Роль анионного канала в транспорте супероксида из митохондрий в условиях кальциевого стресса тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.02, кандидат биологических наук Тикунов, Андрей Петрович

• Тикунов, Андрей Петрович
• кандидат биологических наук
• 2010

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тикунов, Андрей Петрович

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ. роль митохондрий в процессе запрограммированной смерти клетки.'.

Прекращение транспорта электронов и энергетического метаболизма.

Высвобождение каспаз-активирующих белков.

Активные формы кислорода и клеточный окислительно-восстановительный потенциал.

Изменение проницаемости внутренней мембраны митохондрии.

Факторы, влияющие на изменение проницаемости митохондрий.

Роль супероксид-радикала в митоптозе и апоптозе.

Источники супероксид-радикала в клетке.

Митохондриальные источники супероксида.

Механизмы утилизации супероксид-радикала.

Витамин Е - альфа-токоферол.

Супероксиддисмутаза.

Цитохром С.

Каталаза.

Глютатионпероксидаза.

Выход супероксид-радикала через потенциал-зависимый анионный канал в цитоплазму.

Строение потенциал-зависимого анионного канала митохондрии.

Регуляция потенциал-зависимого анионного канала.

ПОСТАНОВКА ЗАДАЧИ.

Цель работы:.

Задачи исследования:.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ.

Реагенты и материалы.

Получение митохондрий печени крысы.

Измерение кальций-индуцированного набухания митохондрий.

Измерение уровня супероксид-радикала (02") в митохондриях.

Определение проницаемости внешней митохондриальной мембраны методом фильтрации митохондрий через силиконовое масло.

Измерение разбухания митохондрий при пониженной температуре.

Вестерн блотанализ выхода цитохрома Сиз митохондрий.

Статистическая обработка данных.

РЕЗУЛЬТАТЫ. кальций-индуцированное изменение проницаемости митохондрии.

Зависимость от концентации кальция.

Представление результатов.

Ингибитор анионного канала 63139.

Изменение проницаемости внешней митохондриальной мембаны при обработке митохондрий ингибитором 63139.

Влияние ингибирования потенциал-зависимогоанионного канала на процесс Са2+индуцированного изменения проницаемости митохондрий.

Влияние обработки митохондрий ингибитором 63139 на транспорт кальция.

Проверка предположения о том, что 63139 может формировать канал во внешней мембране митохондрии независимо от формирования поры повышенной проницаемости митохондрии. . 56 Дозовая зависимость эффекта 63139 на изменение проницаемости митохондрий.

Компенсирующее влияние антиоксиданта на ингибирование проницаемости внешней мембраны митохондрий.

Использование дигидроэтидина для определения скорости производства супероксида дыхательной цепью митохондрий, определение места реакции супероксида с ДГЭ в митохондриях.

Влияние ингибитора анионного канала на уровень супероксида внутри митохондрии.

Порформирующий агент уменьшает накопление 02*"в митохондриях, вызываемое ингибированием потенцал-зависимого анионного канала с помощью 63139.

ОБСУЖДЕНИЕ.

ВЫВОДЫ.

Зависимость флуоресценции кальцеина от его концентрации в растворе.

Использование дигидроэтидина в качестве детектора уровня супероксида.