитивными В-клетками. Это чрезвычайно важное наблюдение, которое однозначно указывает на роль CD5+ В-клеток в реализации гуморального иммунного ответа на опухолеассоциированный дисахарид Gaipi-3GlcNAc (Lec).

Данный подкласс В-клеток способен генерировать «естественные» полиреактивные и аутоиммунные антитела IgM-класса. Кроме того, эти клетки

JL/ отвечают на ряд тимус-независимых антигена I класса, например, липополисахарид.

Особое внимание следует уделить наличию выокоаффинных к Lec В-лимфоцитов. Мы выделили эту минорную фракцию В-клеток у 67% больных J ^ттерйбежяЮм- раком молочной железы на основании яркого флуоресцентного 4 свечения. Подобный феномен может быть обусловлен только наличием большого числа антигенсвязывающих структур В-лимфоцитов. Сходное выраженное связывание не было отмечено для лактозамина. То есть, по-видимому, плотность галектинов на мембране В-лимфоцитов невысока и они связывают относительно небольшие количества галактозосодержащих Сахаров. Напротив, специфическое связывание Galpl-3GlcNAc (Lec) за счет мембранных иммуноглобулинов носит высокоаффинный характер, и эти клетки выявляются у большинства больных раком молочной железы, хотя и в минорном количестве. Справедливость того, что связывание большого числа флуоресцентных зондов Gaipi-3GlcNAc (Lec), дающих при проточной цитометрии сильный люминисцентный сигнал, не обусловлена галектинами, подтверждается следующим фактом. Нами не обнаружено корреляции между процентным содержанием лактозамин-связывающих Влимфоцитов и процентом высокоаффинных по отношению к Lec В-клеток (R=0,189; р=0,13), а корреляция этих клеток с CD5+ В-лимфоцитами, взаимодействующими с лактозамином, носила даже отрицательный (недостоверный) характер (R=-0,151).

На основании полученных нами данных были разработаны дифференциально-диагностические критерии разграничения В-лимфоцитов, специфичных к Lec за счет мембранных иммуноглобулинов, и В-лимфоцитов, способных связывать дисахарид за счет галектинов:

Связывание за счет галектинов происходит СБ5-негативными В-лимфоцитами;

Связывание за счет галектинов происходит с низким аффинитетом;

Мембранные иммуноглобулины В-лимфоцитов, специфичные к Gal(31-3GlcNAc (Lec) характеризуются высокой плотностью на мембране и связывают большие количества дисахарида (высокоаффинные В-клетки). Высокоаффинные к Lec В-клетки присутствуют как во фракции CD5+, так и во фракции CD5- В-лимфоцитов.

Истинное представление об относительном содержании Ьес-специфичных В-лимфоцитов может дать общий процент В-клеток, связывающих Lес, за вычетом процента В-лимфоцитов, связывающих лактозамин. Процент лактозамин связывающих В-клеток при наличии высокоаффинных к Lec В-лимфоцитов был существенно ниже, чем процент клеток, связывающих Lec (1,96 и 10,75%), а при отсутствии высокоаффинных В-клеток эти показатели были примерно одинаковыми (2,03 и 2,5%).

Рассмотрим показатели связывания Lec на уровне гуморальных факторов, присутствующих в сыворотках крови больных. Как мы уже отмечали, это связывание может быть обусловлено как антителами, так и галектинами. Для исключения неспецифической составляющей (галектиновой) мы во всех случаях определяли связывание сывороток как с лактозамином, так и с Gal(31-3GlcNAc

Lec). При этом связывание с лактозамином рассматривалось нами как фоновое 9 неспецифическое) и вычиталось из соответствующих показателей OD. (

При проведении этого анализа отмечены чрезвычайно интересные и новые закономерности. Установлено, что уровни антител к Lec достоверно более высокие в сыворотках крови здоровых доноров, чем у больных раком молочной железы. Означает ли это, что при низких титрах антител к дисахариду риск возникновения рака повышен или речь идет об истощении пула анти-Le0 иммуноглобулинов сыворотки за счет их сорбции на опухоли, предстоит уточнить в дальнейших исследованиях. Однако последнее предположение нельзя исключить, так как исследования сывороток проводились на этапе диагностики до операции.

Антигенная детерминанта Le° входит в состав опухолевых муцинов MUC1, уровни которых в сыворотке крови больных раком молочной железы повышены (опухоле-ассоциированый маркер СА 15-3). Сопоставление концентрации СА 15-5 в сыворотке крови с антителами к одной из углеводных детерминант этого муцина, проведенное на большой группе больных раком молочной железы, позволило впервые установить реципрокные взаимоотношения между циркулирующим антигеном и специфическими антителами к нему. Полученные данные хорошо согласуются с классическими данными по гуморальному иммунитету из области инфекционной иммунологии. При развитии гуморального иммунного ответа на тот или иной патоген или токсин нарастание титров антител сопровождается снижением уровня антигена в крови за счет клиренса комплексов антиген-антитело. При отсутствии выработки антител концентрация антигена в крови может оставаться высокой. Нейтрализующей способностью обладают в основном пентамерные антитела IgM-класса. В рассматриваемом случае антигеном является дисахарид (в составе высокомолекулярного гликопротеина), и весьма вероятный сценарий иммунного ответа состоит в продукции IgM.

Специфичность данного феномена подтверждена тем, что концентрация иммуноглобулинов различных классов ни коим образом не коррелировала с уровнями маркера СА 15.3 в сыворотке крови. Вместе с тем, при высоких титрах анти-Le0 антител концентрация иммуноглобулинов была достоверно более высокой. Сочетание этих двух признаков убедительно говорит о том, что высокое связывание Lec отнюдь не является неспецифическим признаком, отражающим общее повышение сывороточных Ig, напротив, можно допустить, что гуморальная

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Гадецкая, Нина Александровна, 2008 год

1. Артамонова Е.В. Роль иммунофенотипирования опухолевых клеток в диагностике и прогнозе рака молочной железы. Автореф. Дисс. Канд. мед. наук. Москва 2003. -48С.

2. Тупицын Н.Н. Иммунофенотип рака молочной железы. В книге «Рак молочной железы». Ред. Н.Е Кушлинский, С.М.Портной, К.П.Лактионов. Издательство РАМН. 2005. -С. 174-196.

3. Шинкарев С.А. Прогностическая роль маркера LU-BCRU-G7 при ранних стадиях рака молочной железы pTl-2N0M0. //Дис. канд. мед. наук. М. -2004. -158С.

4. Ярилин А.А. Основы иммунологии. М. -Медицина. -1999. -607 С.

5. Bergh EL, Robinson МК, Mansson О, Butcher ЕС, Magnani JL. A carbohydrate domain common to both sialyl Lea and sialyl Lex is recognized by the endothelial cell adhesion molecule ELAM-l. J Biol Chem 1991 ;266:14869-72.

6. Blasco E, Torrado J, Belloso L, Arocena F, Cuadrado E. T-antigen: a prognostic indicator of high recurrence index in transitional carcinoma of the bladder. Cancer 1988;61:1091-5.

7. Boland CR, Montgomery CK, Kim YS. Alteration in human colonic mucin occurring with cellular differentiation and malignant transformation. Proc Natl Acad Set USA 1982;79:2051-5.

8. Brandlein S., Pohle Т., Ruoff N. et al. //Cancer Research. -2003. -V.63. -P.79958005.

9. Brandlein, S., Beyer. „ Eck. M., Bernhardt. W., Hensel, F., Muller-Hermelink. H. K., and Vollmers, H. P. CF.R-1, a new marker for precancerous epithelial lesions defined by the human monoclonal antibody PAM-I. Cancer Res. 63, 2052-2061, 200.

10. Brass N., Racz A., Bauer C. et al. //Role of amplified genes in production of autoantibodies /Blood. -1999. -V.93. -P.2158-2166.

11. Carter P. Improving the efficacy of antibody-based cancer therapies /Nature reviews cancer. -2001. -V. 1. -P. 118-129.

12. Carter P., Smith L., Ryan M. Identification and validation of cell surface antigens for antibody targeting in oncology. /Endocrine-related cancer. -2004. -V.ll. -659687.

13. Chen Y.T., Gure A.O., Tsang S. et al.// A testicular antigen aberrantly expressed in human cancers detected by autologous antibody screening /Proc Natl Acad Sci USA. -1997. -V.94. -P.1914-1918

14. Chen Y.T., Gure A.O., Tsang S. et al.// Identidication of multiple cancer/testis antigens by allogeneic antibody screening of a melanoma cell line library /Proc Natl Acad Sci USA. -1998. -V.95. -P.6919-6923

15. Cordon-Cardo C, Reuter VE, Finstad CL, Sheinfels J, Lloyd КО, FairWR, et al. Blood group-related antigens in human kidney: modulation of Lewis determinants in renal cell carcinoma. Cancer Res 1989;49:212-8.

16. Coronella J.A., Spier C., Welch M. et al. Antigen-driven oligoclonal expansion of tumor-infiltrating B-cells in infiltrating ductal carcinoma of the breast /J. Immunol. -2002. -V. 169. -P. 1829-1836.

17. Fenlon S, Ellis 10, Bell J, Todd JH, Elston CW, Blarney RW Helix pomatia and Ulex europaeus lectin binding in human breast carcinoma. J Pathol 1987;152:169-76.

18. Foxall C, Watson SR, Dowbenko D, Fennie C, Lasky LA, Kiso M, et al The three members of the selectin receptor family recognize a common carbohydrate epitope, the sialyl Lewis" oligosaccharide. J Cell Biol 1992; 117:895-902.

19. Gendler S., Taylor-Papadimitriou J., Duhig T. et al. A high immunogenic region of a human polymorphic epithelial mucin expressed by carcinomas is made up of tandem repeats /J. Biol. Chem. -1988. -V.263. -P.12820-12823.

20. Glennie M.J. & van de Winkel J.G. Renaissance of cancer therapeutic antibodies. Drug discovery today. -2003. -V.8. -P.503-510

21. Gure A.O., Altorki N.K., Stockert E. et al. //Human lung cancer antigens recognized by autologous antibodies: definition of a novel cDNA derived from the tumor suppressor gene locus on chromosome 3p21.3./Cancer Res. -1998. -V.58. -P.1034-1041.

22. Gwin JL, Klein-Szanto AJ, Zhang SY, Agarwal P, Rogatko A, Keller SM. Loss of blood group antigen A in non-small cell lung cancer. Ann Surg Oncol 1994;1:423-7.

23. Hanish FG, Hanski C, Hasegawa A. Sialyl Lewisx antigen as denned by monoclonal antibody AM-3 is a marker of dysplasia in the colonic adenoma-carcinoma sequence. Cancer Res 1992;52:3138-44.

24. Hansen M.H., Nielsen H., Ditzel H.J. The tumor-infiltrating B-cell response in medulary breast cancer is oligoclonal and directed against the autoantigen actin exposed on the surface of apoptotic cancer cells /PNAS. -2001. -V.98, N22. -P.12659-12664.

25. Hasegawa H, Watanabe M, Arisawa Y, Teramoto T, Kodaira S, Kitajima M. Carbohydrate antigens and liver metastasis in colorectal cancer. Jpn J Clin Oncol 1993;23:336-41.

26. Неппапп, R. Hensel, F., Muller, E. G, Keppler, M., Souto-Cameiro, M., Brandlein,

27. S„ Muller-Hermelink, H. K., and Vollmers, H. P. Deactivation of regulatory proteins

28. Hilgers J., Von Mensdorff-Pouilly S., Verstraeten A.A. et al. //Scand. J. Clin. Lab. Invest. -1995. -V.55, Suppl. 221. -P.81-86.

29. Ho S.B., Kim Y.S. //Encyclopedia of cancer. -1997. -V.2. -P.309-324.

30. HofT SD, Matsushita Y, Ota DM, Cleary KR, Yamori T, Hakomori S, et al. Increased expression of sialyl-dimeric Lex antigen in liver metastases of human colorectal carcinoma. Cancer Res 1989;49:6883-8.

31. Husby G., Hoagland P.M., Strickland R.G. et al. Tissue T- and B-cell infiltration of primary and metastatic cancer /J. Clin. Invest. -1976. -V.57. -P.1471-1482.

32. Itzkowitz S. Carbohydrate changes in colon carcinoma. APMIS 1992;100(Suppl 27): 173-80.

33. Itzkowitz SH, Yuan M, Montgomery CK, Kjeldsen T, Takahashi HK, Bigbee WL, et al. Expression of Tn, sialo-syl Tn and T antigens in human colon cancer. Cancer Res 1989;49:197-204.

34. Itzkowitz SH,Yuan M, Ferrel LD, RatclifTe RM, Chung YS, Satake K, et al. Cancer-associated alterations of blood group antigen expression in the human pancreas. J Natl Cancer Inst 1987;79:425-34.

35. Jager D., Stockert E., Scanlan M.J. et al. //Cancer testis antigens and ING1 tumor suppressor gene product are breast cancer antigens: characterization of tissuespecific ING1 transcripts and homologue gene /Cancer research. -1999. -V.59. -P.6197-6204.

36. Jordon DA, Jagirdar J, Kaneko M. Blood group antigens, Lewis" and Lewisy in the diagnostic discrimination of malignant mesothelioma versus adenocarcinoma. Am J Pathol 1989;135:931-7.

37. Kageshita T, Hirai S, Kimura T, Hanai N, Ohta S, Ono T. Association between sialyl Lewis3 expression and tumor progression in melanoma. Cancer Res 1995;55:1748-51.

38. Kojima N, Handa K, Newman W, Hakomori S. Inhibition of selectin-dependent tumor cell adhesion to endothelial cells and platelets by blocking O-glycosylation of these cells. Biochem Biophys Res Commun 1992;182:1288-95.

39. Leathern AJ, Brooks SA. Predictive value of lectin binding on breast-cancer recurrence and survival. Lancet 1987; i: 1054-6.

40. Limas C, Lange R T-antigen in normal and neoplastic urothelium. Cancer 1986;58:1236-45.

41. Magnani JL, Nilsson B, Brockhaus M, Zopf D, Steplewski Z, Koprowski H, et al.

42. A monoclonal antibody-defined antigen associated with gastrointestinal cancer is aiganglioside containing sialylated lacto-N-fucopentaose II. J Biol Chem 1982;257:14365-9.

43. Marsigliante S., Biscozzo L., Marra A. et al. Computerized counting of tumor-infiltrating lymphocytes in 900 breast cancer specimens /Cancer Lett. -1999. -V.139. -P.33.

44. Matsumoto H, Muramatsu H, Shimotakahara T, Yanagi M, Nishijima H, Mitani N, et al. Correlation of expression of ABH blood group carbohydrate antigens with metastatic potential in human lung carcinomas. Cancer 1993;72:75-81.

45. Matsushita Y, Nakamori S, Seftro EA, Hendrix MJC, Irimura T. Human colon carcinoma cells with increased invasive capacity obtained by selection for sialyl-dimeric Lex antigen. Exp Cell Res 1991;196:20-5.

46. Metoki R, Kakudo K, Tsuji Y, Teng N, Clausen H, Hakomori S. Deletion of histo-blood group A and В antigens and expression of incompatible A antigen in ovarian cancer. J Natl Cancer Inst 1989;81:1151-7.

47. Nakasaki H, Mitomi T, Noto T, Ogoshi K, Hanaue H, Tanaka Y, et al. Mosaicism in the expression of tumor-associated carbohydrate antigens in human colonic and gastric cancers. Cancer Res 1989;49:3662-9.

48. Nishiyama T, Matsumoto Y, Watanabe H, Fujiwara M, Sato S. Detection of Tn antigen with Vicia villosa agglutinin in urinary bladder cancer: its relevance to the patient's clinical course. J Natl Cancer Inst 1987;78:1113-17.

49. Nzula S., Going J.J., Stott D.I. Antigen-driven clonal proliferation, somatic hypermutation, and selection of B-lymphocytes infiltrating human ductal breast carcinomas /Cancer Research. -2003. -V.63. -P.3275-3280

50. Ogawa J, Sano A, Inoue H, Koide S. Expression of Lewis-related antigens and prognosis in stage I non-small cell lung carcinoma. Ann Thorac Surg 1995;59:412-5.

51. Orntoft TF. Carbohydrate changes in bladder carcinomas. APMIS 1992;100(Suppl27):181-7.

52. Pfaff. M. O'Connor, R,, Vollmers, H. P., and Muller-Hermelink, H. K. Human monoclonal antibody against, a tissue polypeptide antigen-related protein from a patient with a signet-ring ceil carcincftna of the stomach. Cancer Res., 50: 51925.198, 1990.

53. Phillips ML, Nudelman E, Gaeta FCA, Perez M, Singhal AK, Hakomori S, et al. ELAM-1 mediates cell adhesion by recognition of a carbohydrate ligand, sialyl-Lex. Science 1990;250:1130-2.

54. Randen I., Mellbye O.J., Forre O. et al. The identification of germinal centers and follicular dendritic cell networks in rheumatoid synovial tissue. /Scand. J. Immunol. -1995. -V.41. -P .481-486.

55. Ridolfi R.L., Rosen P.P., Port A. et al. Cancer. -1977. -V.40. -P.1365-1385.

56. Rye P.D., Bovin N.V., Vlasova E.V. et al. //Glycobiology. -1995. -V.5,N4. -P.385-389.

57. Rye P.D., Price M.R. (eds.) ISOBM TD-4 International workshop on monoclonal antibodies against MUC1. Tumor Biology. -1998. -V.19, Suppl.l. -P.l-152.

58. Scanlan M.J., Chen Y.T., Williamson B. et al. //Characterization of human colon carcinoma antigens recognized by autologous antibodies /Int. J. Cancer. -1998. -V.76. -P.652-658.

59. Scanlan M.J., Gordan , Williamson B. et al. //Antigens recognized by autologous antibody in patients with renal-cell carcinoma Ant. J. Cancer. -1999. -V.83. -P.456-464.

60. Scanlan M.J., Gout I., Gordon C.M. et al. //Humoral immunity to human breast cancer: antigen definition and auantitative analysis of mRNA expression /Cancer Immunity. -2001. -V.l. -P.4

61. SEREX database. URL: http://www.licr.org/SEREX.html

62. Sims G.P., Shiono H., WillcoxN. et al. Somatic hypermutation and selection ofB-cells in thymic germinal centers responding to acetylcholine receptor in myasthenia gravis. /J. Immunol. -2001. -V.l67. -P. 1935-1944.

63. Singhal AK, Orntoft TF, Nudelman E, Nance S, Schibing L, Stroud MR, et al. Profiles of Lewisx-containing glycoproteins and glycolipids in sera of patients with adenocarcinoma. Cancer Res 1990;50:1375-80.

64. Springer GF. Tn epitope (N-acetyl-D-galactosaminea-O-serine/threonine) density in primary breast carcinoma: a functional predictor of aggressiveness. Mol Immunol 1989;26:1-5.

65. Stott D., Hiepe F., Hummel M. et al. Antigen-driven clonal proliferation of B-cells within the target tissue of an autoimmune disease. The salivary glands of patients with Sjogren's syndrome /J. Clin. Investig. -1998. -V.l02. -P.938-946.

66. Summers JL, Coon JS,Ward RM, FalorWH, Mille AW III, Weinstein RS. Prognosis of the urinary bladder based upon tissue blood group ABH and Thomsen-Friedenreich antigen status and karyotype of the initial tumor. Cancer Res 1983;43:934-9.

67. Takada A, Ohmori K, Yoneda T, Tsuyuoka K, Hasegawa A, Kiso M. Contribution of carbohydrate antigens sialyl Lewis3 and sialyl Lewis" to adhesion of human cancer cells to vascular endothelium. Cancer Res 1993;53:354-61.

68. Topalian S.L., Rivoltini L., Mancini M. et al. //Human CD4 T-cells specifically recognize a shared melanoma-associated antigen encoded by the tyrosinase gene //Proc Natl Acad Sci USA. -1994. -V.91. -P.9461-9465.

69. Tozeren A, Kleinman HK, Grant DS, Morales D, Mercu-rio AM, Byers SW E-selectin-mediated dynamic interactions of breast- and colon-cancer cells with endothelial-cell monolayers. Int J Cancer 1995;60:426-31.

70. Tureci O., Sahin U., Zwick C. et al. //Identification of a meiosis specific protein as a member of the class of cancer/testis antigens /Proc Natl Acad Sci USA. -1998. -V.95.-P.5211-5216.

71. Vollmers, H. P., and Briindiein, S. Nature's best weapons to fight cancer: reloading human monoclonal IgM antibodies. Hum. Antibodies, //: 131 142,2002.

72. Vollmers, H. P., Dammrich, J., Ribbert, PI., Wozniak, E., and Muller-Hermelink, H. K. Apoptosis of stomach carcinoma cells induced by a human monoclonal antibody. Cancer (Phila.), 76: 550 55H, 1995.

73. Vollmers, H. P., O'Connor, R., Muller, J., Kirchner, Т., and Muller-Hermelink, H, K. SC-1. a functional human monoclonal antibody against autologous stomach carcinoma cells. Cancer Res., 49: 2471-2476, 1989.'

74. Vollmers, H. P. Hensel, F., Hermann, R., Dammrich, J., Zimmenrtann, U., and Muller-Hermelink, H. K. Specific apoptotic activity of the human monoclonal antibody SC-1 on the human stomach cancer cells in vitro. Immunobiology, 179: 394, 1997.

75. Walz G, Aruffo A, Kolanus W, Bevilacqua M, Seed B. Recognition by ELAM-1 of the sialyl-Lex determinant on myeloid and tumor cells. Science 1990;250:1132-5.

76. Wang R.F., Wang X., Atwood A.C. et al. //Cloning genes encoding MHC class II restricted antigens: mutated CDC27 as a tumor antigen. /Science. -1999. -V.284. -P.1351-1354.

77. Wang R.F., Wang X., Rosenberg S.A. //Identification of a novel major histocompatibility complex class И-restricted tumor antigen resulting from a chromosomal rearrangement recognized by CD4(+) T-cells /J. Exp. Med. -1999. -V.189. -P.1659-1668.

78. Yakirevich E., Maroun L., Cohen O. et al. Apoptosis, proliferation, and FAs (APO-1, CD95)/Fas ligand expression in medullary carcinoma of the breast /J. Pathol. -2002. -V.192, N2. -P.166-173

79. Yuan M, Itzkowitz SH, Boland CR, Kim YD, Tomita JT, Palekar A, et al. Comparison of T-antigen expression in normal, premalignant and malignant human colonic tissues using lectin and antibody immunohistochemistry. Cancer Res 1986;46:4841-7.

80. Yuan M, Itzkowitz SH, Palekar A, Shamsuddin AM, Phelps PC, Trump BF, et al. Distribution of blood group antigens A,B,H, Lewisa, and Lewish, in human normal, fetal, and malignant colonic tissue. Cancer Res 1985; 45:4499-511.

81. Zarour H.M., Kirkwood J.M., Kierstead L.S. et al. //Melan A/Mart-1 (5173) represents an immunogenic HLA-DR4-restricted epitope recognized by

82. Vollmers, H. P. Hensel, F., Hermann, R., Dammrich, J., Zimmenrtann, U., and Muller-Hermelink, H. K. Specific apoptotic activity of the human monoclonal antibody SC-1 on the human stomach cancer cells in vitro. Immunobiology, 179: 394, 1997.

83. Walz G, Aruffo A, Kolanus W, Bevilacqua M, Seed B. Recognition by ELAM-1 of the sialyl-Lex determinant on myeloid and tumor cells. Science 1990;250:1132-5.

84. Wang R.F., Wang X., Atwood A.C. et al. //Cloning genes encoding MHC class II restricted antigens: mutated CDC27 as a tumor antigen. /Science. -1999. -V.284. -P.1351-1354.

85. Wang R.F., Wang X., Rosenberg S.A. //Identification of a novel major histocompatibility complex class II-restricted tumor antigen resulting from a chromosomal rearrangement recognized by CD4(+) T-cells /J. Exp. Med. -1999. -V.189. -P.1659-1668.

86. Yakirevich E., Maroun L., Cohen O. et al. Apoptosis, proliferation, and FAs (APO-1, CD95)/Fas ligand expression in medullary carcinoma of the breast /J. Pathol. -2002. -V.192, N2. -P.166-173

87. Yuan M, Itzkowitz SH, Boland CR, Kim YD, Tomita JT, Palekar A, et al. Comparison of T-antigen expression in normal, premalignant and malignant human colonic tissues using lectin and antibody immunohistochemistry. Cancer Res 1986;46:4841-7.

88. Yuan M, Itzkowitz SH, Palekar A, Shamsuddin AM, Phelps PC, Trump BF, et al. Distribution of blood group antigens A,B,H, Lewisa, and Lewish, in human normal, fetal, and malignant colonic tissue. Cancer Res 1985; 45:4499-511.

89. Zarour H.M., Kirkwood J.M., Kierstead L.S. et al. //Melan A/Mart-1 (5173) represents an immunogenic HLA-DR4-restricted epitope recognized bymelanoma-reactive CD4(+) T-cells /Proc Natl Acad Sci USA. -2000. -V.97. P.400-405