Синтез и применение липид-специфических фотореактивных зондов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат химических наук Водовозова, Елена Львовна

• Водовозова, Елена Львовна
• кандидат химических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат химических наук Водовозова, Елена Львовна

Список сокращений

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Принципы фотореактивного зондирования мембран.

1.2. Применение фотореактивных реагентов для исследования липид-белковых взаимодействий

1.2Л.- Неспецифические мембранные зонды.

1.2.2. Фотореактивные жирные кислоты

1.2.3. Фосфолипидные зонды.

1.2.4. Гликолипидные зонды

1.3. Исследование липид-липидных взаимодействий

РЕЗУЛЬТАТЫ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ.

П.1.1. Синтез фотореактивных ^С-меченых фосфатидилхолина 2-РС и сфингомиелина 2-БМ

П.1.2. Синтез фотореактивных ^С-меченых фосфатидилхолина 12-РС и сфингомиелина 12-ЭМ

П. 1.3. Синтез фотореактивных фосфатидилхолина 12-РС и сфингомиелина 12-ЗМ с высоким уровнем тритиевой метки

П.2. Локализация фотореактивной метки фосфолипидных зондов в липидном бислое

П.З. Изучение липид-белковых взаимодействий в мембране вируса гриппа

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ.

Ш.1. Синтез фотореактивномеченых фосфолипидов

Ш.2. Везикулы для спектроскопии *Н-ЯМР и регистрация спектров

Ш.З. Образцы вируса гриппа.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Синтез и применение липид-специфических фотореактивных зондов»

В связи с важной ролью биологических мембран и липид-белко-вых комплексов в функционировании клетки и процессах метаболизма в организме в настоящее время интенсивно продолжается разработка оптимальных методов исследования молекулярной организации этих объектов. Наряду с такими физическими методами изучения строения мембран как электронная микроскопия, спектроскопия ЯМР, ЭПР, флуоресцентная спектроскопия, а также химическими методами с использованием различных моно- и бифункциональных реагентов относительно недавно были разработаны методы исследования мембран с помощью ли-пофильных фотореактивных зондов.

Главной отличительной чертой фотореактивных (фотоактивируе-мых, фотоаффинных) зондов является то, что они при освещении способны к образованию ковалентной связи с находящимися рядом молекулами или частями макромолекул. В результате анализа продуктов сшивки можно однозначно определить, с какими молекулами мембраны находился в контакте зоцц в момент фотолиза.

Пионерами в исследовании мембран с помощью фотореактивных ли-пофильных зондов были Клип и Житлер, применившие для этой цели 1-азидо-4-йодбензол и 1-азидонафталин ¿1/. Однако эти и им подобные аполярные нелипидные зоццы имеют существенный недостаток: их тс) расположение в мембране неопределенно-^, кроме того, они могут нарушать упаковку бислоя, особенно при локализации вблизи полярной части мембраны.

Для флуоресцентных нелипидных гидрофобных зондов, локализация которых в мембране изучена подробно, показано, что они могут на

Этих недостатков удается избежать при закреплении фотореактивной группировки в определенном положении молекулы мембранного ли-пида, что позволяет изучать участки мембраны на различной глубине липидного бислоя. Метод был предложен и развит Кораной с сотр. /3, ^, а также Штоффелем /Ъ/ и другими исследователями /6/.

На ранних этапах применения фотореактивных зондов в мембрано-логии, когда строение биологических мембран было известно лишь в общих чертах, некоторое распространение получил биосинтетический метод: в среду для выращивания микроорганизмов или культуры ткани добавляли фотореактивномеченую жирную кислоту, которая вступала в метаболизм и входила в состав клеточных липидов. Фотолиз и анализ продуктов сшивок позволял судить о характере липид-белковых взаимодействий (см., например, £47). Однако такой метод применим лишь к ограниченному числу объектов и с его помощью можно получить информацию, касающуюся только общей картины липид-белковых взаимодействий в мембране. Поэтому основное применение в мембранных исследованиях нашел другой подход - синтез индивидуальных фотореак-тивномеченых липидов с последующим введением их в изучаемую систему (мембрану). Такой подход позволяет изучать взаимодействие зондов с отдельными компонентами мембран, причем точно определять участок взаимодействия в цепи макромолекулы (например, конкретный аминокислотный остаток в белке).

Несмотря на значительное количество синтезированных фотореакходиться в различных областях бислоя. Например, пирен в фосфати-дилхолиновом бислое находится как в его средней зоне (плоскость молекулы параллельна поверхности мембраны), так и между жирноки-слотными цепями, перпендикулярно поверхности мембраны /2/. тивных липидов, эффективность большинства из них в качестве мембранных зондов еще недостаточно изучена. Кроме того, практически не проводилось сравнительных исследований с помощью однотипных фотореактивных липидов с различными полярными головками.

В связи с этим целью настоящей работы явились синтез двух важнейших фосфолипидов биологических мембран - радиоактивноме-ченых фосфатидилхолинов и сфингомиелинов, несущих фотореактивную группировку на различных расстояниях от полярных головок, достоверная локализация фотореактивных группировок в модельной фосфо-липидной мембране и изучение дифференциального взаимодействия фосфатидилхолина и ефингомиелина с различными белками в биологических мембранах.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Настоящий обзор посвящен рассмотрению результатов, полученных при изучении мембранных объектов с помощью неполярных, а также фосфо- и глико-липидных фотореактивных зондов.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Водовозова, Елена Львовна

ВЫВОДЫ

1. Синтезированы новые фотореактивные ^С- и %-меченые фосфати-дилхолиновые и сфингомиелиновые зонды, несущие 2-нитро-4-азидо-фенильную группировку на различном расстоянии от полярной головки фосфолипида.

2. С помощью спектроскопии %-ЯМР установлено, что в фосфатидил-холиновом бислое фотореактивная метка зондов, содержащих остаток n-nap-12-аминододекановой кислоты, локализована в глубине мембраны.

3. Фотореактивное зондирование мембраны вируса гриппа типа А показало, что малая субъединица гемагглютинина проникает в неполярную область вирусной мембраны. По-видимому, подобным же образом расположена нейраминидаза, тогда как М-белок проникает лишь в соответствующую приповерхностную область бислоя, не доходя до его середины.

4. Большая субъединица гемагглютинина ремантадинустойчивого штамма вируса гриппа, в отличие от дикого штамма, обладает гидрофобным участком, погруженным в липидный бислой.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Итоги настоящей работы показывают, что полученные нами новые фотореактивные липидные зонды, по структуре имитирующие природные фосфатидилхолин и сфингомиелин, являются эффективными инструментами при исследовании липид-белковых взаимодействий. Их совместное использование позволяет дифференцированно изучать взаимодействие фосфатидилхолина и сфингомиелина, двух основных фосфолипидов плазматической мембраны эукариотических клеток и липопротеинов крови, с мембранными белками и апопротеинами. Нами также синтезированы фотореактивные липиды, содержащие метку на различном расстоянии от полярной головки, которые могут дать ценную информацию о глубине погружения различных белков в липидный бислой.

Дальнейшим развитием исследования должно быть определение мест сшивки фотореактивных липидов с белками на уровне отдельных пептидов и аминокислот, что позволит идентифицировать специфические липид-связывающие участки полипептидных цепей мембранных белков и аполипопротеинов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Водовозова, Елена Львовна, 1985 год

1. Klip A., Gitler C. Photoactive covalent labeling of membrane components from within the lipid core. Biochim. Biophys. Res. commun., 1974, v.60, 3, p.1155-1162.

2. Khorana H.G. Chemical studies of biological membranes. Bioorgan. Chem., 1980, v.9, 3, 363-405.

3. Stoffel W., Schreiber 0., Scheefers H. Lipids with photosensi^. tive groups as chemical probes for the structural analysisof biological membranes. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1978, Bd.359, 8, S.923-931.

4. Bisson R., Montecucco C. Photolabeling of membrane proteins with photoactive phospholipids. Biochem. J., 1981, v.193, 3, p.757-763.

5. Greenberg G.R., Chalsxabarti P., Khorana H.G. Incorporationof fatty acids containing photosensitive groups into phospholipids of Escherichia coli. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1976, v.73, 1, p.86-90.

6. Turro N.J. Structure and dynamics of important reactive intermediates involved in photobiological systems. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1980, v.346, p.1-17

7. Moss R.A., Jones M. Carbenes, New York: Interscience, 1973» v. 1, p.240.

8. Reiser A., Waguer H.M. Photochemistry of the azido group. Ins The chemistry of the azido group. New York; Interscience, 1971, p.441-501.

9. Lwowski W. Nitrenes in the photochemistry labeling: speculation of an organic chemist. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1980, v. 346, p.491-500.

10. Iddon B., Meth-Cohn 0., Scriven E.F.V., Sushitzky H., Gallagher P.G. Developments in arylnitrene chemistry: syntheses and mechanizms. Angew. Chem. Int. Ed. Engl., 1979, v.18, 12, p.900-917.

11. Kiehm D.J., lae H.J. Photochemical cross-linking of cell membranes. A test for natural and random collisional crosslinks by millisecond cross-linking. J. Biol. Chem., 1977» v.252, 23, p.8524-8531.

12. Ross A.H., Radhakrishnan R., Robson R.J., Khorana H.G. The transmembrane domain of glycophorin A as studied by cross-linking using photoactivatable phospholipids. J. Biol. Chem., 1982, v.257, 8, p.4152-4161.

13. Nielsen P.E., Hausen J.B., Thomsen T., Buchardt 0. Reagents for photoaffinity labeling. 1 .Photobinding efficiency of aryl azido-, diazocyclipentadienyl- and ethyl diazomalonyl-derivatives of 9-aminoacridine. Experientia, 1983, v.39, 10, p.1065-1072.

14. Mas M.T., Wang J.K., Hargrave P.A. Topography of rhodopsin in rod outer segment disk membranes. Photochemical labeling with N-(4-azido-2-nitrophenyl)-2-aminoethane sulfonate. Biochemistry, 1980, v.19, 4, p.684-692.

15. Guillory R.J., Jeng S.J. Photoaffinity labeling: theory and practice. Ped. Proc., 1983, v.42, 11, p.2826-2830.

16. Goldman D.W., Pober J.S., Might J., Bayley H. Selective labeling of the hydrophobic segments of intrinsic membrane proteins with a lipophilic photogenerated carbene. Nature (London), 1979, v. 280,5724, p.841-843.

17. Nielsen P.E., Buchardt 0. Aryl azides as photoaffinity labels: a photochemical study of some 4-substituted aryl azides. Pho-tochem. Photobiol., 1982, v.35, 3, p.517-323

18. Hu V.W., Wisnieski B.J. Photoreactive labeling of M13 coat protein in model membranes by use of a glycolipid probe. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979, v.76, 11, p.5460-5464.

19. Staros J.Y. Aryl azide photolabels in biochemistry. Trends Biochem. Sci., 1980, v.5f 12, p.520-522.

20. Staros J.Y., Bayley H., Standring D.N., Knovsles J.R. Reduction of arylazides by thiols: implications for the use of photoaffinity reagents. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1978, v.80, 5, p.568-572.

21. Cerletti N., Schatz G. Cytochrome c oxidase from bakersyeast. Photolabeling of subunit exposed to the lipid bilayer. J. Biol. Chem., 1979, v.254, 16, p.7746-7751.

22. Abu-Salah K.M., Findlay J.B.C. Labeling of egg phosphatidylcholine vesicles and myelin membrane with a photoreactive lipophilic reagent. Biochem. J., 1977» v."161, 2, p.223-228.

23. Kahane I., Gitler C. Red cell membrane glycophorin labeling from within the lipid bilayer. Science, 1978, v.201, 4353, p.351-352.

24. Jackson R.L., Segrest J.P., Kahane I., Marchesi V.T. Studies on the major sialoglycoprotein of the human red cell membrane. Isolation and characterization of tryptic glicopeptides. Biochemistry, 1973, v.12, 16, p.3131-3138.

25. Klip A., Darszon A., Montal M. Labeling of rhodopsin moieties confined to the membrane lipid bilayer. Biochem. Biophys. Res. Commun., 1976, v.72, 4, p.1350-1358.

26. Dockter M.E. Fluorescent photochemical surface labeling of intact human erythrocytes. J. Biol. Chem., 1979, v.254, 7,p. 2161-2164.

27. Parley R.A., Goldman D.W., Bayley H. Identification of regions of the catalitic subunit of (Na-K)-ATPase embedded within the cell membrane. J, Biol. Chem., 1980, v.255, 3, p.860-864.

28. Karlish S.J., Jorgensen P.L., Gitler C. Identification of a membrane-embedded segment of the large polypeptide chain of

29. Na+,K+) ATPase. Nature (London), 1977, v,269, 5630, p.715-71735V Mely-Goubert B., Freedman M.H. Liquid fluidity and membrane protein monitoring using 1,6-diphenyl-1,3,5-hexatriene. Bio-chim. Biophys. Acta, 1980, v.601, 2, p.315-327.

30. Brunner J., Semenza G. Selective labeling of the hydrophobic core of membranes -with 3-(trifluoromethyl)-3-(ia- iodo-phenyl)diazirine, a carbene-generating reagent. Biochemistry, 1981, v.20, 25, p.7174-7182.

31. Brunner J., Senn H., Richards P.M. 3^Trifluoromethyl-3-phenyl-diazirine. (A new carbene generating group for photolabeling reagents). J. Biol. Chem., 1980, v.255, 8, p.3313-3318.

32. Wells E., Findlay J.B. Labeling of the intramembranous region of the major sialoglycoprotein of human erythrocytes -with a photosensitive hydrophobic probe. Biochem. J., 1979, v.179, 2, p.265-272.

33. Bercovici T., Gitler 0. 5- Iodonaphthyl azide, a reagent to determine the penetration of proteins into the lipid bilay-er of biological membranes. Biochemistry, 1978, v.17, 8,p.1484-1489»

34. Leblane P., Gapone J., Gerber G.E. Synthesis and biosynthetic utilization of radioactive photoreactive fatty acids. J. Biol. Chem., 1982, v.257, 24, p.14586-14589

35. Gupta C.M., Radhakrishnan R., Khorana H.G. Glycerophospholipid synthesis: improve general method and new analogs containing photoactivable groups. Proc. Nat. Acad. Sci., 1977, v.74, 10,p.4315-4319

36. Gupta O.M., Radhakrishnan R., Gerber G.E., Olsen W.L., Quay S. C., Khorana H.G. Intermolecular crosslinking of fatty acylchains in phospholipids: use of photoactivable carbene precursors. Proc. Nat. Acad. Sci., 1979, v.76, 6, p.2595-2599*

37. Smith R.A.G., Knowles J.R. The preparation and photolysis of 3-aryl-3H-diazirines. J. Chem. Soc. Perkin Trans. 2, 1975, v.7» p.686-694.

38. Radhakrishnan R., Costello C.E., Khorana H.G. Sites of photo-lytic Intermolecular cross-linking between fatty acyl chains in phospholipids carrying a photoactivable carbene precursor. J. Am. Chem. Soc., 1982, v.104, p.5990-3997.

39. Radhakrishnan R., Gupta C.M., Erni B., Robson R.J., Curatolo W., Majumdar A., Ross A.H., Takagaki Y., Khorana H.G. Phospholipids containing photoactivable groups in studies of biological membranes. Ann. N. Y. Acad. Sci., 1980, v.346, p.165-198.

40. Bueldt G., Gaily H.U., Seelig A., Seelig J., Zaccai G. Neutron diffraction studies on selectively deuterated phospholipid bi-layers. Nature (London), 1978, v.271, 5641, p.182-184.

41. Stoffel W., Salm K.P., MtLLler M. Syntheses of phosphatidylcholines, sphingomyelins and cholesterol substituted -with azido fatty acids. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1982, Bd.363, 1, S.1-18.

42. Wasserman E., Smolinsky G., Yager W.A. Electrone spin resonance of alkyl nitrenes. J. Am. Chem. Soc., 1964, v.86, 15, p.3166.

43. Lwowski W. Nitrenes, Interscience Publishers Chichester, England, 1970, p.47-97.

44. Richards P.M., Brunner J. General labeling of membrane proteins Ann. N. Y. Acad. Sci., 1980, v.346, p.144-163.

45. Cotmore S.P., Furthmayer H., Marchesi V.T. Immunochemical evidence for the transmembrane orientation of glycophorin A. Localization of ferritin-antibody conjugates in intact cells. J. Mol. Biol., 1977, v.113, 3, P.539-555.

46. Tomita M., Furthmayer H., Marchesi Primary structure of human erythrocyte glycophorin A. Isolation and characterization of peptides and complete amino acid sequence. Biochemistry,1978, v.17, 22, p.4756-4770.

47. Kagawa Y., Backer E. Partial resolution of the enzymes catalyzing oxidative phosphorylation. J. Biol. Chem., 1971» v.246, 17, P*5477-5487.

48. Urry D.W. The gramicidin A transmembrane channel: a proposedhelix. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1971> v.68, 3, Р-672-676.

49. Veatch W.R., Fossel E.T., Blout E.R. The conformation of gramicidin A. Biochemistry, 1974, v.13, 26, p.5249-5256.

50. Ozols J. Proteolitic cleavage and automated sequence analysis of cytochrome b^ bound to lipid vesicles. Fed. Proc., 1979» v.38, 3(1), p.472.

51. Bisson R., Montecucco C., Capaldi R.A. Interaction of membranous cytochrome b^ with arylazidophospholipids. FEBS Lett.,1979, v.106, 2, p.317-320.

52. Bisson R., Montecucco 0. Photolabeling of membrane proteins•with, photoactive phospholipids. Biochem. J., 1981, v.193, 3, p.757-763.

53. Moonen P., Haagsman H.P,, van Deenen L.L.M., Wirtz K.W.A. Determination of hydrophobic binding site of phosphatidylcholine exchange protein with photosensitive phosphatidylcholine. Eur. J. Biochem., 1979, v.99, 3, p.439-445.

54. Wirtz K.W.A., Moonen P., van Deenen L.L.M., Eadhakrishnan R., Khorana H.G. Identification of the lipid binding site of the phospatidylcholine exchange protein with a photosesitive lipids, Ann. N. T. Acad. Sci., 1980, v.348, p.244-266.

55. Bisson R., Steffens G.O.M., Buse G. Localization of lipid binding domains on subunit II of beef heart cytochrome c oxidase.

56. J. Biol. Chem., 1982, v.257, 12, p.6716-6720.

57. Bisson R., Jacobs B., Gapaldi R.A. Binding of arylazidocyto-chrome c derivatives to beef heart cytochrome c oxidase: cross linking in the high- and low-affinity binding sites. Biochemistry, 1980, v.19, 18, p.4173-4178.

58. Steffens G.J., Buse G. Studies on cytochrome c oxidase. IY. Primary structure and functoin of subunit II. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1979, Bd.360, 4, p.'613-619.

59. Ludwig B., Downer N.W., Capaldi R.A. Labeling of cytochrome•55c oxidase with diazobenzenesulfonate.

60. Biochemistry, 1979, v.18, 8, p.1401-1407.

61. Stoffel W., Darr W. Human high density apolipoprotein A-I-ly-solecithin-lecithin and sphingomyelin complexes. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1976, Bd.357, 1, S.127-137

62. Stoffel W., Metz P., Heller R. Covalent binding of photosensitive 1-(12-azido- 9,10-5H2 oleoyl)glycero-3-phosphocholine (ly-solecithin) to human serum high density apolipoproteins. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1979, Bd.360, 9, S.1319-1325

63. Stoffel W., Metz P., Tunggal B. The binding of lysolecithin to human serum high density apoprotein A-I. A ^C-NMR-study. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1978, Bd.359, 4, S.465-472.

64. Stoffel W., Metz P. Chemical studies on the structure of human serum high-density lipoprotein (HDL-). Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1982, Bd.363, 1, S.19-31.

65. Stoffel W., Salm K.-P., Lauger M. A new method for exchange of lipid classes of human serum high density lipoproteins. Hoppe-Seyler's Z. Physiol. Chem., 1978, Bd.359, 10, p.1585-1393.

66. Ohou P.Y., Fasman G.D. -Turns in proteins. J. Mol. Biol.,1977, v*115, 2, p.135-175.

67. Karlin J.B., Juhn D.J., Starr J.I., Scanu A.M., Rubenstein A.

68. H. Measurement of human high density lipoprotein apolipoprotein A-I in serum by radioimmunoassay. J. Lipid Res., 1976, v.17,1. p.30-37.

69. Edelstein C., Halari M., Scanu A.M. On the mechanism of the displacement of apolipoprotein A-I by apolipoprotein A-II from the high density lipoprotein surface. J. Biol. Chem., 1982, v.257, 12, p.7189-7195.

70. Huang K.S., Lav» J.H. Photoaffinity labeling of crotalus atrox phospholipase A2 by a substrate analogue. Biochemistry, 1981, v.20, 1, p.181-187

71. Bramhall J., Ishida B., Wisnieski B. Photolabile and paramaginetic reagents for the investigation of transmembrane signaling events. J. Supramolec. Str., 1978, v.9, 2, p.193-199.

72. Wisnieski B.J., Iwata K.K. Electrone spin resonance evidence for vertical asymmetry in animal cell membranes. Biochemistry, 1977, v.16, 7, p.1321-1326.

73. Bramhall J.S., Shiflett M.A., Wisnieski B.J. Mapping the membrane proteins of Newcastle-disease virus with a photoreac-tive glycolipid probe. Biochem. J., 1979, v.177, 2, p.765-768.

74. Miyakawa I., Takemoto L.J., Fox G.F. In: Animal virology. New York: Academic Press, 1976, p.485-497.

75. Wisnieski B.J,, Bramhall J.S. Photolabeling of cholera toxin subunits during membrane penetration. Nature (London), 1981, v.289, 5795, p.319-321.

76. Berkhout CD .A., Amerongen A., Wirtz K.W.A. Labeling of phospholipids in vesicles and human erythrocytes by photoacti-vable fatty acid derivatives. Eur. J. Biochem., 1984, v.142, 1, p.91-97.

77. Curatolo 7/., Radhakrishnan R., Gupta C.M., Khorana H.G. Pho-toactivatable carbene-generating phopholipids: physical properties and use in detection of phase separation in lipid mixtures. Biochemistry, 1981, v.20, 6, p.1374-1378.

78. Ladbrooke B.D., Chapman D. Thermal analysis of lipids, proteins and biological membranes. A review and summary of some recent studies. Chem. Pbys. Lipids, 1969, v.3, 4, p.304-367.

79. Gerber G.E., Radhakrishnan R., Gupta C.M., Khorana H.G. Interaction of cholesterol with photoactivable phospholipids in sonicated vesicles. Biochim. Biophys. Acta, 1981, v. 640, 3, p.646-654.

80. Hauser H., Pascher I., Pearson D.H., Sundell S. Preferred conformation and molecular packing of phosphatidylethanol-amine and phosphatidylcholine. Biochim. Biophys. Acta, 1981, v.650, 1, p.21-51.

81. Brockerhoff H. Model of interaction of polar lipids, cholesterol and proteins in biological membranes. Lipids, 1974, v.9, 9, p.645-650.

82. Huang C.-H. A structural model for the cholesterol-phospha-tidylcholine complexes in bilayer membranes. Lipids, 1977, v.12, 4, p.348-356.

83. Молотковский Юл.Г., Лазуркина Т.Ю., Фаерман В.Н., Смоляков B.C., Бергельсон Л.Д. Синтез фотореактивных фосфатидилхоли-на и фосфатидилэтаноламина. Биоорган, х., 1980, т.6, 4, с.594.

84. Молотковский Юл.Г., Дмитриев П.И., Молотковская И.М., Бергельсон Л.Д., Маневич Е.М. Синтез новых флуоресцентномеченых фосфолипидов и изучение их поведения в модельных мембранах. Биоорган, химия, 1981, т.7, 4, с.586-600.

85. Dessort D., Mersel М., Lepage P., Van Dorsselaer. Fast-heating mass spectrometry of phosphatidylcholine, lysophospha-tidylcholine, phosphatidylethanolamine, sphingomyelin. Anal. Biochem., 1984, v.142, 1, p.43-52.

86. Blought H.A., Merlie J.P. The lipids of incomplete influenza virus. Virology, 1970, v.40, 2, p.685-692.

87. Blough H.A., Tiffany J.M. Adv. Lipid Res., 1973, v.11, p. 261-263, Lipids in viruses.

88. Koff W.O., Knight V. Inhibition of influenza virus uncoating by rimantadine hydrochloride. J. Virol., 1979, v.31, 1, Р» 261-263.

89. Bucrinskaya A.G., Vorkunova G.K., Vorkunova N.K. Cytoplasmic and nuclear input virus HNPS in influenza virus-infected cells. J. Gen. Virol., 1979, v.45, 3, p.557-567*

90. Харитоненков И.Г. Структура липидной оболочки миксовирусов. Вопросы вирусологии, 1980, 6, с.654-662.

91. Gregoriades A. The membrane protein of influenza virus: extraction from virus and infected cell with acidic chloroformmethanol. Virology, 1973, v.54, 2, p.369-383

92. Чопин П.В., Компанс P.В. В кн.: Вирусы гриппа и грипп. Под ред. Э.Д.Килбурн. М., 1978,с.33-47.

93. Keil W., Niemann Н., Schwarz R.T., Klenk H.-D. Carbohydrates of influenza virus. Y. Oligosaccharides attached to individual glycosylation sites of the hemagglutinin of Fowl Plague Virus. Virology, 1984, v.133, 1, p.77-91.

94. Porter A.G., Barber С», Carey N.H., Hallewell R.A., Threlfall G., Emtage J.S. Complete nucleotide sequence of an influenza virus haemagglutinin gene from cloned DNA. Nature (London), 1979, v.282, 5738, p.471-477.

95. Schwarz R.T., Klenk H.-D. Inhibition of glycosylation of the influenza virus hemagglutinin. J. Virology, 1974, v.14, 5, p.1023-1034.

96. Атабеков И.Г. (ред.) Практикум по общей вирусологии, М.: МГУ, 198I, с.16-18.

97. Остерман Л.А. Методы разделения белков и нуклеиновых кислот.

98. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М.: Наука, 1981, с.87.

99. Rothman J.E., Tsai D.K., Davidowicz E.A., Lenard J. Transbi-layer phospholipid asymmetry and its maintenance in the membrane of influenza virus. Biochemistry, 1976, v.15, 11, p.2361-2370.

100. Wilson J.A., Skehel J.J., Wiley D.C. Structure of the haemagoglutinin membrane glycoprotein of influenza virus at 3 A resolution. Nature (London), 1981, v.289, 5796, p.366-378.

101. Markwell M., Pox C.F. Protein-proteinXeithin paramyxoviruses identified by native disulfide bonding or reversible chemical cross-linking. J. Virol., 1980, v.33, 1» p.152-166.

102. Gregoriades A., Frangione B. Insertion of influenza M protein into viral lipid bilayer and localization of site of insertion. J. Virol., 1981, v.40, 1, p.323-328.

103. Gregoriades A. Interaction of influenza M protein with viral lipid and phosphatidylcholine vesicles. J. Virol., 1980, v. 36, 2, p.470-479.

104. Добрецов Г.E., Закомырдин Ю.А., Спирин М.М., Букер Л., Хари-тоненков И.Г. Локализация остатков триптофана матриксного белка вируса гриппа в реконструированных протеолипосомах: флюоресцентный анализ. Вопр. вирусологии, 1982, 4, с.432-437.

105. Svetachev 7.1., Vaskovsky V.E. A simplified technique for thin layer microchromatography of lipids. J. Chromatogr., 1972,v. 67, 2, p.376-378.

106. Hanahan D.J., Rodell M., Turner L.D. Enzymic formation of mo-nopalmitoyllecithin (lysolecithins). J. Biol. Chem., 1954, v.206, 2, p.431-441.

107. Hanahan D.J. Sphingomyelin.-Biochemical preparations. J. Biol. Chem., 1954, v.206, 1, p.121-124.

108. Бергельсон Л.Д., Вавер B.A., Ковтун В.Ю., Сенявина Л.Б., Шемякин М.М. Ж. общ. химии, 1962, т.32, б, с.1802-1807.

109. Pleet G.W.J., Knowles J.R., Porter R.R. The antibody binding siteii Labelling of a specific antibody against the photo-precursor of an aryl nitrene. Biochem. J., 1972, v. 128, 3, p.499-508.

110. Jeng S.J., Guillory R.J. The use of aryl azido ATP analogsas photoaffinity labels for myosin ATPase. J, Supramolec. Str., 1975, v.3, 5/6, p»448-468.

111. Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins during the assembly of the head of bacteriophage T4. Nature (London), 1970, v.227, 5259, p.680-685•

112. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., Parr A.L., Randall R.J. Protein measurement with the folin phenol reagent. J. Biol. Chem., 1951, v.193, 1, p.265-275.

113. Vaskovsky V.E., Kostetsky V.J., Vasendin I.M. A universal reagent for phospholipid analysis. J. Chromatogr., 1975» v.114, 1, p.129-141.

114. Perkins G.A., Cruz A.O. Synthesis of compounds similar to chaulmoogric acid. II. dl-Chaulmoogric acid. J. Am. Chem. Soc., 1927, v.49, 4, p.1070-1077.

115. Pellmann J.H.J. The synthesis of taurine-2,2-t2 and hypotau-rine-2,2-t2. J. Label Сотр. Radiopharm., 1981, v.8, 5,p.765-768.

116. Дятловицкая Э.В., Леменовская А.Ф., Арчаков В.И. Изменение липидного состава микросом печени крыс при реконструкции системы цитохрома Р-450. Влияние лизолецитина на инактивацию фермента. Биохимия, 1977, т.42, I, с.139-143.