Разработка методов диагностики инфекции, вызываемой Mycoplasma hyopneumoniae тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.06, кандидат биологических наук Бирюченкова, Марина Вячеславовна

• Бирюченкова, Марина Вячеславовна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Бирюченкова, Марина Вячеславовна

ВВЕДЕНИЕ.

1.0Б30Р ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Возбудитель энзоотической пневмонии свиней.

1.1.1. Таксономическое и филогенетическое положение.

1.1.2. Морфология и строение.

1.1.2.1. Структура микоплазмы.

1.1.2.2. Геном Mycoplasma hyopneumoniae.

1.2. Общая характеристика энзоотической пневмонии свиней.

1.2.1. Патогенез.

1.2.2. Клиническая картина заболевания.

1.2.3. Патологоанатомические изменения.

1.2.4. Иммунитет и специфическая профилактика.

1.3. Диагностика энзоотической пневмонии свиней.

1.3.1. Обнаружение Mycoplasma hyopneumoniae.

1.3.2. Методы молекулярного типирования.

1.3.3. Обнаружение антител к Mycoplasma hyopneumoniae.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка методов диагностики инфекции, вызываемой Mycoplasma hyopneumoniae»

Актуальность темы. Mycoplasma hyopneumoniae является этиологическим агентом энзоотической пневмонии (ЭП) свиней. Ей также принадлежит важная роль в развитии респираторного симптомокомплекса свиней (РСКС) - многокомпонентного заболевания, являющегося одной из наиболее актуальных проблем современного свиноводства [87, 193, 199].

В качестве инфекционного агента, вызывающего ЭП свиней, М. hyopneumoniae была определена Goodwin et al., Маге и Switzer в 1965 году [6, 79]. Заболевание распространено во всем мире [142]. Экономический ущерб от энзоотической пневмонии свиней составляет в странах с развитым свиноводством до одного миллиарда долларов в год [100, 43]. В некоторых странах проведенные исследования выявили поражения, типичные для хронической формы заболевания, у 80% поросят группы откорма [201].

Коинфицирование свиней микоплазмами и другими патогенами (прежде всего такими, как вирус репродуктивно-респираторного синдрома свиней, цирковирус свиней второго типа, вирус гриппа свиней, Pasteurella multocida, Haemophilus parasuis, Actinobacillus pleuropneumoniae, Streptococcus suis) отягощает проявление основных симптомов пневмонии и приводит к формированию респираторного симптомокомплекса свиней. РСКС наносит значительный экономический ущерб свиноводству во всем мире. В различных хозяйствах заболеваемость поросят может достигать 30-70%, а летальность -15% в зависимости от количества ассоциированных инфекционных агентов [116].

Эффективность мер по борьбе с респираторными заболеваниями, ассоциированными с М. hyopneumoniae, во многом зависит от своевременной их диагностики, которая основывается на эпизоотологических данных, клинических признаках болезни, результатах патологоанатомического вскрытия и лабораторных исследований. Проблема осложняется тем, что до настоящего времени в России не было разработано надёжных и достоверных диагностических методов по обнаружению М. Пуорпеитопгае. Слабоизученным оставался широкий круг проблем, связанных с этим видом микоплазм: масштабы распространения М. Нуорпеитотае в свиноводческих хозяйствах и дикой фауне РФ, ее роль в развитии РСКС в российских свиноводческих хозяйствах, филогенетичекие особенности отечественных изолятов бактерии.

Степень разработанности проблемы. На настоящий момент иностранными авторами разработано несколько тест-систем, основанных на иммунофлюоресцентных, иммуногистохимических методах [131, 153, 179] и на различных модификациях ПЦР, позволяющих выявлять М. Нуорпеитотае в носовых, трахеобронхиальных смывах, а также в легочной ткани [42, 65, 69, 76, 206]. Также за рубежом осуществляют серодиагностику микоплазменной инфекции с использованием реакций агглютинации, связывания комплемента и ИФА в различных вариантах [137, 149, 154, 167].

В России до текущего времени не было разработано надёжных и достоверных диагностических методов по обнаружению М. Нуорпеитотае. Слабоизученным оставался широкий круг проблем, связанных с этим видом микоплазм; масштабы распространения М. Нуорпеитотае в свиноводческих хозяйствах и дикой фауне РФ, ее роль в развитии РСКС в российских свиноводческих хозяйствах, филогенетичекие особенности отечественных изолятов бактерии.

Цели и задачи исследования.

Цель данной работы состояла в разработке методов обнаружения М. Нуорпеитотае и антител к ней, а также в применении разработанных методов для изучения распространения этого вида микоплазм на территории РФ и его роли в респираторных болезнях свиней в российских хозяйствах.

Для достижения поставленной цели необходимо было решить следующие задачи:

- разработать методы обнаружения ДНК М. куорпеитотае, основанные на ПЦР;

- применить разработанные методы в диагностических исследованиях;

- провести филогенетический анализ полевых изолятов М. куорпеитотае;

- получить рекомбинантный видоспецифичный белок М. куорпеитотае и разработать на его основе непрямой вариант иммуноферментного анализа (н-ИФА) для выявления антител к данному инфекционному агенту в сыворотках крови свиней;

- провести с использованием разработанного иммуноферментного метода серомониторинг микоплазменной инфекции и определить статус российских свиноводческих хозяйств.

- изучить распространение М. куорпеитотае в дикой фауне РФ.

Научная новизна исследований. Впервые в РФ разработан метод обнаружения ДНК М. куорпеитотае, основанный на ПЦР с электрофоретической детекцией.

Впервые в России разработан метод количественного обнаружения ДНК М. куорпеитотае, основанный на ПЦР в реальном времени (ПЦР-РВ).

Проведен филогенетический анализ полевых изолятов М. куорпеитотае.

Впервые в РФ получен рекомбинантный видоспецифичный белок р65 М. куорпеитотае, и на его основе разработан непрямой вариант иммуноферментного анализа для выявления антител к М. куорпеитотае.

Проведён мониторинг микоплазменной инфекции свиней, показано широкое распространение М. куорпеитотае в свиноводческих хозяйствах и дикой фауне РФ.

С использованием непрямого варианта ИФА определен серологический статус более 5 тысяч племенных свиней, ввезенных в Россию в 2005-2009 гг из Канады и европейских стран, в отношении микоплазменной инфекции.

Практическая значимость исследований. В результате проведённых исследований утверждены следующие нормативные документы:

Методика обнаружения антител к Mycoplasma hyopneumoniae в непрямом варианте иммуноферментного анализа», одобренная учёным советом и утверждённая директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 08.02.2006 г.;

Методика обнаружения Mycoplasma hyopneumoniae с использованием полимеразной цепной реакции», одобренная учёным советом и утверждённая директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 20.03.2006 г.;

Методические указания по выявлению и количественному анализу Mycoplasma hyopneumoniae методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени», одобренная учёным советом и утверждённая директором ФГУ «ВНИИЗЖ» 10.03.2010 г.

Разработанные методики и методические указания используются при проведении диагностических и мониторинговых исследований для выявления М. hyopneumoniae и антител к ней.

Публикации научных исследований. По теме диссертации опубликовано 9 научных работ, в том числе три работы в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

Апробация работы. Материалы диссертации представлены, опубликованы и обсуждены на научно-практической конференции "Ветеринарное обеспечение свиноводства: современное состояние и пути развития" (Харьков, 2005 г.), в материалах международной научно-практической конференции "Современные проблемы ветеринарной медицины в свиноводстве" (Киев, 2006 г.), на XV московском международном ветеринарном конгрессе по болезням мелких домашних животных "Проблемы инфекционной патологии свиней" (Москва, 2007 г.), а также на заседаниях учёного совета ФГУ "Федеральный центр охраны здоровья животных" в период 2005-2009 гг.

Личный вклад. Основной объем исследований проведен автором самостоятельно. Консультативную и методическую помощь при выполнении отдельных этапов работы оказывали следующие сотрудники лаборатории диагностики особо опасных инфекций: к.б.н. А. С. Яковлева, к.в.н. А. В. Канынина, к.в.н. А. М. Тимина, заведующий лабораторией, к.б.н. А. В. Щербаков.

Основные положения, выносимые на защиту:

Метод обнаружения ДНК М. куорпеитотае, основанный на ПЦР с электрофоретической детекцией.

Метод количественного обнаружения ДНК М. куорпеитотае, основанный на ПЦР в реальном времени.

Филогенетический анализ полевых изолятов М. куорпеитотае.

Рекомбинантный видоспецифичный белок М. куорпеитотае и разработанный на его основе непрямой вариант ИФА для выявления антител к микоплазме.

Результаты использования разработанных методов при проведении диагностических и мониторинговых исследований микоплазменной инфекции.

Структура и объём работы. Диссертация изложена на 134 страницах и содержит следующие разделы: введение, обзор литературы, результаты собственных исследований и их обсуждение, заключение и выводы. Список используемой литературы включает 215 источников, из которых 185 иностранных. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 17 рисунками.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология (в том числе бионанотехнологии)», Бирюченкова, Марина Вячеславовна

4. ВЫВОДЫ

1. Разработанным методом обнаружения ДНК М. hyopneumoniae, основанным на ПЦР с электрофоретической детекцией, установлено, что из исследованных 850 проб патологического материала от свиней из 195 хозяйств 43 регионов РФ М. hyopneumoniae выявлена в 22% проб. i

2. Разработанный метод количественного определения ДНК М hyopneumoniae, основанный на ПЦР в режиме реального времени, позволяет установить концентрацию микоплазмы в легких больных свиней, которая обычно составляет 105-10б клеток/г.

3. На основе полученного рекомбинантного антигена разработан непрямой вариант ИФА для выявления антител к М. hyopneumoniae в i сыворотках крови свиней. Диагностическая чувствительность и диагностическая специфичность непрямого варианта ИФА составляет 97,0% и 98,9% соответственно.

4. С использованием разработанного иммуноферментного метода проведен серомониторинг микоплазменной инфекции в хозяйствах РФ. Антитела к М. hyopneumoniae у свиней выявлены в 76 из 136 обследованных хозяйств РФ.

5. Определен серопозитивный статус племенных свиней, ввезенных в Россию в 2005-2009 гг из Франции, Дании, Германии, Великобритании, Литвы, Венгрии и Испании, в отношении инфекции, обусловленной М. hyopneumoniae.

6. С использованием ПЦР и ИФА установлено, что М. hyopneumoniae распространена в ЦФО России среди кабанов, являющихся природным резервуаром данного возбудителя.

7. Проведен филогенетический анализ полевых изолятов М hyopneumoniae. Установлено, что все изоляты формируют два сильно отличающихся кластера. Один кластер включает изоляты как от домашних свиней, так и от кабанов, второй кластер объединяет изоляты М. hyopneumoniae исключительно от кабанов.

5. ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Для практического использования предлагаются:

Методика обнаружения антител к Mycoplasma hyopneumoniae в непрямом варианте иммуноферментного анализа»;

Методика обнаружения Mycoplasma hyopneumoniae с использованием полимеразной цепной реакции»;

Методические указания по выявлению и количественному анализу Mycoplasma hyopneumoniae методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени».

Разработанные методики и методические указания используются при проведении диагностических и мониторинговых исследований для выявления М. hyopneumoniae и антител к ней.

3. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В настоящее время одной из наиболее актуальных проблем свиноводства являются респираторные заболевания. В хозяйствах Российской Федерации и за рубежом широко распространена энзоотическая пневмония свиней, этиологическим агентом которой является М. куорпеитотае. Как монозаболевание энзоотическая пневмония встречается редко и обычно является составной частью респираторного симптомокомплекса свиней.

В России до настоящего момента неизученным оставался широкий круг вопросов, связанных с М. куорпеитотае: степень распространения возбудителя среди домашних свиней и диких кабанов, вовлечённость М. куорпеитотае в инфекционную патологию. Для решения этих задач необходимо иметь в распоряжении надежные методы диагностики микоплазменной инфекции свиней.

В результате проведенных исследований был разработан метод ПЦР, позволяющий выявлять ДНК М. куорпеитотае в легких животных с респираторной патологией. Метод основан на использовании пары видоспецифичных праймеров, комплементарных участку гена р46. Было показано, что данный метод обладает высокой аналитической^ специфичностью и чувствительностью.

С помощью разработанного-метода в период с 2005 по 2009 'годы исследовали более 850' проб патологического материала от свиней с респираторной патологией из 195 хозяйств 43 регионов РФ. В. результате проведенных исследований М. куорпеитотае была выявлена в 22% проб.

При исследованиях материала от свиней различных возрастных групп оказалось, что наиболее часто М. куорпеитотае обнаруживалась у поросят в послеотъемный период (возраст 2-4 месяца) и в период откорма (возраст 4-6 месяцев): 26,6% и 24,2%, соответственно. У животных старше 6 месяцев М. куорпеитотае также выявляли в значительном количестве случаев (16,3%). У поросят-сосунов с респираторной патологией микоплазму обнаруживали значительно реже. Таким образом, наши исследования подтвердили данные литературы [93, 142, 196, 197] о том, что респираторные заболевания, ассоциированные с М. куорпеитотае, присущи, главным образом, поросятам послеотъемного и откормочного периодов.

У животных с респираторной патологией кроме М. куорпеитотае обнаруживали и другие виды патогенных бактерий и вирусы: М. куогЫтз, бактерии семейства Ра81еиге11асеае, ЦВС-2, вирус РРСС. Вирус гриппа свиней обнаруживали редко. Полученные результаты подтверждают данные литературы [50, 98, 116, 132] о значении ассоциаций респираторных патогенов в развитии осложнений энзоотической пневмонии.

Таким образом, в результате проведенных нами исследований было установлено, что спектр патогенов, обнаруживаемых у свиней, пораженных РСКС (чаще всего поросят групп отъема и откорма), включает М. куорпеитотае в ассоциации с рядом других инфекционных агентов вирусной и бактериальной природы.

Для обнаружения ДНК М. куорпеитотае нами был также разработан метод ПЦР в режиме реального времени. В основе метода лежит использование пары праймеров и зонда, комплементарных участку гена р46. ПЦР-РВ имел ряд преимуществ по сравнению с классическим вариантом ПЦР. Аналитическая чувствительность ПЦР-РВ' на порядок превышала чувствительность ПЦР с электрофоретической детекцией. Кроме того, ПЦР-РВ позволяет проводить количественную оценку содержания! М. hyopneumoniae в исследуемых пробах. Для этого нами путем- молекулярного клонирования гена р46 были получены стандарты, ДНК. С использованием количественной ПЦР-РВ мы определили, что у поросят с выраженными признаками пневмонии содержится 105-106 клеток микоплазмы в 1г легочной ткани.

С целью разработки иммуноферментной тест-системы для выявления антител к М hyopneumoniae экспрессией в Е. coli был получен рекомбинантный видоспецифичный белок М. hyopneumoniae. В непрямом варианте ИФА с контрольными сыворотками показали его высокую антигенную активность и специфичность.

На основе рекомбинантного антигена разработали непрямой вариант ИФА для выявления антител к М. hyopneumoniae в сыворотках крови свиней. Определили рабочее разведение антигена и сывороток, оптимальные режимы постановки реакции, установили позитивно-негативный порог реакции, допустимые значения оптической плотности контрольных сывороток и коэффициент вариации.

Диагностические чувствительность и специфичность метода, установленные на панели заведомо положительных и заведомо отрицательных сывороток, составляли 97,0% и 98,9%, соответственно.

Показано, что результаты, получаемые в н-ИФА, очень хорошо согласуются с результатами, получаемыми при использовании коммерческого набора «Mycoplasma hyopneumoniae Antibody Test Kit» (IDEXX, США). Согласованность двух тест-систем определяли по методу капа-статистики, значение k-критерия равнялось 0,92.

С использованием разработанной иммуноферментной тест-системы исследовали более 20000 проб сывороток крови от свиней из 136 хозяйств 43 регионов . РФ. В-* 76* хозяйствах у животных обнаружили антитела к М. куорпеитотае. В результате проведенного серомониторинга впервые было показано широкое распространение этого вида, микоплазм в РФ, а также определен статус большого- числа российских хозяйств в отношении инфекции, обусловленной'М. куорпеитотае. При исследовании сывороток крови племенных свиней, ввезенных в РФ из-за рубежа, было установлено, что количество серопозитивных животных, импортированных из некоторых стран Европы, достигало 88%. Животные, ввезенные из Канады, Польши, Эстонии, Чехии и Ирландии оказались серонегативными в отношении данного возбудителя.

С использованием разработанных методов и методик изучено распространение М. куорпеитотае в дикой фауне РФ. ДНК микоплазмы и/или антитела к ней были обнаружены у диких кабанов, павших или отстрелянных с диагностической целью в Тверской, Смоленской, Владимирской, Московской, Курской, Белгородской областях и в Ставропольском крае. Таким образом, было показано широкое географическое распространение М. куорпеитотае в дикой фауне России.

С целью изучения генетического разнообразия * российских изолятов М.куорпеитотае проведено секвенирование фрагмента гена р46 микоплазм, выявленных у домашних свиней из 9 хозяйств и диких кабанов из 4 областей ЦФО. Филогенетический анализ установленных нуклеотидных последовательностей показал, что все изоляты формируют два сильно отличающихся кластера. Один кластер включал изоляты М. куорпеитотае, выделенные от домашних свиней в России, Канаде и Японии. В этот кластер вошли также несколько изолятов от диких кабанов из ЦФО РФ. Второй кластер формировали изоляты М. куорпеитотае исключительно от диких кабанов.

Таким образом, в результате проведенных исследований было разработано несколько методов и методик по обнаружению возбудителя энзоотической пневмонии свиней, а именно: ПЦР и ПЦР-РВ, а также непрямой вариант ИФА для выявления антител к М. hyopneumoniae в сыворотках крови животных. Применение разработанных методов и методик в диагностических исследованиях позволило установить степень распространения М. hyopneumoniae среди домашних свиней и диких кабанов, а также роль возбудителя- в ассоциированной респираторной патологии свиней.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Бирюченкова, Марина Вячеславовна, 2011 год

1. Бессарабов Б.Ф., Воронин Е.С., Ватутин А.А. Инфекционные болезни животных. М.: КолосС, 2007. - 671 с.

2. Болезни свиней / В. Сидоркин, В. Гавриш, А. Егунова, С. Убираев. М.: Аквариум, 2007. - 274' с.

3. Гафаров Х.З., Романова Е.А. Инфекционные болезни свиней и современные средства борьбы с ними. — Казань: Школа, Шестой элемент, 2003.-200 с.

4. Гельвиг Э.Г. Заболевания свиней: пер. с нем. М.: Астрель, ACT, 2003.112 с.

5. Говорун В.М. Молекулярно-биологические методы выявления и идентификации инфекционных агентов, клиническая лабораторная аналитика, частные аналитические технологии в клинической лаборатории / под ред. В.В. Меньшикова. М.: КолосС, 1999. - 432 с.

6. Губин С.Н. Комплекс респираторных заболеваний свиней (PRDO) // Гл. зоотехник. 2009. - №2. - С. 59.

7. Диагностика микоплазменных заражений- с помощью направленной амплификации / Е.Ю. Жуланова, М.С. Вонский, В.В. Лисин и др. // Молекуляр. генетика, микробиология и вирусология. 1993. - №2. - С. 913.

8. Дудников С.А. Количественная эпизоотология: основы прикладной эпидемиологии и биостатистики. Владимир: Демиург, 2005. - 460 с.

9. Жбанова Т.В., Дрыгин В.В., Дудникова Н.С. Микоплазмозы свиней: обзор литературы. Владимир: ФГУ «ВНИИЗЖ», 2005. - 76 с.

10. Инфекционная патология животных / ред. А .Я. Самуйленко, Б.В. Соловьева, Е.А. Непоклонова, Е.С. Воронина. — М.: Академкнига, 2006. -807 с.

11. Инфекционная патология животных: материалы Междунар. науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ», Владимир, 30-31 окт. 2003 г. -Владимир, 2003. — 155 с.

12. Использование аэросила А-300 и фильтров GF/F (GF/C) для очистки фрагментов ДНК, ДНК-плазмид и РНК / О.Г. Грибанов и др. //

13. Биохимия. 1996.-Т. 21, №6.-С. 1064-1070.

14. Каныпина A.B. Разработка методов иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусу репродуктивно-респираторного синдрома свиней: дис. . канд. вет. наук. Владимир, 2004. - 123 с.

15. Кирьянов Е.А. Микоплазмы и JI-формы бактерий в патологии животных. Уссурийск: Приморский с.-х. ин-т, 1983. - 554 с.

16. Кукушкин С.А. Особенности течения и вакцинопрофилактика репродуктивно-респираторного синдрома свиней в Российской Федерации: дис. . канд. вет. наук. Владимир, 2000. - 176 с.

17. Лобзин Ю.В. Руководство по инфекционным болезням. СПб.: Фолиант, 2000. - 932 с.

18. Малоголовкин А. С. Биологические и генетические характеристики цирковирусов свиней: дис. .канд. биол. наук. Покров, 2009. - 131 с.

19. Методические указания по диагностике заболеваний сельскохозяйственных животных методом полимеразной цепной реакции / под ред. A.A. Гусева, А.Н. Панина. Владимир: ОКНИИиМС ВНИИЗЖ, 1998.-519 с.

20. Палунина В.В. Носительство микроорганизмов в носовой полости у поросят // Ветеринария. 2004. - №1. - С. 29-30.

21. Поляков И. О. Практическое пособие по медицинской статистике. Л.: Медицина, 1975. - 150 с.

22. Прозоровский С.Р., Левина Г.А., Рыжов Е.В. Сравнительное изучение патогенных свойств некоторых видов L-форм бактерий и микоплазм // Вестн. АМН СССР. 1969. - №5. - С. 72.

23. Пыльнов В.А. Разработка молекулярно-биологических методов обнаружения и штаммовой дифференциации вируса репродуктивно-респираторного синдрома свиней: дис. . канд. биол. наук. Владимир, 2003.-112 с.

24. Ресурсы основных видов охотничьих животных и охотничьи угодья России (1991-1995ГГ.) / И.К. Ломанов и др.. М.: ЦНИЛ Охотдепартамента Минсельхозпрода России, 1996. - 226 с.

25. Сатина Т.А. Цирковирусные инфекции свиней: обзор литературы. -Владимир, 2003. 101 с.

26. Теория и практика иммуноферментного анализа / A.M. Егоров и др.. -М.: Высш. школа, 1991.-288 с.

27. Тимаков В.Д., Каган Г.А. L-формы бактерий и семейство Mycoplasmatoceae в патологии. М.: Медицина, 1973. — 392 с.

28. Тимина A.M. Разработка методов лабораторной диагностики цирковирусной инфекции свиней: дис. . канд. вет. наук. Владимир, 2006.- 130 с.

29. Ханаан Д. Методы трансформации. Клонирование ДНК / под ред. Д. Гловера. М., 1988. - 487 с.

30. Этиологическая структура инфекционных болезней свиней в животноводческих хозяйствах России: материалы Междунар. науч. конф., посвящ. 45-летию ФГУ «ВНИИЗЖ», Владимир, 30-31 окт. 2003 г. -Владимир, 2003. 210 с.

31. Яковлева А.С., Канынина А.В., Щербаков А.В. Экспрессия в Е. coli рекомбинантных белков ЗА, ЗВ и 3 АВ вируса ящура / Труды Федерального центра охраны здоровья животных. Владимир: Транзит-ИКС, 2005. - Т. 3. - С. 105-114.

32. Absence of strictly age-related resistance to Mycoplasma hyosynoviae infection in 6-week-old pigs / К. T. Lauritsen et al. // Vet. Microbiol. 2008. - Vol. 130. - P. 385-390.

33. Adams C., Pitzer J., Minion F. C. In vivo expression analysis of the P97 and PI02 paralog families of Mycoplasma hyopneumoniae II Infect. Immun. -2005. Vol. 73. - P. 7784-7787.

34. A longitudinal; study of serological, patterns of respiratory infections in? nine infected Danish swine herds / Ml Andreasen et al. // Prevent. Vet. Med; -2000.-Vol. 25.-P. 221-235;

35. Ameri-Mahabadi M., Zhou E.M., Hsu W.H. Comparison of two swine Mycoplasma hyopneumoniae enzyme-linked- immunosorbent: assays fön detection: of antibodies from vaccinated pigs and Held serum samples // J. Vet. Diagn. Invest.- 2005.- Vol. 17.- P. 61-64,

36. Amikam D.G., Rasin S. Mycoplasmas (Mollicutes) have: a low number of rRNA genes // J. Bacteriology. 1984. - Vol. 158. - P. 376-378.

37. Amplified-fragment length polymorphism fingerprinting of Mycoplasma species / B. Kokotovic et al,. // J. Clin. Microbiol. 1999. - Vol. 37. - P. 3300-3307.

38. A multiplex PCR to identify porcine mycoplasmas present in broth cultures / T. Stakenborg et al. // Vet. Res. Commun. 2006; - Vol. 30: - P. 239-247.

39. A mycoplasma genetic element resembling'prokaryotic insertion sequences / Ferrell R.V. et al.-// Mol. Microbiol: 1989. - Vol. 3. - P. 957-967.

40. A nested PCR assay for the detection of Mycopasma hyopneumoniae in tracheobronchiolar washings from pigs / Verdin E. et al. // Vet. Microbiol. -2000.-Vol. 76.-P. 31-40.

41. An improved enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of porcine serum antibodies against Mycoplasma hyopneumoniae / S.P. Djordjevic et al. // Vet. Microbiol. 1994. - Vol. 39. - P. 261-273.

42. Antimicrobial susceptibility of Mycoplasma hyorhinis / C.C. Wu et al. // Vet. Microbiol. 2000; - Vol. 76. - P. 25-30.

43. Application and field validation of a PCR assay for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae from swine lung tissue samples / H.Y. Cai et al. //J. Vet. Diagn. Invest.- 2007. Vol. 19. - P; 91-95.

44. A processed multidomain Mycoplasma hyopneumoniae adhesion binds fibronectin, plasminogen and swine respiratory cilia / Lisa M. Seymour et al. /URL: www.jbc.org/cgi/doi/10.1075/jbc.Ml 10.104463.

45. Array-based comparative hybridization analysis of field strains of Mycoplasma hyopneumoniae / M.L. Madsen et al. // J. Bacteriol. 2007. -Vol. 189. - P. 7977-7982.

46. Artiushin S., Minion F.C. Arbitrarily primed PCR analysis of Mycoplasma hyopneumoniae field isolates demonstrates genetic heterogeneity // Int. J. System. Bacteriol. 1996. - Vol. 1. - P. 324-328.

47. Associations between pathogens in healthy pigs and pigs with pneumonia I A. Palzer et al. // Vet. Ree. 2008. - Vol. 162. - P. 267-271.

48. Automated annotation of keywords for proteins related to Mycoplasmataceae using machine learning techniques / L.C. Bazzan et al. // Bioinformatics. — 2002.-Vol. 18.-P. 35-43.

49. Association of lysogenic bacteriophage MAV1 with virulence of Mycoplasma arthritidis / L.L. Voelker et al. // Infect. Immun. 1995. - Vol. 63. - P. 40164023.

50. Aymard R.T. Neuraminidase assays // Dev. Biol. 2003. - Vol. 115. - P. 7583.

51. Baker R.B. Respiratory disease in growing pigs: with emphasis on diagnosis, treatment, and control of bacterial pneumonia // North California Healthy Hog Seminar. 1998.

52. Barry M.A., Lai W.C., Johnston S.A. Protection against mycoplasma infection using expression-library immunization // Nature. 1995. - Vol. 377. - P. 632635.

53. Baseman J.B., Lange M., Criscimangna N.L. Interplay between mycoplasmas and host target cells // Microb. Pathog. 1995. - Vol. 19. - P. 105-116.

54. Battrell M.A., Farms M., Hill R. Managing swine respiratory disease // J. Gen. Virol. 2008. - Vol. 87.-P. 1264-1274.

55. Benfield D. A. Porcine reproductive and respiratory syndrome // Diseases of Swine / ed. D.J. Taylor. Ames, Iowa, 1999. - P. 201-224.

56. Berner H. Impfung-eine neue methode der Bekämpfung der Enzootischen Pneumoniae des Schweines // Prakt. Tierarzt. 1995. - P. 668-682.

57. Bisping W., Amtsberg G. Mycoplasms // Farbatlas zur Diagnose Bakterieller Infektionserreger der Tiere. Berlin, Hamburg, 1988. - P. 307-323.

58. Blank W.A., Stemke G.W. A physical and genetic map of the Mycoplasma hyopneumoniae strain J genome // Can. J. Microbiol. 2000. - Vol. 46. - P. 832-840.

59. Blending of a conventional Mycoplasma hyopneumoniae vaccine with a positive marker: tracking of immunized pigs by peptide-specific antibodies raised to the marker component / B. Walders et al. // Res. Vet. Sci. 2005. -Vol. 78.-P. 135-141.

60. Botner A. Diagnosis of PRRS // Vet. Microbiol. 1997. - Vol. 55. - P. 295301.

61. Bruggmann S., Keller H. Quantitative detection of antibodies to Mycoplasma suipneumoniae in pigs' sera by an enzyme-linked immunosorbent assay // Vet. Rec.- 1977.-Vol. 101.-P. 109-111.

62. Burch D.G.S. The comparative efficacy of antimicrobials for the prevention and treatment of enzootic pneumonia and some of their pharmacokinetic // Pig J. 2004. - Vol. 53. - P. 8-27.

63. Calsamaglia M., Pijoan C., Trigo A. Application of a nested polymerase chain reaction assay to detect Mycoplasma hyopneumoniae from nasal swabs // J. Vet. Diagn. Invest. 1999. - Vol. 11. - P. 246-251.

64. Caron J., Ouardani M., Dea S. Detection and differentiation of Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma hyorhinis by PCR amplification of the P36 and P46 genes // J. Clin. Microbiol. 2000. - Vol. 38. - P. 1390-1396.

65. Characterization of the Mycoplasma genome / Rasin R. et al. // J. Biol. Med. 1983.-№56.-P. 357.

66. Choi Y.K., Goyal S.M., Joo H.S. Retrospective analysis of etiologic agents associated with respiratory diseases in pigs // Can. Vet. J. 2003. - Vol. 44. -P. 735-737.

67. Chronological'study of Mycoplasma hyopneumoniae infection, seroconversion and associated lung lesions in vaccinated and non-vaccinated pigs / M. Sibila et al. // Vet. Microbiol. 2007. - Vol. 122. - P. 97-107.

68. Comparison of transmission of Mycoplasma hyopneumoniae in vaccinated and non-vaccinated populations / T. Meyns et al. // Vaccine. 2006. - Vol. 24. -P. 701-7086.

69. Construction of the mycoplasma evolutionary tree from 5S rRNA sequence data / M. J. Rogers et al. // PNAS. 1985. - Vol. 82. - P. 1160-1164.

70. Controlling Mycoplasma hyopneumoniae / F. Joisel et al. // Merial, France. -2001.

71. Current perspectives on the diagnosis and epidemiology of Mycoplasma hyopneumoniae infection / M.Sibila et al. // Vet. J. 2008. - Vol. 3. - P. 125129.

72. Debey M.C., Roth J.A., Ross R.F. Enhancement of the increase in intracellular calcium concentration in stimulated" neutrophils by Mycoplasma hyopneumoniae H Vet. Res. Commun. 1993. - Vol. 17. - P. 249-257.

73. Detection and treatment of mycoplasma contamination in cultured cells // H. Jung et al. // Med. J. 2003. -Vol. 26. - P. 250-258.1.l

74. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae in bronchoalveolar lavage fluids of pigs by PCR / A.K. Baumeister, M. Runge, M. Ganter, A.A. Feenstra // J. Clin. Microbiol. 1998. - Vol. 36. - P. 1984-1988.

75. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae DNA by the polymerase chain reaction / Harasawa R. et al. // Molecular Cell Probes. 1991. - Vol. 5. - P. 103-109.

76. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae in lung and nasal swab samples from pigs by nested PCR and culture methods / Y. Otagiri et al. // J. Vet. Med. Sei. 2005. - Vol. 67. - P. 801-805.

77. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae in nose swabs from pigs by in vitro amplification of the 16S rRNA gene / L.G. Mattsson et al. // J. Clin. Microbiol. 1995. - Vol. 33. - P. 893-897.

78. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae in porcine nasal swabs using realtime PCR / F. Zeeh et al. // Proceedings 18th IPVS Congr. Hamburg, Germany, 2004. - Vol. 1. - P. 178.

79. Detection of porcine reproductive and respiratory syndrome virus and Mycoplasma hyorhinis antigens in pulmonary lesions of pigs suffering from respiratory syndrome / K. Kawashima et al. // J. Comp. Pathol. 1996. - Vol. 114.-P. 315-323.

80. Detection of respiratory pathogens in porcine lung tissue and lavage fluid / L. Moorkamp et al. // Vet. J. 2008. - Vol. 175. - P. 273-275.

81. Development of two real-time PCR assays for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae in clinical samples / C.R. Dubosson et al. // Vet. Microbiol. -2004.-Vol. 102.-P. 55-65.

82. Differentiation of Mycoplasma hyopneumoniae, M. flocculare and M hyorhinis on the basis of amplification of a 16S rRNA gene sequence / G.W. Stemke et al. // Am. J. Vet. Res. 1994. - Vol. 55. - P. 81-84.

83. Diversity of Mycoplasma hyopneumoniae in pig farms revealed by direct molecular typing of clinical material / D. Mayor et al. // Vet. Res. — 2007. -Vol. 38.-P. 391-398.

84. Done S.H. Enzootic pneumonia (mycoplasmosis) revisited // Pig Vet. J. 1996. -Vol. 38.-P. 40-61.

85. Done S.H. Porcine respiratory disease complex (PRDC) // Pig J. 2002. - Vol. 50.-P. 174-196.

86. Dussurget O., Roulland-dussoix D. Rapid, sensitive PCR-based detection of Mycoplasmas in simulated samples of animal sera // Appl. Environ. Microbiol. 1994.-Vol. 60.-P. 953-959.

87. Dybvig K. Molecular biology of mycoplasmas // Annu. Rev. Microbiol. -1996.-Vol. 50.-P. 25-57.

88. Dybvig K. Mycoplasmal genetics // Annu. Rev. Microbiol. 1990. - Vol. 44. -P. 81-104.

89. Easterday B.C. Swine influenza // Diseases of Swine / ed. D.J. Taylor. Ames, Iowa, USA, 1999. - P. 277-290.

90. Effect of sow vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae on sow and piglet colonization and seroconversion, and pig lung lesions at slaughter / M. Sibila et al. // Vet. Microbiol. 2008. - Vol. 127. - P. 165-170.

91. Effect of vaccination against Mycoplasma hyopneumoniae in pig herds with an all-in/all-out production system / D. Maes et al. // Vaccine. 1999. - Vol. 17. -P. 1024-1034.

92. Enzootic pneumoniae in pigs / D. Maes et al. // Vet. Quart. 1996. - Vol. 18. -P. 104-109.

93. Erlandson K.R. Evaluation of three serum antibody enzyme-linked immunosorbent assays for Mycoplasma hyopneumoniae II J. Swine Health and Production. -2005. Vol. 13. - P. 198-203.

94. Evaluation of tRNA gene for identification of Mollicutes / T. Stakenborg et al. // J. Clin. Microbiol. 2005. - Vol. 43. - P. 4558-4566.

95. Fagan P.K., Djordjevic S.P., Chin J. Oral immunization of mice with attenuated Salmonella typhimumum uroA expressing a recombinant Mycoplasma hyopneumoniae antigen (NrdF) // Infect. Immun. 1997. - Vol. 65. - P. 2502-2507.

96. Fano E., Pijoan C.,. Dee S. A longitudinal assessment of Mycoplasma hyopneumoniae serology, comparing three different infection routes and two ELISA tests // Proceedings 18th IPVS Congr. Hamburg, Germany. - 2004: -Vol. 1. - P. 128.

97. Fano E., Pijoan C., Dee S. Dynamics and persistence of Mycoplasma hyopneumoniae infection in pigs // Can. J. Vet. Res. 2005. - Vol. 69. - Pi 223228.

98. Frey J., Haldimann A., Nicolet J. Chromosomal heterogeneity of various Mycoplasma hyopneumoniae field strains // Int. J. System. Bacteriol. 1992. -Vol. 42. P. 275-280.

99. Friis N.F. Mycoplasma hyorhinis in the etiology of serositis among piglets // Acta Vet. Scand. 1994. - Vol. 35. - P. 93-98.

100. Galfre G., Howe S.C., Milstein C. Antibodies to major histocom-patibility antigens produced by hybrid cell lines // Nature. 1977. - Vol. 266. - P. 550552.

101. Genus- and species-specific identification of Mycoplasmas by 16S rRNA amplification / Kuppeveld F.J.M. et al. // Appl. Envir. Microbiol; 1992. -Vol. 58.-P. 2606-2615.

102. Global transcriptional analysis of Mycoplasma hyopneumoniae following exposure to hydrogen peroxide / E.R. Schafer et al. // Microbiology. 2007. -Vol. 153.-P. 3785-3790.

103. Gundersen D.E., Lee I.M., Davis R.E. Phylogeny of mycoplasma like organisms: a basis for their classification // J. Bacteriol. 1994. - Vol. 176. - P. 5244-5254.

104. Halbur P.G. Emerging and recurring diseases in growing pigs. 2001. - P. 435-437.

105. Harasawa R., Asada K., Kato I. A novel repetitive sequence from Mycoplasma hyopneumoniae II J. Vet. Med. Sei. 1995. - Vol. 57. - P. 557558.

106. Holko J., Urbanova J., Holkova T. Diagnostics of main bacterial agents of porcine respiratory diseases complex (PRDC) using PCR detection of Mycoplasma hyopneumoniae II Vet. Med. 2004. - Vol. 49. - P. 35-41.

107. Hsu T., Artiushin S., Minion F.C. Cloning and functional analysis of the P97 swine cilium adhesion gene of Mycoplasma hyopneumoniae II J. Bacteriol. -1997.-Vol. 179.-P. 1317-1323.

108. Hsu T., Minion F.C. Identification of the cilium binding epitope of the Mycoplasma hyopneumoniae P97 adhesin // Infect. Immun. 1998. - Vol. 66. -P. 4762-4766.

109. Humoral immune response to Mycoplasma hyopneumoniae in sows and offspring following an outbreak of mycoplasmosis / P. Wallgren et al. // Vet. Microbiol. 1998. - Vol. 60. - P. 193-205.

110. Identification and characterization of cytopathogenic Mycoplasma hyorhinis from swine farms with a history of abortions /"J.H. Shin et al. // J. Vet. Med. Sei. 2003. - Vol. 65. - P. 501-509.

111. Identification and mapping of immunogenic region of Mycoplasma hyopneumoniae P65 surface lipoprotein expressed in Escherichia coli from a cloned genomic fragment / Kim M. F. et al. // Infect. Immun. 1990. - Vol. 58.-P. 2637-2643.

112. Immune response of gnotobiotic piglets against Mycoplasma hyopneumoniae / J.Muneta et al. // J. Vet. Med. Sei. 2008. - Voll 70. - P. 1065-1070.

113. Immunoblot assays using recombinant antigens; for the detection of Mycoplasma hyopneumoniae antibodies / S. Subramaniam et al. // Vet. Microbiol: 2000. - Voli 75: - P. 99-106.

114. Immunoblotting analysis of antibody response in swine experimentally inoculated with Mycoplasma hyopneumoniae / Y. Mori // Vet. Immunol. Immunopathol. 1988. - Vol. 19. - P. 239-250.

115. Immunological and pathological reactions in piglets experimentally infected with Mycoplasma hyopneumoniae and/or Mycoplasma flocculare / M. Strasser et al. // Vet. Immun. Immunopathol. 1992. - Vol. 31. - P. 141-153.

116. Isolation, identification and diversity of Mycoplasma hyopneumoniae strains / T. Stakenborg et al. // Enzootic Diseases. 2002. - Vol. 4. - P. 459463.

117. Isolation of Mycoplasma hyopneumoniae from different sampling sites in experimentally infected and contact SPF piglets / C. Marois et al. // Vet. Microbiol. 2007. - Vol. 120. - P. 96-104.

118. General properties of mollicute genomes / P. Sirand-Pugnet et al.,// Res. Microbiol. 2007. - Vol. 158 - P. 754-766.

119. Jang E.J., Kim T.J. In vitro expression of the 50-kDa and 30-kDa fragments of the P97 adhesin of Mycoplasma hyopneumoniae in Escherichia coli and their use for serodiagnosis // Can. J. Vet. Res. 2007. - Vol. 71. - P. 278-282.

120. Kapur V., Elam M.R., Pawlovich T.M. Genetic variation in porcine reproductive and respiratory syndrome virus isolates in the midwestern United States / // J. Gen. Virol. 1996. - Vol. 77. - P. 1271-1276.

121. Kazama S., Yagihasshi T., Morita T. Isolation of Mycoplasma hyorhinis and Mycoplasma argininvtrom the ears of pigs with otitis media // Res. Vet. Sci. — 1994.-Vol. 56.-P. 108-110.

122. Keffaber K. K. Reproductive failure of unknown etiology // Am. Assoc. Swine Pract. Newslatter. 1989. - Vol. 1. - P. 1-9.

123. Kleven S.H. Mycoplasmas in the Etiology of Multifactorial Respiratory Disease // Poultry Sci. 1998. - Vol. 77, №8. - P. 1146-1149.

124. Kobish M., Friis N.M. Swine mycoplasmoses // Rev. Sci. Off. Int. Epizoot. -1996.-Vol. 15.-P. 1569-1606.

125. Kohne K., Huebert P. Mixed respiratory infections associated with the porcine respiratory disease complex detected with multiplex-PCR // Proceeding 19th Int. Congr. Pigs Vet. Soc. 2006. - P. 313.

126. Koostra W., Adams J., Smith P. In vitro selection and identification of antibiotic-resistant Mycoplasma mutants // J. Bacteriol. 1966. - Vol. 91, №6.-P. 23-86.

127. Kwon D., Chae C. Detection and localization of Mycoplasma hyopneumoniae DNA in lungs from naturally infected pigs by in situ hybridization using a digoxigenin-labeled probe // Vet. Pathol. 1999. - Vol. 36.-P. 308-313.

128. Kwon D., Choi C., Chae C. Chronologic localization of Mycoplasma hyopneumoniae in experimentally infected pigs // Vet. Pathol. 2002. - Vol. 39.-P. 584-587.

129. Landis J. R., Koch G. G. The measurement of observer agreement for categorical data // Biometrics. 1977. - Vol. 33. - P. 159-174.

130. Levonen K. The detection of respiratoiy diseases in swine herds by means of antibody assay on colostrum from sows: acad. diss. / Faculty of Veterinary Medicine of the University of Helsinki. Helsinki, 2000. - 91 p.

131. Loreto E.L.S., Ortiz M.F., Porto J.I.R. Insertion sequences as variability generators in the Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma synoviae genomes // Gen. Molec. Biol. 2007. - Vol. 30. - P. 283-289.

132. Madden D.L., McCullough N.B. Basic biological characteristics of Mycoplasma// J. Am. Vet. Med. Assoc. 1967. - №151. - P. 16-38.

133. Maes D., Segales J., Meyns T. Control of Mycoplasma hyopneumoniae infections in pigs // Vet. Microbiol. 2007. - Vol. 126. - P. 297-309.

134. Microorganisms associated with pneumonia in slaughter weight swine / R.B. Morrison et al. // Can. J. Comp. Med. 1985. - Vol. 49. - P. 129-137.

135. Minion C.F. Molecular pathogenesis of mycoplasma animal respiratory pathogens // Frontiers Biosci. 2002. - Vol. 7. - P. 1410-1422.

136. Minion C.F., Lefkowitz E.J., Madsen M.L. The genome sequence of Mycoplasma hyopneumoniae strain 232, the agent of swine mycoplasmosis // J. Bacteriol. 2004. - Vol. 186. - P. 7123-7133.

137. Mitochondrial activities in human cultured skin fibroblasts contaminated by Mycoplasma hyorhinis / N. Darin et al. // BMC Biochem. 2003. - Vol. 4. -P. 15.

138. Mori Y., Hamaoka T., Sato S. Use of monoclonal antibody in an enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies against Mycoplasma hyopneumoniae // Isr. J. Med. Sei. — 1987. Vol. 23. - P. 657-662.

139. Mrazek J. Analysis of distribution indicates diverse functions of simple sequence repeats in mycoplasma genomes // Molec. Biol. Evol. 2006. - Vol. 23.-P. 1370-1385.

140. Mycoplasma diseases of animals / J.W. Simeska et al. // Mycoplasmas: Molecular Biology and Pathogenesis / ed. J. Maniloff [et al.]. Washington, 1992.-P. 391-415.

141. Mycoplasma hyopneumoniae increases intracellular calcium release in porcine ciliated tracheal cells / S-C. Park et al. II Infect. Immun. 2002. -Vol. 2.-P. 126-129.

142. Mycoplasma hyopneumoniae infection in pigs: duration of the disease and evaluation of fout diagnostic assays / V. Sorensen et al. // Vet. Microbiol. -1997.-Vol. 54.-P. 23-34.

143. Mycoplasma hyorhinis in Taiwan: Diagnosis and isolation of swine pneumoniae pathogen / J.H.Lin et al. // Vet. Microbiol. 2006. - Vol. 115. -P. 111-116.

144. Mycoplasmas: molecular biology and pathogenesis / J.S. Ellison et al. Am. Soc. Microbiol. 1992. - P. 491-504.

145. O.I.E. WAHID, 2007. URL: www/oie.int/wahis/public.php?page=home.

146. Patterns of Mycoplasma hyopneumoniae infections in Belgian farrow-to-finish pig herds with diverging disease-course / J. Vicca et al. // J. Vet. Med. Ser. B. 2002. - Vol. 39. - P. 349-353.

147. PCR-based detection of Mycoplasma species / H. Okada et al. // J. Microbiol. 2005. - Vol. 44. - P. 42-49.

148. Pollack J.D., Wiliams M.V., Banzon J. Comparative metabolism of Mesoplasma, Entomoplasma, Mycoplasma and Acholeplasma II Int. J. Syst. Bacteriol. 1996. - Vol. 46. - P. 885-890.

149. Polymerase chain reaction for Mycoplasma detection in tracheobronchiolar washings from pigs / B. Blanchard et al. // Mol. Cell Probes. 1996. - Vol. 10.-P. 15-22.

150. Pommier P., Pagot E., Keita A. Epidemiological study of porcinereproductive and respiratory syndrome virus in French farrowing-to-finishing>herds // Proceedings 4l Int. Symp. Emerging and Re-emerging Pig Dis. — Rome, 2003.-P. 62-63.

151. Prevalence of respiratory diseases and their association with growth rate and space in randomly selected swine herds / M.R. Wilson et al. // Can. J. Vet. Res. 1986. - Vol. 50. - P. 209-216.

152. Proceedings of the 30th-Annual Meeting of the American Association of Swine Practitioners: Abstracts. St. Louis, 2007. - 540 p.

153. Protein and antigenic variability among Mycoplasma hyopneumoniae strains by SDS-PAGE and immunoblot / P. Assuncao, C. De la Fe, A.S. Ramirez, O. Gonzales Llamazares // Vet. Res. Commun. 2005. - Vol. 29. - P. 563-574.

154. Protein variability among Mycoplasma hyopneumoniae isolates / D. Calus et al. // Vet. Microbiol. 2007. - Vol. 120. - P. 284-291.

155. Rapid detection of mycoplasma contamination in cell cultures using SYBR Green-based real-time polymarese chain reaction / Y. Tshikawa et al. // In vitro Cell Dev. Biol. Anim. 2006. - Vol. 42. - P. 63-69.

156. Rapid serological profiling by enzyme-linked immunosorbent assay. Comparison of computation methods for measuring antibody titers in a single serum dilution / D. B. Snyder et. al. // Avian Dis. 1982. - Vol. 27, №2. - P. 474-484.

157. Rapp-Gabrielson V. Evaluation of duration of immunity after vaccination ofswine with a single dose of Mycoplasma hyopneumoniae bacterin (M+Pac ) // Proceedings Am. Swine Vet.: Annual Meeting. 2002. - P. 105.

158. Rasin S. Characteristics of the mycoplasmas as a group // Meth. Mycoplasmol. N. Y. - 1983. - P. 3-7.

159. Rautiainen E.J. Mycoplasma hyopneumoniae aspects of epidemiology, protection and control: acad. diss. / Faculty of Veterinary Medicine of the University of Helsinki, 2001.- 106 p.

160. Razin S., Freundt E.A. The Mollicutes, Mycoplasmatales and Mycoplasmatacae // Bergey's Manual of Systematic Bacteriology / ed. N. Krieg, J.G. Holt.-Baltimore; London, 1984. Vol. 1. - P. 740-793.

161. Razin S. The genera*Mycoplasma, Ureaplasma, Acholeplasma, Anaeroplasma and Asteroplasma // The Prokaryotes / ed. A. Balows. N. Y., 1991. - P. 19371959.

162. Razin S., Yogev D., Naot Y. Molecular biology and pathogenicity of mycoplasmas //Microbiol. Mol. Biol. Rev. 1998. - Vol. 64. - P. 1094-1156.

163. Real-time PCR based on SYBR-Green I fluorescence: an alternative to the TaqMan assay for a relative quantitation of gene rearrangements, gene amplifications and micro gene deletions / F. Ponchel et al. // BMC Biotechnol. -2003.-Vol.3.-P. 1-13.

164. Reiterated repeat region variability in the ciliary adhesion gene of Mycoplasma hyopneumoniae / J.L. Wilton et al. // Microbiol. 1998. - Vol. 144.-P. 1931-1943.

165. Rolle M. Bakterien ohne Zellwand, Mykoplasmen // Medizinische Microbiologie, Infektions- und Seuchenlehre. 6 Auflage. - Stuttgart, 1993. -P. 797-810.

166. Ruiz A., Galina 1., Pijoan C. Mycoplasma hyopneumoniae colonization of pigs sired by different boars // Can. J. Vet. Res. 2002. - Vol. 66. - P. 79-85.

167. Schmidt J.A., Browning G.F., Markham P.F. Mycoplasma hyopneumoniae p65 surface lipoprotein is a lipolytic enzyme with a preference for shorter-chain fatty acids // J. Bacteriol. 2004. - Vol. 186. - P. 5790-5798.

168. Schwartz K. Pathological diagnosis of mycoplasmosis in swine // Swine Mycoplasmal Pneumonia Technical Workshop, Kansas City, MO, FDA/CVM. -2002.

169. Sensitive detection of mycoplasmas in cell cultures by using two-step polymerase chain reaction / R. Harasawa et al. // J. Vet. Med. Sei. 1993. - P. 227-232.

170. Seroepidemiology of M. hyopneumoniae in pigs from farrow-to-finish farms /E.A. Leon et al. //Vet. Microbiol. 2001. - Vol. 78. - P. 331-341.

171. Shoukri M. N., Edge V.L. Statistical Methods for Health Sciences. N. Y.: CRC Press Inc., 1996.

172. Sibila M., Olvera A., Calsamiglia M. Development of a real-time PCR (TaqMan) assay for Mycoplasma hyopneumoniae detection and quantification

173. Proceedings 18th IPVS Congr., Hamburg, Germany. 2004. - Vol. 1. - P. 1568-1578.

174. Sieverding E. Handbuch Gesunde Schweine. Osnabrück, 2000. - P. 176179.

175. Stark K.D., Keller H., Eggenderger E. Risk factors for the reinfection of specific pathogen free breeding herds with enzootic pneumoniae // Vet. Ree. — 1992.-Vol. 131.-P. 532-535.

176. Stark K.D., Nicolet J., Frey J. Detection of Mycoplasma hyopneumoniae by air sampling with a nested PCR assay // Appl. Envir. Microbiol. 1998. - Vol. 64. - P. 543-548.

177. Stemke G.W., Robertson J.A. The growth response of Mycoplasma hyopneumoniae and Mycoplasma flocculare based upon ATP-dependent luminometry // Vet. Microbiol. 1990. - Vol. 24. - P. 135-142.iL

178. Stevenson G.W. Bacterial pneumoniae in swine // Proc. 15 IPVS Congress. -1998.-P. 11-20.

179. Stipkovits L. Isolation and pathogenecity of mycoplasmas from geese // Ann. Microbiol. (Inst. Pasteur). 1984. - №135A . - P. 91.

180. Swine and poultry pathogens: the complete genome sequences of two strains of Mycoplasma hyopneumoniae and a strain of Mycoplasma synoviae / A.T.R. Vasconcelos, H.B. Ferreira, C.V. Bizarro, S.L. Bonatto // J. Bacteriol. 2005. -Vol. 187.-P. 5568-5577.

181. Thacker E.L., Thacker B.J. MH and PRRS in the Finisher // American Association of Swine Practitioners. 1999.-P. 145-146.

182. Thacker E.L., Thacker B., Minion F.C. Development of improved diagnostic PCR assays for Mycoplasma / College of Veterinary Medicine Iowa State University Ames.

183. Thacker E.B. Factors affecting the efficacy of the Mycoplasma hyopneumoniae vaccine / Veterinary Medical Research Institute, Iowa State University.

184. Thacker E.L. Diagnosis of Mycoplasma hyopneumoniae // J. Swine Health Prod. 2004. - Vol. 12. - P. 252-254.

185. The transmission of Mycoplasma hyopneumoiae between sow and piglets during the first 14 days of piglets life / E. Rautianien et al. // 15th Congr. Int. Pig Vet. Soc. Birmingham, 1998. - P. 250.

186. Ultrastructural observation of the airways of recovered and susceptible pigs after inoculation with Mycoplasma hyopneumoniae / L.F. Irigoyen et al. // Pesq. Vet. Bras. 1998. - Vol. 18. - P. 135-141.

187. Uphoff C.C., Drexler H.G. Detection of mycoplasma contaminations in cell cultures by PCR analysis II Hum. Cell. 1999. - Vol. 12. - P. 229-236.

188. URL: www.mcxpx.ru/basegvc/vetzac/document/351.html/

189. Use of a Mycoplasma hyopneumoniae nested polymerase chain reaction test to determine the optimal sampling sites in swine / K.T. Kurth et al. // J. Vet. Diagn. Invest. 2002. - Vol. 14. - P. 463-469.

190. Use of a novel serum ELISA method and the tonsil-carrier state for evaluation of Mycoplasma hyosynoviae distributions in pig herds with or without clinical arthritis / E. O. Nielsen et al. // Vet. Microbiol. 2005. - Vol. 111. - P. 41-50.

191. Variable number of tandem amino acid repeats in adhesion-related CDS products in Mycoplasma hyopneumoniae strains / L.A. de Castro et al. // Vet. Microbiol. 2006. - Vol. 116. - P. 258-269.

192. Veilleux C., Razin S., May L.H. Detection of mycoplasma infection by PCR // Molecular and Diagnostic Procedures on Mycoplasmology. — 1996. Vol. 2. -P. 431-438.

193. Vengust G., Valencak Z., Bidovec A. A serological survey of selected pathogens in wild boar in Slovenia // J. Vet. Med. Ser. B. 2006. - Vol. 52. - P. 24-27.

194. Vicente J., Leon-Vizcaino L., Gortazar C. Antibodies to selected viral and bacterial pathogens in European wild boars from southcentral Spain // J. Wildl. Dis. 2002. - Vol. 38. - P. 649-652.

195. Welsh J., McClelland M. Genomic fingerprints produced by PCR with consensus tRNA gene primers // Nucleic Acids Res. 1991. - Vol. 19. - P. 861-866.

196. Woeste K., Grosse Beilage E. Transmission of agents of the porcine respiratory disease complex between swine herds // Dtsch. Tieravztl. Wochenschr. 2007. - Bd. 114. - P. 364-366.

197. Yagihashi T., Kazama S., Tajima M. Seroepidemiology of mycoplasmal pneumonia of swine in Japan as surveyd by an enzyme-linked immunosorbent assay //Vet. Microbiol. 1993. - Vol. 34. - P. 155-166.

198. Zimmermann W., Tshudi P., Nicolet J. ELISA-Serologie in Blut und Kolostralmilch: eine Möglichkeit zur Überwachung der enzootischen Pneumoniae (EP) in Schweine-Beständen// Schweiz. Arch. Tierheilk. 1986. -Bd. 128.-P. 299-306.