Селекция и технология микроклонального размножения ивы остролистной (Salix Acutifolia Willd) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.03.01, кандидат сельскохозяйственных наук Сергеев, Роман Владимирович

• Сергеев, Роман Владимирович
• кандидат сельскохозяйственных наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат сельскохозяйственных наук Сергеев, Роман Владимирович

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ЦЕЛИ И ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЙ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Биология Ивы остролистной

1.2. Экология Ивы остролистной

1.3. Хозяйственное значение ивы

1.3.1. Биологически активные вещества, применение в медицине

1.3.2. Хозяйственное значение ив

1.4. Методы культивирования

1.4.1. Традиционные методы выращивания ив

1.4.2. Размножение растений Salix в культуре in vitro

1.5. Влияние генотипа на синтез вторичных метаболитов ' 26 Выводы

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

ГЛАВА 2. УСЛОВИЯ, ИСХОДНЫЙ МАТЕРИАЛ, СХЕМА И

МЕТОДИКИ ПРОВЕДЕНИЯ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1. Характеристика района исследования

2.2. Методика отбора растительного материала

2.3. Методы оценки запасов коры ив

2.4. Отбор образцов S.acutifolia Willd для определения продуктивности

2.5. Растительный материал S.acutifolia Willd для введения в культуру in vitro

2.6. Схема исследований

2.7. Методики лабораторных исследований

2.8. Культура ивы остролистной in vitro

2.8.1 Выбор первичного экспланта

2.8.2. Стерилизация исходного экспланта Salix acutifolia Willd

2.8.3. Влияние 6-БАП и НУК на морфогенез S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.4. Оценка влияния минерального состава среды на процессы побегообразование S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.5. Влияние типа цитокинина на процесс морфогенеза S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.6. Влияние минерального состава среды на ризогенез S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.7. Укоренение и адаптация регенерантов S. acutifolia Willd

2.8.8. Влияние ауксинов на каллусогенез S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.9. Влияние минерального состава среды на каллусогенез S. acutifolia Willd в культуре in vitro

2.8.10 Создание коллекции in vitro S. acutifolia Willd

2.8.11 Математическая обработка

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЯ

3.1. Динамика накопления коры в насаждениях ивы остролистной

3.1.1. Динамика изменения таксационных показателей модельных деревьев ивы остролистной от возраста

3.1.2. Зависимость таксационных показателей модельных деревьев S. acutifolia Willd в зависимости от диаметра

3.1.3. Динамика накопления коры модельными деревьями ивы остролистной

Выводы

3.2. Селекционная оценка деревьев ивы остролистной

3.3. Оптимизация факторов, влияющих на морфогенетическую способность эксплантов ивы

3.3.1. Обоснование выбора первичного экспланта

3.3.2. Стерилизация эксплантов ивы для введения в культуру in vitro

3.3.3. Изучение влияния сочетание фитогормонов на морфогенез in vitro

3.3.4 Влияние минерального состава среды на гемогенез S. acutifolia Willd в культуре in vitro

3.3.5 Влияние цитокининов на интенсивность морфогенеза S. acutifolia Willd в культуре in vitro

3.3.6 Влияние минерального состава среды на интенсивность образования корней эксплантами ивы остролистной

3.3.7 Адаптация полученных in vitro регенерантов к условиям внешней среды

3.3.8 Подбор ауксина в питательной среде для получения морфогенной каллусной ткани

3.3.9 Изучение влияния минерального состава среды культивирования на процесс каллусогенеза эксплантами ивы 84 остролистной

3.4. Экономическая эффективность

ВЫВОДЫ

ПРЕДЛОЖЕНИЯ ДЛЯ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ В СЕЛЕКЦИОННОЙ ПРАКТИКЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Селекция и технология микроклонального размножения ивы остролистной (Salix Acutifolia Willd)»

На сегодняшний день плантационный способ выращивания древесных пород является общепринятой мировой практикой повышения эффективности лесного хозяйства. Для повышения продуктивности и рентабельности плантационного способа ведения лесного хозяйства необходимо использовать высококачественный посадочный материал, произведенный на основе отобранных по продуктивности форм древесных пород.

В 70-80-е годы XX века наша страна была одной из ведущих биотехнологических держав. Сейчас доля РФ в мировом объеме биотехнологической продукции не превышает 0,2 % (четверть века назад — 5 %), США - 42 %, Евросоюз - 22 %, Китай - 10 %, Индия - 2 %, а по уровню развития биоиндустрии, занимает 70-е место в Мире. Большинство видов жизненно важной биотехнологической продукции Россия импортирует [14].

Первые работы по культуре тканей древесных растений были опубликованы в середине 20-х годов прошлого столетия. В последующих работах 40-х годов было проведены исследования по способности различных тканей Ulmus foliacea Gilib. к образованию адвентивных почек. К середине 60-х годов Матесу (Бутенко, 1964) удалось получить первые растения-регенеранты осины, которые были доведены до почвенной культуры.

Большинство видов ивы {Salix, Salicaceae) содержат в листьях, коре или почках салицилаты (производные салицилового спирта). Салицин (ß-D-глюкопиранозид салицилового спирта), наиболее распространённый салицилат, был первым фенольным глюкозидом, обнаруженным, как в иве, так и в природе. Интерес к натуральным препаратам из ивы как альтернативе аспирина, возрастает, так как салицилаты ивы не обладают побочными эффектами (раздражение и повреждение желудка) [63]. Большинство из источников ивы, в настоящее время доступных для получения лекарственных препаратов, содержат менее 1 % активных компонентов. Поэтому, представляет большой интерес исследования, селекция и культивирование видов и форм ивы, с повышенным содержанием салицилатов [75].

В связи с этим, возникает необходимость их разведения путем создания промышленных плантаций интенсивного типа с короткой ротацией, а в качестве посадочного материала использовать высокопродуктивные (по выходу салицилатов) сорта-клоны, обладающие устойчивостью к неблагоприятным факторам среды, болезням и вредителям.

Исходя из вышеописанных проблем, целью исследований явилось разработка критериев для отбора плюсовых деревьев S.acutifolia Willd и дальнейшее их размножение с использованием технологии культуры тканей растений.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

1. Выявление зависимостей от таксационных характеристик деревьев S.acutifolia Willd биомассы коры на отдельном дереве и единице площади.

2. Определение направлений селекции S.acutifolia Willd с целью получения максимального прироста запаса коры на отдельном дереве

3. Разработка методики по отбору плюсовых деревьев S.acutifolia Willd в местах их естественного произрастания.

4. Изучение режима стерилизации и особенностей микроклонального размножения S.acutifolia Willd.

5. Оптимизация условий культивирования in vitro и адаптации S.acutifolia Willd.

Объект исследований — методы оценки популяций и культур in vitro древесных растений.

Предмет исследований - популяции, отдельные особи, части растений ивы остролистной, каллус, почки, побеги, сегменты растений, растения-регенеранты.

Научная новизна работы.

Определены критерии для оценки природных популяций S.acutifolia Willd и предложен методический подход для отбора плюсовых деревьев ивы остролистной с высокой продуктивностью биомассы коры. Разработана технология микроклонального размножения растений ивы остролистной и оптимизированы условия культивирования и адаптации полученных in vitro растений-регенерантов S.acutifolia Willd. Выявлены общие закономерности и специфические особенности культивирования in vitro растений S.acutifolia Willd.

Практическая ценность. Разработаны нормативные таблицы по оценке товарных запасов коры S.acutifolia Willd в зависимости от таксационных характеристик. Создана коллекция in vitro высокопродуктивных генотипов ив. Оптимизирован процесс получения посадочного материала ивы остролистной с применением культуры in vitro. Разработано обоснование выбора типа сырья, заготовляемого с плантации S.acutifolia Willd. Теоретические и практические результаты работы используются в НИР и учебном процессе МарГТУ.

Обоснование и достоверность научных положений обеспечены достаточным объемом экспериментального материала, собранного с использованием обоснованных методик, а также применением математических методов при обработке полученных результатов, воспроизводимостью результатов научной работы.

Апробация работы. Основные результаты экспериментальной работы по диссертации, выводы и предложения были доложены или представлены на X Международном симпозиуме «Эколого-популяционный анализ полезных растений: интродукция, воспроизводство, использование» (Сыктывкар 2008), V Всероссийской научной конференции «Химия и технология растительных веществ» (Уфа 2008), IX Международной конференции «Биология клеток растений in vitro и биотехнология» (Звенигород 2008), 12th International Congress «Phytopharm 2008» (Saint-Petersburg 2008), Международной научной студенческой конференции по естественным и техническим дисциплинам

Научному прогрессу - творчество молодых» (Йошкар-Ола 2008), I Международной научной конференции студентов, аспирантов и молодых учёных «Фундаментальные и прикладные достижения в биологии» (Донецк 2009). Научные разработки экспонировались на различных выставках, в том числе на 2-й Биотехнологической выставке-ярмарке «РосБиоТех-2008», где были отмечены дипломом и серебряной медалью, были отмечены дипломом третьей степени в VI ярмарке бизнес-ангелов и инноваторов «Российским инновациям — Российский капитал», кроме того проект по теме диссертации победил в программе «Участник Молодёжного Научно-Инновационного Конкурса» («УМНИК») и был удостоен диплома и медали конкурса молодых учёных на лучшую научно-исследовательскую работу на Пятом Московском Международном конгрессе Биотехнология: состояние и перспективы развития.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту:

1. Оценка природных популяций ивы остролистной на интенсивность накопления биомассы коры.

2. Методика для отбора плюсовых деревьев S.acutifolia Willd.

3. Технология микроклонального размножения и особенности культивирования in vitro растений S.acutifolia Willd.

Публикации результатов исследований

По результатам исследований по теме диссертации опубликовано 15 работ.

Объем и структура диссертации

Диссертационная работа состоит из введения, 3 глав, выводов, предложений для использования на практике, списка использованной литературы, содержащего 110 наименований, в том числе 60 иностранных авторов и приложений.

Заключение диссертации по теме «Лесные культуры, селекция, семеноводство», Сергеев, Роман Владимирович

Выводы

Для создания плантаций ивы остролистной необходимо проведение селекционной оценки как внутри насаждений, так и на популяционном уровне.

2. Плюсовые деревья Salix acutifolia Willd имеют в том же возрасте запас коры в 2-2,5 раза выше, чем у нормальных деревьев.

3. Для выявления плюсовых деревьев необходима оценка возраста, диаметра и высоты растения, а так же отбор не более 10 проб массы 1 см коры.

4. Доля коры на однолетних побегах у 15 изученных популяций отличается на 16%, Что свидетельствует о возможности проведения отбора на межпопуляционном уровне.

5. Селекцию ивы остролистной целесообразно осуществлять через индивидуальный отбор особей.

6. Отбор на содержание биологически активных веществ целесообразно проводить с однолетних побегов собранных в период покоя (декабрь-март) с последующим их проращиванием в лабораторных условиях.

7. Оптимальным режимом стерилизации для получения стерильных морфогенных эксплантов ивы остролистной является выдерживание сегментов растений в 10 % растворе Domestos в течение 10 минут.

8. Для интенсивной пролиферации побегов ивы остролистной в культуре in vitro необходимо использовать среду MS дополненную 1 мг/л Кин и 0,05 мг/л НУК.

9. Экспериментально установлено, что результаты, полученные на среде WPM как правило, на 10-20 % лучше результатов, достигнутых на других исследованных средах.

10. Эффективность адаптации растений-регенерантов в контейнерах несколько выше, чем в микропарниках, однако с технологической точки зрения рациональнее использовать торфяные таблетки в комплексе с микропарниками.

11. Для индукции морфогенного каллуса необходимо использовать среду \¥РМ дополненную 2 мг/л 2,4-Д и 0,2 мг/л Кин. I

Предложения для использования в селекционной практике

1. При оценке запасов коры ивы остролистной рекомендуется использование разработанных в данном исследовании нормативных таблиц.

2. Методика отбора особей ивы остролистной на продуктивность коры и содержание биологически активных веществ.

Селекцию ивы остролистной целесообразно осуществлять через индивидуальный отбор особей, так как влияние межпопуляционной изменчивости (по содержанию биологически активных веществ и интенсивности роста) незначительны по сравнению с индивидуальной изменчивостью генотипов ивы остролистной. Отбор на содержание биологически активных веществ целесообразно проводить с однолетних побегов собранных в период покоя (декабрь-март) с последующим их проращиванием в лабораторных условиях.

3. Отбор листьев на содержание биологически активных веществ июнь — июль.

Отбор образцов коры - июнь.

В виду интенсивного разрушения биологически активных веществ при сушке сырья необходимо соблюдение следующих условий: а) избегание запаривания образцов, которое ведёт к снижению содержания биологически активных веществ до трех раз; б) сублимационная сушка для побегов увеличивает сохранение биологически активных веществ до 30%; в) высушивание образцов должно проводиться при температуре не выше 60 °С, при увеличении температуры происходит разрушение до 10 % биологически активных веществ; г) при размельчении образцов необходимо обеспечивать их максимальную гомогенность.

4. Для создания высокопродуктивных плантаций ивы остролистной рекомендуется использовать качественный посадочный материал полученный отбором и последующим микроклональным размножением лучших генотипов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат сельскохозяйственных наук Сергеев, Роман Владимирович, 2011 год

1. Анциферов, Г. И. Отбор каповых форм тополя черного и ивы белой / Г. И. Анциферов // Лесное хозяйство. — 1966. № 5. — С. 33 - 34.

2. Анциферов, Г. И. Ива / Г. И. Анциферов. — М.: Лесная промышленность, 1984.-101 с.

3. Афонин, А. А. Методологические принципы создания устойчивых высокопродуктивных насаждений ив (на примере автохтонных видов Salix Брянского лесного массива). — Брянск: БГУ, 2005. — 146 с.

4. Афонин, А. А. Изменчивость ив Брянского лесного массива и перспективы их селекции на устойчивость и продуктивность: атореф. дис. докт. сельско-хозяйственных наук / A.A. Афонин. — Брянск, 2006. С. 47.

5. Афонин, А. А. Ивы Брянского лесного массива / А. А. Афонин. Брянск: БГУ, 2003.-237 с.

6. Беляева, И. В. Низкорослые декоративные формы ивы в культуре на Среднем Урале / И. В.Беляева, В. И. Шабуров, А. А. Дьяченко // Экология и акклиматизация растений: сб. ст. Ботан. сад УрО РАН. — Екатеринбург. — 1998.-С. 105-113.

7. Берике, В. Гомеопатическое лекарствоведение / В. Берике. СПб. - 2002. — 688 С.

8. Будниченко, Н. И. Опыт посадки ив для биотехнических целей / Н. И. Будниченко // Заповед.Белоруссии. 1985. - № 10. - С. 437 - 451.

9. Бутенко, Р. Г. Клеточная селекция картофеля / Р. Г.Бутенко, Л. М.Хромова, Г. А.Седнина// Сельскохозяйственная биология. 1983. — № 11. — С. 347 — 352.

10. Бутенко, Р. Г. Культура изолтрованных тканей и физиология морфогенеза / Р. Г.Бутенко. М.: Наука, 1964. - 272 с.

11. Бутенко, Р. Г. Методические указания по получению вариантных клеточных линий и растений у разных сортов картофеля / Р. Г.Бутенко, Л. М. Хромова, Г. В. Седнина. М.: ВАСХНИЛ, 1984. - 28 с.

12. Валягина-Малютина, Е. Т. Ива европейской части России. Иллюстрированное пособие для работников лесного хозяйства / Е. Т.Валягина-Малютина. М.: КМК, 2004. - 217 стр.

13. Василов, Р.Г. И накормит, и вылечит Проект "Концепция стратегии развития биотехнологической отрасли промышленности на 2008 2020 гг." / Р.Г. Василов // Российская Газета. - 2008. — 25 янв.

14. Глухов, М. М. Ивовый взяток / М. М. Глухов // Пчеловодство. 1963. — № 3. - С. 20-24.

15. Горобец, А. И. Биологическая продуктивность и хозяйственное значение некоторых видов ив в ЦЧР: автореф. дис. канд. сельско-хозяйственных наук / А. И. Горобец. Воронеж, 1992. - 202 с.

16. Горобец, А. И. Особенности роста ивовых плантаций в зависимости от условий выращивания и свойств культивара / А. И. Горобец // Развитие научного наследия акад. Н.И. Вавилова: тез. Междунар. науч. конф. — Саратов, 1997.-Т. 2.-С. 131-133.

17. Горобец, А. И. Результаты плантационного выращивания ивы в Краснодарском крае / А. И. Горобец, А. П. Максименко // Лесной журнал. -2007.-№6.-С. 36-41.

18. Дервиз — Соколова, Т. Г. Жизненные формы ив северо-востока СССР / Т. Г. Дервиз Соколова // Ботанический журнал. — 1982. — № 7, Т. 67. — С. 975 -982.

19. Дончев, Г. Используването на дървесните кори / Г.Дончев, Н. Иосифов // Гор. Стоп., Гор. пром-ст. 1986. - № 3, Т. 42. - С. 22-25.

20. Доспехов, Б. А. Методика полевого опыта (с основами стат. обработки результатов исследований) / Б. А. Доспехов. — М.: Колос, 1979. — 416 с.

21. Дундаров, С. Фармация (Болг.) / С. Дупдаров, П. Антонов, М. Бояджиева. — 1973. -№3.- С. 54-60.

22. Зузук, Б. М. Ива белая. Salix alba L. / Б. М. Зузук, Р. В. Куцик, А. Т. Недоступ // Провизор. 2005. — № 17.

23. Керн, Э. Э. Деревья и кустарники; их лесоводственные особенности, использование и технические применения / Э. Э. Керн. — М.: Государственное изд-во, 1925. 80 с.

24. Косиченко, Н. Е. Различия в строении древесины и содержании целлюлозы в древесине однолетних побегов и стволов древовидных ив и тополей / Н. Е. Косиченко // Лесохозяйственная информация. 1975. - № 14. - С. 16 — 17.

25. Котов, М. М. Применение биометрических методов в лесной селекции / М. М. Котов, Э. П.Лебедева. — Горький: Марийская республиканская типография, 1977. 121 с.

26. Курнаев, С. Ф. Лесорастительное районирование СССР / С. Ф.Курнаев. — М.: Наука, 1973.

27. Кущенская, С. Ю. Рекомендации по созданию ивовых прутяных плантаций в условиях Ивантеевского питомника / С. Ю. Кущенская // Науч. тр. Моск. гос. ун-т леса. 2000. - № 303. - С. 182 - 185.

28. Максименко, А. П. Плантационное выращивание лозовых ив : учеб. пособие / А. П. Максименко, А. И. Горобец. Краснодар: КубГАУ, 2006. — 118 с.

29. Малыченко, Е. В. Анатомия коры Chosenia nakai и сравнение ее со структурой коры других представителей семейства Salicaceae / Е. В. Малыченко // Науч. докл. высш. шк. Биол.наук. — 1988. № 7. - С. 71 — 76.

30. Малютина, Е. Т. О гермафродитизме у ив секции Vetrix / Е. Т. Малютина // Изв. вузов Лесн. жури. 1973. - № 1. - С. 5 — 8.

31. Морозов, И. Р. Определитель ив СССР и их культура / И. Р. Морозов. — М.: Лесн. промышленность, 1966. 254 с.

32. Насудари, А. А. Материалы к исследованию некоторых видов ивы из флоры Азербайджана: автореф. дис. канд. фармацевт, наук. / А. А. Насудари. Баку, 1966. —19 с.

33. Парфенов, В. И. Ивы (Salix L.) Белоруссии: Таксономия, фитоценология, ресурсы / В. И. Парфенов, И. Ф.Мазин. — Минск: Наука и техника, 1986. — 167 с.

34. Поляков, А. Рекультивация техногенных песков Норильского промышленного района / А. Поляков // Науч. техн. бюл. СО ВАСХНИЛ. — 1987.-№5.-С. 53-59.

35. Правдин, Л. Ф. Ива, ее культура и использование / Л. Ф. Правдин. — М.: Изд-во АН СССР, 1952.

36. Ростовцев, С. А. Содержание целлюлозы и длина волокна в древесине ив / С. А. Ростовцев // Лесн. хоз-во. 1964. - № 1. - С. 22.

37. Саутин, В. И. Выращивание и комплексное использование ивы. Практическое пособие / В. И. Саутин, П. Н. Райко, В. Н. Воробьев. — Минск: Ураджай, 1986. 54 с.

38. Сидоров, А. И. Таннидные ивы / А. И. Сидоров. М.: Лесная промышленность, 1978. -120 с.

39. Скворцов, А. К. Ивы СССР: Систематический и географический обзор / А. К. Скворцов. М.: Наука, 1968. -262 с.

40. Сукачев, В. Н. Из работ по селекции ивы / В. Н. Сукачев // Селекция и интродукция быстрорастущих древесных пород. — Л.: Гослестехиздат, 1934. -№ 1.-С. 51-85.

41. Сукачев, В. Н. Работы по селекции ивы / В. Н. Сукачев // Лесное хозяйство. 1939. - № 3. - С. 24-34.

42. Томилова, Н. К. Статистическая обработка данных: Методическое указание к выполнению расчетно-графического задания для студентов II и III курсов всех специальностей / Н. К. Томилова. — Йошкар-Ола : МарПИ, 1984.-28 с.

43. Чумаков, В. В. Рекомендации по ассортименту и технологии создания плантаций высокотаннидных ив в Европейской части РСФСР / В. В. Чумаков. М.: Мин. лесн. хоз-ва РСФСР, 1989. -55 с.

44. Чумаков, В. В. Создание плантаций высокотанидных ив: Обзорн. информ / В. В. Чумаков. М.: ВНИЦлесресурс Госкомлеса СССР, 1991. - 36 с.

45. Шабуров, В. И. Устойчивость и особенности роста ив на природно-техногенных песках / В. И. Шабуров, И. И. Шилова // Структура популяций и устойчивость растений на Урале. Свердловск, 1978. — С. 135-144.

46. Шашко, Д. Н. Агроклиматическое районирование СССР / Д. Н. Шашко. — М.: Колос, 1967.-335 с.

47. Шлыков, Г. Н. Дубильные растения СССР / Г. Н. Шлыков. М.: Сельхозгиз, 1932. - 192 с.

48. Agrawal, D.C. Rapid micropropagation of hybrid willow (Salix) established by ovary culture/ D.C. Agrawal, K. Gebhardt // Plant Physiology. 1994.- Vol. 143.-P. 763-765.

49. Ahuja, M.R. Somatic cell differentiation and rapid clonal propagation of aspen / M.R. Ahuja// Silvae Genetica. 1983. - Vol. 32. - P. 131 - 135.

50. Amo-Marco, J. В. In vitro propagation of Salix tarraconensis Pau ex Font Quer, an endemic and threatened plant / J. B. Amo-Marco, M. D. Lledo // In vitro Cellular and Development Biology. 1996. - Vol. 32. - P. 42-46.

51. Aravanopoulos, F. A. Heterozygosity and biomass production in Salix eriocephala / F. A. Aravanopoulos, L. Zsuffa // Heredity. 1998. - № 81. - P. 396-403.

52. Aronsson, P. Willow vegetation filters for wastewater treatment and soil remediation combined with biomass production / P. Aronsson, K. Perttu, // Forestry Chronicle. 2001. - Vol. 77, № 2. - P. 293 - 299.

53. Bergman, L. Effects of N6-benzyladenine on shoots of five willow clones (Salix ssp.) cultured in vitro / L. Bergman, S. von Arnold, T. Eriksson // Plant Cell Tissue and Organ Culture. 1985. - Vol. 4. - P. 135 - 144.

54. Bhojwani Sant S. Micropropagation method for a hybrid willow (Salix matsudana x alba NZ-1002) / Sant S. Bhojwani // New Zealand Journal of Botany. 1980. - Vol. 18. - P. 209 - 214.

55. Chalupa, V. In vitro propagation of willows (Salix s P.), European mountain — ahs (Sorbus aucuparia L.) and black locust (Robinia pseudoacacia L.) / V. Chalupa // Biologia Plantarum. 1983. - № 4. - Vol. 25. - P. 305 - 307.

56. Cherkasov, A. Ph. Classification of non-timber resourcer in the USSR: Pap.Finn.-Sov. Symp.Non- Timber Forest Resours / A. Ph. Cherkasov // Acta bot. Fenn. Juvaskyla, 1988.-Vol. 136.-P. 3-5.

57. Chrubasik, S. Treatment of low back pain exacerbations with willow bark extract: a randomized douple-blind study / S. Chrubasik, E. Eisenberg, E. Balan // American Journal of Medicine. 2000. - Vol. 109. - P. 9 - 14.

58. De Vries, M. G. Conservation of natural ecosystems of poplar and willow / M.

59. G. De Vries // Forestry Chronicle. 2001. - Vol. 77, № 2. - P. 255 - 257.

60. Douglas, D. A. Growth of Salix setchellioina on a Kluane River Point Bar,Ykon Territory, Canada / D. A. Douglas // Arct. and Apl. ReS. 1987. - № 1. Vol. 19.-P. 35-44.

61. Driver, J. A. In vitro propagation of paradox walnut rootstock / J. A. Driver, A.

62. H. Kuniyuki // Hortscience. 1984. - Vol. 19. - P. 507 - 509.

63. Dytkowska, O. Heavy metals content of selected galenic preparations / O. Dytkowska, B. Kami-Nski // Acta poloniae pharmaceutica. 1964. - Vol. 21. — P. 493 - 496.

64. Ebbs, S. Transport and metabolism of free cyanide and iron cyanide complexes by willow / S. Ebbs, J. Bushey, S. Poston, Kosma // Plant, Cell & Environment 2003. - Vol. 26. - P. 1467 - 1478.

65. El-Shemy, H. A. The effect of willow leaf extracts on human leukemic cells in vitro / H. A. El-Shemy, A.M. Aboul-Enein, M.I. Aboul-Enein // Journal of Biochemistry and Molecular Biology. 2003. - № 4. Vol. 36. - P. 387 - 389.

66. Forster, N. Seasonality of salicin and phenolic glycoside contents in the bark of three Salix species / N. Forster, C. Ulrichs, M. Zander // First Symposium on Horticulture in Europe, Book of abstracts. — Vienna, 2008. — P. 40-41.

67. Granel, T. Cadmium accumulation by willow clones used for soil conservation, stock fodder, and phytoremediation / T. Granel, B. Robinson, T. Mills // Australian Journal of Soil Research. 2002. - Vol. 40, № 8. - P. 1331 - 1337.

68. Gresshoff, P. M. Development and differentiation of haploid Lycopercicon esculentum (tomato) / P. M. Gresshoff, C. H. Doy // Planta. 1972. - Vol. 107. -P. 161-170.

69. Jain, S. Somatic Embryogenesis in Woody Plants / S. Jain, P. Gupta, R. Newton // Kluwer Academic Publishers. 1995. - Vol. 2. - P. 219 - 234.

70. Jicinska, D. Compatibility and hybridization in wtland Salix species / D.Jicinska, M. N. Koncalova // Preslia. 1986. - № 4. Vol. 58. - P. 369 - 371.

71. Julkunen-Tiitto, R. Variation in growth and secondary phenolics among field cultivated clones of Salix myrsinifolia / R. Julkunen-Tiitto, B. Meier // Planta Medica. 1992. - Vol. 258. - P. 77 - 80.

72. Karkonen, A. Micropropagation of several Japanes woody plants for horticultural purposes / A. Karkonen // Societas Biologica Fennica. 1999. — Vol. 36.-P. 21-31.

73. Kefelil, V. I. Phenolic cycle in plants and environment / V. I. Kefelil, M. V. Kalevitch, B. Borsari // Journal of Cell and Molecular Biology. 2003. - № 2. -P. 13-18.

74. Klang-Westin, E. Potential of Salix as phytoextractor for Cd on moderately contaminated soils/ E. Klang-Westin, J. Eriksson // Plant & Soil. 2003. — Vol. 249.-P 127-137.

75. Kopp, R. F. Willow biomass trials in central New York State / R. F. Kopp, E. H. White, L. P. Abrahamson // Biomass and Bioenergy. 1993. - Vol. 5, № 2. — P. 179-187.

76. Kuzovkina, Y. A. Willows beyond wetlands: uses of Salix L. species for environmental projects / Y. A. Kuzovkina, M. F. Quigley // Water, Air, and Soil Pollution. 2005. - Vol. - 162. - P. 183 - 204.

77. Landberg, T. Differences in oxidative stress in heavy metal resistant and sensitive clones of Salix viminalis / T. Landberg, M. Greger // Journal of Plant Physiology. 2002. - Vol. 159. - P. 69 - 75.

78. Landsberg, J. J. A generalized model of forest productivity using simplified concepts of radiation-use efficiency, carbon balance and partitioning / J. J. Landsberg, R H. Waring // Forest Ecology and Management. 1997. - № 95. — P. 209-228.

79. Larsson, G. The Salix viminalis group useful plants then and now / Larsson G. and Bremer B. // Svensk Botanisk Tidskrift - 1991. - Vol. 85 (3). - P. 185 -200.

80. Ledin, S. Handbook on how to grow short rotation forest / S. Ledin, A. Alriksson. Uppsala: Swedish Univ. Agric. Sei., Section of Short Rotation Forestry, 1992.

81. Liesebach, M. Approaches on vegetative propagation of difficult-to-root Salix caprea / M. Liesebach, G. Naujoks // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. — 2004. № 79. - P. 239 - 247.

82. Lloyd, G. Commercially feasible micropropagtion of mountain laurel, Kalmia latifolia by use of shoot tip culture / G. Lloyd, B. H. McCown // Proceeded International Plant Propagators Society 1980. - Vol. 30. - P. 421 - 427.

83. Lyyra, S. In vitro regeneration of Salix nigra via adventitious shoots / S. Lyyra, A. Lima, S. A. Merkle // Tree Physiology. 2006. - Vol. 26. - P. 969 - 975.

84. Makela, A. Process-based models for forest ecosystem management: current state of the art and challenges for practical implementation / A. Makela, J. Landberg, A. R. Ek // Tree Physiology. 2000. - №. - 20. - P. 289 - 298.

85. Mohren, G.M.J. Contrasts between biologically-based process models and management-oriented growth and yield models / G.M.J. Mohren, II.E. Burkhart // Forest Ecology and Management. 1994. - № 69. - P. 1-5.

86. Mosiej, J. Closing the nutrient loop between urban and rural area wastewater and sludge utilization in Ner River Valley / J.Mosiej, A. Karezmarezyk // Ecohydrology and hydrobiology. - 2006. - Vol. 6, № 1-4. - P. 197 - 203.

87. Murashige, T. A revised medium for rapid growth and bio assays with tobacco tissue cultures / T.Murashige, F.Skoog // Physiologia Plantarum. 1962. - Vol. 15.-P. 473-497.

88. Neumann, A. Die mitteleuropäischen Salix-Arten / A.Neumann. Wien: Mitt Forstlichen Bundes-versuchsanstalt, 1981. —P. 152.

89. Neuner, H. In vitro propagation of Salix caprea L. by single node explants / H. Neuner, R. Beiderbeck // Silvae Genetica. 1993. - № 6. Vol. 42. - P. 308 -310.

90. Newton, R. J. Somatic Embryogenesis in Woody Plants / R. J. Newton, P. K. Gupta Pramod, S. M. Jain Shri Mohan. 1995. - Vol. 2. - P. 532.

91. Park, S. Y. Micropropagation of Salix pseudolasiogynefrom nodal explants / S. Y. Park // Plant Cell, Tissue and Organ Culture. 2008. - № 3. Vol. 93. - P. 341 -346.

92. Patent FR2622800 France, Process for preparing a product for combatting viral complaints, especially cutaneomucosal viral complaints, pharmaceutical compositions and medicaments obtained using this process / Hauser D. — FR2622800; 05.12.1989.

93. Pulford, I. D. Heavy metal uptake by willow clones fro sewage sludge-treated soil: The potential for phytoremediation / I. D. Pulford, D. Riddell-Black, C. Stewart // International Journal of Phytoremediation. — 2002. — Vol. 4, № 1. — P. 59 72.

94. Sands, P. J. Application of process-based models to forest management: experience with PROMOD, a simple plantation productivity model / P. J. Sands, M. Battaglia, D. Mummery // Tree Physiology. 2000. - № 20. - P. 383 - 392.

95. Santos, B. R. Induction of friable callus in leaf explants of Salix (Salyx humboldtiana Willd) / B. R. Santos, R. Paiva, C. Martinotto // Ciencia Rural. — 2005. -№3. Vol. 35.-P. 510-514.

96. Sarwat, S. Salix caprea inhibits skin carcinogenesis in murine skin: inhibition of oxidative stress, ornithine decarboxylase activity and DNA synthesis / S. Sarwat, S. Mohammad // Journal of Ethnopharmacology. 2004. - Vols. 91 (2-3).-P. 267-276.

97. Schenk, R. U. Medium and techniques for induction and growth of monocotyledonous and dicotyledonous plant cell cultures / R. U. Schenk, A. C. Hildebrandt // Canadian Journal Botanica. 1972. - Vol. 50. - P. 199 - 204.

98. Thill, A. Culture et utilisation de l'osier / A. Thill // Bull. Cent. Populicult. Haunaut. 1984. - Vol. 1. - P. 23 - 28.

99. Thorpe, T. A. Clonal Propagation: Advertitious buds / T. A. Thorpe, K. R. Patel // Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants / book auth. Vasil I. K. — New York: Academic Press, 1984. — Vol. 1.

100. Van Auken, O. W. Dynamics of establishment , growth and development of black willow and cottonwood in the san Antonio river forest / O. W. Van Auken, K. J. Bush // Texas Journal of Science . 1988. - № 3 : Vol. 40. - P. 269-277.

101. Vervaeke, P. Phytoremediation prospects of willow stand on contaminated sediment: a field trial / P. Vervaeke, S. Luyssaert, J. Mertens // Environmental Pollution. 2003. - Vol. 126. - P. 275 - 282.

102. Wagner, H. Plant drug analysis / H.Wagner, S.Bladt. New York: Springer, 2001.-Vol. XVI.-P. 384.

103. Waring, R.H. A process model analysis of environmental limitations on the growth of Sitka spruce plantations in Great Britain / R.H. Waring // Forestry. — 2000.-№73.-P. 65-79.

104. Watson, C. Development of a hydroponic screening technique to assess heavy metal resistance in willow (Salix) / C. Watson, I. D. Pulford, D. Riddell-Black // International Journal of Phytoremediation. 2003. - Vol. 5, № 4. - P. 333 — 349.

105. Weber, E. Monographie der Salix alba L. Spec. Plant Unter Berusceichtigund genetischer und Zuchterischer Aspecte / E. Weber // Forstwis-sentschaftliches. — 1974.-Vol. 5.-P. 233-247.

106. МАРИЙ ЭЛ РЕСПУБЛИКЫН ЧОДЫРА ОЗАНЛЫК МИНИСТЕРСТВЫЖЕ

107. МИНИСТЕРСТВО ЛЕСНОГО ХОЗЯЙСТВА РЕСПУБЛИКИ МАРИЙ ЭЛ

108. Ленин проспект, 24 б, Йошкар-Ола, Марий Эл Республик, 424000

109. Ленинский проспект, д.24 б, г. Йошкар-Ола, Республика Марий Эл, 424000

110. Председатель комиссии: Члены комиссии: