Оценка вариабельности ДНК-маркеров в каллусной ткани пшеницы (Triticum aestivum L.) после криосохранения тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.05, кандидат биологических наук Соловьева, Александра Ивановна

• Соловьева, Александра Ивановна
• кандидат биологических наук
• 2011

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Соловьева, Александра Ивановна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Криосохранение тканей и органов Роасеае

1.1.1. Объекты криосохранения

1.1.2. Физиологическое состояние растительного материала

1.1.3. Подготовка растительного материала к замораживанию 10 1.1.4 Защита культуры in vitro с помощью криопротекторов

1.1.5. Дегидратация

1.1.6. Инкапсуляция

1.1.7. Методы замораживания

1.1.8. Оттаивание

1.1.9. Отмывание растительного материала от криозащитных растворов

1.1.10. Восстановление роста

1.1.11. Частота восстановления роста растительного материала

Т. aestivum после различных протоколов криосохранения

1.2. Стабильность растительного материала после криосохранения

1.2.1. Фенотипические изменения

1.2.2. Вариабельность тканей и органов растений на биохимическом уровне

1.2.3. Стабильность растительного материала на цитологическом уровне

1.2.4. Вариабельность последовательностей ДНК

1.2.5. Тип сохраняемой ткани и генетическая вариабельность

1.2.6. Влияние протокола криосохранения на изменчивость растительного материала

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Объект исследования

2.2. Молекулярный анализ ДНК 37 ! 2.3. Получение и культивирование каллусных тканей Т. aestivum

2.4. Регенерация и культивирование растений

2.5. Получение самоопыленных линий

2.6. Криосохранение каллусов

2.7. Оценка восстановления каллусных тканей после отдельных стадий криосохранения

2.8. Определение содержания воды

2.9. Оценка способности каллусных тканей к морфогенезу

2.10. Статистическая обработка данных

2.11. Анализ ДНК-фрагмента

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Характеристика объекта и разработка условий исследования

3.1.1. Выбор и характеристика праймеров

3.1.2. Оценка генетической однородности растений трех сортов 50 Т. аеяНуит

3.1.3. Выбор объекта исследования

3.1.4. Криосохранение каллусов Т. аеьг^ит

3.2. Исследование стабильности растительного материала после криосохранения методом дегидратации

3.2.1. Первая серия опытов

3.2.2. Вторая серия опытов

3.2.3. Уровень изменчивости растительного материала Т. аеяНуит после отдельных этапов криосохранения методом дегидратации

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка вариабельности ДНК-маркеров в каллусной ткани пшеницы (Triticum aestivum L.) после криосохранения»

В настоящее время в качестве самого надежного способа долговременного сохранения генетических ресурсов рассматривается хранение культивируемых тканей растений при температуре жидкого азота (-196°С). Криогенное хранение позволяет исключить вероятность потери ценных образцов и сократить материальные затраты на поддержание коллекций (Engelmann, 2004; Pañis, Lambardi, 2005).

Криосохранение тканей растений, культивируемых in vitro, включает несколько стадий: введение в культуру, подготовку к замораживанию, замораживание, криогенное хранение, оттаивание, восстановление роста и регенерацию растений. Существует вероятность того, что каждый из перечисленных этапов может оказывать влияние на генетическую стабильность растительного материала, поскольку из-за воздействия физических, химических и физиологических факторов живые клетки могут находиться в состоянии стресса и в результате этого в их геноме возникать различные отклонения.

Данные о сохранении стабильности генома культивируемых тканей растений после процедуры криосохранения довольно противоречивы. Во многих работах показана генетическая стабильность объектов после криосохранения выполненного с помощью целого ряда методик (Harding, 2004; Pañis, Lambardi, 2005). Многие ученые сообщали о том, что при исследовании образцов после хранения в жидком азоте не было обнаружено изменений на различных уровнях организации (Harding, 2004; Pañis, Lambardi, 2005). Однако в ряде исследований после полной процедуры криосохранения были выявлены изменения последовательностей ДНК, но они не позволили выяснить какие именно этапы криосохранения могут оказывать дестабилизирующее влияние на геном.

Более детальные исследования были посвящены оценке генетической стабильности растительного материала, восстановленного после отдельных этапов замораживания в жидком азоте с применением медленного замораживания в сочетании с обработкой криозащитными веществами (Aronen et al., 1999; Urbanova et al., 2006) и витрификации в растворах криопротекторов с последующим быстрым погружением в жидкий азот (Kaity et al., 2008; Sanchez et al., 2008). В этих исследованиях после предварительного культивирования растительных тканей не было выявлено появление каких-либо вариаций. Однако изменения спектров ампликоиов были зарегистрированы на последующих этапах криосохранения. В случае использования метода медленного замораживания к появлению < генетической изменчивости приводила обработка растительного материала раствором криопротекторов (Aronen et al. 1999), а в случае метода витрификации обработка витрифицирующим раствором (Kaity et al., 2008). Кроме того, отклонения в геноме также регистрировали «после этапа замораживания в жидком азоте подготовленных тканей (Urbanova et al., 2006; Kaity et al., 2008; Sanchez et al., 2008).

При криосохранении растительного материала весьма перспективно применение метода дегидратации, поскольку он позволяет исключить использование дорогостоящих программных замораживателей и токсичных криопротекторов, способных вызывать дестабилизирующее воздействие на геном растений (Aronen et al., 1999; Kaity et al., 2008). Однако характер воздействия отдельных этапов данного метода на генетическую стабильность тканей и органов растений, культивируемых in vitro, не изучен.

В своем исследовании мы решили оценить влияние отдельных стадий процедуры криосохранения, выполненной методом дегидратации, на стабильность ДНК растительного материала. В качестве объекта исследования нами была выбрана каллусная ткань яровой формы Т. aestivum, поскольку она обладает большим и сложно организованным геномом.

Целью диссертационной работы было изучение влияния отдельных стадий процедуры криосохранения каллусов мягкой яровой пшеницы (ТгШсит аехйчит Ь.), выполненного методом дегидратации, на стабильность ДНК восстановленного растительного материала.

В связи с этим был поставлен ряд задач:

1. Выбрать ДНК-маркеры для оценки генетического полиморфизма и осуществить подбор условий для проведения ПЦР.

2. Получить исходный растительный материал, однородный по ряду ДНК-маркеров.

3. Оценить влияние отдельных этапов процедуры криосохранения на жизнеспособность и морфогенетический потенциал каллусов яровой пшеницы.

4. Определить уровень изменчивости ДНК-маркеров каллусов и полученных из них растений-регенерантов после каждого из этапов криосохранения.

Заключение диссертации по теме «Физиология и биохимия растений», Соловьева, Александра Ивановна

выводы

1. Впервые показано, что каллусы яровой пшеницы (ТгШсит аезйуит Ь.) способны восстанавливать свой рост после криосохранения по протоколу дегидратации. Ни один из этапов криосохранения не вызывал снижения жизнеспособности тканей.

2. Обнаружено, что восстановленные после криосохранения каллусы не утратили способности к регенерации растений, хотя частота формирования морфогенных структур достоверно снижалась на этапе дегидратации, дальнейшие замораживание в жидком азоте и оттаивание существенно не влияли на этот показатель.

3. Впервые проведена оценка влияния этапов криосохранения по протоколу дегидратации на генетическую стабильность восстановленного растительного материала. После этапа дегидратации были обнаружены единичные изменения генома, частота которых составила 0.58%. Остальные стадии криосохранения не вызывали изменений ДНК-маркеров.

4. Регенераты, восстановленные из каллусов, подвергавшихся отдельным этапам криосохранения, полностью сохраняли стабильность по ряду проанализированных ДНК-маркеров.

Автор выражает глубокую благодарность научному руководителю д.б.н. Долгих Юлии Ивановне за всестороннюю помощь, понимание и поддержку, к.б.н. Высоцкую Ольгу Николаевну за помощь в освоении практической и теоретической сторон криосохранения, постоянное внимание к работе и поддержку, к.б.н. Осипову Екатерину Сергеевну за оказанное содействие в освоении методов выявления полиморфизма и анализа ДНК-фрагментов, д.б.н. Попову Александру Сергеевичу за ценные консультации, а также всем сотрудникам лаборатории генетики культивируемых клеток и группы криосохранения Отдела биологии клетки и биотехнологии ИФР РАН за доброжелательное отношение и дружескую атмосферу.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В результате проведенной работы показана возможность применения протокола дегидратации для успешного криогенного хранения каллусов яровой пшеницы (ТгШсит ае$И\>ит Ь.) и получения из них растений. Результаты работы подтвердили возможность использования 1881*.- и КЕМАР-методов для оценки стабильности растительного материала пшеницы, восстановленного после криосохранения.

В ходе экспериментов установлено, что дегидратация является критическим моментом исследованного протокола. Она приводит к существенному снижению способности каллусных тканей пшеницы к морфогенезу и регенерации растений, а также может вызывать вариации в геноме восстановленных каллусов. Отмеченная частота вариаций в ДНК каллусов в целом по опытам составила 0.58%. У регенерантов, восстановленных из каллусных тканей, которые подвергали как отдельным стадиям криосохранения, так и полной процедуре подготовки и замораживания в жидком азоте, изменения не были выявлены. Вероятно, такой результат связан с низкой частотой появления вариаций.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Соловьева, Александра Ивановна, 2011 год

1. Брик А.Ф., Календарь Р-Н, Стратула 0:Р. Сиволап Ю.М. (2006) IRAP-REMAP-анализ сортов ячменя^ одесской! селекции. Цитология и генетика, 40, 24-33.

2. Волкова JI.A., Горская HiBi, Попов A.C., Пауков В.Н., Урманцева BlB.1986) Сохранение основных характеристик мутантных клеточных штаммов диоскореи после хранения при сверхнизких температурах. Физиология растений, 33, 779-787.

3. Высоцкая О.Н., Попов A.C., Данилова С.А. (20076) Криосохранение незрелых зиготических зародышей пшеницы. Генетические ресурсы культурных растений в XXI веке. Тезисы докладов II Вавиловской конференции, Санкт Петербург (ВИР), с. 160.

4. Дерябин-А.Н., Синькевич М.С., Дубинина И.М., Бураханова Е.А., Трунова

5. Т.И. (2007) Влияние Сахаров на развитие окислительного'стресса, вызванного гипотермией (на примере растений картофеля, экспрессирующих ген инвертазы дрожжей). Физиология растений, 54, 39-46.

6. Донец Н.В., Мусин С.М., Попов A.C. (1991) Стабильность состава полиморфных белков растений картофеля, полученных из меристем после криогенного хранения. С.-х. биология, №3, 76—83.

7. Плохинский H.A. (1978) Математические методы в биологии. М.: Из-во МГУ,. 265 с.

8. Попов. А.С. (1988). Криоконсервация клеток растений: В сб: Методы культивирования клеток под ред. Пинаева Г.П: М.: Нау ка, с. 70-77.

9. Тихонова ВЛ. (1999) Долговременное: хранение семян,. Физиология растений, 46, 467-476.

10. Трунова Т.И. (1972) Сахара как один из факторов^ повышающих морозостойкость растений, Известия АН СССР, Сер. биол., № 2, 185-189.

11. Туманов И.И. (1979) Физиология закаливания и морозостойкости растений: М.: Наука, 352 с.

12. Чересиз G.B., Юрченко Н.Н., Иванников А.В., Захаров И.К. (2008) Мобильные элементы.и стресс. Вестник ВОГиС, 32,216-241.

13. Ahuja S., Mandal B.B., Dixit S;, Srivastava P.S. (2002) Molecular, phenotypic and biosynthetic stability in Dioscorea floribunda plants derived from cryopreserved shoot tips. Plant Sci., 163, 971-977.

14. Ai P., Luo Z. (2005) Cryopreservation of dormant vegetative buds adn genetic stability of regenerated plantlets in persimmon. Acta Hortic., 685, 85-92.

15. Albani M;C., Wilkinson M.J. (1998) Inter simple sequence repeat polymerase chain reaction for the detection of somaclonal variation. Plant Breed., 117, 573—575.

16. Aronen T.S., Krajnakova J., Haggman H.M., Ryyiianen L.A. (1999)* Genetic fidelity of cryopreserved embryogenic cultures of open-pollinated Abies cephalonica.• Plant'Sci., 142; 163-172.

17. Atmakuri A.R., Chaudhury R:, Malik S.K, Kumar S. (2009) Mulberry biodiversity conservation through cryopreservation. In Vitro Cell Dev.- Pl., 45, 639649.

18. Bachiri Y., Bajon C., Sauvanet A., Gazeau C., Morisset C. (2000) Effect of osmotic stress on tolerance of air-drying and cryopreservation of Arabidopsis thaliana suspension cells. Protoplasma, 214, 227-243.

19. Bajaj Y.P.S. (1980) Freeze-preservation of plant cells-a novel approach to the conservation of gemplasm. In: Genetics and Wheat Improvement, Gupta A.K. (ed) New Delhi: Oxford & IBH, pp. 141-149.

20. Bajaj{ Y.P.S. (1982) Induction and cryopreservation of genetic variability in rice. International rice tissue culture planning conference, Los Banos, Philippines, pp. 99— 111'.

21. Bajaj Y.P.S. (1983) Cryopreservation of germplasm of cereals Progress and prospects. In: Proc. 6th Int. Wheat Genet. Symp., Sakamoto S. (ed) Kyoto: Kyoto Univ, pp. 565-574.

22. Bajaj Y.P.S. (1984) The regeneration of plants from frozen pollen embryos and zygotic embryos of wheat and rice. Theor. Appl. Genet., 67, 525-528.

23. Bajaj Y.P.S. (1995) Cryopreservation of germplasm of cereals (wheat, rice, and maize). In: Biotechnology in Agriculture and Forestry, Vol. 32. Cryopreservation of Plant Germplasm I, Bajaj Y.P.S. (ed.) New Delhi: Oxford & IBH, pp. 217-235.

24. Bayliss M:W. (1980) Chromosomal variation in plant tissue in culture. Int. Rev. Cytol., 11, 113-143.

25. Benson E.E. (1990) Free radical damage in stored plant germplasm. Rome: International Board for Plant Genetic Resources, pp.128.

26. Benson: E.EV. Johnston J;,. Muthusamy J:, Harding K. (2006) Physical and engineering perspectives of in vitro-plant cryopreservation. In: Plant tissue culture engineering, vol 6, Gupta S., Ibaraki Y. (eds.) Verlag: Springer, pp. 441-476.

27. Benson E.E., Lynch P.T., Jones. J. (1992) Variation in free- radical damage in rice cell suspensions with different embryogenic potentials. Planta, 188, 296-305.

28. Benson E.E., Wilkinson M., Todd A., Ekuere U., Lyon J. (1996) Developmental competence and ploidy stability in plants regenerated from cryopreserved potato shoot-tips. Cryoletters, 17, 119-128

29. Berjak P., Pammenter N.W. (2008) From Avicennia to Zizania: seed recalcitrance in perspective. Ann Bot., 10, 213-218.

30. Bi R.M1, Kou M., Chen» L.G.,. Mao S.R., Wang H.G. (2007) Plant regeneration through callus initiation from mature embryo of Triticum. Plant Breed., 126, 9-12.

31. Blakesley D., Mazrooei S.A., Bhatti M.H., Henshaw G.G. (1996) Cryopreservation of non-encapsulated embryogenic. tissue of sweet potato (Ipomoea batatas). Plant Cell Rep., 15, 873-876.

32. Blakesley D., Mazrooei S.A., Henshaw G.G. (1995) Cryopreservation of embryogenic tissue of sweet potato (Ipomoea batatas): Use of sucrose and dehydration for cryoprotection. Plant Cell Rep., 14, 259-263.

33. Butenko R.G., Popov A.C., Volkova L.A., Chernyak N.D., Nosov, A.M. (1984) Recovery of cell cultures and their biosynthetic capacity after storage of Dioscorea deltoides and Panax ginseng cells in liquid nitrogen. Plant Sci. Lett., 33, 285-292

34. Castillo N.R.F., Bassil N.V., W. Sugae, Reed B.M. (2010) Genetic stability of cryopreserved shoot tips of Rubus germplasm. In Vitro Cell Dev. PL, 46,246-256.

35. Caswell K.L., Kartha K.K. (2009) Recovery of plants from pea and strawberry meristems cryopreserved for 28 years. Cryoletters, 30, 41—46.

36. Cella R., Colombo R., Galli M.G., Nielsen E., Rollo F., Sala F. (1982) Freeze-preservation of rice cells:A physiological study of freeze-thawed cells. Physiol. Plant., 55, 279-284.

37. Chambers G.K., MacAvoy E.S. (2000) Microsatellites: consensus and controversy. Comp. Biochem. Physiol, 126,455-476.

38. Chang Y., Barker R.E., Reed B. M. (2000) Cold acclimation improves recovery of ciyopreserved grass (Zoysia andLolium sp.). Cryoletters, 21, 107—116.

39. Ghannuntapipat C., Sedgley M.',. Collins G. (2003) Changes in- methylation and structure of DNA from almond tissues during nr vitro culture and cryopreservation. J. Amer. Hort. Sci., 128; 787-935.

40. Chen T.H.H., Gusta KV. (1983) Abscisic acid-induced freezing resistance in cultured plant cells. Plant Physiol, 73, 71-75.

41. Chen T.H.H., Kartha K.K., Gusta L.V. (1985) Cryopreservation of wheat suspension culture and regenerable callus. Plant Cell Tiss. Organ Cult., 4,101-109.

42. Chlyah H., Karim R., Hsaine M., Chlyah A. (1990) Improvement of somatic embryogenesis in wheat by segmentation of cultured embryos. In: Plant Biotechnology in Agriculture and Forestry Vol 13, Bajaj Y.P.S. (ed) Heidelberg: Springer-Verlag, pp. 88-97.

43. Cho J.S., Hong S.M., Joo S.Y., Yoo J.S., Kim D.I: (2006) Cryopreservation of transgenic rice suspension cells producing recombinant hCTLA4Ig. Appl. Microbiol Biotechnol., 73, 1470-1476.

44. Condello E., Palombi M.A., Tonelli M.G., Damiano C.; Caboni E. (2009) Genetic stability of wild pear (Pyrus pyraster, Burgsd) after cryopreservation by encapsulation dehydration. Agr. Food Sci., 18, 136-143.

45. Cornejo J.; Wong V.L., Blech A.E. (1995) Cryopreserved callus: a source of protoplast for rice transformation. Plant Cell Rep., 14,210-214.

46. Cote F., Goue O., Domergue R., Panis B., Jenny C. (2000) In-field behavior of banana plants (Musa AA sp.) obtained after regeneration of cryopreserved embryogenic cell suspensions. Cryoletters, 21, 19-24.

47. Crowe J.H., Crowe L.M. (1986) Stabilisation of membranes in anhydrobiotic organisms. In: Membranes, Metabolism, and Dry Organism, Leopold A.C. (ed.) Cornell University, New York: Comstock Publishing Associates, pp. 188-209.

48. Crowe J.H., Crowe L.M., Carpenter J.F., Rudolph A.S., Wistrom C.A., Spargo B.J., Anchordoguy T.J. (1988) Interactions of sugars with membranes. Biochim. Biophys. Acta, 947, 367-384.

49. Delporte F., Mostade O., Jacquemin J.M. (2001) Plant regeneration through callus initiation from thin mature embryo fragments of wheat. Plant Cell Tiss. Org. Cult,. 67, 73-80:

50. Devavallee I., Guillaud J., Beckert M., Dumas C. (1989) Cryopreservation of immature maize embryos after freeze-hardening the ear and in vitro. Plant Sci., 60,' 129.

51. Diettrich B., Popov. A.S., Pfeiffer Bi, Neumann D., Butenko R., Luckner M.1982) Cryopreservation of Digitalis lanata cell cultures. Planta Med., 46, 82-87.

52. Dixit S., Mandal B.B., Ahuja S., Srivastava P.S. (2003) Genetic stability assessment of plants regenerated from cryopreserved embryogenic tissues of Dioscorea bulbifera L. using RAPD, biochemical and morphological analysis. Cryoletters, 24, 77-84.

53. Dixit-Sharma S., Ahuja-Ghosh S., Mandal B.B., Srivastava P.S. (2005) Metabolic stability of plants regenerated from cryopreserved shoot tips of Dioscorea deltoidea — an endangered medicinal plant. Scientia Hort., 105, 513-517.

54. Dumet D., Engelmann F., Chabrillange N., Duval1 Y. (1993) Cryopreservation of oil palm (Elaeis gidneensis Jacq.) somatic embryos involving a desiccation step. Plant Cell Rep., 12, 352-355.

55. Eapen S., Rao (1985) Factors controlling callus induction, growth and plant regeneration in breadwheat (Triticum aestivum L). Proc. Indian Acad. Sci. Plant Sci., 94, 33-40:

56. Eksomtramage T., Paulet F., Noyer J. L., Feldmann P., Glaszmann J. C. (1992) Utility of isozymes in sugarcane breeding. SugarCane, 3, 14-21.

57. Engelmann F. (1992) Cryopreservation of embryos. In: Reproductive Biology and Plant Breeding, DatteeY., Dumas. C., Gallais A. (eds.) Berlin: Springer Verlag, pp. 281-290.

58. Engelmann F. (1997) In vitro conservation methods. In: Biotechnology and Plant Genetic Resources: Conservation and Use, Ford-Lloyd B.V., Newburry J.H., Callow J.A. (eds.) Wellingford: CAB International, pp. 119-162.

59. Engelmann F., Gonzalez Arnao M.T., Wu Y., Escobar. R. (2008) The development of encapsulation dehydration. In: Plant Cryopreservation: A Practical Guide, Reed B.M. (ed.) New York: Springer, pp. 59-75.

60. Fabian A., Jager K., Darko E., Barnabas B. (2008) Cryopreservation of wheat (Triticum aestivum L.) egg cells by vitrification. Acta Physiol. Plant., 30, 737-744.

61. Fang J.-Y., Wetten A., Adu-Gyamfi R., Wilkinson M., Rodriguez-Lopez C. (2009) Use of secondary somatic embryos promotes genetic fidelity in cryopreservation of cocoa (Theobroma cacao L.). Agr. Food Sci., 18; 152-159.

62. Fedoroff N., Banks J.A., Masson P. (1989) Molecular genetic analysis of the maize Suppressor-mutator elements epigenetic developmental regulatory mechanism. Genome, 31, 973-979.

63. Fernandes P., Rodriguez E., Pinto G. Roldan-Ruiz I., Loose M., de Santos C.2008) Cryopreservation of Quercus suber somatic embryos by encapsulation-dehydration and evaluation of genetic stability. Tree Physiol., 28, 1841-1850.

64. Finkle B.J., Ulrich J.M. (1979) Effects of cryoprotectants in combination on the survival of frozen sugarcane cells. Plant Physiol., 63, 598-604.

65. Finkle B.J., Ulrich J.M. (1982) Cryoprotectant removal as a factor in the survival on frozen rice and sugarcane cells. Cryobiology, 19, 329-335.

66. Fretz A., Jahne A., Lorz H. (1992) Cryopreservation of embryogenic suspension culture of barley (Hordenm vulgare L.). Bot. Acta, 105, 140-145.

67. Fretz A., Lorz H. (1995) Cryopreservation of in vitro cultures of barley (Hordeum vulgare L. and H. murinum L.) and transgenic cells of wheat (Triticum aestivum L.). J. Plant Physiol., 146, 489-496.

68. Fukai S., Goi M., Tanaka M. (1991) Cryopreservation of shoot tips of Caryophyllaceae ornamentals. Euphytica, 56, 149—153.

69. Fukai S., Goi M., Tanaka M. (1994) The chimeric structure of the apical dome of chrysanthemum (Dendranthema grandiflornm (Ramat.) Kitam. is affected by cryopreservation. Sci. Hortic.-Amsterdam, 57, 347-351.

70. Gagliardi R.F., Pacheco G.P., Carneiro L.A., Vails J.F.M., Vieira M.L.C., Mansur E. (2003) Cryopreservation of Arachis species by vitrification of in vitro-grown shoot apices and genetic stability of recovered plants. Cryoletters, 24,103-110.

71. Gnanapragasam S., Vasil I.K. (1990) Plant regeneration from a cryopreserved embryogenic cell suspension of a commercial sugarcane hybrid (Saccharum sp.). Plant Cell Rep., 9, 419-423.

72. Gnanapragasam- S., Vasil I.K. (1992a) Cryopreservation of immature embryos, embryogenic callus and cell suspension cultures of gramineous species. Plant Sci., 83, 205-215.

73. Gnanapragasam S.~, Vasil I.K. (1992b) Ultrastructural.changes in suspension culture cells of Panicum maximum during cryopreservation: Plant Cell Rep., 11; 169-174.

74. Gonzalez-Arnao^M.T., EngelmannF. (2006) Cryopreservation of plant germplasm, using the encapsulation-dehydration technique: Review and case study on sugarcane. Cryoletiers, 27, 155-168.

75. Gonzalez-Arnao M.T., Engelmann F., Huet C., Urra C. (1993) Cryopreservation of encapsulated apices of sugarcane: effect of freezing procedure and histology. Cryoletters, 14, 303-308.

76. Gonzalez-Arnao M.T., Urra C., Engelmann F., Ortiz R., de la Fe C. (1999) Cryopreservation of encapsulated sugar cane apices: effect of storage temperature and storage duration. Cryoletters, 20, 347-352.

77. Gupta M., Chyi Y.S., Romero-Severson J., Owen J.L. (1994) Amplification of DNA markers from evolutionarily diverse genomes using single primers of simple sequence repeats. TheorAppl Genet, 89, 998-1006.

78. Haggman,H., Ryynanen L., Aronen T., Krajnakova J. (1998) Cryopreservation of embryogenic cultures of Scots pine. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 54, 45-53.

79. Hahne G., Lorz H. (1987) Cryopreservation of embryogenic callus cultures from barley (Hordeum vulgare L.). Plant Breed., 99, 330-332.

80. Haliloglu K. (2002) Wheat immature embryo culture for embriogenic callus induction. J. Biol. Sci., 2, 520-521.

81. Halperin W. (1986) Attainment and retention of morphogenetic capacity in vitro. In: Cell Culture and Somatic Cell Genetics of Plants, Vasil I.K. (ed.) New York: Academic press, pp. 3-47.

82. Hao Y.J., Deng X.X. (2002) Occurrence of chromosomal variations and plant regeneration from long-term-cultured citrus callus. In Vitro Cell Dev.-PL, 38, 472476.

83. Hao Y.J., Liu Q.L., Deng X.X. (2001) Effect of cryopreservation on apple genetic resources at morphological, chromosomal, and molecular levels. Cryobiology, 23, 4653.

84. Hao Y.J., You C.X., Deng X.X. (2002a) Effects of cryopreservation on developmental competency, cytological and molecular stability of citrus callus. Cryoletters, 23, 27-35.

85. Hao Y.J., You C.X., Deng X.X. (2002b) Analysis of ploidy and the patterns of amplified fragment length polymorphism and methylation sensitive amplified polymorphism in strawberry plants recovered from cryopreservation. Cryoletters, 23, 37-46.

86. Harding K. (1994) The methylation status of DNA derived from potato plants recovered from slow growth. Plant Cell Tiss. Org., 21, 31-38.

87. Harding K. (2004) Genetic integrity of cryopreserved plant cells: a review. Cryoletters, 25, 3-22.

88. Harding K., Benson E.E. (1994) A study of growth, flowering, and tuberisation in plants derived from cryopreserved potato shoot-tips: implications for in vitro germplasm collections. Cryoletters, 15, 59-66.

89. Harding K., Staines H. (2001) Biometric analysis ofphenotypic characters of potato shoot-tips recovered from tissue culture, dimethylsulphoxide treatment and cryopreservation. Cryoletters, 22, 255-262.

90. He G. , Shu L., Liao L., Yin X., Sheng L., Wang X. (1998) Somatic cell cryopreservation and protoplast regeneration of important disease-resistant wild rice Oryza meyeriana Baill. Sci. China Ser. C, 41, 393-399.

91. Heine-Dobbernack E., Kiesecker H., Schumacher H.M. (2008) Cryopreservation of dedifferentiated cell cultures. In: Plant Cryopreservation: A Practical Guide, Reed B.M. (ed.) New York: Springer,, pp. 141-176.

92. Helliot B., Madur D., Dirlewanger E., De Boucaud M.T. (2002) Evaluation of genetic stability in cryopreserved Prunus. In Vitro Cell Dev.-PI, 38, 493-500.

93. Henry Y., Marcotte J.L., De Buyser J. (1996) The effect of aneuploidy on karyotype abnormalities in wheat plants regenerated from- short and longterm somatic embryogenesis. Plant Sci., 114, 101-109.

94. Hitmi A., Sallanon H.', Barthomeuf C. (1997) Cryopreservation of Chrysanthemum cinerariaefolium vis. cells and its impact on their pyrethrin biosynthesis ability. Plant Cell Rep., 17, 60-64.

95. Hoekstra F.A., Golovina E.A., Buitink J. (2001) Mechanisms of plant desiccation tolerance. Trends Plant Sci., 6, 431-438.

96. Hong S, Yin M, Shao X, Wang A, Xu W. (2009) Cryopreservation of embryogenic callus of Dioscorea bulbifera by vitrification. Cryoletiers, 30,4 64-75.

97. Huang C.N., Wang. J.H., Yan* O.S., Zhang X.Q., Yan Q.F. (1995) Plant regeneration from rice (Oryza sativa L.) embryogenic suspension cells cryopreserved by vitrification. Plant Cell Rep., 14, 730-734.

98. Huang C.N., Wang. J.H., Yan Q.F., Yan O.S., Zang S.O. (1995) Rapid establishment and cryopreservation of embryogenic cell suspension cultures of barley (Hordeum vulgare L). Sci Agric. Sin., 28, 21-27.

99. Huang C.N., Yan Q.F., Wang J.H., Yu Z.Y., Du Y. (1992) Stadies of cryopreservation of barley (Hordeum vulgare L.) immature embryos. Bull. Sci. Technol., 8, 209-212.

100. Ipser J. (1993) Effect of dimethylsulfoxide on methylmethanesulfonate induced chromosomal aberrations in Crepis capillaris cultivated in vitro. Biol. Plantarum, 35, 137-139.

101. Ishikawa M., Suzuki M., Nakamura T., Kishimoto T., Robertson A.J., Gusta

102. V. (2006) Effect of growth phase on survival of bromegrass suspension cells following cryopreservation and abiotic stresses. Ann. Bot., 97, 453-459.

103. Ishikawa M., Tandon P., Suzuki M., Yamaguishi-Ciampi A. (1996) Cryopreservation of bromegrass (Bromus inermis Leyss) suspension cultured cells using slow prefreezing and vitrification procedures. Plant Sci., 120, 81-88.

104. Jain S., Jain R.K., Wu R. (1996) A simple and efficient procedure for cryopreservation of embryogenic cells of aromatic Indica rice varieties. Plant Cell Rep., 15, 712-717.

105. Jian L.C., Sun D.I., Sun L.H. (1987) Studies on factors cryopreservation of sugarcane callus. ACTA Bot. Sin., 29, 123-131.

106. Johnston J.W., Benson E.E., Harding K. (2009) Cryopreservation induces temporal DNA methyl ation epigenetic changes and differential transcriptional activity in Rides germplasm. Plant Physiol. Biochem., 47, 123-131.

107. Jokipii S., Ryynanen L., Kallio P.T., Aronen T., Haggman H. (2004). A cryopreservation method maintaining the genetic fidelity of a model forest tree, Populus tremida L. x Populus tremuloides Michx. Plant Sci., 166, 799-806.

108. Kaeppler S.M., Phillips R.L. (1993) Tissue culture-induced' DNA methylation variation in maize. PNAS, 90, 8773-8776

109. Kaity A., Ashmore S.E., Drew R.A. (2009) Field performance evaluation and genetic integrity assessment of cryopreserved papaya clones. Plant Cell Rep., 28, 1421-1430.

110. Kaity A., Ashmore S.E., Drew R.A., DuIIoo M.E. (2008) Assessment of genetic and epigenetic changes following cryopreservation in papaya. Plant Cell Rep., 27, 1529-1539.

111. Kalendar R., Grob T., Regina M., Suoniemi A., Schulman A. (1999) IRAP and REMAP: two new retrotransposon-based DNA fingerprinting techniques. Theor. Appl. Genet., 98, 704-711.

112. Kalendar R., Tanskanen J., Immonen S., Nevo E., Schulman A.H. (2000) Genome evolution of wild barley (.Hordeum spontaneum) by BARE-1 retrotransposon dynamics in response to sharp microclimatic divergence. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 91, 6603-6607.

113. Karp A. (1995) Somaclonal variation as a tool for crop improvement. Euphytica, 85, 295-302.

114. Kashkush K., Feldman M., Levy A.A. (2003) Transcriptional' activation of retrotransposons alters the expression' of adjacent genes in wheat. Nat. Genet., 33, 102-106.

115. Kobayashi T., Niino T., Kobayashi M. (2005) Simple cryopreservation protocol with an encapsulation technique for tobacco BY-2 suspension cell cultures. Plant Biotechnol., 22, 105-112.

116. Koster K. (1991) Glass formation and desiccation tolerance in seeds. Plant Physiol, 96, 302-304.

117. Kumar A., Bennetzen J.L. (1999) Plant retrotransposons. Annu Rev. Genet, 33, 479-532.

118. Kuriyama A., Watanabe K., Ueno S., Mitsuda H. (1989) Inhibitory effect of ammonium ion on recovery of cryopreserved rice cells. Plant Sci., 64, 231-235.

119. Langis P., Steponkus P.L. (1990) Cryopreservation of rye protoplasts by vitrification. Plant Physiol, 92, 666-671.

120. Lee P., Chen T.H.H., FuchigamiL.H. (1991) Changes in the translatable RNA population during abscisic acid induced freezing tolerance in bromegrass suspension culture. Plant Cell Physiol, 32, 45-56.

121. Leroy X., Leon K., Branchard M. (2000) Plant genomic instability detected by microsatellite-primers. Electron J. Biotechn., 3, 140-148.

122. Leroy X., Leon, K. (2000) A rapid method for detection of plant genomic instability using unanchored-microsatellite primers. Plant Mol. Biol Rep., 18, 283.

123. Liu Y.G., Liu L.X., Wang L., Gao A.Y. (2008) Determination! of genetic stability in* surviving apple shoots following cryopreservation by vitrification. Cryoletters, 29, 7-14.

124. Liu Z.L., Han F.P., Tan M., Shan X.Hi, Dong Y.Z., Wang X.Z.,,Fedak G.,

125. Lu T.G., Sun C.S. (1992) Cryopreservation of millet (Setaria italica L.). J. Plant Physiol., 139; 295-298.

126. Lu T.G., Sun C.S. (1995) Cryopreservation of foxtail millet (Setaria italica L.). In: Biotechnology in Agriculture and Forestry, Vol. 32. Cryopreservation of Plant Germplasm I, Bajaj Y.P.'S. (ed.) New Delhi: Oxford & IBH, pp.236-244.

127. Lynch P.T., Benson E .E., Jones J., Cocking E.C., Power J.B., Davey M.R. (1995) The embryogenic potential of rice cell suspension affects their recovery following cryogenic storage. Euphytica, 8, 347-349.

128. Maio J.J.D., Shillito R.D. (1989) Cryopreservation technology for plant cell cultures. Journal of Tissue Culture Methods, 12, 163-169:

129. Malik S.M., Rasid H., Yasmin T., Minhas N.M1 (2004) Effect of 2,4-dichlorophenoxyacetic acid on callus induction from mature wheat (Triticum aestivum L.) seeds. Int. J. Agri. Biol., 6, 156-159.

130. Mandal B.B., Ahuja-Ghosh S., Srivastava P.S. (2008) Cryopreservation of. Discorea rotundata Poir. A comparative study with, two cryogenic procedures and assessment of regenerants by RAPD analysis. Cryoletters, 29, 399-408:

131. Manninen O., Kalendar R., Robinson J., Schulman A.H. (2000) Application of BARE-1 retrotransposon markers to map a major resistance gene for net blotch in barley. Mol. Gen. Genet., 264, 325-334.

132. Mannonen L., Toivonen L., Kauppinen V. (1990) Effects of long-term preservation on growth and productivity of Panax ginseng and Catharanthus roseus cell cultures. Plant Cell Rep., 9, 173-177.

133. Marassi M.A., Scocchi, A., Gonzalez, A.M. (2006) Plant regeneration,from rice anthers cryopreserved by an encapsulation/dehydration technique. In Vitro Cell Dev.-Pl., 42,31-36.

134. Marin M.L., Gogorcena Y., Ortiz J., Duran, V.N. (1993) Recovery of whole plants of sweet orange from somatic embryos subjected^ to freezing thawing treatments. Plant Cell Tiss. Org., 34,5 27-33.

135. Martin C., Cervera M.T., Gonzalez-Benito M;E. (2009) Somaclonal variation after cryopreservation. How to detect it?: AFLPs vs. RAPDs, Cryoletters, 30, 87.

136. Martin C., Gonzalez-Benito M.E. (2005) Survival and, genetic stability of Dendranthema grandiflora Tzvelev shoot apices- after cryopreservation by vitrification and encapsulation-dehydration. Cryobiology, 51, 281-289.

137. Martin C., Gonzalez-Benito M.E. (2006) Sequence comparison in somaclonal variant of cryopreserved Dendranthema grandiflora shoot apices. Cryobiology, 53, 424.

138. Martinez-Montero Mi, Lorenzo J.C., Ojeda E., Quinones J., Quinones J., Mora N., Castillo R. (2006) Methodology for the cryopreservation of calli with embryogenic structures for the culture of sugarcane. Biotecnoloiia Aplicada, 23; 360375.

139. Martínez-Montero M., Martinez J., Engelmann F. (2008) Cryupreservation of sugarcane somatic embryos. Cryoletters, 29, 229-242.

140. Martinez-Montero M.E., González-Arnao M.T., Borroto-Nordelo C., Puentes-Díaz C., Ehgelmann F. (1998) Cryopreservation of sugarcane embryogenic callus using a simplified freezing process. Cryoletters, 19, 171-176.

141. Martinez-Montero M.E., Ojeda E., Espinosa A., Sanchez M., Castillo R. (2002) Field performance of sugarcane (Saccharum sp.) plants derived from cryopreserved calluses. Cryoletters, 23, 21-26

142. Mikulai A., Tomiczak K., Rybczynski; J-J; (20-l:l)i Cryopreservation enhances embryogenic capacity of Gentiana cruciata (L.) suspension culture and maintains (epi)genetic uniformity of regenerants. Plant Cell Rep:, 30; 565-574.

143. Mix-Wagner G. (1999) The conservation of potato cultivars. Potato Res., 42, 427-436.

144. Mohanty S;, Panda M.K., Subudhi E., Nayak S. (2008) Plant regeneration from callus culture of Curcuma aromatica and1 in vitro detection of somaclonal variation throughicytophotometric analysis. Biol. Plantarum, 52, 783-786.

145. Monk M. (1990) Variation in»epigenetic inheritance. Trends Genet., 6, 110-114.

146. Motawei M.I;, Al-Doss A.A., Moustafa K.A. (2007). Genetic diversity among selectedf wheat lines differing in heat tolerance using molecular markers: J. Food Agric. Environ., 5, 180—183.

147. Mott* R.L., Cordts l.M;,. Larson A.M. (1985) Nitrogen? and: growth regulators effect on shoot and root growth of soy been1 in vitro. Tissue Cult. Forest, and Agr. Prospr. 3rd Tenn., New York, London, pp. 336-337.

148. Moukadiri O., Lopes C.R., Cornejo M.J. (1999) Physiological and genomic variations in rice cells recovered from direct immersion and storage in liquid nitrogen: Physiol. Plant., 105, 442-449.

149. Nagaraju Ji, Kathirvel Mi, Kumar R.R., Siddiq E:A., Hasnaim S.E. (2002) Genetic analysis of traditional and evolved Basmati and non-Basmati rice varieties by using fluorescence-based ISSR-PCR and SSR markers. Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 99,5836-5841.

150. Nair D.S., ReghunathB.R. (2009) Cryoconservation and regeneration of axillary shoot meristems of Indigofera tinctoria (L.) by encapsulation-dehydration technique. In Vitro Cell Dev. -PL, 45, 565-573.

151. Paulet F., Engelmann F., Glaszmann, J.-C. (1993) Cryopreservation of apices of in vitro plantlets of sugarcane (Saccharum sp. hybrids) using encapsulation/dehydratation. Plant Cell Rep., 125, 525-529.

152. Peredo E.L., Arroyo-Garcia R., Reed B.M., Revilla MiA. (2008) Genetic and epigenetic stability of cryopreserved and cold-stored hops. (Humulus lupulus L.). Cryobiology, 57, 234-241.

153. Peredo E.L., Folgado R.} Revilla M.A., Arroyo-García R. (2009) Genetic and epigenetic stability of Humulus lupulus after in vitro. Acta Hort., 848, 115-124.

154. Pinker L, Halmagyi A., Olbricht K. (2009) Effects of sucrose preculture on cryopreservation by droplet-vitrification of strawberry cultivars and morphological stability of cryopreserved plants. Cryoletters, 30, 202-211.

155. Pontaroli A.C., Camadro E.L. (2005) Somaclonal variation in Asparagus officinalis plants regenerated by organogenesis from long-term callus cultures. Genet. Mol. Biol., 28,' 423-430.

156. Popova E., Kim H.H., Paek K.Y. (2010) Cryopreservation of coriander (Coriandrum sativum L.) somatic embryos using sucrose preculture and air desiccation. Sci. Hortic. Amsterdam, 124, 522—528.

157. Powell W., Morgante M., Andre C., Hanafey M.,.Vogel J., Tingey S. Rafalski A. (1996) The comparison of RFLP, RAPD, AFLP and SSR (microsatellite) markers for germplasm analysis. Mol. Breeding, 2, 225-238.

158. Queen R.A., Gribbon B.M., James C., Jack P., Flavell A.J. (2004) Retrotransposon-based molecular markers for linkage and genetic diversity analysis in wheat. Mol. Gen. Genomics, 271, 91-97.

159. Rakoczy-Trojanowska, M., Bolibok H. (2004) Characteristics and a comparison of three classes of microsatellite-based markers and their application in plants. Cell. Mol. Biol. Lett., 9; 221-238.

160. Reaney, M. J.T., Gusta L.V. (1987) Factors influencing the induction of freezing tolerance byabscisic acid in cell suspension cultures of Bromus inermis Leyss and Medicago sativa L. Plant-Physiol., 83; 423-427.

161. Redway F.A., VasilV., Vasil K.I. (1990) Characterization and regeneration1 of wheat (Triticum aestivum L.) embryogenic cell suspension cultures. Plant Cell Rep., 8, 714-717.

162. Reed, B. M. Schumacher, L. Wang, N. D Achino, J., Barker, R. E. (2006) Cryopreservation of bermudagrass germplasm by encapsulation dehydration. Crop Sci., 46,6-11.

163. Rey H.Y., Faloci M., Medina R., Dolce N., Mroginski L., Engelmann F.2009) Cryopreservation of in vitro grown shoot tips and apical meristems of the forage legume Arachispintoi. Cryoletters, 30, 347-358.

164. Rostiana O., Niwa M., Marubashi W. (1999) Efficiency of inter-simple sequence repeat PCR for detecting somaclonal variation among leaf-cultureregenerated plants of horseradish. Breed. Sci., 49, 245-250.

165. Ryynanen L., Aronen T. (2005) Genome fidelity during short- and long- term tissue cultured and. differentially cryostored meristems of silver birch (Betula penduld). Plant Cell Tiss. Org., 83, 21-32.

166. Sakai A., Kobayashi S., Oiyama I. (1990) Cryopreservation of nucellar cells of navel orange (Citrus sinensis Osb. var. brasiliensis Tanaka) by vitrification. Plant Cell Rep., 9, 30-33.

167. Sala F., Cella R., Rollo F. (1979) Freeze-preservationof ricecells grown in suspension culture. Physiol Plant., 45, 170-176.

168. Salaj T., Matusikova I., Panis B., Swennen R., Salaj J. (2010) Recovery and characteristics of hybrid firs (Abies alba x A. cephalonica, Abies alba x A. numidica) embriogenic tissues after cryopreservation. Cryoletters, 31, 206-217.

169. Sano H., Kamada I., Youssefian S., Katsumi M., Wabiko H. (1990) A single treatment of rice seedlings with 5-azacytidine induces heritable dwarfism and undermethylation of genomic DNA. Mol. Gen. Genet., 220, 441-447.

170. Schwartz D., Dennis E. (1986) Transposase activity of the Ac con- trolling element in maize is regulated by its degree of methylation. Mol. Gen. Genet., 205, 476-482.

171. Scocchi A., Faloci M., Medina R., Olmos S., Mroginski L. (2004) Plant recovery of cryopreserved apical meristem-tips of Melia azedarach L. using encapsulation/dehydration and assessment of their genetic stability. Euphytica, 135, 29-38.

172. Sisunandar, Rival A., Turquay P., Samosir Y., Adkins S.W. (2010) Cryopreservation of coconut (Cocos nucifera L.) zygotic embryos does not induce morphological, cytological or molecular changes in recovered seedlings. Planta, 232, 435-447.

173. Skyba M., Urbanova M., Kapchina-Toteva V., Kosuth J., Harding K, Cellarova E. (2010) Physiological, biochemical and molecular characteristics of cryopreserved Hypericum perforatum L. shoot tips. Cryoletters, 31, 249-260.

174. Smulders M. J. M., Rus-Kortekaas W., Vosman B. (1995) Tissue culture-induced DNA methylation polymorphisms in repetitive DNA of tomato calli and regenerated plants. Theor.Appl. Genet., 91, 1257-1264.

175. Sopalun K., Thammasiri K, Ishikawa K. (2010) Vitrification-based cryopreservation of Grammatophyllum speciosum protocorms. Cryoletters, 31, 347357.

176. Sowa S., Oleszczuk S., Zimny J. (2005) A simple and efficient method for cryopreservation of embryogenic triticale calli. Physiol. Plantarum, 27, 237-243.

177. Sugawara Y., Sakai A. (1974) Survival of suspension-cultured sycamore cells cooled to the temperature of liquid nitrogen. Plant Physiol., 54, 722-724.

178. Surenciski, M. R., Dematteis, Mi, Flachsland, E.A. (2007) Chromosome stability in cryopreserved germplasm of Cyrtopodium hatschbachii (Orchidaceae). Ann Bot. Fenn., 44, 287-292.

179. Tan M.P. (2010) Analysis of DNA methylation of maize in response to osmotic and salt stress based on methylation-sensitive amplified polymorphism. Plant Physiol. Biochem., 48,21-26.

180. Tanhuanpaa P., Kalendar R., Schulman A.H., Kiviharju E. (2007) A major gene for grain cadmium accumulation in oat (Avena sativa L.). Genome, 50, 588-594.

181. Tanino, K., Weiser C.J., Fuchigami L.H., Chen T.H.H. (1990) Water content during abscisic acid induced freezing tolerance in bromegrass cells. Plant Physiol., 93, 460-464.

182. Touno K., Yoshimatsu K., Shimomura K. (2006) Characteristics of Atropa belladonna hairy roots cryopreserved by vitrification method. Cryoletters, 27, 65-72.

183. Turhan H., Baser I. (2004) Callus induction from mature embryo of winter wheat (Triticum aestivum L.). Asian J. Plant Sci., 3, 17-19.

184. Turner S.R., Krauss S.L., Bunn E., Senaratna T., Dixon K., Tan B., Touchell D.H. (2001a). Genetic fidelity and viability of Anigozanthos viridis following tissue culture, cold storage and cry ©preservation. Plant Sci., 161, 1099-1106.

185. Turner S.R., Senaratna T., Touchell D.H., Bunn E., Dixon K.W., Tan B. (2001b) Stereochemical arrangement of hydroxyl groups in sugar and polyalcohol molecules as an important factor in effective cryopreservation. Plant Sci., 160, 489497.

186. Ulrich J.M., Finkle B.J., Moore P.H., Ginoza H. (1979) Effect of a mixture of ciyoprotectants in attaining liquid nitrogen survival of callus cultures of a tropical plant. Cryobiology, 16, 550-556.

187. Urbanova M., Kosuth J., Cellarova E. (2006) Genetic and biochemical analysis of Hypericum perforatum L. plants regenerated after cryopreservation. Plant Cell Rep., 25; 140-147.

188. Vannini G. L., Poli F. (1983) Binucleation and abnormal chromosome distribution in Euglena gracilis cells treated with dimethyl sulfoxide. Protoplasma, 114; 62-66.*

189. Volk G.M., Harris J. L., Rotindo K.E. (2006) Survival of mint shoot tips after exposure to cryoprotectant solution components. Cryobiology, 52", 305-308!

190. Walters C., Touchell D:H., Power P., Wesley-Smith, J., Antolin, M.F. (2002) A cryopreservation protocol for embryos of the endangered species Zizania texana. Cryoletters, 23, 291-298.

191. Wang J. H. Bian H.W., Zhang Y.X., Cheng H.P. (2001) The dual effect of antifreeze protein on cryopreservation of rice (Oryza sativa L.) embryogenic suspension cells. Cryoletters, 22, 175—182.

192. Wang J.H., Huang C.N. Cryoprecervation of Hordeum (Barley). In: Biotechnology in Agriculture and Forestry, Vol. 50. Cryopreservation of Plant Germplasm II, Towill L.E., Bajaj Y.P.S. (eds.) New Delhi: Oxford & IBH, 2002. pp. 120-135.

193. Wang Q., Gafny R., Sahar N., Sela L, Mawassi M., Tanne E., Perl A. (2002) Cryopreservation of grapevine (Vitis vinifera L.) embryogenic cell suspensions by encapsulation-dehydration and subsequent plant regeneration. Plant Sei., 162, 551558.

194. Wang Q., Valconen J.P.T. (2009) Improved recovery of cryotherapy-treated shoot tips following thermotherapy of in vitro-grown stock shoots of raspberry (Rubus idaeus L.). Cryoletters, 30, 171-182.

195. Wang Z., He Y. (2009) Effect of cryopreservation on the development and DNA methylation patterns of Arabidopsis thaliana. Life Sei. J., 6, 55-60.

196. Wang Z.Y., Legris G., Nagel J. Potrykus I., Spangenberg G. (1994) Cryopreservation of embryonic cell suspensions in Festuca and Lolium species. Plant Sei., 103, 93-106.

197. Ward A.C.W., Benson E.E., Blackhall N.W., Cooperbland S., Powell W., Power J.B., Davey M.R. (1993) Flowcytometric assessments of ploidy stability incryopreserved' dihaploid Solarium tuberosum and wild Solanum species. Gryoletters, 14, 145-152.

198. Watanabe K., Kuriyama A., Kawai F.,, Kanamori. M. (1999) Effect of cryoprotectant treatment and- post-thaw washing on the survival-, of cultured1 rice (Oryzasativa L.) cells after cryopreservation. Gryoletters, 20; 377-382.

199. Watanabe.K., Steponkus P.L. (1995) The vitrification of Oryza sativa L. cells. Gryoletters, 16, 255-262."

200. Wilkinson? T., Wetten A., Fay M.F. (1998) Cryopreservation; of Cosmos atrosanguineus shoot< tips by a modified encapsulation/dehydration method.-Ciyoletters, 19,293-302.

201. Wilkinson T., Wetten A., Prychid C., Fay M.F. (2003) Suitability of cryopreservation for the long-term storage of rare and endangered plant species: a case history for Cosmos atrosanguineus. Ann. Bot., 91,65-74.

202. Withers L.A. (1978) The freeze-preservation of synchronously dividing cultured' cells of Acer pseudoplantanus L. Cryobiology, 15, 87-92.

203. Withers L.A., King P; J. (1979) Proline A novel cryoprotectant for the freeze-preservation of cultured cells of Zea mays L. Plant Physiol., 64, 675-678.

204. Withers L.A., Street H.E. (1977) Freeze preservation of cultured plant cells. III. The pregrowth phase. Physiol. Plant., 39, 171-178.

205. Wm Y., Zhao Y., Engelmann F., Zhou- M. (2001) Cryopreservation of kiwi shoot tips. Cryoletters, 22, 277-284.

206. Yamuna G., Sumathi V., Geetha S.P., Praveen K., Swapna N., Nirmal B.K. (2007) Cryopreservation of in vitro grown shoots of ginger (.Zingiber officinale Rose.). Cryoletters, 28, 241-252.

207. Zale J:M., Borchardt-Wier H., Kidwal K.K., Stebar C.M. (2004) Callus induction and plant regeneration from mature embryos of a diverse set of wheat genotypes. Plant Cell Tiss. Org. Cult., 76, 277-281.

208. Zarghami R., Pirseyedi M., Hasrak S., Sardrood B.P. (2008) Evaluation of genetic stability in cryopreserved Solanum tuberosum. Afr. J. Biotechnol., 1, 2798

209. Zhang Y.X., Wang J.H., Bian H.W., Zhu M.Y. (2001) Pregrowth-desiccation: a simple and efficient procedure for the cryopreservation of rice (Oryza sativa L.) embiyogenic suspension cells. Cryoletters, 22, 221-228.

210. Zietkiewicz E., Rafalski A., Labuda D. (1994). Genome fingerprinting by simple sequence repeat (SSR)-anchored polymerase chain reaction amplification. Genomics, 20, 176-183.2802.