Радиохроматографический анализ меченных тритием соединений методами бумажной и тонкослойной хроматографии тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.14, кандидат химических наук Куделин, Борис Константинович

• Куделин, Борис Константинович
• кандидат химических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат химических наук Куделин, Борис Константинович

ВВЕДЕНИЕ.

ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1. РЕГИСТРАЦИЯ АКТИВНОСТИ МЕЧЕНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА СДОЯХ ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ СОРБЕНТОВ . . . .Ю

1.1. Зависимость результатов радиохроматографического анализа от характера распределения меченого вещества по толщине слоя сорбента

1.2. Эффективность регистрации меченых соединений, нанесенных на хроматографические сорбенты.

1.3. Структура важнейших хроматографических сорбентов

1.4. Особенности измерения активности на хроматографических сорбентах, обусловленные применением сцин-тилляционного метода.

1.5. Аппаратура для регистрации активности на радио-хроматограммах и методы обработки результатов измерений

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ.

2.1. Материалы

2.2. Методы исследования распределения меченого вещества и сцинтиллятора по толщине слоя сорбента

2.3. Измерение активности на хроматограммах и определение относительной эффективности регистрации

2.4. Определение степени десорбции с сорбента меченых соедщений раствором сцинтиллятора

2.5. Определение ослабления света сцинтилляций слоями хроматографических сорбентов и влияния отражающих свойств подложки на результаты измерений

2.6. Определение разрешающей способности хроматогра-фического счетчика.» . •

2.7. Анализ компонентов нуклеиновых кислот методом тонкослойной хроматографии на силикагеле

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

3. ФОРМИРОВАНИЕ ПРОФИЛЯ КОНЦЕНТРАЦИИ ВЕЩЕСТВА ПО ТОЛЩИНЕ СЛОЯ СОРБЕНТА.

3.1» Ослабление света слоями сорбентов.

3.2. Формирование профиля концентрации вещества в стартовых пятнах

3.3. Формирование окончательного профиля концентрации вещества на хроматограммах

4. ОСОБЕННОСТИ РЕГИСТРАЦИИ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ СОЕДИНЕНИЙ

НА ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИХ СОРБЕНТАХ.

4.1. Влияние молярной активности меченного тритием препарата на эффективность его регистрации.

4.2. Относительная эффективность регистрации меченных тритием соединений на бумажных хроматограммах

4.3. Относительная эффективность регистрации меченных тритием соединений на тонких слоях целлюлозы

4.4. Относительная эффективность регистрации меченных тритием соединений на слоях модифицированной целлюлозы

4.5. Относительная эффективность регистрации меченных тритием соединений на слоях силикагеля

5. ВЛИЯНИЕ СЦИНТИЛЛЯТОРА НА ЭФФЕКТИВНОСТЬ РЕГИСТРАЦИИ

МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ СОЕДИНЕНИЙ НА СЛОЯХ СОРБЕНТОВ.

6. ОПТИМИЗАЦИЯ УСЛОВИЙ РАДИОХРОМАТОГРАФИЧЕСКОГО АНАЛИЗА

МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ СОЕДИНЕНИЙ.НО

6.1. Сравнение сцинтилляционного и ионизационного способов регистрации активности на радиохромат о граммах

6.2. Возможность введения поправок на различную эффективность регистрации меченных тритием соединений

6.3. Способы уменьшения различий в эффективности регистрации меченых соединений

6.4. Погрешности радиометрического анализа хроматограмм сцинтилляционным методом

ВЫВОДЫ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Радиохроматографический анализ меченных тритием соединений методами бумажной и тонкослойной хроматографии»

Анализ методами радиохроматографии в настоящее время получил исключительно широкое распространение в связи с повсеместным использованием соединений, меченных радионуклидами. Подобные соединения применяют при проведении исследований в биохимии, медицине, молекулярной биологии и других областях науки.

Одной из основных характеристик качества меченых соединений является радиохимическая чистота (РХЧ). Величина ее выражается, как правило, в процентах и показывает долю активности препарата, которая приходится на целевое соединение. Радиохимическими примесями при этом считаются присутствующие в препарате меченые соединения, отличные от целевого по химической форме.

Необходимость контроля РХЧ связана с тем, что использование меченых соединений с недостаточно высокими значениями этого параметра может привести к существенным искажениям результатов исследований с применением радиоактивной метки.

В большинстве случаев РХЧ меченых соединений определяют хроматографически. Для анализа нелетучих соединений применяют методы жидкостной колоночной, бумажной или тонкослойной хроматографии. По мере развития высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографии (ВЭ1Х), этот метод все пифе используется для определения РХЧ. Однако, при наличии в препарате примесей, обладающих очень большим временем удерживания или сорбирующихся на колонке необратимо, точное определение РХЧ методом ВЭЖХ становится невозможным.

От этого недостатка свободны методы анализа с применением бумажной и тонкослойной хроматографии. Для определения РХЧ на готовой хроматограмме определяют распределение активности по ее длине. Расчет проводят по форьщгле:

РХ4= ' .400% , Л где РХЧ - радиохимическая чистота целевого компонента; А - активность целевого компонента; и. А; - сумма активностей всех компонентов смеси, включая целевой.

В большинстве случаев, однако, при расчете величины РХЧ используют не величину активности соответствующих хроматографи-чееких зон, а пропорциональную ей сумму импульсов, зарегистрированных приборами при измерениях. Как известно, число импульсов, регистр|фуемое приборами, связано с активностью пробы соотношением /К= ^ • А. Коэффициент пропорциональности называется эффективностью регистрации и зависит от свойств нуклида, используемого детектора, физического состояния образца и т.д.36

При вышеупомянутой замене величины активности на соответствующее число импульсов, необходимым условием является равен

Коэффициент пропорциональности ^ между величинами абсолютной активности и числом регистрвдвмых импульсов было рекомендовано называть коэффициентом регистрации /I/, сохранив термин "эффективность регистрации" лишь для обозначения доли частиц, зарегистрированных детектором, от общего числа попавших в него частиц* Для целей настоящего исследования будут иметь значение не абсолютные, а относительные значения коэффициента регистрации, вычисленные относительно коэффициента регистрации одного из веществ, измеренного в тех же условиях и приство эффективности регистрации на всех участках хроматограм-мы в процессе измерений. Выполнение этого условия обычно молчаливо предполагается, однако справедливость такого предположения никем не была строго доказана. Более того, имеются веские основания считать, что далеко не во всех случаях удается обеспечить необходимое равенство эффективностей. Основные проблемы здесь возникают при работе с соединениями, меченными низкоэнергетическими ^-излучателями, и в первую очередь тритием.

Тритий очень широко используют для получения меченых органических веществ. В первую очередь это связано с доступностью и дешевизной исходного изотопного сырья, с возможностью ввести тритий практически во все органические соединения, а также с весьма благоприятным сочетанием радиофизических характеристик этого нуклида. Очень низкая энергия излучения трития позволяет свести к минимуму побочные воздействия и делает его незаменимым при проведении многих биохимических и медицинских исследований.

В то же время свойства трития, как радионуклида, приводят к возникновению серьезных проблем при хроматографическом анализе меченых соединений. Пробег основной массы ^ -частиц трития (Емакс<= 18,6 кэВ, ЕСредНв= 5,6 кэВ /2/) крайне мал. В манятого за стаццарт. Поскольку величины относительной эффективности регистрации и относительного коэффициента регистрации при этом равны между собой, а термин "эффективность регистрации1* является общепринятым (см., например, /76,78,81 и др./), именно он и будет использоваться в данной работе. териалах с плотностью I г/см^ 90% энергии излучения этого нуклида теряется на расстоянии 0,5 мкм от источника /3/. Плотность хроматографических сорбентов составляет около 1,5 г/сь^ для целлюлозы /4/ и около 2,2 г/см^ для силикагеля /5/, а толщина хроматограмм колеблется от 0,15 до 0,4 мм для бумажных и от 0,1 до 0,2 мм для тонкослойных. В связи с этим результаты определения активности на хроматограммах становятся зависимыми от характера распределения данного меченого соединения по толщине слоя сорбента, а также от плотности и пористости самого сорбента.

Анализ литературных источников показывает, что кроме этого для соединений, меченных тритием, наблюдается явление зависимости эффективности регистрации на хроматограммах от химической природы меченого вещества.

В такой ситуации практически невозможно достоверное определение РХЧ меченного тритием соединения по общепринятой методике, предполагающей во всех случаях равенство эффективностей регистрации различных соединений.

Следует отметить, что указанная проблема имеет значение не только для случая определения РХЧ как паспортной характеристики выпускаемых промышленностью меченых соединений. Те же самые факторы влияют на погрешность определения выходов химических реакций, констант их скоростей, количеств побочных продуктов и других величин, вычисляемых из распределения активности на хроматограмме смеси меченных тритием органических соединений.

Целью настоящей работы являлось определение источников погрешностей при радиохроматографическом анализе методами бумажной и тонкослойной хроматографии на различных сорбентах соединений, меченных тритием, а также разработка условий анализа, обеспечивающих высокую достоверность получаемых результатов.

В процессе работы была впервые экспериментально доказана связь результатов измерения активности на хроматограммах с характером распределения меченных тритием соединений по толщине слоя сорбента; изучены закономерности формирования профиля такого распределения на всех стадиях получения хроматограммы.

Изучено явление зависимости эффективности регистрации на хроматограммах от природы меченого соединения и сорбента. Впервые получены значения относительной эффективности регистрации более 20 меченных тритием биологически активных соединений (компоненты нуклеиновых кислот, углеводы, аминокислоты).

Исследовано влияние состава сцинтилляционных смесей на результаты радиохроматографического анализа меченых соединений. Проанализирован вклад различных факторов в общую погрешность определения состава смесей меченых соединений на хроматограммах и предложен оптимальный метод проведения радиохроматографического анализа соединений, меченных тритием.

На основе анализа различных конструкций сцинтилляционных сканирующих счетчиков разработана и сконструирована автоматизированная система на базе мини-ЭВМ для проведения радиохро-матографических измерений.

I. РЕГИСТРАЦИЯ АКТИВНОСТИ МЕЧЕНЫХ СОЕДИНЕНИЙ НА СЛОЯХ ХРОМАТОГРАШЧЕСКИХ СОРБЕНТОВ

До настоящего времени, несмотря на повсеместное использование радиохроматографии для анализа меченых соединений, практически не проводилось систематических исследований, посвященных выяснению особенностей хроматографического анализа меченых препаратов, В мировой литературе имеется единственная монография /6/, посвященная вопросам радиохроматографии. Эта работа носит характер методического пособия и вопросы, связанные с достоверностью результатов количественного радиохроматографического анализа в ней практически не затронуты. В то же время опубликовано значительное количество отдельных наблюдений, свидетельствующих о неоднозначности интерпретации результатов радиохроматографического анализа.

Заключение диссертации по теме «Радиохимия», Куделин, Борис Константинович

вывода

1. Исследованы особенности поведения меченных тритием соединений на бумажных и тонкослойных хроматограммах. Показано, что вследствие низкой проникающей способности излучения трития, характер распределения вещества в слое сорбента оказывает решающее влияние на результаты измерений на радиохромато-граммах. Наряду с этим на всех сорбентах эффективность регистрации зависит от степени контакта массы меченого вещества с введенным в хроматограмму сцинтиллятором.

2. Установлено, что результаты радиохроматографических измерений сцинтилляционным методом на различных сорбентах не зависят от молярной активности меченных тритием препаратов. Доказана равномерность пропитки сорбентов сцинтиллятором в области хроматографических зон веществ.

3. Установлены закономерности формирования профиля концентрации вещества по толщине слоя сорбента на всех этапах подготовки хроматограмм. При условии достижения равномерного распределения на стадии хроматографирования решающие изменения профиля концентрации вещества по толщине хроматограммы происходят при ее высушивании.

4. Впервые получены значения относительной эффективности регистрации на разных хроматографических сорбентах ряда меченных тритием биологически активных соединений (компонентов нуклеиновых кислот, углеводов, аминокислот). Предложены способы учета различий в эффективности регистрации разных соединений.

5. Показано, что преимущества сцинтилляционного метода перед ионизационным при измерениях активности меченных тритием соединений на хроматограммах обусловлены большей прозрачностью слоев сорбентов для света, нежели для ^-частиц трития. Экспериментально определена толщина слоя половинного ослабления света сцинтилляций для хроматографических сорбентов.

6. Показано, что источником систематической погрешности при радиохроматографическом анализе меченных тритием соединений являются различия в эффективности регистрации разных соединений на одной и той же хроматограмме, которые обусловлены главным образом спецификой распределения данного вещества по толщине слоя сорбента, а также степенью контакта массы вещества в хро-матографической зоне со сцинтиллятором.

7. Изучено распределение сцинтилляторов по толщине слоя сорбента, а также влияние состава сцинтилляционных смесей на эффективность регистрации меченных тритием соединений. Разработан метод сцинтилляционных измерений с применением специальных сцинтилляционных смесей, обеспечивающий в большинстве случаев равенство эффективностей регистрации разных соединений в пределах одной хроматограммы. Метод позволяет определять содержание компонентов в смеси меченных тритием соединений с погрешностью не более 1-2%»

8. Разработана методика быстрого анализа ряда компонентов нуклеиновых кислот методом тонкослойной хроматографии на слоях силикагеля.

9. Создана система автоматизированного измерения активности на радиохроматограммах с использованием мини-ЭВМ.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Куделин, Борис Константинович, 1985 год

1. Лукьянов В.Б., Бердоносов С.С,, Богатырев И.О., Заборенко К.Б, Иофа Б.З. Радиоактивные индикаторы в химии. Проведение эксперимента и обработка результатов. М»: Высшая школа, 1977, с.65.

2. Ленский Л,А. Шизика и химия трития. М.: Энергоиздат, 1981, с.15.

3. Ломоносов И.И., Сошин Л.Д. Измерение трития. М.: Атомиз-дат, 1968, с.7.

4. Роговин З.А. Химия целлюлозы. М.: Химия, 1972, с.50.

5. Справочник химика. М.-Л.: Химия, 1964, т.2, с.104.

6. Роберте Т. Радиозфоматография. M.: Miqp, 1981.

7. Demorest H.L., Baskin R. Gas flow counter for scanning paper chromâtograms and paper ionograms. Anal. Chem., 1954, v.26, No.9, pp.1531-1532.

8. Roberts H.R., Carleton P.J. Determination of specific acti14vity of чЗ-labelled sugars on paper chromatograms using an automatic scanning device. Anal. Chem., 1956, v.28, Ho.1, pp.11-16.

9. Osinski P.A. Detection and determination of tritium labelled compounds on paper chromatograms. Intern. J. Appl. Radiat. Isotopes, 1960, v.7, No.4, pp.306-310.

10. Berthold F. Recent methods for the automatic evaluation of thin-layer and paper chromatograms of labelled substances. -Radioisotope sample measurement techniques in medicine and biology. Proceedings of symposium. Vienna,24-28 may, 1965, PP.303-315.

11. Pocchiary P., Rossi C. Quantitative radio paper chromatography. J.Chromatogr.,1961,v.5»No.5»pp.377-394.- 137

12. Phillips R.F., Waterfield W.R. Effects of drying and equilibration of paper chromatograms of tritium labelled compounds. J.Chromatogr.,1969,v.40,No.2,pp.309-311•

13. Apelgot S., Duquesne М. Concentration profile in paper chromatography investigations of a labeled substance. Advances in tracer methodology, ed.S.Rothchild, 1966,v.3,PP.161-172.

14. Вдовенко B.M., Боброва B.H., Рысьев O.A., Иванова И.Ф.

15. Особенности измерения трития в бумажных хроматограммах, -Coll,Czech.Chem.Commxm.,1974,v.39,pp.3640-3648,

16. Furlong N.В.,Williams U.L.,Willis D.P. Enhaucement of %-co-unting efficiency on paper discs after incorporation into3H ША. Biochim.Biophys.Acta,1965,v.103,Ho.2,pp.341-343.

17. Dobbs H,E, Measurement of tritium in heterogeneous and homogeneous counting systems, Int,J,Appl,Radiat,Isotopes, 1968,v,19,No,2,pp,155-157.

18. Gill D.M. Liquid scintillation counting of tritiated compounds supported by solid filters. Int.J.Appl.Radiat.Isotopes, 1967,v,18,No.6,pp.393-398.

19. De Bersaques J, Counting of tritiated compounds on paper chromatograms, Int,J.Appl.Radiat,Isotopes,1968,v,19»No,2, pp,166-169.

20. Рысьев O.A., Бабахин Н.И. Оценка факторов, определяющих различия в эффективности счета меченных тритием препаратов на бумажных хроматограммах. Химия и технология изотопов и меченых соединений. Реферативный сборник НЙИТЭХим, М., 1976, №3 (18), сс.7-8.

21. Bendek G.,Patel A.J. Counting radioactive nucleotides on anion exchange paper discs: recent improvements. In "Liquid scintillation counting", eds. C.-T. Peng, D.L. Hor-rocks, E.L.Alpen. Proc.Intern.Conf. 1979 (Pub.1980),v.2, PP.69-75.

22. Фляте Д.М. Свойства бумаги. M.: Лесная промышленность, 1976, с.275.

23. Аким Э.Л. Обработка бумаги. М.: Лесная промышленность, 1979,с.49.

24. Фролов М.В. Структурная механика бумаги. M. : Лесная промышленность, 1982.

25. Перри С., Амос Р., Брюер П. Практическое руководство по жидклетной хроматографии. М.: Мир, 1974, сс.72-76.

26. Жидкостная колоночная хроматография. Под ред. З.Дейла, К.Мацека, Я.Янака. М.: Мир, 1978, т.1, сс.238-240.

27. Eckert Th., Knie U. Zum einfluss reflektierender trägerma-terialièn bei der quantitativen in situ hochleistungs-dün-nschichtChromatographie. Untersuchungen am beispiel einer kieselgel 60-beschichtung. J.Chromatogr.,1981,v.213»No.3» pp.453-462.

28. Pollak V. Linear relationship between concentration and optical response of thin-layer chromâtograms. J.Chromatogr. 1978, v.152, No.1,pp.201-207.

29. Курицкий А.Л., Кундзич Г.А. Оптические методы и приборы в целлюлозно-бумажной промышленности. М.: Лесная промышленность, 1980.

30. Лейстнёр Л., Салма Э., Кузьмин Н.И. О повышении эффективности тонкослойной хроматографии. ЖАХ, 1982, т.37, №8, сс.1384-1392.

31. Вайсман Л.М. Структура бумаги и методы ее контроля. М.: Лесная промышленность, 1973, с.46.

32. Кейси Д.П. Свойства бумаги и ее переработка. М.: Гослес-бумиздат, I960.

33. Корте X. Пористая структура бумаги. ЕЕ определение, значение и изменение при размоле. В сб. "Основные представления о волокнах, применяемых в бумажном производстве", М.: Гослесбумиздат, 1962, сс.314-345.

34. Seliger H.H., Agranoff B.Y/. Solid scintillation counting3 14of ^H and С in paper chromatograms. Anal.Chem.,1959» v.31,Ho.9,pp.1607-1608.

35. Roucayrol J.C.»Taillandier P. Detection des activités beta sur un chromâtogramme en couche mince avec un scintillateur gélifiable. C.r. hebd. Séanc.Acad.Sci.,1963,v.256,Жо.22, РР.4653-4654.

36. Sprott W.E. A liquid scintillator-based continuous radio-chromatogram scanner. J.Cromatogr.,1965,v.17,No.2,p.355-361

37. Ломоносов И.И. Способ измерения хроматограмм на бумаге соединений, меченных тритием. Авт. свид. № 169866, Бголл.изобр.,1965, №7, с.32.

38. Жарков A.B., Ломоносов И.И. Способ тонкослойной хроматографии соединений, меченных радиоактивными изотопами. Авт. свид. № 169232, Бюлл. изобр., 1965, №6.

39. Snyder F. Quantitative radioassay methods for thin-layer chromatography: zonal and autoradiographic scans. In "Radioisotope sample measurement techniques in medicine and biology". Proceedings of a symposium, Vienna, 24-28 ma^ 1965, pp.521-533.

40. Snyder F., Cress E.A. Application of TLC zonal ^-profile scans to the analysis of urinary constituents derived from lipids. Clin.Chem.,1968,v.14,Ho.6,pp.529-534.

41. Jaffee M.,Ford L.A1. On the nature of quenching. Int.J. Appl.Radiat.Is ot opes, 19 70,v.21,No1,pp.49-52.

42. Cramer C.F.,Arnott S.G. Liquid scintillation quenching agents from filter paper. Int.J.Appl.Radiat.Isotopes,1972, v.23,No.7,pp.339.

43. Rouchand J.,Decallonne J.R.,Meyer J.A. Thin-layer chromatographic measurement of low activities of tritiated substances mixed with non-radioactive quenching plant pigments. -J.Chromatogr.,1977,v.139,No.2,pp.376-380.

44. Moriand J.»Christoffersen T.,0snes J.-B.,Paus P.N. Liquid scintillation counting of polar molecules: effect of pH on water association, adsorption to glass and elution from paper. Acta Chem.Scand. Ser.B, 1977,v.31,No.5,pp.431-432.

45. Wigfield D.C.,Srinivasan V. Correlation between sample adsorption and pulse height shift in liquid scintillation counting. Int.J.Appl.Radiat.Isotopes,1973,v.24,No.10,p.613.14

46. Wigfield D.C. The determination of the radioactivity of ^C samples adsorbed on glass vials by direct liquid scintillation counting. Analyt.Biochem.,1974,v.59,No.1,pp.11-15.

47. Wigfield D.C.,Srinivasan V. Liquid scintillation counting and sample adsorption. Structural factors in organic molecules controlling likelihood of adsorption. Int.J.Appl. Radiat.Is ot opes,1974,v.25,No.11/12,pp.473-482.

48. Reimschiissel W.,Kubik M. The problem of adsorption on sili1 Acagel xn a liquid scintillation radiometry of 4Î labelled compounds. J.Radioanal.Chem.,1980,v.60,No.1,pp.55-64.

49. Kubik M. Problem of adsorption on silica gel in the liquid1Ascintillation radiometry of чЗ labelled compounds. Deviation from channel ratio curve. J.Radioanal.Chem.,1981, v.63,No.2,pp.235-245.

50. Хайс И.М. Хроматография радиоактивных веществ на бумаге. -В кн. "Хроматография на бумаге" под ред. И.М.Хайса и К.Мацека. М.: Иностранная литература,1962, сс.195-206.

51. Роджерс Э. Авторадиография. М.: Мир, 1972.

52. Parups E.Y.,Hoffman I.,Jackson H.R. Scintillation radio-autography of tritium-labelled compounds on paper chromato-grams. Talanta,1960,v.5,No.2,pp.75-77.

53. Luthi U.,Waser P.G. Low-temperature fluorography inducedby tritium-labelled compounds on thin-layer chromatograms.-Nature,1965,v.205,No.4977,pp.1190-1191.

54. Randerath K. An improved procedure for solid scintillation fluorography of tritium labeled compounds. Anal.Chem., 1969,v.41,No.7,pp.991-992.

55. Tykva R.,Pavlu B. Photodensitometric investigation of the conditions of tritium determination on paper chromato-grams by fluorography. Coll.Czech.Chem.Commun.,1973,v.38, No.1,pp.25-28.

56. Bonner W.M.,Stedman J.D. Efficient fluorography of tritium and carbon-14 on thin layers. Anal.Biochem.,1978,v.89, No.1,pp.247-256.

57. Soini E. Radio-isotope counting techniques for analytical applications in biology and medicine. Sci,Tools,1978, v.25,No.3,pp.38-48.

58. Tykva R.,Votruba I. The use of the semiconductivity detector for determination of labelled compounds in thin-layer chromatography. J.Chromatogr.,1974,v.93,No.2,pp.399-405.

59. Tykva R.,Panek V. Estimation of low-energy Jb -nuclides using silicon detectors with partially depleted surface barrier. II. Simultaneous estimation of two -nuclides. -Radiochem.Radioanal.Lett.,1973,v.14,No.2,pp.109-121.

60. Tykva R.,Franek P. Nondestructive and quantitative evaluation of radioactive spots on two-dimentional peptide maps by an automated procedure. Anal.Biochem.,1977,v.78,No.2,1. PP. 572-576.

61. Вдовенко B.M.»Боброва В.Н.,Жарков А.В.,Рысьев О.А.»Волина В.В. Быстрый метод определения радиохимической чистоты препаратов, меченных тритием, с помощью бумажной и тонкослойной хроматографии. Радиохимия,1971,т.13,№2,сс.255-259.

62. Вдовенко В.М. »Боброва В.Н.,Рысьев 0.А. »Жарков А.В., Суров Н.А. Сканирующие устройства для измерения трития на хроматограммах с введенными сцинтилляторами. Изотопы в СССР, №3,1973, сс.26-29.

63. Рысьев О.А.,Суров Н.А. Универсальное сканирующее устройство для одномерных бумажных и тонкослойных хроматограмм. -Приборы и техника эксперимента, 1973, №2, с.249»

64. Рысьев О.А.,Жарков А.В. ,Долгирев Е.И. Сцинтилляционный метод измерения трития в биологии и медицине. М,: Атом-издат, 1978.

65. Pay D.D.,Costa J.L.,Launay J.M. Thin-layer chromatographic separation and quantitation of radioactively labelled 5-hy-droxytryptamine, 5-hydroxytryptamine-O-sulfate, and 5-hydro-xyindoleacetic acid. J.Chromatogr.,1982,v.252,No.1,p.33S.

66. Houx N.W.H. Liquid scintillation radioassay of thin-layer chromatograms: Problems in the use of external standard quench correction. Anal.Biochem.,1969,v.30,No.2,pp.302-305.

67. Redgwell R.J.,Turner N.A.,Bieleski R.L. Stripping thin layers from chromatographic plates for radiotracer measurements. J.Chromatogr.,1974,v.88,No.1,pp.25-31•

68. Aloyo V.J. Scintillation counting of tritium and carbons-containing gel slices: a one-step method. Anal.Biochem.1979,v.99,No.1,pp.161-164.

69. Takiue M.,Ishikawa H. Conversion of a cellulose support sample to a homogeneously dispersed system for liquid scintillation measurement. Int.J.Appl.Radiat.Isotopes,1980,v.31,No.10,pp.619-622.

70. Takiue M.,Pujii H.,Ishikawa H. Activity determination of filter sample with liquid scintillation measurement. -Radioisotopes,1981,v.30,No.3,pp.135-139.

71. Cayen M.N.,Anastassiadis P.A. A simplified technique forthe liquid scintillation measurement of radioactivity on14paper chromatograms containing toluene-insoluble C- and %-labelled compounds. Anal.Biochem.,1966,v.15,No.1, pp.84-92.

72. McKenzie R.M.,Gholson R.K. Liquid scintillation counting14. 3of C— and "H-labelled samples on solid supports: a general solution of the problem. Anal.Biochem.,1973,v.54, No.1,pp.17-31.

73. Gulyassy P.P. Sources of error in counting tritium-labelled adenosine and guanosine derivatives on chromatograms. -J.Chromatogr.,1975,v.105,No.2,pp.401-404.

74. Moore P.A. Improved liquid scintillation counting of tritiated inulin. Clin.Chem.,1981,v.27,No.2,pp.349-350.

75. Willenbrink J. On the quantitative assay of radiochroma-tograps by liquid scintillation counting. Int.J.Appl. Radiat.Isotopes,1963»v.14,No.4,pp.237-238.

76. Sheppard G. The radiochromatography of labelled compounds. • Review 14, The radiochemical centre Amersham, England,1972.

77. Жилка Л. ,Матуха M. Методы континуальной обработки радио-хроматограмм. В сб. "Органические соединения, меченные радиоактивными изотопами", П Симпозиум стран-членов СЭВ, Ленинград, 1981. М.: ЦНИИатоминформ, 1982, ч.2, сс.212-223.

78. Chromatography analyzer LB283. Rev. Sci. Instr., 1980, v.51, No.11,p.1588.

79. Static radiochromatogram reader CHROMELEC. Проспект фирмы "Numelec" (Франция), 1978.

80. Лурье А.А. Хроматографические материалы. M.: Химия, 1978.

81. Каталог химических реактивов и высокочистых химических веществ. М.: Химия, 1971, с.584.

82. Гуськова Л.И. »Демушкин В,П. Современные методы хроматогра-фического анализа нуклеиновых кислот и их компонентов. ~ Успехи химии, 1974, т.43, №7, сс.1241-1281.

83. Randerath К, A comparison between thin-layer chromatography and paper chromatography of nucleic acid derivatives, -Biochim.Biophys.Res.Comm.,1961/1962,v.6,No.6,pp.452-457.

84. Marzullo G.,Lach J.W. Separation of phosphorylated and UDP derivatives of hexosamines and acetylhexosamines by thin-layer chromatography. Anal.Biochem.,1967,v.18, No.3, pp.579-582.

85. Issaq H.J.,Barr E.W.,Zielinski W.L. Separation of alkylated guanines, adenines, uracils and cytosines by thin-layer chromatography. J.Chromatogr.,1977,v«131,No.1, pp.265-273»

86. Flouret G.,Hector 0. Adsorption chromatography of cyclic nucleotides on silica gel and alumina thin-layer sheets.-Anal.Biochem.,1974,v.58,No.1,pp.276-285.

87. Remy P.,Dirheimer G.,Ebel J. Separation des nucleosides mono-, di- et triphosphates par chromatographie sur couche mince de silice. J.Chromatogr.,1967,v.31,No.2, pp.609-612.

88. Scheit K.-H. Silicageldunnschichtchromatographie der Nucleosides, Nucleotides und Oligonucleotides. Biochim. Biophys.Acta, 1967,v.134,pp.217-220.

89. Лукьянов В .Б. «Симонов Е.Ф. Измерения и идентификация бета-радиоактивных препаратов. М,: Энергоатомиздат,1982.

90. Виноградова Р.Г.»Лузин И.Е.»Романов,§.И.»Рысьев О.А. Выбор режима сканирования радиохроматограмм на установке УСХ-1. Заводская лаборатория, 1975,т.41,№ 5,сс.556-560.

91. Лыков А.В. Теория сушки. М.: Энергия, 1968.

92. Журавлева В«П. Массотеплоперенос при термообработке и сушке капиллярнопористых строительных материалов. Минск, Наука и техника, 1972.

93. НО. Чураев Н.В.,Ильин Н.И. Радиометрические методы исследования движения подземных вод, М.: Атомиздат, 1973,

94. Токштейн А. »Дворжак И. ,Хайс И.М. Принципы и теория хроматографии на бумаге. В кн. "Хроматография на бумаге", под ред. И.М.Хайса и К.Мацека. М.: Иностранная литература, 1962, сс.32-91.

95. Калинин Ф.Л.,Лобов В.П.,Жидков В.А. Справочник по биохимии. Киев, Наукова думка, 1971*113» Jackson F.L.,Lampe H.W. Direct counting of tritium-tagged solid and liquid samples. Anal.Chem.,1956,v.28,Ho.11, pp.1735-1737.

96. Папков С.П. »Файнберг Э.З. Взаимодействие целлюлозы и целлюлозных материалов с водой. М.: Химия, 1976.

97. Кочетков Н.К.»Будовский Э.И.»Свердлов Е.Д.,Симукова Н.А., Турчинский М.Ф.,Шибаев В.Н. Органическая химия нуклеиновых кислот. М.: Химия, 1970, сс.177-195.

98. Киселев А.В. ,Яшин Я.И. Адсорбционная газовая и жидкостная хроматография. М.: Химия, 1979, сс.205-254.

99. Березкин В.Г.,Бочков А.С. Количественная тонкослойная хроматография. М.: Наука, 1980, с.130.

100. Вяземский В.0.»Ломоносов И.И.,Писаревский А.Н.»Протопопов Х.В.,Рузин В.А.,Тетерин Е.Д. Сцинтилляционный метод в радиометрии. М.: Госатомиздат, 1961.

101. Shapiro I.L.»Kritchevsky D. The quenching of 14C and 3H by organic solvents in two common liquid scintillation solutions. Int.J.Appl.Radiat.Isotopes,1964»v.15»No.6, pp.325-330.

102. Labeled compounds. Radionuclides. LSC products. Catalog e-9, Hew England Nuclear, 1982.

103. Radiochemicals and stable isotopes labelled compounds. CEA Catalogue-1980.

104. Radiochemicals. ICN Catalogue-1981.

105. Radiochemical/Biochemical and equipment catalog. Schwarz/ Mann, Inc., 1982.

106. Research products. Catalog-1983. Amersham International Ltd.

107. Доерфель К. Статистика в аналитической химии* М.: Мир, 1969.

108. Новак Й. Количественный анализ методом газовой хроматографии. М.: Мир, 1978, сс.158-160.

109. Каргер Б. Основы высокоскоростной жидкостной хроматографии. В кн. "Современное состояние жидкостной хроматографии", под ред. Дж.Киркленда. М.: Мир, 1974, сс.9-45.

110. Боброва В.H.»Рысьев 0.А.,Иванова И.§. Вопросы точности определения радиохимической чистоты препаратов, меченных тритием. Препринт РИ-14, Л.: Радиевый институт им.В.Г. Хлопина, 1973.

111. Вдовенко В.М. »Боброва В.H. »Рысьев О.А. »Жарков А.В. »Суров H.A.,Иванова И.Ф. Новый метод измерения хроматограммс мягкими В -излучателями. Радиохимия,1973,т.15,№4,с.595.

112. Золотарев П.П. Об испарении жадности с плоской поверхности раствора. Доклады АН СССР, 1966,т.168,№1,с.83-86.

113. Гамаюнов Н.И. »Ильченко Л.И. Закономерности переноса влаги и структурообразования при сушке различных материалов. Химич. промышленность, 1979, № 6, сс.344-348.

114. Красников В.В. Кондуктивная сушка. М.: Энергия, 1973.

115. Catch J.R. Labelled compounds the user and the supplier. - J.Labelled Сотр.,1973,v.9,Ho.4,pp.737-741.

116. Mukherjee K.D.,Mangold H.K. Recent developments in the chromatographic analysis and purification of radioactive labelled lipids. J.Labelled Сотр., 1973, v.9,Ho.4, pp.779-803.

117. Неймарк А.В.,Хейфец Л.И. Механизм переноса испаряющейся влаги в капиллярно-пористой частице. Химич. промышленность, 1979, № 6, сс.348-351.