Роль хламидий в спонтанной инфекционной патологии обезьян тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.03, кандидат биологических наук Слободенюк, Владимир Владимирович

• Слободенюк, Владимир Владимирович
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Слободенюк, Владимир Владимирович

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Место хламидийной инфекции в инфекционной патологии животных и человека: Эпидемиологическая значимость хламидиоза животных как источника и резервуара возбудителя для человекам.

1.1.1. Роль хламидий в этиологии воспалительных заболеваний человекам.

1.1.2. Хламидиозы животных как возможный источник и резервуар ^возбудителя* хламидийной инфекции человека.18»

Г. 1.3: Восприимчивость животных к хламидиозу человека.

1.2. Методы лабораторной диагностики хламидиоза человека и животных.

1.2.1. Общепринятые методы диагностики хламидийной инфекции.

1.2.2. Достоинства и недостатки методов диагностики хламидиозов, их ограничения в применении.30>

1.2.3. Подходы к, совершенствованию методов диагностики; хламидийной инфекции1.

1.3. Филогенетическая характеристика хламидий.

Глава 2. Материалы и методы исследований.

2.1. Материалы исследования.

2.1.1. Характеристика обследованных,обезьян.

2.1.2. Образцы клинического материала.

2.1.3. Используемые культуры клеток, среды и реактивы.

2.1.4. Штаммьгмикроорганизмов.

2.2. Лабораторные методы исследования.

2.2.1. Верификация хламидий у обезьян.

2.2.1.1. Цитологический метод.

2.2.1.2. Серологический метод.

2.2.1.3. Культуральный метод.

2.2.1.4. Молекулярно-генетические методы.

2.2.2. Программное обеспечение в молекулярно-генетическом исследовании хламидий.

2.2.3. Секвенирование штаммов хламидий.

2.3. Статистическая обработка полученных данных.

Глава 3. Результаты собственных исследований.

3.1. Установление естественного инфицирования хламидиями обезьян с применением общепринятого в клинической практике комплекса лабораторных методов обследования.

3.2. Совершенствование методов верификации хламидий у обезьян.

3.2.1. Молекулярно-генетический анализ.

3.2.1.1. Комплексная одновременная детекция и идентификация Chlamydophila pneumoniae и Chlamydia trachomatis.

3.2.1.2. Повышение диагностической значимости культурального метода.

3.2.1.3. Генотипирование хламидий Chlamydia trachomatis.

3.2.1.4. Выявление чувствительности к антибиотикам.

3.3.Установление филогенетической топографии штаммов хламидий, выделенных от обезьян в семействе Chlamydiaceae.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль хламидий в спонтанной инфекционной патологии обезьян»

Инфекционные заболевания, вызываемые облигатными внутриклеточными микроорганизмами семейства Chlamydiaceae, являются одной из актуальных задач современного здравоохранения, ввиду широкого распространения их во всем мире [14, 15, 19; 20, 24]. Среди группы возбудителей хламидийных инфекций животных и человека, известных под общим названием «хламидиозы», особое значение для-медицины .представляют хламидии двух родов Chlamydia и Chlamydophila, носящие антропонозный характер: вид Chlamydia- trachomatis, вызывающий различные урогенитальные заболевания (уретрит, цервицит, эндометрит, простатит, орхит и др.), патологию беременности»и родов, некоторые формы артрита, трахому, лимфогранулему венерум, патологию органов .дыхания, офтальмию новорожденных, и* вид Chlamydophila pneumoniae (биовар TWAR), являющийся респираторным-возбудителем, а также играющий роль в патологии сердечно - сосудистой системы и головного мозга (атеросклероз, ишемическая болезнь , сердца, инсульт, транзиторные нарушения кровообращения мозга, болезнь Альцгеймера) [14, 20, 51, 88, 103, 132; 174].

Взгляды ученых нацелены на более детальное изучение жизненного цикла хламидий, фенотипических признаков, особенностей структуры генома штаммов хламидий и их непосредственную связь между собой [65, 70, 84, 168]. В первую очередь это может помочь в разработке новых методов диагностики, лечения и профилактики, а также созданию препаратов бактерицидного действия, которые бы могли воздействовать губительно на все формы, цикла развития хламидий, и новых иммуномодулирующих препаратов, вакцин с целью наиболее эффективного лечения и профилактики хламидиоза. Для осуществления описанного выше необходимо применение оптимальной экспериментальной биологической модели. По эволюционному родству и принадлежности человека к отряду приматов использование обезьян для экспериментального изучения хламидий антропонозного характера является наиболее адекватным.

Известны работы, посвященные попыткам экспериментального заражения обезьян хламидиями, выделенными от человека с воспалительными заболеваниями органов малого таза, уретритами, цервицитами, эпидидимитами, в результате чего была доказана высокая восприимчивость данных животных к хламидиям [119, 184]. Однако прежде чем рассматривать обезьян как экспериментальную модель для изучения хламидийных инфекций, необходимо знать, имеют ли обезьяны свою собственную хламидийную патологию^ что/ может привести не только к ложным результатам экспериментального изучения хламидийных инфекций, но и существует опасность заражения* человека хлами-диозом от обезьян ввиду зооанропонозного характера возбудителей хламидий-ной.инфекции.

В'литературе практически нет данных отом, что обезьяны, имеют различного рода хламидийную патологию, за исключением исследований, начатых в последнее время [3]. Однако учитывая проведенные исследования распространения-» урогенитальных» инфекций при патологии беременности-и родов, можно заключить, что хламидиозы у обезьян изучены недостаточно. Выявление особенностей течения, распространения^ хламидийной инфекции в популяции-обезьян, роли Chlamydia trachomatis и Chlamydophila pneumoniae в патологии урогенитального тракта и органов дыхания,, унификация-методов детекции и идентификации возбудителей, изучение фенотипических признаков; филогенетического положения в.семействе Chlamydiaceae штаммов-хламидий; выделенных от обезьян, представляют собой научный интерес и могут служить.теоретической» и практической базой для понимания патогенеза клинических проявлений и совершенствования диагностики хламидийной инфекции у обезьян и человека.

Цель исследования

Определение роли Chlamydia trachomatis и Chlamydophila pneumoniae в спонтанной инфекционной патологии обезьян и установление их филогенетического положения в семействе Chlamydiaceae штаммов, вызывающих патологический процесс у обезьян; Задачи исследования

1. Определить естественное распространение Chlamydia trachomatis и Chlamydophila pneumoniae у низших обезьян разных видов с патологией ;урогениталь-ного тракта, органов дыхания и органов зрения.

2. Разработать способ? мультиплексной5 ИЦР.** диагностики; хламидийнош инфекг ции обезьян, вызванной видом» Chlamydophila pneumoniae и, Chlamydia trachomatis^ ш способ мультиплексной! ПЦР диагностики плазмидных ш бесплазмид-г ных, штаммов вида Chlamydia trachomatis:

3t. Выделить штаммы хламидий от обезьян и изучить их фенотипические осо-бенностшв«культуре: клеток.:

4. Провести молекулярноггенетическое" генотипирование штаммов Chlamydia trachomatis; выделенныхот обезьящ методамшПЦРги<1ЩРЩДРФ-анализа:

5. Провести молекулярно-генетическое: исследование- детерминант1 антибиоти-корезистентности методом ПЦР штаммов хламидий, выделенных от обезьян.

6. Провести молекулярно-генетические исследования штаммов хламидий, выделенных от обезьян, для установления их филогенетического положения в семействе Chlamydiaceae.

Научная новизна

Выявлено естественное инфицирование штаммами Ch. trachomatis ш Chi. pneumoniae низших обезьян разных видов» с патологией; органов репродуктивного тракта, органов дыхания и органов зрения.

Впервые разработан способ мультиплексной ПДР диагностики хлами-дийиой инфекции обезьян, вызванной видом Chlamydophila pneumoniae и Chlamydia trachomatis,. и способ мультиплексной ПЦР диагностики плазмидных и бесплазмидных штаммов вида Chlamydia trachomatis.

Впервые изучены фенотипические особенности штаммов,СМ. pneumoniae и Ch. trachomatis, выделенных от обезьян при культивировании их в культуре клеток.

Методами ПЦР и ПЦР-ПДРФ-анализа впервые выявлена принадлежность к генотипам штаммов Chlamydia trachomatis, выделенных от обезьян, что позволяет определить патогенетический потенциал течения хламидиоза;

Впервые* проведено' молекулярно-генетическое исследование детерминант антибиотикорезистентности штаммов Chl.pneumoniae и Ch. trachomatis, выделенных от обезьян, что позволяет конкретизировать схему лечения хламидиоза.

Впервые^ установлено филогенетическое' положение штаммов* Ghl. pneumoniae и Ch: trachomatis, выделенных от обезьян, в? семействе* Chlamydiaceae, а также родство ^данных изолятов с подобными, штаммами^ выделенными от человека, в сопоставимости со-штаммами; нуклеотидные последовательности которых представлены ^ электронной базе данных GenBank.

Практическая значимость

Предложен унифицированный* набор модифицированных лабораторных методов\ (цитологический, серологический, культуральный, молекулярно-генетический, биоинформационный анализ), комплексно оценивающий^ инфекционный процесс при спонтанном хламидиозе обезьян. Спонтанная хламидий-ная инфекция* низших обезьян может рассматриваться? как лабораторная модель, перспективная для совершенствования верификации возбудителя; лечебных и профилактических схем лечения.

Разработаны и предложены лабораторный способ мультиплексной ПЦР диагностики хламидийной инфекции обезьян, вызванной видом Chlamydophila pneumoniae и Chlamydia trachomatis, и способ мультиплексной ПЦР диагностики плазмидных и бесплазмидных штаммов вида Chlamydia trachomatis, защищенные Патентом на изобретение РФ «Способ диагностики хламидийной. инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления» № 2385946, зарегистрирован 10.04.2010, и Патентом на изобретение РФ «Способ прогнозирования манифестной или стертой формы хламидийной инфекции человека или обезьян и набор для его осуществления» № 2385945, зарегистрирован 10.04.2010.

Внедрение результатов работы

Результаты исследований и разработок внедрены в научных подразделениях Научно - исследовательского института медицинской приматологии Российской академии медицинских наук и используются в научной работе лаборатории клинической микробиологии и биотехнологии ФГУН МНИИЭМ им. Г.Н. Габричевского.

Положения, выносимые на защиту

1. Доказана эпизоотологическая значимость хламидиозов в спонтанной инфекционной патологии низших обезьян.

2. Впервые выявлена связь генотипических и фенотипических свойств возбудителей хламидиозов с патогенетическими механизмами и особенностями течения и проявления хламидийной инфекции у низших обезьян.

3. Установлено филогенетическое положение штаммов хламидий, выделенных от обезьян, в семействе Chlamydiaceae и подтверждено их родство со штаммами, выделенными от человека.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Слободенюк, Владимир Владимирович

Выводы

1. Установлена роль Ch. trachomatis и Chi. pneumoniae в развитии спонтанной инфекционной патологии низших обезьян.

2. Впервые разработанная мультиплексная ПЦР при диагностике хламидийной инфекции обезьян, вызванной видом Chi. pneumoniae и Ch. trachomatis, и мультиплексная ПЦР при детекции плазмидных и бесплазмидных штаммов вида Ch. trachomatis позволяют одновременно не только верифицировать возбудителей хламидиозов обезьян, но и осуществлять дифференциацию хламидий, оценивать вирулентность штаммов.

3. Предложенные условия оптимизации культивирования хламидий и усовершенствование системы их детекции в культуре клеток повышают диагностическую значимость и информативность культурального метода исследования хламидиозов.

4. Штаммы Ch. trachomatis с генотипом Е выделены от животных без проявления клинических признаков инфекции, но имеющих в анамнезе хронические; заболевания урогенитального тракта, а штаммы с генотипом G - от обезьян с выраженными клиническими признаками заболевания урогенитального тракта. Генотип G у обезьян вызывает патологию органов зрения и органов дыхания. Клиническое проявление инфекционного процесса напрямую зависит от гено-типических и фенотипических особенностей штаммов хламидий.

5. У штаммов Ch. trachomatis, выделенных от обезьян, выявлены гены устойчивости к тетрациклинам, но не определяются гены устойчивости к макролидам. У штаммов СМ. pneumoniae детерминанты устойчивости к тетрациклинам и макролидам не зафиксированы, что позволяет оптимизировать схему лечения хламидиоза обезьян.

6.Установлено место на филогенетическом дереве семейства Chlamydiaceae штаммов Ch. trachomatis и СМ. pneumoniae , выделенных от обезьян, их близкое эволюционное расположение с аналогичными видами, депонированными в электронной базе данных GenBank. Выявлено различие нуклеотидной последовательности 16S - 23 S срединного рибосомального участка и домена I 23 S рРНК плазмидосодержащих и бесплазмидных штаммов Ch. trachomatis, выделенных от человека и обезьян.

Практические рекомендации

Предложенные модифицированные культуральный и молекулярно-генетические методы для верификации хламидий позволяют провести объективную оценку генотипических и фенотипических свойств хламидий, а также всесторонне оценивать выраженность инфекционного процесса и прогнозировать исход хламидийной инфекции у приматов.

Спонтанная хламидийная инфекция обезьян может быть использована как модель для изучения хламидиоза человека.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Слободенюк, Владимир Владимирович, 2010 год

1. Адаскевич В.П. Заболевания; передаваемые половым путем: 2-е изд., пе-рераб. и доп. Витебск., 1997. 310 с.

2. Адаскевич В.П. Инфекции, передоваемые половым путем: руководство для врачей. Н. Новгород: Изд-во НГМА, 2004. - 416 с.

3. Аршба И.М. Распространение возбудителей урогенитальных инфекций у обезьян и их роль в патологии беременности и родов: Автореф. дис. канд. биол. наук. Сочи; 2008.

4. Ашмарин И.П., Воробьёв А.А. Статистические методы в микробиологических исследованиях. JL, 1962. — 180 с.

5. Воробьев А.А., Кривошеин Ю.С. Основы микробиологии, вирусологии и иммунологии. М., 2001. - 224 с.

6. Герасимова Н.М. Новая классификация хламидий и ее значение для практики //ИППП. -2001*. -№1. С. 14-18.

7. Глазкова JI.K., Акилов О.Е. Практические аспекты персистирующей" хламидийной инфекции // ИППП. 1999. - №4. - С. 29 - 34.

8. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер. с анг.-М., Практика. -1998.-459 с.

9. П.Глик Б., Пастернак Д. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. М.: Мир., 2002. - 598 с.

10. Гнутов И.Н. Клиника и диагностика генерализованной формы хламидиоза зоонозной природы у людей: Автореф. дис. докт. мед. наук. — М., 1981.

11. Гомберг. М.А., Поздняков О.Л., Соловьев A.M. Урогенитальная хлами-дийная инфекция: лечить или не лечить? // Consilium medicum.-2006.-T. 8, №4.-С. 21-25.

12. Гранитов В.М. Хламидиозы.-М.: Медициская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА., 2002. 192 с.

13. Дмитриев Г.А. Лабораторная диагностика бактериальных урогениталь-ных инфекций. М.: Медицинская книга, Н.Новгород: Издательство НГМА., 2003.-336 с.

14. Дмитриев Г.А., Киселев В.И., Орлова О.Е. и др. Лабораторная-диагностика урогенитального хламидиоза. Пособие для врачей. М. — 1999. - 19 с.

15. Дмитриев Г.А., Глазко И.И. Диагностика инфекций, передаваемых половым путем. М.: «Издательство БИНОМ», 2007. 320 с.

16. Зимин А.Л. Разработка метода специфической детекции и видовой дифференциации возбудителей хламидиозов на основе структурного полиморфизма гена отр2: Автореф. дис. канд. биол. наук. Ml, 2003.

17. Коваленко Е.В., Новицкая С.А., Назарова И.Н. Особенности иммунного статуса больных хламидиозом // II Всеросс. Науч.-практ. конф. «Полиме-разная цепная реакция* в диагностике и контроле лечения инфекционных заболеваний» М, 1998. - С. 20 - 21.

18. Ксенз ИЯ:, Почерняев К.Ф., Курман А.Ф. Способ определения ДНК возбудителей «хламидийных инфекций в мультиплексной полимеразнош цепной реакции. Патент UA 11834 U, 16.01.2006.

19. Куляш Г.Ю. Персистирующая урогенитальная инфекция: возможности и нерешенные вопросы лабораторной и клинической диагностики // ИППП. — 2003. — № 3. С. 3 — 8.

20. Лобзин Ю.В:, Лященко Ю.И., Позняк A.JL. Хламидийные инфекции. Руководство для врачей. СПб.: ООО «Издательство Фолиант», 2003. - 400 с.

21. Маликова М:В: Проблема хламидиозов в современных, условиях // Инфекционные болезни. Тернополь. 1998. - № 2. - С. 35 — 39:

22. Метельская В.А., Алешкин В.А., Зверев В.В. и др. Современные методьг лабораторной диагностики хламидиозов//Журн. микробиол. 2008. - № 4. - С. 111-117.

23. Могилевец Т.Л. Клинико-иммунологическая характеристика урогени-тальной хламидийной инфекции у женщин: Автореф. дис. канд. мед. наук. Санкт-Петербург, 2002.

24. Молочков, В.А. Урогенитальный хламидиоз. М.: Бином, 2006. - 208 с.

25. Мортон Р.С. Урогенитальная инфекция: переоценка данных и гипотезы II ИППП. 2000. - № 2. - С. 4 -15.

26. Мусина Е. А., Шипицына Е. В., Савичева А. М., и др. Значение хламидийной инфекции в развитии заболеваний репродуктивной системы // Журнал акушерства и женских болезней. 2006. — № 5. С. 32 — 33'.

27. Нурушева С.М. Урогенитальная хламидииная инфекция у женщин (кли-нико-экспериментальные лабораторные: исследования): Автореф. дис. докт. мед. наук. М., 1996.

28. Павлович С.А. Микробиология с иммунологией и вирусологией. Учебн. пособие для Мед. ВУЗов. Изд. 2:-Минск: Высш: Школа. 2008:

29. Плютто A.M. Выявление хламидийной инфекции по косвенным цитологическим.признакам// Клиническая лабораторная диагностика. 1998. №

30. Позняк A.JL, Лобзин Ю.В., Сидорчук С.Н. и др. Хламидийные поражения дыхательных; путей: распространенность, диагностика^ клинические особенности // Эпидемиология и инфекционные болезни. — 2002. — № 5. — С. 46-53.

31. Покровский В.И., Гнутов И.Н. О генерализованной? форме хламидиоза. зоонозной природы у людей. -М., 1982.-С. 23 -25:

32. Рищук С.В;, Коспоченко Д.Ф. Способ диагностики манифестной; и латентной форм хронического урогенитального хламидиоза у мужчин: Патент RU 2222018 С1, 06.06.2002.

33. Семенов В.М. Клинико-эпидемиологическая характеристика хламидиозов // Рос. мед. журн. 2000. - № 1. - С. 48-52.

34. Сидоренко М.Г. Статистика. Учебное пособие. М.: Форум., 2007. - 160 с.

35. Скрипкина Ю.К., Кубанова А.А., Аковбян В.А., и др. Проблема диагностики и лечения урогенитального хламидиоза в России // Антибиотики и химиотерапия. 1996. - Т. 41, № 2. - С. 5-8.

36. Шаткин А.А., Ильинский Ю.И., Покровский В.И., Гнутов И.Н. Хлами-диозы. Руководство по зоонозам. Л.: Медицина. - 1983. - С. 125-140.

37. Эйдельштейн И. А. Фундаментальные изменения в классификации хламидии и родственных им микроорганизмов, порядка Chlamydiales // Клин, микробиол. и антимикроб, химиотер. 1999. - Т. 1, № 1. - С. 5 - 11.

38. Эйдельштейн И.А., Эйдельштейн М.В., Нарезкина А.Д. Способ дифференциальной диагностики представителей семейства Chlamydiaceae. Патент RU 2245369 С1, 05.05.2003.

39. Эйдельштейн И.А., Эйдельштейн М.В., Нарезкина А.Д. Способ дифференциальной диагностики Chlamydia spp., Chlamydia pneumonia и возбудителей зоонозных хламидиозов. Патент RU 2241042 С1, 08.05.2003.

40. Юнкеров В.И., Григорьев С.Г. Математико-статистическая обработка данных медицинских исследований, 2-е изд., доп. СПб.: ВМедА., 2002. -266 с.

41. Amann R., Springer N., Schonhuber W., Ludwig W. at all. Obligate intracellular bacterial parasites of acanthamoebae related to Chlamydia spp. // Applied Environmental Microbiology. 1997. - Vol. 63. - P. 115 - 121.

42. Andersen P. Pathogenesis of lower respiratori tract infections due Chlamydia, Mycoplasma, Legionella and viruses // Thorax. 1998. - Vol. 53, N 4. - P. 302-307.

43. Anttila Т., Saikku P., Koskela P. et al. Serotypes of Chlamydia trachomatis and risk for development of cervical squamous cell carcinoma // JAMA. — 2001.-Vol. 285.- P. 47-51.

44. Azuma Y., Hirakawa H., Yamashita A., Cai T. at all. Genome sequence of the cat pathogen, Chlamydophila felis // DNA Research. 2006. - Vol. 13. - P. 15 -23.

45. Balin B.J., Gerard H.C., Arking E. J. et al. Identification and localization of Chlamydia pneumoniae in the Alzheimer's brain // Medical Microbiology and Immunology. 1998. - Vol. 187. - P. 23 - 42.

46. Bandea C.I., Kubota K., Brown T.M. et al. Typing of Chlamydia trachomatis strains from urine samples by amplification and sequencing the major outer membrane protein gene (ompl) // Sexually Transmitted Infections. 2001. -Vol. 77, N. 6.-P. 419-422.

47. Barwell C.F., Camb M.P. Laboratory infection of man with virus of enzootic abortion of ewes //Lancet. 1955. - Vol. 266, Issue 6905. - P. 1369 - 1370.

48. Bell T.A., Kuo C.-C., Wang S. P., and Grayston J. T. Experimental infection of baboons (Papio cynocephalus anubis) with Chlamydia pneumoniae strain 'TWAR' // Journal of Infection. 1989. - Vol. 19, Issue 1. - P. 47 - 49.

49. Birkelund S. and Stephens R.S. Construction of physical and genetic maps of Chlamydia trachomatis serovar L2 by pulsed-field gel electrophoresis // Journal of bacteriology. 1992. - Vol. 174, N. 9. - P. 2742 - 2747.

50. Birtles R. J., Rowbotham T. J., Storey C. et al. Chlamydia-like obligate parasite of free-living amoebae // Lancet. 1997. - Vol. 349, Issue 9056. - P. 891 -964.

51. Bodetti T.J., and Timms P. Detection of Chlamydia pneumoniae DNA and antigen in the circulating mononuclear cell fractions of Humans and Koalas // Infection and Immunity. 2000. - Vol. 68, N. 5. - P. 2744 - 2747.

52. Brenciani A., Bacciaglia A., Vecchi M. et al. Genetic Elements Carrying erm(B) in Streptococcus pyogenes and Association with tet{M) Tetracycline Resistance Gene // Antimicrobial agents and chemotherapy. — 2007. Vol. 51, N. 4.-P. 1209-1216.

53. Burton M.J., Holland M.J., Jeffries D. et al. Conjunctival chlamydial 16S ribo-somal RNA expression in trachoma: is chlamydial metabolic activity required for disease to develop? // Clinical Infectious Diseases. 2006. - Vol. 42, N. 4. -P. 463-470.

54. Bush R.M. and Everett K.D.E. Molecular evolution of the Chlamydiaceae // Int. journal of systematic and evolutionary microbiology. — 2001. Vol. 51, N. l.-P. 203-220.

55. Carlson J.H., Whitmire W.M., Crane D.D., Wicke L., Virtaneva K. The Chlamydia trachomatis Plasmid Is a Transcriptional Regulator of Chromosomal Genes and a Virulence Factor // Infection and Immunity. — 2008. Vol. 76, N. 6.-P. 2273-2283.

56. Carlson J.H., Porcella S.F., McClarty G., and Caldwell H.D. Comparative genomic analysis of Chlamydia trachomatis oculotropic and genitotropic strains // Infection and Immunity. 2005. Vol. 73, N. 10. - P. 6407 - 6418.

57. Chernesky M.A., Jang D., Lee H.H. et al. Diagnosis of Chlamydia trachomatis infections in men and women by testing first-void urine by ligase chain reaction // Journal of clinical microbiology. 1994. - Vol. 32, N. 11. - P. 2682 -2685.

58. Clarebout G. Real-time multiplex detection of three bacterial' species responsible for sexually-transmitted diseases. Patent WO 2007/137650 Al, 06.12.2007.

59. Crook Т., Bannister B. Acute transverse myelitis associated with Chlamydia pneumoniae infection // Journal of Infection-1992. —Vol. 2, N. 1. P.' 63 - 65:

60. Gomanducci M:, Ricci S:, Cevenini. R., Ratti G. Diversity of the Chlamydia"* trachomatis common plasmid in biovars with» different pathogenicity. // Plas-mid'. 1990! - N. 23. - P. 149 - 154.

61. Corsaro D;, Greub G. Pathogenic Potentialof NovelChlamydiae and'Diagnos-tic Approaches to Infections Due to. These Obligate Intracellular Bacteria// Clinical microbiology reviews. 2006. - Vol. 19, N. 2. - P: 283 - 297.

62. Cunningham Mi Compositions,.methods and kits for. determining the presence' of Chlamydophila1 pneumoniae in a test sample. Patent WO 2006/133385 A2, 14.1212006.

63. Dabiri H.f, Rezadehbashi M., Badami N. et al. Detection of Chlamydia pneumoniae in Atherosclerotic Plaques of Patients in «Tehran, Iran // Japanese journal! of infectious diseases. 2009: - Vol. 62, N. 3*. - P. 195 - 197.

64. Dugan J., Rockey D.D:, Jones L., Andersen A.A. Tetracycline Resistance in Chlamydia suis Mediated by Genomic Islands Inserted into the Chlamydial /wv-Like Gene // Antimicrobial agents and'chemotherapy. 2004: - Vol. 48, N. 10.-P. 3989 -3995'.

65. Edet E.E. The prevalence of Chlamydial trachomatis infection among gynaecological patients // British journal of clinical practice. 1993. - Vol. 47, NT. -P. 21-22.

66. Ellis R.W. Infection and coronary heart disease // Journal of medical microbiology. 1997. - Vol. 46. - P. 535 - 539.

67. Elnifro E.M., Cooper R. J., Klapper P.E. et al. Multiplex polymerase chain reaction for diagnosis of Viral and Chlamydial Keratoconjunctivitis // Investigative ophthalmology and visual science. 2000. - Vol. 41, N. 7. - P. 1818 — 1822.

68. Essig A., Rudolphi A., Heinemann M. et al. A Model of Genital Chlamydia trachomatis Infection Using Human Xenografts in Severe Combined Immuno-deficienc Mice // Infection and immunity. 1996. - Vol. 64, N. 6. - P. 2300 -2307.

69. Everett K. D., Bush R. M., Andersen A. A. Phylogenetic analysis of the codi-ny gene support the new Chlamydia taxonomy // 4 5th European Chlamydia Congress "Chlamydia 2000". Abstract book. - Helsinki. - 2000. - P. 5.

70. Everett K. D., Andersen A. A. The ribosomal intergenic spacer and domain I of the 23S rRNA gene are phylogenetic markers for Chlamydia spp. // Int. journal of systematic bacteriology. 1997. - Vol. 47, N. 2. - P. 446 473.

71. Falck G., Heyman L., Gnarpe J. et al. Chlamydia pneumonia (TWAR): a common agent in acute bronchitis // Scandinavian journal of infectious diseases. 1994. - Vol. 26, N. 2. - P. 179 - 187.

72. Falck G., Engstrand I., Gnarpe J., Gnarpe H. Association of Chlamydia pneumoniae with otitis media in children // Scandinavian journal of infectious diseases. 1998. - Vol. 30, N. 4. - P. 377 - 380.

73. Farencena A., Comanducci M. Characterization of A New Isolate of Chlamydia trachomatis Which Lacks the Common Plasmid and Has Properties of Biovar trachoma // Infection and Immunity. 1997. - Vol. 65, N. 7. - P. 2965 -2969.

74. Fryer R.H., Schwobe E.P., Woods M.L., Rodgers G.M. Chlamydia species infect human vascular endothelial cells and induce procoagulant activity // Journal of investigative medicine. 1997. - Vol. 45, N. 4. - P. 168 - 174.

75. Fukushi H., Hirai K. Proposal of Chlamydia pecorum sp. nov. for Chlamydia strains derived from ruminants // Int. journal of systematic bacteriology. — 1992. Vol. 42, N 2. - P. 306 - 308.

76. Gaydos C.A. Chlamydia pneumonia and its proposed link to multiple sclerosis: To be or not to be? // Neurology. 2001. - Vol. 56, N. 1. - P. 1126 - 1127.

77. Girjes A.A., Hugall A.F., Timms P., and Lavin M.F. Two distinct forms of Chlamydia psittaci associated with disease and infertility in Phascolarctos cine-reus (Koala) // Infection and Immunity.-1988.-Vol. 56, N. 8. P. 1897 - 1900:

78. Girjes A. A., Hugall A., Graham D. M. et al. Comparison of type I and type II Chlamydia psittaci strains infecting koalas (Phascolarctos cinereus) II Veterinary microbiology. 1993. - Vol 37, N. 1. - P. 65 - 83.

79. Girjes A.A., Carrick F.N., and Lavin M.F. Lipopolysaccharide biosynthesis genes in koala type I Chlamydia:cloning and characterization // Research in microbiology. 1997. - Vol. 148. - P. 413 - 425.

80. Glassick Т., Giffard P., and- Timms P. Outer membrane protein 2' gene sequences indicate that Chlamydia pecorum and Chlamydia pneumoniae cause infections in koalas // Systematic and applied microbiology. 1996. - Vol. 19; N. l.-P. 457-464.

81. Grayston J. Т., Kuo C.-C., Campbell L. A., and Wang S. Chlamydia pneumoniae sp. nov. for Chlamydia sp. strain TWAR // Int. journal of systematic and evolutionary microbiology. 1989. - Vol. 39; N. 2. - P. 88 - 90:

82. Grayston J.T., Kuo C.-C., Wang S.-P., and Altman J. A new Chlamydia psit-taci strain; TWAR, isolated in acute respiratory tract infection // New Eng. journabof medicine. 1986: - Vol. 315, N. 3. - P. 161- 168.

83. Gullsby K, Storm M;, and Bondeson K. Simultaneous Detection:of Chlamydophila' pneumoniae andlMycoplasma pneumoniae by Use of Molecular Beacons in a Duplex Real-Time PGR // Journal"of clinical microbiology. 2008. -Vol-46,N. 2.-P. 727-731.

84. Hackstadt Т., Scidmore-Carlson M.A., Shaw E.I., and Fischer E.R. The Chlamydia trachomatis IncA-protein is required for homotypic vesicle fusion // Cellular. Microbiology. 1999. - Vol. 1, N. 2. - P. 119 - 130.

85. Hahn-D:?L., Dodge R.W. and'Golubjatnikov R. Association, of Chlamydia, pneumoniae (strain TWAR) infection^ with .wheezing, asthmatic bronchitis, and adult-onset asthma // JAMA. 1991. - Vol. 266, N. 2. - P:225 - 230.

86. Haidl S., Ivarsson S., Bjerre I., Persson, K. Guillain Barre syndrome after Chlamydia pneumoniae infection // New Eng. journal of medicine. — 1992. -Vol. 326.-P. 576-577.

87. Harland R: M. In situ hybridisation: an improved whole-mount method for Xenopus embryos // Methods in cell biology 1991. — Vol. 36, N. 1. — P. 685 -695.

88. Hartley J. C., Kaye S., Stevenson S., Bennett J. et al. PCR Detection and Molecular Identification of Chlamydiaceae Species // Clinical microbiology. — 2001. Vol. 39, N. 9. - P. 3072 - 3079.

89. Heick E. Skriver. Chlamydia pneumoniae associated ADEM (acute disseminated encephalomyelitis) // European Journal of Neurology. - 2000. - Vol. 7, N. 1. - P. 435-438.

90. Hogan R. J., Mathews S. A., Mukhopadhyay S. Chlamydial persistence: beyond the Biphasic Paradigm // Infection and immunity. 2004. - Vol. 72, N. 4.-P. 1843- 1855.

91. Holland S.M., Taylor H., Gaydos C.A. et al. Experimental infection with Chlamydophila pneumonia in nonhuman primates // Infection and immunity. 1990. - Vol. 58, N. 3. - P. 593 - 597.

92. Hyldig-Nielsen J.J., Godskesen M.A. PNA probes for detection of Neisseria gonorrhoeae and Chlamydia trachomatis. Patent US 6,169,169 Bl, 02.01.2001.

93. Inman R.D., Chiu B. Synoviocyte-packaged chlamydia*trachomatis induces a chronic aseptic arthritis // Journal of clinical investigation. — 1998. Vol. 102, N. 10.-P: 1776-1782.

94. Kahane S., Everett K. D. E., Kimmel N., Friedman M. G. Simkania negeven-sis strain Z: growth, antigenic and genome characteristics // Int. journal of systematic bacteriology. 1999. - Vol. 49, N. 1. - P. 815 - 820.

95. Klint Mi, Fuxelius H.-H., Goldkuhl R.R. et al. High-Resolution Genotyping of Chlamydia trachomatis Strains by Multilocus Sequence Analysis // Journal of clinical microbiology. 2007. - Vol. 45, N. 5. - P. 1410 - 1414.

96. Koskela P., Anttila Т., Bjorge T. et al. (Chlamydia trachomatis infection as a risk factor for invasive cervical cancer // Int. journabof cancer. 2000. - Vol. 85, N. Г.-Р:35-39.

97. Kuo C.-C., Jackson L.A., Gampbell L.A., and Grayston J.T. Chlamydia pneumoniae (TWAR) // Clinical Microbiology Rev. 1995. - Vol. 8, № 4'. - P. 451-461.

98. Lampe M:F., Wilson C.B., Bevan M.J;, Starnbach M.N. Gammas interferon, production by cytotoxic T lymphocytes is required for resolution of Chlamy-dia trachomatis infection // Infection and immunity. 1998. - Vol. 66, N. 11. -P. 5457-5461.

99. Г15. bee H.H., Chernesky MIA'., xSchachter J. et al. Diagnosis of Chlamydia trachomatis genitourinary infection in women by ligase chain reaction assay of urine // Lancet. -1995. Vol. 345, Issue 8944. - P. 213 - 216.

100. Martin^ D.Hi, Koutsky L., Eschenbach D.A. et al. Prematurity and perinatal mortality inr pregnancies complicated by maternal Chlamydia trachomatis infections//JAMA-1982,-Vol. 247,N. 11. — P. 1585-1588.

101. Min-Chih Hsu, Pei-Yi" Tsai, Kow-Tong Chen, Lan-Hui Li. Genotyping of Chlamydia5 trachomatis from clinicalspecimens in Taiwan // Journal of medical microbiology. 2006. - Vol. 55, N. 3: - P. 301 - 308.

102. NortomR., Schepetiuk S., Кок T. Chlamydiaipneumoniae with endocarditis // Lancet. 1995: - Vol: 345, N. 8961. - P. 1376 - 1377.

103. Ossewaarde J. M., Rieffe M., Rozenberg Arska M. et al'. Development and clinical evaluation of a polymerase chain reaction test for detection of Chlamydia trachomatis // Journal of clinical microbiology. - 1992. - Vol. 30, N. 8. -P. 2122-2128.

104. Pal S., Hui W., Peterson E.M., de la Maza L.M. Factors influencing the induction of infertility in a mouse model of Chlamydia trachomatis ascending genital tract infection // Journal of medical microbiology. 1998: - Voh 47, N. 7. -P. 599-605.

105. Pannekoek Y., Arie-van der Endi, Eijk P.P. et al. Normal IncA Expression: and Fusogenicity of Inclusions in Chlamydia trachomatis Isolates with the incA I47T Mutation // Infection and immunity. 2001. - Vol. 69, N.7. - P. 4654-4656.

106. Patton D.L., and C.C. Kuo. Histopathology of Chlamydiatrachomatis salpingitis after primary and repeated- reinfections in the monkey subcutaneous, pocket model! // Journal of reproduction* and* fertility. 1989. - Vol. 85, N;l . -P. 647-656.

107. Patton D. L., Kuo C.C., Wang S.P. et al. Chlamydial infection in subcutaneous fimbrial transplants in cynomolgus and rhesus monkeys // Journal of infectious diseases. 1987. - Vol. 155, N. 1. - P. 229 - 235.

108. Patton D.L., Cosgrove Y.T., Kuo C.C., and Campbell bee Ann. Effects of Quinolone Analog CI-960 in a Monkey Model of Chlamydia trachomatis Salpingitis // Antimicrobial agents and chemotherapy. 1993. - Vol. 37, N. 1. -P. 8-13.

109. Patton D. L., Kuo C.-C., Wang S.-P., and Halbert S. A. Distal tubal obstruction induced by repeated Chlamydia trachomatis salpingeal infections in pig-tailed macaques // Journal of infectious diseases. 1987. - Vol. 155, N. 6. -P. 1292-1299.

110. Pedersen L.N., Kjaer H.O., Moller J. K. et al. High-resolution genotyping of Chlamydia trachomatis from recurrent urogenital infections // Journal of clinical microbiology. 2000. - Vol. 38, N. 8. - P. 3068 - 3071.

111. Peterson E.M., Markoff B.A., Schuchter J., de la Maza L.M. The 7, 5 kb plasmid present in Chlamydia trachomatis is not essential for the growth of this microorganism // Plasmid. 1990; - N. 23. - P. 144 - 148.

112. Poppert S., Essig A., Marre R. et al. Detection and Differentiation of Chlamy-diae by Fluorescence In Situ Hybridization // Applied and> environmental microbiology. 2002. - Vol. 68, N. 8. - P. 4081 - 4089.

113. Pudjiatmoko, Fukushi H., Ochiai Y., Yamaguchi Т., Hirai K. Phylogenetic analysis of the genus Chlamydia based1 on 16S rRNA gene sequences // Int. journal of systematic bacteriology. 1997. - Vol. 47, N. 2. - P. 425 - 431.

114. Read T. D., Brunham R. C., Shen C., at all. Genome sequences of Chlamydia trachomatis MoPn and Chlamydia pneumoniae AR39 // Nucleic acids research. 2000. - Vol. 28, N. 6. - P. 1397 - 1406.

115. Rodriguez P., Vekris A., Barbeyrac B: et al. Typing of Chlamydia trachomatis by restriction endonuclease analysis of the amplified major outer membrane protein gene // Journal of clinical microbiology. — 1991. Vol. 29, N: 6. - P. 1132-1136.

116. Ryan G., Abdella T.N., McNeeley S.G. et al. Chlamydiatrachomatis infection, in pregnancy and; effect of treatment on* pregnancy outcome // American journals obstetrics and,gynecology. 1990. - Vol: 1621 - P. 34 - 39:

117. Saikku P., Wang S. P:, Kleemola M. et ah An epidemic of mil& pneumonia due to an .unusual strain of Chlamydia psittaci II Journar of infectious diseases. 1985. - Vol: 151'. - P. 832 - 839:

118. Schifer H.G. Enteropathogenitat von Chlamydien // Deutsche medizinische Wochenschrift. 1994. Bd: 119, N. 117.-P. 1637- 1638.

119. Scidmore-Carlson M.A., Shaw Е.Г., Dooley C.A. et al. Identification and characterization of a Chlamydia trachomatis early operon encoding four novelun-clusion membrane proteins // Molecular microbiology. 1999. - Vol. 33- N. 4'.=-P. 753-765.

120. Schachter J., Ostler H.B., Meyer K. F. Human infection with the agent of feline pneumonitis //Lancet. 1969. - Vol. 1. - P. 1063 - 1065.

121. Schachter J., Stoner E., and Moncada J. Screening for chlamydial infections in women attending family planning clinics // Western journal of medicine. -1983.-Vol. 138.-P. 375-379.

122. Schachter J., Stamm W.E., Qiunn T.C. et al. Ligase chain reastion to detect Chlamydia trachomatis infection of the cervix // Journal of clinical microbiology. 1994. - Vol. 32, N.l 0. - P. 2540 - 2543.

123. Somani J., Bhullar V.B., Workowski K.A. et al. Multiple drug-resistant Chlamydia trachomatis associated with clinical treatment failure // Journal of infectious diseases. -2000. Vol. 181, N. 4. - P. 1421 - 1427.

124. Stamp J.T., Me Ewen A.D., Watt J.A., Nisbet J. Enzootic abortion in ewes; transmission of the disease // Vet. record. 1950. - Vol: 62. - P. 251 - 254.

125. Stephens, R.S. Chlamydia. Intracellular Biology // Pathogenesis and Immunity. Washington: ASM Press. 1999. - 321P.

126. Storey C., Lusher M., Yates P., and Richmond S. Evidence for Chlamydia pneumoniae of non-human origin // Journal of general microbiology. 1993. — Vol. 39.-P. 2621-2626.

127. Stothard D.R., Williams J.A. Identification of a Chlamydia trachomatis Sero-var E Urogenital Isolate Which Lacks the Cryptic Plasmid // Infection and immunity. 1998. - Vol. 66, N. 12. - P. 6010 - 6013.

128. Stratton C.W., Mitchell W.M., Sriram S. Does Chlamydia pneumoniae play a role in pathogenesis of multiple sclerosis? // Journal of medical microbiology. 2000. - Vol. 49, N. 1. - P. 1 - 3.

129. Suchland R.J., Rockey D.D., Weeks S.K. et al. Development of Secondary Inclusions in Cells Infected by Chlamydia trachomatis // Infection and immunity. 2005. - Vol. 73, N. 7. - P. 3954 - 3962.

130. Suchland R.J., Rockey D.D., Bannantine J.P., Stamm W.E. Isolates of Chlamydia trachomatis Lack IncA, a Protein Localized to the Inclusion Membrane // Infection and immunity. 2000. - Vol. 68, N. 1. - P. 360 - 367.

131. Suchland R.J., Stamm W.E. Simplified microtiter cell culture method for rapid immunotyping of Chlamydia trachomatis // Journal of clinical microbiology. -1991.-Vol. 29, N. 7.-P. 1333-1338.

132. Sweet R. L., Landers D.V., Walker C., and Schachter J. Chlamydia trachomatis infection and pregnancy outcome // American journal of obstetrics and gynecology. 1987. - Vol. 156. - P. 824 - 833.

133. Sziller I., Babula O., Ujhazy A. et al. Chlamydia trachomatis infection, Fallopian tube damage and a mannose-binding lectin codon 54 gene polymorphism // Human Reproduction. 2007. - Vol. 22, N.7. - P. 1861 - 1865.

134. Tamura K., Dudley J., Nei M. and Kumar S. MEGA 4: Molecular Evolutionary Genetics Analysis (MEGA) software version 4.0. // Molecular Biology and Evolutionary. 2007. - Vol. 24, N. 8. - P. 1596 - 1599.

135. Thom D. Lower respiratory tract infection with Chlamydia pneumonia // Archives of family medicine. 1994. - Vol. 3, N 9. - P. 828 - 832.

136. Thomas N.S., Lusher M., Storey C.C. and Clarke I.N. Plasmid diversity in Chlamydia II Microbiology. 1997. - Vol. 143. - P. 1847 - 1854.

137. Thomson N.R., Holden M.T., Carder C. et all. Chlamydia trachomatis: Genome sequence analysis of lymphogranuloma venereum isolates // Genome research.-2008.-Vol. 18, N. l.-P. 161-171.

138. Timms P. Novel diagnostic agents of chronic or persistent Chlamydial diseases and uses thereof. Patent WO 02/14516 Al, 21.02.2002.

139. Tracey J. Bodetti, Timms P. Detection of Chlamydia pneumoniae DNA and Antigen in the Circulating Mononuclear Cell Fractions of Humans and Koalas // Infection and immunity. 2000. - Vol. 68, N. 5. - P. 2744 - 2747.

140. Trama J., Mordechai E., Adelson M.E. Methods and compositions for detecting serotypes of Chlamydia trachomatis capable of causing lymphogranuloma venereum. Patent US2007269810 (Al), 22.11.2007.

141. Vanrompay D., Hoang T. Q. Т., Liselotte De Vos. Specific-Pathogen-Free Pigs as an Animal Model for Studying Chlamydia trachomatis Genital Infection // Infection and immunity. 2005. - Vol. 73, N. 12. - P. 8317 - 8321.

142. Ward M.E. The immunobiology and immunopathology of Chlamydial infections // Acta path, et microb. Scandinavica. 1995. - Vol. 103. - P. 769 - 796.

143. Wills J.M., Watson G., Lusher M. et al. Characterisation of Chlamydia psittaci isolated from a horse // Vet. Microbiol. 1990. - Vol: 24. - P. 11 - 19.

144. Yang Z.-P., Kuo C.-C., and Grayston J. T. A mouse model of Chlamydia pneumoniae strain TWAR pneumonitis // Infection and5 immunity. 1993": — Vol. 6Г, N. 5. - P. 2037-2040.

145. Yang Z.-P., Kuo C.-C., and Grayston Ji T. Systemic dissemination, of Chlamydia pneumoniae following' intranasal inoculation' in1 mice // Journal- of infectious diseases. 1995. - Vol. 171. - P. 736-738.

146. Yang Z.-P:, Cummings P.K., Patton D.L., and KuorC.-C. UltrastructuraHung pathology of experimental Chlamydia pneumoniae pneumonitis in mice // Journal of infectious diseases. 1994: - Vol. 170: - P. 464M67.

147. Zelin J. M., Robinson A. J. et al. Chlamydial ,urethritis in heterosexual men attending a genitourinary medicine clinic: prevalence, symptoms condom usage and partner change // Int. J. STD AIDS. 1995. - Vol. 6. - P. 27 - 30.

148. Zhongyu Li, Ding- Chen, Youmin Zhong, et al. The Chlamydial Plasmid-Encoded Protein- pgp3 Is Secreted into the Cytosol of Chlamydia-Infected Cells // Infection and immunity. 2008. - Vol. 76, N. 8. - P. 3415-3428.