Совершенствование диагностики и методов лечения опухолей носоглотки с применением проточной цитометрии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.01.12, кандидат медицинских наук Джаббаров, Самир Махаббат оглы

• Джаббаров, Самир Махаббат оглы
• кандидат медицинских наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Джаббаров, Самир Махаббат оглы

ВВЕДЕНИЕ.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Современное состояние проблемы диагностики и лечения рака носоглотки.

1.2. Современное представление о плоидности

Глава 2. Общая характеристика клинического материала, применяемых методов и оборудования.

2.1. Введение в метод проточной цитометрии.

2.2. Материалы, использованное оборудование, методики исследований.

2.3. Приготовление образцов.

2.4. Примеры полученных цитограмм.

2.5. Статистическая обработка материалов исследования.

Глава 3. Изучение содержания плоидности ДНК, доли Б фазных клеток и пролиферативной активности при раке носоглотки.

Анализ корреляции ДНК-плоидности опухолевых клеток, морфологических характеристик опухолей и особенности клинического течения опухолевого процесса.

3.1. Плоидность и стадия заболевания при раках носоглотки.

3.2. Плоидность и регионарное метастазирование.

3.3. Плоидность и пролиферативная активность при раке носоглотки.

3.4. Плоидность и эффективность химио и лучевой терапии.

3.5. Плоидность и гистологический тип раков носоглотки.

3.6. Плоидность и пол больных раком носоглотки.

3.7. Общая и безрецидивная выживаемость больных раком носоглотки

Глава 4. ДНК-плоидность опухолевых клеток как прогностический показатель течения опухолевого процесса в ряду клинических прогностических признаков при некоторых злокачественных эпителиальных новообразованиях человека (обсуждение результатов).

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Совершенствование диагностики и методов лечения опухолей носоглотки с применением проточной цитометрии»

Актуальность темы

Абсолютное число заболевших раком носоглотки в РФ на 2007 год составил 563 человека, что составляет 0,12% от общего количества больных впервые в жизни установленным диагнозом злокачественного новообразования. При этом прирост количества больных раком носоглотки за период с 2002 по 2007 год составил 8,9% (от исходного уровня). В структуре заболеваемости населения РФ злокачественными новообразованиями доля рака носоглотки составляла 0,16% у мужчин и 0,08% у женщин (Давыдов М.И., Аксель Е.М., 2009). К сожалению, несмотря на небольшое количество, пациенты с данной патологией поздно обращаются в специализированные центры. Диагноз ставится в основном уже в далеко зашедших случаях, что связано со скрытым течением и поздними первичными проявлениями. У двух третей обращающихся за помощью больных опухолевый процесс носит местнораспространенный характер. Для решения вопроса об объеме необходимого лечения требуются прогностические данные. Клинические прогностические критерии (локализация, форма роста, распространенность, гистологическое строение опухоли и др.) достаточно хорошо изучены и преимущественно характеризуют состояние опухолевого процесса в настоящий момент. В то же время ДНК-цитометрические показатели, характеризующие биологические свойства опухолевых клеток, могут предсказать их поведение в отдаленном будущем. Однако биологические особенности рака носоглотки, несомненно играющие важную роль в прогнозе заболевания, остаются еще малоизученными.

Изучение ДНК-цитометрических характеристик опухолевых клеток является предметом самостоятельного изучения. Анализ ДНК-цитометрических данных позволяет установить и охарактеризовать плоидность основного (модального) класса клеток в популяции, выявить дополнительные статистически значимо различающиеся субпопуляции (многоклоновость), вычислить долю пролиферирующих клеток и т.д. Велик вклад этого метода в диагностику опухолей доказан в работах отечественных авторов (Г.Н.Зубрихина, Т.Г.Николаева, В.Н. Богатырев).

В последние годы получил признание и распространение способ прогнозирования течения опухолевого процесса на основании определения плоидности клеток в опухолевом узле. Изучению подвергались новообразования молочной железы, пищевода, легких и др. органов человека. ДНК-цитометрические данные опухолей сопоставлялись с клиническими данными. В результате такого сопоставления для разных видов опухолей были выявлены некоторые общие закономерности: диплоидные опухоли имели более благоприятное течение, чем анеуплоидные. Для ряда видов опухолей были также отмечены некоторые специфические особенности. Сопоставление с клиническими факторами прогноза показало высокую информативность показателя плоидности ДНК опухолевых клеток и позволило рассматривать его как независимый прогностический признак. Недостаточно изученной является прогностическая значимость ДНК-цитометрических данных при злокачественных опухолях головы и шеи.

Современный метод проточной цитофлуориметрии позволяет с высокой точностью на статистически достаточном материале измерить количество исследуемых веществ в клетках и их ядрах. В основе определения -измерение естественной люминесценции или люминесценции специальных красителей, избирательно связывающихся с изучаемыми веществами. Отдельное место среди методов проточной цитофлуориметрии занимает ДНК-цитофлуориметрия. Своеобразие этого метода заключается в том, что содержание ДНК в нормальной жизнеспособной клетке не является постоянным, а зависит от фазы клеточного цикла. При разных формах патологии количество ДНК в покоящейся (неделящейся) клетке не всегда бывает одинаковым (диплоидным), но может отклоняться от нормального содержания (анеуплоидия) в сторону уменьшения (гипоплоидия) или чаще -в сторону увеличения (гиперплоидия). Последнее (гипердиплоидия, триплоидия, тетраплоидия и т.д.)? часто имеет место при злокачественном росте.

В специальной литературе нет устоявшегося мнения относительно значимости плоидности ДНК в исходе злокачественных опухолей носоглотки. Работ по изучению плоидности злокачественных новообразований носоглотки в литературе встречается мало. Можно предположить, что сочетание клинических факторов прогноза с ДНК-цитометрическими сделает возможным более точное прогнозирование течения местно-распространенных форм рака назофарингеальной области, что позволит более обоснованно принимать решение об объеме и тактике лечения.

Таким образом, актуальность темы определяется, как ростом числа больных злокачественными опухолями носоглотки, так и сомнительностью прогноза, изучаемого с помощью клинических и морфологических характеристик опухоли. Несмотря на то, что опухоли указанной локализации встречаются редко, их прогрессирование рано приводит к генерализации процесса и гибели больных. Накопленные материалы ДНК-цитометрического изучения новообразований человека в недостаточной степени содержат сведения о злокачественных новообразованиях слизистой оболочки носоглотки. Поэтому привлечение метода проточной цитометрии к изучению биологических характеристик рака носоглотки, с целью поиска объективных прогностических критериев опухолевого процесса, является актуальным.

ЦЕЛЬ ИССЛЕДОВАНИЯ

Установить место и роль проточной цитометрии (плоидность, количество клеток в Э фазе клеточного цикла, пролиферативная активность) в определении критериев прогноза и течения опухолей слизистой оболочки носоглотки.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

Для достижения намеченной цели были поставлены следующие задачи:

1. Изучить ДНК-цитометрические характеристики больных раком носоглотки. Сопоставить результаты ДНК-цитометрического анализа опухолей с клиническими (стадия заболевания, распространенность процесса, наличие местных и отдаленных метастазов, сроки рецидивирования и метастазирования, сроки выживаемости) и патоморфологическими (гистологическое строение, степень дифференцированности и др.) данными.

2. Сопоставить данные ДНК-цитометрии с клинической эффективностью примененного лечения (химиотерапия, лучевая терапия).

3. Выявить группу риска больных раком носоглотки, связанную с плоидностью опухолевых клеток и плохим прогнозом.

НАУЧНАЯ НОВИЗНА

Впервые в России определена и изучена плоидность ДНК клеток при раке носоглотки. Впервые путем сопоставления полученных ДНК-цитометрических данных с клиническим материалом, дана оценка значимости плоидности ДНК при опухолях носоглотки, ее корреляции с клинико-морфологическими характеристиками течения опухолевого процессе и связь с результатами лечения.

ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

Разработанные ДНК-цитометрические критерии, с учетом клинических и прогностических показателей, позволяют более объективно определять объемы лечения больных, включая режимы лечения как по объемам, так и по интенсивности схем химио-лучевого лечения. На основе ДНК-цитометрического прогностического критерия среди больных, получивших лечение, была сформирована группа риска больных с более агрессивным течением.

Работа выполнена в лаборатории фармакоцитокинетики (зав. д.б.н. Д.Ю.Блохин) НИИ Экспериментальной диагностики и терапии опухолей (Директор, проф. А.Ю. Барышников) и в отделении опухолей верхних дыхательных и пищеварительных путей (зав. проф. Е.Г. Матякин) Онкологического Научного Центра им.Н.Н.Блохина (Директор, академик М.И.Давыдов) Российской Академии Медицинских наук.

Заключение диссертации по теме «Онкология», Джаббаров, Самир Махаббат оглы

ВЫВОДЫ

1. Анализ клинического материала, полученный у 46 больных раком носоглотки с помощью проточной ДНК-цитометрии установил, что диплоидные и анеуплоидные опухоли встречались в равном соотношении.

2. ДНК-проточная цитометрия позволяет также исследовать такую биологическую характеристику у больных раком носоглотки, как содержание клеток в Э фазе клеточного цикла, а также пролиферативную активность в виде суммы 8- и в2/М клеток. Высокий пролиферативный индекс, составляющий более 20% у больных диплоидными, и более 11% у пациентов с анеуплоидными раками носоглотки, коррелировал с развитием отдаленных метастазов и плохим прогнозом.

3. Общая и безрецидивная выживаемость при диплоидных и при анеуплоидных новообразованиях носоглотки не различалась, при среднем времени наблюдения 14,5 месяцев медианы не достигнуты.

4. Частота возникновения отдаленных метастазов у диплоидных и анеуплоидных была практически равной (18,2 и 20,8%, соответственно). Сроки и вероятность появления отдаленных метастазов также не различались среди больных диплоидными и анеуплоидными опухолями носоглотки.

5. Частота отдаленного метастазирования у больных анеуплоидными раками носоглотки мужского пола составила 25%, у женщин 12,5%.

6. Частота прогрессировать находится в прямой зависимости от индекса вовлечения периферических лимфатических узлов (при N0-1 - 5,3%, N2 -27,3%, N3 - 40%). Наиболее неблагоприятный прогноз и развитие отдаленных метастазов наблюдается у больных анеуплоидными опухолями носоглотки с индексом вовлечения лимфоузлов N2 (33,3%) по сравнению с больными диплоидными опухолями с N2 (23%).

7. Большинство опухолей носоглотки 82,6% (п=38) было представлено недифференцированным раком носоглоточного типа, 6 случаев плоскоклеточного неороговевающего рака и 2 случая - плоскоклеточного рака с ороговением. Не выявлено достоверных взаимосвязей между плоидностью и гистологической формой рака носоглотки. Замечено, что анеуплоидный неороговевающий плоскоклеточный рак в 50% случаях имеет отдаленные метастазы по сравнению с анеуплоидным недифференцированным раком носоглотки (16,6%).

8. Мужской пол, анеуплоидный плоскоклеточный неороговевающий рак, анеуплоидия с индексом вовлечения регионарных лимфоузлов N2^3, анеуплоидия с высоким пролиферативным индексом (более 11 %) являются неблагоприятными прогностическими факторами. Возможно наличие вышеуказанных факторов является показанием для проведения более интенсивного адъювантного лечения.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Таким образом, исследование клинических материалов, полученных от 46 больных (15 лиц женского пола и 31 лицо мужского) в возрасте от 16 до 84 лет раком носоглотки (I стадия 2 больных, во II - 6, в III - 17, в IV стадии --21 больной) установило, что диплоидные и анеуплоидные опухоли встречаются в равном соотношении. ДНК-проточная цитометрия позволяет исследовать такую биологическую характеристику у больных раком носоглотки, как содержание клеток в Б фазе клеточного цикла, а также пролиферативную активность в виде суммы 8 и С2/М клеток Высокий пролиферативный индекс, составляющий более 20% у больных диплоидными, и более 11% у пациентов с анеуплоидными раками носоглотки коррелировали с развитием отдаленных метастазов и плохим прогнозом. Время наблюдения за больными раком носоглотки, составило от 4 и до 34 месяцев и показало, что общая и безрецидивная выживаемость при диплоидных и при анеуплоидных новообразованиях носоглотки не различалась, медианы не достигнуты. Частота возникновения отдаленных метастазов как у диплоидных, так и анеуплоидных была практически равной (18,2 и 20,8%, соответственно). Сроки и вероятность появления отдаленных метастазов также не различались среди больных диплоидными и анеуплоидными опухолями носоглотки. Частота отдаленного метастазирования у больных анеуплоидными раками носоглотки мужского пола была выше по сравнению с таковыми у женщин. Частота прогрессирования рака носоглотки находиться в прямой зависимости от индекса вовлечения периферических лимфатических узлов (при N0-1 - 5,3%, N2 - 27,3%, N3 -40%), а наиболее неблагоприятный прогноз и развитие отдаленных метастазов наблюдается у больных анеуплоидными опухолями носоглотки с индексом вовлечения лимфатических узлов N2 (33,3%) по сравнению с больными диплоидными опухолями с N2 (23%). Большинство опухолей носоглотки 82,6%(п=38) было представлено недифференцированным раком носоглоточного типа, 6 случаев плоскоклеточного неороговевающего рака и 2 случая - плоскоклеточного рака с ороговением. Не выявлено достоверных взаимосвязей между плоидностью и гистологической формой рака носоглотки. Также отмечено, что анеуплоидный неороговевающий плоскоклеточный рак в 3 раза чаще (в 50%) имеет отдаленные метастазы по сравнению с недифференцированными раками (16,6%). Больные мужского пола, анеуплоидный плоскоклеточный неороговевающий рак, анеуплоидия с индексом вовлечения регионарных лимфоузлов N2^3, анеуплоидия с высоким пролиферативным индексом (более 11%) - являются плохим прогностическим фактором, возможно эти пациенты являются объектами для проведения более интенсивного адъювантного лечения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Джаббаров, Самир Махаббат оглы, 2010 год

1. Алферов, B.C. Органосохраняющие методы лечения рака гортани: Дис. . д-ра. мед. наук. /B.C. Алферов. М., 1993. - 310 с.

2. Ахундов, A.A. Клиническое значение плоидности ДНК при плоскоклеточных раках слизистой оболочки полости рта и гортани. Дис. . д-ра мед. наук /A.A. Ахундов. М., 2000. - 262 с.

3. Белоусова, Н.В. Современная диагностика рака носоглотки /Н.В. Белоусова, Б.К. Поддубный, Г.В. Унгиадзе // Современная онкология. 2000. - № 3. -С.78-82.

4. Белоусова, Н.В. Диагностика недифференцированного рака носоглотки /Н.В.Белоусова, Т.Т. Кондратьева, В.Э. Гурцевич и др. // Тезисы докладов V межрегионарной научно-практической конференции. Барнаул, 2003. - С. 280281.

5. Богатырев, В.Н. Значение количественных методов исследования в клинической онкоцитологии. Дис. . док. мед. наук. /В.Н. Богатырев. — М., 1991. -426 с.

6. Богатырев, В.Н. Проточная цитометрия при раке молочной железы Т1-2 N0 МО: анализ 10-летних наблюдений /В.Н. Богатырев, С.М. Портной, К.П. Лактионов // Материалы I съезда онкологов и радиологов СНГ. М., 1996. -С. 482-483.

7. Богданская, Н.М. Сравнительная морфометрическая характеристика первичных и метастатических карцином носоглотки /Н.М. Богданская. // Материалы V съезда онкологов и радиологов СНГ. Ташкент, 2008. - С. 72.

8. Вдовина, С.Н. Использование радиомодифицирующих средств в лечении рака полости носа и околоносовых пазух /С.Н. Вдовина // Вестник РОНЦ им. H.H. Блохина РАМН. 2009. - Т. 20., прил. 1. - С.55-56.

9. Гурцевич, В.Э. Иммунодиагностика опухолей человека, ассоциированных с вирусом Эпштейна-Барр. Дис. . док. мед. наук. /В.Э. Гурцевич. М., 1984. -340 с.

10. Давыдов, М.И.Статистика злокачественных новообразований в России и странах СНГ в 2007 г. /М.И.Давыдов, Е.М. Аксель // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. 2009. - Т. 20, №3, прил 1.

11. Задеренко, И.А. Хирургическое лечение метастазов в регионарных лимфатических узлах у больных раком носоглотки /И.А. Задеренко, Р.И. Азизян, А.А.Дробышев, С.Б. Алиева // Вестник РОНЦ им. Н.Н.Блохина РАМН. 2009. - Т.20, приложение 1. - С.58.

12. Зубрихина, Г.Н. Проточная цитометрия в диагностике и прогнозе злокачественных новообразований. Дис. . д-ра. мед. наук. /Г.Н. Зубрихина. -М., 1990.-ЗЗбс.

13. Лактионов, К.К. Корреляция плоидности больных немелкоклеточным раком легкого 1 стадии с показателями общей выживаемости. /К.К.Лактионов, Б.Е. Полоцкий, В.Н. Богатырев и соавт. // Материалы V съезда онкологов и радиологов СНГ. Ташекнт, 2008. - С.203.

14. Михайлова H.A. Уточняющая диагностика рака носоглотки. Дис. . канд. мед. наук. /H.A. Михайлова. М., 2006. - 155 с.

15. Нечушкина, В.М. Клиническая оценка параметров ДНК проточной цитомстрии при раке тела матки. Дис. . канд. мед. наук. /В.М. Нечушкина. -М., 2002.-176 с.

16. Николаева, Т.Г. Опыт применения проточной ДНК-цитометрии для прогнозирования течения злокачественных новообразований /Т.Г. Николаева, Я.В. Добрынин, В.П. Летягин и соавт. // Вестник АМН. 2002. - №1. - С.45-49.

17. Николаева, Т.Г. Проточная ДНК цитометрия в прогнозировании течения опухолевого процесса при некоторых злокачественных новообразованиях человека. Дис. . д-ра биол. наук. /Т.Г. Николаева. М., 2003. - 240 с.

18. Паниченко, И.В. Клиническое зпачение показателей ДНК-проточной цитометрии (ДНК-ПЦМ) при раке яичников /И.В. Паниченко, В.Н. Богатырев,

19. B.В. Кузнецов и др. // Материалы V- съезда онкологов и радиологов СНГ. -г. Ташкент, 2008 С.394.

20. Паниченко. И.В. Количественные параметры клеток опухоли как факторы прогноза у больных раком яичников /И.В. Паниченко, В.Н. Богатырев, М.И. Нечушкин и соавт. // Вестник РОНЦ им. Блохина РАМН. 2009. - Т.20, №2.- С. 80.

21. Пачес, А.И. Опухоли головы и шеи. /А.И. Пачес. М.: Медицина, 1983.1. C. 85-86.

22. Письменный, В.И. Хирургический метод лечения опухолей носоглотки и околоносовых пазух /В.И. Письменный, Ф.Г. Габриелян, О.В. Осокин и др. // Материалы V съезда онкологов и радиологов СНГ. г. Ташкент, 2008. - С. 165.

23. Поддубный, Б.К. Выявление первичной опухоли у больных с метастазами в лимфатические узлы шеи /Б.К. Поддубный, Н.В. Белоусова, B.JI. Шабаров // Вопросы онкологии. 1978. - № 9. - С. 118-120.

24. Поддубный, Б.К. Увеличенные лимфоузлы шеи как первое проявление опухоли /Б.К. Поддубный, Н.В. Белоусова, Г.В. Унгиадзе // Возможностисовременной онкологии в диагностике и лечении злокачественных новообразований. М., 2003. - С. 19-22.

25. Портной, С.М. Рак молочной железы (факторы прогноза и лечение): Автореф. дис. . д-ра мед. наук. /С.М. Портной. — М., 1997. 40 с.

26. Степина, В.Н. Дифференциальная диагностика рака носоглотки с помощью серологических маркеров вируса Эпштайна-Барр /В.Н. Степина, В.Э.Гурцевич, Л.Ф.Морозова и др. // Мед.рекомендации. М., 1987. - С. 24-28

27. Тихонова, Н.А. Некоторые вопросы заболеваемости РСФСР злокачественными опухолями головы и шеи/ Н.А. Тихонова, Е.В. Козлова, И.Б. Троицкая и др. // Опухоли головы и шеи. М., 1980. - №IV. - С. 46-48.

28. Чуприк-Малиновская, Т.П. Консервативная терапия (лучевая и химиолучевая) больных раком носоглотки: Автореф. дис. . д-ра мед. наук. /Т.П. Чуприк-Малиновская. М., 1996. - 360 с.

29. Швецова, Г.Н. Экспрессия некоторых молекулярно-биологических маркеров в опухолях молочной железы /Г.Н. Швецова, М.Б. Ориновский, JI.E. Гуревич и соавт. // Материалы V съезда онкологов и радиологов СНГ. -г. Ташкент, 2008. С.65.

30. Abad, М. DNA aneuploidy by flow cytometry is an independent prognostic factor in gastric cancer /М. Abad, J. Ciudad, M.R. Roncon et al. // Anal Cell Pathol. -1998. -Vol.16, N4. -P.223-231.

31. Arai, Y. Analysis of DNA ploidy using fresh frozen tissue of head and neck squamous cell carcinomas/ Y. Arai, M. Tsukuda, K. Ito et al. // Auris Nasus Larynx. -1997. -Vol.24,N2.-P. 193-198.

32. Atkin, N.B. Prognostic significance of modal DNA value and other factors in malignant tumors based on 1465 cases /N.B. Atkin, R. Kay // Br. J. Cancer. 1979. - N40. -P. 210-221.

33. Bagwell, C. DNA and cell cycle analysis as a prognostic indicators in breast tumors revisited /С. Bagwell, G. Clark, F. Spyratos et al. // Clin Lab. Med. 2001. -Vol.21, N4. -P.875-895.

34. Balzera, B.R. Flow cytometric DNA analysis of squamous cell carcinomas of the oral cavity: correlation with clinical and histopathological Features. /B.R. Balzera,

35. A.Borges, S. Pradhan et al. // EUR J. Oncol. 1994. -№ 30. P.98-101.

36. Bueno, R. Tumor DNA content as a prognostic indicator in squamous cell carcinoma the oral cavity and tonge base / R. Bueno, N. Glias, Deldado, D.Cebollada, D.Gonzalez // J. Head Neck. -1998. Vol. 20, N3. - P.232-239.

37. Bungaard, T. Stereologic, histopathologic, flow cytometric, and clinical parameters in the prognostic evaluation of 74 patients with intraoral squamous cell carcinomas IT. Bungaard, F.B. Sorensen, M. Galhede et al. // Cancer. -1992. -N70.-P.l-13.

38. Carillo, R. Salivary neoplasms of palate: a flow cytometric and clinicopathological analysis /R.Carillo, J. Batsakis, R. Weber, M. Luna, A.el-Naggar // J. Laryngol. -1993. -N107 (9). P.858-861.

39. Chedid, H.M. Assessment of clinical and therapeutic factors in patients with nasopharyngeal undifferentiated carcinoma /H.M. Chedid, S.A. Franzi, R.A. Dedivitis // Braz. J. Otorhinolaringol. 2008. - Vol.74, N 4. - P.566-570.

40. Chen, C. Treatment results and late complications of 556 patients with locally advanced nasopharyngeal carcinoma treated witrh radiotherapy alone /C. Chen, F.Han, C.Zhao et al. // Br. J. Radiol. 2009. - N 82. - P. 452-458.

41. Chen, X.J. Flow cytometric analysis of nasopharyngeal carcinoma /X.J. Chen // Zhongua Zhong Liu Za Zhi. -1990. -N12(2). P. 82-84.

42. Cheng, D.S. DNA content in nasopharyngeal carcinoma /D.S. Cheng,

43. B.H.Campbell, L.J. Clowry et al. // Am. J. Otolaryngol. -1990. Vol.11, N 6. -P.393-397.

44. Chong, V.F.H. MRI features of cervical nodal necrosis in metastatic disease /V.F.H.Chong, Y.F. Fan, J.B.K. Klioo // Clin. Radiol. 1996. -N 2. - P. 103-109.

45. Costello, F. A clinical and flow cytometric analysis of patients with nasopharyngeal cancer /F. Costello, B.R. Mason, R.J. Collins et al. // Cancer. 1990. -N66(8).-P. 1789-1795.

46. Cruz, I. Specific p53 immunostaining patterns are associated with smoking habits in patients with oral squamous cell carcinomas /1. Cruz, P.Snijders, V.Van Hounten etal.//J. Clin. Pathol.-2002. -N55.- P. 834-40.

47. Danic, D. Prognostic factors in squamous cell car cinoma of the larynx /D.Danic, M.Maruic, B.Uzarevic et al. // ORL J. Otorinolaryngol. Relat. Spec. 2000. - N 62. -P. 143-148.

48. Daniele, E. Prognosis in lower lip squamous ctll carcinoma: assessment of tumor factor/E.Daniele, V.Rodolico, V.Leonardi, V.Tralongo // Path. Res. Pract. 1998. -N194.-P. 319-324.

49. Duesberg, P. Genetic inetability of cancer cells is proportional to their degree of aneuploidy /P.Duesberg, C.Rausch, D.Rasnick, R.Hehlmann // Proc. Natl Acad. Sci USA. -1998.-N95 (23).-P. 13692-13697

50. D Urso, V. Cytometry and DNA ploidy: clinical ases and molecular perspective in gastric and lung cancer /D Urso V., A. Cjllodoro, E.Mattioli et al. // J. Cell Physiol. 2010.- N222(3).- P. 532-539.

51. Ernberg, J. EBV infection — clinical aspects and diagnosis /J.Ernberg, J .Anders son, A.Linde //Nord. Med. 1990. - P. 19-23.

52. El-Naggar, A.K. Genotypic analysis of primary nead and neck squamous carcinoma by combined fluorescence in situ hibridization and DNA flow cytometry /A.K.El-Naggar, M.Dinh, M.A. Luna et al. // Am J. Clin. Pathol. 1996. - N105(1). -P. 102-108.

53. Faccioli, S. Cell proliferation as an independent predictor of survival for patients with advanced nasopharyngeal carcinoma /S. Faccioli, O.Cavicci, A.Rinaldi Ceroni et al. // Mod. Pathol. 1997. - N10. - P.884-894.

54. Fang, F.M. Pretreatment Quality of life as a predictor of distant metastasis and Survival for patients with nasopharyngeal carcinoma /F.M.Fang, W.L.Tsai, C.Y. Chien et al. // J. Clin. Oncol. 2010. - N 28. - P.4384-9.

55. Flyger, H. DNA ploidy in colorectal cancer, heterogeineity within and between tumors and relation to survival /H.Flyger, J.Larsen, H.Nielsen et al. // Cytometry. -1999. -Vol.38, N6.- P. 293-300.

56. Francia, G. Heterogeneity of nuclear DNA pattern and its relationship with cell cycle activity parameters in multinodular goiter /G.Francia, L.Azzolina, T.Mantovani et al. // Clin Endoccr. -1997. -N 46. P. 649-654.

57. Fridlander, M.L. Clinical and biological significance of aneuploidy in human tumors /M.L.Fridlander, D.W.Hedley, I.W. Taylor // J. Clin Pathol. 1984. -N 37. -P.961-974.

58. Frost, Ar. DNA analysis and S- phase fraction determination by flow cytometric analysis of infiltrating lobular carcinoma of the breast /Ar.Frost, D.S.Karcher, S.Terahata et al. // Mod Pathol. 1996. - N 9. - P. 930-937.

59. Fukushima, T. Flow cytometric analysis of DNA ploidy in oral and pharyngeal carcinomas /T.Fukushima // Nippon Jibinkoka Gakkai Kaino. 1997. - Vol.100, N8. - P.870-879.

60. Gazic, B. S-phase fraction determined on fine needle aspirates is an independent prognostic factor in breast cancer a multivariate study of 770 patients /B.Gazic, J.Pizem, M.Braco et al. // Cytopathology. - 2008. -Vol.19, N5. - P. 294-302.

61. Genest, D.R. Flow cytometric analysis of nucleare DNA content in endometrial adenocarcinoma. Atipical mitoses are associated with DNA aneuploidy /D.R.Genest, E.Sheets, I.M. Lage // Am. J. Clin Pathol. 1994. - N 102. - P. 341-348.

62. Ghosh Surna Loss of adhesion regulated prpteinase production is correlated with invasive activity in oral squamous cell carcinoma /Ghosh Surna, G. Mushi Hidayatullah, Sen Ratha et al.// Cancer. 2002. - N 95. - P. 24-33.

63. Grotte, K. Intratumoral genomic heterogeneity in advanced head and neck cancer detected by comparative genomic hybridization /K.Grotte, S.Tremmel, S.Popp et al. //Adv. Otorhinolaryngol. 2005. -N62.- P.38-48.

64. Han, F. Correlation of DNA ploidy in fresh tumor tissues to prognosis of nasopharyngeal carcinoma /F.Han, H.Y.Wang, Y.F.Xia et al. //Al Zheng. 2007. -Vol.26, N9. -P.1015-1019.

65. Hao S.P. Nasopharingectomy for recurrent nasopharyngeal carcinoma: a rewiew of 53 patients and prognostic factors /S.P.Hao, N.M.Tsang, K.P.Chang et al. // Acta Otolaringol. 2008.- N128(4).- P.473-481.

66. Hemmer, J. Flow cytometric DNA ploidy analysis of squamous cell carcinoma of the oral cavity. Comparison with clinical staging and histologic grading /J.Hemmer, J.Kreider // Cancer. 1990. -N66(2). - P. 317-320.

67. Hemmer, J. The value of DNA flow cytometry in predicting the development of lymoh node metastasis and survival in patients with locally recurrent oral squamous cell carcinoma /J.Hemmer, T.Thein, W.F.Van Heerden // Cancer. -1997. -N79 (12). -P. 2309-13

68. Hemmer, J. DNA aneuploidy by flow cytometry is an independent prognostic factor in squamous cell carcinoma of the oral cavity /J.Hemmer, E.Nagel, K.Kraft // Anticancer Res. 1999.-N19.-P. 1419-22.

69. Hogmo, A. Nuclear DNA content and p53 immunostaining inmetachronous preneoplastic lesions and subsequent carcinomas of the oral cavity /A.Hogmo,

70. E.Munck-Wikland, R. Kuylensterma et al. // Head Neck. 1996. -N 18. -P. 433440.

71. Hrafnkelsson, J. Cellular DNA pattern, S-phase frequency and survival in papillary thyroid cancer /J.Hrafnkelsson, O.Stal, S.Enestrom et al. // Acta Oncol. -1988. -N27.-P. 329-333.

72. Hu, J.Y. Impact of pretherapy body mass index on prognosis of nasopharyngeal carcinoma /J.Y.Hu, W.Yi, Y.F. Xia et al. // Clin J. Cancer. 2009. - Vol. 28, N10. -P. 1043-1048.

73. Huang, T. Image analysis of DNA content and nuclear morphometry for predicting radiosensivity of nasopharyngeal carcinoma /T.Huang, M.Chen, M.Wu, X.Wu // Anal Quant Cytol. Histol. 2008. - Vol.30, N 3. -P. 169-174.

74. Hui, E.P. A prospective study of pre-treatment cell kinetics and clinical outcome in nasopharyngeal carcinoma /E.P.Hui, T.C.Poon, P.M. Teo et al. // Radiotherapy Oncol. -2003. N 69(1). - P.53-62.

75. Hsu, M.M. DNA content of nasopharyngeal carcinoma: an independent prognostic indicator /M.M.Hsu, C.R.Chiou, Y.KoJ., et al. // Cancer Detect Prev. -2000.-N 24(2). P. 119-126.

76. Janot, F. Prognostic value of clinicophatological parameters in head and necr squamous cell carcinoma: a prospective analysis /F.Janot, J.Klijanienko, A.Russo et al. // Br J. Cancer. 1996. - N 73. - P. 532-538.

77. Joensuu, H. Different opinions on classification of DNA histograms produced from paraffin-embedded tissue /H.Joensuu, O.Kallioniemi // Cytometry. 1989. -N 10. -P. 711-717.

78. Jsaacs, J.T. Clonal heterogeneity and its implications, In: Breast cancer treatment and prognoses: Ed: Stoll B.A. /J.T. Jsaacs // Oxford-London- Edinburgh: Blackwell scientific publications. 1986. - P.45-56.

79. Kademi, B. Treatment results of nasopharyngeal carcinoma: a 15-year single institu tional experience /B.Kademi, J.Mahmoodi, S.Omidvari et al. // J.Egypt canc. Inst. 2006. -N18(2). - P. 147-155.

80. Kamal-Eldin Ahmed Abou-Elhamd The flow cytometric analysis of premalignant and malignant lesions in head and neck squamous cell carcinoma /Kamal-Eldin Ahmed Abou-Elhamd and Tito Naeem Habib. // Oral Oncology. 2007. - N 43(4). -P. 366-372.

81. Kasprzyk, M. Prognostic value of DNA ploidy: 5-year follow-up of hatients with resectable squamous cell carcinoma (SCC) of the lung /M.Kasprzyk, W.Dyszkiewicz, C.Piwkowski et al. // Lung Cancer. 2006. - N51(2). - P. 201-206.

82. Keng, P.C. Measurement of proliferation activities in human tumor models: a comparison of flow cytometric methods /P.C.Keng, D.W.Siemann // Radiat Oncol Invest. 1998. - N 6. - P. 120-127.

83. Kimura, O. DNA index as a significant prognostic indicator of colorectal cancer /O.Kimura, K.Sugamura, T.Kijima et al. // Gan To Kagaku Ryoho. 1996. -N23(2).-P. 118-124.

84. Koss, L.G. Flow cytometric measurements of DNA and other cell components in human tumors: A critical appraisal /L.G.Koss, B.Czerniak, F.Herz, R.T.Wersto // Human Pathol. 1989, - Vol.20, N6. - P.528-548.

85. Lee, C. Concurrent chemoradiotherapy with adjuvant chemotherapy for high-risk nasopharyngeal carcinoma /C.Lee, S.Chu, P.Chou // Auris Nasus Larynx. 2009. -Vol.36, N6.- P. 688-694.

86. Leung, T.W. Treatment results of 1070 patients with nasopharyngeal carcinoma: an analysis of survival and failure patterns /T.W.Leung, S.Y.Tung, W.K.Sze et al. // Head Neck. 2005. -Vol.27, N 7. - P.555-565.

87. Lin, J.S. Outpatients weekly neoadjuvant chemotherapy followed by radiotherapy for advanced nasopharyngeal carcinoma: high complete response and low toxicity rates /J.S.Lin, J.S.Jan, C.Y.Hsu et al. // Br. J. Cancer. 2003. - N88. - P. 187-194.

88. Lipford, E.H. Prognostic factors in surgically resected limited stage, non-small-cell carcinoma of the lung /E.H.Lipford, J.C.Eggleston, K.D.Lillemore et al. // J. Surg Pathol. 1984. - N 8. - P. 357-365.

89. Lui, M.T. Prognostic factors affecting the utcome of nasopharyngeal carcinoma /M.T.Lui, C.Y.Hsieh, T.H.Chang et al. // Jpn J. Clin Oncol. 2003. - Vol.33, N10. -P. 501-508.

90. Ma, J. Prognostic significance of DNA ploidy and proliferative indices in patients with nasopharyngeal carcinoma /J.Ma, H.A.Nicholas, H.A.Terry et al. // Ai Zheng. -2002. -Vol.21, N6. P. 644-650.

91. Mahmood, J. The implication of DNA content on S-phase fraction in oral carcinomas with and without metastasis /J.Mahmood, K.Suzuki, T.Nomura et al. // Int J. Oral Maxillofac Surg. -1995. -Vol.24, N6. P.427-432.

92. Mao, Y. A clinical verification of the Chinese 2008 staging system for nasopharyngeal carcinoma /Y.Mao, W.Li, L.Chen et al. // Chin J. Cancer. 2009. — Vol.28, N10.-P. 1022-1028.

93. Marks, J.E. The national cancer data base report on the relationship of race and national origin to the histology of nasopharyngeal carcinoma /J.E.Marks, J.L.Phillips, H.R.Menck//Cancer. 1998. - N83.- P.582-588.

94. Melamed, M.R. Flow cytometry and sorting: Ed: Willey J. /M.R.Melamed, P.F.Mullaney, M.R.Mendelson // New-York, 1979. 716 p.

95. Mesia, R. Hyperfractionated radiotherapy: improvement of survival in locally advanced nasopharyngeal carcinoma /R.Mesia, M.Manos, J.Nogues et al. // Ann Otol Rhinol Laryngol. 2009. -Vol. 118, N6. - P.442-448.

96. Minu, Ar. Role of DNA ploidy in esophagal squamous cell carcinoma. An ultraviolet microphotometric study /Ar.Minu, M.Endo, M.Sunagawa // Cancer. -1994.- N74.-P. 578-585.

97. Mirza, A. Prognostic factors in node-negative breast cancer a review studies with sample size more than 200 and follow up more than 5 years /A.Mirza, N.Mirza, G.Vlastos, S.Singletary // Am. Surg. 2002. -N 235 (1). -P. 10-26.

98. Mishra, R.C. Study of tumor ploidy in early stages of buccal mucosa cancer /R.C.Mishra, S.Mohanty // Eur J. Surg Oncol. 1996. - N22. - P.58-60.

99. Nakada, K. Relationship among 201T1 uptake, nuclear DNA content and clinical behavior in metastatic thyroid carcinoma /K.Nakada, C.Katon, K.Morita et al. // J. Nucl Med. 1999.- Vol.40, N6. - P.963-967.

100. Nakamura, T. Chemoradiotherapy for locally recurrent nasopharyngeal carcinoma: treatment outcome and prognostic factors /T.Nakamura, T.Kodaire, H.Tachibana et al. // Jap J. Clin Oncol. 2008. -Vol.38, N12. - P.803-809.

101. Okafuji, M. The relationship of genetic aberrations detection by comparative genomic hibridization to DNA ploidy and tumor size in human oral squamous cell carcinomas /M.Okafuji, H.Ita, A.Oga et al. // J. Oral Pathol Med. 2000. - N29 -P.226-231.

102. Oliani, C. Cytofluorimetric evaluation of DNA ploidy in lung cancer: bronchoscopic study /C.Oliani, D.Barana, A.Cazzadori et al. // Int J. Biol Markers. -2005.-N20(2). -P.87-92.

103. Oye, R. Can flow cytometrically determined DNA ploidy and S phase fraction predict regional metastasis in squamous cell carcinoma of the oral cavity? /R.Oye, K.Ikemura // Head Neck. 2002. - N 24. - P. 136-142.

104. Pinto, A. DNA flow cytometry but not telomerase activity as predictor of disease-free survival in pTl-2/N0/G2 breast cancer /A.Pinto, S.Andre, T.Pereira et al. // Pathobiology. 2006. - N73. - P.63-70.

105. Porter, M.J. Detection of the tumour suppressor gene p53 in nasopharyngeal carcinoma in Hong Kong Chnese /M.J.Porter, J.K.Field, S.P.Leung et al. // Anticancer Res.-1994. N14. -P.1357-60.

106. Rapil, S. Flow cytometric measerement of DNA content in human solid tumors: a comparison with cytogenetics /S.Rapil, A.Caldini, A.Fanelli, et al. // Cytometry. -1996.-Vol.26, N3. -P.192-197.

107. Reiter, R. Centrosome abnormalities in head and neck squamous cell carcinoma (HNSCC) /R.Reiter, P.Gais, M.Steuer-Vogt et al. // Acta Otolaryngol. 2009. - N2. - P.205-213.

108. Salmon, I. Ploidy level and proliferative activity measurements in a series of 407 thyroid tumors os other patologic conditions /I.Salmon, P.Gasperin, M.Remmelink et al.//Hum Pathol. 1993.- N24.- P.912-920.

109. Saito, T. Flow cytometric analysis of nuclear DNA content in tonge squamous cell carcinoma: relation to cervical lymph node metastasis /T.Saito, J.Sato, A.Saton et al. // Int J. Max Fac Surg. 1994. - N23. - P.28-31.

110. Saito, T. Flow cytometric analysis of nuclear DNA content in oral leuplakia: relation to clinicopathologic findings /T.Saito, T.Yamashita, K.Notani et al. // Int J. Oral Maxillofac Surg. 1995. - N 24. - P.44-47.

111. Sarker, S. Nuclear DNA content using computerized image cytometry of squamous cell carcinomas of the head and neck /S.Sarker, K.Chufoor, K.Patel et al. // J. Laryngol Otol. 1997. -Nl. -P. 43-47.

112. Sato, T. Cytoflurometric nuclear DNA content analysis of breast tissue after frozen section diagnosis /T.Sato, M.Chiba, T.Kamiyama et al. // Anal Quant Cytol Histol. -2000. Nl. - P. 70-75.

113. Schimming, R. Prognostic relevance of DNA image cytometry in oral cavity carcinomas /R.Schimming, M.Hlawitschka, G.Haroske et al. // Anal Quant Cytol Histol. 1998. - N20. - P.43-51.

114. Shen, C. Pmgnostic impact of primary tumor volume in patients with nasopharyngeal carcinoma treated by definitive radiation therapy /C.Shen, J.J.Lu, Y.Gu et al. //Laryngoscope. 2008. - N7. - P.1206-1210.

115. Shi, X. Analysis of DNA ploidy, cell cycle and Ki-67 antigen in nasopharyngeal carcinoma by flow cytometry /X.Shi, X.Yuan, D.Tao et al. // J. Huazhong Univ Sei Technolog Med Sei. 2005. - N25. - P.198-201.

116. Smilek, P. Correlation of expression of Ki-67, EGFR, c-erbB-2, MMP-9, p-53, bcl-2, CD34 and cell cecle analysis with survival in head and neck squamous cell cancer /P.Smilek, L.Dusek, K.Vesely et al. // J. Exp Clin Cancer Res. 2006. - N4. -P.549-555.

117. Steinbeck, R.G. DNA content and HCNA immunoreactivity in oral precancerous and cancerous lesions /StR.G.einbeck, J.Moege, K.M.Heselmeyer et al. // Eur J. Cancer B Oral Oncol. 1993. - N29(B). - P.279-284.

118. Sterm, Y. Comparison of nuclear DNA content in locally invasive and noninvasive papillary carcinoma of the thyroid gland /Y.Sterm, l.Lisnyansky, T.Shpitzer et al. // Otolaryngol Head Neck Surg. 1997. - N5. - P.501-503.

119. Stewart, C.C. Flow cytometric analysis of oncogene expression in human neoplasies /C.C. Stewart // Arch. Pathol. Lab. Med. 1989. - Vol.113, N6. - P.634-640.

120. Struikmans, H. Proliferative capacity in head and neck cancer /H.Struikmans, H.Kai, G.Hordiijk et al. //Head Neck. 2001. - N23.- P.484-491.

121. Tamura, S. Impaired Ljng-Term T-cell immuniti to Epstein-Barr virus in patients with nasopharyngeal carcinoma /S.Tamura, A.Yamazaki, M.Kunimoto et al. // Jpn. J. Cancer Res. 1992. - P.445-449.

122. Ten Velde, G.P.M. Flow cytometric analyswis of DNA ploidy level in paraffin-embedded tissue of none-small-cell lung cancer /G.P.M. Ten Velde, B.Schutte, A.Vermeulen // Eur J. Cancer Clin Oncol. 1988. - N 24. - P.455-460.

123. Venkitaraman, R. Results of combined modality treatment for nasopharyngeal cancer /R.Venkitaraman, S.Ramanan, A.Vasanthan et al. // J. Cancer Res Ther. -2009.-N 5(2).-P.102-106.

124. Volker, H. Predictors of nodal metastasizing in laryngeal squamous cell carcinomas as decision support for neck dissection: comprehensive analysis of literature /H.Volker, M.Scheich, C.Volter et al. // Laryngorhinootologie. 2008. -N6. -P.392-398.

125. Villanacci, V. Flow cytometry study of DNA and cell kinetics in the adenoma-carcinoma sequence in the large intenstine /V.Villanacci, P.G.Grigolato, M.Cadei et al. //Pathologica. 1998. - N90. - P.120-126.

126. Vindelov, L.L. Some methods and application of flow cytometric DNA analysis in clinical and experimental oncology /L.L.Vindelov, I.S.Christensen// Eur J. Haematol. -1988. N 48. -P.69-76.

127. Xi, S. Gene therapy for treatment of oral squamous cell carcinoma /S.Xi, J.R.Grandis // J. Dent Res. 2003. - N82 - P. 11-16.

128. Xiao, W.W. Treatment outcome after radiotherapy alone for patients with early-stage nasopharyngeal carcinoma /W.W.Xiao, F.Han, T.X.Lu et al. // Int J. Radiat Oncol Biol Phys. -2009. -Vol.74, N4.- P.1070-1076.

129. Xie, F.Y. Radiotherapy of cervical lymph nodes for the patients with stage-No nasopharyngeal carcinoma /F.Y.Xie, M.Peng, W.H.Hu et al. //Ai Zheng. 2010. -N1. - P.100-104.

130. Yip, T.T. Prognostic significance of DNA flow cytometric analysis in patients with nasopharyngeal carcinoma /T.T.Yip, W.H.Lau, J.K.Chan et al. // Cancer. -1998.-Nil. P. 2284-2292.

131. Yu, J.M. DNA ploidy analysis of effectiveness of radiation therapy for cervical carcinoma/J.M.Yu, H.Zhang, S.R.Wang et al. // Cancer. -1991. N68. - P.76-78.

132. Zhao, F. Flow cytometry analysis of 67 squamous cell carcinoma of the tonge /F.Zhao, S.Lui, S.Yu // Chung Hua Hsuen Chuan Hsueh Tsa ccih. 1995. - Vol.30, N2. -P. 127.