Роль аутокринной активации FGF-сигнального пути в резистентности гастроинтестинальных стромальных опухолей к иматинибу тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Бикиниева Фирюза Фанисовна

• Бикиниева Фирюза Фанисовна
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Бикиниева Фирюза Фанисовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Гастроинтестинальные стромальные опухоли: эпидемиология, этиология и дифференциальная диагностика

1.2. Молекулярно-генетические особенности ГИСО

1.3. Рецепторные тирозинкиназы и сигнальные пути

1.4. Механизмы резистентности ГИСО к ИМ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объект и предмет исследования

2.2. Культивирование, пассирование и хранение клеточных культур

2.2. Химические соединения и антитела, использованные в работе

2.3. Оценка пролиферативной способности клеток с помощью системы RTCA iCELLigence

2.4. Анализ цитотоксической активности при помощи МТТ-теста

2.5. Определение жизнеспособности клеток методом окраски кристаллический фиолетовый

2.6. Анализ экспрессии белков методом иммуноблоттинга (вестерн-блоттинг)

2.7. Мультиплексный анализ цитокинов (MAGPIX)

2.8. Количественная полимеразная цепная реакция на экспрессию гена FGF-2

2.9. Оценка апоптоза TUNEL-методом

2.10. Оценка инвазивных и миграционных свойств опухолевых клеток

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Фенотипические характеристики клеток ГИСО, резистентных к таргетному препарату ИМ

3.2. ИМ вызывает изменения секретома ИМ-резистентных клеток ГИСО

3.3. FGF-2 ингибирует цитотоксическую активность ИМ в отношении ИМ -чувствительных клеток ГИСО

3.4. БОБ-2 лиганд усиливает процессы пролиферации, миграции и инвазии

клеток с признаками резистентности к ИМ

3.5. ИМ стимулирует процессы инвазии и миграции клеток ГИСО

ГЛАВА 4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

ПЕРСПЕКТИВЫ ДАЛЬНЕЙШЕЙ РАЗРАБОТКИ ТЕМЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Роль аутокринной активации FGF-сигнального пути в резистентности гастроинтестинальных стромальных опухолей к иматинибу»

Актуальность темы

Гастроинтестинальные стромальные опухоли (ГИСО) - распространенный тип опухолей в желудочно-кишечном тракте, происходящий из интерстициальных клеток Кахаля (пейсмейкеров ЖКТ) или клеток-предшественников. Эти опухоли включаются в группу мезенхимальных опухолей и широко изучаются в научных и клинических исследованиях [4, 6, 57]. Долгое время ГИСО ошибочно относили к группе лейомиом, лейомиосарком и лейомиобластом из-за ограниченных представлений об их морфологии и механизмах возникновения. Данное ошибочное представление о происхождении ГИСО являлось одним из основных факторов, обуславливающих неэффективность общепринятых подходов к консервативному лечению пациентов с ГИСО, в том числе, с неоперабельными и рецидивирующими формами заболевания [49, 88]. Данная печальная картина претерпела существенные изменения в лучшую сторону после обнаружения в данных новообразованиях специфической активирующей мутации гена тирозинкиназного рецептора с-К1Т, а также гена рецептора тромбоцитарного фактора роста 2 типа (PDGFR2А). В настоящее время проведение иммуногистохимического окрашивания на маркер с-К1Т (СD117) (а также выявление нового маркера DOG1) является общепризнанным диагностическим алгоритмом, позволяющим эффективно дифференцировать ГИСО от других видов мезенхимальных опухолей [29, 45, 91].

На сегодняшний день, в клинических рекомендациях существует классификация прогностических групп ГИСО на основании размеров, митотического индекса и локализации опухоли [45,78]. Традиционным методом терапии пациентов с операбельными новообразованиями является резекция новообразования с последующим назначением в адъювантном режиме таргетной терапии препаратами, ингибирующими активность рецепторных тирозинкиназ, в том числе, С-К1Т. В настоящее время лекарственным препаратом первой линии

терапии ГИСО является иматиниба мезилат (ИМ)1, который показал превосходные клинические результаты как в отношении местно-распространенных, так и неоперабельных, рецидивирующих и метастатических форм ГИСО. Этот факт имеет важное практическое значение, так как до внедрения ИМ в клиническую практику прогноз пациентов с диссеминированными и неоперабельными формами ГИСО был крайне неудовлетворительным по причине, доказанной химиорезистентности данных новообразований к широкому спектру современных химиопрепаратов. Именно поэтому появление таргетных препаратов, ингибирующих активацию KIT-сигнального пути, имело революционные последствия для пациентов с данным онкологическим заболеванием [11, 31].

Тем не менее, спустя полтора-два года у большинства пациентов с различными формами ГИСО начинает развиваться устойчивость к данному лекарственному препарату, что проявляется в увеличении объема и размеров первичного опухолевого очага и появлении новых метастатических поражений на фоне проводимой таргетной терапии ИМ. Вышеизложенное является основным фактором, ограничивающим более длительную продолжительность таргетной терапии ИМ и диктует необходимость пересмотра дальнейшей тактики лечения данных пациентов [68]. Именно неуклонно развивающаяся вторичная резистентность ГИСО к ИМ послужила поводом для многочисленных дискуссий по поводу целесообразности продолжения терапии ИМ данным больным, в том числе, необходимости в повышении дозы данного таргетного препарата [79].

В настоящее время доказано клиническими исследованиями, что, если заболевание продолжает прогрессировать во время терапии ИМ, данным пациентам рекомендовано последовательное назначение препаратов второй, третьей и четвертой линии — сунитиниб2, регорафениб3 и рипретиниб4, соответственно [45, 78]. Одним из оснований для назначения данных препаратов является изменение молекулярно-генетического профиля опухоли, заключающееся

1 Торговое название - Гливек

2 Торговое название - Сутен

3 Торговое название - Стривага

4 Торговое название - Квинлок

в формировании вторичных мутаций с-К1Т или РООЯЕЛ (мутации взаимоисключающие), которые приводят к снижению противоопухолевой активности ИМ. Несмотря на успешные результаты, достигнутые при использовании лекарственных препаратов второй, третьей и четвертой линий терапии, у большинства пациентов с ГИСО, эти положительные эффекты обычно являются непродолжительными. У большинства пациентов по-прежнему наблюдается прогрессирование заболевания через 5-6 месяцев после смены одного таргетного препарата на другой. Это ведет к ухудшению качества жизни и сокращению общей продолжительности жизни, так особенно у пациентов с неоперабельными и метастатическими формами ГИСО. [65]

Результаты многочисленных исследований проведенных, в том числе, нашей научной группой, а также клинических наблюдений за данными пациентами, свидетельствуют о многообразии механизмов формирования вторичной резистентности ГИСО к вышеуказанным препаратам, что, в свою очередь, подчеркивает научно-практическую значимость исследований, направленных на понимание механизмов патогенеза данного заболевания и формирования устойчивости опухоли к действию таргетных препаратов [19,48,82,109].

Было также показано, что механизмы резистентности ГИСО к таргетным препаратам не ограничиваются мутациями в генах с-К1Т или РООЯЕЛ и существует множество других механизмов, обуславливающих резистентность ГИСО к ИМ. К таковым изменениям относятся усиление экскреции таргетных препаратов из опухолей, изменение их фармакодинамики, а также активация альтернативных сигнальных каскадов, которые регулируют пролиферативную способность опухолевых клеток и ингибируют процессы их программированной клеточной гибели [20, 48, 80].

Исследование нарушений FGF-сигнального пути при различных злокачественных новообразованиях является одной из наиболее активно исследуемых областей как в экспериментальной, так и клинической онкологии. Было показано, что активация FGF-сигнального пути способствует усилению пролиферативного индекса опухолей и способна модулировать их

чувствительность к действию многих лекарственных препаратов: в том числе, таргетных [82, 84, 87]. Данные исследования позволили выявить новые молекулярные механизмы приобретенной резистентности к ингибиторам тирозинкиназ (ИТК) и способствовали разработке новых стратегий для преодоления лекарственной устойчивости опухолей. Так как в настоящее время ингибиторы рецепторных и нерецепторных тирозинкиназ широко применяются в практической онкологии, изучение механизмов резистентности к вышеуказанным препаратам является одной из важных научных задач в понимании процессов прогрессирования злокачественных новообразований и преодолении неизбежно развивающейся лекарственной устойчивости опухолей [89]. В качестве примера, в лечении пациентов с ГИСО одним из перспективных подходов является комбинированное применение препаратов, которые ингибируют аберрантную активацию KIT- и FGF-сигнальных путей. Это может быть перспективным для пациентов, у которых уже развилась резистентность опухоли к ИТК, действие которых было направлено на селективное ингибирование KIT-сигнального пути [54, 62].

Степень разработанности темы исследования

Изучение роли активации FGF-сигнального пути в возникновении устойчивости злокачественных опухолей к химио- и таргетной терапии в настоящее время является одной из наиболее перспективных исследовательских областей в экспериментальной и клинической онкологии. Подобные исследования могут привести к разработке новых подходов, направленных на преодоление лекарственной устойчивости опухолей. В настоящее время особое внимание уделяется изучению роли гиперэкспрессии и активирующих мутаций всех 4 -х типов рецепторов к фактору роста фибробластов (FGFR) [26, 90], а также соответствующих лигандов, в первую очередь, FGF-2 [34, 66]. Несмотря на этот очевидный факт, молекулярные механизмы активации и ингибирования FGF -сигнального пути в ГИСО, и их роль в прогрессировании данного заболевания являются малоизученными. Результаты нашего исследования иллюстрируют признаки активации FGF-сигнального пути в разных клеточных линиях ГИСО, в

том числе, с признаками приобретенной устойчивости к таргетному препарату ИМ [55, 82]. Несмотря на это, роль аутокринной активации вышеуказанного сигнального пути в формировании резистентности ГИСО к ИМ, оставалась до настоящего времени неизученной, что и явилось основной предпосылкой для проведения настоящего исследования. На наш взгляд, изучение данного вопроса поможет разработать и внедрить новые эффективные подходы в лечении ГИСО для преодоления резистентности этих опухолей к уже существующим терапевтическим стратегиям, основанным на применении ИТК.

Цель исследования

Исследовать механизмы активации FGF-сигнального пути в гастроинтестинальных стромальных опухолей (ГИСО) и их роль в резистентности к иматинибу мезилату (ИМ).

Задачи исследования:

1. Получить субклон клеточной линии ГИСО, резистентный к иматинибу мезилату (ИМ), и провести сравнительный анализ чувствительности к ИМ у ИМ -чувствительных и резистентных клеточных линий ГИСО.

2. Исследовать изменения в секретоме ИМ-чувствительных и резистентных ГИСО на фоне ингибирования KIT-сигнального пути.

3. Изучить роль аутокринных механизмов в регуляции FGF-сигналлинга в ИМ-резистентных клеточных линиях ГИСО in vitro.

4. Оценить способность экзогенного FGF-2 лиганда регулировать процессы пролиферации, инвазии, миграции и апоптоза клеток ГИСО, подвергнутых воздействию таргетного препарата ИМ.

5. Выявить роль активации FGF-сигнального пути в процессах инвазии и миграции опухолевых клеток, а также на фоне ИМ-индуцированного ингибирования KIT-сигнального пути.

Научная новизна

В результате проведенных исследований были впервые получены данные об изменениях в секретоме клеток ГИСО, находящихся под воздействием таргетного препарата ИМ. Данные изменения относились исключительно к клеткам ГИСО с

фенотипическими признаками резистентности к ИМ и проявлялись в усилении продукции некоторых хемокинов и цитокинов под действием данного таргетного препарата. Мы получили новые данные, свидетельствующие о том, что ИМ способен стимулировать синтез фактора роста фибробласта 2 типа (FGF-2) в клетках ГИСО, которые стали устойчивыми к действию ИМ. Аналогичные изменения фенотипа опухолевых клеток наблюдались при ингибировании KIT-сигнального пути c использованием соответствующих коротких интерферирующих РНК (киРНК). Кроме того, мы впервые обнаружили, что ИМ стимулирует процессы инвазии и миграции в устойчивых к ИМ клетках ГИСО. Эти эффекты являлись следствием аутокринной активации FGF-сигнального пути в клетках ГИСО, так как нейтрализация FGF-2 лиганда полностью нивелировала вышеуказанные эффекты ИМ. Таким образом, полученные результаты впервые иллюстрируют процессы ИМ-индуцированной аутокринной активации FGF-сигнального пути в клетках ГИСО, что, в свою очередь, обеспечивает их резистентность к таргетному препарату ИМ. Данный факт открывает новые перспективы для изучения клинической эффективности ингибиторов FGF-сигнального пути в лечении пациентов с ГИСО, прогрессирующими на фоне продолжающейся терапии ИМ.

Теоретическая и практическая значимость Представленные в диссертационном исследовании данные расширяют наше понимание механизмов развития устойчивости ГИСО и возникновения вторичной резистентности к препарату ИМ. Резистентность ГИСО к ИМ может являться следствием аутокринной активации FGF-сигнального пути, которая осуществляется благодаря способности вышеуказанного таргетного препарата индуцировать продукцию опухолевыми клетками фактора роста фибробластов 2 типа (FGF-2) и, таким образом, стимулировать процессы их инвазии и миграции. Полученные экспериментальные данные могут способствовать разработке новых стратегий лечения пациентов с ГИСО, у которых развилась вторичная резистентность к ИМ на фоне отсутствия вторичных мутаций в генах KIT или PDGFR2A. Возможность блокирования FGF-сигнального пути с использованием

ингибиторов тирозинкиназных рецепторов и моноклональных антител может быть рассмотрена в качестве перспективного терапевтического подхода для данных пациентов. Кроме того, изучение уровня экспрессии и концентрации FGF-2 как в самих злокачественных новообразованиях, так и сыворотке пациентов, получающих лечение ИМ, может быть использовано в качестве перспективного предикторного маркера формирующейся резистентности опухоли к данному таргетному препарату.

Положения, выносимые на защиту

1. Активация FGF-сигнального пути в ГИСО, резистентных к иматинибу мезилату, происходит аутокринным путем и обусловлена гиперпродукцией FGF-2 лиганда опухолевыми клетками под действием данного таргетного препарата.

2. Иматиниба мезилат усиливает миграционные и инвазивные характеристики ИМ-резистентных ГИСО посредством БОР-2-опосредованной активации FGF-сигнального пути, что является новым механизмом прогрессирования ГИСО на фоне проводимой таргетной терапии иматинибом мезилатом.

Личное участие

Все разделы работы выполнены лично автором. На основании проведенного анализа отечественных и зарубежных литературных данных, автором сформулирована концепция работы, сформулирован план ее выполнения. Автор освоил методы, применяемые для получения и оценки результатов. Исследование включало в себя: культивирование клеточных линий, проведение иммуноблоттинга, теста оценки пролиферации клеток, оценка цитокинового профиля и анализа миграционных и инвазивных свойств опухолевых клеток. Оценка, статистическая обработка собранных данных, формулирование выводов и основных положений, выносимых на защиту автор выполнил самостоятельно.

Степень достоверности и апробация результатов

Достоверность результатов, полученных при проведении данного диссертационного исследования, основана на обширном количестве полученных экспериментальных данных, а также использовании современных методов

исследования, направленных на достижение поставленных целей и задач. Выводы, представленные в работе, а также практические рекомендации, основаны на фактических данных, наглядно представленных в виде иллюстративных рисунков и таблиц. Анализ полученных экспериментальных данных и их достоверность подтверждается использованием современных и соответствующих методов обработки полученной информации.

Основные результаты исследования были апробированы, представлены и обсуждены на следующих научно-практических конференциях и конгрессах: 12-я ежегодная международная конференция общества клинических онкологов (г. Сеул, Корея, 2019 г.), 5-я Всероссийская конференция по молекулярной онкологии (г. Москва, Россия, 2019 г.), 2-й Российско-Британской конференции молодых медиков (г. Кембридж, Великобритания, 2020 г.). Кроме того, результат исследования был представлен на 27-й Международной научно-практической конференции молодых ученых «Белые цветы» ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России (г. Казань, Россия, 2021г.) и на Поволжском онкологическом форуме КГМА - филиал ФГБОУ ДПО РМАНПО Минздрава России (г. Казань, Россия, 2022г.).

Научные материалы, представленные в диссертации, активно применяются в учебном процессе кафедры общей патологии ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России, кафедры биохимии, биотехнологии и фармакологии ФГАОУ ВО «Казанский (Приволжский) федеральный университет» и кафедры фармакологии ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России (г. Пермь) при изучении дисциплин: «Патологическая физиология», «Патология», «Фармакология», «Биохимия злокачественного роста» и «Молекулярные основы канцерогенеза» у студентов 3 курса лечебного, педиатрического, медико-биологического и фармацевтического факультетов. Кроме того, они находят применение в исследовательской работе молодежной научной лаборатории «Молекулярных механизмов химиорезистентности опухолей» ФГБОУ ВО Казанский ГМУ Минздрава России.

Научная специальность, которой соответствует диссертация

Диссертация соответствует паспорту специальности 3.3.3 - Патологическая физиология, направление подготовки научно-педагогических кадров 30.06.01 Фундаментальная медицина. Результаты диссертации соответствуют области исследования специальности: 1. Изучение механизмов онкогенеза ГИСО сопряжено с фундаментальными достижениями в области молекулярной биологии, биохимии и генетики. 2. Исследование роли цитокинов в пролиферативной активности опухолевых клеток; 3. Изучение патогенетической роли аутокринной активации FGF-FGFR- сигнального пути в прогрессировании ГИСО.

Публикации

Основные результаты диссертационного исследования отражены в 11 научных работах, из них 5 рецензируемых научных изданиях, определенных ВАК Министерства науки и высшего образования Российской Федерации, в том числе 5 в научных журналах, индексируемых в базе данных Scopus, WoS. Получен патент Российской Федерации на изобретение (регистрационный номер: 2765545, дата регистрации: 01.02.2022).

Благодарности

Диссертант благодарит коллектив молодёжной лаборатории «Молекулярных механизмов химиорезистентности опухолей» ФГБОУ ВО Казанского ГМУ Минздрава России и лаборатории цитогенетики отдела молекулярной биологии опухоли НИИ канцерогенеза ФГБУ «НМИЦ онкологии им. Н.Н. Блохина» Минздрава России за консультативную помощь в проведении экспериментальных исследований.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Гастроинтестинальные стромальные опухоли: эпидемиология, этиология и дифференциальная диагностика

ГИСО являются опухолями мезенхимального происхождения, которые возникают из пейсмекерных клеток Кахаля в желудочно-кишечном тракте (ЖКТ). ГИСО характеризуются разнообразными клиническими особенностями и имеют злокачественный характер [1, 13, 15]. ГИСО относится к семейству сарком мягких тканей (СМТ), но из-за особенностей их гистогенеза, клинических характеристик и специфической терапии включают в отдельную группу сарком [9, 77].

Наиболее распространенные локализации ГИСО: желудок (50-60% случаев), тонкая кишка (30-35% случаев), толстая кишка и прямая кишка (5% случаев), а в пищеводе их обнаруживается еще реже (<1% случаев). Также известны другие расположения ГИСО, например, в сальнике, брыжейке или забрюшинном пространстве (<5% всех ГИСО) [9, 10]. Такие ГИСО называются вне желудочно-кишечного тракта (extra-gastrointestinal stromal tumor, E-GIST). Около 40% всех ГИСО на момент обнаружения имеют метастазы в печени, сальнике, брюшине и другие внутрибрюшинные пространства [57].

ГИСО составляет одну пятую часть всех СМТ, что и делает наиболее распространенными саркомами ЖКТ [5, 14]. Средняя частота заболеваемости данного вида опухоли колеблется от 10 до 22 случаев на 100 000 населения в год в зависимости от страны [57]. Такая частота заболеваемости обусловлено, во -первых, проблемами диагностики данного заболевания, так как методы со временем совершенствуются, и это приводит к различным вариациям в диагностике. Во-вторых, во многих канцер-регистрах ГИСО чаще стали относит к злокачественным, либо потенциально злокачественным видам опухолей [47].

Важно отметить, что в последней классификации Всемирной организации здравоохранения (ВОЗ) 2020 года все ГИСО, независимо от размера, локализации и митотического индекса классифицируют как злокачественные [77].

Заболеваемость ГИСО у мужчин встречается чаще, чем у женщин и обычно наблюдается у пожилых пациентов (средний возраст составляет 60-65 лет). Детские

формы ГИСО встречается очень редко и в основном представляют собой подгруппу опухолей, отличающихся друг от друга как по молекулярно-генетическому статусу, так и по клиническому течению. Для данного типа опухолей характерно, что они не связаны с мутациями в генах KIT/PDGFRA, а в основном вызваны изменениями в генах, отвечающих за комплекс сукцинатдегидрогеназы (SDH). Такие опухоли часто обнаруживаются в разных частях желудка и иногда могут давать метастазы в лимфатические узлы [69].

Большинство ГИСО являются спорадическими и не имеют установленных факторов риска. Однако, некоторые ГИСО возникают в результате специфических опухолевых синдромов [45].

Семейная форма ГИСО

Семейная форма ГИСО с аутосомно-доминантными мутациями KIT или PDGFRA встречается редко и проявляется в раннем возрасте вместе с другими сопутствующими признаками. Пигментные пятна на коже, пигментная крапивница и диффузная гиперплазия интрестициальных клеток Кахаля в стенке кишечника могут наблюдаться в случаях мутации KIT [37]. В то время как у пациентов с мутациями PDGFRA кроме наличия множественных желудочных ГИСО могут наблюдаться воспалительные фиброзные полипы [38].

Синдром триады Карнея

Сочетание ГИСО желудка, параганглиомы и хондромы легких - известна как триада Карнея. Данный синдром представляет собой редкий ненаследственный синдром, для которого характерно начало в подростковом возрасте с преобладанием лиц женского пола. Синдром тирады Карнея характеризуется гиперметилированием гена SDHC (ферментного комплекса сукцинат-дегидрогенезы, SDH) и не имеет мутации в гене KIT и PDGFRA [41].

Синдром Карнея-Стратакиса

Синдром Карнея-Стратакиса, характеризуется мутацией одного из субъединиц ферментного комплекса сукцинат дегидрогеназы (SDH). Клинически проявляется мультифокальным поражением желудка и параганглиомой с возможными

метастазами в лимфатические узлы. Данный синдром возникает в позднем подростковом возрасте и может проявится до 30 лет [27].

Нейрофиброматоз I типа

Нейрофиброматоз I типа (нейрофиброматоз фон Реклингхаузена) характеризуется мутацией гена НФ1[4]. Развивается один или несколько ГИСО, располагающимся в основном в тонкой кишке. При иммуногистохимическом окрашивании положительны на KIT, но не имеют мутации в гене KIT [44].

Семейные случаи с аутосомно-доминантными мутациями KIT или PDGFRA в половых клетках могут иметь не только множественные ГИСО, но и сопутствующие признаки. Эти признаки могут включать другие опухоли или нарушения, которые могут быть унаследованы вместе с этими мутациями. Важно отметить, что такие случаи являются крайне редкими, и большинство ГИСО не связаны с аутосомно-доминантными мутациями KIT или PDGFRA в половых клетках. Пигментные пятна на коже, пигментная крапивница диффузная гиперплазия интерстициальных клеток Кахаля в стенке кишечника могут наблюдаться мутации KIT [37]. B то время как у пациентов с зародышевыми мутациями PDGFRA могут наблюдаться воспалительные фиброидные полипы в дополнение к множественным желудочным ГИСО и деформации рук [38].

Постановка и оценка риска

Частота митозов, размер опухоли и место расположения опухоли являются важными прогностическими факторами (желудочные ГИСО имеют лучший прогноз, чем ГИСО тонкого кишечника или прямой кишки) [11, 91]. Разрыв опухоли является дополнительным неблагоприятным прогностическим фактором и должен быть зарегистрирован, независимо от того, произошел ли он до или во время операции. В настоящее время мутационный статус не учитывается в классификациях риска, хотя некоторые характеризуется особенностью течения заболевания [58]. Среди пациентов с ГИСО, обнаруживающих мутацию PDGFRA в D842V, наблюдается благоприятный прогноз заболевания. Однако, у пациентов с делециями экзона 11 гена KIT, включающими кодоны 557-558, повторно

подтверждалась повышенная вероятность рецидива [86]. Эти данные были подтверждены многократно в различных исследованиях.

Американский объединенный комитет по онкологическим заболеваниям (AJCC) и Союз по международной борьбе с онкологическими заболеваниями (UICC) редко используют классификацию стадий, учитывая особенности истории болезни ГИСО. Вместо этого было предложено несколько классификаций для оценки риска рецидива при локализованной форме заболевания. Одной из широко применяемых классификаций является система, предложенная Институтом патологии вооруженных сил (AFIP), которая учитывает количество первичных митозов, размер опухоли и ее локализацию (т.е. три основных прогностических фактора для локализованных форм ГИСО) [63, 64]. На другой серии была разработана номограмма, использующая все три критерия [30]. При использовании номограммы важно принять во внимание, что митотический индекс и размер опухоли являются непрерывными переменными, поэтому необходимо правильно выбирать пороговые значения. Прогностические карты были созданы путем объединения данных определенного количества пациентов с ГИСО, которые не получали адъювантную терапию. В эти карты включены митотический индекс и размер опухоли в качестве непрерывных переменных. Важно отметить, что имеющиеся классификации риска в основном относятся к ГИСО с мутациями гена KIT [45].

Процедуры стадирования выбираются с учетом того, что большинство рецидивов поражают брюшину и печень. Трехфазная компьютерная томография (КТ) брюшной полости и малого таза с контрастным усилением является методом выбора для стадирования и последующего наблюдения. Магнитно-резонансная томография (МРТ) может быть альтернативной процедурой, особенно при гистиомах прямой кишки, когда МРТ дает лучшую информацию о предоперационном стадировании [53]. Дополнительно в обследование пациентов входят КТ грудной клетки и клинико-лабораторные исследования. Оценка поглощения фтордезоксиглюкозы (ФДГ) с использованием позитронно-эмиссионная томография (ПЭТ) или в сочетании с КТ или МРТ представляет

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бикиниева Фирюза Фанисовна, 2024 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ахметзянов Ф. Ш. Молекулярно-генетические особенности гастроинтестинальных стромальных опухолей / Ф. Ш. Ахметзянов, С. В. Петров, Д. Д. Халиков // Вопросы онкологии. - 2019. - ^ 65, № 1. - С. 69-76.

2. Ващенко В. И. Ингибиторы топопизомераз как лекарственные средства, механизм их действия / В. И. Ващенко // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2003. - Т. 2, № 4. - С. 2-14.

3. Галембикова А. Р. Механизмы резистентности гастроинтестинальных стромальных опухолей к иматинибу / А. Р. Галембикова, С. В. Бойчук // Казанский медицинский журнал. - 2018. - Т. 99, № 6. - С. 959-965.

4. Гастроинтестинальные стромальные опухоли / Е. А. Дубова, А. И. Щеголев, О. Д. Мишнев, Г. Г. Кармазановский // Медицинская визуализация. - 2007. - № 1.

- С. 25.

5. Клинико-морфологические характеристики пациентов гастроинтестинальной стромальной опухолью с дефицитом сукцинатдегидрогеназы / В. В. Югай, М. П. Никулин, Н. А. Козлов [и др.] // Вопросы онкологии. - 2022. - Т. 68, № 5. - С. 614-621.

6. Мазуренко Н. Н. Молекулярно-генетические особенности и маркеры гастроинтестинальных стромальных опухолей / Н. Н. Мазуренко, И. В. Цыганова // Успехи молекулярной онкологии. - 2015. - Т. 1, № 2. - С. 29-40.

7. Мечетнер Е. Б. Новые подходы к оценке экспрессии и функциональной активности Р-гликопротеина / Е. Б. Мечетнер // Биологические мембраны. - 2003.

- Т. 20, № 3. - С. 213-224.

8. Мутации генов с-ЫТ и PDGFRA и клинико-морфологические особенности стромальных опухолей желудочно-кишечного тракта / И. С. Беляков, О. А. Анурова, П. В. Снигур [и др.] // Вопросы онкологии. - 2007. - ^ 53, № 6. - С. 677681.

9. Никулин М. Л. Гастроинтестинальные стромальные опухоли : обзор

материалов ASCO 2010 / М. Л. Никулин, И. С. Стилиди // Современная онкология. - 2010. - T. 12, № 3. - С. 8-11.

10. Никулин М. П. Стромальная опухоль желудочно-кишечного тракта / М.П. Никулин // Эффективная фармакотерапия. - 2012. -T. 10, № 36-2. - С. 12-21.

11. Практические рекомендации по лекарственному лечению гастроинтестинальных стромальных опухолей / М. П. Никулин, П. П. Архири, Л. Ю. Владимирова [и др.] // Злокачественные опухоли. - 2019. - № 3 (S 2). - С. 477485. - URL: https: //www.rosoncoweb.ru/standarts/RUSSCO/2021/2021-29.pdf (дата обращения: 23.04.2023).

12. Прогностическое значение мутаций KIT и PDGFRA в гастроинтестинальных стромальных опухолях / И. В. Цыганова, И. С.Беляков, О. А. Анурова, Н. Н. Мазуренко // Молекулярная медицина. - 2015. - № 2. - С. 61-64.

13. Серяков А. П. Гастроинтестинальные стромальные опухоли / А. П. Серяков // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. - 2010. -№ 4. - С. 49-57.

14. Современные представления о молекулярных механизмах в онкогенезе гастроинтестинальных стромальных опухолей / Д. Ю. Гвалдин, Е. П. Омельчук, Н. Н. Тимошкина [и др.] // Вопросы онкологии. - 2020. - Т. 66. - № 1. - С. 13-22.

15. Стромальные опухоли желудочно-кишечного тракта : клинико-морфологические особенности, патогенез и современные подходы к лечению / И. С. Стилиди, П. П. Архири, О. А. Анурова, Н. Н. Мазуренко // Вестник Российской академии медицинских наук. - 2010. - № 2. - С. 46-52.

16. ETV1 is a lineage survival factor that cooperates with KIT in gastrointestinal stromal tumours / P. Chi, Y. Chen, C. R. Zhang [et al.] // Nature. - 2010. - Vol. 467, No. 7317. - Pр. 849-853. - URL: https: //www.nature.com/articles/nature09409 (date accessed: 03.10.2023).

17. 18FDG-Positron emission tomography for the early prediction of response in advanced soft tissue sarcoma treated with imatinib mesylate (Glivec®) / S. Stroobants, J.

Goeminne, M. Seegers [et al.] // European journal of cancer. - 2003. - Vol. 39, No. 14. -Pp. 2012-2020.

18. A mechanism of resistance to gefitinib mediated by cellular reprogramming and the acquisition of an FGF2-FGFR1 autocrine growth loop / K. E. Ware, T. K. Hinz, E. Kleczko [et al.] // Oncogenesis. - 2013. - Vol. 2, No. 3. - Pp. e39-e39.

19. A missense mutation in KIT kinase domain 1 correlates with imatinib resistance in gastrointestinal stromal tumors / L. L. Chen, J. C. Trent, E. F. Wu [et al.] // Cancer research. - 2004. - Vol. 64, No. 17. - Pp. 5913-5919.

20. A novel receptor tyrosine kinase switch promotes gastrointestinal stromal tumor drug resistance / S. Boichuk, A. Galembikova, P. Dunaev [et al.] // Molecules. - 2017. -Vol. 22, No. 12. - Pp. 2152.

21. A smooth muscle-derived, Braf-driven mouse model of gastrointestinal stromal tumor (GIST) : evidence for an alternative GIST cell-of-origin / J. Kondo, W. J. Huh, J. L. Franklin [et al.] // The Journal ofpathology. - 2020. - Vol. 252, No. 4. - Pp. 441-450.

22. Acquired resistance to imatinib in gastrointestinal stromal tumor occurs through secondary gene mutation / C. R. Antonescu, P. Besmer, T. Guo [et al.] // Clinical cancer research. - 2005. - Vol. 11, No. 11. - Pp. 4182-4190.

23. Activation of FGFR1ß signaling pathway promotes survival, migration and resistance to chemotherapy in acute myeloid leukemia cells / M. A. Karajannis, L. Vincent, R. Direnzo [et al.] // Leukemia. - 2006. - Vol. 20, No. 6. - Pp. 979-986.

24. Activation of the FGF2/FGFR1 autocrine loop for cell proliferation and survival in uveal melanoma cells / G. Lefevre, N. Babchia, A. Calipel [et al.] // Investigative ophthalmology & visual science. - 2009. - No. 3. - Pp. 1047-1057.

25. Aleksakhina S. N. Mechanisms of acquired tumor drug resistance / S. N. Aleksakhina, A. Kashyap, E. N. Imyanitov // Biochimica et Biophysica Acta (BBA)-Reviews on Cancer. - 2019. - Vol. 1872, No. 2. - Pp. 188310.

26. Brooks A. N. Molecular Pathways: Fibroblast Growth Factor Signaling : A New Therapeutic Opportunity in Cancer FGF/FGFR Signaling in Cancer / A. N. Brooks, E.

Kilgour, P. D. Smith // Clinical cancer research. - 2012. - Vol. 18, No. 7. - Pp. 18551862.

27. Clinical and molecular genetics of patients with the Carney-Stratakis syndrome and germline mutations of the genes coding for the succinate dehydrogenase subunits SDHB, SDHC, and SDHD / B. Pasini, S. R. Mc Whinney, T. Bei [et al.] // European Journal of Human Genetics. - 2008. - Vol. 16, No. 1. - Pp. 79-88. - URL: https: //www.nature.com/articles/5201904 (accessed: 05.05.2023).

28. Conventional and molecular cytogenetic characterization of a new human cell line, GIST-T1, established from gastrointestinal stromal tumor / T. Taguchi, H. Sonobe, S. Toyonaga [et al.] // Laboratory investigation. -2002. - Vol. 82, No. 5. - Pp. 663-665.

29. Current clinical management of gastrointestinal stromal tumor / K. Akahoshi, M. Oya, T. Koga, Y. Shiratsuchi // World journal of gastroenterology. - 2018. - Vol. 24, No. 26. - Pp. 2806-2817. - URL:https: //www.wjgnet.com/1007-9327/full/v24/i26/2806.htm (accessed: 17.05.2022).

30. Development and validation of a prognostic nomogram for recurrence-free survival after complete surgical resection of localised primary gastrointestinal stromal tumour : a retrospective analysis / J. S. Gold, M. Gonen, A. Gutiérrez [et al.] // The lancet oncology. - 2009. - Vol. 10, No. 11. -Pp. 1045-1052.

31. Din O. S. Treatment of gastrointestinal stromal tumor: focus on imatinib mesylate / O. S. Din, P. J. Woll // Therapeutics and clinical risk management. - 2008. - Vol. 4, No. 1. - Pp. 149-162.

32. Direct engagement of the PI3K pathway by mutant KIT dominates oncogenic signaling in gastrointestinal stromal tumor / B. Bosbach, F. Rossi, Y. Yozgat [et al.] // Proceedings of the National Academy ofSciences. - 2017. - Vol. 114, No. 40. - Pp. E8448-E8457.

33. Distinct role of fibroblast growth factor-2 and vascular endothelial growth factor on tumor growth and angiogenesis / R. Giavazzi, B. Sennino, D. Coltrini [et al.] // The American journal of pathology. - 2003. - Vol. 162, No. 6. - Pp. 1913-1926.

34. Dow J. K. Fibroblast growth factor 2 : its structure and property, paracrine function, tumor angiogenesis, and prostate-related mitogenic and oncogenic functions / J. K. Dow, R. W. de Vere White // Urology. - 2000. - Vol. 55, No. 6. - Pp. 800-806.

35. Efficacy and safety of sunitinib in patients with advanced gastrointestinal stromal tumour after failure of imatinib : a randomised controlled trial / G. D. Demetri, A. T. van Oosterom, C. R. Garrett [et al.] // The Lancet. - 2006. - Vol. 368, No. 9544. - Pp. 13291338.

36. Endocrine fibroblast growth factor FGF19 promotes prostate cancer progression / S. Feng, O. Dakhova, C. J. Creighton, M. Ittmann // Cancer research. - 2013. - Vol. 73, No. 8. - Pp. 2551-2562.

37. Familial gastrointestinal stromal tumor with hyperpigmentation : associationwith a germline mutation of the c-kit gene / H. Maeyama, E. Hidaka, H. Ota [et al.] // Gastroenterology. - 2001. - Vol. 120, No. 1. - Pp. 210-215.

38. Familial PDGFRA-mutation syndrome : somatic and gastrointestinal phenotype / P. N. Manley, S. Abu-Abed, R. Kirsch [et al.] // Human Pathology. - 2018. - Vol. 76. -Pp. 52-57.

39. FGF/FGFR signaling pathway involved resistance in various cancer types /

Y. Zhou, C. Wu, G. Lu [et al.] // Journal of Cancer. - 2020. - Vol. 11, No. 8. - Pp. 2000. - URL: https: //www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7052940/ (accessed: 03.10.2023).

40. Fibroblast growth factor (FGF) and FGF receptor-mediated autocrine signaling in non-small-cell lung cancer cells / L. Marek, K. E. Ware, A. Fritzsche [et al.] // Molecular pharmacology. - 2009. - Vol. 75, No. 1. - Pp. 196-207.

41. Gastric stromal tumors in Carney triad are different clinically, pathologically, and behaviorally from sporadic gastric gastrointestinal stromal tumors : findings in 104 cases / L. Zhang, T. C. Smyrk, W. F. Young Jr [et al.] // The American journal of surgical pathology. - 2010. - Vol. 34, No. 1. - P. 53.

42. Gastrointestinal stromal tumors / M. von Mehren, B. P. Rubin, D. B. Flieder, C. P. Raut // Textbook of Uncommon Cancer, 5th Edition. - Wiley-Blackwell, 2017. - Pp. 470-492.

43. Gastrointestinal stromal tumors in Japanese patients with neurofibromatosistype I / T. Nishida, M. Tsujimoto, T. Takahashi [et al.] // Journal of Gastroenterology. - 2016. - Vol. 51. - Pp. 571-578.

44. Gastrointestinal stromal tumors in patients with neurofibromatosis 1: a clinicopathologic and molecular genetic study of 45 cases / M. Miettinen, J. F. Fetsch, L.

H. Sobin, J. Lasota // The American journal of surgical pathology. - 2006. - Vol. 30, No.

I. - Pp. 90-96.

45. Gastrointestinal stromal tumours : ESMO-EURACAN-GENTURIS Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up / P. G. Casali, J. Y. Blay, N. Abecassis [et al.] // Annals of Oncology. - 2022. - Vol. 33, No. 1. - Pp. 20-33.

46. Van Glabbeke M. Comparison of two doses of imatinib for the treatment of unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors : a meta-analysis of 1,640 patients / M. Van Glabbeke // Journal of clinical oncology. - 2010. - Vol. 28, No. 7. - P. 1247.

47. Global epidemiology of gastrointestinal stromal tumours (GIST) : A systematic review of population-based cohort studies / K. S0reide, O. M. Sandvik, J. A. S0reide [et al.] // Cancer Epidemiology. - 2016. - Vol. 40. - Pp. 39-46. - URL: https: //www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1877782115002519 (accessed: 15.03.2023).

48. Gramza A. W. Resistance to Tyrosine Kinase Inhibitors in Gastrointestinal Stromal Tumors / A. W. Gramza, C. L. Corless, M. C. Heinrich // Clinical cancer research : an official journal of the American Association for Cancer Research. - 2009. - Vol. 15, No. 24. - Pp. 7510-7518.

49. Heinrich M. C. Gastric GI stromal tumors (GISTs) : the role of surgery in theera of targeted therapy / M. C. Heinrich, C. L. Corless // Journal of surgical oncology. - 2005.

- Vol. 90, No. 3. - Pp. 195-207.

50. Hubbard S. R. Juxtamembrane autoinhibition in receptor tyrosine kinases / S. R. Hubbard // Nature Reviews Molecular Cell Biology. - 2004. - Vol. 5, No. 6. - Pp. 464-471.

51. Hubbard S. R. Receptor tyrosine kinases : mechanisms of activation and signaling / S. R. Hubbard, W. T. Miller // Current opinion in cell biology. - 2007. - Vol. 19, No. 2. - Pp. 117-123.

52. iCELLi gence real-time cell analysis system for examining the cytotoxicity of drugs to cancer cell lines / L. Türker §ener, G. Albeniz, B. Din5, I. Albeniz // Experimental and therapeutic medicine. - 2017. - Vol. 14, No. 3. - Pp. 1866-1870.

53. Imaging surveillance of gastrointestinal stromal tumour : current recommendation by National Comprehensive Cancer Network and European Society of Medical Oncology-European Reference Network for rare adult solid cancers / F. Alessandrino, S. H. Tirumani, J. P. Jagannathan, N. H. Ramaiya // Clinical Radiology. -2019. - Vol. 74, No. 10. - Pp. 746-755.

54. Inhibition of FGF-FGFR and VEGF-VEGFR signalling in cancer treatment /

G. Liu, T. Chen, Z. Ding [et al.] // Cell Proliferation. - 2021. - Vol. 54, No. 4. - Pp. e13009.

55. Inhibition of FGFR2-signaling attenuates a homology-mediated dna repair in gist and sensitizes them to DNA-topoisomerase II inhibitors / B. Sergei, D. Pavel, G. Aigul [et al.] // International Journal of MolecularSciences. - 2020. - Vol. 21, No. 1. - URL: https: //www.mdpi.com/1422- 0067/21/1/352 (accessed: 11.03.2020).

56. Gastrointestinal stromal tumours / J-Y. Blay, Y-K. Kang, T. Nishida, M. von Mehren // Nature Reviews: Disease Primers. - 2021. - Vol. 7, No. 1. - P. 22.

57. Joensuu H. Gastrointestinal stromal tumour / H. Joensuu, P. Hohenberger, C. L. Corless // The Lancet. - 2013. - Vol. 382, No. 9896. - Pp. 973-983.

58. KIT, PDGFRA, and BRAF mutational spectrum impacts on the natural history of imatinib-naive localized GIST / S. Rossi, D. Gasparotto, R. Miceli [et al.] // The

American journal of surgical pathology. - 2015. - Vol. 39, No. 7. - Pp. 922-930.

59. KIT oncogenic signaling mechanisms in imatinib-resistant gastrointestinal stromal tumor: PI3-kinase/AKT is a crucial survival pathway / S. Bauer, A. Duensing, G. D. Demetri, J. A. Fletcher // Oncogene. - 2007. - Vol. 26, No. 54. - Pp. 7560-7568.

60. Late resistance to imatinib therapy in a metastatic gastrointestinal stromal tumour is associated with a second KIT mutation / T. Wakai, T. Kanda, S. Hirota [et al.] // British Journal of Cancer. - 2004. - Vol. 90, No. 11. - Pp. 2059-2061.

61. Lemmon M. A. Cell signaling by receptor tyrosine kinases / M. A. Lemmon,

J. Schlessinger // Cell. - 2010. - Vol. 141, No. 7. - Pp. 1117-1134.

62. Liu S. Emerging strategies for the improvement of chemotherapy in bladder cancer: Current knowledge and future perspectives / S. Liu, X. Chen, T. Lin // Journal of advanced research. - 2022. - Vol. 39. - Pp. 187-202.

63. Miettinen M. Gastrointestinal stromal tumors : pathology and prognosis at different sites / M. Miettinen, J. Lasota // Seminars in diagnostic pathology. - 2006. -Vol. 23, No. 2. - Pp. 70-83.

64. Miettinen M. Gastrointestinal stromal tumors: review on morphology, molecular pathology, prognosis, and differential diagnosis / M. Miettinen, J. Lasota // Archives of pathology & laboratory medicine. - 2006. - Vol. 130, No. 10. - Pp. 1466-1478.

65. Mohammadi M. Systemic therapy of advanced/metastatic gastrointestinal stromal tumors: an update on progress beyond imatinib, sunitinib, and regorafenib / M. Mohammadi, H. Gelderblom // Expert Opinion on Investigational Drugs. - 2021. - Vol. 30, No. 2. - Pp. 143-152.

66. Molecular and clinical significance of fibroblast growth factor 2 (FGF2/bFGF) in malignancies of solid and hematological cancers for personalizedtherapies / M. R. Akl, P. Nagpal, N. M. Ayoub [et al.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7, No. 28. - Pp. 44735. -URL: https: //www.oncotarget.com/article/8203/text/ (accessed: 23.04.2023).

67. Molecular subtypes of KIT/PDGFRA wild-type gastrointestinal stromal tumors:

a report from the National Institutes of Health Gastrointestinal StromalTumor Clinic / S. A. Boikos, A. S. Pappo, J. K. Killian [et al.] // JAMA oncology. - 2016. - Vol. 2, No. 7.

- Pp. 922-928.

68. Nishida T. Tyrosine kinase inhibitors in the treatment of unresectable or metastatic gastrointestinal stromal tumors. / T. Nishida, T. Doi, Y. Naito // Expert opinion on pharmacotherapy. - 2014. - Vol. 15, No. 14. - Pp. 1979-1989. - URL: https: //www.tandfonline.com/doi/full/10.1517/14656566.2014.937707 (accessed: 23.04.2023).

69. Pappo A. S. Pediatric gastrointestinal stromal tumors / A. S. Pappo, K. A.Janeway // Hematology/oncology clinics of North America. - 2009. - Vol. 23, No. 1. - Pp. 15-34.

70. PDGFRA mutations in gastrointestinal stromal tumors: frequency, spectrum and in vitro sensitivity to imatinib / C. L. Corless, A. Schroeder, D. Griffith [et al.] // Journal of clinical oncology. - 2005. - Vol. 23, No. 23. - Pp. 5357-5364.

71. Prognostic value of KIT/PDGFRA mutations in gastrointestinal stromal tumours (GIST) : Polish Clinical GIST Registry experience / A. Wozniak, P. Rutkowski, A. Piskorz [et al.] // Annals of oncology. - 2012. - Vol. 23, No. 2. - Pp. 353-360.

72. Regad T. Targeting RTK Signaling Pathways in Cancer / T. Regad // Cancers (Basel). - 2015. - Vol. 7, No. 3. - Pp.1758-1784.

73. Regorafenib (BAY 73-4506) : a new oral multikinase inhibitor of angiogenic, stromal and oncogenic receptor tyrosine kinases with potent preclinical antitumor activity / S. M. Wilhelm, J. Dumas, L. Adnane [et al.] // International journal of cancer. - 2011.

- Vol. 129, No. 1. - Pp. 245-255.

74. Resistance to EGFR inhibitors in non-small cell lung cancer : Clinical management and future perspectives / C. Tomasello, C. Baldessari, M. Napolitano [et al.] // Critical reviews in oncology/hematology. - 2018. - Vol. 123. - Pp. 149-161.

75. RNA interference screening identifies a novel role for autocrine fibroblast growth factor signaling in neuroblastoma chemoresistance / F. Salm, P. Cwiek, A. Ghosal [et al.] // Oncogene. - 2013. - Vol. 32, No. 34. - Pp. 3944-3953. - URL: https://www.nature.com/articles/onc2012416 (accessed: 01.10.2023).

76. Role of FGF-2/FGFR signaling pathway in cancer and its signification in breast cancer / J. Fang, S. Huang, H. Liu [et al.] // Chinese Science Bulletin. - 2003. - Vol. 48. - Pp. 1539-1547.

77. Sbaraglia M. The 2020 WHO Classification of Soft Tissue Tumours : news and perspectives / M. Sbaraglia, E. Bellan, A. P. Dei Tos // Pathologica. - 2021. - Vol. 113, No. 2. - Pp. 70-84. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/33179614/ (accessed: 23.04.2023).

78. SELNET clinical practice guidelines for soft tissue sarcoma and GIST / J. Y. Blay, N. Hindi, J. Bollard [et al.] // Cancer Treatment Reviews. - 2022. - Vol. 102. - Pp. 102312. - URL: https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34798363/ (accessed: 23.04.2023).

79. Serrano C. Gastrointestinal stromal tumor: challenges and opportunities for a new decade / C. Serrano, S. George // Clinical Cancer Research. - 2020. - Vol. 26, No. 19. -Pp. 5078-5085.

80. Tamborini E. Mechanism of resistance in gastrointestinal stromal tumors / E. Tamborini // Handb Exp Pharmacol. - 2018. - Vol. 249. - Pp. 195-202.

81. Targeted deep sequencing reveals unrecognized KIT mutation coexistent with NF1 deficiency in GISTs / J. Wu, H. Zhou, X. Yi [et al.] // Cancer Management and Research. - 2021. - Vol. 2021. - Pp. 297-306.

82. Targeting of FGF-Signaling Re-Sensitizes Gastrointestinal Stromal Tumors (GIST) to Imatinib In Vitro and In Vivo / S. Boichuk, A. Galembikova, P. Dunaev [et al.] // Molecules (Basel). - 2018. - Vol. 23, No. 10. - URL: https: //www.mdpi.com/1420-3049/23/10/2643 (accessed: 29.03.2022).

83. Telocytes are the physiological counterpart of inflammatory fibroid polyps and PDGFRA-mutant GISTs / R. Ricci, M. C. Giustiniani, M. Gessi [et al.] // Journal of cellular and molecular medicine. - 2018. - Vol. 22, No. 10. - Pp. 4856-4862.

84. The emerging role of the FGF/FGFR pathway in gastrointestinal stromal tumor / A. Astolfi, M. A. Pantaleo, V. Indio [et al.] // International journal of molecular sciences.

- 2020. - Vol. 21, No. 9. - P. 3313.

85. Transcriptome sequencing identifies ETV6-NTRK3 as a gene fusion involved in GIST / M. Brenca, S. Rossi, M. Polano [et al.] // The Journal of pathology. -2016. - Vol. 238, No. 4. - Pp. 543-549. - URL: https: //pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/26606880/ (accessed: 30.09.2023).

86. Tumor genotype is an independent prognostic factor in primary gastrointestinal stromal tumors of gastric origin : a European multicenter analysis based on ConticaGIST / A. Wozniak, P. Rutkowski, P. Schöffski [et al.] // Clinical cancer research. - 2014. -Vol. 20, No. 23. - Pp. 6105- 6116.

87. Turner N. Fibroblast growth factor signalling: from development to cancer /

N. Turner, R. Grose // Nature Reviews Cancer. - 2010. -Vol. 10, No. 2. - Pp. 116129. - URL: https: //www.nature.com/articles/nrc2780(accessed: 16.09.2022).

88. Two hundred gastrointestinal stromal tumors: recurrence patterns and prognostic factors for survival / R. P. De Matteo, J. J. Lewis, D. Leung [et al.] // Annals of surgery.

- 2000. - Vol. 231, No. 1. - P. 51.

89. Weaver A. Fibroblast growth factor receptor (FGFR) inhibitors : A review of a novel therapeutic class / A. Weaver, J. B. Bossaer // Journal of Oncology Pharmacy Practice. - 2021. - Vol. 27, No. 3. - Pp. 702-710.

90. Wesche J. Fibroblast growth factors and their receptors in cancer / J. Wesche, K. Haglund, E. M. Haugsten // Biochemical Journal. - 2011. - Vol. 437, No. 2. - Pp. 199213.

91. Случай гастроинтестинальной стромальной опухоли желудка / Т. Э. Скворцова, И. А. Оганезова, О. И. Медведева [и др.] // РМЖ. Медицинское обозрение. - 2021. - Т. 5, № 6. - С. 433-437.

92. A novel tyrosine kinase switch is a mechanism of imatinib resistance in gastrointestinal stromal tumors / D. Mahadevan, L. Cooke, C. Riley [et al.] // Oncogene.

- 2007. - Vol. 26, No. 27. - Pp. 3909-3919.

93. A phase Ib study of BGJ398, a pan-FGFR kinase inhibitor in combination with imatinib in patients with advanced gastrointestinal stromal tumor / C. M. Kelly, A. N. Shoushtari, L.-X. Qin [et al.] // Investigational new drugs. - 2019. - Vol. 37. - Pp. 282290. - URL: https: //link.springer.com/article/10.1007/s10637-018-0648-z (accessed: 30.04.2023).

94. Agaimy A. Gastrointestinal manifestations of neurofibromatosis type 1 (Recklinghausen's disease): clinicopathological spectrum with pathogenetic considerations / A. Agaimy, N. Vassos, R. S. Croner // International journal of clinical and experimental pathology. - 2012. - Vol. 5, No. 9. - Pp. 852.

95. Beenken A. The FGF family : biology, pathophysiology and therapy / A. Beenken, M. Mohammadi // Nature reviews Drug discovery. - 2009. - Vol. 8, No. 3. -Pp. 235-253.

96. Belov A. A. Molecular mechanisms of fibroblast growth factor signaling in physiology and pathology / A. A. Belov, M. Mohammadi // Cold Spring Harbor perspectives in biology. - 2013. - Vol. 5, No. 6. - P. a015958.

97. Boikos S. A. The genetic landscape of gastrointestinal stromal tumor lacking KIT and PDGFRA mutations / S. A. Boikos, C. A. Stratakis // Endocrine. - 2014. - Vol. 47. - Pp. 401-408.

98. BRAF mutant gastrointestinal stromal tumor: first report of regression with BRAF inhibitor dabrafenib (GSK2118436) and whole exomic sequencing for analysis of acquired resistance / G. S. Falchook, J. C. Trent, M. C. Heinrich [et al.] // Oncotarget. -2013. - Vol. 4, No. 2. - Pp. 310.

99. Clinical value of next generation sequencing of plasma cell-free DNA in gastrointestinal stromal tumors / C. Serrano, A. Vivancos, A. Lopez-Pousa [et al.] // BMC cancer. - 2020. - Vol. 20. - Pp. 1-12.

100. Clinicopathologic characteristics, diagnostic clues, and prognoses of patientswith multiple sporadic gastrointestinal stromal tumors: a case series and review of the literature / Y.-Y. Shen, X.-L. Ma, L.-X. Yang [et al.] // Diagnostic Pathology. - 2020. - Vol. 15. -

Pp. 1-10.

101. Complementary activity of tyrosine kinase inhibitors against secondary kit mutations in imatinib-resistant gastrointestinal stromal tumours / C. Serrano, A. Marino-Enriquez, D. L. Tao [et al.] // British journal ofcancer. - 2019. - Vol. 120, No. 6. - Pp. 612-620.

102. Corless C. L. Gastrointestinal stromal tumours: origin and molecular oncology / C. L. Corless, C. M. Barnett, M. C. Heinrich // N ature Reviews Cancer. - 2011. - Vol. 11, No. 12. - Pp. 865-878.

103. Correlation of KIT and PDGFRA mutational status with clinical benefit in patients with gastrointestinal stromal tumor treated with sunitinib in a worldwide treatment-use trial / P. Reichardt, G. D. Demetri, H. Gelderblom [et al.] // BMC cancer. - 2016. - Vol. 16, No. 1. - Pp. 1-10.

104. Effect of KIT and PDGFRA mutations on survival in patients with gastrointestinal stromal tumors treated with adjuvant imatinib : an exploratory analysis of a randomized clinical trial / H. Joensuu, E. Wardelmann, H. Sihto [et al.] // JAMA oncology. - 2017. - Vol. 3, No. 5. - Pp. 602-609.

105. Efficacy and safety of regorafenib for advanced gastrointestinal stromal tumours after failure of imatinib and sunitinib (GRID) : an international, multicentre, randomised, placebo-controlled, phase 3 trial / G. D. Demetri, P. Reichardt, Y.-K. Kang [et al.] // The Lancet. - 2013. - Vol. 381, No. 9863. - Pp. 295-302. - URL: https://www.thelancet.com/journals/lancet/article/PIIS0140-6736(12)61857-1/fulltext?cc=y (accessed: 03.10.2023).

106. FGFR-mediated reactivation of MAPK signaling attenuates antitumor effects of imatinib in gastrointestinal stromal tumors / F. Li, H. Huynh, X. Li [et al.] // Cancer discovery. - 2015. - Vol. 5, No. 4. -Pp. 438-451.

107. FGFR genetic alterations predict for sensitivity to NVP-BGJ398, a selectivepan-FGFR inhibitor / V. Guagnano, A. Kauffmann, S. Wöhrle [et al.] // Cancer discovery. -2012. - Vol. 2, No. 12. - Pp. 1118-1133.

108. Genomic aberrations in cell cycle genes predict progression of KIT-mutant gastrointestinal stromal tumors (GISTs) / M. C. Heinrich, J. Patterson, C. Beadling |et al.] // Clinical Sarcoma Research. - 2019. - Vol. 9. - art. 3. - URL: https ://clinicalsarcomaresearch.biomedcentral.com/articles/10.1186/s 13569-019-0112-7 (accessed: 03.10.2023).

109. Inhibition of FGF2-mediated signaling in GIST-promising approach for overcoming resistance to Imatinib / S. Boichuk, A. Galembikova, E. Mikheeva [et al.] // Cancers. - 2020. - Vol. 12, No. 6. - Pp. 1674.

110. Insulin-like growth factor (IGF) system and gastrointestinal stromal tumours (GIST): present and future / M. Nannini, G. Biasco, A. Astolfi [et al.] // Histol Histopathol. - 2014. - Vol. 29, No. 2. - Pp. 167-175.

111. Insulin-like growth factor type 1 receptor (IGF-1R) exclusive nuclear staining : a predictive biomarker for IGF-1R monoclonal antibody (Ab) therapy in sarcomas / I. Asmane, E. Watkin, L. Alberti [et al.] // European journal of cancer. - 2012.

- Vol. 48, No. 16. - Pp. 3027-3035.

112. KIT-dependent and KIT-independent genomic heterogeneity of resistance in gastrointestinal stromal tumors—TORC1/2 inhibition as salvage strategy / T. Mühlenberg, J. Ketzer, M. C. Heinrich [et al.] // Molecular cancer therapeutics. - 2019.

- Vol. 18, No. 11. - Pp. 1985-1996.

113. KIT activation is a ubiquitous feature of gastrointestinal stromal tumors / B. P. Rubin, S. Singer, C. Tsao [et al.] // Cancer research. - 2001. - Vol. 61, No. 22. - Pp. 8118-8121.

114. KIT mutations induce intracellular retention and activation of an immature form of the KIT protein in gastrointestinal stromal tumors / S. Tabone-Eglinger, F.Subra, H. E. Sayadi [et al.] // Clinical cancer research. - 2008. - Vol. 14, No. 8. - Pp. 2285-2294.

115. Long-term outcome of molecular subgroups of GIST patients treated with standard-dose imatinib in the BFR14 trial of the French Sarcoma Group / A. Patrikidou, J. Domont, S. Chabaud [et al.] // European Journal of Cancer. - 2016. - Vol. 52. - Pp.

173-180.

116. Molecular correlates of imatinib resistance in gastrointestinal stromal tumors / M. C. Heinrich, C. L. Corless, C. D. Blanke [et al.] // Journal of clinical oncology. - 2006. -Vol. 24, No. 29. - Pp. 4764-4774.

117. Novel V600E BRAF mutations in imatinib-naive and imatinib-resistant gastrointestinal stromal tumors / N. P. Agaram, G. C. Wong, T. Guo [et al.] // Genes, Chromosomes and Cancer. - 2008. - Vol. 47, No. 10. - Pp. 853-859.

118. PDGFRA-mutant syndrome / R. Ricci, M. Martini, T. Cenci [et al.] // Modern Pathology. - 2015. - Vol. 28, No. 7. - Pp. 954- 964. - URL: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0893395222014041 (accessed: 04.10.2023).

119. Prognostic time dependence of deletions affecting codons 557 and/or 558 ofKIT gene for relapse-free survival (RFS) in localized GIST : a Spanish Group for Sarcoma Research (GEIS) Study / J. Martin-Broto, A. Gutierrez, X. Garcia-del-Muro [et al.] // Annals of oncology. - 2010. - Vol. 21, No. 7. - Pp. 1552-1557.

120. Roskoski R. Structure and regulation of Kit protein-tyrosine kinase - The stem cell factor receptor / R. Roskoski // Biochemical and Biophysical Research Communications. - 2005. - Vol. 338, Is. 3. - Pp. 1307-1315. - URL: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0006291X05021790?via%3Dihub (accessed: 03.10.2023).

121. Secondary mutations in the kinase domain of the KIT gene are predominant in imatinib-resistant gastrointestinal stromal tumor / T. Nishida, T. Kanda, A. Nishitani [et al.] // Cancer science. - 2008. - Vol. 99, No. 4. - Pp. 799-804.

122. Targeted therapy in GIST : In silico modeling for prediction of resistance / M. A. Pierotti, E. Tamborini, T. Negri [et al.] // Nature Reviews Clinical Oncology. - 2011. -Vol. 8, No. 3. - URL: https: //www.nature.com/articles/nrclinonc.2011.3 (accessed: 03.10.2023).

СПИСОК ИЛЮСТРАТИВНОГО МАТЕРИАЛА

Рисунок 1 - Распространенность мутаций в ГИСО желудка, тонкой кишки и

прямой кишки....................................................................................19

Рисунок 2 - Структура рецептора тирозинкиназ и нижележащих сигнальных

путей................................................................................................24

Таблица 1 - Первичные и вторичные антитела, использованные для вестерн-

блоттинга...........................................................................................42

Рисунок 3 - Измерение уровня комплексного сопротивления (импеданса)........45

Рисунок 4 - Превращение МТS реагента в формазан....................................45

Таблица 2 - Приготовление фиксирующего раствора....................................46

Таблица 3 - Градиент геля....................................................................49

Таблица 4 - Нижний гель (12%).............................................................50

Таблица 5 - Верхний гель (6%)..............................................................50

Таблица 6 - Приготовление буфера для инкубации....................................55

Рисунок 5 - Пролиферативная активность клеточных линий ГИСО,

культивированных в присутствии ИМ в течение 7 дней.................................59

Таблица 7 - Значения 1С50 для ИМ в ИМ-чувствительных (ГИСО Т-1) и ИМ-

резистентных клеточных линиях (ГИСО Т-Ш и ГИСО 430)..........................60

Рисунок 6 - Окрашивание кристаллическим фиолетовым ИМ-чувствительных (ГИСО Т-1) и резистентные клеточных линий (ГИСО Т-Ж и ГИСО 430), культивированных с ИМ (1 цМ) в течение 96 часов.....................................61

Рисунок 7 - Оценка уровня экспрессии расщепленных форм ПАРП и каспазы-3 в ИМ-чувствительных ГИСО (ГИСО Т-1) и ИМ-резистентных клеточных линиях

(ГИСО Т-Ж и ГИСО 430) после инкубации с ИМ (1 цМ) в течение 48 часов.....62

Рисунок 8 - Динамика содержания цитокинов в супернатантах клеточных линий

ГИСО, инкубированных с ИМ (1 мкмоль/л) в течение 2, 4 и 6 дней.................64

Рисунок 9 - Динамика уровня FGF-2 в супернатантах ИМ-чувствительной линии ГИСО Т-1 и резистентной к ИМ клеточной линии ГИСО Т-Ж, культивированных

в присутствии ИМ (1 мкмоль/л)..............................................................67

Рисунок 10 - Экспрессия сигнальных молекул FGF-сигнального пути в

резистентных к ИМ клетках ГИСО, культивированных с ИМ в присутствии НАТ

к FGF-2...............................................................................................69

Рисунок 11 - Анализ пролиферативной активности чувствительных к ИМ клеток ГИСО линии Т-1, инкубированных в течение 72 часов с FGF-2 (100 нг/мл) в

присутствии либо отсутствии ИМ (0,25 ^М)................................................71

Таблица 8 - Сравнительные значения 1С50 для ИМ в отношении в ИМ-чувствительных (ГИСО Т-1) пре-инкубированных FGF-2 (100 нг/мл) в течение 48

часов.................................................................................................72

Рисунок 12 - Кривая расчета половинной ингибирующей концентрации (1С50)..72 Рисунок 13 - Окрашивание кристаллическим фиолетовым культур ИМ-чувствительных клеток линии ГИСО Т-1, инкубированные ИМ отдельно, либо в

комбинации с FGF-2 в течение 72 часов.....................................................73

Рисунок 14 - Микрофотографии TUNEL-метода в ИМ-чувствительных клетках

ГИСО Т-1...........................................................................................74

Рисунок 15 - Репрезентативные изображения заживления ран ИМ-резистентных клеток ГИСО, проинкубированные FGF-2 (100 нг/мл) в течение 5

дней..................................................................................................75

Рисунок 16 - Репрезентативные изображения анализа инвазии клеток ИМ -резистентных клеток ГИСО, проинкубированные FGF-2 (100 нг/мл) в течение 5

дней..................................................................................................76

Рисунок 17 - Репрезентативные изображения анализа инвазии клеток ИМ -резистентных ГИСО, проинкубированные ИМ (1 мкмоль/л), и ИМ в комбинации с нейтрализующими анти-БОР-2 антителами

(20мкг/мкл)........................................................................................78

Рисунок 18 - Результаты заживления ран ИМ-резистентных клеток ГИСО после культивирования с ИМ (1 мкмоль/л) отдельно, и в комбинации с нейтрализующими анти-БОР-2 антителами (20 мкг/мл).................................79