Разработка и исследование термочувствительных биоматериалов на основе поли-N-изопропилакриламида тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Селезнева, Ирина Ивановна

• Селезнева, Ирина Ивановна
• кандидат физико-математических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Селезнева, Ирина Ивановна

Введение

СОДЕРЖАНИЕ

Глава I. Термочувствительные субстраты, модификация свойств поверхности для целей тканевой инженерии.

1.1. Природа кооперативных фазовых переходов, термочувствительность полимеров и способы ее модификации.

1.2. Методы приготовления субстратов на основе поли-Ы-изопропилакриламида и анализ физико-химических характеристик их поверхности.

1.3 Взаимодействие термочувствительных субстратов на основе поли-Nизопропилакриламида с клетками и белками сыворотки.

Глава 2. Материалы и методы исследования.

2.1. Методы исследования фазовых переходов в растворах термочувствительных полимеров и полимерных субстратах.

2.2. Методы формирования субстратов и исследования физико —химических характеристик их поверхности.

2.3. Культура клеток: экспериментальные среды, методы культивирования, подсчета, определения адгезионной, пролиферативной активности и жизнеспособности клеток.

Глава 3. Исследование кооперативных фазовых переходов в растворах термочувствительных полимеров и полимерных субстратах на основе сополимеров N-изопропилакриламида и N-третбутилакриламида.

3.1. Исследование объемных фазовых переходов в разбавленных растворах термочувствительных полимеров методом спектрофотометрии.

3.2. Определение параметров фазового перехода методом микрокалориметрии, выявление возможных механизмов модуляции термочувствительности в сополимерах ПНИПА/НТБА.

3.3. Исследование объемных фазовых переходов в термочувствительных субстратах ПНИПА/НТБА

Глава 4. Разработка техники приготовления полимерных субстратов ПНИ

ПА/НТБА и анализ физико-химических характеристик их поверхности.

4.1. Разработка техники приготовления полимерных субстратов ПНИПА/НТБА.

4.2. Исследование эластических свойств субстратов ПНИПА/НТБА.

4.3. Анализ химической композиции субстратов ПНИПА/НТБА

4.4.Исследование смачиваемости поверхности субстратов ПНИПА/НТБА.

Глава 5. Исследование взаимодействия термочувствительных субстратов ПНИПА/НТБА с клетками, оптимизация свойств субстратов для целей тканевой инженерии.

5.1. Исследование особенностей взаимодействия клеток с термочувствительными субстратами ПНИПА/НТБА.

5.2, Разработка методики фотоиндуцируемого связывания полимеров, исследование объемных фазовых переходов в субстратах ПНИПА/НТБА/ААБФ 113 5.3 Исследование особенностей взаимодействия клеток с термочувствительной поверхностью субстрата ПНИПА/НТБА/ААБФ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Разработка и исследование термочувствительных биоматериалов на основе поли-N-изопропилакриламида»

В настоящее время культуры клеток животных и человека находят все более широкое применение в медицине и биотехнологии. Развитие клеточных технологий и тканевой инженерии выдвигает ряд новых требований к материалам, формирующим субстрат-подложку для культивирования субстратзависимых клеток млекопитающих, и составляющих основу имплантируемых тканевых конструкций. Данные материалы должны поддерживать адгезию, рост и сохранение функциональной активности клеток, обеспечивать иммобилизацию и направленную доставку факторов, управляющих формированием тканей, быть нетоксичными и, по возможности, биодеградабельными.

Понимание механизма кооперативных взаимодействий в биополимерах, являющихся не только существенной составной частью, но и управляющей основой организма, явилось толчком к созданию так называемых "умных" или "восприимчивых" синтетических полимерных материалов. Способность восприимчивых полимеров резко и обратимо реагировать на изменение внешних условий определяет их использование в качестве функциональных материалов в самых разных областях. Восприимчивые полимеры используют для направленной доставки лекарств, разделения макромолекул, иммобилизации биокатализаторов и клеток и многого другого.

В 1990 году группой японских ученых был разработан субстрат для культивирования клеток на основе поли-Ы-изопропилакриламида (ПНИПА), термочувствительного полимера, несущего функциональные С=0 и N-H группы, характерные для молекул белков, и являющегося аналогом полилейцина по химическому составу. Поли-N-изопропилакриламид испытывает фазовый переход из нерастворимого в растворимое в воде состояние при температуре около 33°С, называемой нижней критической температурой сольватации (НКТС). Из всех Н,Н-алкилпроизводных акриламида ПНИПА характеризуется наиболее резким набуханием/коллапсом при переходе температуры через критическую точку, что определяется уникальным балансом гидрофоб-но/гидрофильных взаимодействий в молекуле данного полимера (Bae et al., 1990). При температуре 37°С полимер находится в нерастворимом состоянии, что позволяет использовать его в качестве твердого субстрата для культивирования клеток. Понижение температуры культивирования ниже НКТС вызывает гидратирование полимера и открепление клеток от поверхности субстрата без применения протеолитических ферментов и диссоциирующих агентов.

На основании анализа опубликованных работ можно отметить несколько основных преимуществ термочувствительных субстратов на основе ПНИПА перед традиционно используемым культуральньш пластиком. Культивирование на термочувствительной поверхности позволяет получать интактные культуры клеток и на протяжении многих пассажей поддерживать специфическую активность клеток (Okano et al, 1993). Гидрофильно/гидрофобные свойства поверхности ПНИПА позволяют управлять не только прикреплением/откреплением культур клеток, но и процессами сорбции/десорбции белков, при откреплении от субстрата клетки сохраняют функциональные белки, межклеточные контакты и синтезированный матрикс (Liu, Zhu 1999). Зависимое от температуры изменение адгезионных характеристик и набухания субстрата ПНИПА позволяет проводить позиционирование двух типов сокультивируемых клеток. (Ito et al., 1997) (Yamato et al., 2002). Данные характеристики субстрата ПНИПА подразумевают широкие возможности его применения для культивирования специализированных клеток, создания тканевых эквивалентов и проведения исследований в области клеточной биологии.

Однако, ряд недостатков, связанных в основном с существующими ныне методами формирования субстратов, ограничивают возможности широкого применения ПНИПА для нужд тканевой инженерии, медицины и биотехнологии. Основным недостатком применяемых в настоящее время методик приготовления субстратов ПНИПА является необходимость ковалентного связывания ПНИПА с поверхностью для обеспечения устойчивой адгезии и роста культур клеток. Эта необходимость вызвана сильной-гидратацией линейных полимеров ПНИПА (Takezawa et al., 1990). В настоящее время для приготовления субстратов ПНИПА чаще всего используется метод полимеризации полимера при помощи электронного луча высокой энергии непосредственно на поверхности, предназначенной для культивирования клеток (Bae et al, 1990, Yamada et al., 1990). Низкая плотность покрытия, формируемого данным методом, ограничивает динамические свойства субстратов и определяет существенное влияние свойств подложки на смачиваемость поверхности субстратов ПНИПА. К недостаткам данного метода; следует отнести также ряд ограничений на тип покрываемой поверхности, необходимость проведения многократных промывок, для удаления непрореагировавших токсичных для клеток мономеров, а также то, что аппаратура, используемая для формирования электронного луча высокой энергии, недоступна большинству исследователей, работающих с культурами клеток.

Разработаны также методы фотоиндуцируемой полимеризации ПНИПА на поверхности полистирола (Chen et al., 98).(Ichimura, Komatsu, 1987) (Moghaddam, Matsuda, 1993) (Liang et al., 2000), однако данные методы также подразумевают проведение ряда промывок и стерилизацию поверхности перед использованием ПНИПА в качестве субстрата для культивирования клеток. Различие в методах синтеза, отсутствие контроля над степенью ковалентного связывания, неконтролируемое изменение шероховатости и смачиваемости поверхности привели к значительному расхождению данных, получаемых различными исследовательскими группами.

Таким образом, наряду с несомненными преимуществами субстрата ПНИПА при проведении разработок в области тканевой инженерии, биотехнологии и медицины, недостатки, связанные с существующими технологиями формирования данных субстратов, делают актуальной задачу разработки новых композиций и новых методов формирования термочувствительных субстратов на основе ПНИПА.

Снижение гидратированности субстрата ПНИПА путем со полимеризации его с гидрофобным мономером является логичным способом повышения его адгезивных свойств. К настоящему времени путем сополимеризации НИПА с гидрофобными мономерами создан целый ряд линейных полимеров, отличающийся по температурам фазового перехода и степени его кооперативности (Takei et al., 1993) (Yoshida et al., 1994) . ( Liu, Zhu, 1999). Однако, большая часть работ, в которых исследуется влияние химической композиции полимеров на параметры фазового перехода, проводится на линейных полимерах, синтезированных стандартными химическими методами. Исследования клеточной активности, за редким исключением, проводят на термочувствительных субстратах, полимеризованных непосредственно на покрываемой поверхности. Различие в применяемых методах синтеза не позволяет корректно сравнить данные, полученные разными авторами, и выявить связь микро и макрохарактеристик субстратов, определяющих их взаимодействие с культурами клеток. Кроме того, вопросы о том, насколько однородной или неоднородной является структура сколапсировавшего полимера, какие факторы отвечают за кооперативность фазового перехода, а также какова связь макропараметров с термодинамическими характеристиками системы остаются до сих пор открытыми вследствие недостатка экспериментальных данных.

Таким образом, существует настоятельная необходимость разработки - подхода,, который позволил бы провести параллельное исследование параметров фазового перехода термочувствительных полимеров в растворах, физико-химических характеристик поверхности формируемых субстратов и особенностей взаимодействия с ними культур субстратзависимых клеток млекопитающих.

Наш подход к модификации свойств ПНИПА заключался в постепенном увеличении числа гидрофобных групп в полимере путем его сополимеризации с N-трет-бутилакриламидом (НТБА). Выбор НТБА определялся требованием минимального изменения химической структуры полимера ПНИПА, поскольку N-третбутилакриламид является наиболее гидрофобным мономером в ряду АА>ДМА>ЭА>ДЭА>ТБА (Liu, Zhu, 1999) и отличается от НИПА наличием одной дополнительной метальной группы.

Для обеспечения эффективности фотоиндуцируемого ковалентного связывания субстрата с поверхностью было предложено ввести в состав линейных полимеров мономерные звенья акриламидобензофенона, т.к. преобразование фенилазидогрупп происходит гораздо быстрее и с большей эффективностью, чем реакции циклодимеризации хромофоров типа циннамолила, кумаролила и производных стилбена.

Цель данной работы заключалась в разработке на основе сополимеров N-изопропилакриламида (НИПА) и N-третбутилакриламида (НТБА) и акриламидобензофенона (ААБФ) новых термочувствительных материалов, предназначенных для поддержания роста субстратзависимых клеток, а также обеспечения бесферментного открепления клеток от поверхности культивирования.

В соответствии с целью работы были поставлены следующие задачи:

1. Исследование особенностей фазовых переходов в растворах термочувствительных полимеров и термочувствительных субстратах ПНИПА/НТБА. Выявление возможных механизмов модуляции температуры и кооперативности фазовых переходов сополимеров ПНИПА/НТБА в растворах и в пленочных субстратах.

2. Разработка техники приготовления полимерных субстратов ПНИПА/НТБА и проведение анализа физико-химических характеристик их поверхности.

3. Исследование адгезии, роста и бесферментного открепления клеток от поверхности субстратов ПНИПА/НТБА. Определение оптимального композиционного состава субстрата ПНИПА/НТБА, обеспечивающего высокую адгезионную и пролифера-тивную активность, а также эффективное бесферментное открепление клеток.

4. Разработка методики фотоиндуцируемого формирования полимерных сеток, определение влияния введенных в состав сополимера фотоиндуцируемых мономеров акриламидобензофенона (ААБФ) на термочувствительность формируемых субстратов ПНИПА/НТБА/ААБФ и их взаимодействие с клетками.

Объектом нашего исследования; стали линейные сополимеры N-изопропилакриламида и N-третбутилакриламида с различным соотношением мономерных звеньев, синтезированные на химическом факультете Дублинского Университета А.Гореловым и Т.Голубевой. Учитывая то, что данные полимеры не несут на поверхности электрического заряда и химическая структура в ряду сополимеров НИПА/НТБА меняется минимально, данные сополимеры мы рассматривали в качестве модельной системы для исследования влияния относительного количества гидрофобных групп на термочувствительность полимеров и их взаимодействие с субстратзависимыми клетками млекопитающих. Использование линейных полимеров ПНИПА/НТБА позволило предпринять комплексный подход к разработке новых термочувствительных биоматериалов: исследования кооперативных фазовых переходов в растворах термочувствительных полимеров и полимерных субстратах и определение физико-химических характеристик поверхности сополимеров ПНИПА/НТБА с различным соотношением мономеров были проведены параллельно с исследованием клеточной активности.

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, изложения собственного экспериментального материала, выводов и библиогафического списка использованной литературы.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Селезнева, Ирина Ивановна

124 ВЫВОДЫ

1. Установлено, что усиление гидрофобных взаимодействий при увеличении количества мономерных звеньев N-третбутилакриламида приводит к нелинейному снижению кооперативности и линейному снижению температуры фазового перехода в растворах сополимеров и термочувствительных субстратах ПНИПА/НТБА.

2. Разработан метод формирования полимерных субстратов с шероховатостью поверхности, оптимальной для культивирования клеток многих типов и обеспечивающей необходимую точность при проведении анализа физико-химических характеристик поверхности.

3. Выявлено, что с увеличением процентного содержания НТБА происходит изменение конформации сополимеров ПНИПА/НТБА в пленочных субстратах и возрастает степень компактизации структуры полимеров в растворе при температурах выше НКТС. Показано, что снижение числа полярных групп, находящихся в конформации, подходящей для формирования водородных связей с молекулами воды, приводит к снижению гидратируемости поверхности субстратов ПНИПА/НТБА при температуре 37°С.

4. Установлено, что снижение гидратируемости поверхности субстратов при температуре культивирования клеток приводит к значительному увеличению адгезионных характеристик субстратов ПНИПА/НТБА по сравнению с субстратами, сформированными на основе линейных полимеров ПНИПА. Показано, что разработанные нами субстраты на основе: линейных сополимеров ПНИПА/НТБА и ПНИПА/НТБА/ААБФ поддерживают адгезию, распластывание и рост фибробластов и эпителиальных клеток на уровне, сравнимом с обработанным для роста клеток полистиролом.

5. Разработана методика фотоиндуцируемого формирования полимерных сеток и ковалентного связывания субстратов ПНИПА/НТБА/ААБФ с поверхностью полистирола, установлены режимы формирования субстратов с различной степенью ковалентного связывания.

6. Выявлено, что при снижении температуры ниже НКТС все разработанные нами субстраты обеспечивают открепление клеток от поверхности без применения протеолитических ферментов и диссоциирующих реагентов. Установлено, что время, необходимое для открепления клеток, определяется темпами набухания сополимеров и существенно зависит от типа клеток и степени ковалентного связывания субстратов.

Список работ, опубликованных по теме диссертации

1. Селезнева И.И., Рочев Ю.А. Гаврилюк Б.К. Горелов А.В. ГолубеваТ.Н., Даусон К.А. Создание новых биоматериалов на основе термочувствительных биополимеров.

Ф Второй съезд биофизиков России, 1999, т.2, с.620.

2. И.И. Селезнева, Ю.А. Рочев, Б.К. Гаврилюк, А.В.Горелов, Т.Н. Голубева, К.А. Даусон. Исследование особенностей взаимодействия клеток с субстратами на основе термочувствительных полимеров. Тезисы стендовых сообщений школы-конференции "Горизонты физико-химической биологии" Пущино, 2000, с. 57-58

3. Iu.Rochev, T.Golubeva,, I.Selezneva, L.Allen, В. Gavrilyuk, A.Gorelov, W.Gallagher, K.Dawson. Cell behaviour on Thermoresponsive Surfaces. Book of Abstracts 14th conference of the European Colloid and Interface Society, p. 156, Greece, 2000.

4. Селезнева И.И, Давыдова Г.А, Сахно И.В., Рочев Ю.А, Гаврилюк Б.К. Термочувствительные полимеры на основе поли-Ы-изопропилакриламида для покрытия поверхности хирургических имплантатов. Тезисы докладов IV т Международной конференции "Современные подходы к разработке и клиническому применению эффективных перевязочных средств, шовных материалов и полимерных имплантатов" Москва 2001, с.175.

5. Селезнева И.И., Рочев Ю.А., Гаврилюк Б.К., Горелов А.В., ГолубеваТ.Н., Даусон К.А. Термореверсивные субстраты на основе поли-Ы-изопропилакриламида для целей тканевой инженерии. Тезисы конференции "От современной фундаментальной биологии к новым наукоемким технологиям" Пущино 200Г, с.98.

6. Rochev Yu., Т. Golubeva, A.Gorelov, L.Allen W.Gallagher, I.Selezneva, B.Gavrilyuk, K.Dawson. Surface modification for controlled cell growth on copolymers of N-isopropylacrylamide. Progress in Colloid and Polymer Science 2001, v.l 18, p. 153-156.

7. И.И.Селезнева, Г.А. Давыдова, Б.К.Гаврилюк, Ю.А.Рочев, А.В.Горелов, Т.Н.Голубева. Динамические свойства термореверсивных субстратов: зависимость от межмолекулярных сшивок. «Горизонты науки. От теории к практике». Академия наук РФ. Институт теоретической и экспериментальной биофизики РАН. Пущино 2003. с.228-232.

8. Yu. Rochev, D. О Halloran, Т. Golubeva, V. Gilchrest, I. Selezneva, B. Gavrilyuk, A.Gorelov Rationalizing the Design of Polymeric Thermoresponsive Biomaterials Book of Abstracts 18th European Conference on Biomaterials , p.l 13, Stuttgart, 2003

9. Yu. Rochev, D. О Halloran, T. Golubeva, V. Gilchrest, I. Selezneva, B. Gavrilyuk, A.Gorelov Rationalizing the Design of Polymeric Thermoresponsive Biomaterials Journal of Materials Science: Materials in Medicine, 2004, v. 15 (4), 513-517.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Использование линейных полимеров позволило исключить токсичность субстратов и предпринять комплексный подход к разработке новых биоматериалов. Исследования кооперативных фазовых переходов в растворах термочувствительных полимеров и полимерных субстратах и определение физико-химических характеристик поверхности сополимеров ПНИПА/НТБА с различным соотношением мономеров были проведены параллельно с исследованием клеточной активности. Наряду с оптимизацией свойств субстратов ПНИПА/НТБА для целей тканевой инженерии, биотехнологии и медицины, были проведены исследования, направленные на выявление связи микро и макропараметров субстратов, определяющих их взаимодействие с культурами клеток. Проведенные исследования позволили также сделать ряд выводов, относительно возможных механизмов модуляции термочувствительности и адгезионных характеристик субстратов ПНИПА/НТБА.

Таким образом, все поставленные задачи были решены. Разработанные нами субстраты ПНИПА/НТБА поддерживают адгезию, пролиферацию клеток и экспрессию большинства генов на уровне, сравнимом с культивированием на специально обработанном для роста клеток полистироле, но при этом обеспечивают эффективное открепление клеток без применения ферментов и диссоциирующих агентов. Данные субстраты могут быть использованы для позиционирования трех и более типов клеток, создания сложных тканевых конструкций, предназначенных для восстановления поврежденных органов и тканей. Термочувствительные субстраты ПНИПА/НТБА обеспечивают возможность получения интактных первичных культур клеток и сохранения их специфической активности в течение многих пассажей, что открывает перспективу их применения в биотехнологии, для производства биологически активных препаратов, а также в медицине для проведения клеточной терапии тканей и органов. Высокая эластичность субстратов ПНИПА/НТБА в сочетании с возможность контролируемой доставки лекарственных препаратов открывают возможность применения разработанных нами материалов в качестве полимерного покрытия имплантируемых конструкций.

Разработанная нами методика формирования субстратов из спиртовых растворов линейных полимеров не требует проведения многократных промывок и стерилизации поверхности перед использованием для культивирования клеток, как в разработанных ранее методах. Медленное испарение спирта приводит к самоорганизации полимеров, следствиями которого являются минимизация площади поверхности и снижение шероховатости формируемых субстратов до уровня 15 нм, оптимального для адгезии, роста и поддержания функциональной активности клеток разных типов.

Снижение температуры фазового перехода, пропорциональное проценту содержащихся в полимерной цепи мономеров НТБА, позволяет проводить манипуляции с клетками без жесткого термостатирования, обычно применяемого при работе с субстратами ПНИПА. Снижение темпов набухания субстратов, вызванное уменьшением кооперативное™ фазового перехода, позволяет регулировать скорость открепления клеточных пластов.

Эффективность предложенного нами метода УФ-индуцируемого формирования полимерных сеток и ковалентного связывания их с поверхностью полистирола при использовании акриламидобензофенона в качестве сшивающего реагента существенно выше, чем в методах, предложенных ранее, плотность наносимого нами покрытия (500мкг/см2) существенно превышает максимальную плотность (3 мкг/см2) покрытия ПНИПА, полимеризуемого электронным лучом.

Наиболее интересным результатом, полученным на данном этапе, явилось выявление связи термодинамических характеристик с макропараметрами системы. Резкое увеличение числа кооперативных блоков и константы инициации коллапса, характеризующее снижение термочувствительности полимеров, происходит при том же соотношении соотношении мономерных звеньев НИПА и НТБА ( приблизительно 3/1), при котором резко меняются темпы набухания полимерных субстратов и степень связывания ими воды при температуре культивирования. При том же соотношении мономерных звеньев происходит резкое снижение удельной теплоемкости сколапсировавших полимеров. Эта связь может отражать наличие, по крайней мере, двух основных конформаций сополимеров ПНИПА/НТБА. Первая конформация при соотношении мономеров выше 3/1 — характеризуется высокой' кооперативностью фазового перехода, вторая, более компактная конформация, характеризуется низкой кооперативностью фазового перехода и низким содержанием С=0 и N-H групп, находящихся; в конформации, подходящей для образования водородных связей с молекулами воды. Продолжение исследований в данном направлении может привести к лучшему пониманию механизмов кооперативных фазовых переходов.

Результаты данной диссертационной работы можно применить как в дальнейших разработках термочувствительных биоматериалов, предназначенных для поддержания формирования тканей, иммобилизации и направленной доставки лекарственных препаратов, разделения макромолекул и регуляции активности биокатализаторов, так и в проведении исследований в области клеточной биологии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Селезнева, Ирина Ивановна, 2004 год

1. Албертс Б., Брей Д., Льюис Дж, Рэфф М., Роберте К., Уотсон Дж. Молекулярная биология клетки // М. Мир, 1986, т.1., с.64

2. Галаев Ю.В. "Умные "полимеры в биотехнологии и медицине //Успехи химии, 1995, т.64, № 56 с.505

3. Кантор Ч., Шиммел П. Биофизическая химия. — М.:Мир, 1985.-534 с.

4. Киреев В.В. Высокомолекулярные соединения // Высшая школа 1992 с.18

5. Матвеев Ю.И., Аскадский А.А. Влияние физических характеристик и типа надмолекулярной структуры полимера на его растворимость. Высокомолекулярные соединения . серия А, 1994. Т.36, :№3, с. 436-443

6. Попович С.Н. Чупов В.В., Платэ Н.А. Синтез и свойства рН-зависимых термочувствительных сополимеров. Высокомолекулярные соединения, сер. Б- 1997- т. 39, № 12, с 2054-2058

7. Птицын О.Б., Эйзнер Ю.Е. Теория переходов глобула-клубок в макромолекулах // Биофизика 1965-т.Ю, с.З.

8. Сумм Б.Д., Горюнов Ю.В. Физико-химические основы смачивания и растекания. // М., Химия-1976-232с.

9. Сумм Б.Д. Гистерезис смачивания // Соросовский образовательный журнал -1999-№76 с.98-102

10. Филиппова О.Е. "Восприиммчивые" полимерные гели //Высокомолекулярные соединения -2000- серия С, т.42,126, с.2328-2352

11. Abuzakouk М., Feighery С., Farrely С.О. Collagenase and dispase enzymes disrupt lymphocyte surface molecules // J.Immunol. Methods 1996- v. 194, p.211-216.

12. Amiya Т., Hirokawa Y., Hirose Y., Li Y. and Tanaka Т., Reentrant phase transition of N-isopropylacrylamide gels in mixed solvents. //J. Chem. Phys. 86 (1987), pp. 2375-23

13. Andrade J.D., Interfacial phenomena and biomaterials.// Med. Instrumentation- 1973- vl, pllO

14. Anrade J.D., Smith L.M., Gregonis D.E. //Surface and interfacial aspects of biomedical polymers// Andrade J.D. Ed. Plenum Press:New York-1985-voll, chapter7, p.280

15. Bae YH; Okano T; Hsu R, Kim S.W. Thermo-sensitive polymers as on-off switches fordrug release //Makromol.Chem.: Rapid Commun. 1987- v.8, p.481-485

16. Bae YH, Okano T, Kim SW. Temperature dependence of swelling of crosslinked poly(N,N'-alkyl substituted acrylamide) in water.// J. Polym. Phys. -1990-v.28,p.923-936

17. Bae YH; Okano T; Kim SW "On-off' thermocontrol of solute transport. I. Temperature dependence of swelling of N-isopropylacrylamide networks modified with hydrophobic components in water// Pharm Res. 1991 - Apr, 8,N4, 531-537

18. Baier R.E., Conditioning surfaces to suit the biomedical environment // J.Biomech. Eng. 1982, 104, 257

19. Baier R.E., Meyer A.E., Natiella J.R., Natiella R.R., Carter J.M. Surface properties determine bioadhesive outcomes: Methods and results // J .Biomed. Mater. Res. -1984-V.18, pp337-355

20. Banovac F., Saavedra S.S., Truskey G.A. Local conformational changes of vitronectin upon adsorption on glass and silane surfaces. //J.Colloid Int.Sci.-1994-v.165, p.31-40

21. Beake B. D., Leggett G. J.: Nanoindentation and nanoscratch testing of uniaxially and biaxially drawn po!y(ethylene terephthalate) film // Polymer-2002- v.43, p.319-327.

22. Bell E.,Ivarsson B, Merrill C. Production of tissue-like structure by contraction of collagen lattices by human fibroblasts of different proliferative potential in vitro. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1979-V.76, p. 1274-1278

23. Bhatia S.N., Yarmush M.L., Toner M. Controlling cell interactions by micropatterning in co-cultures: hepatocytes and 3T3 fibroblasts //J. Biomed. Mater.Res -1997-v.34,p. 189199

24. Bhatia S.N., Balis U.J., Yarmush M.L., Toner M. Effect of cell-cell interactions in preservation of cellular phenotype: cocultivation of hepatocytes and nonparenchymal cells. //FASEB J.- 1999-V.13, p. 1883-1990.

25. Birdi K.S., Cell adhesion on solids and role of surface forces //J. Theor.Biol., -1981-V.93, p.1-5.

26. Boutris C., Chatzi E.G., Kiparissides C. Characterization of the LCST behaviour of aqueous poly(N-isopropy!acrylamidesoIutions by thermal and cloud point techniques //Polymer -1997-V.38, N10, p.2567-2570

27. Chen G, Hoffman A.S. Preparation and properties of thermoreversible, phase-separating enzyme-oligo(N-isopropy!acrylamide) conjugates //Bioconjug Chem, -1993-4, 6, p.509-514.

28. Chen G; Imanishi Y; Ito Y. Effect of protein and cell behavior on pattern-grafted ther-moresponsive polymer. // J Biomed Mater Res, 1998 Oct, 42,N1,38-44

29. Clark P., Connolly P., Curtis A.S.G., Dow J.A.T., Wilkinson C.D.W. //Cell guidance byultrafine topography in vitro. // J.Cell Sci.-1991-v.99, p.73-77

30. Clemence J, Ranieri J.P., Aebischer P., Sigrist H. Photoimmobilization of a bioactive laminin fragment and pattern-guided selective neuronal cell attachment //Bioconj.Chem-1995-V.6, p.411-417.

31. Coates J. Interpretation of infrared spectra, a practical approach //Encyclopedia of analytical chemistry Ed.R.A.Meyers /John Wiley &Sons Ltd, Chichester, -2000- p. 1081510837

32. Curtis, A.S.G., Forrester, Clark P. Substrate hydroxylation and cell adhesion // J.Cell Sci. 86,9-24, 1986.

33. Curtis A., Wilkinson C. Topographical control of cells. //Biomaterials -1997-V.18, p.1573-1583.

34. Dalby M.J., Riehle M.O., Johnstone H.J.H., Affrossman S, Curtis A.S.G. Polymer demixed nano-topography: control of fibroblast spreading and proliferation. // Tissue Eng -2002-V.8, p.1099-1108.

35. Desai, N.P., Hossainy S.F.A., Hubbell J.A. Surface-immobilized polyethylene oxide for bacterial repellence// Biomaterials 1992-13,417-420.

36. Ding Z; Chen G; Hoffman AS Unusual properties of thermally sensitive oligomer-enzyme conjugates of poly(N-isopropylacrylamide)-trypsin. //Biomed Mater Res.-1998-39:3, p.498-505

37. Ding Z; Long CJ; Hayashi Y; Bulmus EV; Hoffman AS; Stayton PS .Temperature control of biotin binding and release with A streptavidin-poly(N-isopropylacrylamide) site-specific conjugate.// Bioconjug Chem.-1999 -May, 10:3,395-400

38. Dusek K., Patterson D. //J.Polym. Sci. A-2, 1968, v.6, N7,12

39. Dusek K.,PrinsW.//Adv. Polym. Sci., 1969, v.6, N1, pi.

40. Eriksson K.-O. Hydrophobic interaction chromatography//in: J.-C. Janson, L. Ryden (Eds.), Protein Purification. Principles, High Resolution Methods, and Applications, VCH, New York, 1989, pp. 207-226.

41. Ertel S.I., Chilkoti A., Horbett T.A., Ratner B.D. Endothelial cell growth on oxygen-containing films deposited by radiofrequency plasmas: the role of surface carbonil groups //J. Biomater.Sci., Polym.Edn-1991-v.3, p.163-183

42. Fujishige S., Kubota K.and Ando I., Phase transition of aqueous solutions of poly(Nisopropylacrylamide) and poly(N-isopropylmethacrylamide). J. Phys. Chem. -1989-v. 93, p. 3311-3313.

43. Galaev I.Y. and Mattiasson B. "Smart" polymers and what they could do in biotechnology and medicine. // Tibtech 1999, vol 17, pp 335-340.

44. Gouras P., Cao H., Sheng Y., Tanabe Т., Y. Efremova Y, Kjeldbye H. Patch culturing and transfer of human fetal retinal epithelium // Graefes Arch.Clin. Exp. Opthalmol. — 1994- v. 232, 599-607

45. Grinnel, F. Cellular adhesiveness and extracellular substrata // Int.Rev.Cytol. -1978-V.3, p.65-144

46. Grinnell F., Lang B.S. Binding of soluble plasma fibronectin to baby hamster kidney cells occurs at 4°C. //J.Cell.Biol.-1981-v.87, p. 127

47. Harris A.K., Wild P., Stopak D. Silicon rubber substrate: a new wrinkle in the study of cell locomotion. // Science -1980-v. 208, p. 177-179.

48. Harmon M.E., Kuckling D., Curtis W.F. Photo-cross-linkable PNIPAm copolymers. 2. Effects of constraint on temperature and pH-responsive hydrogel layers. //Macromolecules -2003-V.36, p. 162-172.

49. Heskins M, Guillent J.E., James E. Solution properties of poly (N-isopropylacrylamide) // J. Macromol. Sci.-Chem. -1968- A2, p.1441-1455

50. Hirokava Y, Tanaka T. //J.Chem. Phys. -1984-V.81,12, p6379

51. Hirasa O, Ito S., Yamauchi A., Fujishige S.,Ichijo H.//Polymer Gels. Fundamentals and Biomedical Applications/ Ed. By DeRossi D., Kajiwara K., Osada Y., Yamauchi A. New York; London: Plenum Press-1991- p.247.

52. Hirose M., Kwon O.H., Yamato M, Kikuchi A., Okano T. Creation of designed cell sheets that are noninvasively harvested and moved to another surface. //Biomacromolecules -2000-v. 1, p.377-381.

53. Hoffman A.S., "Intelligent" polymers in medicine and biotechnology //Artif. Organs -1995-v.19, p. 458-467.

54. Hubbell J.A. Biomaterials in tissue engineering //Bio Technology -1995- v. 13, p.565-576

55. Ichijo H, Kishi R., Hirasa O., Takiguchi Y.//Polym. Gels and Networks. -1994- v.2, N3/4, p.315

56. Ichimura K., Komatsu T. //J.Polym.Sci.,Polym.Chem.-1987 -v.25, p.1475-1480

57. Idziak I., Avoce D., Lessard D., Gravel D., Zhu X.X. Thermosensitivity of aqueous solutions of poly(N,N-diethylacrylamide)//Macromolecules -1999-V.32, p. 1260-1263

58. Inomata H., Goto S. and Saito S., Phase transition of N-substituted acrylamide gels.// Macromolecules -1990-V.23, p. 4887-4888

59. Ishidao Т., Hashimoto Y., Iwai Y., Arai Y //Colloid Polym. Sci -1994-V.272, N 10, p.1313

60. Ista LK; Perez Luna VH; Lopez GP .Surface-grafted, environmentally sensitive polymers for biofilm release. //Appl Environ Microbiol.- 1999 v.65, N4, p.1603-1609

61. Ito Y., Chen G., Guan Y., and Imanishi Y. Patterned Immobilization of thermorespon-sive polymer. //Langmuir -1997-13, p.2756-2759.

62. Johnson R.E., Dettre R.H. Contact angle hysteresis. III. //J.Phys.Chem.68 -1964-, p. 1744-1750

63. Johnson R.E., Dettre R.H. Contact angle hysteresis. IV. //J.Phys.Chem.69 -1964-, p.1507-1515

64. Kanazawa H; Kashiwase Y; Yamamoto K; Matsushima Y; Kikuchi A; Sakurai Y; Okano T. Temperature-responsive liquid chromatography. 2. Effects of hydrophobic groups in N-isopropylacrylamide copolymer-modified silica. //Anal Chem. -1997-v. 69,N5, p.823-30

65. Kaneko Y., Yoshida R., K. Sakai, Sakurai Y., Okano T. Temperature-responsive shrinking kinetics of poly(N-isopropylacrylamide) copolymer gels with hydrophilic and hydrophobic comonomers // J.Membrane Science -1995-v.lOl, p.13-22

66. Katsuto O., Inomata H., Goto S. and Saito S., Thermal analysis of the volume phase transition with N-isopropylacrylamide gels.// Macromolecules -1990- v.23, p. 283-289.

67. Kawaguchi H., Fujimoto K., Mizuhara Y. Hydrogel microspheres, III. Temperature-dependent adsorption of proteins on poly-N-isopropylacrylamide hydrogel microspheres // Colloid Plym Sci. -1992-V.270, p.53-57

68. Kidoaki S., Ohya S., Nakayama Y., Matsuda T. Thermoresponsive structural change of a poly(N-isopropylacrylamide) Graft Layer Measured with an atomic force microscope// Langmuir -2001 -v. 17, p.2402-2407.

69. Kim S.W., Kikuchi A., Okuhara M., Sakurai Y., Okano T. Novel thermally reversible hydrogel as detachable cell culture substrate//J Biomed Mater Res-1998-v. 40, p.631-639

70. Klein-Soyer C., Hemmendinger S., Cazenave J.-P. Culture of human vascular endothelial cells on a positively charged polystyrene surface. Primaria: comparison with fibronectin-coated tissue culture grade polystyrene. //Biomaterials —1989-v.lO, p.85-90.

71. Kubota K., Fujishige S. and Ando I., Single-chain transition of poly(N-isopropylacrylamide) in water. // J. Phys. Chem. -1990-V.94, p. 5154-5158.

72. Kushida A; Yamato M; Konno C; Kikuchi A; Sakurai Y; Okano T Temperature responsive culture dishes allow nonenzymatic harvest of differentiated Mardin-Darby canine kidney (MDCK) cell sheets. // J Biomed Mater Res.- 2000 v.51, p.216-223

73. Kwok D.Y., Lam C.N.C., Li A., Wu L.R., Мок E., Neumann A.W. Measuring and interpreting contact angles: a complex issue // Colloids and Surfaces. A. -1998- v. 142, p.219-235.

74. Kwok D.Y., Neumann A.W. Contact angle measurement and contact angle interpretation //Adv.Colloid Interface Sci.-1999-v.81, p.167-249

75. Lakhiari H; Okano T; Nurdin N; Luthi C; Descouts P; Muller D; Jozefonvicz J. Temperature-responsive size-exclusion chromatography using poly(N-isopropylacrylamide) grafted silica.// Biochim Biophys Acta -1998 -vl379, N 3, p. 303-313

76. Lau A.C.W., Wu C. Thermally sensitive and biocompatible poly(N-vinilcaprolactam): synthesis and characterization of high molar mass linear chains //Macromolecules -1999-v.32, p.581-584.

77. Lee J.H., Jung H.W., Kang I.K., Lee H.B. Cell behaviour on polymer surfaces with different functional groups. //Biomaterials -1994-v. 15, N.9, p.705-711.

78. Lee J.S., Sugioka K., Toyoda K, Offenhausser A., Knoll W, Sasabe H. Micropatterning of cultured cells on polystyrene surface by using an eximer laser //Appl.Phys.Lett.-1994-v.65, p.400-402.

79. Li Y., Tanaka T. Kinetics of swelling and shrinking of gels //J.Chem. Phys,-1990-v.92, p. 1365

80. Liang L., Feng X., Liu J., Rieke P.C., Fryxell G.E. Reversible surface properties of glass plate and capillary tube grafted by photopolymerization of N-izopropylacrylamide.// Macromolecules 1998 -v.31, p.7845

81. Liang L., Rieke P.C., Fryxell G.E., Liu J., Engehard M.H., Alford K.L. Temperature-sensitive surfaces prepared by UV photografting reaction of photosensitizer and N-isopropylacrylamide. //J.Phys.Chem. B. -2000-V.104, p.l 1667-11673.

82. Liang L., Rieke P.C., Liu J., Fryxell G.E., Young J.S., Engehard M.H., Alford K.L. Surfaces with reversible hydrophilic/hydrophobic characteristics on cross-linked poly(N-isopropylacrylamide) hydrogels //Langmuir. -2000-V.16, p.8016-8023.

83. Lifshits I.M., Grosberg A.Yu., Khokhlov A.R. // Rev.Modern Phys., 1978, v.50, p.683.

84. Liu H. Y. and Zhu X. X. Lower critical solution temperatures of N-substituted acrylamide copolymers in aqueous solutions // Polymer 1999-v. 40,25, p 6985-6990

85. Liu H., Avoce D., Song Z., Zhu X. X. N-Isopropylacrylamide Copolymers with Acrylamide and Methacrylamide Derivatives of Cholic Acid: Synthesis and Characterization // Macromolecular Rapid Communications-2001-v.22, N9, p. 675-680

86. Lumry R., Biltonen R.L., Brandts J.F. Validity of the "two-state" hypothesis for conformational transitions of protein. // Biopolymers 1966- v.4, p. 917-944.

87. Lydon M.J., Minett T.W., Tighe B.J. Cellular interactions with synthetic polymer surfaces in culture. // Biomaterials -1985- v. 6, p. 396-402

88. Lydon M.J., Clay C.S. Substratum topography and cell traction on sulphuric acid treated bacteriological-grade plastic. // Cell Biol.Internl.Rep. -1985-V.9, p.911-921

89. Makhaeva E.E., Le Thi Minh Thanh, Starodoubtsev S.G., Khokhlov A.R.// Macromol. Chem. Phys. -1996-V.197, 6, p. 1973

90. Marler J.J., Upton J., Langer R., Vacanti J.P. Transplantation of cells in matrices for tissue regeneration //Advanced Drug Delivery Reviews -1998-V.33, p.165-182

91. Maroudas, N.G., Chemical and mechanical requirements for fibroblast adhesion //Nature -1973-244,353

92. Matsubara C; Izumi S; Takamura K; Yoshioka H; Mori. Determination of trace amounts of phosphate in water after preconcentration using a thermally reversible polymer. // Y Analyst-1993 118:5,553-556

93. Matsuda Т., Sugawaga Т., Control of cell adhesion, migration and orientation on photo-chemically microprocessed surfaces// J. Biomed.Mater.Res.-1996- v32, p. 165-173

94. Matsuyama A. and Tanaka F. Theory of solvation-induced reentrant coil-globule transition of an isolated polymer chain. // J. Chem. Phys. -1991- v.94, p. 781-786.

95. Mikheeva L.M., Grinberg N.V., Mashkevich A.Ya., Grinberg V.Ya. Microcalorimetric study of thermal cooperative transitions in poly(N-vinilcaprolactam) hydrogels //Macromolecules -1997-V.30, p.2693-2699

96. Moghaddam M.J., Matsuda T.J. //J.Polymer Sci., Polym.Chem.-1993-v.31,p.l589-1597

97. Mrksich M., Chen C.S., Xia Y, Dike L.E., Ingber D.E., Whitesides G.M. Controlling cell attachment on contoured surfaces with self-assembled monolayers of alkanethiolates on gold// Proc. Natl. Acad.Sci.-1996- US A,v. 93, p. 10775-10778

98. Oliver, W.C.; Pharr, G.M An improved technique for determining hardness and elastic modulus using load and displacement sensing indentation experiments //Journal of Materials Research-1992 -.v 7, N.6, p.1564-1583

99. Ю9.0капо T, Bae YH, Jacobs H, Kim SW. Thermally on-off switching polymers for drug permeation and release. // J Control Rel. -1990- v.l 1, p 255-265.

100. Ю.Окапо Т., Molecular design of temperature-responsive polymers as intelligent materials. // Adv. Polym. Sci. -1993-v.l 10, p. 179-200

101. Okano T; YamadaN; Sakai H; Sakurai Y A novel recovery system for cultured cells using plasma-treated polystyrene dishes grafted with poly(N-isopropylacrylamide). //J. Biomed Mater Res. 1993-v. 27,10, p. 1243-1251.

102. Park TG; Hoffman AS. Estimation of temperature-dependent pore size in poly(N-isopropylacrylamide) hydrogel beads. //Biotechnol Prog. 1994 -v. 10,1, p. 82-86.

103. Pelham R.J., Wang Y.L. Cell locomotion and focal adhesions are regulated by substrate flexibility//Proc.Natl.Acad.Sci.USA -1997-V.94, p.13661-13665

104. Pharr G.M. Measurement of mechanical properties by ultra-low load indentation. //Mater.Science and Engineering A-1998-V.253, p. 151-151

105. Prange M.M., Hooper M.H., Prausnitz J.M. Thermodynamics of aqueous systems containing hydrophilic polymers or gels. //Am. Inst. Chem. Eng. J. -1989-V.35, p. 803-813.

106. Poland D., Scheraga H.A., Theory of Helix-Coil Transitions in Biopolymers //New York, Academic Press, 1970

107. Privalov P.L., Stability of proteins.// Adv. Protein Chem. -1979 -v.33, p. 167-241.

108. Privalov P.L. Stability of proteins.// Adv.Protein Chem.-1982- v.35, p.1-104

109. Privalov P.L., Potekhin S.A. Scanning microcalorimetry in studying temperature-induced changes in proteins. //Methods Enzymol. —1986 —v.131, p. 4—51.

110. Ramos S.M.M., Charlaix E., Benyagoub A. Contact angle hysteresis on nano-structured surfaces // Surface Science -2003-V.540, p.355-362.

111. Von Recum H.A., Kim S.W.; Kikuchi A; Okuhara M.; Sakurai Y.; Okano T. Novel thermally reversible hydrogel as detachable cell culture substrate. //J Biomed Mater Res. -1998-v. 40,4,p. 631-639

112. Von Recum H; Kikuchi A; Okuhara M; Sakurai Y; Okano T; Kim S.W . Retinal pigmented epithelium cultures on thermally responsive polymer porous substrates.// J Bio-mater Sci Polym Ed.- 1998 -v. 9,11, p. 1241-1253.

113. Rollason G., Davies J.E., Sefton M.V. Preliminary report on cell culture on a themally reversible copolymer// Biomaterials -1993-V.14, p. 153-155

114. Academic Press, 1962, p.l 131.Schild H. G. Poly(N-isopropylacrylamide) experimental, theory and application // Prog.

115. Poly(N-isopropylacrylamide)-based hydrogels that support tissue formation in vitro //Macromolecules -1999-V.32, p.7370-7379

116. Tanaka T. //Phys. Rev. Lett. 1978, v.40, N12, p. 820

117. Takei YG, Aoki T, Sanui K, Ogata N, Okano T, Sakurai Y. Temperature- responsive bio-conjugates. 2. Molecular design for temperature-modulated bioseparations // J. Bioconju-gate Chem. -1993-v.4,p. 341-348.

118. Takei YG, Aoki T, Sanui K, Ogata N, Sakurai Y, Okano T. Dynamic contact angle measurement of temperature-responsive surface properties for Poly(N-isopropylacrylamide) grafted surfaces // Macromolecules -1994-v. 27, p.6163-6166.

119. Takei Y.G., Aoki Т., Sanui K; Ogata N., Sakurai Y., Okano T. Temperature-modulated platelet and lymphocyte interactions with poly(N-isopropylacrylamide)-grafted surfaces.// Biomaterials -1995-v. 16, 9, p. 667-673

120. Takezawa Т., Mori Y., Yoshizato K. Cell culture on a thermo-responsive polymer sur-face//Bio Technology-1990-V.8, p.854-856

121. Takezawa T; Yamazaki M; Mori Y; Yonaha T; Yoshizato К Morphological and immuno-cytochemical characterization of a hetero-spheroid composed of fibroblasts and hepatocytes.// J Cell Sci.- 1992 101 (Pt 3):,p. 495-501

122. Takezawa T; Mori Y; Yonaha T; Yoshizato К. Characterization of morphology and cellular metabolism during the spheroid formation by fibroblasts.// Exp Cell Res.- 1993- v. 208,N 2, p.430-41

123. Tateno C., Yoshizato K., Long-term cultivation of adult rat hepatocytes that undergo multiple cell divisions and express normal parenchymal phenotypes. //Am J. Pathol -1996-V.148, p.383-392.

124. Taylor L.D. and Cerankowski L.D. Preparation of films exhibiting a balanced temperature dependence to permeation by aqueous solutions: A study of lower consolute behavior.//!. Polym. Sci., Part A: Polym. Chem. -1975- v. 13 p. 2551-2570.

125. Thom V.H., Altankov G., Groth Th., Jankova K., Jonsson G., Ulbricht M. Optimizing cell-surface interactions by photografting of poly(ethylene glycol) //Langmuir-2000-v.6, p.2756-2765.

126. Tiktopulo E.I., Uversky V.N., Lushchik V. В., Klenin S.I., Bychkova V.T., Ptitsyn O.B. "Domain" Coil-Globule Transition in Homopolymers// Macromolecules-1995- v.28,р.7519-7524.

127. Tiktopulo E.I., Kajava A.V., Denaturation of Type I collagen fibrils is an endothermic process accompanied by noticeable change in the partial heat capacity// Biochemistry1998- v.37, p.8147-8152

128. Uchida K., Sakai K., Ito E., Kwon O.H., Kikuchi A., Yamato M., Okano T. Temperature-dependent modulation of blood platelet movement and morphology on poly(N-isopropylacrylamide)-grafted surfaces. Biomaterials -2000- v.21, p.923-929.

129. Uludag H., Nome B, Kousinioris N.,Gao T. Engineering Temperature-sensitive poly(N-isopropylacrylamide) polymers as carriers of therapeutic proteins //Biotechnol. And Bio-engineering -2001 -v.73,6,20, p.510-521.

130. Vernon B; Kim SW; Bae YH Insulin release from islets of Langerhans entrapped in a poly(N-isopropylacrylamide-co-acrylic acid) polymer gel. // J Biomater Sci Polym Ed.1999-v. 10, N2,183-98

131. Volpe C.D., Cassinelli C., Morra M. Wilhelmy plate measurements on poly(N-isopropylacrylamide)-grafted surfaces. //Langmuir-1998-v.l4, p.4650-4656.

132. Waymouth C. To disaggregate or not to disaggregate, injury and cell disaggregation, transient or permanent //In Vitro 1974- v. 10, p.97- 111.

133. Winnik F.M. Fluorescence studies of aqueous solutions of poly(N-isopropylacrylamide) below and above their LCST.// Macromolecules -1990-V.23, p. 233-242.

134. Wojciak-Stothard В., Curtis A., Monaghan W., Macdonald K., Wilkinson C. Guidance and activation of murine macrophages by nanometric scale topography //Cell Res.- 1996-v.223, p.426-435.

135. Wu, S., Polar and non-polar interactions in adhesion. //J.Adhesion -1973- 5,39

136. N. Yamada, T. Okano, H. Sakai, F. Karikusa, Y. Sawasaki, and Y. Sakurai, Termo-responsive polymeric surfaces: Control of attachment and detachment of cultured cells, // Makromol. Chem.: Rapid Commun. -1990- 11,571-576

137. Yamato M., Adachi E., Yamamoto K., Hayashi T. Condensation of collagen fibrils to the direct vicinity of fibroblasts as a cause of gel contraction. //J. Biochem 1995-v.l 17, p.940-946.

138. Yamato M., Konno C., Kushida A., Hirose M., Utsumi M., Kikuchi A., Okano T. Release of adsorbed fibronectin from temperature-responsive culture surfaces requires cellular activity. // Biomaterials -2000-V.21, p.981-986.

139. Yamato M., Kushida A., Kwon O.H., Hirose M., Utsumi M., Kikuchi A., Okano T. Cell sheet engineering// In: Ikada Y, Shimizu Y, editors. Tissue Engineering for Therapeutic Use 4. Amsterdam: Elsevier -2000- p. 105-112

140. Yamato M., Kwon O.H., Hirose M., Kikuchi A., Okano T. Novel patterned cell co-culture utilizing thermally responsive grafted polymer surfaces.// J. Biomed. Mater. Res. -2001-v.55, p.137-140.

141. Yamato M., Utsumi M., Kushida A., Konno C., Kikuchi A., Okano T. Thermo-responsive culture dishes allow the intact harvest of multilayered keratinocyte sheets without dispase by reducing temperature// Tissue Eng -2001-V.7, p.473-480

142. Yamato M, Konno C, Utsumi M, Kikuchi A, Okano T. Thermally responsive polymer-grafted surfaces facilitate patterned cell seeding and co-culture// Biomaterials -2002-v.23, p.561-567

143. Yoshida R, Sakai K, Okano T, Sakurai Y. Surface-modulated skin layers of thermal responsive hydrogels as on-off switches: II .Drug permeation. //J Biomater Sci Polym End. -1991-v.3, p. 243-252

144. Yoshida R., Sakai K., Okano Т., Sakurai Y. Modulating the phase transition temperature and thermosensitivity in N-isopropylacrylamide copolymer gels //J.Biomater. Sci. Polymer Edn. 1994-V.6, N6., p.585-598

145. Yoshioka H., Mikami M., Nakal t., Могу Y. Preparation of poly (N-isopropylacrylamide)-grafted silica gel and its temperature-dependent interaction with proteins //Polym.Adv.Technol.-1995- 6, p 418-4201. Благодарности

146. Используемые в тексте сокращения

147. НКТС НИПА -ПНИПА -НТВА -ПНТБА1. ПНИПА/НТБА х/у-ААБФ1. ПНИПА/НТБА/ААБФ x/y/z КП1. АСМ1. ПНИПМА1. ЭГДМА1. ПТМГ1. ДМА1. АК