Получение пептида-мимотопа химических канцерогенов группы полициклических ароматических углеводородов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.03, кандидат биологических наук Апалько, Светлана Вячеславовна

• Апалько, Светлана Вячеславовна
• кандидат биологических наук
• 2009

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Апалько, Светлана Вячеславовна

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы.

1.1. Роль антител в защите организма от химических канцерогенов.

1.1.1. Индукция и функции антиканцерогенных антител.

1.1.1.1. Индукция антиканцерогенных антител в естественных условиях.

1.1.1.2. Индукция антиканцерогенных антител в модельных экспериментах.

1.1.2. Механизмы угнетения и стимуляции канцерогенеза антителами.

1.1.3. Механизмы взаимодействия антител с полициклическими ароматическими углеводородами.

1.2. Использование технологии фагового дисплея для получения пеп- ^ тидных лигандов.

1.2.1. Использование пептидных фаговых библиотек для картирования эпитопов рецепторных молекул.

1.2.2. Получение пептидов-мимотопов непептидных соединений.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Материалы.

2.2. Методы.

Глава 3. Результаты и обсуждение исследований.

3.1. Получение и характеристика моноклональных антител к бен- ^ зо[а]пирену.

3.1.1. Получение и скрининг мышиных гибридом, синтезирующих моноклональные антитела к бензо[а]пирену.

3.1.2. Иммунохимическая характеристика мАТ В 2.

3.1.3. Моделирование РаЬ-фрагмента мАТ В 2.

3.2. Получение и характеристика пептида-мимотопа бензо[а]пирена.

3.2.1. Аффинная селекция специфических клонов из пептидной фаговой библиотеки.

3.2.2. Иммунологическая характеристика пептида-мимотопа бензо[а]пирена.

ВЫВОДЫ.

СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ а.о. - аминокислотные остатки

AT - антитела

Б А - бенз [а] антрацен

БП - бензо[а]пирен

БСА - бычий сывороточный альбумин

БФ - бактериофаг

ДНК — дезоксирибонуклеиновая кислота

ПАУ - полициклические ароматические углеводороды

ИФА — иммуноферментный анализ кБСА - катионизированный БСА кДНК - кодирующая ДНК кое - колонеобразующие единицы мАТ - моноклональные антитела

ПААГ — полиакриламидный гель п.н. - пары нуклеотидов

ПЦР — полимеразная цепная реакция

ПЭГ - полиэтиленгликоль

РНК - рибонуклеиновая кислота

Ah - арил-гидрокарбон сур - цитохром

CR - кросс-реактивность

Fv -вариабельный фрагмент AT

Ig - иммуноглобулины

GST - глутатион-8-трансфераза

OD - оптическая плотность rFab - рекомбинантный Fab фрагмент AT

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение пептида-мимотопа химических канцерогенов группы полициклических ароматических углеводородов»

Актуальность проблемы. По данным Международного агентства ВОЗ по изучению рака 80% онкологической заболеваемости населения определяется воздействием на человека преимущественно химических факторов среды. Канцерогенному воздействию подвергаются большие группы населения индустриально развитых регионов не только в силу непосредственной близости канцерогенно-опасных производств, но и в следствие загрязнения окружающей среды автомобильными выбросами, широкого распространения курения табака (активного и пассивного) и т.п.

Основная канцерогенная нагрузка приходится на полициклические ароматические углеводороды (ПАУ). Бензо[а]пирен (БП) - одно из самых активных и распространенных в окружающей среде соединений, относящихся к безусловным канцерогенам для человека, что дало основание рассматривать его в качестве индикатора группы ПАУ [1].

Таким образом, существует насущная потребность в разработке новых эффективных методов профилактики злокачественных опухолей, основанных на защите организма от химических канцерогенов, в частности, от БП.

Ранее в модельных экспериментах было показано, что торможение канцерогенеза, а именно появления и роста химически индуцированных опухолей, достижимо за счет индукции образования соответствующих антиканцерогенных антител (АТ). Поэтому в основу профилактики рака может быть заложен принцип иммунологической защиты организма от химических канцерогенов.

Предлагаемый ранее подход иммунопрофилактики рака, основанный на использовании конъюгатов химических канцерогенов (или их аналогов) с мак-ромолекулярными носителями в качестве антиканцерогенных вакцин неприменим для иммунопрофилактики рака у человека, т.к. сохраняется вероятность индукции опухоли самим канцерогеном в составе такого конъюгата [2, 3].

Принципиально новый подход использовали Chagnaud J.L. и соавт. (Université de Bordeaux II, France) [4]. В 1992 г. они сообщили о получении ан-тиидиотипических AT к канцерогенам (вторых AT). Вторые AT несут в себе так называемый «внутренний иммунологический образ» канцерогена и способны индуцировать синтез AT, связывающих канцероген. В 1993-1995 г.г. они описали ингибирующее действие вторых AT на возникновение опухолей, индуцированных канцерогенами у животных. Однако, использование таких AT в практике имеет серьезные недостатки, такие как появление сопутствующих AT против видовых, аллогенных и изотипических эпитопов и развитие нежелательных аллергических реакций.

Поэтому разработка альтернативных подходов, направленных на получение иммуногенных препаратов, не содержащих никаких органических аналогов канцерогена и, тем не менее, способных индуцировать антиканцерогенный иммунный ответ, представляет самостоятельный научный и практический интерес.

В данной работе предлагается новый подход к созданию антиканцерогенных вакцин, основной идеей которого является получение пептида, модулирующего иммунные функции низкомолекулярного соединения, такие как индукция антиканцерогенных AT и торможение канцерогенеза. Получение такого пептида возможно при помощи использования технологии фагового дисплея. Полученный пептид-мимотоп также как и антиидиотипические AT не будет содержать канцерогена, способного индуцировать возникновение опухоли, и в тоже время сопутствующих антигенных детерминант, вызывающих побочные патологические осложнения.

Цель работы: получение пептида-мимотопа химических канцерогенов.

Задачи исследования:

1. Получить и охарактеризовать мАТ с заданными свойствами - высокой специфичностью к БП и низкой кросс-реактивностью с неканцерогенными ПАУ и эндогенными структурно схожими соединениями.

2. Смоделировать структуру Fab фрагмента полученного мАТ и определить расположение активного центра связывания соединений группы ПАУ.

3. При помощи технологии фагового дисплея получить рекомбинант-ные клоны бактериофагов, содержащие пептид, специфически взаимодействующий с AT к БП.

4. Изучить иммунологические свойства пептида-мимотопа БП.

Научная новизна. Впервые в России получено мАТ к БП (мАТ В2). По своим характеристикам мАТ В2 не уступает зарубежным аналогам, а по специфичности к БП даже превосходит. Полученное мАТ В2 обладает высокой кросс-реактивностью к бенз [а] антрацену (БА), вероятному канцерогену для человека, и низким аффинитетом к неканцерогенным структурно схожим веществам.

Определены нуклеотидные последовательности ДНК, кодирующие вариабельные фрагменты легкой и тяжелой цепей.мАТ В2, транслированы в аминокислотные последовательности, на основе которых построена модель центра связывания мАТ В2. При помощи математического моделирования было определено место и сила связывания мАТ В2 с рядом химических соединений группы ПАУ.

На основе полученных моно- и поликлональных AT к БП при помощи технологии фагового дисплея впервые удалось получить пептид-мимотоп химических канцерогенов группы ПАУ. Полученный пептид-мимотоп, обладает способностью специфически связываться с мАТ В2 и моноспецифическими по-ликлональными AT к БП и БА.

Пептид-мимотоп бензо[а]пирена в составе pill белка бактериофага обладает иммуногенными свойствами - способностью индуцировать синтез AT к БП при иммунизации животных.

Научно-практическая значимость работы. Предложенный подход, позволяющий получать пептид-мимотоп химических канцерогенов группы ПАУ, способный индуцировать антиканцерогенный иммунный ответ, может быть использован для получения пептидов-мимотопов других низкомолекулярных органических соединений, представляющих опасность для здоровья человека и животных (например, пестицидов).

Полученный пептид-мимотоп БП и БА может быть использован при разработке принципиально новой группы иммунопрепаратов - антиканцерогенных вакцин, а также при создании новых диагностических тест-систем на основе иммуно-ферментного анализа (ИФА) для определения наличия антиканцерогенных AT. Замена в таких диагностических системах конъюгатов канцероген-белок на пептид-мимотоп исключит работу с потенциально опасными реагентами.

На полученный в данной работе пептид-мимотоп БП и Б А получен патент'

РФ.

Апробация работы. Результаты работы доложены на III Международной конференции «Фундаментальные науки - медицине» (г. Новосибирск 2-8 сентября 2007 г), IV съезде Российского общества биохимиков и молекулярных биологов (г. Новосибирск 11-15 мая 2008 г.), V конференции молодых ученых России с международным участием «Фундаментальные науки и прогресс клинической медицины» (г. Москва 19-22 мая 2008 г.), III Троицкой конференции «Медицинская физика и инновации в медицине» (г. Троицк 3-6 июня 2008 г.), V Северном социально-экологическом конгрессе (г. Москва 21-22 апреля 2009 г.), Международной научно-практической конференции «Новые идеи и решения молодых исследователей в развитии АПК» (1-е место) (г. Волгоград 13-15 мая 2009 г.), научно-практической конференции «Биологически активные вещества: фундаментальные и прикладные вопросы получения и применения» (г. Новый свет, Крым, Украина, 25-30 мая 2009 г.), научной конференции, посвященной 25-летию Института химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН «Химическая биология - Фундаментальные проблемы бионанотехноло-гии» (г. Новосибирск, 10-14 июня 2009 г.).

Апробация диссертации состоялась2009 г.

Публикации. По материалам диссертации опубликовано 10 научных работ. По результатам работы получен 1 патент РФ.

Заключение диссертации по теме «Молекулярная биология», Апалько, Светлана Вячеславовна

ВЫВОДЫ

1. Получено мАТ В2 с высокой специфичностью к бензо[а]пирену и бенз[а]антрацену, и низкой кросс-реактивностью с неканцерогенными ПАУ, которое не реагирует с эндогенными лигандами (стероидными гормонами и ароматическими аминокислотами).

2. Определены аминокислотные последовательности вариабельных фрагментов тяжелой и легкой цепей мАТ В2, по которым была смоделирована структура Fab фрагмента мАТ В2. Установлено, что активный центр связывания ПАУ расположен между третьими петлями тяжелой и легкой цепей.

3. Установлено, что экспериментально полученные значения кросс-реактивности мАТ В2 с ПАУ положительно коррелируют с рассчитанными значениями энергии связи.

4. Из пептидной фаговой библиотеки выделен клон бактериофага, содержащий в своем составе пептид-мимотоп, способный к специфическому связыванию с мАТ В2 и поликлональными антителами к бензо[а]пирену и бенз [а] антрацену.

5. Определена аминокислотная последовательность и осуществлен синтез пептида-мимотопа бензо[а]пирена, установлено, что пептид обладает слабой способностью конкурировать с бензо[а]пиреном за связывание с мАТ В.

6. Показано, что иммунизация мышей рекомбинантным клоном бактериофага, содержащим исследуемый пептид-мимотоп, приводит к образованию AT к исходному канцерогену БП.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Апалько, Светлана Вячеславовна, 2009 год

1. Перечень веществ, продуктов, производственных процессов, бытовых и природных факторов, канцерогенных для человека. Гигиенические нормативы ГН 1.1.725-98 МЗ России. -М., 1999.

2. Moolten F.L., Schreiber В., Rizzone A. Protection of mice against 7.12-dimethylbenz(a)antracene-induced skin tumors by immunization with a fluorinated asnalog of carcinogen. Cancer Res., 1981, .41, .452-459.

3. Silbart L.K., et al. Selective induction of mucosal immune responses to 2-acetylaminofluorene. Anticancer Research, 1996, 16, 651-660.

4. Chagnaud J.L., Faiderbe S., Geffard M. Effects of a monoclonal anti-idiotypie antybody, internal image of benzo(a)pyrene, on rat sarcomas. Acad.Sci. Paris, Sciences de la vie, 1993, 316, 1266-1269.

5. Ames B.N, Gold L.S, Willett W.C. The causes and prevention of cancer. Proc Natl Acad Sci USA, 1995, 92, 5258-5265.

6. Перечень веществ, продуктов, производственных процессов, бытовых и природных факторов, канцерогенных для человека. Гигиенические нормативы ГН 1.1.725-98 МЗ России. -М., 1999.

7. Кошкина B.C., Анипанова Н.А., Котляр Н.Н. Мониторинг распространенности химических канцерогенов в объектах окружающей среды и биосферах у жителей города с развитой отраслью черной металлургии. Гигиена и санитария, 2006, 12-14.

8. International Agency for Recearch on Cancer Monographs on the Evaluation of Carcinogenic Risk of Chemicals to Humans. Polynuclear Aromatic Compounds. Part I: International Agency for Recearch on Cancer. Lyon. France, 1983: Vol. 32.

9. Гуляева Л.Ф., Гришанова А.Ю. и др. Микросомная монооксигеназная система живых организмов в биомониторинге окружающей среды. Аналитический обзор. ГПНТБ, Новосибирск, 1994 98 с.

10. Гуляева Л.Ф., Вавилин В.А., Ляхович В.В. Ферменты биотрансформации ксенобиотиков в химическом канцерогенезе. Аналитический обзор. ГПНТБ, Новосибирск, 2000 90 с.

11. Yang C.S., Brady J.F., Hong J.Y. Dietary effects on cytochromes P450, xenobiotic metabolism and toxicity. FASEB J., 1992, 6, 737-744.

12. Rendic S., Di Carlo F.J. Human cytochrome P450 enzymes: a status report summarizing their reactions, substrates, inducers and inhibitors. Drug Metab. Rev., 1997, 29,413-580.

13. Hankinson O. The aryl hydrocarbon receptor complex. Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol, 1995, 35, 307-340.

14. Pelkonen O. and Nebert D.W. Metabolism of polycyclic aromatic hydrocarbons: etiologic role in carcinogenesis. Pharmacol. Rev., 1982, 34, 189-222.

15. Jerina D.M., Sayer J.M. et al. Carcinogtnicity of polycyclic aromatic hydrocarbons: the bay-region theory. In: Pullman В., ed. Carcinogenesis: fundamental mechanisms and environmental effects, 1980, 1-12.

16. Miller K.P., Ramos K.S. Impact of cellular metabolism on the biological effects of benzoa.pyrene and related hydrocarbons. Drug Metab.Rev., 2001, 33, 135.

17. Sticha K.R., Staretz M.E., Wang M., Liang H., Kenney P.M., Hecht S.S. Effects of benzyl isothiocyanate and phenethyl isothiocyanate on benzoa.pyrene metabolism and DNA adduct formation in the A/J mouse. Carcinogenesis, 2000, 21, 1711-1719.

18. Vijayalakshmi KP, Suresh CH. Theoretical studies on the carcinogenic activity of diol epoxide derivatives of PAH: proton affinity and aromaticity as decisive descriptors. Org Biomol Chem., 2008, 6, 4384-4390.

19. Autrup H, Harris C.C, Trump B.F, Jeffrey A.M. Metabolism of benzo-(a)pyrene and identification of the major benzo(a)pyrene-DNA adducts in cultured human colon. Cancer Res, 1978, 38, 3689-3696.

20. Sogawa K., Fujii-Kuriyama Y. Ah receptor, a novel ligandactivated transcription factor, J. Biochem., 1997, 122, 1075-1079.

21. Hahn Mark E. Aryl hydrocarbon receptors: diversity and evolution. Chemico-Biological Interactions, 2002, 141, 131-160.

22. Harper Patricia A., Wong Judy M.Y., Lam Maria S.M., Okey Allan B. Polymorphisms in the human AH receptor. Chemico-Biological Interactions, 2002, 141, 161-187.

23. Denison Michael S., Pandini Alessandro, Nagy Scott R., Baldwin Enoch P., Bonati Laura. Ligand binding and activation of the Ah receptor Chemico-Biological Interactions, 2002, 141, 3 -24.

24. Puga Alvaro, Xia Ying, Elferink Comelis. Role of the aryl hydrocarbon receptor in cell cycle regulation. Chemico-Biological Interactions, 2002,141, 117-130.

25. Nebert Daniel W., Dalton Timothy P., Okey Allan B., Gonzalez Frank J. Role of Aryl Hydrocarbon Receptor-mediated Induction of the CYP1 Enzymes in Environmental Toxicity and Cancer. The journal of biological chemistry, 2004, 279, 23847-23850.

26. Gonzalez F.J., Fernandez-Salguero P. The aryl hydrocarbon receptor: studies using the AHR-null mice. Drug Metab. Dispos., 1998, 12, 1194-1198.

27. Fernandez-Salgureo P.M., Hilbert D.M., Rudikoff S., Ward J.M., Gonzaler F.J. Aryl-hydrocarbon receptor-deficient mice are resistant to 2,3,7,8-tetrachlorodibenzo-p-dioxin-induced toxicity. Toxicol. Appl. Pharmacol, 1996, 140, 173-179.

28. Kazumi Sugihara et al. Aryl hydrocarbon receptor-mediated induction of microsomal drug-metabolizing enzyme activity by indirubin and indigoq. Biochemical and Biophysical Research Communications, 2004, 318, 571-578.

29. Chen S., Nguyen N., Tamura K., Karin M. and Tukey R.H. The role of the Ah receptor and p38 in benzoa.pyrene-7,8-dihydrodiol and benzo[a]pyrene-7,8-dihydrodiol-9,10-epoxide-índuced apoptosis. J. Biol. Chem., 2003, 278, 1952619533.

30. Kim J.H., Stansbury K.H., Walker N.J., Trush M.A., Strickland P.T., Sutter T.R. Metabolism of benzoa.pyrene and benzo[a]pyrene-7,8-diol by human cytochrome P450 1B1. Carcinogenesis, 1998, 19, 1847--1853.

31. Rushmore TH, Kong AN. Pharmacogenomics, regulation and signaling pathways of phase I and II drug metabolizing enzymes. Curr Drug Metab., 2002,3,481-490.

32. Ковалев И.Е., Шипулина H.B. Иммунохимические адаптации организма к окружающей химической среде. Серия биологическая, 1992, 1, 31-41.

33. Ковалев И.Е., Шипулина Н.В., Томилина Н.Ю. Индукция цитохрома Р-450 и последующая индукция иммунного ответа у крыс при хроническом введении ксенобиотиков, Фармакол. и токсикол., 1990, 53, 54-57.

34. Ковалев И.Е., Шипулина Н.В. Ковалентное связывание ксенобиотиков с белками организма как механизм адаптации. Хим.-фарм. ж-л, 1996, 12, 3-11.

35. Creech H.J., Franks W.R. Compounds synthesized from protein and carcinogenic hydrocarbons. Amer. J. Cancer, 1937, 30, 555-562.

36. Peck R.M., Peck E.B. Inhibition of chemically induced neoplasia by immunization with an antigenic carcinogen-protein conjugate. Cancer Res., 1971, 31, 1550-1554.

37. Curtis G.L., Ryan W.Z., Stenback F. Antibody simulation of benzoa.pyrene carcinogenesis. Cancer Lett., 1978, 4, 223-228.

38. Moolten F.L., Capparell N.L., Boger E. Induction of antibodies against carcinogenic polycyclic aromatic hydrocarbons. Nature, 1978, 272, 614-616.

39. Moolten F.L„ Capparell N.L., Boger E. Protection of mice against 7.12-dimethylbenza.anthracene-induced skin tumors by immunization with a fluorinated analog of carcinogen. Cancer Res., 1981, 41, 452-459.

40. Chagnaud J.L., Faiderbe S., Geffard M. Identification and immunoshemical characterization of IgA in Sera of patients with mammary tumors. Int. J. Cancer, 1992, 50,395-401.

41. Moolten F.L., Capparell N.L., Boger E. Reduction of respiraatoty tract binding of benzoa.pyrene in mice by immunization. J. Natl. Cancer Inst., 1978, 61, 1347-1349.

42. Silbart L.K., Keren D. Reduction of intestinal carcinogen absorbtion carcinogen-specific secretory immunity. Science, 1989,243, 1462-1464.

43. Silbart L.K., McAleer F., Rasmussen M.V. Selective induction of mucosal immune responses to 2-acetilaminofluorene. Anticancer Res., 1996, 16, 651660.

44. Scheepers P.T.J, et al. Immunochemical detection of metabolites of parent and nitro poly cyclic aromatic hydrocarbons in urine samples from persons occupa-tionally exposed to diesel exhaust. Fresenius J Anal Chem, 1995, 351, 660-669.

45. Gomes M., Santella R.M. Immunologic methods for the detection of benzoa.pyrene metabolites in urine. Chem. Res. Toxicol, 1990, 3, 307-310.

46. Nording M., Haglund P. Evaluation of the structure/cross-reactivity relationship of polycyclic aromatic compounds using an enzyme-linked immunosorbent assay kit. Analytica Chimica Acta, 2003, 487, 43-50.

47. Scharnweber T., Fisher M., Suchanek M., Knopp D., Niessner R. Monoclonal antibody to polycyclic aromatic hydrocarbons based on a new benzoa.pyrene immunogen. Fresenius J Anal Chem, 2001, 371, 578-585.

48. Suchanek M., Scharnweber T., Fisher M., Knopp D., Niessner R. Monoclonal antibodies specific to polynuclear aromatic hydrocarbons. Folia Biologica, 2001,47, 106-107.

49. Buck S., Bouche F.B., Brandenburger A., Miller C.P. Modulation of the metabolism and adverse effects of benzoa.pyrene by specific antibody: novel host factor in enveromental carcinogenesis? Carcinogenesis, 2005, 26, 835-844.

50. Grubor Nenad M., Hayes John, Small Gerald J., Jankowiak Ryszard. Cross-reactivity and conformational multiplicity of an anti-polycyclic aromatic hydrocarbon mAb. PNAS, 102, 7453-7458.

51. James L.C., Roversi P., Tawfic D.S. Antibody multispecificity mediated by conformational diversity. Science, 2003, 299, 1362-1367.

52. James L.C., Tawfic D.S. The specificity of cross-reactivity: promiscuous antibody binding involves specific hydrogen bonds rather than nonspecific hydrophobic stickiness. Protein Sci, 2003, 12, 2183-2193.

53. Pellequer J.-L., Zhao B., Kao H.-I., Bell C.W., Li K., Li Q.X., Karu A.E., Roberts V.A. Stabilization of bound polycyclic aromatic hydrocarbons by a n-cation interaction. J. Mol. Biol., 2000, 302, 691-699.

54. Lommerse J.P., Tailor R. Characterising non-covalent interaction with the Cambridge Structural Database. J Enzyme Inhib, 1997, 11, 223-243.

55. Shoichet B.K., Kuntz I.D. Matching chemistry and shape in molecular docking. Protein Eng., 1993, 6, 723-732.

56. Goodsell D.S., Morris G.M., Olson A.J. Automated docking of flexible ligands: Application of AutoDock. J. Mol. Recog., 1996, 9, 1-5.

57. Model P., Russel M. Filamentous bacteriophage. The bacteriophages. Plenum Press, 1988, 2, 375-456.

58. Smith G. P., Scott J. K. Libraries of peptides and proteins displayed on filamentous phage. Methods Enzymol, 1993, 217, 228-257.

59. Kunkel, T., Roberts J., Zakour R. Rapid and efficient site-specific mutagenesis without phenotypic selection. Methods in Enzymology, 1987, 154, 367382.

60. Smith G. P. Filamentous fusion phage: novel expression vectors that display cloned antigens on the virion surface. Science, 1985, 228, 1315-1317.

61. Gailus V., Rasched I. The adsorption protein of bacteriophage fd and its neighbour minor coat protein build a structural entity. Eur. J. Biochem, 1994, 222, 927-931.

62. Felici F., Castagnoli L., Musacchio A., Jappelli R., Cesareni, G. Selection of antibody ligands from a large library of oligopeptides expressed on a multivalent exposition vector.J. Mol. Biol., 1991, 222, 301-310.

63. Luzzago A., Felici F., Tramontano A., Pessi A., Cortese R. Mimicking of discontinuous epitopes by phage-displayed peptides, I. Epitope mapping of human H ferritin using a phage library of constrained peptides. Gene, 1993, 128,51-57.

64. Greenwood J., Willis A.E., Perham R, N. Multiple display of foreign peptides on a filamentous bacteriophage. J.Mol. Biol., 1991, 220, 821-827.

65. Garrard L. J., Yang M., O'Connell M. P., Kelley R. F., Henner D. J. Fab assembly and enrichment in a monovalent phage display system. BioTechnology, 1991, 9, 1373-1377.

66. James B. Burritt, Clifford W. Bond, Kimathi W. Doss, Algirdas J. Jesaitis. Filamentous Phage Display of Oligopeptide Libraries. Analytical biochemistry, 1996, 238, 1-13

67. Brian K. Kay, Jill Winter, John McCafferty. Phage Display of Peptides and Proteins: A Laboratory Manual. Academic Press, NY, 1996

68. Burritt J. B., Quinn M. T., Jutila M. A., Bond C. W., Jesaitis A. J. Topological mapping of neutrophil cytochrome b epitopes with phage-display libraries. J. Biol. 1995, Chem., 270, 16974-16980.

69. Devlin J., Panganiban L., Devlin P. Random peptide libraries: a source for specific protein binding molecules. Science, 1990, 249, 404-406.

70. Renschler M. F., Bhatt R. R., Dower W. J., Levy R. Synthetic peptide ligands of the antigen binding receptor induce programmed cell death in a human B-cell lymphoma. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1994, 91, 3623-3627.

71. Scott J., Smith G. Searching for Peptide Ligands with an Epitope Library. Science, 1990, 249, 386-390.

72. Cwirla S., Peters E., Barrett R., Dower W. Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1990, 87, 6378-6382.

73. O'Neil K. T., Hoess R. H., Jackson S. A., Ramachandran N. S., Mousa S. A., DeGrado W. F. Identification of novel peptide antagonists for GPIIb/IIIa from a conformationally constrained phage peptide library. Proteins, 1992, 14, 509-515.

74. Christian R. B., Zuckermann R. N., Kerr J. M., Wang L., Malcolm B. A. Simplified methods for construction, assessment and rapid screening of peptide libraries in bacteriophage. J. Mol. Biol., 1992, 227, 711-718.

75. Blond-Elguindi S., Cwirla S. E., Dower W. J., Lipshutz R. J., Sprang S. R., Sambrook J. F., Gething M.-J. H. Affinity panning of a library of peptides displayed on bacteriophages reveals the binding specificity of BiP. Cell, 1993, 75, 717-728.

76. Koivunen E., Wang B., Ruoslahti E. Isolation of a highly specific ligand for the alpha 5 beta 1 integrin from a phage display library. J. Cell Biol., 1994, 124, 373-380.

77. McConnell S. J., Kendall M. L., Reilly T. M., Hoess, R. H. Constrained peptide libraries as a tool for finding mimotopes. Gene, 1994, 151,115-118.

78. Hammer J., Takacs B., Sinigaglia F. Identification of a motif for HLA-DR1 binding peptides using M13 display libraries. J. Exp. Med., 1992, 176, 1007-1013.

79. Hoess R. H. (1993) Phage display of peptides and protein domains. Curr. Opin. Struct. Biol., 1993, 3, 572-579.

80. Luzzago A., Felici F., Tramontano A., Pessi A., Cortese R. Mimicking of discontinuous epitopes by phage-displayed peptides. I. Epitope mapping of human H ferritin using a phage library of constrained peptides. Gene,1993, 128, 51-57.

81. McLafferty M. A., Kent R. B., Ladner R. C., and Markland W. Mimicking of discontinuous epitopes by phage-displayed peptides, I. Epitope mapping of human H ferritin using a phage library of constrained peptides. Gene, 1993, 128, 2936.

82. Brian K. Kay, Jeremy Kasanov, Montarop Yamabhai. Screening Phage-Displayed Combinatorial Peptide Libraries. Methods, 2001, 24, 240-246.

83. Parmley S. F., Smith G. P. Antibody-selectable filamentous fd phage vectors: affinity purification of target genes. Gene, 1988, 73, 305-318.

84. Parmley S. F., Smith G. P. Filamentous fusion phage cloning vectors for the study of epitopes and design of vaccines. Adv. Exp. Med. Biol., 1989, 251, 215— 218.

85. Cwirla S. E., Peters E. A., Barrett R. W., Dower W. J. Peptides on phage: a vast library of peptides for identifying ligands. Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A., 1990, 87, 6378-6382.

86. Bluthner M., Bautz E. K., Bautz F. A. Mapping of epitopes recognized by PM/Scl autoantibodies with gene-fragment phage display libraries. J. Immunol. Methods, 1996, 198, 187-198.

87. Bluthner M., Schafer C., Schneider C., Bautz F. A. Identification of major linear epitopes on the splOO nuclear PBC autoantigen by the gene-fragment phage-display technology. Autoimmunity, 1999, 29, 33-42.

88. Du Plessis D. H., Romito M., Jordaan F. Identification of an antigenic peptide specific for bluetongue virus using phage display expression of NS1 sequences. Immunotechnology, 1995, 1, 221-230.

89. Petersen G., Song D., Hugle-Dorr B., Oldenburg I., Bautz E. K. Mapping of linear epitopes recognized by monoclonal antibodies with gene-fragment phage display libraries. Mol. Gen. Genet., 1995, 249, 425-431.

90. Wang L. F., Du Plessis D. H., White J. R., Hyatt A. D., Eaton B. T. Use of a gene-targeted phage display random epitope library to map an antigenic determinant on the bluetongue virus outer capsid protein VP5. J. Immunol. Methods, 1995, 178, 1-12.

91. Horowitz B., Bonomo R., Prince A. M., Chin S. N., Brotman B., Shulman R. W. Solvent/detergent-treated plasma: a virus-inactivated substitute for fresh frozen plasma. Blood, 1992, 79, 826-831.

92. Kouzmitcheva G.A., Petrenko V.A., Smith G.P. Identifying Diagnostic Peptides for Lyme Disease through Epitope Discovery. Clinical and diagnostic laboratory immunology, 2001, 8:1, 150-160.

93. Yu J., Smith G. Affinity maturation of phage-displayed peptide ligands. Methods Enzymol., 1996, 267, 3-27.

94. Lunder M., Bratkovic T., KreftS., B. Strukelj. Peptide inhibitor of pancreatic lipase selected by phage display using different elution strategies. Journal of Lipid Research, 2005, 46:7, 1512-1516.

95. Yu H., Dong X., Sun Y. An alternating elution strategy for screening high affinity peptides from a phage display peptide library. Biochem Eng J., 2000, 18(3): 169-175.

96. Cortese R., Monaci P., Luzzago A., Santini C., Bartoli F., Cortese I., Fortugno P., Galfre G., Nicosia A., Felici F. Selection of biologically active peptides by phage display of random peptide libraries. Curr. Opin. Biotechnol., 1996, 7, 616-621.

97. Маниатис Т., Фрич Э., Сэмбрук Дж. Методы генетической инженерии. Молекулярное клонирование, Изд-во Мир, Москва, 1984.

98. Thomas Stratmann, Angray S Kang. Cognate peptide-receptor ligand mapping by directed phage display. Proteome Science, 2005, 3:17.

99. Minenkova O., Amedeo De Tomassi, Francesca Bellintani, Paola Fortugno, Nicola Gargano, Franco Felici, Paolo Monaci. Colony Assay for Phage-Displayed Libraries. Analytical Biochemistry, 2000, 284, 412-415.

100. Guang Yang, Yaping Gao, Jie Dong, Chuan Liu, Yanning Xue, Ming Fan, Beifen Shen, Ningsheng Shao. A novel peptide screened by phage display can mimic TRAP antigen epitope against Staphylococcus aureus infections. J. Biol. Chem., 2005, 29, 27431-27435.

101. Novick RP, Ross HF, Projan SJ, Kornblum J, Kreiswirth B, Moghazeh S. Synthesis of staphylococcal virulence factors is controlled by a regulatory RNA molecule. EMBO J., 1993, 12,3967-3975.

102. Jin Gui, Terence Moyana, Jim Xiang. Selection of a Peptide with Affinity for the Tumor-Associated TAG72 Antigen from a Phage-Displayed Library. Biochemical and biophysical research communications, 1996, 218, 414-419.

103. Fawcett P. Т., Rose C. D., Gibney К. M. Comparative evaluation of adsorption with E. coli on ELISA tests for Lyme borreliosis. J. Rheumatol., 1995, 22, 684-688.

104. Seppala I. J., Kroneld R., Schauman K., Forsen К. O., Lassenius R. Diagnosis of Lyme borreliosis: non-specific serological reactions with Borrelia burgdorferi sonicate antigen caused by IgG2 antibodies. J. Med. Microbiol., 1994, 40, 293302.

105. Van Hoecke C, Fu D, De Grave D, Voet P, Lebacq E. Clinical and immunological assessment of a candidate Lyme disease vaccine in healthy adults: antibody persistence and effect of a booster dose at month 12. Vaccine, 1998, 16(17), 16881692.

106. Lowry F.D. Staphylococcus aureus infections. New Engl.J.Med., 1998, 339, 520-532.

107. Vieira-da-Motta O, Ribeiro PD, Dias da Silva W, Medina-Acosta E. RNAIII inhibiting peptide (RIP) inhibits agr-regulated toxin production. Peptides, 2001,22, 1621-1627.

108. Moe G. R., Granoff D. M. Molecular mimetics of Neisseria meningitidis serogroup B polysaccharide. Int. Rev. Immunol., 2001, 20, 201-220.

109. Moe G. R., Tan S., Granoff D. M. Molecular mimetics of polysaccharide epitopes as vaccine candidates for prevention of Neisseria meningitides serogroup B disease. FEMS Immunol. Med. Microbiol., 1999, 26, 209-226.

110. Gonzalez-Sapienza G., Cachau R. E. Identification of critical residues of an immunodominant region of Echinococcus granulosus antigen B. J. Biol. Chem., 2003,278,20179-20184.

111. Shawver L. K., Mann E., Elliger S. S., Dugger T. C., Arteaga C. L. Ligand-like effects induced by anti-c-erbB-2 antibodies do not correlate with and are not required for growth inhibition of human carcinoma cells. Cancer Res., 1994, 54, 1367-1373.

112. Pupa S. M., Menard S., Andreola S., Colnaghi M. I. Antibody response against the c-erbB-2 oncoprotein in breast carcinoma patients. Cancer Res., 1993, 53, 5864-5866.

113. Bei R., Masuelli L., Moriconi E., Visco V., Moretti A., Kraus M. H., Muraro R. Immune responses to all ErbB family receptors detectable in serum of cancer patients. Oncogene, 1999, 18,1267-1275.

114. Thor A., Ohuchi N., Szpak C., Johnston W., Schlom J. Distribution of oncofetal antigen tumor-associated glycoprotein-72 defined by monoclonal antibody B72.3. Cancer Res., 1986, 46, 3118-3124.

115. Nuti M., Teramoto Y., Mariani-Costantini R., Horan H., Schlom J. A monoclonal antibody (B72.3) defines patterns of distribution of a novel tumor-associated antigen in human mammary carcinoma cell populations. Int. J. Cancer, 1982, 29, 539-545.

116. Stramingnoni D., Bowen R., Atkinson В., Schlom J. Differential reactivity of monoclonal antibodies with human colon adenocarcinomas and adenomas. Int. J. Cancer, 1983, 31, 543-552.

117. Miraldi F., Nelson A., Kraly C., Ellery S. Diagnostic imaging of human neuroblastoma with radiolabeled antibody. Radiology, 1986, 161, 413-417.

118. Pastan I. Targeted therapy of cancer with recombinant immunotoxins. Biochim Biophys Acta., 1997, 1333(2), 1-6.

119. Jain R. Physiological barriers to delivery of monoclonal antibodies and other macromolecules in tumors. Cancer Res,, 1990, 50, 814-819.

120. Yokota T, Milenic DE, Whitlow M, Schlom J. Rapid tumor penetration of a single-chain Fv and comparison with other immunoglobulin forms. Cancer Res., 1992, 52, 3402-3408.

121. Rajotte D, Агар W, Hagerdom M, Koivunen E, Pasqualini R, Ruoslahti E. Molecular heterogeneity of the vascular endothelium revealed by in vivo phage display. J Clin Invest., 1998, 102(2), 430-437.

122. Некрасов Б.Г., Кувшинов В. H., Ушакова Т. А., Каледин В. И., Нико-лин В. П., Туманова О. Ю., Ильичев А. А., Сандахчиев JI. С. Опухоль-адресованный пептид // Приоретет 10.05.2005. Патент РФ 2265027, 2005.

123. Некрасов Б.Г., Кувшинов В. Н., Ушакова Т. А., Каледин В. И., Нико-лин В. П., Туманова О. Ю., Ильичев А. А., Сандахчиев JI. С. Опухоль-адресованный пептид // Приоретет 20.10.2005. Патент РФ 2273644, 2006.

124. Brian К. Kay, Alexei V. Kurakin, Robin Hyde-DeRuyscher. From peptides to drugs via phage display. DDT, 1998, 3:8, 370-378.

125. Delvin J.J., Pantaganiban L.C., Delvin P.E. Random peptide libraries: a source of specific protein binding molecules. Science, 1990, 249, 404-406.

126. Olbenburg K.R., Loganathan D., Goldstein I.J., Schultz P.G., Gallop M.A. Peptide ligands for a sugar-binding protein isolated from a random peptide library. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 1992, 89, 5393-5397.

127. Vertesy L., Oeding В., Bender R., Zepf K., Nesemann G. Tendamistat (Hoe-467), a tight binding a-amylase inhibitor from Streptomyces ten-dae. Isolation and biochemical properties. Eur. J. Biochem., 1984, 141, 505-572.

128. Pflugroth J.W., Wiegard G., Huber R., Vertesy L. Crystal structure determination, refinement and the molecular model of the alpha-amylase inhibitor Hoe-467A. J. Mol. Biol., 1986, 189, 383-386.

129. Kline A., Braun W., Wuthrich K. Studies by 1H nuclear magnetic resonance and distance geometry of the solution conformation, of the alpha-amylase inhibitor tendamistat. J. Mol. Biol., 1986, 189, 377-382.

130. Hofmann O., Vertesy L., Braunitzer G. The primary structure of the a-amylase inhibitor Z-2685 from Streptomyces parvullus FH-1641.Biol. Chem. Hoppe-Seyler, 1985,366, 1161-1168.

131. Bottger V., Peters L.-E., Micheel B. Identification of peptide mimotopes for the fluorescein hapten binding of monoclonal antibody B13-DE1. J. Mol. Recog-nit, 1999, 12, 191-197.

132. Sellrie F., Schenk J.A., Behrsing O., Bottger V., Micheel B. A competitive immunoassay to detect a hapten using an enzyme-labelled peptide mimotope as tracer. Journal of Immunological Methods, 2002, 261, 141-144.

133. Harris Shannon 1., Park Moon K., Nahm Moon H., Diamond Betty. Peptide mimic of phosphorylcholine, a dominant epitope found on streptococcus pneumoniae. Infection and immunity, 2000, 68, 5778-5784.

134. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinium thiocyanate-phenol-chlorophorm extraction. Anal .Biochem, 1987, 162, 156-159.

135. Остерман JI.А. Методы исследования белков и нуклеиновых кислот. Электрофорез и ультрацентрифугирование. М.: Наука, 1981.

136. Костянко М.В., Глушков А.Н. Способ получения конъюгата гаптен-белок. Приоритет 16.02.1998. Патент РФ 2141114.

137. Glushkov A.N., Kostyanko^-HVl.V., Chemo S.V., Vasilchenko I.L. Synthesis of Polycyclic Aromatic Hydrocarbon Protein Conjugates for Preparation and Immunoassay of Antibodies. Russian J.Immunology, 2002, 7, 41-46.

138. Глушков A.H., Костянко M.B., Черно C.B., Васильченко И.JI. Имму-ноферментный анализ антител к бенза.пирену. Эксперим. онкол., 1998, 20, 7476.

139. Glushkov A.N. et al. Immunological images of polycyclic aromatic hydrocarbons. Experimental oncology, 2006, 28, 93-176.

140. Скоупс P. Методы очистки белков, M., Мир, 1985.

141. Yamashita. N. et al. Anti-PAH monoclonal antibodies and cell lines producing the same. United State Patent № US 6,277,964 В1, 2001.

142. Morea V., Lesk Arthur M., Tramontano A. Antibody modeling: implications for engineering and desing. Methods, 2000, 20, 267-279.

143. Muckerheide A., Apple Raimond J., Pesce Amadeo J., Michale Gabriel J. Cationizatiom of protein antigens. I. Alteration of immunogenic properties. The Journal of Immunology, 1987, 138, 833-837.

144. Muckerheide A., Domen Patricia L., Michale Gabriel J. Cationizatiom of protein antigens. II. Alteration of regulatory properties. The Journal of Immunology, 1987, 138, 2800-2804.

145. Domen Patricia L., Muckerheide A., Michale Gabriel J. Cationizatiom of protein antigens. III. Abrogation of oral tolerance. The Journal of Immunology, 1987, 139,3195-3198.

146. Glushkov A.N. et al. Immunological images of polycyclic aromatic hydrocarbons. Experimental oncology, 2006, 28, 93-176.

147. Kohler G., Milstein C. Continuous cultures of fused cells secreting antibody of predefined specificity. Nature, 1975, 256,495-497.