Разработка и применение иммуноферментных тест-систем для определения антител к вирусу ССЯ-76 и оценки качества вируссодержащего сырья тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.06, кандидат биологических наук Волкова, Марина Алексеевна

• Волкова, Марина Алексеевна
• кандидат биологических наук
• 1999

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Волкова, Марина Алексеевна

1. ВВЕДЕНИЕ.

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

2.1. Аденовирусная инфекция кур, вызываемая аденовирусом ССЯ-76.

2.2. Классификация и структура аденовирусов птиц.

2.3. Морфология и химический состав вируса ССЯ-76. Устойчивость к физическим воздействиям.

2.4. Гемагглютинирующая активность вируса ССЯ-76.

2.5. Антигенная активность вируса ССЯ-76.

2.6. Иммунитет и специфическая профилактика.

2.7. Диагностика синдрома снижения яйценоскости кур.

2.8. Иммуноферментный анализ.

3. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ

3.1. Материалы и методы.

3.2. Результаты исследований

3.2.1. Разработка метода выявления и определения активности вируса ССЯ- 76 в непрямом сэндвич-варианте ИФА.

3.2.2. Оптимизация условий постановки непрямого сэндвич-варианта ИФА.

3.2.3. Изучение корреляционной зависимости между результатами определения активности вируса ССЯ-76 в ИФА и РГА.

3.2.4. Разработка метода выявления и количественного определения в

ИФА антител к вирусу ССЯ-76.

3.2.5. Оптимизация условий постановки ИФА.

3.2.6. Изучение корреляционной зависимости результатов выявления в ИФА и РТГА антител к вирусу ССЯ-76.

3.2.7. Определение титра антител в ИФА методом одного разведения.

3.2.8. Изучение корреляционной зависимости результатов выявления антител к вирусу ССЯ-76 в РТГА и ИФА при контроле вакцинных препаратов.

3.2.9. Иммунологический мониторинг птицепоголовья в отношении вируса ССЯ-76 на птицефабриках Российской Федерации.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и применение иммуноферментных тест-систем для определения антител к вирусу ССЯ-76 и оценки качества вируссодержащего сырья»

Актуальность темы. Синдром снижения яйценоскости-76 - заболевание птицы, вызываемое ДНК - содержащим вирусом, который относится к семейству Adenoviridae. Заболевание сопровождается резким, но непродолжительным снижением яичной продуктивности кур-несушек, ухудшением качества яиц, появлением яиц с мягкой, деформированной скорлупой или без скорлупы.

Впервые установленный в 1976 году в Северной Ирландии (Van Eck J.H. et al.) синдром снижения яйценоскости в последующие годы регистрировали в других странах Европы, Южной Америки, Азии, Австралии и Африки (Baxendale W.,1978; McFerran J.В., 1980; et al.). В начале восьмидесятых годов были выявлены случаи ССЯ-76 в нашей стране, что было подтверждено обнаружением в крови переболевших птиц антигемагглютининов к вирусу ССЯ-76 (Рождественский И.К. и соавт., 1981; Бурцев В.Ю. и соавт., 1983). В крупных птицеводческих хозяйствах ССЯ-76 наносит существенный экономический ущерб, который усугубляется затратами на оздоровительные мероприятия.

Диагноз на синдром снижения снижения яйценоскости -76 устанавливают комплексно на основании данных эпизоотологического обследования хозяйства, клинических признаков и патологоанатомических изменений у поражённой птицы и результатов лабораторных исследований.

Принятая в нашей стране схема ретроспективной диагностики предусматривает выявление антител с помощью традиционных серологических реакций: реакции диффузной преципитации, реакции нейтрализации и реакции торможения гемагглютинации.

Разработка иммунохимических методов - ИФА расширила возможность выявления специфических антител к возбудителям вирусных болезней, открыла перспективы устранения многих технических проблем лабораторной диагностики и повышения её стандартизации и достоверности. Являясь одним из сравнительно "молодых" методов, базирующихся на использовании антител, конъюгированных с различными ферментами, ИФА по многим параметрам превосходит традиционные методы диагностики: по чувствительности, специфичности и производительности, быстроте получения результатов, возможности стандартизации условий постановки анализа, доступности широкому кругу практических учреждений.

В связи с интенсивным развитием птицеводства диагностика заболеваний птиц приобретает всё большее значение. Внедрение современных методов диагностики в птицеводство диктует необходимость создания автоматизированных систем анализа для проведения массовых исследований. В зарубежных коммерческих наборах (фирмы ЮЕХХ, КР1 (США), виНсИпау (Англия)) предусматривается тестирование сывороток в одном разведении одновременно на несколько заболеваний, что позволяет сократить время при проведении комплексной лабораторной диагностики. Применение иммунофермент-ных тест-систем для определения антител и компьютерных программ обработки данных в птицеводстве позволяет:

- определять уровень материнских антител;

- предсказывать точно время падения уровня материнских антител для возможно более ранней вакцинации без интерференции с "полевым" вирусом;

- оценивать эффективность вакцинации (напряжённость иммунитета); -корректировать программу вакцинации по серологическим профилям для нормальных и неоднородных стад;

- определить возможный контакт с "полевым" вирусом.

Указанные преимущества этого метода способствовали его выбору для изучения возможности использования в качестве метода выявления и количественного определения антител к вирусу ССЯ-76 при ретроспективной диагностике и для оценки состояния гуморального иммунитета.

Кроме того, в условиях интенсивного производства вакцин назрела необходимость разработки специфичных и точных методов оценки качества вирусного сырья. Реакция гемагглютинации, применяемая в настоящее время для контроля вируссодержащего сырья, используемого при изготовлении вакцины против ССЯ-76, при высокой чувствительности не обладает специфичностью по отношению к гемагглютинирующим вирусам. В литературе имеются сообщения об использовании сэндвич-варианта ИФА для прямого обнаружения и определения активности различных вирусов, вызывающих болезни птиц. 7

Однако многие вопросы постановки непрямого варианта ИФА для определения антител к вирусу ССЯ-76 и использование непрямого сэндвич-варианта ИФА для оценки качества вируссодержащего сырья при изготовлении диагностикумов и вакцин требуют дальнейшей разработки, что является актуальной задачей, так как этот чувствительный, специфичный и простой для исполнения метод позволит проводить массовые исследования птицепоголо-вья на наличие антител к вирусу ССЯ-76, изучение иммунного статуса птиц и оценку качества вируссодержащего сырья при производстве диагностикумов и вакцин против ССЯ-76.

Цели и задачи исследования. Целью нашей работы явилась разработка метода контроля вируссодержащего сырья, используемого для производства диагностикумов и вакцин на основе непрямого сэндвич-варианта ИФА, и разработка иммуноферментной тест-системы для выявления и количественного определения вирусспецифических антител в сыворотках крови кур, позволяющей проводить массовые исследования птицепоголовья при ретроспективной диагностике ССЯ-76 и изучении иммунного статуса.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: -получить высокоочищенные, концентрированные препараты антигена и вирусспецифические сыворотки на лабораторных и восприимчивых животных;

-разработать иммуноферментную тест-систему для определения активности вируса ССЯ-76 в вируссодержащем сырье, используемом при производстве вакцин и диагностикумов, и провести сравнительный анализ данных, полученных с помощью ИФА и базовой реакции РГА;

-разработать иммуноферментную тест-систему для количественного определения антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур и провести сравнительный анализ данных ИФА и РТГА при тестировании сывороток методом последовательных разведений и при использовании одного разведения сыворотки;

-изучить корреляционную зависимость результатов выявления антител к вирусу ССЯ-76 в РТГА и ИФА при контроле вакцинных препаратов в условиях производства, 8

-провести анализ данных ИФА, полученных при иммунологическом мониторинге птицепоголовья в отношении вируса ССЯ-76 на птицефабриках Российской Федерации.

Научная новизна. Разработана тест-система на основе непрямого сэндвич-варианта ИФА для определения активности вируса ССЯ-76 в вирус-содержащем сырье при производстве диагностикумов и вакцин против ССЯу-ч

76. Большая специфичность ИФА по сравнению с РГА позволяла выявлять и ^

----. * определять концентрацию вируса ССЯ-76 в смеси с гетерологичными вирусами, используемой при производстве ассоциированных вакцин.

Впервые в России разработана иммуноферментная тест-система для выявления вирусспецифических антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур при тестировании их в одном разведении. Данная тест-система предусматривает количественное определение антител по уравнению регрессионной зависимости, осуществляемое автоматически с использованием компьютерной программы учёта и хранения результатов " Иммуноферментный анализ", разработанной в ВНИИЗЖ.

Изучена диагностическая ценность ИФА в сравнение с РТГА, применяемой при лабораторной диагностике ССЯ-76.

Проведён анализ данных ИФА, полученных при иммунологическом мониторинге птицепоголовья в отношении вируса ССЯ-76 на птицефабриках Российской Федерации в 1997-1999гг. с использованием разработанной имму-ноферментной тест-системы для определения антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур.

Практическая значимость. На основании проведённых исследований разработана тест-система на основе непрямого сэндвич-варианта ИФА для определения активности вируса ССЯ-76 в вируссодержащем материале. Разработана иммуноферментная тест-система для количественного определения антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур. Разработаны и утверждены Департаментом ветеринарии и директором института методические рекомендации и методики по определению антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур в иммуноферментном анализе, разработан "Набор для определения 9 антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости -76 иммуноферментным методом" и подготовлено наставление по применению разработанного набора. Данные иммуноферментные тест-системы внедрены в практику научных исследований и применяются при контроле вируссодержащего сырья, используемого при изготовлении вакцин и диагностикумов, при ретроспективной диагностике ССЯ-76 и контроле напряжённости поствакцинального иммунитета в ветеринарии.

Апробация работы. Результаты исследований по теме диссертации доложены и обсуждены на заседаниях Учёного Совета ВНИИЗЖ в 1995-1999 годах, на научной конференции, посвящённой 100-летию открытия вируса ящура (Владимир, 1997г.), на научной конференции, посвящённой 40-летию ВНИИЗЖ (Владимир, 1998г.), на научной конференции, посвящённой 30-летию Покровского завода биопрепаратов (Покров, 1999г.).

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 7 научных работ.

Объём и структура диссертации. Диссертация изложена на 135 страницах, иллюстрирована 24 таблицами, 2 схемами, и 24 рисунками. Список использованной литературы включает 136 источников, из них 116 иностранных.

Основные положения, выносимые на защиту. Разработка иммуно-ферментной тест-системы для выявления и определения активности антигена вируса ССЯ-76 в вируссодержащем сырье.

Результаты сравнения ИФА и РГА при контроле вирусного сырья для производства диагностикумов и вакцин против ССЯ-76.

Разработка иммуноферментной тест-системы для выявления и количественного определения антител к вирусу ССЯ-76 при тестировании сывороток в одном разведении с использованием компьютерной программы учёта и хранения результатов "Иммуноферментный анализ", разработанной во ВНИИЗЖ.

Результаты сравнения ИФА и РТГА при ретроспективной диагностике синдрома снижения яйценоскости-76, определении иммунного статуса у птиц и оценки эффективности вакцинации.

10

Исследования по диссертационной работе выполнены в 1995-99гг. во Всероссийском научно-исследовательском институте защиты животных (ВНИИЗЖ, Г.Владимир).

Автор выражает искреннюю благодарность научному руководителю, к.в.н. Борисову В.В., к.б.н. Мудрак Н.С., к.б.н. Дрыгину В.В., к.б.н. Фалиной Г.М., к.в.н. Борисовой O.A., к.б.н. Гулёнкину В.М., к.б.н. Колосову С.Н., д.б.н. Пономарёву А.П., Назаровой Т.И., Зинковскому Ю.В., Воробьёвой О.В., Ирзе В.Н., д.в.н. Узюмову В.Л. - за практическую помощь в выполнении отдельных этапов работы и оформлении диссертации.

11

2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Вирусология», Волкова, Марина Алексеевна

5. ВЫВОДЫ

1. Получены иммуноспецифические компоненты: препараты антигена и гипериммунные сыворотки для иммуноферментных тест-систем, предназначенных для определения активности вируса ССЯ-76 и для выявления антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур.

2. Разработана тест-система на основе непрямого сэндвич-варианта ИФА для определения активности вируса ССЯ-76 в исходном вируссодержащем сырье, используемом для производства вакцин и диагностикумов, а также в процессе его очистки и инактивации.

3. Показана специфичность непрямого сэндвич-варианта ИФА по сравнению с РГА, что позволяло выявлять вирус ССЯ-76 в смеси с другими гемагглютини-рующими вирусами, используемыми при составлении ассоциированных вакцин.

4. На основе непрямого варианта ИФА разработана тест-система для выявления вирусспецифических антител в сыворотках крови кур при тестировании их в одном разведении для количественного определения антител по уравнению регрессионной зависимости, осуществляемое автоматически с использованием компьютерной программы учёта и хранения результатов "Иммуноферментный анализ", созданной во ВНИИЗЖ.

5. При сравнительном анализе данных количественного определения антител к вирусу ССЯ-76 в ИФА и РТГА показана более высокая пороговая чувствительность ИФА по сравнению с РТГА и возможность тестирования неинакти-вированных сывороток в одном разведении (1:400).

6. Установлено наличие парной корреляции между результатами выявления антител к вирусу ССЯ-76 в ИФА и РТГА при контроле вакцинных препаратов производства ВНИИЗЖ (13=0.76). Вирусспецифические антитела выявляли через 14 дней после иммунизации кур инактивированными вакцинами против ССЯ-76 в обоих реакциях. Титры антител, выявленные в ИФА, в среднем были в 10 раз выше, чем в РТГА.

117

7. Уровень поствакцинальных антител к вирусу ССЯ-76 в сыворотках крови кур из 22 регионов России, привитых вакцинами производства ВНИИЗЖ в 199799гг., был в пределах от 1:1200 до 1:23000 и зависел от типа вакцины, иммунизирующей дозы, породы и возраста птиц, качества вакцинации и других факторов. При применении вакцинных препаратов на основе масляных адъю-вантов показатели титров антител в ИФА были выше более, чем в 2 раза, чем при использовании инактивированной сорбированной вакцины.

8. Выявление на ряде птицефабрик антител к вирусу ССЯ-76 в титрах от 1:300 до 1:1600 у невакцинированной птицы в возрасте от 100 до 500 дней, не со провождающееся клиническими проявлениями инфекции, свидетельствовало , о вероятной персистенции вируса в организме птиц.

ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

В процессе выполнения научных исследований разработан пакет научно-технической документации, который включает "Методику определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости (ССЯ-76) в сыворотке крови кур в иммуноферментном анализе", утверждённую директором ВНИИЗЖ 31.01.96г., "Методическое руководство по определению титра антител в реакции ИФА методом одного разведения сыворотки (на примере ССЯ-76)", утверждённое директором ВНИИЗЖ 21.05.98г., "Методическое руководство выявления и определения активности антигена вируса ССЯ-76 в непрямом сэндвич-варианте иммуноферментного анализа", утверждённое директором ВНИИЗЖ 28.01.99г., "Временную инструкцию по изготовлению и контролю сывороток, применяемых для диагностики синдрома снижения яйценоскости-76", утверждённую директором ВНИИЗЖ 13.09.95г., "Временную инструкцию по изготовлению и контролю диагностикумов и наборов для определения антител против вируса ССЯ-76 кур иммуноферментным методом", утверждённую директором ВНИИЗЖ 20.08.96г., "Временное наставление по применению набора для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом" и ТУ 9380-033-00008064-97 на "Набор для определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости-76 иммуно

118 ферментным методом", утверждённые Департаментом ветеринарии Минсель хозпрода России 27.03.97г.

Разработанные методы используются для лабораторной диагностики ССЯ-76 и контроля вируссодержащего сырья, используемого для производства вакцин и диагностикумов. Полученная НТД послужила основой для опытного производства коммерческих иммуноферментных наборов для выявления антител к вирусу ССЯ-76, применяемых в птицеводстве.

119

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Волкова, Марина Алексеевна, 1999 год

1. Антитела. Методы. / Под. ред. Д.Кэтти. -Мс; Мир. 1991. 382с.

2. Борисов В.В., Борисова O.A. и др. Сравнительное изучение иммуногенной активности эмульсионной и сорбированной вакцин против ССЯ // Тезисы докладов конференции, посвящ. 100-летию открытия вируса ящура. -BnaflHMnpj 1997. -С. 132.

3. Бурцев В.И., Бесхлебнов В.А., Козлова Д.И. Синдром снижения яйценоскости. Вопросы ветеринарной вирусологии, микробиологии и эпизоотологии // Тезисы докл. научной конф. -Покров, 1983. -С.61-66.

4. Верховская Л.В. Изучение антигенов аденовирусов и разработка иммуно-ферментной диагностики аденовирусных инфекций с/х животных Автореф;дисс. ,,, канд. биол. наук.-М, j 1991.-25с.

5. Вирусология: 3-х т. Пер. с англ. Под ред. Б. Филдса, Д. Найпа при участии Р. Ченока, Б. Ройзмана, Дж. Мелника, Р. Шоупа // М.:Мир. 1989.

6. Дудникова Е.К. Разработка и применение ИФА для выявления противоя-щурных антител в сыворотках крови животных Г Дисс, „v. канд. вет. наук. -Владимир,, 1997. -161с.

7. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М. Теория и практика иммуноферментного анализа // М. :Высш. школа. 1991. -288с.120

8. Иммуноферментный анализ / Под ред. Т.Т.Нго, Г.Ленхоффа. -Москва:Мир. -1988. -444 с.

9. Осидзе С.Д., Фомина Н.В., Грошева Г.А., Сергеев С.Д. Способ выявления антител для диагностики синдрома снижения яйценоскости-76 кур // Авторское свидетельство №1671311, зарегистрировано 22 апреля 1991 г.

10. Рождественский И.К., Коровин Р.Н, Седунов Э.А. Синдром снижения яйценоскости-аденовирусная болезнь кур // Ветеринария. -1981. -№4. -С.70-71.

11. Сергеев В.Д., Никитина Н.В., Мухамедшина А.Р. Иммуноферментный метод в диагностике болезни птиц // Основы профилактики болезней с/х птицы. -Л'. 1989.-С.75-82.

12. Сергеев В.Д., Никитина И.В., Осидзе С.Д., Фомина Н.В. Диагностика болезни птиц синдром снижения яйценоскости-76 // Комплекс противоэпизоотических и специальных мероприятий по борьбе с болезнями птиц. -Лс, 1990.-С. 15-21.

13. Сергеев В.Д., Дубовой A.C., Рождественский И.К. и др. Нормативно-техническая документация (ТУ, Инструкция, Наставление) на набор для диагностики синдрома снижения яйценоскости-76 иммуноферментным методом. Утверждены ГУВ 14.11.1991.

14. Фомина Н.В., Осидзе С.Д., Хилько С.Н., Кирасова М.А. Иммуноферментный метод определения антител к вирусу синдрома снижения яйценоскости -76 // Труды ВИЭВ. -1988. -№66. -С.37-41.

15. Фомина Н.В. // Аденовирусная инфекция животных: В 2х т. -Т2. -Му1. Колос, 1995. -193с.

16. Хохлачёв О.Ф., Беляева А.В. Усовершенствованный метод выявления антигемагглютининов к вирусу ССЯ-76 // Основы профилактики болезней с-х птиц. -Ленинград. -1989. -С.20-27.

17. Adair В.М., Curran W.L. . , McFerran J.В. Ultrastructural studies of the replication of fowl adenovirus in primary cell cultures // Avian Pathol. -1979. -Vol. 8. -P. 133-144.

18. Adair B.M., McFerran J.В., Connor T.J., Mc-Nulty M.S., . McKillop E.R. Biological and physical properties of a virus (strain 127) associated with the egg drop syndrome 1976 //Avian Pathol. -1979. Vol. 8. -P. 249-264.122

19. Badstue P.B. and Smidt B. Egg drop syndrome 76 in Danish poultry // Nord Vet. Med. -1978 -Vol. 30. -P. 498-505.

20. Baxendale W. Egg drop syndrome 76 // Veterinary Record. -1978.-Vol. 102. -P. 285-286.

21. Baxendale, W. Egg drop syndrome 76 // Veterinary Record. -1978.-Vol. 102. -P 450.

22. Baxendale, W., Lutticken D., Hein R. Observation made with the egg drop sindrome 76 of chickens and the development of a vaccine against the disease // Proc. 16 Worlds Poultry Congress, Sept.-17-21. -Brasil, -1978.

23. Baxendale, W. Convencion annal de la asociacion Nacional de espesialiatas on cicucias Avicolas. // Recent, research on egg drop syndrome-76 (EDS-76). -1980. -P. 206-211.

24. Bragg, R.R., Allwright D.M.; Coetzee L. Isolation and identification of adenovirus 127, the causative agent of egg drop syndrome (EDS), from commercial laying hens in South Africa Onderstepoort // J. Vet. Res. -1991. -Vol. 58. -P. 309310.

25. Brugere Picoux J. Les adenovirus en pathologie aviare //Rec. Med. Veter. -1978. -Vol. 154. -P. 1015-1021.

26. Chris S. Hayhow and Y.M. Saif. Development of an antigen-capture enzyme-linked immunosorbent assay for detection of Enterovirus in commercial Turkeys //AvianDiseases. -1993. -Vol. 37. -P. 375-379.

27. Chalguest R.R. A Statistical Model to optimize indirect Sandwich Enzyme-Linked immunosorbent assay parameters of antigen and antibody: a microcomputer program //Avian Diseases. -1987. -Vol. 31. -P. 509-512.123

28. Constantin, Hein. Preventition du syndrome "cute de ponte 76" par le vaccine inactive souche BC-14/^viculteur-1978. -Vol. 379. -P. 61-64.

29. Cook J.K.A. Aspectof vaccination against egg drop syndrome 76 (EDS-76) International symposium an the Immunization of Adult Birds with Inactivated Oil Abjuvant vaccines, Lyon, France, 1981 ^Develop, biol. standart. -1981.-Vol. 51 -P. 123-126.

30. Cook J.K.A. Egg Drop Syndrome 1976 (EDS-76) virus infection in adequately vaccinated chickens //Avian Pathol. -1983. -Vol. 12. -P. 9-16.

31. Darbyshire J.H., R.W. Peters. Studies on EDS 76 virus infection in laying chickens //Avian Pathol. -1980. -Vol. 9. -P. 277-290.

32. Dawson G.J., Orsi L.N., Yates V.G., Chang P.W., Pronovost A.D. An enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibodies to avian adenovirus and avian adenovirus-associated virus in chickens // Avian Diseases. -1980. -Vol. 24. -P. 393-402.

33. Eck J.H.H. Incidence of EDS-76 virus infection fowjin 1980 in the Netherlands in comparison with the incidence in 1976-1978 // Vet Q. -1981. -Vol 3. -P. 150152.

34. Eck J.H.H. Serological examination and egg production of progeny of fo experimentally infected with egg drop syndrome 76 virus // Vet. Q. -1982. -Vol 4. -P. 117-124.124

35. Eck J.H.H. Involment of spleen components of nature fowfjn the primary and secondary hlfmoral antibody response folio ing experimental EDS-76 virus infection //Veter. Q. -1986. -Vol 8. -P. 105-122.

36. Engvall E. r Perlman P. Enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA). Quantitative assay of immunoglobulin G //l^mmunochemistry. -1990. -Vol. 8. -P. 871-874.

37. Erlich H.A. PCR technology,-New York: Paven Press. 1998. 254 p

38. Firth G.A., Hall McFerran. Isolation of a nemagglutinating adeno-like virus related to virus 127 from an Australian poultry flock with an egg drop syndrome // Aust. Vet. J. -1981. -Vol. 57. -P. 239-242.

39. Garret J.K., Davis R.B., Ragland W.L. Enzyme-linked immunosorbent assay for detection of antibody to avian encefalomielitisvirus in chickens // Avian Diseases. -1984. -Vol. 28. -P. 117-130.

40. Gazdzinski P. Wystepowanie w krajowych fermach drobin przeciwcial przeciwko wirusowi wywol ujqcemuSyndrom Spadqu Niesnosci // Med. Wet. -1981. -Vol .37. -P. 172-174.

41. Goater E. Contre le syndrome EDS-76 2 solutions: I hygiene et la vaccination //Le ceurrier avicole. -1978. -Vol. 34. -P. 9-12.

42. Gough, R.E., Collins M;S. > Spackmani). Isolation of a haemagglutinating adenovirus from commercial ducks//Vet. Rec. -1982. -Vol. 110. -P. 275-276.

43. Ginsberg H.S., Pereira H.G., Valentine R.C., Wilcox W.C. A proposed terminology for the adenovirus antigens and virion morphological subunits // Virology. -1966. -Vol 28. -P. 782-783.125

44. Green M, Piena M. Biochemical studies on adenovirus multiplication. 4. Isolation, purification, and chemical analisis of adenovirus // Virology. -1963. -Vol. 20. -P. 199-207.

45. Hamblin C., Armstrong R.M. Preliminary studies using ELISA for the diagnosis of foot-and-mouth disease virus in epithelial tissue samples from the field // Europ. Commiss. ControljFMD. Lelystad, Netherlands, 20-22 Sept. -1983. -Rome.-P. 27-33.

46. Hamblin C., Barnett I.T.R., Hedger R.S. A nev^Jenzymelinked immunosorbent assay (ELISA) for the detection of antibodies against FMD virus 1.Development and method of ELIISA//lmmunol. Methods. -1986,-Vol. 93.-P. 115-121.

47. Harrach B., Meehan M. B., Benko M., Adair B. M., Todd D. Close Phylogenetic Relationship between Egg Drop Syndrome Virus, Bovine Adenovirus Serotype 7, and Ovine Adenovirus Strain 287 // Virology. -1997. -Vol. 229. -P. 302306.

48. Hassan M.K., Saif Y.M., Shawky. Comparison between antigen-capture ELISA and conventional methods used for titration of infectious bursal disease virus //Avian Diseases. -1996. -Vol. 40. -P. 562-566.

49. Heider G. von, Klaczinski K., Prusas C., Hlinak A., Minning P., Kieper B., Werner N. und Heiduk C. Antikorpernachweis viraler Erreger von Gefluggelkrankheiten im indirecten ELISA// Mh. Vet. Med. -1990. -Vol. 45. -P. 698702.

50. Hess M., Cuzange A., Ruigrok R.W.H. e.a. The avian adenovirus penton: Two fibers and one base // J. Mol. Biol. -1995. -Vol. 252. -P. 379-385.

51. Hlinak A., Dahms H.? Minning P. Beitrag zur Wertung Verschiedener Testmethoden zum Nachweis von Antikörpern gegen das Newcastle disease Virus // Mh. Vet. Med. -1992. -8ol. 47. -8. 443-447.126

52. Home R.W., Bonner S., Waterson A.P., Wildy P. The icosahedral form of an adenovirus //J. Mol. Biol. -1959. -Vol. 1. -P. 84-86.

53. Hosakava K, Sing M.T. Isolation and characterization of a extremely basic protein from adenovirus type 5 //Virology. 1976. -Vol. 17. -P. 924-934.

54. IDEXXs instruction for an enzyme immunoassay for the detection of antibody in chicken serum // IDDEXX Laboratories, Inc. Westbrook,USA. -1996. -P. 30.

55. Instruction for an enzyme immunoassay for the detection of antibody to Egg Drop Syndrome( EDS) in chictfen serum // England, Guildhay Ltd, 6 Riverside Business Centre, Walnut Tree Close, Guildfort, Surrey, GU1 4UG. -1996. -P. 4.

56. Infectious bronchitis virus antibody test kit. Instruction. Catalog № 54-82-01 // KPL ( Kirkegaard and Perry Laboratories), US, 2 Cessna Court Gaithersburg Maryland 20879, 800 638 3167.

57. Infectious bursal disease antibody test kit. Instruction. Catalogue Code CK113 // BioChek C.V. Weth. Venteweg 143. 2805 JN Gouda. Holland.

58. Ishibashi M., Maizel J.V. The polypeptides of adenovirus. V. Young virion, structural intermediates between top components and aged virions // Virology. -1974. -Vol. 57. -P. 409-424.

59. Islam M.R. ^ ! Jones R.C. An enzyme-linked immunosorbent assay for measuring antibody titre agaist avian reovirus using a single dilution of serum II Avian Pathology. -1988. -Vol. 17. -P. 411-425.

60. Kaleta E.F. et. al. Nachweis von Antikorpernjgegen das Egg Drp Syndrome-76 -virus bei domestrizierten und nicht domestrizierten Vögeln // Prakt. Tierartzt. -1980. -8ol. 61.-5. 948-955.

61. Kardi V., Szegletes, Forgach K., Toth B. Use of ELISA methods for determination of IBD (Gumboro) virus antigen and antibody // 11th International Congress of the World Veterinary Poultry Association: Abstr. -Budapest, Hungary. -1997. -P. 269.

62. Kazuhiro Y., Shuichi O. Enzyme-linked immunosorbent assay for the detection of infectious bronchitis virus antigens // Jap. J. Vet. Sei. -1987. -Vol. 49. -P. 757763.

63. Kisary J., Zsak L. The molecular weight of the egg drop syndrome (EDS) avian adenovirus (Strain B8/78) DNA extimated by digestion with restriction endonuclease enzyme R. EcoRI //Arch. Virol. -1980. -Vol. 65. -P. 63-65.

64. Kohler H., Loupal L., Spadint W. Zum Egg drop Syndrom des Huhnes. 2. Pathologische Anatomic und Histopatalogic II DTW. -1982. ol. 182. - . 14-16.

65. Kraft. V., Grund G.^Monreal. Ultrastructural characterisation of isolate 127 of egg drop syndrome 1976 virus as an adenovirus. // Avian Pathol. -1979. -Vol. 8. -P. 353-361.

66. Kumar R-, Mohanty. K.CvVerma. Epizootiological studies on egg drop syndrome in poultry // Indian J. Anim. Sei. -1992. -Vol. 62. -P. 497-501.128

67. Laver W.G., Suriano J.R., Green M. Adenovirus proteins. 2. N-terminal amino acid analisis//Virology. -1967. -Vol. 1. -P. 723-728.

68. Louis N., Fender P., Barge A. et al. Cell binding domain of adenovirus serotype 2 fiber // J.Virol. -1994. -Vol. 68. -P. 4104-4106.

69. Loupai G., Spadiut W., Vasicek L. Zum Egg Drop Syndrom des Huhnes. Mitt. L. Klinik und serologic // Dt. titerarztl. Wsch. -1982. -Vol. 89. -P. 11-13.

70. Ma S.H., Tan J.M., Wu Z., Tal X.G. Detection of the antibody of avian egg drop syndrome-76 by using the competition enzyme linked immunosorbent assay // Journal of Shanghai Agricultural College. -1991. -Vol. 9. -P. 285-289.

71. Maizel J.V., White D.O., Scharff M.D. The polypeptides of adenoviruses // Virology. -1968. -Vol. 36. -P. 115-136.

72. Malkinson M., WeismanK Serological survey for the prevalence of antibodies to egg drop syndrome 1976 virus in domesticated and wild birds in Israel // Avian Pathol. -1980. -Vol. 9. -P. 421-426.

73. Marquardt W.W., Johnson R.B., Odenwald W.F., Schlotthober B.A. An indirect enzyme-linked immunosorbent assay for measuring antibodies in chickens // Avian Diseases. -1980. -Vol. 24. -P. 375-385.

74. McCracken R.M., McFerran J.B. Experimental reproduction of the egg drop syndrome 76 withldeamagglutinating adenovirus //Avian. Pathol. -1978. -Vol. 7. -P. 483-490.129

75. McFerran J.B., Rowley, Helen M. Serological studies on flocks showing depressed egg production //Avian Palhol. -1977. -Vol. 6.-P. 405-413.

76. McFerran J.B., Adair B.M. //Avian Palhol. -1977. -Vol. 6.-P. 187-217.

77. McFerran J.B., McNulty M.S., Curran W.L. Diagnosis of avian viral disease by electron microscopy // Am.J.Vet. Res. -1978. -Vol. 39. -P. 505-508.

78. McFerran J.B., Connor T.J., Adair B.M. Studies on the antigenic relationship between an isolate (127) from the egg drop syndrome 76 and fow/adenovirus // Avian Pathol. -1978 -1978b. -Vol. 7. -P. 629-636.

79. McFerran J.B., McCracken E.R. McKillop. M.S.^McNulty /VjvS<> CollinsP Studies on a depressed egg production syndrome in Northern Iseland // Avian Palhol. 1978. -Vol. 7. -P. 35-47.

80. McFerran, J.B. Egg drop syndrome // Disease of poultry, lova State University1.wa, USA. 1997.-P. 552-563.

81. Meulemans G., Dekegel J. Peeters E. Van Meirhaeghe£ ^ Halen. Isolation of an adeno-like virus from laying chickens affected by egg drop syndrome 1976 //Vlaams Diergeneeskd Tijdschr. -1979.-Vol. 2.-P. 151-157.

82. Mockett A.P.A. Darbyshire J.H. Comparative studies with an the enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for antibodies to avian infectious bronchitis virus//Avian Pathpi-1981. -Vol. 1. -P. 1-10.130

83. Monreal J., Dorn R., Vergleichende Untersuchengen zum Antikorpernachweis bei Huhneradeno- and Egg Oi-op Syndrome 76 virus // Infectionen. Dt. tierarzti. Wsch. -1981. 4 c . 88. . 97-103.

84. Mullis K., Fallona F. Specific syntesis of DNA in vitro a polymerasecatalyzed chain reaction // Metod Enzymol. -1987. -Vol. 155. -P. 335-344.

85. Nagi S.A., Karaca K., Bauman B. A monoclonal antibody-based antigen capture E L I A for identification of infectious bronchitis virus serotypes // Avian Patholog. -1993. -Vol. 22. -P. 555-564.

86. Nawathe D.R., Abegunde/l Egg drop syndrome 76 in Nigeria: Serological evidence in commercial farms //Vet Ree. -1980. -Vol. 107. -P. 466-467.

87. Norrby E. The relationship between the soluble antigens and the virion of adenovirus type 3.4. Immunological complexity of soluble components // Virology. -1969.-Vol. 37. -P. 565-576.

88. Norrby E. The relationship between soluble antigens and the virion of adenovirus type 3. I.Morfological characteristics // Virology. -1966. -Vol. 28. -P. 236-248.

89. Norrby E. The relationship between soluble antigens and the virion of adenovirus type 3. 3. Immunological characteristics // Virology. -1969. -Vol. 37. -P. 565-576.

90. Norby E., Bartha A., Boulanger P., Dreizen R., Ginsberg H.S., Kalter S.S., Kawamura H., Rowe W.P., Rüssel W.C., Schiessinger W., Wigand R. Adenoviridae H Intervirology. -1976. -Vol. 7. -P. 117-125.

91. Ouwerkerk M. ELISA in der Geflugeldiagnostik // Swiss vet. -1990. -föol. 7. -5. 120-125.131

92. Pallister J.A., Sheppard M. Comparison by restriction enzyme analisis of three fowl adenoviruses of varying pathogenicity // Vet. Microbiol. -1995. -Vol. 48. -P. 155163.

93. Penzes Z.^ Meszaros J. Comparison of different computational methods for measuring antibodes to avian infectious bronchitis virus in single serum dilution // Acta Veterinara Hungarica. -1992. -Vol. 40. -P. 311-321.

94. Peraza Villarroel G., Martinez B.L. Vaccina emulsionada contra sindrome de la laja de postura 76: dosis inductora de anticuerpus inhibidores de la hemagglutination /A/eterinaria Mexico. -1986. -Vol. 17. -P. 97-103.

95. Petterson U., Wadell G. Antigen structure of the adenoviruses // Immunochemistry of viruses EDS. Van Regenmortel and Neirath A.R. -Elsevier Sci: Publishers, B.V. -1985. -P. 295-323.

96. Picault I.P. Chutes de ponte associees a la production sans coquille fragile: propriétés de I agent infectieux isole an cours de la maladie // Awiculteur. -1978. -Vol. 379. -P. 57-60.

97. Piela T.H., Yates V.G., Chand P.W. Use of egg yolk to determine ant body levels in chickens inoculated with aklemagglutinating duck adenovirus (adenovirus 127-1 ike) //Avian Diseases. -1985. -Vol. 29. -P. 457-464.132

98. Prage !., Petterson U., Hoglund S., Londberg-Holm K., Philipson L. Structural proteins of adenoviruses. 4. Sequential degradation of the adenovirus type 2 virion //Virology. -1970. -Vol. 42. -P. 341-358.

99. Robinson A.G.,; Younghusband H.B., Bellet A.J.D. A circular DNA-protein complex from adenoviruses//Virology. -1973. -Vol. 56. -P. 54-69.

100. Roggendorf M., Wigand R. Dienhardt F., Frosner G. Enzyme-linked immunosorbent assay for acute adenovirus infection // Journal of Virological iVlethods. -1982. -Vol. 4. -P. 24-35.

101. Russels W.C., Adrian T., Bartha A. Classification and Nomenclature of viruses Sixth report of the International Commitee on "Taxonomy of viruses" // Virus Taxonomy-Wien, NewYork, 1995. -P. 128-133.

102. Silim A. ,Venne D. Comparison of egg-yolk and serum antibody titers to four avian viruses by enzyme-linked immunosorbent assay using paired field samples //Avian Diseases. -1989. -Vol. 33. -P. 643-648.

103. Schloer G.M. Frequency of antibody to adenovirus 127 in domestic ducks and wild waterfowl //Avian DiseaseS.-1980. -Vol. 24. -P. 91-98.

104. Schloer G.M., Ph D., Heider.D. Antibody titer to adenovirus 127 in long island ducklines from one wefjkto six weeks of age //Connection Annal de la Asso-ciacion Nacional de espesialistas on cicucias. -Avicolas, 1980. -Vol. 81. -P. 189192.

105. Sharma J.M., Dohms J.E., Walser M.„ . Snayder D.B. Presence of lesions without virus replication in the thymus of chickens exposed to infectious bursal disease virus //Avian Diseases.-1993 -Vol. 37. -P. 741-748.133

106. Snyder D.G., Marguardt W.W., Mallinson E.T., Russel E. Enzyme-Linked Immunosorbent Assay. 1. Measurement of Antibody Activity Titer Against Newcastle Disease Virus in a Single Serum Dilution // Avian Diseases. -1983. Vol. 27. -P. 161-170.

107. Snyder D.B., Marguardt W.W. Laboratory manual for isolation and identification of avian pathogens. // American Assotiation of avian pathologists. -1989. -P. 161-170.

108. Stegny B.T., Nalivaiko L.I., Shomin A.A., Yu I. Studying of epizootic situation on egg-drop-syndrome (EDS-76) in Ukraine // 11th International Congress of the

109. World Veterinary Poultry Association: Abstr. -Budapest, Hungary. 1997. -P. 248.

110. Taniguchi T.S.;Yamaguchi M.5Maeda H.^Kawamura H., HoriuhiiXPatho-logical changes in laying hens inoculated with the JPA-I strain of egg drop syndrome 1976 virus // Nat. Inst. Anim. Health Q (Tokyo). -1981. -Vol. 21. -P. 83-93.

111. Todd D} r M.S. MoNulty. Biochemical studies on a virus associated with Egg Drop Syndrome-1976 // J. Gener Virol. -1978. -Vol. 40. -P. 63-75.

112. Tsukamoto K., Matsumura F., Mase M/ Imai K. A highly sensitive, broad-spectrum infectivity assay for infectious {jursal disease virus // Avian Diseases. -1995. -Vol. 39. -P. 575-586.

113. Yamaguchi S., Imada, H.^Kawamura H«,Taniguchi T. ?Saio H., Shi-mamatsu, Outbreaks of egg drop syndrome-1976 in Japan and its etiological agent //Avian Diseases.-1981. -Vol. 25. -P. 628-641.

114. Yamaguchi S., Imada i . Kawamura. H.? Taniguchi I., KawakamiM. Pathogenicity and distribution of egg drop syndrome-1976 virus (JPA-I) in inoculated laying hens //Avian Diseases-1981. -Vol. 25. -P. 642-649.

115. Wan Weemen B.K., Schuurs A.H.W.M. Immunoassay using antigen enzyme conjugates // FEBS Letters. -1971. -Vol. 15. -P. 232-236.

116. Wigand R.? Adrian T. Classification 9nd epidemiology of adenoviruses // Adenovirus DNA Ed. Doerfler W. -Boston. M. Vijhoff Publ. -1986. -P. 409-441.

117. Williams R, Boshoft C.H , Verwoerd D., Schoeman M.,van Wyk A., Gerdes T.H., Roos K. Detection of antibodies to //ewcastle disease virus in ostriches135struthio camelus) by an indi rect ELISA // Avian Diseases. -1997. -Vol. 41. -P. 864869.

118. Zakharchuk A.N., Kruglyak V.A., Akopian T.A., Naroditsky B.S., Ti-chonenke T.I. Physical mapping and homology studies of egg drop syndrome (EDS-76) adenovirus DNA// Arch. Virol. -1993. -Vol. 128. -P. 171-176.

119. Zanella A., Poli A. ? Bettoni V. Ri£erche preliminari sulla riposta immunitaria alia vaccinazione con vaccino inattivato in veicolo oleoso contro la cosiddetta "Sindrome calo di deposizione-76" // Selezione Suinavicunicola. -1978. -Insert 39.

120. Zanella A. et al. Egg drop syndrome (EDS 76) ethiopatogenesis, epidemiology, immunology and control of the disease // Convencion de la Asociacion Na-cionalde espesialistas on cicucias Avicolas. -1980. -P. 197-201.

121. Zanella. A., Di Donato A.,Nigrelli A., G. Poli. Egg drop syndrome (EDS 76). Etiopathogenesis, epidemiology, immunology and control of the disease // Clin Veter. -1980. -Vol. 103. -P. 459-469.

122. Zsak. L. KisaryJjMagyarorszagon izolalt B8/78 jelu EDS adenovirus bi-ologiai es fizikokemiai jellemzese // Magyar allatorvosok lapja. -1981.-Vol. 36. -P. 420-425.

123. Zsak. L. KisaryJ. Some biological and physico-chemical properties of egg drop syndrome (EDS) avian adenovirus strain B8/78 // Arch Virol. -1981. -Vol. 68. -P. 21, 1-219.

124. Zsak L., Szekely A., Kisary J. Experimental infection of joung and laying geese with egg drop syndrome-76 adenovirus strain B8/78 // Avian Pathol. -1982. -Vol. 11. -P. 555-562.136