Роль рецепторов TLR2, TLR4 и растворимых белков LBP, sCD14 и sMD-2 в ответах клеток крови на провоспалительные агенты бактериальной природы в норме и патологии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Радзюкевич Ярослав Вадимович

• Радзюкевич Ярослав Вадимович
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Радзюкевич Ярослав Вадимович

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль моноцитов в хроническом и остром воспалении

1.2 Эндотоксины грамотрицательных бактерий: открытие, структура, функции

1.3 Механизм распознавания и ответа на эндотоксин

1.4 Транспорт мономеров эндотоксина и их обнаружение клетками врождённого иммунитета

1.5 Растворимые ЛПС-транспортирующие белки и их роль в активации иммунного ответа

1.5.1 Липополисахарид-связывающий белок (LBP)

1.5.2 Растворимый рецептор CD14

1.5.3 Белок миелоидной дифференцировки MD-2

1.5.4 Белок-аллерген клещей домашней пыли Der p

1.6 TLR's как центральные рецепторы в активации иммунного ответа

1.6.1 Характеристика и функции Toll-подобного рецептора 4 (TLR4)

1.6.2 Роль TLR4 в активации врождённого и адаптивного иммунитета

1.6.3 Внутриклеточная передача сигнала от TLR4

1.7 Токсины грамположительных бактерий

1.7.1 Активация иммунных клеток посредством ЛТК

1.8 Влияние хронического воспаления на функциональную активность TLR 2 и TLR 4 и синтез провоспалительных цитокинов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2 Разработка дизайна исследования

2.4. Анализ распределения субпопуляций моноцитов и количества TLR2 и TLR4 на поверхности клеток крови методом проточной цитофлюориметрии

2.5. Активация клеток врождённого иммунитета здоровых доноров и пациентов к синтезу цитокинов бактериальными агентами

2.6. Определение концентрации цитокинов в сыворотке крови методом иммуноферментного анализа

2.7. Статистическая обработка результатов

3. Результаты и обсуждение

3.1 Вклад LBP и sCD14 в активацию клеток крови здоровых доноров провоспалительными агентами, обладающими различной структурой

w W г л

липополисахаридов и липотейхоевой кислоты

3.2 Роль ЛПС-транспортирующих белков (LBP, sCD14, sMD-2) в ответе клеток врождённого иммунитета пациентов с СД2т и БА+СД2т на липополисахариды

w W г г

разной структуры или липотейхоевую кислоту

3.3 Исследование участия белка крови sMD-2 в активации клеток крови различными структурами ЛПС и аллергеном Der p

3.3.1 Влияние блокирования белка MD-2/sMD-2 на синтез TNF-a и IL-8 в ответ на аллерген и эндотоксины

3.3.2 Участие Der p 2 и sMD-2 в ответе клеток крови на эндотоксины и аллергены

3.4 Влияние БА и СД2т на количество рецепторов TLR2 и TLR4 и функциональную активность клеток крови

3.4.1 Показатели для отбора исследуемых групп пациентов

3.4.2 Количество рецепторов TLR2 и TLR4 и функциональная активность клеток крови условно-здоровых доноров различных возрастных групп

3.4.3 Особенности синтеза рецептора TLR2 у пациентов с бронхиальной астмой и/или сахарным диабетом 2 типа

3.4.4 Особенности синтеза рецептора TLR4 у пациентов с БА и/или СД2т

3.5 Изменение индуцированного липополисахаридами различной структуры и липотейхоевой кислотой синтез провоспалительных цитокинов клетками крови при хроническом слабом воспалении

3.5.1 Изменение соотношения субпопуляций моноцитов при слабом хроническом воспалении

3.5.2 Влияние количества рецепторов TLR2 и TLR4 на синтез цитокинов клетками врождённого иммунитета в ответ на ЛТК или ЛПС

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль рецепторов TLR2, TLR4 и растворимых белков LBP, sCD14 и sMD-2 в ответах клеток крови на провоспалительные агенты бактериальной природы в норме и патологии»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень её разработанности

Сепсис и септический шок - опасные патологические состояния, развивающиеся на фоне попадания в организм грамотрицательных и грамположительных бактерий или их компонентов (липополисахаридов и липотейхоевых кислот, соответственно). Несмотря на активное исследование механизмов развития избыточного вопалительного ответа, сопровождающего сепсис, эффективных способов борьбы с ним в настоящее время не обнаружено [Сапичева с соавт., 2015]. Ключевую роль в развитии сепсиса играют Toll-подобные рецепторы 2/1, 2/6 и 4 и липополисахарид-транспортирующие белки, обеспечивающие доставку и распознавание бактериальных лигандов клетками врождённого иммунитета [Ospelt and Gay, 2010; Кабанов с соавт, 2018]. Известно, что структура липополисахаридов - основных компонентов внешней стенки грамотрицательных бактерий - определяет биологическую активность молекулы [Kabanov and Prokhorenko, 2010]. Механическое взаимодействие липополисахаридов с липополисахарид-транспортирующими белков при доставке к рецепторам описано достаточно подробно [Ryu et al., 2017], однако их влияние на интенсивность провоспалительного ответа изучено недостаточно.

Помимо острого воспалительного ответа, активация TLR2 и TLR4 специфическими эндогенными лигандами может лежать в основе формирования слабого хронического воспаления, сопровождающего развитие ряда заболеваний, в т.ч. астму (БА) и сахарный диабет 2 типа (СД2т) [Dasu et al., 2010; Lucas, Maes, 2013; Zakeri and Russo, 2018]. В свою очередь, сформировавшееся хроническое слабое воспаление сопровождается изменением количества и активности TLR на клетках врождённого иммунитета [Огурцова, 2019; Бочкарёва с соавт., 2021], что может влиять на развитие острого воспалительного ответа и противобактериальный иммунитет.

Аллергическая астма часто связана с попаданием в организм белка-аллергена клещей домашней пыли Der p 2, который усиливает ЛПС-

индуцированный синтез провоспалительных цитокинов благодаря загрязнённости попадающих в организм аллергенов липополисахаридами и функциональной гомологии Der p 2 с липополисахарид-транспортирующим белком sMD-2 [Liao et al., 2015; Огурцова, 2019].

Бронхиальная астма и сахарный диабет 2 типа связаны друг с другом развитием хронического слабого воспаления [Wood et al., 2012]. К настоящему времени достаточно полно изучены особенности активации TLR при бронхиальной астме, ожирении или сахарном диабете 2 типа [Огурцова, 2019; Кытикова с соавт., 2020; Бочкарёва с соавт., 2021], однако недостаточно известно об особенностях развития этих заболеваний при их одновременном присутствии. Молекулярные механизмы, лежащие в основе наблюдаемых изменений и особенности острого провоспалительного ответа на фоне слабого хронического воспаления в настоящее время недостаточно изучены [Torres et al., 2021].

Исследование механизмов активации врожденного иммунитета бактериальными агентами, а также роли липополисахарид-транспортирующих белков и Toll-рецепторов в этом процессе является важным для понимания особенностей функциониривания антибактериального иммунитета, сопровождающегося слабым хроническим воспалением.

В связи с изложенным выше были сформулированы цель и задачи исследования.

Цель работы: определение роли рецепторов TLR2, TLR4 и растворимых белков LBP, sCD14 и sMD-2 в ответах клеток крови человека при активации липополисахаридами разной структуры и липотейхоевой кислотой в норме и при хроническом слабом воспалении.

Задачи исследования:

1. Исследовать в цельной крови здоровых доноров и пациентов с хроническим слабым воспалением корреляцию содержания растворимых белков крови (LBP, sCD14 и sMD-2), а также субпопуляций моноцитов и синтеза провоспалительных цитокинов при действии липополисахаридов различной структуры и липотейхоевой кислоты.

2. Определить вклад белка sMD-2 в активацию клеток врождённого иммунитета белком-аллергеном клещей домашней пыли Der p 2 и его комбинацией с липополисахаридами различной структуры.

3. Исследовать влияние хронического слабого воспаления на количество и функциональную активность рецепторов TLR2 и TLR4 на моноцитах и нейтрофилах пациентов с бронхиальной астмой (БА), сахарным диабетом 2 типа (СД2т) или коморбидностью БА+СД2т.

Научная новизна работы.

Установлено, что концентрация ЛПС-транспортирующих белков (LBP, sCD14, sMD-2) в крови не коррелирует с уровнем активации липополисахаридами или липотейхоевой кислотой клеток врождённого иммунитета здоровых доноров и пациентов с бронхиальной астмой, сахарным диабетом 2 типа или коморбидностью этих заболеваний. Обнаружено, что при слабом хроническом воспалении, сопровождающем сахарный диабет 2 типа, усиливается синтез провоспалительных цитокинов при действии липотейхоевой кислоты на клетки цельной крови пациентов. Показано усиление активирующего влияния липополисахаридов в комбинации с экстрактом аллергенов клещей домашней пыли Dermatophagoides pteronyssinus на синтез клетками врождённого иммунитета здоровых доноров провоспалительного TNF-a. Впервые обнаружен и предложен потенциально возможный механизм такого влияния, обусловленный дополнительным синтезом белка sMD-2 в ответ на белок-аллерген Der p 2.

Теоретическая и практическая значимость работы.

Полученные результаты позволяют расширить понимание механизма развития индуцированного липополисахаридами и липотейхоевой кислотой провоспалительного ответа и уточнить роль липополисахарид-транспортирующих белков LBP, sCD14 и sMD-2 в этом процессе. Помимо этого, полученные результаты указывают на значительный вклад белка sMD-2 в формирование аллергического воспаления, индуцированного липополисахаридами, содержащимися в клещах домашней пыли. Понимание механизмов активации клеток крови аллергенами и эндотоксинами необходимо для дальнейшей

разработки новых подходов к купированию воспалительного процесса, запускаемого этими провоспалительными агентами.

Обнаруженное влияние хронического воспаления на количество и функциональную активность TLR2 и TLR4 рецепторов может позволить предложить таргетное лечение при бактериальных инфекциях.

Методология и методы исследования

Работа выполнена в рамках методологии клеточной биологии и биохимии. Она включает в себя такие методы как проточная цитометрия, спектрофотометрия, иммуноферментный анализ. Статистическая обработка данных проводилась с помощью U-теста Манна-Уитни, критерия знаков Вилкоксона и рангового критерия Пирсона с использованием программного обеспечения Sigma plot и StatSoft Statistica. Полученные в ходе работы результаты сопоставляются с данными, представленными в научной литературе, и соответственно интерпретируются.

Основные научные достижения, выносимые на защиту.

1. Корреляция между субпопуляциями моноцитов, концентрацией растворимых белков LBP, sCB14 и sMD-2, а также количеством TLR2 и TLR4 на моноцитах и нейтрофилах и синтезом провоспалительных цитокинов клетками врождённого иммунитета здоровых доноров, индуцированном липотейхоевой кислотой или липополисахаридами различной структуры не обнаружена.

2. Аллерген Der p 2 самостоятельно не активирует клетки врождённого иммунитета к синтезу провоспалительных цитокинов, но усиливает синтез цитокина TNF-a в ответ на липополисахариды различной структуры. Модулирующая активность белка-аллергена связана с его способностью усиливать синтез липополисахарид-связывающего белка sMD-2.

3. Наличие сахарного диабета 2 типа в анамнезе сопровождается увеличением содержания воспалительных моноцитов в общем количестве этих клеток, количества TLR2 на поверхности клеток крови и повышением концентрации LBP в крови, что сопровождается усилением индуцированного липотейхоевой кислотой синтеза TNF-a.

Степень достоверности и апробация результатов.

Полученные результаты, заключение и выводы, сформулированные в диссертации, отвечают целям и задачам работы. Достоверность результатов исследований подтверждена применением современных методов, адекватных подходов, компьютерных программ для обработки данных и использованием сертифицированного оборудования для измерения.

Основные положения диссертационной работы представлены и обсуждены на конференции молодых ученых «Биология - наука 21 века» (Пущино, 2017, 2023), международной конференции «Рецепторы и внутриклеточная сигнализация» (Пущино, 2021), Международном университетском научном форуме «Science. Education. Practice» (Торонто, 2021).

Личный вклад автора

Все результаты, представленные в диссертации, получены автором лично, либо при его непосредственном участии. Автору диссертационной работы принадлежит ключевая роль в определении задач для достижения цели, анализе литературных данных, самостоятельном планировании и выполнении экспериментов, обработке и интерпретации результатов, представлении и апробации результатов исследований на научных конференциях, подготовке научных публикаций по результатам исследований.

Публикации по результатам исследований:

По материалам диссертации опубликовано 6 работ, из них 4 научные статьи, индексированные в библиографической базе Scopus, в том числе, 1 статья, опубликованная в журнале квартиля Q1, 6 опубликованных тезисов докладов, представленных на всероссийских и международных конференциях, 1 патент и 1 методические рекомендации.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль моноцитов в хроническом и остром воспалении

Важным звеном иммунитета являются моноциты, участвующие как в поддержании хронического слабого воспаления [Mattos et al., 2016], так и в развитии провоспалительного ответа на грамотрицательные лиганды [Madalma et al., 2018]. Моноциты представляют собой гетерогенный тип клеток, состоящий из фенотипически и функционально различных субпопуляций (подгрупп), играющих специфическую роль в контроле, развитии и эскалации иммунного ответа. Метод проточной цитометрии позволяет разделить моноциты по количеству поверхностных рецепторов CD14 и CD16 на три подгруппы: классические, промежуточные и неклассические [Ziegler-Heitbrock et al., 2010]. Различия в процентном соотношении субпопуляций моноцитов человека в крови можно наблюдать у пациентов с разнообразными патологическими состояниями, такими как инфекции, сердечно-сосудистые и воспалительные заболевания, рак и аутоиммунные заболевания.

Моноциты и нейтрофилы играют важную роль в воспалении и врожденном иммунном ответе на бактериальную инфекцию. Эти клетки активируются, когда Toll-подобные рецепторы (TLR), локализованные на клеточной поверхности, распознают бактериальные компоненты, включая липополисахарид (ЛПС) и липотейхоевую кислоту (ЛТК). Связывание компонентов клеточной стенки бактерий с TLR на моноцитах (преимущественно неклассической и промежуточной субпопуляций) приводит к синтезу и высвобождению провоспалительных цитокинов и хемокинов, включая фактор некроза опухоли (TNF-a), интерлейкины IL-1ß и IL-8, а также противовоспалительные цитокины, такие как IL-10 [Beutler et al., 2003], которые активируют врожденный и адаптивный иммунные ответы. В нейтрофилах активация TLR приводит к изменениям синтеза молекул адгезии, продукции IL-8, усилению фагоцитоза и индукции респираторного взрыва, связанного с повышенным уровнем активных форм кислорода [Hadley et al., 2007].

1.2 Эндотоксины грамотрицательных бактерий: открытие, структура, функции

Центральная роль в индукции воспаления при грамотрицательной бактериальной инфекции отводится липополисахаридам (ЛПС) - основному агонисту TLR4 [Kagan, 2017]. ЛПС представляет собой макромолекулярный гликолипид, состоящий из бифосфорилированного липида А и гидрофильного полисахарида. Полисахаридная часть состоит из олигосахарида и дистальных цепей полисахарида (О-антигена) [Ain et al., 2020]. При связывании с TLR4 ЛПС индуцирует секрецию клетками крови провоспалительных цитокинов, оксида азота и эйкозаноидов. Присутствие ЛПС в крови или интерстициальной жидкости может привести к эндотоксимии, что может вызвать септический шок при усиленном иммунном ответе. В последнее время показано, что небольшие дозы попадающего в кровь ЛПС коррелируют с аутоиммунными заболеваниями и аллергией, тогда как высокие концентрации ЛПС в крови приводят к метаболическому синдрому. Это увеличивает риск серьезных заболеваний, таких как диабет 2 типа, болезни сердца и печени [Farhana and Khan, 2021].

Липополисахарид - термостойкая амфифильная молекула массой до 20 кДа, состоящая из трех ковалентно связанных частей (Рисунок 1):

1. липофильный липид А,

2. гидрофильное олигосахаридное ядро,

3. разветвлённый полисахарид (О-антиген).

Рисунок 1. Структура липополисахарида (по Mazgaeen and Gurung, 2020)

Липидная часть молекулы закрепляет ЛПС во внешней мембране грамотрицательных бактерий, а жирные ацильные цепи липида A скрыты от внешней водной среды. Связанный O-антиген выступает наружу от поверхности мембраны. В зависимости от наличия и длины О-антигена выделяют различные хемотипы липополисахаридов: от S-хемотипа с полной полисахаридной цепью до Re-хемотипа, у которого липид А связан только с двумя остатками KDO [Гюлазян с соавт., 2014]. Было установлено, что попадание значительного количества ЛПС в организм человека может привести к т.н. «септическому шоку», ведущему к развитию полиорганной недостаточности и смерти [Cohen, 2002; Tsujimoto et al., 2008].

Иммуногенный потенциал ЛПС варьирует у разных видов бактерий и в основном определяется структурой липида А [Dixon and Darveau, 2005]. Гексаацилированный липид А из Escherichia coli является одним из наиболее высокотоксичных (то есть провоспалительных) структур [Homma et al., 1985]. Вариации этой гексаацилированной структуры являются общими и могут оказывать значительное влияние на распознавание липополисахарида клетками врожденного иммунитета и на последующие иммунные ответы. Количество

жирных ацильных цепей и наличие в них двойных связей регулируют биологическую активность ЛПС: наиболее токсичными являются гексаацилированные липополисахариды, пента- или гептаацилированные молекулы ЛПС приблизительно в 100 раз менее активны, а тетраацильные аналоги неактивны [Molinaro et al., 2015; Kabanov and Prokhorenko, 2010]. Гексаацилированный ЛПС также необходим для обнаружения бактериальной инвазии цитоплазматическими каспазами 4, 5 и 11 [Kayagaki et al., 2013; Hagar et al., 2013]. Понимание сложного процесса распознавания ЛПС иммунной системой хозяина может дать важное представление о природе и интенсивности воспалительных реакций.

1.3 Механизм распознавания и ответа на эндотоксин

Сам ЛПС не является токсичным для млекопитающих. Он функционирует как сигнальная молекула, «предупреждая» организм на самой ранней стадии о возможности инвазивной грамотрицательной бактериальной инфекции [Akira and Takeda, 2004; Beutler et al., 2003; Cristofaro and Opal, 2006]. В частности, последовательное взаимодействие агрегатов ЛПС с белками крови LBP и альбумином с последующим взаимодействием мономеров ЛПС с CD14, MD-2 и TLR4 млекопитающих способствует мощным иммунным ответам на пикомолярные концентрации эндотоксина [Gioannini et al., 2007]. Мономерный ЛПС, связавшись с комплексом MD-2/TLR4 на поверхности эффекторных клеток, запускает врожденные иммунные реакции организма, характеризующиеся воспалением, продукцией цитокинов и возможным уничтожением бактерий иммунными клетками и системой комплемента. Однако тяжелая бактериальная инфекция и внезапное увеличение концентрации ЛПС в крови могут вызвать неконтролируемый синтез провоспалительных цитокинов и неадекватное усиление иммунного ответа, что приводит к повреждению тканей и отказу органов - так называемому сепсису или септическому шоку [Beutler and Rietschel, 2003]. Как следствие, организму необходимо иметь два противоположно

действующих механизма: механизм, распознающий низкие концентрации ЛПС (для быстрой мобилизации иммунитета к небольшому количеству инвазивных грамотрицательных бактерий), и невоспалительный иммуноэффекторный механизм, который изолирует, блокирует и детоксифицирует ЛПС для предотвращения избыточной или длительной активации иммунитета.

1.4 Транспорт мономеров эндотоксина и их обнаружение клетками врождённого иммунитета

Прежде чем иммунитет человека мобилизуется против грамотрицательных бактерий, клетки организма должны определить их наличие в крови. Этому способствует высокочувствительное обнаружение эндотоксина клетками врождённого иммунного ответа, участвующими в упорядоченном, согласованном взаимодействии между растворимыми и мембранносвязанными белками крови с внутренним кором и липидом A липополисахарида (эндотоксина, ЛПС) [Gioannini et al., 2007]. Обнаружение попавшего в кровь ЛПС является первостепенной задачей иммунитета, поскольку липид A обычно скрыт во внешнем монослое грамотрицательных бактерий. Таким образом, у человека сформировались механизмы для разрушения эндотоксин-содержащих агрегатов, извлечения мономера ЛПС и его доставки к активируемому комплексу MD-2/TLR4.

ЛПС высвобождается из бактериальной клеточной стенки после её разрушения и активно секретируется в крови в форме везикулы наружной мембраны бактерий [Beveridge, 1999]. Активация комплекса MD-2/TLR4 эндотоксином требует связывания отдельной молекулы ЛПС (мономера ЛПС) с MD-2/TLR4 и последующей димеризации тройного комплекса ЛПС/MD-2/TLR4 [Park et al., 2009]. Комплекс MD-2/TLR4 имеет ограниченное сродство к агрегатам ЛПС и не способен извлекать из агрегатов мономеры ЛПС [Gioannini et al., 2004]. Для этого необходимы вспомогательные белки, извлекающие мономеры ЛПС из внешней мембраны грамотрицательных бактерий или из агрегатов ЛПС и доставляющие их к MD-2/TLR4 [Ryu et al., 2017] (Рисунок 2).

TLR4/MD2 Signaling activation

Рисунок 2. Схема переноса ЛПС от бактериальной мембраны/везикулы к рецепторному комплексу MD-2/TLR4 [Ryu et al., 2017].

Механизм распознавания попавшего в кровь ЛПС включает упорядоченные взаимодействия эндотоксина с липополисахарид-связывающим белком (LBP), с растворимым CD14 (sCD14) или мембранносвязанным CD14 (mCD14) и внеклеточным растворимым MD-2 (sMD-2) или c комплексом MD-2/TLR4 [Ryu, 2017]. LBP связывается с высокой аффинностью с богатыми эндотоксинами структурами (например, мембраной грамотрицательных бактерии или агрегатами эндотоксина), и, вероятно, изменяет локализацию липополисахарида [Gioannini et al., 2007]. Это увеличивает доступность скрытой в норме гидрофобной липидной части эндотоксина, облегчая экстракцию отдельных молекул ЛПС растворимым или мембраносвязанным CD14 [Gioannini and Weiss, 2007]. LBP передаёт мономер ЛПС на sCD14, который транспортирует его к sMD-2 или к MD-2/TLR4, что приводит к активации клеток крови [Ryu et al., 2017].

Если ЛПС является сильным агонистом MD-2/TLR4 (например, область липида A содержит гексаацилированный бифосфорилированный диглюкозамин), то всего 25 комплексов ЛПС/MD-2/TLR4 на клетку могут вызывать обнаруживаемые провоспалительные реакции, что связано с эффективной димеризацией этих тройных комплексов [Teghanemt et al., 2013]. Менее активные тройные комплексы, содержащие отличающиеся структурные варианты ЛПС или MD-2 (или обоих), требуют более высоких концентраций комплексов на поверхности для индукции TLR4-зависимой активации клеток, что подразумевает менее эффективную димеризацию тройного комплекса [Gioannini et al., 2014].

У каскада передачи ЛПС от LBP ^ CD14 ^ MD2/TLR4 есть три преимущества.

- Во-первых, такая последовательность событий позволяет осуществляться димеризации TLR4 при пикомолярных концентрациях ЛПС, тогда как удаление любого белка из описанной выше цепочки передачи ЛПС делает необходимым более высокие концентрации эндотоксина для активации TLR.

- Во-вторых, подсчитано, что из одной грамотрицательной бактерии могут быть извлечены тысячи молекул ЛПС. Такое количество комплексов ЛПС/CDM может стимулировать димеры MD-2/TLR4 на макрофагах [Gioannini et al., 2007]. Таким образом, молекулы ЛПС, выделенные из одной бактерии, могут масштабировать количество макрофагов, участвующих в развитии воспалительного ответа.

- Третье преимущество каскада переноса ЛПС связано с существованием растворимой популяции CD14 [Moreno et al., 2004]. Некоторые типы клеток, например эндотелиальные, синтезируют TLR4 и MD2, но не синтезируют CD14. Эти клетки слабо реагируют на ЛПС по сравнению с иммунными клетками. Растворимый CD14, присутствующий в кровотоке, может доставлять ЛПС к MD-2/TLR4 эндотелия, повышая чувствительность этих клеток к бактериальным инфекциям [Mazgaeen and Gurung, 2020]. В целом, наличие каскада переноса ЛПС, опосредованного растворимыми и мембраносвязанными рецепторами,

позволяет различным иммунным клеткам регулировать активность противобактериального иммунитета. Такая гибкость в активности может позволить индуцировать иммунные ответы в зависимости от ситуации.

1.5 Растворимые ЛПС-транспортирующие белки и их роль в активации иммунного ответа

1.5.1 Липополисахарид-связывающий белок (LBP)

LBP представляет собой белок плазмы с молекулярной массой около 60 кДа. Он в основном синтезируется гепатоцитами, а также эпителиальными и мышечными клетками [Zweigner et al., 2006]. В норме LBP обнаруживается в относительно низких концентрациях в крови (5-15 мкг/мл) и в тканевой жидкости [Gonzalez-Quintela et al., 2013]. LBP является белком острой фазы, поэтому при попадании ЛПС в кровь концентрация LBP значительно увеличивается и максимально усиливает ответ организма на инфекцию даже при низких концентрациях эндотоксина [Stasi et al., 2016]. При развитии септического состояния концентрация LBP в крови может достигать 200 мкг/мл [Augsburger et al., 2013]. Уровень LBP в крови значительно увеличивается в ответ на грамотрицательную или грибковую инфекцию, но не изменяется при вирусной инфекции, что делает возможным использование этого белка наряду с другими белками в качестве биомаркера сепсиса [Chen et al., 2016]. При эндотоксемии усиливается взаимодействие комплексов LBP/ЛПС с лейкоцитами крови за счет повышения количества рецепторов к ЛПС на поверхности клеток, а также числа циркулирующих моноцитов и нейтрофилов [Кабанов Д.С. с соавт., 2018].

Структура LBP

Среди белков острой фазы выделяется бактерицидный белок, повышающий проницаемость мембран (BPI), который является ближайшим гомологом LBP [Bingle and Craven, 2004]. BPI также может связывать ЛПС и обнаруживается в основном в гранулах нейтрофилов [Canny and Levy, 2008]. LBP структурно очень похож на BPI. Эти белки имеют ~ 50% идентичности аминокислотной

последовательности и похожую на бумеранг третичную структуру [Eckert et al., 2013] (Рисунок 3).

Рисунок 3. Общая структура LBP мыши.

N-концевой, центральный и C-концевой домены схематично нарисованы синим, голубым и зеленым цветом, соответственно. Молекулы фосфолипидов показаны красным. ß-нити пронумерованы (модифицировано по Eckert et al., 2013).

Подобно BPI, LBP содержит N-концевой катионный домен, который обеспечивает связывание эндотоксина, и C-концевой домен, который необходим для передачи эндотоксина на другие белки [Gutsmann et al., 2001]. Однако, в отличие от BPI, LBP имеет более слабое сродство к эндотоксину, вероятно, из-за его более низкого общего заряда, в том числе в области N-концевого домена. Эта особенность белка обусловливает его эндотоксин-транспортную активность. Кроме того, в LBP наблюдается значительное смещение C-концевого домена относительно N-концевого домена, что создает широкую отрицательно заряженную бороздку между C-концевым и центральным доменами, которая отсутствует в BPI [Eckert et al., 2013]. Предполагается, что эта бороздка необходима для связывания с CD 14 и транспорта ЛПС, однако прямых доказательств её функции пока нет.

Тем не менее, было показано что мутация, затрагивающая бороздку, нарушает функцию связывания лиганда и индукцию цитокинов. У людей с такой мутацией понижена эффективность ответа на бактериальные инфекции и тяжелее протекает воспаление [Eckert et al., 2013].

Участие LBP в активации клеток эндотоксинами

А

Основная функция LBP - высвобождение мономеров ЛПС из агрегатов и их передача на другие белки или липопротеины. LBP выполняет двойную роль при активации клеток крови липополисахаридами [Gutsmann et al., 2001].

При низкой концентрации эндотоксина в крови, LBP облегчает его обнаружение и активацию иммунных клеток. При ранней стадии грамотрицательной инфекции LBP связывается с агрегатами ЛПС и изменяет их заряд посредством взаимодействия с отрицательными зарядами основы липида А и внутреннего кора эндотоксина. В результате такого воздействия мономеры ЛПС становятся доступными для извлечения из агрегатов. Эксперименты по мутагенезу LBP и анализ функциональной конкуренции с синтетическими пептидами показали, что во взаимодействие с ЛПС вовлечены основные аминокислотные остатки N-концевого домена LBP (Arg119, Lys120 и Lys124) [Lamping et al., 1996]. N-концевой участок LBP связывается в продольном направлении с ЛПС-мицеллой и белок формирует высокоаффинный комплекс с ЛПС (Kd =~109 M). Затем при участии С-концевого домена LBP мономер ЛПС передаётся на sCD14. Одна молекула LBP, связанная с ЛПС-мицеллой, катализирует транспорт нескольких мономеров ЛПС к CD14 (Рисунок 4) [Ryu et al., 2017].

CD14

ш

C-Domain

Рисунок 4. Модель взаимодействия между комплексом мицелл LBP-Ra/ЛПС

и CD14.

Оранжевый прямоугольник на верхней панели представлен внизу крупным планом (модифицировано по Ryu et al., 2017).

При более высоких концентрациях ЛПС LBP может ингибировать иммунный ответ на эндотоксины аналогично BPI. Повышение концентрации LBP в крови до 50-100 мкг/мл вызывает подавление LBP-опосредованной доставки S-ЛПС E. coli O111:B4 к мембранам моноцитов. Ингибирование доставки ЛПС к клеткам при повышении концентрации LBP объясняется формированием трехкомпонентного комплекса LBP/ЛПС/LBP, в котором LBP стерически препятствует взаимодействию этого комплекса с mCD14 [Hamann et al., 2005]. Сравнение пороговых концентраций LBP, необходимых для подавления активации разных типов клеток эндотоксинами, показывает, что первыми "выключаются" нейтрофилы и, в последнюю очередь, моноциты [Lichte et al., 2013; Кабанов с соавт., 2018]. Такой механизм активируется во время острой фазы воспалительного ответа при увеличении концентрации LBP, что приводит к накоплению LBP на мицеллах эндотоксинов. В этих условиях LBP обеспечивает нейтрализацию агрегатов эндотоксинов путём переноса ЛПС на липопротеины высокой или низкой плотности сыворотки, что приводит к выведению ЛПС из кровотока. Кроме того, показано, что LBP высокой плотности (hd-LBP) отделяет от mCD14 связанный с клетками ЛПС, ингибируя тем самым вызванную эндотоксинами клеточную активацию и подавляя перенос ЛПС от sCD14 к растворимым формам MD-2 [Hamann et al., 2005]. Это явление предполагает эволюционно консервативный механизм ограничения степени воспаления во время грамотрицательной инфекции. В начале воспалительного ответа, концентрация LBP значительно меньше, чем CD14, что способствует экстракции и доставке мономера эндотоксина к CD14, а затем к MD-2/TLR4 [Kitchens et al., 2001]. Во время острой фазы концентрация LBP увеличивается, что приводит к невоспалительному удалению агрегатов и мономеров эндотоксина из крови.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Радзюкевич Ярослав Вадимович, 2024 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ain Q., Batool M., Choi S. TLR4-targeting therapeutics: structural basis

and computer-aided drug discovery approaches //Molecules. - 2020. - V. 25 (3). - P. 627.

2. Akira S., Takeda K. Toll-like receptor signalling //Nature reviews immunology. - 2004. - V. 4 (7). - P. 499-511.

3. Al-Kindi S., Buzkova P., Shitole S., Reiner A., Garg P., Gottdiener J., Psaty B., Kizer J. Soluble CD14 and risk of heart failure and its subtypes in older adults //Journal of cardiac failure. - 2020. - V. 26 (5). - P. 410-419.

4. Al-Shukaili A., Al-Ghafri S., Al-Marhoobi S., Al-Abri S., Al-Lawati J., Al-Maskari M. Analysis of inflammatory mediators in type 2 diabetes patients //International journal of endocrinology. - 2013. - V. 2013.

5. Antal-Szalmas P., Poppelier M., Sümegi A., Van der Brüggen T., Verhoef J., Van Kessel K., Van Strijp J. Spare CD14 molecules on human monocytes enhance the sensitivity for low LPS concentrations // Immunology Letters. - 2004. - V. 93. -P.11-15.

6. Augsburger M., Iglesias K., Bardy D., Mangin P., Palmiere C. Diagnostic value of lipopolysaccharide-binding protein and procalcitonin for sepsis diagnosis in forensic pathology //International journal of legal medicine. - 2013. - V. 127. - P. 427435.

7. Avan A., Tavakoly S., Ghayour-Mobarhan M., Rahimi H., Tajfard M., Ferns G. Serum C-reactive protein in the prediction of cardiovascular diseases: Overview of the latest clinical studies and public health practice //Journal of cellular physiology. - 2018. - V. 233 (11). - P. 8508-8525.

8. Beldi G., Khosravi M., Abdelgawad M., Salomon B., Uzan G., Haouas H., Naserian S. TNFa/TNFR2 signaling pathway: an active immune checkpoint for mesenchymal stem cell immunoregulatory function //Stem cell research & therapy. -2020. - V. 11. - P. 1-15.

9. Bester J., Pretorius E. Effects of IL-1ß, IL-6 and IL-8 on erythrocytes, platelets and clot viscoelasticity //Scientific reports. - 2016. - V. 6 (1). - P. 32188.

10. Beutler B., Hoebe K., Ulevitch J. How we detect microbes and respond to them: the Toll-like receptors and their transducers //Journal of Leucocyte Biology. -2003. - V. 74 (4). - P. 479-485.

11. Beutler B., Rietschel E. T. Innate immune sensing and its roots: the story of endotoxin //Nature reviews immunology. - 2003. - V. 3 (2). - P. 169-176.

12. Beveridge T. J. Structures of gram-negative cell walls and their derived membrane vesicles //Journal of bacteriology. - 1999. - V. 181 (16). - P. 4725-4733.

13. Bingle C. D., Craven C. J. Meet the relatives: a family of BPI-and LBP-related proteins //Trends in immunology. - 2004. - V. 25 (2). - P. 53-55.

14. Botha-Scheepers S., Watt I., Slagboom E., de Craen A., Meulenbelt I., Rosendaal F., Breedveld F., Huizinga T., Kloppenburg M. Innate production of tumour necrosis factor a and interleukin 10 is associated with radiological progression of knee osteoarthritis //Annals of the rheumatic diseases. - 2008. - V. 67 (8). - P. 1165-1169.

15. Bryant C., Gay N., Heymans S., Sacre S., Schaefer L., Midwood K. Advances in Toll-like receptor biology: Modes of activation by diverse stimuli //Critical reviews in biochemistry and molecular biology. - 2015. - V. 50 (5). - P. 359-379.

16. Buchheister S., Buettner M., Basic M., Noack A., Breves G., Buchen B., Keubler L., Becker C., Bleich A. CD14 plays a protective role in experimental inflammatory bowel disease by enhancing intestinal barrier function //The American journal of pathology. - 2017. - V. 187 (5). - P. 1106-1120.

17. Canny G., Levy O. Bactericidal/permeability-increasing protein (BPI) and BPI homologs at mucosal sites //Trends in immunology. - 2008. - V. 29 (11). - P. 541547.

18. Chen K., Chaou C., Jiang J., Yu H., Meng H., Tang W., Wu C. Diagnostic accuracy of lipopolysaccharide-binding protein as biomarker for sepsis in adult patients: a systematic review and meta-analysis //PLoS One. - 2016. - V. 11 (4). - P. e0153188.

19. Chen L., Fu W., Zheng L., Wang Y., Liang G. Recent progress in the discovery of myeloid differentiation 2 (MD2) modulators for inflammatory diseases //Drug Discovery Today. - 2018. - V. 23 (6). - P. 1187-1202.

20. Chiou Y. L., Lin C. Y. Der p2 activates airway smooth muscle cells in a TLR2/MyD88-dependent manner to induce an inflammatory response //Journal of cellular physiology. - 2009. - V. 220 (2). - P. 311-318.

21. Ciesielska A., Matyjek M., Kwiatkowska K. TLR4 and CD14 trafficking and its influence on LPS-induced pro-inflammatory signaling //Cellular and molecular life sciences. - 2021. - V. 78. - P. 1233-1261.

22. Cleveland M., Gorham J., Murphy T., Tuomanen E., Murphy K. Lipoteichoic acid preparations of gram-positive bacteria induce interleukin-12 through a CD14-dependent pathway //Infection and Immunity. - 1996. - V. 64 (6). - P. 19061912

23. Cohen J. The immunopathogenesis of sepsis //Nature. - 2002. - V. 420 (6917). - P. 885-891.

24. Cox, A., Zhang P., Bowden D., Devereaux B., Davoren P., Cripps A., West, N. Increased intestinal permeability as a risk factor for type 2 diabetes //Diabetes & metabolism. - 2017. - V. 43 (2). - P. 163-166.

25. Crespo-Lessmann A., Mateus E., Vidal S., Ramos-Barbón D., Torrejón M., Giner J., Soto L., Juárez C., Plaza V. Expression of toll-like receptors 2 and 4 in subjects with asthma by total serum IgE level //Respiratory Research. - 2016. - V. 17. -P. 1-8.

26. Cristofaro P., Opal S. M. Role of Toll-like receptors in infection and immunity: clinical implications //Drugs. - 2006. - V. 66. - P. 15-29.

27. Dasu M., Devaraj S., Park S., Jialal I. Increased toll-like receptor (TLR) activation and TLR ligands in recently diagnosed type 2 diabetic subjects //Diabetes care. - 2010. - V. 33 (4). - P. 861-868.

28. Derewenda U., Li J., Derewenda Z., Dauter Z., Mueller G., Rule G., Benjamin D. The crystal structure of a major dust mite allergen Der p 2, and its biological implications //Journal of molecular biology. - 2002. - V. 318 (1). - P. 189197.

29. Di Gioia M., Zanoni I. Toll-like receptor co-receptors as master regulators of the immune response //Molecular immunology. - 2015. - V. 63 (2). - P. 143-152.

30. Ding P. H., Jin L. J. The role of lipopolysaccharide-binding protein in innate immunity: a revisit and its relevance to oral/periodontal health //Journal of periodontal research. - 2014. - V. 49 (1). - P. 1-9.

31. Dixon D. R., Darveau R. P. Lipopolysaccharide heterogeneity: innate host responses to bacterial modification of lipid a structure //Journal of dental research. -2005. - V. 84 (7). - P. 584-595.

32. Eckert J., Kim Y., Kim J., Gurtler K., Oh D., Sur S., Lundvall L., Hamann L., van der Ploeg A., Pickkers P., Giamarellos-Bourboulis E., Kubarenko A., Weber A., Kabesch M., Kumpf O., An H., Lee J., Schumann R. The crystal structure of lipopolysaccharide binding protein reveals the location of a frequent mutation that impairs innate immunity //Immunity. - 2013. - V. 39 (4). - P. 647-660.

33. Ehrlich S., Quesenberry J., Van Den Eeden S, Shan J., Ferrara A. Patients diagnosed with diabetes are at increased risk for asthma, chronic obstructive pulmonary disease, pulmonary fibrosis, and pneumonia but not lung cancer //Diabetes care. - 2010. - V. 33 (1). - P. 55-60.

34. Farhana A., Khan Y. S. Biochemistry, lipopolysaccharide //StatPearls [Internet]. - StatPearls Publishing, 2022.

35. Farhat K., Riekenberg S., Heine H., Debarry J., Lang R., Mages J., Buwitt-Beckmann U., Roschmann K., Jung G., Wiesmuller K., Ulmer A. Heterodimerization of TLR2 with TLR1 or TLR6 expands the ligand spectrum but does not lead to differential signaling //Journal of Leucocyte Biology. - 2008. - V. 83 (3). - P. 692-701.

36. Fawkner-Corbett D., Simmons A., Parikh K. Microbiome, pattern recognition receptor function in health and inflammation //Best practice & research Clinical gastroenterology. - 2017. - V. 31 (6). - P. 683-691.

37. Flo T. H., Aderem A. Pathogen recognition by Toll-like receptors //Neurolmmune Biology. - 2005. - V. 5. - P. 167-182.

38. Francisco C., Catai A., Moura-Tonello S., ArrudaL., Lopes S., Benze B., Del Vale D., Malmegrim K., Leal M. Cytokine profile and lymphocyte subsets in type 2 diabetes //Brazilian Journal of Medical and Biological Research. - 2016. - V. 49.

39. Gao P., Gibson P., Baines K., Yang I., Upham J., Reynolds P., Hodge S., James A., Jenkins C., Peters M., Zhang J., Simpson J. Anti-inflammatory deficiencies in neutrophilic asthma: reduced galectin-3 and IL-1RA/IL-1ß //Respiratory Research. -2015. -16 (1).

40. Gioannini T. L., Weiss J. P. Regulation of interactions of Gram-negative bacterial endotoxins with mammalian cells //Immunologic research. - 2007. - V. 39. -P. 249-260.

41. Gioannini T., Teghanemt A., Zhang D., Coussens N., Dockstader W., Ramaswamy S., Weiss J. Isolation of an endotoxin-MD-2 complex that produces Tolllike receptor 4-dependent cell activation at picomolar concentrations //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2004. - V. 101 (12). - P. 4186-4191.

42. Gioannini T., Teghanemt A., Zhang D., Esparza G., Yu L., Weiss J. Purified monomeric ligand. MD-2 complexes reveal molecular and structural requirements for activation and antagonism of TLR4 by Gram-negative bacterial endotoxins //Immunologic research. - 2014. - V. 59. - P. 3-11.

43. Gioannini T., Teghanemt A., Zhang D., Prohinar P., Levis E., Munford R., Weiss J. Endotoxin-binding proteins modulate the susceptibility of bacterial endotoxin to deacylation by acyloxyacyl hydrolase //Journal of Biological Chemistry. - 2007. - V. 282 (11). - P. 7877-7884.

44. Gonzalez-Quintela A., Alonso M., Campos J., Vizcaino L., Loidi L., Gude F. Determinants of serum concentrations of lipopolysaccharide-binding protein (LBP) in the adult population: the role of obesity //PloS one. - 2013. - V. 8 (1). - P. e54600.

45. Gupta S., Maratha A., Siednienko J., Natarajan A., Gajanayake T., Hoashi S., Miggin, S. Analysis of inflammatory cytokine and TLR expression levels in Type 2 Diabetes with complications //Scientific reports. - 2017. - V. 7 (1). - P. 1-10.

46. Gutsmann T., Müller M., Carroll S., MacKenzie R., Wiese A., Seydel U. Dual role of lipopolysaccharide (LPS)-binding protein in neutralization of LPS and enhancement of LPS-induced activation of mononuclear cells //Infection and immunity. - 2001. - V. 69 (11). - P. 6942-6950.

47. Ha E., Kim J., Yon D., Lee S., Kim M., Lee K., Sung M., Jee H., Shin Y., Han M. Association of serum lipopolysaccharide-binding protein level with sensitization to food allergens in children //Scientific Reports. - 2021. - V. 11 (1). - P. 2143.

48. Hadley J., Wang J., Michaels L., Dempsey C., Foster J., Thiemermann C., Hinds J. Alterations in inflammatory capacity and TLR expression on monocytes and neutrophils after cardiopulmonary bypass //Shock. - 2007. - V. 27 (5). - P. 466-473.

49. Hagar J., Powell D., Aachoui Y., Ernst R., Miao E.. Cytoplasmic LPS activates caspase-11: implications in TLR4-independent endotoxic shock //Science. -2013. - V. 341 (6151). - P. 1250-1253.

50. Hajishengallis G., Lambris J. D. More than complementing Tolls: complement-Toll-like receptor synergy and crosstalk in innate immunity and inflammation //Immunological reviews. - 2016. - V. 274 (1). - P. 233-244.

51. Hamann L., Alexander C., Stamme C., Zahringer U., SchumannR. Acute-phase concentrations of lipopolysaccharide (LPS)-binding protein inhibit innate immune cell activation by different LPS chemotypes via different mechanisms //Infection and immunity. - 2005. - V. 73 (1). - P. 193-200.

52. Hammad H., Chieppa M., Perros F., Willart M., Germain R., Lambrecht B. House dust mite allergen induces asthma via Toll-like receptor 4 triggering of airway structural cells //Nature medicine. - 2009. - V. 15 (4). - P. 410-416

53. Han J., Kim H., Lee D., Hong S., Park K., Jeon Y., Kim D., Cheong H., Kim H. Structure-based rational design of a Toll-like receptor 4 (TLR4) decoy receptor with high binding affinity for a target protein //PLoS One. - 2012. - V. 7 (2). - P. e30929.

54. Hasannejad H., Takahashi R., Kimishima M., Hayakawa K., Shiohara T. Selective impairment of Toll-like receptor 2-mediated proinflammatory cytokine production by monocytes from patients with atopic dermatitis //Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 2007. - V. 120 (1). - P. 69-75.

55. Hayes M. P., Freeman S. L., Donnelly R. P. IFN-y priming of monocytes enhances LPS-induced TNF production by augmenting both transcription and mRNA stability //Cytokine. - 1995. - V. 7 (5). - P. 427-435.

56. Haziot A., Ferrero E., Ko'ntgen F., Hijiya N., Yamamoto S., Silver J., Stewart C., Goyert S. Resistance to endotoxin shock and reduced dissemination of gram-negative bacteria in CD14-deficient mice //Immunity. - 1996. - V. 4 (4). - P. 407414.

57. Herre J., Gronlund H., Brooks H., Hopkins L., Waggoner L., Murton B., Gangloff M., Opaleye O., Chilvers E., Fitzgerald K., Gay N., Monie T., Bryant C. Allergens as immunomodulatory proteins: the cat dander protein Fel d 1 enhances TLR activation by lipid ligands //The Journal of Immunology. - 2013. - V. 191 (4). - P. 1529-1535.

58. Homma J., Matsuura M., Kanegasaki S., Kawakubo Y., Kojima Y., Shibukawa N., Kumazawa Y., Yamamoto A., Tanamoto K., Yasuda T., Imoto M., Yoshimura H., Kusumoto S., Shiba T. Structural requirements of lipid A responsible for the functions: a study with chemically synthesized lipid A and its analogues //The Journal of Biochemistry. - 1985. - V. 98 (2). - P. 395-406.

59. Hosoki K., Boldogh I., Aguilera-Aguirre L., Sun Q., Itazawa T., Hazra T., Brasier A., Kurosky A., Sur S. Myeloid differentiation protein 2 facilitates pollen-and cat dander-induced innate and allergic airway inflammation //Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 2016. - V. 137 (5). - P. 1506-1513. e2.

60. Huang X., Feng Y., Xiong G., Whyte S., Duan J., Yang Y., Wang K., Yang S., Geng Y., Ou Y., Chen D. Caspase-11, a specific sensor for intracellular lipopolysaccharide recognition, mediates the non-canonical inflammatory pathway of pyroptosis //Cell & bioscience. - 2019. - V. 9. - P. 1-11.

61. Javaid K., Rahman A., Anwar K., Frey R., Minshall R., Malik A. Tumor necrosis factor-a induces early-onset endothelial adhesivity by protein kinase C£-dependent activation of intercellular adhesion molecule-1 //Circulation research. - 2003. - V. 92 (10). - P. 1089-1097.

62. Jialal I., Huet A., Kaur H., Chien A., Devaraj S. Increased toll-like receptor activity in patients with metabolic syndrome //Diabetes care. - 2012. - V. 35 (4). - P. 900-904.

63. Jiang Z., Georgel P., Du X., Shamel L., Sovath S., Mudd S., Huber M., Kalis C., Keck S., Galanos C., Freudenberg M., Beutler B. CD14 is required for MyD88-independent LPS signaling //Nature immunology. - 2005. - V. 6 (6). - P. 565570.

64. Juan T., Hailman E., Kelley M., Wright S., Lichenstein H. Identification of a domain in soluble CD14 essential for lipopolysaccharide (LPS) signaling but not LPS binding //Journal of Biological Chemistry. - 1995. - V. 270 (29). - P. 17237-17242.

65. Jung B. J., Kim H., Chung D. K. Differential immunostimulatory effects of lipoteichoic acids isolated from four strains of Lactiplantibacillus plantarum //Applied Sciences. - 2022. - V. 12 (3). - P. 954.

66. Kabanov D. S., Prokhorenko I. R. Structural analysis of lipopolysaccharides from Gram-negative bacteria //Biochemistry (Moscow). - 2010. -V. 75. - P. 383-404.

67. Kagan J. Lipopolysaccharide detection across the kingdoms of life //Trends in immunology. - 2017. - V. 38 (10). - P. 696-704.

68. Kagan J., Su T., Horng T., Chow A., Akira S., Medzhitov R. TRAM couples endocytosis of Toll-like receptor 4 to the induction of interferon-ß //Nature immunology. - 2008. - V. 9 (4). - P. 361-368.

69. Kankaanranta H., Kauppi P., Tuomisto L., Ilmarinen P. Emerging comorbidities in adult asthma: risks, clinical associations, and mechanisms //Mediators of inflammation. - 2016. - V. 2016.

70. Kapellos T., Bonaguro L., Gemünd I., Reusch N., Saglam A., Hinkley E., Schultze J. Human monocyte subsets and phenotypes in major chronic inflammatory diseases //Frontiers in immunology. - 2019. - P. 2035.

71. Kato A., Ogasawara T., Homma T., Saito H., Matsumoto K. Lipopolysaccharide-binding protein critically regulates lipopolysaccharide-induced

IFN-P signaling pathway in human monocytes //The Journal of Immunology. - 2004. -V. 172 (10). - P. 6185-6194.

72. Kayagaki N., Wong M., Stowe I., Ramani S., Gonzalez L., Akashi-Takamura S., Miyake K., Zhang J., Lee W., Muszynski A., Forsberg L., Carlson R., Dixit V. Noncanonical inflammasome activation by intracellular LPS independent of TLR4 //Science. - 2013. - V. 341 (6151). - P. 1246-1249.

73. Kennedy M., Mullen G., Leifer C., Lee C., Mazzoni A., Dileepan K., Segal D. A complex of soluble MD-2 and lipopolysaccharide serves as an activating ligand for Toll-like receptor 4 //Journal of Biological Chemistry. - 2004. - V. 279 (33). - P. 34698-34704.

74. Kenny E. F., O'Neill L. A. J. Signalling adaptors used by Toll -like receptors: an update //Cytokine. - 2008. - V. 43 (3). - P. 342-349.

75. Kitchens R., Thompson P., Viriyakosol S., O'Keefe G., Munford R. Plasma CD14 decreases monocyte responses to LPS by transferring cell-bound LPS to plasma lipoproteins //The Journal of clinical investigation. - 2001. - V. 108 (3). - P. 485-493.

76. Kopp F., Kupsch S., Schromm A. B. Lipopolysaccharide-binding protein is bound and internalized by host cells and colocalizes with LPS in the cytoplasm: Implications for a role of LBP in intracellular LPS-signaling //Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Molecular Cell Research. - 2016. - V. 1863 (4). - P. 660-672.

77. Kosmalski M., Rozycka-Kosmalska M., Witusik A., Pietras T. The coincidence of diabetes mellitus and asthma, their probable causal relationships and therapeutic opportunities //Advances in Respiratory Medicine. - 2020. - V. 88 (6). - P. 590-598.

78. Kumar V. Toll-like receptors in adaptive immunity //Toll-like Receptors in Health and Disease. - Cham : Springer International Publishing, 2021. - P. 95-131.

79. Lad N., Murphy A., Parenti C., Nelson C., Williams N., Sharpe G., McTernan P. Asthma and obesity: endotoxin another insult to add to injury? //Clinical Science. - 2021. - V. 135 (24). - P. 2729-2748.

80. Ladefoged M., Buschard K., Hansen A. M. K. Increased expression of tolllike receptor 4 and inflammatory cytokines, interleukin-6 in particular, in islets from a

mouse model of obesity and type 2 diabetes //Apmis. - 2013. - V. 121 (6). - P. 531538.

81. Lambrecht B. N., Hammad H., Fahy J. V. The cytokines of asthma //Immunity. - 2019. - V. 50 (4). - P. 975-991.

82. Lamping N.; Hoess A.; Yu B.; Park T.; Kirschning C.; Pfeil D.; Reuter D.; Wright S.; Herrmann F.; Schumann R. Effects of site-directed mutagenesis of basic residues (Arg 94, Lys 95, Lys 99) of lipopolysaccharide (LPS)-binding protein on binding and transfer of LPS and subsequent immune cell activation //Journal of immunology (Baltimore, Md.: 1950). - 1996. - V. 157 (10). - P. 4648-4656.

83. Lauer S., Kunde Y., Apodaca T., Goldstein B., Hong-Geller E. Soluble MD2 increases TLR4 levels on the epithelial cell surface //Cellular immunology. -2009. - V. 255 (1). - P. 8-16.

84. Lechner A., Henkel F., Hartung F., Bohnacker S., Alessandrini F., Gubernatorova O., Drutskaya M., Angioni C., Schreiber Y., Haimerl P., Ge Y., Thomas D., Kabat A., Pearce E., Ohnmacht C., Nedospasov S., Murray P., Chaker A., SchmidtWeber C., Bieren J. Macrophages acquire a TNF-dependent inflammatory memory in allergic asthma //Journal of Allergy and Clinical Immunology. - 2022. - V. 149 (6). -P. 2078-2090.

85. León-Pedroza J., González-Tapia L., del Olmo-Gil E., Castellanos-Rodríguez D., Escobedo G., González-Chávez A.. Low-grade systemic inflammation and the development of metabolic diseases: from the molecular evidence to the clinical practice //Cirugía y Cirujanos (English Edition). - 2015. - V. 83 (6). - P. 543-551.

86. Liao E., Hsieh C., Chang C., Yu S., Sheu M., Wu S., Tsai J. Enhanced allergic inflammation of Der p 2 affected by polymorphisms of MD-2 promoter //Allergy, Asthma & Immunology Research. - 2015. - V. 7 (5). - P. 497-506.

87. Lichte P., Grigoleit J., Steiner E., Kullmann J., Schedlowski M., Oberbeck R., Kobbe P. Low dose LPS does not increase TLR4 expression on monocytes in a human in vivo model //Cytokine. - 2013. - V. 63 (1). - P. 74-80.

88. Liu Y., Yin H., Zhao M., Lu Q. TLR2 and TLR4 in autoimmune diseases: a comprehensive review //Clinical reviews in allergy & immunology. - 2014. - V. 47. -P. 136-147.

89. Lizundia R., Sauter K., Taylor G., Werling D. Host species-specific usage of the TLR4-LPS receptor complex //Innate immunity. - 2008. - V. 14 (4). - P. 223231

90. Lucas K., Maes M. Role of the Toll Like receptor (TLR) radical cycle in chronic inflammation: possible treatments targeting the TLR4 pathway //Molecular neurobiology. - 2013. - V. 48 (1). - P. 190-204.

91. Madalina M., Deleanu M., Manduteanu I. Lipopolysaccharide-induced inflammation in monocytes/macrophages is blocked by liposomal delivery of g //Int. J. Nanomed. - 2018. - V. 13. - P. 63-76.

92. Mancek-Keber M., Gradisar H., Jerala R. MD-2 and Der p 2—a tale of two cousins or distant relatives? //Journal of endotoxin research. - 2005. - V. 11 (3). - P. 186-192.

93. Manni M., Trudeau J., Scheller E., Mandalapu S., Elloso M., Kolls J., Wenzel S., Alcorn J. The complex relationship between inflammation and lung function in severe asthma //Mucosal immunology. - 2014. - V. 7 (5). - P. 1186-1198.

94. Mattos R., Medeiros N., Menezes C., Fares R., Franco E., Dutra W., Rios-Santos F., Correa-Oliveira R., Gomes J. Chronic low-grade inflammation in childhood obesity is associated with decreased IL-10 expression by monocyte subsets //PLoS One. - 2016. - V. 11 (12). - P. e0168610.

95. Mazgaeen L., Gurung P. Recent advances in lipopolysaccharide recognition systems //International journal of molecular sciences. - 2020. - V. 21 (2). -P. 379.

96. McGettrick A. F., O'Neill L. A. J. Localisation and trafficking of Toll-like receptors: an important mode of regulation //Current opinion in immunology. - 2010. -V. 22 (1). - P. 20-27.

97. Molinaro A., Holst O., Di Lorenzo F., Callaghan M., Nurisso A., D'Errico G., Zamyatina A., Peri F., Berisio R., Jerala R., Jiménez-Barbero J., Silipo A., Martín-

Santamaría S. Chemistry of lipid A: at the heart of innate immunity //Chemistry-A European Journal. - 2015. - V. 21 (2). - P. 500-519.

98. Monie T. P. Section 4-integrated innate immunity—combining activation and effector functions //The Innate Immune System. - Academic Press, 2017. - P. 121169.

99. Moreno C., Merino J., Ramírez N., Echeverría A., Pastor F., Sánchez-Ibarrola A. Lipopolysaccharide needs soluble CD14 to interact with TLR4 in human monocytes depleted of membrane CD14 //Microbes and infection. - 2004. - V. 6 (11). -P. 990-995.

100. Moreno-Navarrete J., Ortega F., Serino M., Luche E., Waget A., Pardo G., Salvador J., Ricart W., Frühbeck G., Burcelin R., Fernández-Real J. Circulating lipopolysaccharide-binding protein (LBP) as a marker of obesity-related insulin resistance //International journal of obesity. - 2012. - V. 36 (11). - P. 1442-1449.

101. Mueller G. A., Benjamin D. C., Rule G. S. Tertiary structure of the major house dust mite allergen Der p 2: sequential and structural homologies //Biochemistry. -1998. - V. 37 (37). - P. 12707-12714.

102. Mueller G., Min J., Foo A., Pomés A., Pedersen L. Structural analysis of recent allergen-antibody complexes and future directions //Current allergy and asthma reports. - 2019. - V. 19. - P. 1-10.

103. Mueller M., Lindner B., Kusumoto S., Fukase K., Schromm A., Seydel U. Aggregates are the biologically active units of endotoxin //Journal of Biological Chemistry. - 2004. - V. 279 (25). - P. 26307-26313.

104. Mueller M., Stamme C., Draing C., Hartung T., Seydel U., Schromm A. Cell activation of human macrophages by lipoteichoic acid is strongly attenuated by lipopolysaccharide-binding protein //Journal of Biological Chemistry. - 2006. - V. 281 (42). - P. 31448-31456.

105. Mukherjee S., Huda S., Sinha Babu S. P. Toll-like receptor polymorphism in host immune response to infectious diseases: A review //Scandinavian journal of immunology. - 2019. - V. 90 (1). - P. e12771.

106. Mukherjee S., Karmakar S., Babu S. P. S. TLR2 and TLR4 mediated host immune responses in major infectious diseases: a review //Brazilian Journal of Infectious Diseases. - 2016. - V. 20. - P. 193-204.

107. Muroi M., Ohnishi T., Tanamoto K. Regions of the mouse CD 14 molecule required for Toll-like receptor 2-and 4-mediated activation of NF-kB //Journal of Biological Chemistry. - 2002. - V. 277 (44). - P. 42372-42379.

108. Nielsen M. C., Andersen M. N., M0ller H. J. Monocyte isolation techniques significantly impact the phenotype of both isolated monocytes and derived macrophages in vitro //Immunology. - 2020. - T. 159. - №. 1. - C. 63-74.

109. Nilsen N., Deininger S., Nonstad U., Skjeldal F., Husebye H., Rodionov D., von Aulock S., Hartung T., Lien E., Bakke O., Espevik T. Cellular trafficking of lipoteichoic acid and Toll-like receptor 2 in relation to signaling; role of CD14 and CD36 //Journal of Leucocyte Biology. - 2008. - V. 84 (1). - P. 280-291.

110. Ohnishi H., Tochio H., Kato Z., Kawamoto N., Kimura T., Kubota K., Yamamoto T., Funasaka T., Nakano H., Wong R., Shirakawa M., Kondo N. TRAM is involved in IL-18 signaling and functions as a sorting adaptor for MyD88 // PLoS One. - 2012. - 7(6). -P. e38423.

111. Oliveira-Nascimento L., Massari P., Wetzler L. M. The role of TLR2 in infection and immunity //Frontiers in immunology. - 2012. - V. 3. - P. 79.

112. Ospelt C., Gay S. TLRs and chronic inflammation //The international journal of biochemistry & cell biology. - 2010. - V. 42 (4). - P. 495-505.

113. Osterlund C., Gronlund H., Polovic N., Sundstrom S., Gafvelin G., Bucht A. The non-proteolytic house dust mite allergen Der p 2 induce NF-kB and MAPK dependent activation of bronchial epithelial cells //Clinical & Experimental Allergy. -2009. - V. 39 (8). - P. 1199-1208.

114. Panda A., Qian F., Mohanty S., van Duin D., Newman F., Zhang L., Chen S., Towle V., Belshe R., Fikrig E., Allore H., Montgomery R., Shaw A.. Age-associated decrease in TLR function in primary human dendritic cells predicts influenza vaccine response //The Journal of Immunology. - 2010. - V. 184 (5). - P. 2518-2527.

115. Park B., Lee J. Recognition of lipopolysaccharide pattern by TLR4 complexes //Experimental & molecular medicine. - 2013. - V. 45 (12). - P. e66-e66.

116. Park B., Song D., Kim H., Choi B., Lee H., Lee J.. The structural basis of lipopolysaccharide recognition by the TLR4-MD-2 complex //Nature. - 2009. - V. 458 (7242). - P. 1191-1195.

117. Park S., Kim N., Jung J., Lee C., Han S., Kim Y. Myeloid differentiation 2 as a therapeutic target of inflammatory disorders //Pharmacology & therapeutics. -2012. - V. 133 (3). - P. 291-298.

118. Park S., Kim N., Jung J., Lee C., Han S., Kim Y. Myeloid differentiation 2 as a therapeutic target of inflammatory disorders //Pharmacology & therapeutics. -2012. - V. 133 (3). - P. 291-298.

119. Parolia A., Gee, L., Porto I., Mohan M. Role of cytokines, endotoxins (LPS), and lipoteichoic acid (LTA) in endodontic infection //J Dent Oral Disord Ther. -2014. - V. 2 (4). - P. 1-5.

120. Pasare C., Medzhitov R. Toll-like receptors: linking innate and adaptive immunity //Mechanisms of lymphocyte activation and immune regulation X: innate immunity. - 2005. - P. 11-18.

121. Percy M. G., Gründling A. Lipoteichoic acid synthesis and function in gram-positive bacteria //Annual review of microbiology. - 2014. - V. 68. - P. 81-100.

122. Perrin-Cocon L., Aublin-Gex A., Sestito S., Shirey K., Patel M., André P., Blanco J., Vogel S., Peri F., Lotteau V. TLR4 antagonist FP7 inhibits LPS-induced cytokine production and glycolytic reprogramming in dendritic cells, and protects mice from lethal influenza infection //Scientific Reports. - 2017. - V. 7 (1). - P. 40791.

123. Perros F., Lambrecht B. N., Hammad H. TLR4 signalling in pulmonary stromal cells is critical for inflammation and immunity in the airways //Respiratory research. - 2011. - V. 12 (1). - P. 1-8.

124. Peters M. C. et al. Plasma interleukin-6 concentrations, metabolic dysfunction, and asthma severity: a cross-sectional analysis of two cohorts //The lancet Respiratory medicine. - 2016. - T. 4. - №. 7. - C. 574-584.

125. Plociennikowska A., Hromada-Judycka A., Dembinnska J., Roszczenko P., Ciesielska A., Kwiatkowska K. Contribution of CD14 and TLR4 to changes of the PI (4, 5) P2 level in LPS-stimulated cells //Journal of Leucocyte Biology. - 2016. - V. 100 (6). - P. 1363-1373.

126. Poxton I. R. Teichoic acids, lipoteichoic acids and other secondary cell wall and membrane polysaccharides of Gram-positive bacteria, p 91 -103 //Molecular medical microbiology, 2nd ed. Academic Press, Waltham, MA. - 2014.

127. Pretorius E., Mbotwe S., Kell D. B. Lipopolysaccharide-binding protein (LBP) reverses the amyloid state of fibrin seen in plasma of type 2 diabetics with cardiovascular co-morbidities //Scientific reports. - 2017. - V. 7 (1). - P. 9680.

128. Pugin J., Stern-Voeffray S., Daubeuf B., Matthay M., Elson G., Dunn-Siegrist I. Soluble MD-2 activity in plasma from patients with severe sepsis and septic shock //Blood. - 2004. - V. 104 (13). - P. 4071-4079.

129. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Impact of Comorbidity of Bronchial Asthma and Type 2 Diabetes Mellitus on the Expression and Functional Activity of TLR2 and TLR4 Receptors //Life. - 2023. - V. 13 (2). - P. 550.

130. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Participation of monocyte subpopulations in progression of experimental endotoxemia (EE) and systemic inflammation //Journal of immunology research. - 2021. - V. 2021. - P. 1-9.

131. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Synergistic effect of Dermatophagoides pteronyssinus allergen and Escherichia coli lipopolysaccharide on human blood cells //Plos one. - 2018. - V. 13 (11). - P. e0207311.

132. Raetz C., Guan Z., Ingram B., Six D., Song F., Wang X., Zhao J. Discovery of new biosynthetic pathways: the lipid A story //Journal of lipid research. - 2009. - V. 50. - P. S103-S108.

133. Randeria S., Thomson G., Nell T., Roberts T., Pretorius E. Inflammatory cytokines in type 2 diabetes mellitus as facilitators of hypercoagulation and abnormal clot formation //Cardiovascular diabetology. - 2019. - V. 18 (1). - P. 1-15.

134. Ranoa D. R. E., Kelley S. L., Tapping R. I. Human lipopolysaccharide-binding protein (LBP) and CD14 independently deliver triacylated lipoproteins to Toll-

like receptor 1 (TLR1) and TLR2 and enhance formation of the ternary signaling complex //Journal of Biological Chemistry. - 2013. - V. 288 (14). - P. 9729-9741.

135. Re F., Strominger J. L. Monomeric recombinant MD-2 binds toll-like receptor 4 tightly and confers lipopolysaccharide responsiveness //Journal of Biological Chemistry. - 2002. - V. 277 (26). - P. 23427-23432.

136. Resman N., Vasl J., Oblak A., Pristovsek P., Gioannini T. L., Weiss J., Jerala R. Essential roles of hydrophobic residues in both MD-2 and toll-like receptor 4 in activation by endotoxin //Journal of Biological Chemistry. - 2009. - V. 284 (22). - P. 15052-15060.

137. Ryu J., Kim S., Rah S., Kang J., Jung H., Lee D., Lee H., Lee J., Park B., Yoon T., Kim H. Reconstruction of LPS transfer cascade reveals structural determinants within LBP, CD14, and TLR4-MD2 for efficient LPS recognition and transfer //Immunity. - 2017. - V. 46 (1). - P. 38-50.

138. Schäfer C., Parlesak A., Schütt C., Christian Bode J., Bode, C. Concentrations of lipopolysaccharide-binding protein, bactericidal/permeability-increasing protein, soluble CD14 and plasma lipids in relation to endotoxaemia in patients with alcoholic liver disease //Alcohol and alcoholism. - 2002. - V. 37 (1). - P. 81-86.

139. Schröder N., Morath S., Alexander C., Hamann L., Härtung T., Zähringer U., Göbel U., Weber J., Schumann R. Lipoteichoic acid (LTA) of Streptococcus pneumoniaeand Staphylococcus aureus activates immune cells via Toll-like receptor (TLR)-2, lipopolysaccharide-binding protein (LBP), and CD14, whereas TLR-4 and MD-2 are not involved //Journal of biological chemistry. - 2003. - V. 278 (18). - P. 15587-15594.

140. Schumann R. R. Old and new findings on lipopolysaccharide-binding protein: a soluble pattern-recognition molecule //Biochemical Society Transactions. -2011. - V. 39 (4). - P. 989-993.

141. Sepehri Z., Kiani Z., Nasiri A., Kohan F. Toll-like receptor 2 and type 2 diabetes //Cellular & molecular biology letters. - 2016. - V. 21. - P. 1-9.

142. Shaw A. C. Effects of Aging on Human Toll-Like Receptor Function //Handbook of Immunosenescence; Fulop, T., Franceschi, C., Hirokawa, K., Pawelec, G., Eds. - 2019.

143. Sheedy F. J., O'Neill L. A. J. The Troll in Toll: Mal and Tram as bridges for TLR2 and TLR4 signaling //Journal of Leucocyte Biology. - 2007. - V. 82 (2). - P. 196-203.

144. Shimazu R., Akashi S., Ogata H., Nagai Y., Fukudome K., Miyake K., Kimoto M. MD-2, a molecule that confers lipopolysaccharide responsiveness on Tolllike receptor 4 //The Journal of experimental medicine. - 1999. - V. 189 (11). - P. 1777-1782.

145. Shirey K., Lai W., Scott A., Lipsky M., Mistry P., Pletneva L., Karp C., McAlees J., Gioannini T., Weiss J., Chen W., Ernst R., Rossignol D., Gusovsky F., Blanco J., Vogel S. The TLR4 antagonist Eritoran protects mice from lethal influenza infection //Nature. - 2013. - V. 497 (7450). - P. 498-502.

146. Shive C., Jiang W., Anthony D., Lederman M. Soluble CD14 is a nonspecific marker of monocyte activation //AIDS (London, England). - 2015. - V. 29 (10). - P. 1263.

147. Silva L., Neto A., Maia S., Guimaraes C., Quidute I., Carvalho A., Júnior S., Leao J. The role of TNF-a as a proinflammatory cytokine in pathological processes //The Open Dentistry Journal. - 2019. - V. 13 (1).

148. Stasi A., Intini A., Divella C., Franzin R., Montemurno E., Grandaliano G., Ronco C., Fiaccadori E., Pertosa G., Gesualdo L., Castellano G. Emerging role of Lipopolysaccharide binding protein in sepsis-induced acute kidney injury //Nephrology Dialysis Transplantation. - 2017. - V. 32 (1). - P. 24-31.

149. Sundaram K., Mitra S., Gavrilin M., Wewers M. House dust mite allergens and the induction of monocyte interleukin 1p production that triggers an ikb^-dependent granulocyte macrophage colony-stimulating factor release from human lung epithelial cells //American journal of respiratory cell and molecular biology. - 2015. -V. 53 (3). - P. 400-411.

150. Takeuchi O., Akira S. Pattern recognition receptors and inflammation //Cell. - 2010. - V. 140 (6). - P. 805-820.

151. Tan Y., Kagan J. C. A cross-disciplinary perspective on the innate immune responses to bacterial lipopolysaccharide //Molecular cell. - 2014. - V. 54 (2). - P. 212223.

152. Tanaka T., Narazaki M., Kishimoto T. IL-6 in inflammation, immunity, and disease //Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2014. - V. 6 (10). - P. a016295.

153. Teghanemt A., Weiss J. P., Gioannini T. L. Radioiodination of an endotoxin MD-2 complex generates a novel sensitive, high-affinity ligand for TLR4 //Innate immunity. - 2013. - V. 19 (5). - P. 545-560.

154. Teghanemt A., Widstrom R., Gioannini T., Weiss J. Isolation of Monomeric and Dimeric Secreted MD-2: Endotoxin sCD14 and Toll-like receptors 4 ectodomain selectively react with the monomeric form of secreted MD-2 //Journal of Biological Chemistry. - 2008. - V. 283 (32). - P. 21881-21889.

155. Tissieres P., Dunn-Siegrist I., Schappi M., Elson G., Comte R., Nobre V., Pugin, J. Soluble MD-2 is an acute-phase protein and an opsonin for Gram-negative bacteria //Blood, The Journal of the American Society of Hematology. - 2008. - V. 111 (4). - P. 2122-2131.

156. Torres R., Souza M., Coelho A., de Mello L., Souza-Machado C. Association between Asthma and Type 2 Diabetes Mellitus: Mechanisms and Impact on Asthma Control—A Literature Review //Canadian respiratory journal. - 2021. - V. 2021.

157. Triantafilou M., Mouratis M., Lepper P., Haston R., Baldwin F., Lowes S., Ahmed M., Schumann C., Boyd O., Triantafilou K. Serum proteins modulate lipopolysaccharide and lipoteichoic acid-induced activation and contribute to the clinical outcome of sepsis //Virulence. - 2012. - V. 3 (2). - P. 136-145.

158. Trompette A., Divanovic S., Visintin A., Blanchard C., Hegde R., Madan R., Thorne P., Wills-Karp M., Gioannini T., Weiss J., Karp C. Allergenicity resulting

from functional mimicry of a Toll-like receptor complex protein //Nature. - 2009. - V. 457(7229). - P. 585-588.

159. Tsujimoto H., Ono S., Efron A., Scumpia O., Moldawer L., Mochizuki H. Role of Toll-like receptors in the development of sepsis //Shock. - 2008. - V. 29 (3). -P. 315-321.

160. Usui M., Hanamura N., Hayashi T., Kawarada Y., Suzuki K. Molecular cloning, expression and tissue distribution of canine lipopolysaccharide (LPS)-binding protein //Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Gene Structure and Expression. - 1998.

- T. 1397. - №. 2. - C. 202-212.

161. Vaure C., Liu Y. A comparative review of toll-like receptor 4 expression and functionality in different animal species //Frontiers in immunology. - 2014. - V. 5.

- P. 316.

162. Vidya M., Kumar V., Sejian V., Bagath M., Krishnan G., Bhatta R. Tolllike receptors: significance, ligands, signaling pathways, and functions in mammals //International reviews of immunology. - 2018. - V. 37 (1). - P. 20-36.

163. Villar J., Pérez-Méndez L., Espinosa E., Flores C., Blanco J., Muriel A., Basaldúa S., Muros M., Blanch L., Artigas A., Kacmarek R. Serum lipopolysaccharide binding protein levels predict severity of lung injury and mortality in patients with severe sepsis //PloS one. - 2009. - V. 4 (8). - P. e6818.

164. Visintin A., Halmen K., Latz E., Monks B., Golenbock D. Pharmacological inhibition of endotoxin responses is achieved by targeting the TLR4 coreceptor, MD-2 //The Journal of Immunology. - 2005. - V. 175 (10). - P. 6465-6472.

165. Visintin A., Iliev D., Monks B., Halmen K., Golenbock D. MD-2 //Immunobiology. - 2006. - V. 211 (6-8). - P. 437-447.

166. Visintin A., Mazzoni A., Spitzer J., Segal D. Secreted MD-2 is a large polymeric protein that efficiently confers lipopolysaccharide sensitivity to Toll-like receptor 4 //Proceedings of the National Academy of Sciences. - 2001. - V. 98 (21). -P. 12156-12161

167. Wang Y., Luo W., Han J., Khan Z., Fang Q., Jin Y., Chen X., Zhang Y., Wang M., Qian J., Huang W., Lum H., Liang G. MD2 activation by direct AGE

interaction drives inflammatory diabetic cardiomyopathy// Nature Communications. -2020. - V.11 (1). - P. 2148.

168. Wang Y., Shan X., Chen G., Jiang L., Wang Z., Fang Q., Liu X., Wang J., Zhang Y., Wu W., Liang G. MD-2 as the target of a novel small molecule, L6H 21, in the attenuation of LPS-induced inflammatory response and sepsis. //British journal of pharmacology. - 2015. - V. 172 (17). - P. 4391-4405.

169. Wifi M., Assem M., Elsherif R., El-Azab H., Saif A. Toll-like receptors-2 and-9 (TLR2 and TLR9) gene polymorphism in patients with type 2 diabetes and diabetic foot //Medicine. - 2017. - V. 96 (17).

170. Wolfs T., Dunn-Siegrist I., Veer C., Hodin C., Germeraad W., van Zoelen M., van Suylen R., Peutz-Kootstra C., Elson G., Pugin J., Buurman W. Increased release of sMD-2 during human endotoxemia and sepsis: a role for endothelial cells //Molecular immunology. - 2008. - V. 45 (11). - P. 3268-3277

171. Wood L., Baines K., Fu J., Scott H., Gibson P. The neutrophilic inflammatory phenotype is associated with systemic inflammation in asthma //Chest. -2012. - V. 142 (1). - P. 86-93.

172. Wright S., Ramos R., Tobias P., Ulevitch R., Mathison J. CD14, a receptor for complexes of lipopolysaccharide (LPS) and LPS binding protein //Science. - 1990.

- V. 249 (4975). - P. 1431-1433.

173. Wu Z., Zhang Z., Lei Z., Lei P. CD14: Biology and role in the pathogenesis of disease //Cytokine & growth factor reviews. - 2019. - V. 48. - P. 24-31.

174. Yamamoto M., Sato S., Mori K., Hoshino K., Takeuchi O., Takeda K., Akira S. Cutting edge: a novel Toll/IL-1 receptor domain-containing adapter that preferentially activates the IFN-P promoter in the Toll-like receptor signaling //The Journal of Immunology. - 2002. - V. 169 (12). - P. 6668-6672.

175. Yamamoto Y., Harashima A., Saito H., Tsuneyama K., Munesue S., Motoyoshi S., Han D., Watanabe T., Asano M., Takasawa S., Okamoto H., Shimura S., Karasawa T., Yonekura T., Yamamoto H.. Septic shock is associated with receptor for advanced glycation end products ligation of LPS //The Journal of Immunology. - 2011.

- V. 186 (5). - P. 3248-3257.

176. Yang M., Gan H., Shen Q., Tang W., Du X., Chen D. Proinflammatory CD14+ CD16+ monocytes are associated with microinflammation in patients with type 2 diabetes mellitus and diabetic nephropathy uremia //Inflammation. - 2012. - V. 35. -P. 388-396.

177. Yang M., Zhang F., Qin K., Wu M., Li H., Zhu H., Ning Q., Lei P., Shen G. Glucose-regulated protein 78-induced myeloid antigen-presenting cells maintained tolerogenic signature upon LPS stimulation //Frontiers in Immunology. - 2016. - V. 7.

- P. 552

178. Zakeri A., Russo M. Dual role of toll-like receptors in human and experimental asthma models //Frontiers in immunology. - 2018. - V. 9. - P. 1027.

179. Zanoni I., Granucci F. Role of CD14 in host protection against infections and in metabolism regulation //Frontiers in cellular and infection microbiology. - 2013.

- V. 3. - P. 32

180. Zanoni I., Ostuni R., Capuano G., Collini M., Caccia M., Ronchi A., Rocchetti M., MingozziF, Foti F., Chirico G., Costa B., Zaza A., Ricciardi-Castagnoli P., Granucci F.. CD14 regulates the dendritic cell life cycle after LPS exposure through NFAT activation //Nature. - 2009. - V. 460 (7252). - P. 264-268.

181. Zhang P., Nguyen J., Abdulla F., Nelson A., Beckman J., Vercellotti G., Belcher J. Soluble MD-2 and heme in sickle cell disease plasma promote proinflammatory signaling in endothelial cells //Frontiers in immunology. - 2021. - V. 12.

- P. 941.

182. Zhou M., Wang C., Yang W., Wang P. Microglial CD14 activated by iNOS contributes to neuroinflammation in cerebral ischemia //Brain research. - 2013. - V. 1506. - P. 105-114.

183. Zhu L., Li W., Fan Z., Ye X., Lin R., Ban M., Ren L., Chen X., Zhang D. Immunomodulatory activity of polysaccharide from Arca granosa Linnaeus via TLR4/MyD88/NFKB and TLR4/TRIF signaling pathways //Journal of Functional Foods. - 2021. - V. 84. - P. 104579.

184. Zhu T., Meng Q., Ji J., Lou X., Zhang L. Toll-like receptor 4 and tumor necrosis factor-alpha as diagnostic biomarkers for diabetic peripheral neuropathy //Neuroscience letters. - 2015. - V. 585. - P. 28-32.

185. Ziegler-Heitbrock L., Ancuta P., Crowe S., Dalod M., Grau V., Hart D., Leenen P., Liu Y., MacPherson G., Randolph G., Scherberich J., Schmitz J., Shortman K., Sozzani S., Strobl H., Zembala M., Austyn J., Lutz M. Nomenclature of monocytes and dendritic cells in blood //Blood, The Journal of the American Society of Hematology. - 2010. - V. 116 (16). - P. e74-e80.

186. Zweigner J., Schumann R. R., Weber J. R. The role of lipopolysaccharide-binding protein in modulating the innate immune response //Microbes and Infection. -2006. - V. 8 (3). - P. 946-952.

187. Бочкарева Л., Недосугова Л., Петунина Н., Тельнова М., Гончарова Е. Некоторые механизмы развития воспаления при сахарном диабете 2 типа // Сахарный диабет. - 2021. -Т.24 (4). - С. 334-341.

188. Ганковская Л., Намазова-Баранова Л., Хорева М., Брагвадзе Б., Огурцова А., Алексеева А., Ганковский В., Свитич О. Особенности экспрессии Toll-подобного рецептора 2 и Toll-подобного рецептора 4 у детей с бронхиальной астмой //Медицинская иммунология. - 2017. - Т. 19. - №. 4. - С. 431-440.

189. Гюлазян Н., Белая О., Малов В., Пак С., Волчкова Е. Липополисахариды/эндотоксины грамотрицательных бактерий: роль в развитии интоксикации // Эпидемиология и инфекционные болезни. - 2014. -Т.2. -с. 11-16.

190. Кабанов Д. С., Радзюкевич Я.В., Грачёв С.В., Прохоренко И.Р. Влияние структуры липида А липополисахаридов на их взаимодействие с ЛПС-связывающим белком сыворотки крови и активацию лейкоцитов //Биологические мембраны. - 2018. - Т. 35. - №. 5. - С. 341-350.

191. Косякова Н. И., Радзюкевич Я.В., Морозова А.А., Прохоренко И.Р. Активация клеток крови ЛПС и DpE: роль sMD-2 и p38 MAPK в развитии аллергического воспаления //Российский аллергологический журнал. - 2019. - Т. 16. - №. S1. - С. 81-84.

192. Косякова, Н. И., Матрусов, С. Г., Сандалова, Т. В., Ильеня, Э. Л., Панкратова, Е. В., Радзюкевич, Я. В., & Прохоренко, И. Р. (2021). Технология частотно-модулированных электромагнитных, электрических и аудиовизуальных воздействий, управляемых сигналами обратной связи от ритма дыхания, биопотенциалов мозга и сердца пациента, для лечения диабетической ангиопатии.

193. Кытикова О., Новгородцева Т., Денисенко Ю., Антонюк М., Гвозденко Т. Толл-подобные рецепторы в патофизиологии ожирения// Ожирение и метаболизм. — 2020. — Т. 17 (1). — С.56-63.

194. Огурцова А. Д. Анализ экспрессии и функциональной активности То11-подобных рецепторов у больных бронхиальной астмой: дис. ... кан. мед. наук: 14.03.09: защищена 11.02.19 — М., 2019. — 147 с.

195. Радзюкевич Я. В., Серов Д. А., Прохоренко И. Р. Исследование влияния LBP на активацию клеток крови липополисахаридами разной структуры //Медицинский академический журнал. - 2016. - Т. 16. - №. 4. - С. 90-91.

196. Радзюкевич, Я. В., Тихонов, К. Г., Дегтярёв, Е. А., Буряк, В. И., & Савченко, Т. В. Поиск растительных оксилипинов, обладающих противовспалительной активностью // Достижения и перспективы создания новых лекарственных растительных препаратов. - 2023. - Р. 109-114

197. Сапичева Ю., Лихванцев В., Петровская Э., Лопатин А. Тактика ведения пациентов с сепсисом и септическим шоком в многопрофильном стационаре // Москва. - 2015.

198. Сорокина Л., Иванов В., Минеев В., Лим В., Трофимов В. Особенности цитокинового спектра у больных неаллергической бронхиальной астмой в сочетании с сопутствующим сахарным диабетом 2 типа //Медицинская иммунология. - 2017. - Т. 19. - №. 3. - С. 313-318.

199. Хорева М., Латышева, Т., Огурцова, А., Грачева, Л., Захаров, М., Свитич, О., Ганковская, Л. Экспрессия и функциональная активность и ТЬЯД у больных аллергической бронхиальной астмой //Российский иммунологический журнал. - 2019. - Т. 13. - №. 2-1. - С. 614-616.

СПИСОК РАБОТ, ОПУБЛИКОВАННЫХ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи в рецензируемых изданиях ВАК:

1. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Impact of Comorbidity of Bronchial Asthma and Type 2 Diabetes Mellitus on the Expression and Functional Activity of TLR2 and TLR4 Receptors //Life. - 2023. - V. 13. - №. 2. - P. 550.

2. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Participation of monocyte subpopulations in progression of experimental endotoxemia (EE) and systemic inflammation //Journal of immunology research. - 2021. - V. 2021. - P. 1-9.

3. Косякова Н. И., Радзюкевич Я.В., Морозова А.А., Прохоренко И.Р. Активация клеток крови ЛПС и DpE: роль sMD-2 и p38 MAPK в развитии аллергического воспаления //Российский аллергологический журнал. - 2019. - Т. 16. - №. S1. - С. 81-84.

4. Кабанов Д. С., Радзюкевич Я.В., Грачёв С.В., Прохоренко И.Р. Влияние структуры липида А липополисахаридов на их взаимодействие с ЛПС-связывающим белком сыворотки крови и активацию лейкоцитов //Биологические мембраны. - 2018. - Т. 35. - №. 5. - С. 341-350.

5. Radzyukevich Y. V., Kosyakova N. I., Prokhorenko I. R. Synergistic effect of Dermatophagoides pteronyssinus allergen and Escherichia coli lipopolysaccharide on human blood cells //Plos one. - 2018. - V. 13. - №. 11. - P. e0207311.

6. Радзюкевич Я. В., Серов Д. А., Прохоренко И. Р. Исследование влияния LBP на активацию клеток крови липополисахаридами разной структуры //Медицинский академический журнал. - 2016. - Т. 16. - №. 4. - С. 90-91.

Публикации в сборниках работ и тезисах конференций:

1. Радзюкевич Я.В., Косякова Н.И., Прохоренко И.Р. Роль белка крови sMD-2 в активации клеток крови различными структурами ЛПС и аллергеном Der p 2 // 26-ая Пущинская школа-конференция молодых ученых с международным участием «Биология - наука XXI века» Пущино, 9-13 апреля 2023 г.

2. Radzyukevich Y.V., Kosyakova N.I., Zubova S.V., Prokhorenko I.R. LPS-induced cytokine production in patients with nonallergic bronchial asthma in combination with type 2 diabetes mellitus. In: Science. Education. Practice : proceedings of the International University Science Forum (Canada, Toronto), February 10, 2021. Part 2 -Infinity Publishing. P. 133-142. DOI:10.34660/INF.2021.14.10.019

3. Зубова С. В., Радзюкевич Я.В., Косякова Н.И., Прохоренко И.Р. Способность липополисахарида R. Capsulatus PG блокировать сочетанную активацию клеток крови эндотоксином и аллергеном //Рецепторы и внутриклеточная сигнализация. - 2021. - С. 671-676.

4. Серов Д.А., Радзюкевич Я.В., Косякова Н.И., Прохоренко И.Р. «Исследование ответных реакций клеток крови пациентов с дебютом бронхиальной астмы на эндотоксины». XVI Всероссийский научный форум с международным участием имени академика В.И. Иоффе «Дни иммунологии в Санкт-Петербурге» 5-8 июня 2017 г. Санкт-Петербург. Медицинская иммунология, 19(Специальный выпуск), 96-97. (2017).

5. Радзюкевич Я.В., Серов Д.А., Косякова Н.И., Прохоренко И.Р. «Влияние терапии бронхиальной астмы на лпс-индуцированные цитокиновые ответы клеток крови пациентов с данным заболеванием». 21 -я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых «Биология - наука XXI века». Сборник тезисов, 236-237 (2017).

6. Радзюкевич Я.В., Серов Д.А., Прохоренко И.Р. «Исследование влияния LBP на активацию клеток крови липополисахаридами разной структуры». III Всероссийская научная конференция молодых ученых «Проблемы биомедицинской науки третьего тысячелетия» 12-14 сентября 2016 г. Санкт-Петербург. Медицинский академический журнал, 16 (4), 90-91 (2016).

Патент:

1. Прохоренко И.Р., Грачёв С.В., Кабанов Д.С., Радзюкевич Я.В., Косякова Н.И. Противоаллергическое средство//Патент России № 2690430.2019. Бюл. № 16.

Методические рекомендации:

1. Н.И. Косякова, И.Р. Прохоренко, Д.А. Серов, Я.В. Радзюкевич, Л.А. Андреева, Е.В. Панкратова, Н.В. Шибаев, П.А. Сахаров, Д.С. Кабанов. Исследование мокроты и крови на биомаркеры системного воспаления и оценка роли пресепсина, регуляторных молекул и цитокинов в прогнозе обострений и тяжелых осложнений хронических заболеваний легких. - 2021.