Создание высокоэффективной системы микроклонального размножения генетически стабильных растений гладиолуса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Абу Камиль, Ахмед

• Абу Камиль, Ахмед
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Абу Камиль, Ахмед

ВВЕДЕНИЕ

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Ююпальное мпкроразмноженпе растений

1.2. Эпигенетическая и генетическая изменчивость растений, размножаемых методом in vitro

1.2.1. Эпигенетическая изменчивость

1.2.2. Генетическая изменчивость

1.3. -Закономерности органогенеза клубнелуковичных геофиюв.

Особенности развития гладиолуса садового (Gladiolus hybridus hort.)

1.4. Разработка способов мнкроклоналыюго размножения гладиолуса

2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Растительный материал

2.2. Изучение биологической активности паклобутразола

2.3. Масс-клональное размножение гладиолуса 38 2.3.1 Выгонка гладиолусов в теплице

2.4. Методы цитологических исследований

2.5. Методика оценки морфологических и количественных признаков

2.6. Методы статистического анализа Дб

3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Влияние паклобутразола на развитие проросших семян лука-батуна

3.2. Микроклоналыюе размножение растений гладиолуса -48 3.2.1. Определение скорости развития апикальных почек различных сортов гладиолуса на агарнзоваиной среде

3.2.2. Изучение влияния паклобу!разола на развитие культуры гладиолуса в жидком питательном среде

3.2.3. Влияние отношения объем среды/число экснлантов и паклобутразола па динамику развития культуры гадиолуса

3.2.4. Получение клубнелуковиц гладиолуса

3.2.5. Влияние ПАБК на образование клубнелуковиц гладиолуса

Обсуждение

4. ЦитогенетическиП анализ растепип-регенерантов гладиолуса сортов Закат и Сомбреро Обсуждение

5. Изучение морфологических п количественных признаков растсинп-регенсрантов гладиолуса гибридного сортов Закат и Сомбреро в 5С1,5С2и5СЗ Обсуждение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Создание высокоэффективной системы микроклонального размножения генетически стабильных растений гладиолуса»

Превращение цветоводства в важную отрасль растениеводства ставит ряд проблем, таких как повышение коэффициента размножения и оздоровление посадочного материала. Решение этих проблем возможно с помощью микроклонального размножения растений, т.е. использования техники in vitro для быстрого неполового получения растений, идентичных исходному.

Гладиолус - одна из наиболее популярных традиционных срезочных культур открытого грунта. Высокая экологическая пластичность гладиолуса позволяет выращивать его почти повсеместно, за исключением самых северных районов.

Современные культурные гладиолусы, объединяемые в культурный вид Gladiolus х hybridus hört. Представляет широчайшую гамму окрасок от белых, розовых, желтых до 1фасных, черно-красных, • сиреневых, фиолетовых, зеленых, каштановых. Общее число существующих сортов трудно обозримо « достигает по некоторым данным 30 тысяч (Матвеева, 1980).

В 1970 г. впервые опубликовано сообщение о методе размножения рода Gladiolus через культуру in vitro (Zir et' al., 1970). Техника микроклонирования сокращает продолжительность развития в несколько раз по сравнению с жизненным циклом гладиолуса в естественных условиях, а коэффициент размножения повышает на порядки. К настоящему времени разработаны несколько технологий потенциально коммерческого назначения

Румынии и др., 1990; Hussey, 197.7, 1982; Raamsdonk, Vries, 1989; ziv et ai., тзу

Однако микроклонирование гладиолуса остается еще сравнительно продолжительной, сложной и дорогоетоющей процедурой. По некоторым оценкам, 70-80% себестоимости конечной продукции составляет затраты на оплату ручных манипуляций (Ziv, 1989). Несмотря на то, что методы микроклонирования гладиолуса уже включают в систему технологи^ агропромышленной ориентации (Lilien-Kipris, Kochba, 1987), повышение конкурентноспособности продукции, полученной методом in vitro, остается актуальной задачей.

В связи с этим представляет большой интерес изучение явления сомаклональной изменчивости у растений Gladiolus х hybridus hört. , возникающее при культивировании изолированных клеток, тканей и органов in vitro и регенерации растений. Следует отметить, что для растений Gladiolus сомаклональная изменчивость не изучалась. Широкий спектр фенотипических и генетических изменений обнаружен у растений-регенерантов многих видов, в частности^ у представителей. семейств Liliaceae, Iridiaceae и Amaryllidaceae (Malnassy, Ellison, 1970; Yang, 1977; Fitter, Krikorian, 1985; 1986; Hussey, 1983; Krikorian, Kann, 1979b; 1980; Krikorian et al., 1981; 1982; 1986a; 1986b; Sheridan, 1974; 1975; Bennici, 1979; Yamabe, Yamata, 1973; Orihara, 1981; 1982; Riley et al., 1967; Novak, 1980; 1974; 1981; Novak et al., 1982; Verma, mittal, 1979; Yamare, 1975; Sekerka, 1977; Roy, 1980; Stewart, 1978). Таким образом, генетическая природа и механизмы возникновения сомаклопальпой изменчивости широко изучались для многих растений. Однако для управления сомаклоналыюй вариабельностью для каждого вида важно понять ее причины и размах. Сомаклопальную вариабельность желательно свести к минимуму, когда целью служит получение однородного материала. 13 то же время при требовании дополнительной генетической изменчивости степень вариабельности необходимо усилить.

Цель настоящей работы - 1. Изучение стабильности и изменчивости полученных in vitro растений-рсгснерапгов Gladiolus х hybridus hört. 2. Создание высокоэффективной системы получения генетически стабильных растений гладиолуса путем мнкроююнального размножения. В соответствии с этим, были поставлены следующие задачи:

1 - Оптимизация условий культивирования для микроклоиального размножения гладиолуса гибридного;

2 - Изучение влияния паклобутразола (ретарданта на пролиферацию побегов и почек в культуре iu vitro гладиолуса.

3 - Изучение морфологических-и количественных признаков растений-регенерантов гладиолуса.

4 - Цитогенетнческий анализ растений гладиолуса, полученных микроклоиального размножения;

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

История культуры изолированных клеток растений берет свое начало с конца 30-х годов XX века. Одна из первых работ датирована в 1939 году, когда Готре индуцировал образование каллусной ткани из запасающей паренхимы таких корнеплодов, как морковь, петрушка (Уайт, 1949). Долгое время успехи в области .культуры изолированных клеток растений были связаны с отдельными объектами, которые являются, в основном, представителями семейства Solanaceae - табак, картофель, томаты, петунья и некоторых других семейстд.

В настоящее время метод культивирования in vitro клеток и регенерация из них растений разработан для многих видов. Эти методы позволяют создать на их основе различные технологии, которые могут решить некоторые практические задачи, стоящие перед биотехнологической промышленностью и сельским хозяйством (Бутенко, 1984). Можно назвать три направления создания новых технологий на основе культивируемых клеток и тканей растений. Первое из них - получение промышленным способом ценных биологически активных веществ растительного происхождения. Второе - использование методов клеточной и генной инженерии для изменения генотипа клетки и полученных на ее основе трансгенных растений. Третье - применение тканевых и клеточных культур для быстрого клонального микроразмножения и оздоровления растений, чему посвящена первая часть обзора (Rovve, 1986).

1.1 Клональное мнкроразмножснис растений

Клональное микроразмножение - это массовое бесполое размножение организмов, базирующееся на использовании метода культур изолированных органов, тканей и клеток растений (Давыдова, Бутенко, 1970).

Термин "клон" (от греческого clon - отпрыск) был предложен Вэббером в 1903 году для вегетативно размножаемых растений. Клон - это вегетативное потомство одного растения. Предполагается, что отпрыски растения, размножаемого неполовым путем, не являются индивидуальностями в обычном смысле слова. Они лишь части (клоны) материнской особи, идентичные ей и между собой. Таким образом, клональное микроразмножение. - это использование техники in vitro для быстрого неполового получения растений, идентичных исходному (Chu, 1986).

Преимуществом клоналыюго микроразмножения растений в сравнении с традиционными методами являются значительно более высокие коэффициенты размножения; миниатюризация процесса, приводящая к экономии площадей; оздоровление посадочного материала; возможности в условиях in vitro.размножать растения, которые не размножаются обычными способами (George, Sherington, 1984; Высоцкий, 1986).

Области применения клоналыюго микроразмножения разработаны и имеют тенденцию к расширению. В соответствии с количеством продукции технологии размножения in vitro можно разделить на,- мало- и г» крупномасштабные. Это деление связано с целями и областями применения. Создание нужного для селекционера количества копии уникальных генотипов ис требует больших масштабов. Быстрое клопальное микроразмножение вновь созданных и уже существующих сортов с целыо массового получения оздоровленного посадочного материала должно быть крупномасштабным процессом. Масштабы применения технологии в этом случае определяются потребностью и рентабельностью (Chu, 1986).

Процесс клональпого микроразмножения может идти двумя путями: 1 -активация развития уже существующих в растении меристем (апекс стебля, пазушные и спящие почки стебля); 2 - индукция образования почек или эмбриоидов de novo (Hartmann, Kester, 1975).

В основе метода клональпого микроразмноження, основанного на активации развития меристем, лежит известный способ вегетативного размножения с номощыо отводов и черенков (Lawrence, 1981; Krikorian, 1982). Вегетативное . размножешге успешно удается, если апикальное доминирование выражено слабо. Суть апикального доминирования заключается в том, что верхушечная почка подавляет или тормозит рост боковых почек (Sachs, Thimaim, 1964), Для индукции роста пазушных почек у растеши! с ярко выраженным апикальным доминированием прибегают к удалению апекса стебля или к обработке растений цитокннинами. Последнее приводит к образованию много^Лслешшх пазушных по0егов. Побеги отделяют друг от друга и повторно культивируют на питательной среде, гч стимулируя пролиферацию пазушных меристем и возникновения побегов более высоких порядков.

Другой тип клональпого микроразмпожеиия растении основан на регенерации растений из каллуса. При работе этим методом следует иметь в виду, что длительное пассирование каллуса ведет к возникновению геномных, хромосомных и генных мугаций, т.е. потере морфогепстичсского потенциала (Бутепко и др., 1967; Глеба, 1978; Гапоненко и др., 1985). В связи с этим, при использовании культуры каллуса для микроразмножения растений необходимо свести к минимуму период неорганизованного роста. Подобным путем регенерации растений из каллуса является соматический эмбриогенез. В процессе соматического эмбриогенеза небольшое количество /теток, в результате ряда быстрых и направленных делений образуют сферическую глобулу, состоящую из массы меристематичсских клеток, т.е. структуру, называемую эмбриоидом. Мангуссон и Борнман в 1985 году показалш, что эмбриоид имеет биполярную структуру и характеризуется наличием апекса побега и апекса корня (Мш^иББоп, Вопппап, 1985). Образование соматических эмбриоидов неполностью соответствует образованию зародышей, возникших половым путем, так как дифференциация и последующее развитие апексов побегов происходит на ранней стадии развития зародыша.

Соматический эмбриогенез лежит в основе клоиального микроразмножения большинства растений, в том числе из семейства

1 л орхидных, рутовых и цитрусовых (Barlass, Skene, 1986; Aarlrijk, Linde, 1986; Шснгеля, Бугенко, 1986).

Процесс клопальпого микроразмиожепия можно разделить па несколько этапов. Обычно их насчитывают четыре: 1 - Выбор растения-донора, изолирование и стерилизация эксиланга, создание условий для его роста на питательной среде in vitro; 2 - Собственно размножение путем: а) стимуляции развития всех пазушных почек экегшапта; б) микрочерепковапне побега; в) стимуляции образования микроклубней и микролуковичек; г) индукция образования адвентивных почек тканями листа, стебля, чешуйками и донцем луковиц, корневищем, зачатками соцветий (без образования сначала каллусной ткани); д) укоренение размноженных побегов и адаптация пробирочных растений к условиям in vitro; с) выращивание извлеченных из культуральных сосудов растений в условиях теплицы в почве или в искусственном субстрате, ж) подготовка к реализации или высадке в поле (Rovve, 1986).

Наряду с преимуществами микроклонального размножения растений, •имеются также проблемы и недостатки, присущие этому методу. К этим проблемам относятся: 1 - по сравнению с традиционным производством лаборатория по размножению растений методом культуры тканей требует больших капиталовложений и соответствешю больших текущих расходов. Для большинства декоративных и различных других растений такой метод размножения просто может не окупаться, пока не будет упрощен; 2 -технические проблемы, такие как, возникновение "стекловидности" внтрификация), бактериальное заражение, фенольные соединения и другие ингнбирующие факторы, продуцируемые растениями, и которые подавляют рост (Fridboigct el al., 1978). Третья группа проблем связана с качеством растений, размножаемых методом in vitro, чему посвящена следующая часть обзора.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Абу Камиль, Ахмед

пыподы

1. Показано стимулирующее влияние паклобутразола , на пролиферацию побегов и почек в культуре in \ilro гладиолуса copia Закат, определены оптимальные концентрации паклобутразола для культ тчфоваппя апикальных ночек в жидкой питательной среде.

2. В резульипе оптимизации условии культивирования^в сочетании с оптимальными концентрациями паклобутразола разработана эффективная система микроклоиального размножения гладиолуса гибридного, которая характеризовалась увеличением диаметра клубнелуковиц ."\7 раза, КР на 9 раз по сравнению с контролем.

3. Обнаружена кариотипическая изменчивость, связанная с изменением числа хромосом у растений-peiспсрапгов гладиолуса сортов Закат (SCj, SC2, SCj) и Сомбреро (SC|). Показана зависимость этой изменчивости от генотипа

4. Показана стабильность по числу хромосом растений-регенератов SC'2 и SC3 copia Сомбреро, а также по мо|)фологпчсскпм признакам растснпи-рсгснсрангов сорта Закат.

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

1. Для увеличения эффективности микроклопального размножения G. Hybridus hört. Рекомендуется добавление в среду культивирования наклобутразол, определенных в данном исследовании оптимальных концентрациях (10,0-12,5 мг/л), учитывая условий культивирования, предложенных автором.

2. Для создания генетического разнообразия растений G. Hybridus hört., необходимого для селекции, предлагается использовать феномен сомаклопальной изменчивости.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Абу Камиль, Ахмед, 2000 год

1. Ахвердов А.А., Мирзосва II.В. Длительность девственного периода, время первого цветения и сроки проростання дикорастущих видов флоры Армении в культурс./Тр. Бог. Сада АН Арм. ССР, Еревван.-1962.-Т.13.-С.61-63.

2. Андреева И.И. морфогенез вегетативных органов шпажника гибридного (Gladiolus hybridus liort.) в первый год жизпи./Бюл. Гл. Ботан. сада,-1971 ,-вып .-79.-С.80-87.

3. Андреева И.И. Жизненный циклл шпажника гибридного Gladiolus х hybridus liort. (Iridaccac).^OTan. жури.-1977.-Т.62.-№8.-С.1183-1196.

4. Андреева И.И. Возрастание изменения в жизненном цикле шпажника гибридного Gladiolus х hybridus liort. (1т1асеае)./Изв. ТСХА.-1980.-Вып.З,-С.48-55.

5. Андреева И.И. Основы рационального выращивания и размножения шпажника гибридного./Бюл. Гл. Ботан. Сада.-1984.-Т.131.-С.71-76.

6. Базилевская Н.А. Растенисводственные ресурсы Южной Африки./Тр. по прпкл. Ботан., гсист. и селекции.-1929.-Т.22.-Вып.4.-С.405.

7. Бутенко Р.Г., Шамипа З.Б., Фролова JI.B. Индуцированный органогенез и характеристика растений, полученных в культуре тканей табака./Генетика.-1967.-Т.З.-№3.-С.23-39.

8. Высоцкий В.А. Клопалыюе микроразмножение растеиин./В кн.: Культура клеток растений н биотсхпология.-М., "Наука".-1986.-С.285.

9. Вильяме В.Р. Общее земледелие, г. П. Естественно исторические основы луговодства./М., 1992.-С.146.

10. Вакуленко В.В. Гладиолусы ./"Московский рабочий", М., 1952.-С.275.

11. Васильев А.Е., Воронин Н.С., Еленевский А.Г. и др. Ботаника: Анатомия и морфология растепий./М., "Просвещение"-1978.-С.480.

12. Гапопспко Л.К., Малнкова 11.И., Охрнмспко Г.П., Co3hiiod A.A. Получение сомаклональиых линий у злаков (Trilicum aeslivuin L. и Horde um vulgare Ь.)./Докл. AH CCCP.-1985.-T.283.-.№6.-C.1471-M75.

13. Глеба Д.М., Глеба Ю.Ю. Мутации и эпигенетические изменения в культуре клеток и протопластов высших растений./"Цитнлогня и генетика".-1978.-Т. 12.-№5.-С.458-469.

14. Гупало H.H. Возрастание изменения растений и их значение в растепиеводстве./М., "Наука",-1969.-С.252.

15. Давыдова U.M., Бутспко Р.Г. Культура изолированных органов, тканей и клеток растспий./М., "Наука".-1970.-С.265.

16. Злобин Ю.И. О неравноценности особей в ценопопуляцнях растспин./Ботап. журн.-1980.-Т.65.-№3.-С.311-322.

17. Игнатьева H.H. Причины "вырождения" некоторых декоративных травянистых многолстннков./Ботап. журн.-1966.-Т.51 .-№3.-С.426-430.

18. Игнатьева И.Г1. Селекция люпина многолистиого на продолжительность жизненного цнкла./Доклю ТСХА.-1973.-Выи.19.-С.155-158.

19. Кренке H.H. Теория циклического старения и омоложения растений и практическое ее применение./М., 1940.-С.105.

20. Комаров B.J1. Избранные сочипепия./М., 1945.-Т.1.-С.298.

21. Куперман Ф.М. Морфофизиология растений/'Высшая школа".-М., 1968.-С.168.

22. Кукушкин В.А. Морфофизиологические особенности клубпепочек гладиолуса./Бюл. Гл. ботан. Сада.-1984.-Т.131.-С.76-81.

23. Работников Т.А. Опыт определения возраста у травянистых растений./Ботан. журнал.-1946.-Т.31.-№5.-С.686-691.

24. Ржанова Е.И., H.A. Тихонова Закономерности органогенеза и жизненных циклов луковичных и клубнелуковичных геофитов./Изд-во МГУ.-1976.-С.29.

25. Румынии 13.Д., И.13. Агаджапяп, А.Г. Слюсаренко Масс-клональное размножение гладиолусов./Бюллетспь Главного ботанического сада.-1990.-Т.156.-С.68-72.

26. Серебряков И.Г. Морфология вегетативных органов высших растеинй./"Советская паука".-М., 1952.-С.250.

27. Сабинин Д.А. Физиология развития растений./Изд-во All СССР.-М., 1963.-С.367.

28. Седов Е. Морфогспсз./Цветоводство.-1968.-№ 7.-С. 13.

29. Сысина H.A. Морфогенез гладнолуса./Авторефф. Дис. Канд. Биол. Наук.-М., МГУ.-1953.-С.12.

30. Стеббинс Дж.Л. (мл.) Географическое распределение полиплоидов и значение полинлондни./В кн.: Полиплоидия, № 7, Изд-во Иностр. Лит.-1956.-С.56-94.

31. Стэрн Ф. Эволюция садовых нрисов./В кн.: Полиплоидия, М.-Л., Изд-во Иностр. Лит.-1956.-С.263.

32. Тихонова H.A. Возрастная изменчивость гладиолусов/ТДветоводство,'.-1968.-№ 9.-С.95-103.

33. Флора CCCP/T.IV, Л., Изд-во АН СССР.-1935.-С.580.

34. Матвеева Т.С. Спонтанная и экспериментально вызванная полиплоидия у некоторых декоративных однодольных растений и ее селекционное значение./В кн.: Полиплоидия и селекция, М.-Л., Изд-во "Наука".-1965.-С.ЗЮ.

35. Максимов H.A. Краткий круг физиологии растепий./"Высшая школа".-М., 1968.-С.115.

36. Непорожный Г.Д. Гладиолус./М., "Сельхозгиз".-1950.-С.167.

37. Шенгеля Л.Н., Бутснко Р.Г. Клоналыюс микроразмиожепие цитрусовых культурой пазушных почск./В кн.: Культура клеток растений и биотехнология.-М., "Наука".-1986.-С.285.

38. Швппитц Ф. Исследования полиплоидных растений. XII. Признаки гигантизма у растений и их значение для селекции./ В кн.: Полиплоидия, М., Изд-во Иностр. Лит.-1956.-С.149.

39. Щербаков 13.К. Полиплоидия в селекции декоративных растепнй./Пол. Моск. о-ва нсиыт. Природы, отд. Бнол.-1960.-Т.65.-№ 4,-C.I02.

40. Уайт Ф.Р. Культура растительных клегок./Изд-во Иностранной лиг-ры.-М., 1949.-C.11.

41. Anderson П.М., Abbott A.J., Wiltshire Micro propagation of stavvberry plants in vitro с fleet of growth regulators on incidence of niulti - apex abiiornialiiny./Scienlia Horticulturae.-1982.-V.16.-P.331-341.

42. Abbott A.J., Whitclcy E. Culture of Malus tissues in vitro. .Multiplication of apple plants from isolated shoot apices./Scicutia Hoit-1976.-V.4.-P.183-189.

43. Aartrijk J., van, G.J. Blom-Barnhoorn Some influences of 1-naphtylacctic acid on the differentiation of mcristcms of Lilium speciosum 'Rubruin' nr. 10 in vitro./Acta IIort.-1979.-V.91.-P.269-279.

44. Aartrijk J. Van, G.J. Bloom-Barnhoorii Growth regulator requirements for adventitious regeneration from Lilium bulbscalc tissue in vitro, in relation to duration of bulb storage and cultivar./Scicntia IJort.-1981.-V.14.-P.261-268.

45. Aartrijk J. Van and P.C.G. Van Der Linde In vitro propagation of flower-bulb crops./In: Tissue Culture as a Plant Production System for Horticultural Crops.-Zimmerman R.II. et al., (eds).- Martinus Nijhoff Publishers.-1986.-P.371.

46. Barlass M., G.M. Skene Citrus (Citrus species)./In: Y.P.S. Bajaj (cd), Biotechnology in agriculture and forestry. 1. Trees 1. Springer-Vcrlag. Berlin.-I986.-P.229.

47. Bamford R. The chromosome number in Gladiolus./J. Agric. Res.-1935.-V.51.-N 10.-P.945-950.

48. Bamford R. Cluomosomc number and hybridization in Gladiolus./J. Heredity.-1941.-V.32.-N 12-.P.419-422. •

49. Bcnnici A. M. Buiatti, F. D'Aniato, M. Pngliai Nuclcar behavior in Haplopappus gracilis callus grown in vitro on different culture mcdia./Colloq. Into Kilion. CNRS.-1971.-V.193.-P.245-250.

50. Bcnnici A. Cytological chiincras in plants regenerated from Lilium longiflorum tissues grown in vitro./Z. Pflanzcnzuchtung.-l979.-.82.-P.349-353.

51. Beute M.K. Effect of virus infection on susceptibility to certain fungus diseases and yield o!'Gladiohis./Phytopathology.-1979.-V.60.-P.1809-1813.

52. Beute M.K , R.D. Milholland, G.V. Gooding A survey of viruses in field grown Gladiolus in North Carolina./Plant Dis. Rcp.-1970.-V.54.-P.I25-I27.

53. Bajaj Y.P.S., M.M.S. Sidhu, A.P.S. Gill Some factors affecting the in vitro propagation ol Gladiolus./Scicntia llorticulturae.-1983.-V.18.-P.269-275.

54. Boxus P. rfhc production of srawberry plants y in vitro micro-propagation./J. Hort. Sci.-1974.-V.49.-P.209-210.

55. Ben-Jaacov J., Langhans R.W. Rapid multiplication of chrysanlhcnumi plants by stem-tip pioliferctiou./Hort. Scicnce.-1972.-V.7.-P.289-290.

56. Broertjes C., van Harten A.M. Application of Mutation Breeding Methods in the Improvement of Vegetatively Propagated Crops./Amsterdam: Elsevier Scientific Publishing Co.-1986.-P.381.

57. Beal A.C. Gladiolus studies. 1. Botany, history and evolution of the Gladiolus./Corncll Extcntion Bull.-1916.-V.93.-N 9.-P.117.

58. Buch Ph.O. Unusual Gladiolus species./Tlie Nat. Hortic. Maag.-1958.-V.37.-N 4.-P.204.

59. Cathy H.M. Physiology of growth retarding chemicals./Aim. Rev. Plant Physiol.-l 964.-V. 15.-P.271 -302.

60. Chung J.D., C.K. Chun, Y.K. Suh, E.M. Rhee In vitro propagation of Hyacinthus orientalis L. Effect of auxins on callus formation and bulblct differentiation from flower organ and flower stem tissue./J. Kor. Soc. Ilort. Sci.-1981.-V.22.-P.146-151.

61. Collingwood I. Gladiolus ncbulicola Ingram ./Gardener's Chronicle.-1930.-V.89.-P.86.

62. D'Amato F. Cytogenetic of differentiation in tissue and cell culturcs./ln Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell, Tissue and Organ Culture, cd. J. Reiner, Y.P.S. I3ajaj.-Berlin, Heidelberg and New York: Springer-Vedag.-1977.-P.343-357.

63. Davis M.J., Baken R., Hanau J.J. Clonal multiplication of carnation by micropropagation./Journal of the American Society for Horticultural Scicncc.-1977.-V.102.-P.48-53.

64. Dantu P.K., S.S. Bhojvvani In vitro propagation and corm formation in Gladiolus./Gartenbauwisscnschaft.-1987.-V.52.-N 2.-P.90-93.

65. Debergh P., Harbaoui Y., lcmeur R. Mass propagation of globe artichoke (Cynara scolymus): Evaluation of different hypotheses to overcome vitrification with special reference to water potcntial./Physiologia Plantarum.-1981.-V.53.-P. 181-187.

66. Daarlington C.D. Chromosome Atlas of Flowering Planls./London, G. Allen a. Unwin, Ltd.-1955.

67. Earle E.D., Langhans R.W. Carnation propagation from shoot tips cultured in liquid medium./Hort. Sci.-1975.-V.10.-P.608-610.

68. Evans D.A., W.R. Sharp Single gene mutations in tomato plants rehenerated from tissue ciilturc./Science.-I983.-V.221,-P.949-951.

69. Forsberg J.L. Diseases of ornamental plants./Univcrsity of Illinois, College of Agriculture, Special Publication.-1863.-N 3.

70. Fridborg G., Pcdcrscn M., Landstroin L., Eriksson T. The effect of activated charcoal on tissue cultures: absorption of metabolites inhibiting morphogenesis./PhysioloiaPlantarum.-1978.-V.43.-P. 104-106.

71. Graebe J.E. Gibberellin biosynthesis and control./Ann. rev. Plant Physiol.-1987.-V.38.-P.419-465.

72. Goulston (¡.11., Shearing S.J. Review of the cffccts of paclobutrazol on ornamental pot plants./Aeta Ilort.-1985.-V.167.-P.339-348.

73. Grove L.C Growth and flowering of the gladiolus. Influence of certain morphological and physiological characteristics of the corm./Agric. exp. Station Iova state college of agric. And nice. Arts, Floricull. Sect.-Res. Bull.-1939.-N 253,-P.l 150-1156.

74. George E.F., P.D. Sherrington Plant propagation by tissue cuIture./Mandbook and directory of commercial laboratories.-Exegclics Ltd., Evcrslcy, BasingstoU, Hants, U.K.-1984.-P.243.

75. Hartmann II. T., D.E. Kcsler Plant propagation principles and practiccs./3 ed. Prentice-Hall., Mew Jersey.-1975.-P. 197."

76. Husscy G. In vitro release of axillary shoots from apical dominance in monocotylcdonous plantlcts./Ann. Bot.-1976.-V.40.-P. 1323-1325.

77. Husscy G. In vitro propagation of Gladiolus by precocious axillary shoot formation./Scienlia 1 lorticullurac.-l 977.-V.6.-P.287-296.

78. Husscy G. Problems and prospects in in vitro propagation of hcibaccous plants./ln: Withers LA, AJdcrson G (Eds) Plant Tissue Culture and its Agricultural Application, Butler worth, London.-1986.-P.69-84.

79. Husscy G. In vitro propagation of monocotiledonous bubles and corms./ln "Plant Tissue Culture", (A. Fujivvara, ed.),Marzuzen, Tokyo.-1982,-P.677-680.

80. Halvcry A.M. Recent advances in the use of growth substances in ornamcntals./In: Bopp M. (Ed.) Plant Growth Substances, Springer Vcrlag, Berlin.-1985.-P.391-398;

81. Ilacketl W.P., Anderson J.M. Aseptic multiplication and maintenance of differentiated carnation shoots derived from shoot apices./Proceedings of the American Society for Horticultural Scicnccs.-1967.-V.90.-P.365-369.

82. Heinz D.J., W.P. Mcc Morphologic, cytogenetic and enzymatic variation in Saccharuin spccics hybrid clones derived from callus tissue./Amcr. J. Bot.-1971.-V.58.-P.257-263.

83. Jan W. Ilowc New Tcchnologgies in plant tissue culturc./ln: Tissue Cultirc as a Plant Production System for Horticultural Crops.-Ziniiiicrmau R.H. ct al. (Eds).-Martinus Nijhoff publishcrs.-1986.-P.371/

84. Jones R.E.R. Cliromosome number in the progeny of triploid Gladiolus./Amer. J. Bot.-1942.-V.92.-N 10.-P.807.

85. Krikorian A.D. Cloning higher plants from ascptically cultured tissues and cells./Biol. Rev/-1982.-V.57.-P.l 51-218.

86. Knaws J.F., Miller J.W. A contaminant, Erwinia carotovora, affecting commercial plant tissue cultures./In vitro.-1978.-V.14.-P.754-756.

87. Knaws J.F. A partial tissue culture method for pathogen-free propagation of selected ferns from sporcs./Proc FI State Hort Soc.-1976.-V.89.-P.363-365.

88. Logan A.E., F.W. Zettlcr Rapid in vitro propagation of virus-indexed Gladiolus./Acta Horticulture.-1985.-N 164.-P. 169-180.

89. Lilien-Kipnis H., M. Kochba Mass Propagation of new Gladiolus hybrids./Acta Horticulturae.-1987.-V.2.-N 212.-P.631-638.

90. Lawrence R.H. in vitro plant cloning system./Jr: Evil. Expt. Bot.-I981.-V.21.-P.289-300.

91. Lutter H. Om Gladiolus imbricatus synantropa forekomst, spcciellt i Finland./Memoranda Soc. Fauna et Flora Fennica.-1961.-V.36.-P.1959.

92. Maliga P. The need and search for genetic markers in plant cell cultures./In: F. Scala, B. Parisi, R. Cella and O. Ciferri (eds). Plant cell cultures: results and perspectives. Elsevier/North Holland.-1980.-P.107-114.

93. Malnassy P., Ellison J.11. Asparagus tetraploids from callus tissuc./Hort Science.- 1970.-V.5.-P.444-445.

94. Murashige T. And I;. Skoog Arcviscd nicdiuin for rapid growth and bioassay with tobacco tissue culturc./Physiol. PIant.-l962.-V.15.-I\472-497.

95. Migdalska B. Développement du pollen et les nombres des chromosomes chez quelques variétés des Gladiolus./Acta Soc. Bot. Polon.-1934.-V.XI, N 4,-P.463.

96. McLean F.T. South African wild llowcrs./Journ. of the New York Bot. Garden.-1935.-V.36.-N 423.-P.29.

97. Muraashige T., Shabde M.N., Hasegawa P.M., Takatori F.H., Joncs J.B. Propagation of asparagus through shoot apex culture. I. Nutrient medium for formation of plantlcts./Journal of the Amerocan Society for Horticultural Science.-1972.-V.97.-P. 158-161.

98. Murashige T. Plant propagation tlirough tissue cultures./Annual Review of Plant Physiology.-1974 .-V.25.-P. 135-166.

99. Murashige T., Serpa M., Jones J.B. Clonal multiplication of Gerbera through tissue culture./Hort Sci.-l974.-V.9.-P. 175-180.

100. Mantell S.H., II. Smith Plant biotcchnology./Cambridgc University Press.-1983.-P.301.

101. Mangusson I., Bornmsn C.H. Anatomical observations on somatic embtyogenesis from scutellar tissue of immature zygotic embryos of Triticum aestivum L./Physiol. Plant.-1985.-V.63.-P.137-145.

102. Nickell L.G. Crop improvement in sugar cane: studies using in vitro methods./Crop Science.-l977,-V. 17.-P.717-719.

103. Pinney R.D., A.C. llildcbraiidt Important Gladiolus diseases in Wisconsin./Phytopathology.-1968.-V.58.-P.103.

104. Pinney R.D. Some viruses of Gladioli in Wiskonsin./Ph.D Thesis, University of Wisconsin, Madison, Wisconsin.-1969.

105. Pricrik R.L.M., M.I1.M. Steegmans Effects of auxins, cytokinins, gibbercllins, abscisic acid, and etheplion on rcncration and growth of bulblcts 011 cxciscd bulb-scale segments of hyacinth./Physiol. Plant.-1975.-V.34,-P. 14-17.

106. Raamsdonk L.W.D., T. Dc Vries Biosystematic studies in European species of Gladiolus (Iridaccac)./Pl. syst. Evol.-1989.-V.165.-P.189-l98.

107. Reuveni O,, Lilien-Kipnis M. Studies on the in vitro cultured of date palm (Phoenix daclylifcra L.) tissues and organs./Panophlet no 145, The Volcani: Inslilule of Agricultural Research, Israel.-1974.

108. Sacristan M.D., G. Mciclicrs The caryological analysis of plants regenerated from tomorous and other callus cultures of tobacco./Molec. Gen. Genct.-1969.-V.105.-P.317-333.

109. Simonscn J., A.C. Ilildcbrandt In vitro growth and differentiation of Gladiolus plants from callus cultures./Cau. J. Bot.-1971.-V.49.-P.1817-18l9.

110. Singh 13.D., B.L. Harvey, K.N. Kao, R.A. Miller Karyotypic chngcs and selection pressure in llaplopappus gracilis suspention culturcs./Can. J. Genet. Cytol.-1975.-V.17.-P.109-116.

111. Sachs T., Thiinann K.V. Release of lateral buds from apical dominance./Nature (London).-1964.-V.201.-P.939-940.

112. Sachs T., Thimann K.V. The role of auxins and cytokinins in the release of buds from dominance./Am. J. Bot.-1967.-V.54.-P. 136-144.

113. Smith S.M., ILL. Street The decline of embryogenic potential as callus and suspension cultures of carrot (Daucus carota L.) arc serially subcullured./Ann. Bot.-l 974.-V.38.-P.233-241.

114. Styer D.J. Bioreactor technology for plant propagation./In: Hcnke RR et al. (Eds). Tissue Culture in Forestry and Agriculture. Plenum. New York.-1985.-P.117-130.

115. Steinitz B., lilicn-Kipnis H. Control of Precocious Gladiolus Corm and Cormel Formation in Tissue Culture./J. Plant Physiol.-1989.-V.135.-P.495-500.i '"vO

116. Skirvin K.M., J. Janick Tissue culture induced variation in sccntcd Pelargonium spp./J. Amer. Soc. Moil. Sei.-1976.-V. 101.-P.281-290.

117. Skirvin K.M. Natural and induccd variation in tissue culture./Euphytica.-1978.-V.27.-P.241-266.

118. Sunderland N. Nuclear cytology./In: Plant Tissue and Cell Culture, cd. U.E. Street, London: Blackwcll Scientific Publications.-1977.-P. 177-205.

119. Sutter E., R.W. Langhans Abnormalities in Chrysanthemum regenerated JYoin long-term culUucs./Ann. 13ot.-198l.-V.48.-P.559-568.

120. Schmidt II., G. Peschel Neue Wege rur Warmwasscr-bcutzuugshcizc von gladiolcnbrut. Aich. Gartenbau.-1964.-V.12.-IIf.6.

121. Sharma A.K., C. Talukdar Chromosome studies in members of the Iridaceae and their mcchanistn of spcciation./Gcnetica.-l960.-V.XXXI.-P.340-384.

122. Takayama S., Misawa M. Mass propagation of Begonia hicmalis by shake cultures./Plant Cell Physiol.-1981.-V.22.-P.461-467.

123. Takayama S., Misawa M. The mass propagation of lilium in vitro by stimulation of multiple adventitious bulb scale formation and by shake culture./Can. J. Bot.-1983.-V.61.-P.224-228.

124. Tsook II. Introduction of Ixora coccinea as a flowering pot plant./M. Sc. Thesis, Hebrew University of Jerusalem (in Hebrew; English summary) (submitted).-1986.

125. Vajrabhaya T. Variations in clonal propagation./In: J. Arditti (cd), Orchid biology: reviews and perspcctives.-Columbia Univ. Press, NY.-1977.-P. 179-201.

126. Weatherhead M.A., Burdon J., Henshaw G.G. Some Effects of activated charcoal as an additive to plant tissue culture media./Z. Pflanzcnpliysiol.-1978.-V.89.-P.141-147.

127. Ziv M. Transplanting Gladiolus plants propagated in vitro./Scientia Horticulturae.-l 979.-V. 11 .-P.257-260.

128. Ziv M., A. 11. Ma levy, R. Shilo Organs and Plantlets Regeneration of Gladiolus through Tissue Cullurc./Ann. Bol.-1970.-V.3'l.-P.671-676.

129. Ziv M. In vitro hardening and acclimatization of tissue culture planls./In: Withers A.W., Aldcrson P.G. (Eds) Plant Tissue Culture and Its Agricultural Application, Butter-worth, london.-1986.-P.187-196.

130. Ziv M., Yogev T., Krcbs O. Effects of paclobulrazol and chlonicquat on growth pattern and shoot proliferation of normal and variant Acchmca fasciala Baker plants regenerated in vilro./Jsrael J. Bot.-1986.-V.35.-P. 175-182.

131. Ziv M. Enhanced shoot and connlel proliferation in liquid cultured gladiolus buds by growth rclaidauts./Plant Cell, Tissue and Organ Culture.-1989,-V.17.-P.I01-110.

132. Ziv M., Meiz G., Halevy A.1I. factors inllucncing the production of hardened glaucous carnation planllels in vilro./Planl Cell Tissue and Organ Culture.-1983.-V.2.-P.55-65.1. РОССИЙСКАЯ ГОСУДАРСТВНИH