Получение и оценка биологических свойств колицина E2 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 16.00.03, кандидат биологических наук Тихонов, Георгий Игоревич

• Тихонов, Георгий Игоревич
• кандидат биологических наук
• 2004

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Тихонов, Георгий Игоревич

ПЕРЕЧЕНЬ СОКРАЩЕНИЙ, УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ,

СИМВОЛОВ, ЕДИНИЦ И ТЕРМИНОВ.

ВВЕДЕНИЕ.

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

1.1. Микробиоценоз желудочно-кишечного тракта новорожденных телят.

1.2. Антиоксидантная система организма и способы ее регулирования.

1.3. Биопрепараты, применяемые для профилактики диареи телят.

1.4. Методы лечения телят при желудочно-кишечных болезнях.

1.5. Колицины - продукты микробного синтеза.

2. СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ.

2.1. Материалы и методы.

2.2.Результаты исследований.

2.2.1. Получение рекомбинантного штамма B.subtilis рВсо1Е2 -продуцента гибридного колицина Е2.

2.2.2. Получение гибридного колицина Е2.

2.2.3. Оценка биологических свойств колицина Е2.

2.2.4. Определение профилактической эффективности колицина Е при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

2.2.5. Оценка терапевтической эффективности колицина Е2 при болезнях новорожденных телят.

2.2.6. Сравнительная оценка эффективности колицина Е с другими биопрепаратами.

3. ЭКОНОМИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ ПРИМЕНЕНИЯ КОЛИЦИНА Е2.

4. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ.

5. ВЫВОДЫ.

6. СВЕДЕНИЯ О ПРАКТИЧЕСКОМ ИСПОЛЬЗОВАНИИ ПОЛУЧЕННЫХ НАУЧНЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ.ИЗ

7. РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Получение и оценка биологических свойств колицина E2»

Острые кишечные заболевания молодняка по широте распространения и охвату поголовья занимают ведущее место в патологии сельскохозяйственных животных. Отход молодняка в первые месяцы жизни (падеж, санитарный брак) в зависимости от уровня ведения животноводства достигает в среднем 10 - 30 % и более.

Практически повсеместно регистрируемая заболеваемость молодняка свидетельствует о том, что эти заболевания не случайны и возникают как следствие постоянно присутствующих в среде обитания животных неблагоприятных факторов, закономерно вызывающих патологические изменения в организме.

ОКЗ являются основными причинами гибели молодняка в первый месяц после рождения. Устойчивость телят к ОКЗ зависит от уровня факторов естественной резистентности организма новорожденных животных, активности колострального иммунитета, который находится в прямой зависимости от качества молозива и его своевременного получения новорожденным молодняком.

Исследованиями Воронина Е.С. с соавт. (1991) установлено, что молодняк крупного рогатого скота, в большинстве случаев, рождается с низкой резистентностью организма. У новорожденных животных с пониженой неспецифической реактивностью на фоне высокой обсемененности условно - патогенными микроорганизмами внешней среды, а зачастую и молозива, происходит инфицирование и опережающее заселение кишечника, условно -патогенными и патогенными микроорганизмами и, как следствие, возникают ОКЗ, в этиопатогенезе которых активно участвуют энтеробактерии.

Имеющиеся и широко используемые в настоящее время моновакцины против колибактериоза и сальмонеллеза для иммунизации животных не всегда эффективны, поскольку в этиологии диарей в большинстве случаев участвует ассоциация 3 - 5, а иногда и большего количества возбудителей, преимущественно из семейства энтеробактерий.

Существенную роль в лечении и предупреждении ОКЗ играют препараты, способствующие восстановлению нормальной микробной среды в кишечнике. К ним относятся пробиотики, изготовленные на основе лактоба-цилл и бифидобактерий, которые наряду с антогонистическим действием благоприятно влияют на пищеварение, способствуют лучшему усвоению корма, участвуют в биосинтезе витаминов группы В, ряда незаменимых аминокислот, бактериоцинов и др. (30, 38).

Переболевание в раннем возрасте ОКЗ, содержание в помещении животных с разным иммунологическим фоном, воздействие различных стрессов, приводит к развитию иммунодефицитного состояния, способствующего повышенной восприимчивости молодняка к различным ауто- и экзопатогенам, и в итоге к массовым респираторным болезням. В настоящее время известно 10-15 различных вирусных и бактериальных агентов и их ассоциаций, способных вызывать кишечные и респираторные болезни телят (25, 26).

Лечение желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных остается в настоящее время одной из актуальных проблем ветеринарной медицины. Широко применяемые с этой целью антибактериальные препараты, наряду с положительным воздействием на течение и форму заболевания, вызывают побочные эффекты: возникновение антибиотикоре-зистентных штаммов микроорганизмов, развитие дисбиотических состояний кишечника, аллергические реакции и др.

Одним из способов предупреждения развития антибиотикоустойчивых форм микроорганизмов является периодическая замена широко применяющихся антибиотиков новыми или редко применяющимися.

Однако получение новых групп антибактериальных препаратов на основе усложненных способов синтеза и новых технологий влечет за собой значительное повышение затрат на лечение.

В связи с этим интерес представляет разработка дешевых антибактериальных средств, не приводящих к развитию дисбиотических изменений в желудочно-кишечном тракте и не требующих коррекции нарушений микрофлоры кишечника биопрепаратами.

Новые возможности в реализации этого подхода открылись благодаря созданию полифункциональпого биопрепарата нового поколения - колицина Е2, обладающего антибактериальными, антиоксидантными и иммуномоду-лирующими свойствами (4, 7, 8).

В научных публикациях последних лет, по проблеме создания препаратов методами генной инженерии, появляется большое количество информации, касающейся получения препаратов, имеющих бактериальную и вирусную природу и способных воздействовать благотворно одновременно на несколько систем организма.

Нормальная жизнедеятельность организма невозможна без развитой многоступенчатой системы регуляции и координации различных его функций, осуществляемых специальными веществами - биорегуляторами. Это осуществляется с помощью витаминов, гормонов, нейромедиаторов, которые способны повышать защитно-приспособительные возможности организма. Среди них видное место занимают противоокислительные вещества или антиок-сиданты.

Антиоксиданты обеспечивают необходимую активность антиокислительной системы - универсальной регулирующей системы организма, контролирующей уровень свободнорадикальных реакций окисления и препятствующей накоплению продуктов окисления (42, 71,91, 104, 126, 128).

Многочисленные работы последних лет показывают, что состояние анти-оксидантной недостаточности (так называемая, свободнорадикальная патология или синдром пероксидации) как неспецифическая патофизиологическая реакция способствует развитию различных заболеваний (52, 114, 120, 123).

В настоящее время в связи с распространением в животноводстве индустриальных технологий наблюдается повышенная потребность в антиокси-дантах. Это обусловлено целым рядом причин:

- инфекционные, желудочно-кишечные, респираторные заболевания;

- вакцинации животных против вирусных заболеваний;

- недостаток и плохое качество кормов, наличие в них нитритов, нитратов, солей тяжелых металлов;

- низкое содержание в кормах в весенний период естественных антиоксидантов - каротина, витаминов А, Е, С и др.;

- низкая температура, повышенная влажность, недостаток света в помещениях;

- гиподинамия в зимний период;

- физиологические и технологические стрессы - роды, перемещения, перестановки и др.

В настоящее время наибольшее распространение в животноводстве получили обладающие антиоксидантпыми свойствами витамины А, Е, С, микроэлемент селен, органические соединения деполен, селенопиран и другие (10, 11, 49, 91). Из новых препаратов хорошо себя зарекомендовал амбиол (41).

Бурное развитие биологии в последние годы привело к раскрытию новых закономерностей окислительно-восстановительных реакций в организме млекопитающих, роли антиоксидантов в этих процессах, созданию новых антиоксидантов широкого спектра действия, полученных методом генной инженерии.

На базе лаборатории ветеринарной иммунологии ГУ Зональный НИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого (г. Киров) в 2000 г. был сконструирован генно-инженерными методами гибридный штамм Bacillus subtilis pBColE2 -продуцент гибридного колицина Е2, патент РФ на изобретение №2188233 получен 27 августа 2002 года (5).

Ряд авторов (3, 4, 6, 7, 8) в своих исследованиях показали, что гибридный колицин Е2 обладает оригинальными биологическиими свойствами.

Таким образом, изучение биологических свойств гибридного колицина Е2 показало возможность применения его как ветеринарного препарата, для профилактики и лечения инфекционных заболеваний сельскохозяйственных животных. Тем не менее, возникла настоятельная необходимость более детального изучения механизма действия колицина Е2 при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят и широкого применения его в ветеринарной практике.

Цель и задачи исследований

Целью настоящей работы являлось усовершенствование методов получения и очистки колицина Е2 и оценка его лечебно-профилактической эффективности при желудочно-кишечных болезнях телят.

Для решения были поставлены следующие задачи:

1. Разработать методы получения и очистки колицина Е2.

2. Определить биологические свойства колицина Е2 in vivo и in vitro.

3. Изучить антибактериальную активность колицина Е2 в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов.

4. Оценить лечебно-профилактическую эффективность колицина Е2 при желудочно-кишечных болезнях телят.

5. Разработать рекомендации по применению колицина Е2.

Научная новизна.

Получен рекомбинантный штамм B.subtilis pBcoIE2 - продуцент гибридного колицина Е2.

В результате проведенных исследований была изучена трансформация структурного гена Е. coli К12 в клетки бактерии В. subtilis. Выло установлено, что миниклетки, которые образуются при асимметричном делении мутантов Е. coli К12, не содержат геномную ДНК, но могут содержать плазмидную ДНК родительской клетки. При этом Col-плазмиды транслируются с образованием полипептидов.

Установлено, что колицин Е2 состоит из двух полипептидных субъединиц - собственно бактериоцина с молекулярной массой 68 кДа и белка иммуно-сти с молекулярной массой 10 кДа. Колицин Е2 проникал через клеточные мембраны бактерий матричного штамма Е. coli К12, а также штаммов Pseu-domonas, Salmonella, Haemophilus, Streptoccus и вызывал эндонуклеазную деградацию бактериальной ДНК, т.е. не отличался видовой специфичностью, при общей высокой бактерицидности.

Исследовано действие гибридного колицина Е2 на процесс инфицирования клеток культуры ПЭК герпес вируса третьего типа (штамм Румын) возбудителя инфекционного ринотрахеита крупного рогатого скота.

Впервые проведена комплексная оценка возможности использования колицина Е2 в ветеринарной практике в качестве профилактического и терапевтического средства при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят.

Учитывая, что Колицин Е2 является эффективным антибактериальным препаратом в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов, предложено применение Колицина Е2 в комплексе с симптоматическими средствами лечения.

Практическая и теоретическая значимость работы.

Сконструирован гибридный штамм Bacillus subtilis pBColE2 - продуцент колицина Е2, обладающего антибактериальными и антиоксидантными свойствами, который депонирован и зарегистрирован во Всероссийской коллекции микроорганизмов ГУ Зонального НИИСХ Северо-Востока им. Н.В. Рудницкого под номером В-771.

Показано, что колицин Е2 обладает высокой лечебно-профилактической эффективностью при острых желудочно-кишечных болезнях молодняка крупного рогатого скота.

Установлено, что эффективной профилактической дозой колицина Е2 для телят является 20 мг на 10 кг живой массы при внутримышечном его применении в течение 4-6 дней. Терапевтический эффект для больных новорожденных телят проявляется в дозе 20 мг на 10 кг веса при внутримышечном его применении в течение 6 дней.

Полученный колицин Е2 зарегистрирован Ветфармбиосоветом Департамента ветеринарии Минсельхозпрода РФ (протокол №3 от 06.06.2000 г. 001157-ОП).

Разработана схема применения препарата при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях сельскохозяйственных и домашних животных.

Составлено и утверждено временное наставление по применению коли-цина Е2 в ветеринарии (в порядке широких производственных испытаний 2001-2004 гг): Одобрено Ветфармбиосоветом Департ. ветеринарии Минсель-хоза РФ (протокол №3 от 06.06.2000 г.) ООП57-ОП. Утв. Департ. ветеринарии Минсельхоза России 12.03.2001 за№ 13-4-03/0039(35).

Внедрена в производство схема применения колицина Е2 с профилактической и терапевтической целью.

Результаты изучения используются практическими ветеринарными врачами Российской Федерации при лечении и профилактике болезней животных.

Подготовлен и утвержден комплект нормативно-технической документации на препарат колицин Е2.

Разработаны практические рекомендации на Колицин Е2.

Основные положения, выносимые на защиту:

1. Результаты исследования генетической цепи по конструированию штамма-продуцента колицина Е2, синтеза и очистки колицина Е2.

2. Результаты изучения биологических свойств препарата.

3. Результаты изучения лечебно-профилактического действия колицина Е2 при желудочно-кишечных заболеваниях телят.

Апробация работы: основные положения диссертации были доложены и обсуждены: на международных конгрессах:

-IX международный ветеринарный конгресс (Москва, 2001);

- XI международный ветеринарный конгресса (Москва, 2003); на международных конференциях:

- международная научно-практическая конференция «Нейроинфекции: бешенство, губкообразная энцефалопатия крупного рогатого скота, Крейтц-фелда - Якоба и другие прионные болезни; листериоз, болезнь Ауэски, болезнь Тешена» (Покров, 2001).

- международная научная конференция «Актуальные проблемы развития животноводства» (Львов, 2003); на научно-практических конференциях:

- научно-практическая конференция «Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспективы» (Киров, 2001).

Публикации. По материалам диссертационной работы опубликовано 8 научных работ в сборниках международных и научно-практических конференций и конгрессов и в научных журналах.

Объем и структура диссертации. Основной текст работы изложен на 128 страницах машинописного текста. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, собственных исследований, обсуждения полученных результатов, выводов, практических предложений, библиографического списка (103 отечественных и 35 зарубежных авторов), приложений. Диссертация иллюстрирована 33 таблицами и рисунками.

Заключение диссертации по теме «Ветеринарная эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология», Тихонов, Георгий Игоревич

ВЫВОДОВ

1. В связи с высокой антибиотикорезистентностью выделяемых от новорожденных телят микроорганизмов для лечения и профилактики желудочно-кишечных болезней животных необходимо применять препарат колицин Е2.

2. С целыо профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят колицин Е2 применять сразу после рождения в дозе 20 мг на 10 кг живой массы телят внутримышечно, 1 раз в сутки в течение 4-6 дней.

3. С лечебной целью при желудочно-кишечных болезнях новорожденных телят колицин Е2 необходимо применять при первых появлениях клинических признаков заболевания в дозе 20 мг на 10 кг живой массы телят внутримышечно, 1 раз в сутки в течение 6 дней.

4. Учитывая, что колицин Е2 является эффективным антибактериальным препаратом в отношении патогенных и условно-патогенных микроорганизмов рекомендуется применять колицин Е2 в комплексе с симптоматическими средствами лечения.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Тихонов, Георгий Игоревич, 2004 год

1. Агаджанова Л.М., Мокацяп Р.Г., Акунц К.Б. Окислительный стресс в патогенезе хламидийной инфекции //Биоантиоксиданты:Тез. докл. V Меж-дуи. конф.-М.: РАН, 1988.-С.193.

2. Аввакумова Н.П., Агапова А.И. Антиоксидантная активность гумино-вых веществ // Биоантиоксиданты:Тез. докл. VI Междун. конф.-М.: РАН, 2002.-С.10.

3. Азямов М.А. Изучение действия колицина Е2 на организм живот-ных//Научный журнал Северо-Восточного научно-методического центра РАСХН Аграрная наука Евро-Северо-Востока. 2000. -№1. -С.93-94.

4. Азямов М.А. Применение препарата Колицин Е2 в ветеринарии //Сельскохозяйственная микробиология в XIX-XXI веках: Тезисы всероссийской конференции, 14-19 июня 2001 года. Санкт-Петербург.: Луч, 2001. -С.85.

5. Азямов М.А. Штамм бактерий В.subtilis pbColE2 продуцент гибридного колицина Е2, используемый для получения ветеринарного препарата. / Патент №2188233 от 27.08.2002.

6. Азямов М.А., Тихонов Г.И. Антиоксидантный препарат нового поколения колицин Е2 // Биотехнология на рубеже веков: проблемы и перспек-тивы:Мат. научн.-практич. конф. 22-23 мая 2001 г.-Киров.: ВГТУ, 2001.-С.4-5.

7. Анохин Б.М. Гастроэнтерология телят. Воронеж: Мир, 1985 г.-123с.

8. Барабой В.А. Механизмы стресса и перекисное окисление липи-дов//Успехи современной биологии.-М.:Наука, 1991.-Т.111.-Вып.6.-С.923-931.

9. Бахмут Л.Н., Вагенлейтнер А.В., Кононов Г.А. и др. Диагностика и профилактика эмбриональной смертности у коров//Сельскохозяйственная биология.-1994.-№4.-С.83-87.

10. Белов А.Д., Киршин В.А., Лысенко Н.П., Пак В.В. /Радиобиология/; Под ред. А.Д. Белова. М.: Колос, 1999.

11. Биоантиокислители.-М.: Наука, 1975.-268 с.

12. Башкатова В.Г. Роль окислительного стресса в механизмах нейроток-сичности, вызываемой лекарственной зависимостью: возможные пути коррекции. Биоаптиоксиданты: Тез. докл. VI Междун. конф.-М.: РАН, 2002.-С.62-63.

13. Биоантиоксиданты в лучевом поражении и злокачественном рос-те/Бурлакова Е.Б., Алесенко А.В., Молочкина Е.М. и др.-М.:Наука, 1975.-214 с.

14. Биопрепараты. Промышленный регламент на производство колицина Е2. Утв. 18.01.2002г. Директором ГУ зональный НИИ сельского хозяйства Северо-Востока им.Н.В.Рудницкого.

15. Биофизика рака/Эмануэль Н.М., Кавецкий Р.Е., Тарусов Б.Н., Сидорик Е.П.-Киев:Наукова думка, 1976.-296 с.

16. Блохина И.Н., Воронин Е.С., Залесских Н.В. и др. «Методические указания по выделению и идентификации условно-патогенных энтеробактерий и сальмонелл при острых кишечных заболеваниях молодняка сельскохозяйственных животных» М.: МСХ, 1990. с.37.

17. Бобырев В.Н., Почерняева В.Ф., Стародубцев С.Г. и др. Специфичность систем антиоксидантной защиты органов и тканей основа дифференцированной фармакотерапии антиоксидантами//Экспериментальпая и клиническая фармакология.-1994.-Т.57.-№ 1 .-С.47-54.

18. Бондаренко В.М. и др. Дисбиоз. Современные особенности профилактики и лечения. М.: Мир, 1995. - с.20.

19. Воронин A.M. Биология плазмид, Успехи микробиологии. М.: Колос, 1983. с.143.

20. Брода, П. Плазмиды. М.: Мир, 1982. с.270.

21. Вильшанская Ф.Л. Микрофлора кишечника и методы выявления дисбактериоза. Медицинская сестра. 1987. -№10. С. 12-16.

22. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное окисление липидов в биологических мембранах. М.: Наука, 1972.-252 с.

23. Воронин Е.С., Ставцева Л.Я., Девришов Д.А., Сравнительная характеристика условно патогенных бактерий, выделенных от больных детей и те-лят.//Современные аспекты профилактики инфекц. болезней молодняка.-Кишинев.: Наукова думка, 1989. с 19-24.

24. Воронин Е.С., Девришов Д.А., Ставцева Л.Я., Шишков В.П., Бедоева З.М., Грязнева Т.Н. Профилактика и лечение диарей телят с использованием неспецифических препаратов и бактериофитов.// Доклады ВАСХНИЛ- 1990. №11. с 47-50.

25. Воскресенский О.Н. Витамины-антиоксиданты и системность биологического ингибирования перекисного окисления липидов и биополимеров//Биофизические и физико-химические исследования в витаминологии.-М.: Наука, 1981.-С.6-9.

26. Гаффаров Х.З., Иванов А.В., Непоклонов Е.А., Равилов А.З. Моно- и смешанные инфекционные диареи новорожденных телят и поросят.// Казань.: ФЭН, 2002. Сс.101-151, 441-466, 475-530.

27. Голубева И.В., Киселева В.А. и др. /Энтеробактерии. Руководство для врачей /; Под ред. В.И.Покровского. М.: Медицина, 1985.

28. Грязнева Т.Н., Павлова И.Б., Воронин Е.С., Панитков М.А. Биологические средства коррекции микробиоценоза кишечника телят // Ветеринария. 1991.-№7.-С. 23-24.

29. Гуляева Н.В. Роль окислительного стресса в механизмах патогенеза нейродегенеративных заболеваний//Биоантиоксиданты:Тез. докл. V Междун. конф.-М.: РАН, 1988.-С.13.

30. Гуськов A.M., Дарий.Г.Е., Пузына Г.И. и др. Стресс-протекторный эффект амбиола //Биоантиоксидант:Тез.докл. 4 конф. -М., РАН, 1993.-Т.2.-С.100.

31. Двинская Л.М., Шубин А.А. Использование антиоксидантов в живот-новодстве.-Л.: Агропромиздат, 1986.-160 с.

32. Девришов Д.А., Воронин Е.С., Шишков В.П. -Тезисы докл. Всесоюзн. научи.-техн. конф. Применение биотехнологий в животноводстве, растениеводстве и вет. медицине. М.: МВА, -1988.- С. 102-103.

33. Девришов Д.А., Воронин Е.С. Профилактика и лечение диареи телят лактобактерином// Межвузовский сборник./ Инфекционные болезни теляг.-Кишинев.: Наукова думка,- 1988. с 23-25.

34. Девришов Д.А. Разработка и изучение свойств иммуномодуляторов и биологических препаратов для профилактики и лечения болезней молодняка сельскозяйственных животных //Автореф. дисс.докт. биол. наук.- М.: МГАВМиБ им. К.И. Скрябина.- 2000.- 53 с.

35. Девришов Д.А., Воронин Е.С. Профилактика и лечение диареи телят полифагом// Межвузовский сборник конф./ Инфекционные болезни телят.-Кишинев.: Наукова думка. 1988. с 9-12.

36. Девришов Д.А. Этиология и профилактика желудочно кишечных заболеваний телят// Вестник с/х науки.-1989-№9 с. 17.

37. Девришов Д.А., Воронин Е.С., Ставцева Л.Я., Грязнева Т.Н. Изучение бактериобиоценоза причины острых желудочно - кишечных заболеваний молодняка животных .// Вестник с/х науки.- 1991.- №2. с 43-46

38. Домнина Н.С., Комарова Е.А. Биоантиоксиданты, свойства и применение в животноводстве//Архив ветеринарных наук.-Санкт-Петербург, Ломоносов, 1998.-Т1 (48).-С.67-90.

39. Дроговоз С.М., Слышков В.В., Сальникова С.И. Эффективность окси-коричных кислот при токсических поражениях печени //Экспериментальная и клиническая фармакология.-1993.-Т.56.-№2.-С.55-58.

40. Егоров Е.С., Олескин А.В., Самуилов В.Д., «Биотехнология. Проблемы и перспективы» М., Высшая школа, 1987. -139 с.

41. Журавлев А.И. Антиокислители // Большая медицинская энциклопе-дия.-3-е изд.-1975.-Т.2.-С.ЗЗ-35.

42. ЖуравлевА.И. Биоантиокислители в животном организ-ме//Биоантиокислители.-М.: Наука, 1975.-С. 19-30.

43. Журавлев А.И. Развитие идей Б.Н. Тарусова о роли цепных процессов в биологии//Биоантиокислители в регуляции метаболизма в норме и патологии. М.: Наука, 1982.-C.3-37.

44. Запруднов A.M., Мазанкова Л.Н. Микробная флора кишечника и про-биотики. М.: Колос. 1999.-204с.

45. Изачик Ю.Л., Корсунский А.А. Дисбактериоз кишечника. Медицинская помощь. 1993. -№2. -С.58-60.

46. Интизаров М.М. «Микрофлора тела животных» М.: МВА, 1989.-20с.

47. Исследование синтетических и природных антиоксидантов in vitro и in vivo: Сб. науч. ст. института химической физики им. Н.Н. Семенова.-М.: Наука, 1992.-110 с.

48. Клонирование ДНК. Методы. Под ред. Д. Гловера. М., Мир, 1988.-534с.

49. Конопаткин А.А., Бакулов И.А. и дрУ Эпизоотология и инфекционные болезни сельскохозяйственных животных /; Под ред. А.А. Конопаткина. — М.: Колос, 1984.-324с.

50. Коровина Н.А., Вихерева В.Н., Захарова И.Н. и др. Профилактика и коррекция нарушений микробиоциноза кишечника у детей раннего возраста /Медицина.- № 4.- 1996.- С. 28-34.

51. Коршунов В.М., Володин Н.Н., Ефимов Б.А. и др. Микроэкология желудочно-кишечного тракта. Коррекция микрофлоры при дисбактериозах кишечника. М.: Мир, 1999.- 287с.

52. Коршунов В.М., Смеянов В.В., Ефимов Б.А. Рациональные подходы к проблеме коррекции микрофлоры кишечника. Вестн. РАМН. 1996. №2. С. 60-65.

53. Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии. М.: Колос-2001.-314с.

54. Куваева И.Б., Ладодо К.С. Микроэкологические нарушения у детей.-М.: Медицина.- 1996.- 239 с.

55. Куриленко А.Н., Крупальник В.Л. Инфекционные болезни молодняка сельскохозяйственных животных. М.: Колос, 2000.-275с.

56. Лившиц В.А. Методы молекулярной генетики и генной инжене-рии.//Новосибирск. Наука. - 1990. - СС.7-10, 39-44.

57. Лившиц В.А., Чеснокова В.П., Алешин В.В. Штамм бактерий E.coli М17/р Colap, используемый для получения пробиотического препарата. Патент №2144954 от 27.01.2000.

58. Микробиологическая диагностика дисбактериоза кишечника и его коррекция при помощи бактерийных препаратов "Ором" и "Бифидумбакте-рин" /Гариб Ф.Ю., Нарбаева И.Э., Бектемиров A.M. Т. и др. // Методич. ре-коменд., Ташкент.:Прамос. - 1994. - с. 13.

59. Негреску Е.В., Лебедев А.В., Балденков Г.Н. и др. Анитоксиданты, перекисное окисление липидов и рецепторозависимое увеличение Са2+ в тромбоцитах человека//Вопр. мед. химии.-1992.-Т.38.-№1.-С.36-39.

60. Никитин И.Н., Воскобойник В.Ф., Шайхаманов М.Х. Организация и экономика ветеринарного дела. М.: Колос.- 1996.-364с.

61. Определитель бактерий Берджи. Под ред. Дж. Хоулта, Н.Крига, П.Спита, Дж.Стейли, С.Уильямса (9-е издание в 2-х томах). Перевод с английского под ред. Академика РАН Г.А. Заварзина, М.: Мир; 1997.

62. Организация и экономика ветеринарного дела. Практикум. Под ред. Никитина И.Н., М.: Колос, 1998.

63. Панин А.С., Серых Н.Е. и др. «Пробиотические препараты в ветеринарии» Ветинформ.- 1993.-№2.-С.12-15.

64. Парфенов А.И. Микробная флора кишечника и дисбактериоз /Русский медицинский журнал.- № 6.- 1998.- С. 23-29.

65. Патологическая физиология/Под ред. Адо А.Д., Адо A.M., Пыцкий В.И. и др.-М.: Триада-Х, 2000.-574 с.

66. Перекисное окисление и стресс/Барабой В.А., Брехман И.И., Голотин В.Г., Кудряшов Ю.Б.-СПб.:Наука, 1992.-435с.

67. Перетц М.Г. «Значение нормальной микрофлоры для организма человека и животных»-М.: Колос, 1995.-387с.

68. Петренко Ю.М. Перекисное окисление липидов в биомембра-нах//М.:Мир, 1981, №1, с.151.

69. Плазмиды. Методы. Под ред. К. Харди.М.: Мир, 1989.-267с.

70. Полушин Г. В., Старченков С.В., Щербаков Г. Г. Лечение и профилактика новорожденных телят при диспепсии. СПб: ГИОРД, 1999.-185с.

71. Придыбайло Н.Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных и птиц. Профилактика и лечение их иммуностимуляторами. М.: ВАСХ-НИЛ, 1991.-43 с.

72. Роль фенольных антиоксидантов в повышении устойчивости органических систем к свободнорадикальному окислению: Аналитический обзор/Сорокина И.В., Крысин А.П., Хлебникова Т.Б. и др.-Новосибирск.: Сиб. отд. РАН, 1997.-68 с.

73. Самуйленко А.Я., Рубан Е.А. Основы технологии производства ветеринарных биологических препаратов.- М.: ВНИТИБП.- Т. I, Т. П.- 2000.- 781 с.

74. Сейфулла Р.Д., Борисова И.Г. Проблемы фармакологии антиоксидан-тов//Фармакология и токсикология.-1990.-T.53.-№6.-C.3-10.

75. Скородумов Д.И., Сидоров М.А., Федоров В.Б. Определитель зоопа-тогенных микроорганизмов. М.: Колос, 1995.-294с.

76. Стальная И.Д. Метод определения диеновых конъюгаций ненасыщенных жирных кислот//Современные методы в биохимии/Под. ред. В.I I. Орехо-вича.-М.: Медицина, 1977.-С.63-64.

77. Сюрин В.Н., Самуйленко А.Я., Соловьев Б.В. и др. Вирусные болезни животных.- М.:ВНИТИБП.- 1998.- 937 С.

78. Тараканов М.А. «Механизм действия пробиотиков на микрофлору пищеварительного тракта и организм животных» Ветеринария. 2000. -№5.С25-26.

79. Технические условия на препарат колицин Е2. ТУ 9337-010-0000806401. 2001.-11с. Утверждены 12.03.2001г. Департаментом ветеринарии Мин-сел ьхоза РФ

80. Трещанина Н.А., Серых М.М., Фролов Ю.П. «Выделение чистой культуры бактерий//Изучение свойств выделенных штаммов//Техника микробиологического исследования» Самараю: Восход, 1997.-76с.

81. Тутов И.К., Ситьков В.И. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов.- Ставрополь.- ГСХА.- 1997.- 253 с.

82. Уголев А. М., Баженов А. М., Щербаков Г.Г. Рекомендации по профилактике острых желудочно-кишечных болезней у новорожденных телят. Л.: Парус, 1982.-35с.

83. Физиология сельскохозяйственных животпых/Под ред. Голикова А.Н. -3-е изд., испр. и доп.-М.: ВО Агропромиздат, 1991.-432 с.

84. Чахаева О.В. Гнотобиология и микрофлора организма "хозяина" и ан-тибиотикотерапия. Антибиотики и медбиотехнология. 1987. -Т.32. -№3. -С. 170.

85. Шевелуха B.C., Калашникова Е.А., Воронин Е.С. и др. Сельскохозяйственная биотехнология.- М.: Высшая школа.- 2003.- 469 с.

86. Шендеров БА. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Т. 1; Микрофлора человека и животных и ее функции. М.:ГРАНТЬ, 1998:288.

87. Эмануэль Н.М. Антиоксиданты в пролонгировании жизни//Биология старения.-Л.:Наука, 1982.-С.569-585.

88. Эмануэль Н.М., Заиков Г.Е., Крицман В.А. Цепные реакции.-М.: Наука, 1989.-335 с.

89. Abdel Samee A.M. Using some antibionic and probiotics for alleviating heat stress on growing and docrabbits in Egypt // Word Rabit Sc., - 1995. - Vol. -3, - № 3, p. - 107-111.

90. Ames B.N. et al. Carcinogens are mutagens: a simple test sistem combining liver homogenates for activation and bacteria for detection. Proc.Nat.Acad.Sci. USA; 1973,V.70,№8, P.2281-2285.

91. Ames B.N.,Lee F.D.,Durston W.E. An imroved bacterial test system for the detection and classification of mutagens and carcino-gens.Proc.,Nat.,Acad.Sci.USA, 1973, V.70, P.782-786.

92. Arneborn P., Biberfeld G. T-lymphocyte subpopulation in relationn to in unosupression in measles. Infect. Immun., 1983, V.39, P.29.

93. Auroma O.I., Halliwell В., Gajewski E., Dizdaroglu M. Copper-ion-dependent damage to the bases in DNA in the presence of hydrogen perox-ide//Biochem. J.-1991 .-№273 .-P.601 -604.

94. Bach J.F. The use of regulatory biological products to manipulate immune responses. Congress Immunologi., Paris, July, 1980. P.80.

95. Badet M.T., Chateaureynud P., Mayer G. Immunitary relations bet ween mother and emryo during gestation. A comparative atudy in lower and higher vertebrates. Dev. and Сотр. Immunal., 1983, 7, № 4, P.731-734.

96. Bailey M.E. Inhibition of warmed-over flavor with emphasis on Maillard reaction products//Food Tecnology.-1988.-Vol.42.-№6.-P. 123-126.

97. Bovcris A. Mitochondrial production of superoxide radical and hydrogen peroxide//Adv. Exp. Med. Biol.-1977.-№78.-P.67-82.

98. Dean R.T., Thomas S.M., Carner A. Free-radical-mediated fragmentation of monoamine oxidase in the mitochondrial membrane. Role of lipid radi-cals//Biochem J.-1986.-№240.-P.489-494.

99. Del-Maestro R.F. An approach to free radicals in medicine and biol-ogy//Acta. Physiol. Scand. Suppl.-1980.-№492.-P153-167.

100. Demopoulos Harry B. Control of free radicals in biologic systems//Fed. Proc.-1973 .-V.32.-№8.-P. 1903-1908.

101. Demopoulos Harry B. The basis of free radical pathology//Fed. Proc.-1973 .-V.32.-№8.-P. 1859-1861.

102. DiMascio P., Murphy M.E., Sies H. Antioxidant defence systems: the role of carotenoids, tocopherols, and thiols//AM J. Clin. Nutr.-1991.-№53.-P. 19452000.

103. Friedman D.R., Halbert S.P. Mixed bacterial infections in relation to antibiotic activities. J.Immunol. -1987. -№84. P. 11-19.

104. Guemouri L., Artur Y., Herbeth В., at al. Biological variability of superoxide dismutase, glutathione peroxidase and catalase in blood//Clin Chem.-1991.-№37.-P. 1932-1937.

105. Gutterige J.M.C. The role of superoxide and hydroxyl radicals in phospholipid peroxidation catalyzed by iron salts//FEBS Lett.-1982.-№152(2).-P.454-458.

106. Halliwell B. Drug antioxidant effects//Drugs.-1991.-№ 42 (4).-P.569-605.

107. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine.-England, Oxford: Clarendon Press, 1985.-P.250-263.

108. Halliwell В., Gutteridge J.M.C. Free radicals in biology and medicine.-England, Oxford: Clarendon Press, 1995.

109. Hicks R.B. Effect of nutrition, medical treatments and management practices on health and performance of newly-received stocker cattle. :StiIIwater.-2002.-P.21-37.

110. Jacobson R.H. Validation of serological assays for diagnosis of infectious diseases. Rev. of Science and Technology, OIE, Paris 1998. 17(2): 469-486 (English version)

111. Lavelle F., Micheleso A.M., Dimitrijevic L. Biological protection by superoxide dismutase//Biophys. Res. Commun.-2001.-№55.-P.350-357.

112. Lee R.W., Stuart R.L., Parryman K.R., Ridenour K.W. Effect of vitamin supplementation on the performance of stessed beef calves//J. Anim. Sci.-l995.-№61.-P.425.

113. Logani M.K., Davies R.E. Lipid oxidation: biologic effect and antioxi-dants//Lipids.-1980.-V. 15.-№6.-P.485-495.

114. McDonough P.L. and al. Salmonella enterica infections: an emerging infectious disease.//J.Clin.Microbiol. 1999. - 37: 2418-2427.

115. Peo E.R. and al. Colicins are they here to stay.// Nebraska Vet. Report. -1984, EC 84. P.24-25.

116. Rivas A.L. and al. Relations between oraly-administered colostrum derived nutrients and bovine leukocyte populations. (1999) 38th Ann National Council, Arlington, VA; 215-217

117. Roth J.A. Virulence Mechanisms of Bacterial Pathojens.// ASM, Washington, DC. 1988. P.50-52.

118. Shin S.J. Seminar in bovine bacterial infectious diseases in Shong nam Vet Coll. Korea (1998). 36-41

119. Skvirsky R., Reginald S., Shen X. Plasmids. J. Bacteriology 1995, Now, p. 6153-6159.

120. Southorn P.A., Powis G. Free radicals in medicine. Chemical nature and biologic reactions//Mayo. Clin. Proc.-1988.-№63.-P.381-389.

121. W.R. Jarvis, The epidemiology of colonization, Infection Control and Nosocomial Colonization 1996; 17:47-52.

122. Yamada Y., Yamada M., Nakazawa A. The methods studies of colicins. J. Bacteriology 1995, Now, p. 6064-6068.

123. Youngman P., Zuber P., Perkins J., Sandman K., Igo M., Losisk R. J. Colicins. Science, 1985, p. 285-291.