Оценка проангиогенных свойств мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.01.04, кандидат наук Гомзикова Марина Олеговна

• Гомзикова Марина Олеговна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Гомзикова Марина Олеговна

ВВЕДЕНИЕ

Глава 1. Обзор литературы

1.1 Внеклеточные везикулы

1.1.1 Внеклеточные везикулы клеток млекопитающих - экзосомы и микровезикулы

1.1.2 Молекулярный механизм формирования микровезикул

1.1.3 Теория паракринной стимуляции регенерации стволовыми клетками и участие внеклеточных везикул в регенерации и ангиогенезе

1.1.4 Концепция бесклеточной терапии на основе внеклеточных везикул

1.1.5 Применение внеклеточных везикул для диагностики и терапии заболеваний

1.1.6 Ограничения терапевтического применения внеклеточных везикул

1.2 Химическое соединение - цитохалазин В

1.2.1 История открытия и структура цитохалазина B

1.2.2 Механизм действия цитохалазина В

1.2.3 Применение цитохалазина В

1.2.4 Получение мембранных везикул с помощью цитохалазина В

1.3 Заключение по обзору литературы

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Методы работы с мембранными везикулами клеток человека

2.2.1 Получение мембранных везикул от клеток человека, обработанных цитохалазином В

2.2.2 Приготовление мембранных везикул для анализа методом динамического рассеяния света

2.2.3 Приготовление мембранных везикул для анализа методом полимеразной цепной реакции

2.2.4 Приготовление мембранных везикул и проведение трансмиссионной электронной микроскопии

2.2.5 Приготовление мембранных везикул и проведение сканирующей электронной микроскопии

2.2.6 Окрашивание мембранных везикул РЬа11о1ёт, специфичным к актину

2.2.7. Детекция процесса синтеза белка

2.2.8. Подготовка мембранных везикул для исследования стабильности при разных условиях хранения

2.2 Методы работы с нуклеиновыми кислотами

2.2.1 Выделение тотальной ДНК

2.2.2 Выделение плазмидной ДНК

2.2.3 Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.2.4 Электрофорез в агарозном геле

2.3 Методы работы с белками

2.3.1 Выделение тотального белка

2.3.2 Измерение концентрации белка методом бицинхониновой кислоты

2.3.3 Иммуноблоттинг

2.3.4 Мультиплексный анализ

2.4. Методы работы с прокариотическими клетками

2.4.1 Культивирование бактериальных клеток

2.4.2 Трансформация бактериальных клеток

2.4.3 Криоконсервация бактериальных клеток

2.5 Методы работы с эукариотическими клетками

2.5.1 Культуры клеток человека, культивирование клеточных культур

2.5.2 Пассирование клеточных культур

2.5.3 Криоконсервация клеточных культур

2.5.4 Исследование размера клеточных компонентов методом проточной цитофлуориметрии с использованием калибровочных частиц

2.5.5 Трансфекция культуры клеток человека

2.5.6 Окрашивание цитоскелета клеток человека

2.5.7 Иммуноокрашивание клеток человека

2.5.8 Окрашивание мембранными красителями клеток человека

2.5.9 Окрашивание клеток человека красителем CFDA SE

2.6 Оценка процесса слияния и переноса содержимого мембранных везикул в клетку-реципиента in vitro

2.6.1 Нанесение мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В, на клетки-реципиенты

2.6.2 Оценка количества клеток-реципиентов, обладающих флуоресценцией, и средней интенсивности флуоресценции методом проточной цитофлуориметрии

2.7 Оценка проангиогеного потенциала in vitro и in vivo

2.7.1 Формирование капилляро-подобных структур эндотелиальными клетками пупочной вены человека на матриксе Matrigel in vitro

2.7.2 Подкожная инъекция мембранных везикул и клеток человека в матриксе Matrigel лабораторным животным Rattus norvegicus

2.7.3 Гистологическое исследование

2.8 Статистическая обработка результатов

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1 Получение, исследование размера и молекулярного состава мембранных везикул

3.1.1 Характеристика состава фракций, получаемых в процессе выделения мембранных везикул

3.1.2 Исследование размера и морфологии мембранных везикул полученных с помощью цитохалазина В

3.1.3 Исследование структуры актинового цитоскелета в клетках, обработанных цитохалазином В, и в мембранных везикулах

3.1.4 Исследование наличия генетического материала в составе мембранных

везикул, полученных с помощью цитохалазина В

3.1.4 Исследование процесса синтеза белка внутри мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В

3.2 Исследование взаимодействия и механизма доставки содержимого мембранных везикул в клетку-реципиента

3.2.1 Исследование включения мембранного компонента везикул в состав цитоплазматической мембраны клетки-реципиента

3.2.2 Исследование переноса трансмембранных белков клетке-реципиенту посредством мембранных везикул

3.2.3 Исследование переноса содержимого мембранных везикул в клетку-реципиента

3.3 Исследование проангиогенных свойств мембранных везикул, полученных от клеток, обладающих повышенной ангиогенной активностью

3.3.1 Исследование способности мембранных везикул индуцировать формирование капилляро-подобной сети эндотелиальными клетками пупочной вены человека на матриксе Matrigel in vitro

3.3.2 Исследование молекулярного состава мембранных везикул на наличие проангиогенных факторов

3.3.3 Исследование способности мембранных везикул индуцировать ангиогенез in vivo

3.4 Оценка стабильности мембранных везикул мезенхимных стволовых

клеток человека

ГЛАВА 4.ОБСУЖДЕНИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ

Заключение

ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования и степень ее разработанности

Изучение молекулярных механизмов передачи информации в биологических системах является важной биохимической задачей. Межклеточная коммуникация играет ключевую роль в поддержании жизнедеятельности и функционировании многоклеточных организмов, поскольку обмен информацией необходим для координации клеток в удаленных частях многоклеточного организма. В настоящее время общепризнанно, что клетки способны передавать сигналы не только через непосредственный контакт поверхностных рецепторов и/или посредством растворимых секретируемых факторов, но и посредством внеклеточных везикул, окруженных цитоплазматической мембраной (Кореньков Д.А. и др., 2014). Современные открытия в области межклеточной коммуникации требуют исследования строения, свойств и функционирования биомолекул, заключенных внутри надмолекулярных комплексов - везикул клеток человека, которые служат векторами внутри организма, участвуя в передаче информации между клетками. Однако наше понимание процесса обмена информацией между клетками, особенно опосредованного везикулами, остается весьма ограниченным.

Одним из наиболее перспективных подходов стимуляции процессов регенерации, нейропротекции и ангиогенеза при травматическом или ишемическом повреждении тканей считают клеточную терапию с применением стволовых клеток (СК) человека. СК - это неспециализированные клетки, обладающие способностью к самообновлению, способные при определенных условиях дифференцироваться в различные специализированные клеточные типы (Лукьянчиков В., 2014). Несмотря на то, что эмбриональные и фетальные СК обладают наибольшим потенциалом к дифференцировке в различные типы клеток, терапевтическое применение эмбриональных СК (ЭСК) человека

запрещено, а фетальных СК (ФСК) ограничено (Иванов Д.В. и др., 2010). Запрет связан не только с этическими вопросами, но также с опасностью неограниченного и неконтролируемого деления, которую несут ЭСК и ФСК. Альтернативой применения эмбриональных и фетальных СК могут стать стволовые клетки взрослого организма. Данный вид СК обнаружен в костном мозге, жировой ткани и других тканях организма: в пуповине и пуповинной крови, синовиальной жидкости и мембране, пульпе зуба и другие (Li et al., 2015; Stoltz et al., 2015). Одним из наиболее удобных источников СК взрослого организма признана подкожная жировая ткань человека, поскольку ее возможно относительно легко изъять в терапевтически значимом количестве в процессе стандартной операции - липосакции (Mahmoudifar et al., 2015). Однако остается риск дифференцировки трансплантированных СК в нежелательном направлении in vivo. Существуют примеры дифференцировки трансплантированных мезенхимных стволовых клеток (МСК) в адипогенном направлении в почках и в остеогенном направлении в сердце. Еще одним вопросом, связанным с применением СК взрослого организма, является возможность их онкологической трансформации при культивировании и экспансии in vitro/ex vivo (Herberts et al., 2011). Этот вопрос приобретает особую актуальность в связи с развитием генно-клеточной терапии, при которой предварительно проводят генетическую модификацию трансплантируемых клеток путем внесения в клетки трансгенов с целью повышения эффективности терапии. Однако в этом случае возникает проблема: при генетической модификации клеток человека in vitro существует опасность онкологической трансформации за счет вставочного мутагенеза и активации онкогенов, что может в конечном итоге привести к онкологическим заболеваниям (Steinemann et al., 2013). В этой связи особую актуальность приобретают технологии, способные снижать потенциальные риски клеточной и генно-клеточной терапии.

Одна из гипотез, объясняющая благоприятный эффект после проведения клеточной терапии, основана на способности СК к стимуляции клеток

микроокружения путем непосредственного межклеточного контакта, секреции во внеклеточное пространство биологически активных молекул, таких как факторы роста, хемокины, цитокины и др., а также путем высвобождения внеклеточных везикул (Rani et al., 2015). Несмотря на многолетние исследования терапевтического потенциала СК, комплексный вклад межклеточной коммуникации СК в процессы регенерации остается недостаточно исследованным.

Помимо фундаментального интереса анализа биологически активных веществ, представляет интерес и возможность применения полученных факторов межклеточной коммуникации в биомедицине для стимуляции регенерации. В связи с упомянутыми выше проблемами биобезопасности применения СК, актуальным представляется применение препаратов на основе внеклеточных везикул СК, не содержащих способных к онкологической трансформации клеток, с целью стимуляции регенерации.

Внеклеточные везикулы - это мембранные везикулы, которые, как показали недавние исследования, несут белки, нуклеиновые кислоты, липиды и опосредуют межклеточную коммуникацию в организме человека (Baglio et al., 2015). Внеклеточные везикулы проявляют свойства родительской клетки. В различных экспериментальных моделях показано ингибирование апоптоза и стимуляция пролиферации клеток под действием внеклеточных везикул СК (Bruno et al., 2012). В этой связи исследование возможности использования мембранных везикул клеток человека, которые являются естественными векторами нашего организма и не способны к делению, в качестве терапевтического инструмента для стимуляции регенерации и ангиогенеза является крайне перспективным. Однако существует неразрешенная на сегодняшний день проблема: количество естественно выделяемых внеклеточных везикул ограничено и не достаточно для широкого терапевтического применения (Biancone et al., 2012).

Известно, что процесс высвобождения мембранных везикул от поверхности клетки требует молекулярных изменений внутри клетки,

которые бы вызывали нарушение связи цитоплазматической мембраны с цитоскелетом и дезорганизацию цитоскелета (Puddu et al., 2010; Morel et al., 2011). Таким образом, исследования молекулярных механизмов реагирования клеточных компонентов на химические воздействия, вызывающие дестабилизацию цитоскелета клетки, представляют особенный интерес.

Одними из наиболее исследованных химических веществ, которые вызывают дезорганизацию актинового цитоскелета, являются цитохалазины открытые в 1967 году. Поскольку цитохалазины не влияют на жизнеспособность клеток и не запускают апоптоз в клетках животных и человека (Mao et al., 2011; Peng et al., 2015), они являются перспективными кандидатами для использования в целях стимуляции высвобождения внеклеточных везикул. Например, было обнаружено, что дезорганизация цитоскелета клеток человека линии HT29 химическим веществом -цитохалазином D, значительно увеличивает количество высвобождаемых внеклеточных везикул (Choi et al., 2012).

Pick et al. в 2005 году предложили применять к клеткам, обработанным цитохалазином B, механическую силу с целью стимуляции образования мембранных везикул, которые далее ими успешно использовались для изучения клеточного сигналинга (Pick et al., 2005). В дальнейшем Mao et al. в 2011 году предложили использовать везикулы, полученные от обработанных цитохалазином B клеток человека, в качестве векторов для доставки химических веществ и наночастиц (Mao et al., 2011). Мембранные везикулы являются биосовместимыми векторами, так как окружены естественной цитоплазматической мембраной клетки. Таким образом везикулы не распознаются организмом как чужеродные объекты, при этом везикулы способны к рецепторному взаимодействию с клетками организма. Кроме того, ЦПМ клеточного происхождения защищает содержимое везикул от деградации внеклеточными ферментами.

Таким образом, молекулярные механизмы передачи информации в биологических системах и роль мембранных везикул в регенеративных процессах представляют огромный фундаментальный и практический интерес. Именно отсутствие глубокого понимания механизмов опосредованной везикулами межклеточной коммуникации является основной причиной, ограничивающей применение мембранных везикул в биомедицине для стимуляции регенерации. В этой связи возможность использования мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В, в качестве нового терапевтического инструмента представляет также и несомненный практический интерес.

Цель работы: характеристика биохимического состава и оценка векторных свойств и биологической активности мембранных везикул клеток человека.

В соответствии с целью были поставлены следующие экспериментальные задачи:

1. Получить мембранные везикулы от клеток человека HEK293FT, обработанных цитохалазином В, и исследовать размер и молекулярный состав мембранных везикул;

2. Исследовать взаимодействие и механизм доставки содержимого мембранных везикул в клетку-реципиента;

3. Исследовать проангиогенные свойства мембранных везикул, полученных от клеток человека, обладающих повышенной ангиогенной активностью - SH-SY5Y и МСК;

4. Оценить влияние различных условий хранения на целостность и способность к доставке своего содержимого мембранных везикул, полученных от МСК человека с помощью цитохалазина В.

Научная новизна

В результате получения и исследования применимости мембранных везикул из клеток человека, обработанных цитохалазином В, для стимуляции

ангиогенеза определены морфология, размер и молекулярный состав мембранных везикул. Методом электронной микроскопии, которая является общепризнанным стандартом для измерения размера микро- и наноструктур, впервые установлено, что размер мембранных везикул, получаемых с помощью цитохалазина В (МВ-ЦВ), составляет от менее 100 нм до 1800 нм с пиком в области 100-600 нм. Впервые показано, что МВ-ЦВ содержат в своем составе молекулы актина и генетический материал митохондрий клетки. Несомненной новизной обладают данные по исследованию синтеза белка внутри МВ-ЦВ с использованием аналога метионина - L-азидогомоаланина. Впервые показано, что среди общего пула встречаются отдельные МВ-ЦВ, способные поддерживать синтез белка. Приоритетными являются данные о механизме доставки содержимого МВ-ЦВ в клетку-реципиента. Установлено, что доставка посредством МВ-ЦВ происходит путем непосредственного слияния мембран, а также путем эндоцитоза. Впервые установлена зависимость эффективности доставки от количества нанесенных МВ-ЦВ и от концентрации загруженных в них веществ. Впервые показан перенос плазмидной ДНК посредством МВ-ЦВ, при этом плазмидная ДНК была способна служить матрицей для транскрипции и последующей трансляции в клетках-реципиентах. Принципиально новыми являются данные о том, что МВ-ЦВ заключают биоактивные молекулы (факторы роста, цитокины, хемокины) клеток-доноров. МВ-ЦВ, полученные от клеток с повышенной проангиогенной активностью (опухолевые и стволовые клетки человека), способны стимулировать формирование капилляро-подобных структур на внеклеточном матриксе Matrigel in vitro и ангиогенез in vivo. Несомненной новизной обладают данные по влиянию различных условий хранения на морфологию, целостность и способность к доставке содержимого МВ-ЦВ.

Научно-практическая значимость работы

Настоящая работа расширяет знания о молекулярных механизмах реагирования клеточных компонентов на химическое воздействие

цитохалазином В. В ходе выполнения работы разными методами была охарактеризована морфология, размер и молекулярный состав мембранных везикул клеток человека, полученных с помощью цитохалазина В, что позволило глубже изучить данные надмолекулярные комплексы. Это в свою очередь будет способствовать развитию практических подходов с использованием везикулярных систем.

Полученные результаты расширяют представления о возможностях терапевтического применения мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В. Обнаруженная нами способность мембранных везикул к слиянию и доставке генетической информации в клетку-реципиента открывает перспективу использования МВ-ЦВ в качестве новой векторной системы в генной терапии. Кроме того, нами показано, что МВ-ЦВ проявляют биологическую активность клеток-доноров и способны стимулировать формирование капилляро-подобных структур HUVEC на матриксе Matrigel in vitro и ангиогенез in vivo. Это может быть использовано для терапевтической стимуляции ангиогенеза при ишемических повреждениях тканей человека. В результате исследовательской работы была подана заявка на выдачу патента на изобретение «Способ получения лекарственного препарата на основе везикул клеток человека» в раздел А61К согласно международной патентной классификации (уведомление о поступлении заявки №2015131280 от 27.07.2015).

Используемые в работе методические подходы позволяют получать мембранные везикулы в больших количествах, что совместно с проведенными нами параллелями между механизмом образования, размером, составом и биологической активностью МВ-ЦВ и естественных микровезикул, позволит использовать МВ-ЦВ в качестве модельной системы в области исследования молекулярных механизмов передачи информации в биологических системах. В целом результаты настоящей работы, полученные в области исследования биологической активности МВ-ЦВ СК, будут

способствовать развитию теории паракринной стимуляции клеток микроокружения стволовыми клетками.

Положения, выносимые на защиту:

1. Мембранные везикулы, получаемые с помощью цитохалазина В, заключают цитоплазматическое содержимое клеток-доноров, в частности молекулы актина, митохондриальную ДНК, компоненты и исходные молекулы, необходимые для синтеза белка, а также различные факторы роста, цитокины и хемокины.

2. Доставка содержимого мембранных везикул внутрь клетки-реципиента происходит путем непосредственного слияния мембран и эндоцитоза.

3. Мембранные везикулы, полученные от клеток-доноров, обладающих повышенной ангиогенной активностью - SH-SY5Y и МСК, стимулируют ангиогенез in vitro и in vivo.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка проангиогенных свойств мембранных везикул, полученных с помощью цитохалазина В»

Апробация работы

Материалы диссертации представлены на следующих всероссийских и международных симпозиумах, конгрессах и конференциях: VI международный симпозиум «Актуальные вопросы генных и клеточных технологий» (Москва, 2013); IV международная научно-практическая конференция "Постгеномные методы анализа в биологии, лабораторной и клинической медицине" (Казань, 2014); международная научно-практическая конференция "Актуальные вопросы образования и науки" (Тамбов, 2014); 19 международная пущинская школа-конференция «Биология-наука XXI века» (Пущино, 2015); 18 международный симпозиум биологов Европы «Symbiose» (Греция, 2015); международная научно-практическая конференция «Наука и образование третьего тысячелетия» (Москва, 2015).

Место выполнения работы и личный вклад соискателя

Экспериментальные данные получены автором на базе института фундаментальной медицины и биологии Казанского (Приволжского) федерального университета. Автор принимал участие в определении цели исследовательской работы. Автор лично планировал и проводил эксперименты в соответствии с поставленными задачами работы. Полученные результаты автор лично описывал и обсуждал. Автор проводил сравнительный анализ полученных им результатов с данными, представленными в научной литературе. Автор принимал активное участие в написании статей.

Связь работы с научными программами

1. Грант РФФИ 16-04-01567 А «Исследование молекулярных и клеточных механизмов индукции ангиогенеза генетически модифицированными CD34+ клетками человека» (2016-2018).

2. Грант Президента Российской Федерации для государственной поддержки молодых российских ученых докторов наук МД-433.2013.4 «Модуляция межклеточной коммуникации клеток человека в ответ на экзогенные генетические факторы» (2013).

3. Пятьдесят лучших инновационных идей для Республики Татарстан премия «Связьинвестнефтехим» (конкурс 2013).

4. Пятьдесят лучших инновационных идей для Республики Татарстан номинация «Молодежный инновационный проект» (2016-2017).

5. Программа «УМНИК» Фонда содействия развитию малых форм предприятий в научно-технической сфере (2016-2017).

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 9 печатных работ, в том числе 2 статьи в научных журналах рекомендованных ВАК, а также индексируемых в базе данных Scopus, 7 тезисов докладов на Международных и Всероссийских конференциях и конгрессах.

Структура и объем работы

Материалы диссертационный работы изложены на 171 страницах машинописного текста. Работа содержит 29 рисунков и 4 таблицы. Диссертация состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов исследований, обсуждения результатов, заключения, выводов и списка литературы. Библиография включает 201 источников, среди которых 11 отечественных и 190 зарубежных источников.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Внеклеточные везикулы

Внеклеточные везикулы - это окруженные мембраной сферические микро- и наноструктуры. Впервые внеклеточные везикулы клеток животных были обнаружены в крови человека в 1967 году (Wolf, 1967). К настоящему времени установлено наличие внеклеточных везикул в различных биологических жидкостях человека (кровь, лимфа, слюна, пот, моча, грудное молоко, спинномозговая жидкость). Показано высвобождение везикул многими типами клеток человека, в том числе лейкоцитами, эритроцитами, клетками гладкой мускулатуры, эндотелиальными, стволовыми, а также опухолевыми клетками (Puddu et al., 2010; Sturk, 2012).

Долгое время полагали, что внеклеточные везикулы - инертный «мусор», высвобождаемый клетками в процессе жизнедеятельности, однако накапливающиеся данные свидетельствуют о важной роли внеклеточных везикул в различных физиологических и патологических процессах (Choi et al., 2012). В настоящее время стало общепризнанно, что внеклеточные везикулы выполняют функцию межклеточной коммуникации: 1) запуская рецептор-опосредованный сигналинг; 2) доставляя свое содержимое путем слияния с клеткой-мишенью (Ratajczak et al., 2006; Choi et al., 2015). Межклеточная коммуникация посредством внеклеточных везикул имеет несколько преимуществ: во-первых, благодаря тому, что везикулы несут на своей поверхности рецепторные белки, они способны к целевой доставке; во-вторых, везикулы способны переносить гидрофобные молекулы (биоактивные липиды и мембранные белки); в-третьих, содержимое везикул защищено мембраной от деградации внеклеточными ферментами (Choi et al., 2015). Следует отметить, что внеклеточные везикулы способны не только к локальному распространению, но также к циркуляции в организме человека с током крови и лимфы (Choi et al., 2015).

Система межклеточной коммуникации посредством внеклеточных везикул была также обнаружена у растений, грибов, архей, грам-отрицательных и некоторых грам-положительных бактерий (Deatherage et al., 2012). Наличие подобной межклеточной коммуникации у прокариот позволяет предполагать, что система обмена информацией между клетками посредством везикул зародилась миллионы лет назад (van der Pol et al., 2012). При этом обмен внеклеточными везикулами возможен не только между клетками одного вида, но и между клетками, принадлежащими к разным доменам. Например, внешнемембранные везикулы (от англ. Outer membrane vesicles - OMV) Pseudomonas aeruginosa способны сливаться с мембраной эукариотической клетки-хозяина и вносить в нее факторы вирулентности, такие как фосфолипаза С, лактамаза, протеазы, приводя к гибели клетки (Bomberger et al., 2009). Внешнемембранные везикулы бактерий участвуют в подготовке ниши для колонизации, доставке вирулентных факторов и модуляции защитного ответа клетки-хозяина (Kuehn et al., 2005).

1.1.1 Внеклеточные везикулы клеток млекопитающих - экзосомы и

микровезикулы

Пул внеклеточных везикул неоднороден и включает в себя экзосомы и микровезикулы. Отдельную группу везикул, окруженных цитоплазматической мембраной (ЦПМ) клетки, представляют апоптозные тельца, которые образуются в результате программируемой клеточной гибели. Апоптозные тельца в отличие от экзосом и микровезикул обладают относительно крупными размерами (1000-5000 нм) и имеют иное биологичекое значение (van der Pol et al., 2012).

Экзосомы - это внеклеточные везикулы, обладающие размером от 40 до 150 нм (Simpson et al., 2009; Raposo et al., 2013; Ji et al., 2014). Экзосомы являются внеклеточными везикулами эндосомного происхождения. Подтверждением этого является отсутствие в мембране экзосом стандартных

ЦПМ белков и наличие белков, характерных для эндоцитозной системы клетки (Thery et al., 2002). Методом трансмиссионной электронной микроскопии было установлено, что экзосомы происходят из внутриклеточных мультивезикулярных телец, которые сливаются с ЦПМ клетки с высвобождением интралюминальных везикул - экзосом во внеклеточную среду (Рисунок 1). В то же время возможно созревание мультивезикулярных телец с образованием лизосом (Рисунок 1) (Choi et al., 2012; van der Pol et al., 2012).

Микровезикулы - мембранные везикулы гетерогенного размера (от 40 до 2000 нм по разным данным), отделяющиеся от поверхности клеток (van der Pol et al., 2012; Akers et al., 2013). Микровезикулы заключают внутри себя цитозольные компоненты, такие как ферменты, факторы транскрипции, молекулы РНК, митохондриальной ДНК (Guescini et al., 2010; Guescini et al., 2010), полученные ими от родительских клеток (VanWijk et al., 2003; Hugel et al., 2005). Несмотря на то, что механизм образования и биохимический состав экзосом и микровезикул отличаются, их физические параметры близки и перекрываются, поэтому разделение экзосом и микровезикул представляет сложную задачу. Использование стандартных методов выделения, основанных на центрифугировании, не позволяет получить чистые фракции экзосом и микровезикул. По этой причине зачастую исследователи для обозначения исследуемого объекта используют общий термин - внеклеточные везикулы (Choi et al., 2012; Choi et al., 2015).

Состав внеклеточных везикул зависит от типа клетки-родителя и стимула, вызвавшего их образование (Jimenez et al., 2003; Leroyer et al., 2010). Основными белками, входящими в состав везикул, являются цитоплазматические белки, белки цитоскелета (актин, тубулин и другие), поверхностные рецепторы (Choi et al., 2013). Липидный компонент внеклеточных везикул обогащен фосфатидилсерином, фосфатидилхолином,

Рисунок 1 - Схема образования внеклеточных везикул клеток животных. 1 образование экзосом, 2 - образование микровезикул.

сфингомиелином, ганглиозидом и холестеролом (Choi et al., 2013). Valadi et al. установили, что экзосомы тучных клеток мыши (линия клеток MC/9) и человека (линия клеток HMC-1) содержат микроРНК и мРНК 1300 генов, которые могут быть транслированы в аминокислотную последовательность in vitro (Valadi et al., 2007). Обнаружено, что помимо микроРНК и мРНК внеклеточные везикулы несут небольшое количество 18S и 28S рибосомных РНК (Miranda et al., 2010), а также митохондриальную ДНК (Guescini et al., 2010). Однако вопрос о том, происходит ли включение нуклеиновых кислот и белков во внеклеточные везикулы случайно или существуют механизмы специфичного сортинга, остается открытым. С целью обобщения данных о молекулярном составе внеклеточных везикул, количество которых продолжает стремительно расти, были созданы базы данных - EVpedia (http://evpedia.info) и ExoCarta (http://exocarta.org), которые содержат информацию обо всех обнаруженных во внеклеточных везикулах молекулах. ExoCarta содержит информацию о внеклеточных везикулах клеток млекопитающих, а EVpedia включает информацию о внеклеточных

везикулах всех эукариот и прокариот (Choi et al., 2013). Кроме того, было создано Международное общество внеклеточных везикул, которое предложило стандартизировать процедуру выделения везикул, что позволило бы сравнивать данные, получаемые разными исследовательскими группами (Witwer et al., 2013).

Функции внеклеточных везикул в организме многообразны и определяются их составом. Например, известно участие тромбоцитарных микровезикул в свертывании крови, а эндотелиальных микровезикул - в ангиогенезе (Leroyer et al., 2010). Кроме того, обнаружено участие микровезикул в модуляции иммунного ответа; антигенной презентации; переносе сигнальных молекул; стимуляции ангиогенеза; переносе генетической информации, что может выступать в качестве посттранскрипционной регуляции экспрессии генов; росте и метастазировании опухоли путем стимуляции ангиогенеза и переноса онкогенов (van der Pol et al., 2012); распространении патогенов (Mack et al., 2000; Rozmyslowicz et al., 2003; Миллер Г. Г. и др., 2015).

1.1.2 Молекулярный механизм формирования микровезикул

Молекулярный анализ выявил обогащение определенных мембранных липидов и поверхностных белков в составе естественных микровезикул. Было обнаружено, что микровезикулы моноцитов крови и клеточной линии моноцитов (THP-1) несут поверхностные белки - тканевой фактор и гликопротеиновый лиганд-1 P-селектина и у них отсутствует поверхностный белок CD45 (Del Conde et al., 2005). Так как в ЦПМ моноцитов такое распределение поверхностных белков характерно для определенных областей мембраны, обгащенных холестеролом (липидных рафтов), было сделано заключение, что формирование микровезикул происходит в области рафтов (Del Conde et al., 2005). Подтверждением высказанного авторами предположения служит уменьшение высвобождения клеткой микровезикул в результате снижения количества холестерола в ЦПМ (Del Conde et al., 2005).

Согласно теории «липидных рафтов» ЦПМ клетки состоит из жидкостно-неупорядоченной фазы (от англ. Ld - liquid-disordered), содержащей ненасыщенные глицерофосфолипиды, и жидкостно-упорядоченой фазы (от англ. Lo - liquid-ordered), содержащей насыщенные сфинголипиды и холестерол (Плескова С.Н. и др., 2015). Lo-фаза формируется благодаря стремлению холестерина встроиться в область гидрофобных насыщенных ацильных цепей сфинголипидов (Kaiser et al., 2009) и представляет собой «остовки» гелевой консистенции в жидкой Ld-фазе. Однако область ЦПМ, где преимущественно происходит формирование микровезикул остается спорной, так как другими авторами было обнаружено повышенное высвобождение микровезикул при снижении количества холестерола в ЦПМ клетки, а также при повышении окружающей температуры, что приводит к повышению текучести мембраны, то есть к преобладанию Ld-фазы мембраны (Gonzalez et al., 2009). В то же время нельзя недооценивать роль изгиба мембраны в процессе формирования везикул (McMahon et al., 2005). В настоящее время установлено, что формирование изгиба мембраны клетки обеспечивается белковыми молекулами и липидами, входящими в состав мембраны. Цитоскелет клетки способен вызывать изгиб мембраны с последующим формированием выпячиваний, псевдоподий, выростов, учавствующих в фагоцитозе. Белковые молекулы, обладающие конической формой и входящие в состав мембраны, также вызывают изгибание мембраны (Hanzal-Bayer et al., 2007). Периферические мембранные белки -динамин, клатрин, покровные белки I и II (от англ. coat protein - COP), белки, содержащие bar-домены, сближают удаленные участки, формируя изгиб мембраны (McMahon et al., 2005). Кроме того, липидные молекулы, входящие в состав мембраны имеют разную пространственную структуру, например, перевернутая конусовидная форма характерна для лизофосфатидной кислоты и сфингомиелина, цилиндическая - для 1,2-диолеоил-sn-глицеро-3-фосфолхолина (ДОФХ), фосфатидилхолина и фосфатидилсерина, конусовидная - для 1,2-диолеоил^-глицеро-3-

фосфоэтаноламина (ДОФЭ) и фосфатидилэтаноламина (Sprong et al., 2001; Callan-Jones et al., 2011). Группировка определенных липидных молекул, а также перераспредление липидов между внешним и внутренним монослоем мембраны - увеличение количества липидных молекул во внешнем монослое по сравнению с внутренним, вызывает спонтанный изгиб мембраны, что приводит к отделению ЦПМ от цитоскелета и способствует формированию микровезикул на поверхности клетки (McMahon et al., 2005; D'Souza-Schorey et al., 2012).

Характерной особенностью молекулярного механизма формирования микровезикул является нарушение мембранной асимметрии (перемещение фосфатидилсерина в наружный монослой ЦПМ) (Freyssinet et al., 2010). Известно, что для ЦПМ характерно асимметричное распределение фосфолипидов между двумя монослоями (наружный монослой обогащен фосфатидилхолином и сфингомиелином, тогда как внутренний монослой содержит аминофосфолипиды - фосфатидилсерин (ФС) и фосфатидилэтаноламин (ФЭ)), которое находится под контролем ферментативного трансмембранного комплекса, включающего в себя такие ферменты, как аминофосфолипид-транслоказа, флоппаза, скрамблаза (Manno et al., 2002; Daleke, 2003). Перемещение ФС в наружный монослой катализирует АТФ-зависимый фермент с «флоппазной» активностью, при этом также происходит обратный процесс - транспортировка ФС во внутренний монослой с помощью фермента аминофосфолипид-транслоказы, обладающей «флиппазной» активностью, которая поддерживает исходное асимметричное распределение фосфолипидов (Manno et al., 2002; Daleke, 2003). Процесс нарушения асимметричности мембраны является Ca -зависимым. Поступление Ca2+ внутрь клетки происходит двумя путями: 1) быстрое кратковременное агонист-индуцированное высвобождение ионов кальция из Са2+-депо, представленных эндоплазматическим ретикулумом (ЭПР); 2) депо-управляемый вход кальция - медленный продолжительный приток внеклеточных ионов кальция через ЦПМ (Рисунок 2). При

увеличении концентрации ионов кальция в цитозоле происходит активация флоппазы, скрамблазы и одновременное ингибирование аминофосфолипид-транслоказы, что приводит к перемещению ФС преимущественно в наружный монослой ЦПМ (Morel et al., 2011). Перемещение ФС во внешний монослой ЦПМ играет важную роль в высвобождении микровезикул, что подтверждается наличием редкого наследственного заболевания, которое наследуется по аутосомно-рецессивному типу - синдрома Скотта. Основным симптомом синдрома Скотта является продолжительное кровотечение, причиной которого на биохимическом уровне является дефект фермента -скрамблазы. Отсутствие ферментативной активности вызывает ингибирование перемещения ФС во внешний монослой ЦПМ, что приводит к снижению количества высвобождаемых тромбоцитарных микровезикул, участвующих в свертывании крови (Piccin et al., 2007).

Увеличение внутриклеточной концентрации Ca2+ одновременно приводит к активации кальпаина, некоторых киназ, а также к ингибированию фосфатаз (Azevedo, 2012). Эти события в свою очередь приводят к реорганизации цитоскелета. Кальпаин - цистеиновая протеиназа семейства папаиназ (Piccin et al., 2007). Субстратом фермента кальпаина являются белки анкирины, которые связывают интегральные мембранные белки со спектрин-актиновым цитоскелетом, и собственно белки цитоскелета (спектрин и актин) (Puddu et al., 2010; Morel et al., 2011). Активированный кальпаин разрушает связь ЦПМ с цитоскелетом клетки и дезорганизует цитоскелет. Поэтому обработка тромбоцитов человека (Fox et al., 1990) и S49 клеток лимфомы мыши (Campbell et al., 2014) иономицином - веществом, индуцирующим поступление Ca2+ внутрь клетки,

Рисунок 2 - Схема молекулярного механизма формирования микровезикул. 1.Увеличение концентрации ионов кальция в клетке: А) высвобождение ионов кальция из Са2+-депо, представленных эндоплазматическим ретикулумом (ЭПР); Б) приток внеклеточных ионов кальция через ЦПМ. 2. Активация флоппазы и одновременное ингибирование аминофосфолипид -транслоказы, что ведет к перераспределению фосфолипидов -перемещение, главным образом, ФС в наружный монослой ЦПМ. 3. Активация протеазы кальпаина, которая разрушает якорный белок анкирин и белки цитоскелета - спектрин и актин. 4. Образование везикулы, обогащенной компонентами цитоплазмы клетки.

запускает вышеописанный механизм и приводит к повышению количества высвобождаемых микровезикул. Применение веществ, нарушающих связь гликопротеинов ЦПМ с цитоскелетом (дибукаин) (Бох & а!., 1990) и разрушающих актиновый цитоскелет клеток человека (латрункулин А) (Atanassoff & а!., 2014), то есть имитирующих действие активированной эндогенной протеазы - кальпаина, также приводит к увеличению количества

высвобождаемых внеклеточных везикул. Применение химического вещества, вызывающего дезорганизацию актинового цитоскелета клеток человека (цитохалазина D) к клеткам линии HT29 (аденокарциномы толстой кишки), также значительно увеличивает количество высвобождаемых микровезикул (Choi et al., 2012). Таким образом, дезорганизация актинового цитоскелета и отделение ЦПМ играет ключевую роль в процессе высвобождения микровезикул (Morel et al., 2011; Azevedo, 2012).

Следует отметить, что в результате формирования и высвобождения внеклеточных везикул, происходит непрерывное отщепление части цитоплазмы и ЦПМ клетки. Это приводит к изменению объема и площади клетки, поэтому предполагают, что существует компенсаторный механизм. Вероятно, восполнение утраченных частей клетки происходит путем встраивания мембраны экзоцитозных пузырьков в состав ЦПМ клетки, одновременно с процессами высвобождения внеклеточных везикул (Cocucci et al., 2007; Cocucci et al., 2015).

1.1.3 Теория паракринной стимуляции регенерации стволовыми клетками и участие внеклеточных везикул в регенерации и ангиогенезе

В области регенерационной медицины наиболее перспективным подходом является клеточная терапия, в том числе с применением СК человека. Долгое время полагали, что благоприятный эффект терапии связан исключительно с замещением трансплантированными СК утраченных клеток организма. Однако на модели повреждения почек, вызванного введением токсических доз глицерола, было обнаружено, что трансплантированные СК находятся в месте повреждения не более нескольких дней и впоследствии не обнаруживаются в составе ткани (Duffield et al., 2005; Biancone et al., 2012). Кроме того, было обнаружено, что питательная среда, в которой росли СК, также обладает регенеративным потенциалом, подобно СК. Takahashi et al. показали, что инъекция питательной среды МСК нивелирует последствия

инфаркта у крыс: происходит увеличение плотности капилляров в ишемизированной ткани, уменьшение размера повреждения и улучшение сердечной деятельности (Takahashi et al., 2006). Поэтому исследователи предположили, что основной положительный эффект от трансплантации СК в область повреждения связан с паракринным воздействием на клетки микроокружения - теория паракринной стимуляции. Согласно данной теории трансплантированные клетки воздействуют на клетки-микроокружения путем секреции биоактивных молекул - цитокины, хемокины, факторы роста, такие как инсулиноподобный фактор роста (от англ. Insulin-like Growth Factor - IGF-1) (Imberti et al., 2007), фактор роста эндотелия сосудов (от англ. Vascular Endothelial Growth Factor -VEGF) (Togel et al., 2009), фактор роста фибробластов (от англ. Fibroblast growth factor-2 - FGF-2) фактор роста гепатоцитов (от англ. hepatocyte growth factor - HGF), и внеклеточных везикул, которые являются медиаторами межклеточной коммуникации, во внеклеточное пространство.

Недавние исследования на различных моделях повреждения почек (Bruno et al., 2009), сердца (Lai et al., 2010; Arslan et al., 2013), печени (Herrera et al., 2010) и нервной ткани (Xin et al., 2013) показали, что внеклеточные везикулы СК обладают свойством стимулировать регенерацию подобно СК-родителям. На модели повреждения почек цисплатиной было показано увеличение пролиферации эпителиальных клеток почечных канальцев и снижение количества апоптозных клеток in vitro, а также снижение уровня азота мочевины и креатинина в сыворотке крови in vivo после инъекции внеклеточных везикул МСК (Bruno et al., 2009). Внеклеточные везикулы СК печени стимулируют выживаемость и пролиферацию гепатоцитов, а также ускоряют регенерацию печени после 70% гепатоэктомии (Herrera et al., 2010). Внеклеточные везикулы СК сердца также способствуют регенерации сердечно-сосудистой системы, стимулируя миграцию эндотелиальных клеток посредством активации ERK-сигнального пути (от англ. Extracellular Signalregulated kinase pathway) и ангиогенез посредством индукции экспрессии

матриксных металлопротеиназ и секреции VEGF (Vrijsen et al., 2010). Известно, что восстановление кровоснабжения, обеспечивающего приток питательных веществ, кислорода и отток продуктов метаболизма, является необходимым условием регенерации ткани. Внеклеточные везикулы МСК стимулируют пролиферацию эндотелиальных клеток, формирование капилляро-подобных структур in vitro. На модели ишемии задних конечностей крыс МСК и внеклеточные везикулы МСК значительно улучшают кровоснабжение ткани (Zhang et al., 2012). На лабораторных животных было показано, что инъекция внеклеточных везикул CD34-положительных клеток улучшает жизнеспособность, индуцирует пролиферацию и формирование капилляро-подобных структур эндотелиальными клетками in vitro и ангиогенез in vivo (Sahoo et al., 2011).

Способность стимулировать ангиогенез характерна также для внеклеточных везикул, выделяемых опухолевыми клетками. Так как быстрорастущим опухолевым клеткам для обеспечения своего питания и газообмена необходимо стимулировать прорастание кровеносных сосудов. Было показано, что внеклеточные везикулы стволовых опухолевых клеток почки человека способны стимулировать формирование кровеносных капилляров in vivo. Анализ содержимого внеклеточных везикул выявил наличие мРНК генов, вовлеченных в ангиогенез, в том числе мРНК факторов роста, таких как VEGF, FGF2, а также ангиопоэтин 1, эфрин A3, матриксные металлопротеиназы 2 и 9 (Grange et al., 2011).

Таким образом, секретом клеток человека помимо растворимых биоактивных молекул составляют внеклеточные везикулы, которые отчасти обеспечивают паракринное действие трансплантированных клеток на клетки микроокружения (De Jong et al., 2014). Это подтверждается приведенными выше данными о регенеративном потенциале внеклеточных везикул СК при повреждениях почек, сердца, печени и нервной ткани. Проявление внеклеточными везикулами СК биологических свойств клеток-родителей и благоприятное воздействие на регенерацию и ангиогенез, позволяют

использовать внеклеточные везикулы СК в качестве нового терапевтического инструмента, а также совместно с существующими методами для достижения положительного синергетического эффекта.

1.1.4 Концепция бесклеточной терапии на основе внеклеточных

везикул

Применение СК для стимуляции регенерации проявило себя крайне перспективной стратегией лечения, поскольку СК обладают высоким проангиогенным и регенеративным действием на клетки микроокружения. СК взрослого организма используются для терапии таких заболеваний, как остеонекроз, дегенерация межпозвонковых дисков, инфаркт миокарда, повреждение легких, вызванное эндотоксинами E. coli, повреждение печени и почек, дегенерация ретины, аутоиммунный энцефаломиелит, остеоартрит, раны различной этиологии и другое (Wei et al., 2013).

Однако существует риск применения СК в клеточной терапии, связанный с неограниченным клеточным ростом и формированием опухолей. Известно, что экспериментальная инъекция ФСК в мозг и спинномозговую жидкость мальчика 9 лет больному атаксией-телеангиэктазией (наследственное заболевание, симптомом которого является расстройство координации движений в результате гибели нейронов), привела к образованию в головном и спинном мозге мальчика множественных медленно растущих опухолей - производных трансплантированных ФСК (Amariglio et al., 2009). Следует отметить, что опасность неконтролируемого деления несут не только ЭСК и ФСК, но и СК взрослого человека. Так как в процессе получения СК и наработки большего количества трансплантируемого материала in vitro существует опасность контаминации, а также повреждения генетического аппарата (Rosland et al., 2009). Слудет отметить, что существует риск спонтанной дифференцировки трансплантированных СК в нежелательном направлении in vivo. Описана дифференцировка МСК в адипогенном направлении в почках (Kunter et al.,

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Гомзикова Марина Олеговна, 2016 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Балезин С.А. Основы физической и коллоидной химии / С.А. Балезин, Б.В. Ерофеев, Н.И. Подобаев - Москва: Просвещение, 1975. - 398с.

2. Иванов Д.В. Медицинское образование. Координация научных исследований. Экономические и юридические вопросы медицины. / Д.В. Иванов, А.В. Чабаненко // Вестник новых медицинских технологий - 2010. -Т.17 - №2 - С.286-290.

3. Кореньков Д.А. Роль микрочастиц в межклеточной коммуникации / Д.А. Кореньков, О.М. Овчинникова, С.А. Сельков, Д.И. Соколов // Цитология -

2014. - Т.56 - №7 - С.480-488.

4. Лукьянчиков В. Стволовые клетки: вчера, сегодня и завтра / В.Лукьянчиков // Врач - 2014. - Т.4 - С.2-4.

5. Миллер Г.Г. Взаимосвязь клеточного микровезикулярного транспорта с персистенцией патогенов in vitro и in vivo / Г.Г.Миллер, А.Я. Мухачев, А.Ф. Быковский // Журнал микробиологии, эпидемиологии и иммунобиологии -

2015. - Т.4 - С.63-70.

6. Мулдер М. Введение в мембранную технологию / М.Мулдер; перевод с англ А. Ю. Алентьева, Г. П. Ямпольской. - Москва: Мир, 1999. - 513с.

7. Мухитов А.Р. Современная световая микроскопия в биологических и медицинских исследованиях / А.Р. Мухитов, С.С.Архипова, Е.Е. Никольский - Москва: Наука, 2011. - 140с.

8. Невмержицкая Ю.Ю Практикум по физиологии и биохимиии растений (белки и ферменты) / Ю.Ю. Невмержицкая, О.А. Тимофеева - Казань: Казанский университет, 2012. - 36с.

9. Плескова С.Н. Функциональные особенности планарных рафтов и кавеол в клеточной физиологии / С.Н. Плескова, В.Н. Крылов, А.В. Дерюгина // Успехи современной биологии - 2015. - Т.135 - №6 - С.609-617.

10. Спирин А.С. Молекулярная биология: рибосомы и биосинтез белка / А. С. Спирин - Москва: Академия, 2011. - 513с.

11. Ченцов Ю. С. Введение в клеточную биологию / Ю.С.Ченцов - Москва: ИКЦ "Академкнига", 2004. - 495с.

12. Acquarone M. Mitomycin-treated undifferentiated embryonic stem cells as a safe and effective therapeutic strategy in a mouse model of Parkinson's disease / M.Acquarone, T.M. de Melo, F. Meireles, J. Brito-Moreira, G. Oliveira, S.T. Ferreira, N.G. Castro, F. Tovar-Moll, J.C. Houzel, S.K. Rehen // Front Cell Neurosci - 2015. - V.9 - P.97.

13. Akbasak A. Reconstituted basement membrane (matrigel) enhances the growth of human glioma cell lines in nude mice / A.Akbasak, C.C. Toevs, D.W. Laske // J Neurooncol - 1996. - V.27 - №1 - P.23-30.

14. Akers J.C. Biogenesis of extracellular vesicles (EV): exosomes, microvesicles, retrovirus-like vesicles, and apoptotic bodies / J.C. Akers, D. Gonda, R. Kim, B.S. Carter, C.C. Chen // J Neurooncol - 2013. - V.113 - №1 - P.1-11.

15. Akyurekli C. A systematic review of preclinical studies on the therapeutic potential of mesenchymal stromal cell-derived microvesicles / C.Akyurekli, Y. Le, R.B. Richardson, D. Fergusson, J. Tay, D.S. Allan // Stem Cell Rev - 2015. - V.11 - №1 - P.150-160.

16. Altieri S.L. Exosomes from plasmacytoma cells as a tumor vaccine / S.L. Altieri, A.N. Khan,T.B. Tomasi // J Immunother - 2004. - V.27 - №4 - P.282-288.

17. Alvarez-Erviti L. Delivery of siRNA to the mouse brain by systemic injection of targeted exosomes / L.Alvarez-Erviti, Y. Seow, H. Yin, C. Betts, S. Lakhal, M.J. Wood // Nat Biotechnol - 2011. - V.29 - №4 - P.341-345.

18. Amariglio N. Donor-derived brain tumor following neural stem cell transplantation in an ataxia telangiectasia patient / N.Amariglio, A. Hirshberg, B. W. Scheithauer, Y. Cohen, R. Loewenthal, L. Trakhtenbrot, N. Paz, M. Koren-Michowitz, D. Waldman, L. Leider-Trejo, A. Toren, S. Constantini, ,G. Rechavi // PLoS Med - 2009. - V.6 - №2 - P.221-231.

19. Antonyak M.A. Cancer cell-derived microvesicles induce transformation by transferring tissue transglutaminase and fibronectin to recipient cells / M.A.

Antonyak, B. Li, L.K. Boroughs, J.L. Johnson, J.E. Druso, K.L. Bryant, D.A. Holowka, R.A. Cerione // Proc Natl Acad Sci USA - 2011. - V.108 - №12 -P.4852-4857.

20. Araldi E. International Society for Extracellular Vesicles: first annual meeting / E. Araldi, E.M. Kramer-Albers, E.N. Hoen, H. Peinado, K.M. Psonka-Antonczyk, P. Rao, G. van Niel, M. Yanez-Mo, I. Nazarenko // J Extracell Vesicles - 2012. - V.1 - P.11.

21. Arnaoutova I. The endothelial cell tube formation assay on basement membrane turns 20: state of the science and the art / I. Arnaoutova, J. George, H.K. Kleinman, G. Benton // Angiogenesis - 2009. - V.12 - №3 - P.267-274.

22. Arshinova O.Yu. Lyophilization of liposomal drug forms / O.Yu. Arshinova, E.V. Sanarova, A.V. Lantsova, N.A. Oborotova // Pharmaceutical Chemistry Journal - 2012. - V.46 - №4 - P.228-233.

23. Arslan F. Mesenchymal stem cell-derived exosomes increase ATP levels, decrease oxidative stress and activate PI3K/Akt pathway to enhance myocardial viability and prevent adverse remodeling after myocardial ischemia/reperfusion injury / F. Arslan, R.C. Lai, M.B. Smeets, L. Akeroyd, A. Choo, E.N. Aguor, L. Timmers, H.V. van Rijen, P.A. Doevendans, G. Pasterkamp, S.K. Lim, D. P. de Kleijn // Stem Cell Res - 2013. - V.10 - №3 - P.301-312.

24. Atanassoff A.P. Microvesicle shedding and lysosomal repair fulfill divergent cellular needs during the repair of streptolysin O-induced plasmalemmal damage / A. P. Atanassoff, H. Wolfmeier, R. Schoenauer, A. Hostettler, A. Ring, A. Draeger, E. B. Babiychuk // PLoS One - 2014. - V.9 - №2 - P.1-11.

25. Azevedo L. Microparticles and Exosomes: Are They Part of Important Pathways in Sepsis Pathophysiology? / L.Azevedo // - 2012. - P.155-166.

26. Baglio S.R. Mesenchymal stem cell secreted vesicles provide novel opportunities in (stem) cell-free therapy / S. R. Baglio, D.M. Pegtel, N. Baldini // Front Physiol - 2012. - V.3 - - P.1-11.

27. Baglio S.R. Human bone marrow- and adipose-mesenchymal stem cells secrete exosomes enriched in distinctive miRNA and tRNA species / S.R. Baglio,

K. Rooijers, D. Koppers-Lalic, F.J. Verweij, M. Perez Lanzon, N. Zini, B. Naaijkens, F. Perut, H.W. Niessen, N. Baldini, D. M. Pegtel // Stem Cell Res Ther

- 2015. - V.6 - P.1-20.

28. Baj-Krzyworzeka M. Tumour-derived microvesicles carry several surface determinants and mRNA of tumour cells and transfer some of these determinants to monocytes / M.Baj-Krzyworzeka, R. Szatanek, K. Weglarczyk, J. Baran, B. Urbanowicz, P. Branski, M.Z. Ratajczak, M. Zembala // Cancer Immunol Immunother - 2006. - V.55 - №7 - P.808-818.

29. Balaj L. Tumour microvesicles contain retrotransposon elements and amplified oncogene sequences / L.Balaj, R. Lessard, L. Dai, Y.J. Cho, S.L. Pomeroy, X.O. Breakefield, J. Skog // Nat Commun - 2011. - V.2 - - P.1-19.

30. Baraniak P.R. Stem cell paracrine actions and tissue regeneration / P.R.Baraniak, T.C. McDevitt // Regen Med - 2010. - V.5 - №1 - P.121-143.

31. Biancone L. Therapeutic potential of mesenchymal stem cell-derived microvesicles / L.Biancone, S. Bruno, M.C. Deregibus, C. Tetta, G. Camussi // Nephrol Dial Transplant - 2012. - V.27 - №8 - P.3037-3042.

32. Bomberger J.M. Long-distance delivery of bacterial virulence factors by Pseudomonas aeruginosa outer membrane vesicles / J.M.Bomberger, D.P. Maceachran, B.A. Coutermarsh, S. Ye, G.A. O'Toole, B. A. Stanton // PLoS Pathog - 2009. - V.5 - №4 - P.1-13.

33. Bousquet P.F. Effects of cytochalasin B in culture and in vivo on murine Madison 109 lung carcinoma and on B16 melanoma / P.F.Bousquet, L.A. Paulsen, C. Fondy, K.M. Lipski, K.J. Loucy, T. P. Fondy // Cancer Res - 1990. - V.50 - №5

- P.1431-1439.

34. Breitbach M. Potential risks of bone marrow cell transplantation into infarcted hearts / M.Breitbach, T. Bostani, W. Roell, Y. Xia, O. Dewald, J.M. Nygren, J.W. Fries, K. Tiemann, H. Bohlen, J. Hescheler, A. Welz, W. Bloch, S. E. Jacobsen and B. K. Fleischmann // Blood - 2007. - V.110 - №4 - P.1362-1369.

35. Bridges P.A. The effects of freeze-drying on the stability of liposomes to jet nebulization / P.A.Bridges, K.M. Taylor // J Pharm Pharmacol - 2001. - V.53 - №3

- P.393-398.

36. Brown L. Extracellular vesicles produced by the Gram-positive bacterium Bacillus subtilis are disrupted by the lipopeptide surfactin / L.Brown, A. Kessler, P. Cabezas-Sanchez, J.L. Luque-Garcia, A. Casadevall // Mol Microbiol - 2014. -V.93 - №1 - P.183-198.

37. Bruno J. Polypeptide synthesis in enucleated mouse fibroblasts / J.Bruno, J. J. Lucas // Cell Biol Int Rep - 1983. - V.7 - №8 - P.651-659.

38. Bruno S. Microvesicles derived from mesenchymal stem cells enhance survival in a lethal model of acute kidney injury / S.Bruno, C. Grange, F. Collino, M.C. Deregibus, V. Cantaluppi, L. Biancone, C. Tetta and G. Camussi // PLoS One - 2012. - V.7 - №3 - P.1-11.

39. Bruno S. Mesenchymal stem cell-derived microvesicles protect against acute tubular injury / S.Bruno, C. Grange, M.C. Deregibus, R.A. Calogero, S. Saviozzi, F. Collino, L. Morando, A. Busca, M. Falda, B. Bussolati, C. Tetta and G. Camussi // J Am Soc Nephrol - 2009. - V.20 - №5 - P.1053-1067.

40. Bunn C.L. Cytoplasmic inheritance of chloramphenicol resistance in mouse tissue culture cells / C.L.Bunn, D.C. Wallace, J.M. Eisenstadt // Proc Natl Acad Sci U S A - 1974. - V.71 - №5 - P.1681-1685.

41. Callan-Jones A. Curvature-driven lipid sorting in biomembranes / A.Callan-Jones, B. Sorre, P. Bassereau // Cold Spring Harb Perspect Biol - 2011. - V.3 - №2

- P.1-14.

42. Campbell L.E. Membrane properties involved in calcium-stimulated microparticle release from the plasma membranes of S49 lymphoma cells / L.E.Campbell, J. Nelson, E. Gibbons, A.M. Judd, J.D. Bell // ScientificWorldJournal - 2014. - V.2014 - - P.1-8.

43. Camussi G. Role of stem-cell-derived microvesicles in the paracrine action of stem cells / G.Camussi, M.C. Deregibus, V. Cantaluppi // Biochem Soc Trans -2013. - V.41 - №1 - P.283-287.

44. Carmeliet P. Molecular mechanisms and clinical applications of angiogenesis / P.Carmeliet, R.K. Jain // Nature - 2011. - V.473 - №7347 - P.298-307.

45. Carter S. B. Effects of cytochalasins on mammalian cells / S.B.Carter // Nature - 1967. - V.213 - №5073 - P.261-264.

46. Cavenee W.K. Regulation of cholesterol biosynthesis in enucleated cells / W.K.Cavenee, H.W. Chen, A.A. Kandutsch // J Biol Chem - 1981. - V.256 - №6 -P.2675-2681.

47. Chen J. Proangiogenic compositions of microvesicles derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells / J.Chen, Z. Liu, M.M. Hong, H. Zhang, C. Chen, M. Xiao, J. Wang, F. Yao, M. Ba, J. Liu, Z. K. Guo and J. Zhong // PLoS One - 2014. - V.9 - №12 - P. 1-16.

48. Cherqui S. Lentiviral gene delivery of vMIP-II to transplanted endothelial cells and endothelial progenitors is proangiogenic in vivo / S.Cherqui, K.M. Kingdon, C. Thorpe, S.M. Kurian, D.R. Salomon // Mol Ther - 2007. - V.15 - №7 -P.1264-1272.

49. Chironi G.N. Endothelial microparticles in diseases / G.N.Chironi, C.M. Boulanger, A. Simon, F. Dignat-George, J.M. Freyssinet, A. Tedgui // Cell Tissue Res - 2009. - V.335 - №1 - P.143-151.

50. Choi D.S. Proteomics, transcriptomics and lipidomics of exosomes and ectosomes / D.S.Choi, D.K. Kim, Y.K. Kim, Y.S. Gho // Proteomics - 2013. - V.13 - №10-11 - P.1554-1571.

51. Choi D.S. Proteomics of extracellular vesicles: Exosomes and ectosomes / D.S.Choi, D.K. Kim, Y.K. Kim,Y.S. Gho // Mass Spectrom Rev - 2015. - V.34 -№4 - P.474-490.

52. Choi D.S. Proteomic analysis of microvesicles derived from human colorectal cancer ascites / D.S.Choi, J.O. Park, S.C. Jang, Y.J. Yoon, J.W. Jung, D. Y. Choi, J.W. Kim, J.S. Kang, J. Park, D. Hwang, K.H. Lee, S.H. Park, Y.K. Kim, D.M. Desiderio, K.P. Kim, Y.S. Gho // Proteomics - 2011. - V.11 - №13 - P.2745-2751.

53. Choi D.S. The protein interaction network of extracellular vesicles derived from human colorectal cancer cells / D.S.Choi, J.S. Yang, E.J. Choi, S.C. Jang, S. Park, O.Y. Kim, D. Hwang, K.P. Kim, Y.K. Kim, S. Kim, Y.S. Gho // J Proteome Res - 2012. - V.11 - №2 - P.1144-1151.

54. Ciccarone V. Phenotypic diversification in human neuroblastoma cells: expression of distinct neural crest lineages / V.Ciccarone, B.A. Spengler, M.B. Meyers, J.L. Biedler, R.A. Ross // Cancer Res - 1989. - V.49 - №1 - P.219-225.

55. Clancy J.W. Regulated delivery of molecular cargo to invasive tumour-derived microvesicles / J.W.Clancy, A. Sedgwick, C. Rosse, V. Muralidharan-Chari, G. Raposo, M. Method, P. Chavrier, C. D'Souza-Schorey // Nat Commun -2015. - V.6 - - P.1-21.

56. Cocucci E. Ectosomes and exosomes: shedding the confusion between extracellular vesicles / E.Cocucci, J. Meldolesi // Trends Cell Biol - 2015. - V.25 -№6 - P.364-372.

57. Cocucci E. Enlargeosome traffic: exocytosis triggered by various signals is followed by endocytosis, membrane shedding or both / E.Cocucci, G. Racchetti, P. Podini, J. Meldolesi // Traffic - 2007. - V.8 - №6 - P.742-757.

58. Compagna R. Cell Therapy in Patients with Critical Limb Ischemia / R.Compagna, B. Amato, S. Massa, M. Amato, R. Grande, L. Butrico, S. de Franciscis, R. Serra // Stem Cells Int - 2015. - V.2015 - - P.1-14.

59. Cooper J.A. Effects of cytochalasin and phalloidin on actin / J.A.Cooper // J Cell Biol - 1987. - V.105 - №4 - P.1473-1478.

60. Crenshaw A.H. Mass enucleation of tissue culture cell monolayers / A.H.Crenshaw, J.W. Shay, L.R.Murrell // Journal of Tissue Culture Methods -1980. - V.6 - P.127-130.

61. Crowley J.T. Lipid exchange between Borrelia burgdorferi and host cells / J.T.Crowley, A.M. Toledo, T.J. LaRocca, J.L. Coleman, E. London, J.L. Benach // PLoS Pathog - 2013. - V.9 - №1 - P.1-17.

62. D'Souza-Schorey C. Tumor-derived microvesicles: shedding light on novel microenvironment modulators and prospective cancer biomarkers / C.D'Souza-Schorey, J.W. Clancy // Genes Dev - 2012. - V.26 - №12 - P.1287-1299.

63. Aldridge D.C. The Structures of Cytochalasins A and B / D.C. Aldridge, J.J. Armstrong, R.N. Speake, W.B. Turner // Royal Society of chemistry - J. Chem. Soc. C - 1967. - P. 1667-1676.

64. Daleke D.L. Regulation of transbilayer plasma membrane phospholipid asymmetry / D.L. Daleke // J Lipid Res - 2003. - V.44 - №2 - P.233-242.

65. Day J.G. Cryopreservation and freeze-drying protocols / J.G.Day, G. Stacey

- N.J.:Humana Press, 2007. - 368p.

66. De Jong O.G. Extracellular vesicles: potential roles in regenerative medicine / O.G.De Jong, B.W. Van Balkom, R.M. Schiffelers, C.V. Bouten, M.C. Verhaar // Front Immunol - 2014. - V.5 - - P.1-13.

67. Deatherage B.L. Membrane vesicle release in bacteria, eukaryotes, and archaea: a conserved yet underappreciated aspect of microbial life / B.L.Deatherage, B.T. Cookson // Infect Immun - 2012. - V.80 - №6 - P.1948-1957.

68. Del Conde I. Tissue-factor-bearing microvesicles arise from lipid rafts and fuse with activated platelets to initiate coagulation / I.Del Conde, C.N. Shrimpton, P. Thiagarajan, J.A. Lopez // Blood - 2005. - V.106 - №5 - P.1604-1611.

69. Duffield J.S. Restoration of tubular epithelial cells during repair of the postischemic kidney occurs independently of bone marrow-derived stem cells / J.S.Duffield, K.M. Park, L.L. Hsiao, V.R. Kelley, D.T. Scadden, T. Ichimura, J.V. Bonventre // J Clin Invest - 2005. - V.115 - №7 - P.1743-1755.

70. Eppler S.M. A target-mediated model to describe the pharmacokinetics and hemodynamic effects of recombinant human vascular endothelial growth factor in humans / S.M. Eppler, D.L. Combs, T.D. Henry, J.J. Lopez, S.G. Ellis, J.H. Yi, B. H. Annex, E.R. McCluskey, T.F. Zioncheck // Clin Pharmacol Ther - 2002. - V.72

- №1 - P.20-32.

71. Escrevente C. Interaction and uptake of exosomes by ovarian cancer cells /

C.Escrevente, S. Keller, P. Altevogt, J. Costa // BMC Cancer - 2011. - V.11 - P.1-10.

72. Flaumenhaft R. Platelet- and megakaryocyte-derived microparticles / R.Flaumenhaft, A.T. Mairuhu, J.E. Italiano // Semin Thromb Hemost - 2010. -V.36 - №8 - P.881-887.

73. Fournier R.E. A general high-efficiency procedure for production of microcell hybrids / R.E.Fournier // Proc Natl Acad Sci U S A - 1981. - V.78 - №10

- P.6349-6353.

74. Fournier R.E. Microcell-mediated transfer of murine chromosomes into mouse, Chinese hamster, and human somatic cells / R.E.Fournier, F.H. Ruddle // Proc Natl Acad Sci USA - 1977. - V.74 - №1 - P.319-323.

75. Fox J.E. Role of the membrane skeleton in preventing the shedding of procoagulant-rich microvesicles from the platelet plasma membrane / J.E.Fox, C.

D. Austin, J.K. Boyles, P. K. Steffen // J Cell Biol - 1990. - V.111 - №2 - P.483-493.

76. Freyssinet J.M. Formation of procoagulant microparticles and properties / J.M.Freyssinet, F. Toti // Thromb Res - 2010. - V.125 - P.46-48.

77. Fruh V. How to catch a membrane protein in action: a review of functional membrane protein immobilization strategies and their applications / V.Fruh, I.J. AP, G. Siegal // Chem Rev - 2011. - V.111 - №2 - P.640-656.

78. Galindo-Hernandez O. Elevated concentration of microvesicles isolated from peripheral blood in breast cancer patients / O.Galindo-Hernandez, S. Villegas-Comonfort, F. Candanedo, M. C. Gonzalez-Vazquez, S. Chavez-Ocana, X. Jimenez-Villanueva, M. Sierra-Martinez, E. P. Salazar // Arch Med Res - 2013.

- V.44 - №3 - P.208-214.

79. Gatti S. Microvesicles derived from human adult mesenchymal stem cells protect against ischaemia-reperfusion-induced acute and chronic kidney injury / S.Gatti, S. Bruno, M. C. Deregibus, A. Sordi, V. Cantaluppi, C. Tetta, G. Camussi // Nephrol Dial Transplant - 2011. - V.26 - №5 - P. 1474-1483.

80. Gonzalez L.J. The influence of membrane physical properties on microvesicle release in human erythrocytes / L.J.Gonzalez, E. Gibbons, R. W. Bailey, J. Fairbourn, T. Nguyen, S. K. Smith, K. B. Best, J. Nelson, A. M. Judd, J.D. Bell // PMC Biophys - 2009. - V.2 - №1 - P.1-7.

81. Grande R. Outer Membrane Vesicles (OMVs) from Biofilm and Planktonic Phase Associated with Extracellular DNA (eDNA) / R.Grande, M. C. Di Marcantonio, I. Robuffo, A. Pompilio, C. Celia, L. Di Marzio, D. Paolino, M. Codagnone, R. Muraro, P. Stoodley, L. Hall-Stoodley, G. Mincione // Front Microbiol - 2015. - V.6 - - P.1-11.

82. Grange C. Microvesicles released from human renal cancer stem cells stimulate angiogenesis and formation of lung premetastatic niche / C.Grange, M. Tapparo, F. Collino, L. Vitillo, C. Damasco, M. C. Deregibus, C. Tetta, B. Bussolati, G. Camussi // Cancer Res - 2011. - V.71 - №15 - P.5346-5356.

83. Greening D.W. A protocol for exosome isolation and characterization: evaluation of ultracentrifugation, density-gradient separation, and immunoaffinity capture methods / D.W.Greening, R. Xu, H. Ji, B. J. Tauro, R. J. Simpson // Methods Mol Biol - 2015. - V.1295 - - P.179-209.

84. Guescini M. Astrocytes and Glioblastoma cells release exosomes carrying mtDNA / M.Guescini, S. Genedani, V. Stocchi, L. F. Agnati // J Neural Transm (Vienna) - 2010. - V.117 - №1 - P.1-4.

85. Guescini M. C2C12 myoblasts release micro-vesicles containing mtDNA and proteins involved in signal transduction / M.Guescini, D. Guidolin, L. Vallorani, L. Casadei, A. M. Gioacchini, P. Tibollo, M. Battistelli, E. Falcieri, L. Battistin, L. F. Agnati, V. Stocchi // Exp Cell Res - 2010. - V.316 - №12 - P.1977-1984.

86. Gupta M.K. Mechanism and its regulation of tumor-induced angiogenesis / M. K.Gupta, R. Y. Qin // World J Gastroenterol - 2003. - V.9 - №6 - P. 1144-1155.

87. Hacein-Bey-Abina S. Insertional oncogenesis in 4 patients after retrovirus-mediated gene therapy of SCID-X1 / S.Hacein-Bey-Abina, A. Garrigue, G.P. Wang, J. Soulier, A. Lim, E. Morillon, E. Clappier, L. Caccavelli, E. Delabesse, K.

Beldjord, V. Asnafi, E. MacIntyre, L. Dal Cortivo, I. Radford, N. Brousse, F. Sigaux, D. Moshous, J. Hauer, A. Borkhardt, B. H. Belohradsky, U. Wintergerst, M. C. Velez, L. Leiva, R. Sorensen, N. Wulffraat, S. Blanche, F. D. Bushman, A. Fischer, M. Cavazzana-Calvo // J Clin Invest - 2008. - V.118 - №9 - P.3132-3142.

88. Hanzal-Bayer M.F. Lipid rafts and membrane traffic / M. F.Hanzal-Bayer, J.F. Hancock // FEBS Lett - 2007. - V.581 - №11 - P.2098-2104.

89. Hao L. Stem cell-based therapies for ischemic stroke / L.Hao, Z. Zou, H. Tian, Y. Zhang, H. Zhou, L. Liu // Biomed Res Int - 2014. - V.2014 - P.1-11.

90. Heins M. Storage of serum or whole blood samples? Effects of time and temperature on 22 serum analytes / M.Heins, W. Heil, W. Withold // Eur J Clin Chem Clin Biochem - 1995. - V.33 - №4 - P.231-238.

91. Herberts C.A. Risk factors in the development of stem cell therapy / C.A.Herberts, M.S. Kwa, H. P. Hermsen // J Transl Med - 2011. - V.9 - P.1-10.

92. Herrera M.B. Human liver stem cell-derived microvesicles accelerate hepatic regeneration in hepatectomized rats / M.B.Herrera, V. Fonsato, S. Gatti, M. C. Deregibus, A. Sordi, D. Cantarella, R. Calogero, B. Bussolati, C. Tetta, G. Camussi // J Cell Mol Med - 2010. - V.14 - №6B - P.1605-1618.

93. Hong B.S. J. Colorectal cancer cell-derived microvesicles are enriched in cell cycle-related mRNAs that promote proliferation of endothelial cells / B.S.Hong, J. H. Cho, H. Kim, E. J. Choi, S. Rho, J. Kim, J. H. Kim, D. S. Choi, Y. K. Kim, D. Hwang and Y. S. Gho // BMC Genomics - 2009. - V.10 - - P.1-12.

94. Honig M.G. Fluorescent carbocyanine dyes allow living neurons of identified origin to be studied in long-term cultures / M.G.Honig, R.I. Hume // J Cell Biol - 1986. - V.103 - №1 - P. 171-187.

95. Huang J. Genetic modification of mesenchymal stem cells overexpressing CCR1 increases cell viability, migration, engraftment, and capillary density in the injured myocardium / J.Huang, Z. Zhang, J. Guo, A. Ni, A. Deb, L. Zhang, M. Mirotsou, R.E. Pratt, V.J. Dzau // Circ Res - 2010. - V.106 - №11 - P.1753-1762.

96. Hugel B. Membrane microparticles: two sides of the coin / B.Hugel, M. C. Martinez, C. Kunzelmann and J. M. Freyssinet // Physiology (Bethesda) - 2005. -V.20 - - P.22-27.

97. Imberti B. Insulin-like growth factor-1 sustains stem cell mediated renal repair / B.Imberti, M. Morigi, S. Tomasoni, C. Rota, D. Corna, L. Longaretti, D. Rottoli, F. Valsecchi, A. Benigni, J. Wang, M. Abbate, C. Zoja, G. Remuzzi // J Am Soc Nephrol - 2007. - V.18 - №11 - P.2921-2928.

98. Ji H. Deep sequencing of RNA from three different extracellular vesicle (EV) subtypes released from the human LIM1863 colon cancer cell line uncovers distinct miRNA-enrichment signatures / H.Ji, M. Chen, D. W. Greening, W. He, A. Rai, W. Zhang and R. J. Simpson // PLoS One - 2014. - V.9 - №10 - P. 1-10.

99. Jimenez J.J. Endothelial cells release phenotypically and quantitatively distinct microparticles in activation and apoptosis / J.J.Jimenez, W. Jy, L. M. Mauro, C. Soderland, L. L. Horstman and Y. S. Ahn // Thromb Res - 2003. -V.109 - №4 - P.175-180.

100. Kahlert C. Identification of double-stranded genomic DNA spanning all chromosomes with mutated KRAS and p53 DNA in the serum exosomes of patients with pancreatic cancer / C.Kahlert, S. A. Melo, A. Protopopov, J. Tang, S. Seth, M. Koch, J. Zhang, J. Weitz, L. Chin, A. Futreal, R. Kalluri // J Biol Chem -2014. - V.289 - №7 - P.3869-3875.

101. Kaiser H.J. Order of lipid phases in model and plasma membranes / H.J.Kaiser, D. Lingwood, I. Levental, J. L. Sampaio, L. Kalvodova, L. Rajendran and K. Simons // Proc Natl Acad Sci USA - 2009. - V.106 - №39 - P.16645-16650.

102. Kang D. Proteomic analysis of exosomes from human neural stem cells by flow field-flow fractionation and nanoflow liquid chromatography-tandem mass spectrometry / D.Kang, S. Oh, S.M. Ahn, B.H. Lee, M. H. Moon // J Proteome Res - 2008. - V.7 - №8 - P.3475-3480.

103. Kawamoto T. Tumor-derived microvesicles induce proangiogenic phenotype in endothelial cells via endocytosis / T.Kawamoto, N. Ohga, K. Akiyama, N.

Hirata, S. Kitahara, N. Maishi, T. Osawa, K. Yamamoto, M. Kondoh, M. Shindoh, Y. Hida and K. Hida // PLoS One - 2012. - V.7 - №3 - P.1-12.

104. Khoo C.P. A comparison of methods for quantifying angiogenesis in the Matrigel assay in vitro / C.P. Khoo, K. Micklem, S.M. Watt // Tissue Eng Part C Methods - 2011. - V.17 - №9 - P.895-906.

105. Kleinman H.K. Matrigel: basement membrane matrix with biological activity / H.K.Kleinman, G. R. Martin // Semin Cancer Biol - 2005. - V.15 - №5 -P.378-386.

106. Klymchenko A.S. Fluorescent probes for lipid rafts: from model membranes to living cells / A. S.Klymchenko, R. Kreder // Chem Biol - 2014. - V.21 - №1 -P.97-113.

107. Krogh A. Predicting transmembrane protein topology with a hidden Markov model: application to complete genomes / A.Krogh, B. Larsson, G. von Heijne, E. L. Sonnhammer // J Mol Biol - 2001. - V.305 - №3 - P.567-580.

108. Krondahl U. Cells reconstituted from cell fragments of two different species multiply and form colonies / U. Krondahl, N. Bols, T. Ege, S. Linder, N. R. Ringertz // Proc Natl Acad Sci U S A - 1977. - V.74 - №2 - P.606-609.

109. Kuehn M.J. Bacterial outer membrane vesicles and the host-pathogen interaction / M. J.Kuehn, N. C. Kesty // Genes Dev - 2005. - V.19 - №22 - P.2645-2655.

110. Kunter U. Mesenchymal stem cells prevent progressive experimental renal failure but maldifferentiate into glomerular adipocytes / U.Kunter, S. Rong, P. Boor, F. Eitner, G. Muller-Newen, Z. Djuric, C. R. van Roeyen, A. Konieczny, T. Ostendorf, L. Villa, M. Milovanceva-Popovska, D. Kerjaschki, J. Floege // J Am Soc Nephrol - 2007. - V.18 - №6 - P.1754-1764.

111. Lai R.C. Exosome secreted by MSC reduces myocardial ischemia/reperfusion injury / R.C.Lai, F. Arslan, M. M. Lee, N. S. Sze, A. Choo, T. S. Chen, M. Salto-Tellez, L. Timmers, C. N. Lee, R. M. El Oakley, G. Pasterkamp, D. P. de Kleijn, S. K. Lim // Stem Cell Res - 2010. - V.4 - №3 -P.214-222.

112. Lawrie A.S. Microparticle sizing by dynamic light scattering in fresh-frozen plasma / A.S.Lawrie, A. Albanyan, R. A. Cardigan, I. J. Mackie, P. Harrison // Vox Sang - 2009. - V.96 - №3 - P.206-212.

113. Lee H.W. Effects of Intracoronary Administration of Autologous Adipose Tissue-Derived Stem Cells on Acute Myocardial Infarction in a Porcine Model / H.W.Lee, H. C. Lee, J. H. Park, B. W. Kim, J. Ahn, J. H. Kim, J. S. Park, J. H. Oh, J. H. Choi, K. S. Cha, T. J. Hong, T. S. Park, S. P. Kim, S. Song, J. Y. Kim, M. H. Park, J. S. Jung // Yonsei Med J - 2015. - V.56 - №6 - P.1522-1529.

114. Lee K. Growth factor delivery-based tissue engineering: general approaches and a review of recent developments / K.Lee, E. A. Silva, D. J. Mooney // J R Soc Interface - 2011. - V.8 - №55 - P.153-170.

115. Lee Y. Exosomes and microvesicles: extracellular vesicles for genetic information transfer and gene therapy / Y.Lee, S. El Andaloussi and M. J. Wood // Hum Mol Genet - 2012. - V.21 - №R1 - P.R125-134.

116. Leroyer A.S. Endothelial-derived microparticles: Biological conveyors at the crossroad of inflammation, thrombosis and angiogenesis / A.S.Leroyer, F. Anfosso, R. Lacroix, F. Sabatier, S. Simoncini, S. M. Njock, N. Jourde, P. Brunet, L. Camoin-Jau, J. Sampol, F. Dignat-George // Thromb Haemost - 2010. - V.104 -№3 - P.456-463.

117. Lev S. Non-vesicular lipid transport by lipid-transfer proteins and beyond / S.Lev // Nat Rev Mol Cell Biol - 2010. - V.11 - №10 - P.739-750.

118. Li C.Y. Comparative analysis of human mesenchymal stem cells from bone marrow and adipose tissue under xeno-free conditions for cell therapy / C.Y.Li, X.Y. Wu, J. B. Tong, X. X. Yang, J. L. Zhao, Q. F. Zheng, G. B. Zhao, Z. J. Ma // Stem Cell Res Ther - 2015. - V.6 - - P.1-10.

119. Lim J.H. Nanovesicle-based bioelectronic nose for the diagnosis of lung cancer from human blood / J.H.Lim, J. Park, E. H. Oh, H. J. Ko, S. Hong, T. H. Park // Adv Healthc Mater - 2014. - V.3 - №3 - P.360-366.

120. Lopatina T. Cell-Derived Microvesicles: A Cell Free Therapy Approach to the Regenerative Medicine / Lopatina T., M. C. Deregibus, Cantaluppi V., Camussi G. // Current Biotechnology - 2012. - V.1 - - P.11-22.

121. Mack M.A. Transfer of the chemokine receptor CCR5 between cells by membrane-derived microparticles: a mechanism for cellular human immunodeficiency virus 1 infection / M.Mack, A. Kleinschmidt, H. Bruhl, C. Klier, P.J. Nelson, J. Cihak, J. Plachy, M. Stangassinger, V. Erfle, D. Schlondorff // Nat Med - 2000. - V.6 - №7 - P.769-775.

122. MacLean-Fletcher S. Mechanism of action of cytochalasin B on actin / S.MacLean-Fletcher, T.D. Pollard // Cell - 1980. - V.20 - №2 - P.329-341.

123. Mahmoudifar, N. and P. M. Doran Mesenchymal Stem Cells Derived from Human Adipose Tissue / Mahmoudifar, N. and P. M. Doran // Methods Mol Biol -2015. - V.1340 - - P.53-64

124. Manno S. Identification of a functional role for lipid asymmetry in biological membranes: Phosphatidylserine-skeletal protein interactions modulate membrane stability / S.Manno, Y. Takakuwa, N. Mohandas // Proc Natl Acad Sci USA -2002. - V.99 - №4 - P.1943-1948.

125. Mao Z. Cells as factories for humanized encapsulation / Z.Mao, R. Cartier, A. Hohl, M. Farinacci, A. Dorhoi, T. L. Nguyen, P. Mulvaney, J. Ralston, S. H. Kaufmann, H. Mohwald and D. Wang // Nano Lett - 2011. - V.11 - №5 - P.2152-2156.

126. Martens S. Mechanisms of membrane fusion: disparate players and common principles / S.Martens, H. T. McMahon // Nat Rev Mol Cell Biol - 2008. - V.9 -№7 - P.543-556.

127. Masyuk A.I. Exosomes in the pathogenesis, diagnostics and therapeutics of liver diseases / A.I.Masyuk, T. V. Masyuk and N. F. Larusso // J Hepatol - 2013. -V.59 - №3 - P.621-625.

128. McMahon H.T. Membrane curvature and mechanisms of dynamic cell membrane remodelling / H.T.McMahon, J. L. Gallop // Nature - 2005. - V.438 -№7068 - P.590-596.

129. Miranda K.C. Nucleic acids within urinary exosomes/microvesicles are potential biomarkers for renal disease / K.C.Miranda, D. T. Bond, M. McKee, J. Skog, T. G. Paunescu, N. Da Silva, D. Brown, L. M. Russo // Kidney Int - 2010. -V.78 - №2 - P.191-199.

130. Morel O. Cellular mechanisms underlying the formation of circulating microparticles / O.Morel, L. Jesel, J. M. Freyssinet, F. Toti // Arterioscler Thromb Vasc Biol - 2011. - V.31 - №1 - P.15-26.

131. Morel O. Procoagulant microparticles: disrupting the vascular homeostasis equation? / O.Morel, F. Toti, B. Hugel, B. Bakouboula, L. Camoin-Jau, F. Dignat-George, J. M. Freyssinet // Arterioscler Thromb Vasc Biol - 2006. - V.26 - №12 -P.2594-2604.

132. Moretton M.A. Cryoprotection-lyophilization and physical stabilization of rifampicin-loaded flower-like polymeric micelles / M.A.Moretton, D.A. Chiappetta, A. Sosnik // J R Soc Interface - 2012. - V.9 - №68 - P.487-502.

133. Morse M.A. A phase I study of dexosome immunotherapy in patients with advanced non-small cell lung cancer / M. A.Morse, J. Garst, T. Osada, S. Khan, A. Hobeika, T. M. Clay, N. Valente, R. Shreeniwas, M. A. Sutton, A. Delcayre, D. H. Hsu, J. B. Le Pecq, H. K. Lyerly // J Transl Med - 2005. - V.3 - №1 - P.1-9.

134. Mukherjee S. Endocytic sorting of lipid analogues differing solely in the chemistry of their hydrophobic tails / S.Mukherjee, T. T. Soe, F. R. Maxfield // J Cell Biol - 1999. - V.144 - №6 - P.1271-1284.

135. Mulcahy L.A. Routes and mechanisms of extracellular vesicle uptake / L.A.Mulcahy, R. C. Pink, D. R. Carter // J Extracell Vesicles - 2014. - V.3 - P.1-10.

136. Nawaz M. Extracellular Vesicles: Evolving Factors in Stem Cell Biology / M.Nawaz, F. Fatima, K. C. Vallabhaneni, P. Penfornis, H. Valadi, K. Ekstrom, S. Kholia, J. D. Whitt, J. D. Fernandes, R. Pochampally, J. A. Squire, G. Camussi // Stem Cells Int - 2016. - V.2016 - P.1-11.

137. Oksvold M.P. Magnetic bead-based isolation of exosomes / M.P.Oksvold, A. Neurauter, K. W. Pedersen // Methods Mol Biol - 2015. - V.1218 - - P.465-481

138. Oliveira D. L. Characterization of yeast extracellular vesicles: evidence for the participation of different pathways of cellular traffic in vesicle biogenesis / D.L.Oliveira, E.S. Nakayasu, L. S. Joffe, A. J. Guimaraes, T. J. Sobreira, J. D. Nosanchuk, R. J. Cordero, S. Frases, A. Casadevall, I. C. Almeida, L. Nimrichter, M. L. Rodrigues // PLoS One - 2010. - V.5 - №6 - P. 1-10.

139. Papetti M. Mechanisms of normal and tumor-derived angiogenesis / M.Papetti, I.M. Herman // Am J Physiol Cell Physiol - 2002. - V.282 - №5 -P.C947-970.

140. Peng L.H. Cell Membrane Capsules for Encapsulation of Chemotherapeutic and Cancer Cell Targeting in vivo / L.H.Peng, Y. H. Zhang, L. J. Han, C. Z. Zhang, J. H. Wu, X. R. Wang, J. Q. Gao, Z. W. Mao // ACS Appl Mater Interfaces - 2015. - V.7- №33 - P. 18628-18637.

141. Phillips M.J. Effects of cytochalasin B on membrane-associated microfilaments in a cell-free system / M.J.Phillips, M. Oda, I. M. Yousef, K. Funatsu // J Cell Biol - 1981. - V.91 - №2 Pt 1 - P.524-530.

142. Piccin A. Circulating microparticles: pathophysiology and clinical implications / A.Piccin, W. G. Murph, O. P. Smith // Blood Rev - 2007. - V.21 -№3 - P.157-171.

143. Pick H. Investigating cellular signaling reactions in single attoliter vesicles / H.Pick, E.L. Schmid, A. P. Tairi, E. Ilegems, R. Hovius, H. Vogel // J Am Chem Soc - 2005. - V.127 - №9 - P.2908-2912.

144. Prescott D.M. Enucleation of mammalian cells with cytochalasin B / D.M.Prescott, D. Myerson, J. Wallace // Exp Cell Res - 1972. - V.71 - №2 - P.480-485.

145. Puddu P. The involvement of circulating microparticles in inflammation, coagulation and cardiovascular diseases / P.Puddu, G. M. Puddu, E. Cravero, S. Muscari, A. Muscari // Can J Cardiol - 2010. - V.26 - №4 - P.140-145.

146. Rani S. Mesenchymal Stem Cell-derived Extracellular Vesicles: Toward Cell-free Therapeutic Applications / S.Rani, A. E. Ryan, M. D. Griffin, T. Ritter // Mol Ther - 2015. - V.23 - №5 - P.812-823.

147. Raposo G. Extracellular vesicles: exosomes, microvesicles, and friends / G.Raposo, W. Stoorvogel // J Cell Biol - 2013. - V.200 - №4 - P.373-383.

148. Ratajczak J. Embryonic stem cell-derived microvesicles reprogram hematopoietic progenitors: evidence for horizontal transfer of mRNA and protein delivery / J.Ratajczak, K. Miekus, M. Kucia, J. Zhang, R. Reca, P. Dvorak, M. Z. Ratajczak // Leukemia - 2006. - V.20 - №5 - P.847-856.

149. Ratajczak J. Membrane-derived microvesicles: important and underappreciated mediators of cell-to-cell communication / J.Ratajczak, M. Wysoczynski, F. Hayek, A. Janowska-Wieczorek, M. Z. Ratajczak // Leukemia -2006. - V.20 - №9 - P.1487-1495.

150. Ratajczak M. Z. Pivotal role of paracrine effects in stem cell therapies in regenerative medicine: can we translate stem cell-secreted paracrine factors and microvesicles into better therapeutic strategies? / M. Z.Ratajczak, M. Kucia, T. Jadczyk, N. J. Greco, W. Wojakowski, M. Tendera, J. Ratajczak // Leukemia -2012. - V.26 - №6 - P.1166-1173.

151. Ridler M. A. The response of human cultured lymphocytes to cytochalasin B / M. A.Ridler, G. F. Smith // J Cell Sci - 1968. - V.3 - №4 - P.595-602.

152. Rizvanov A.A. Interaction and self-organization of human mesenchymal stem cells and neuro-blastoma SH-SY5Y cells under co-culture conditions: A novel system for modeling cancer cell micro-environment / A. A. Rizvanov, M. E. Yalvac, A. K. Shafigullina, Salafutdinov, II, N. L. Blatt, F. Sahin, A. P. Kiyasov, A. Palotas // Eur J Pharm Biopharm - 2010. - V.76 - №2 - P.253-259.

153. Rosland G.V. Long-term cultures of bone marrow-derived human mesenchymal stem cells frequently undergo spontaneous malignant transformation / G.V.Rosland, A. Svendsen, A. Torsvik, E. Sobala, E. McCormack, H. Immervoll, J. Mysliwietz, J. C. Tonn, R. Goldbrunner, P. E. Lonning, R. Bjerkvig, C. Schichor // Cancer Res - 2009. - V.69 - №13 - P.5331-5339.

154. Roy C.S. Targeting angiogenesis for controlling neuroblastoma / C.S.Roy, S. Karmakar, N. L. Banik, S. K. Ray // J Oncol - 2012. - V.2012 - - P.1-12.

155. Royo F. Different EV enrichment methods suitable for clinical settings yield different subpopulations of urinary extracellular vesicles from human samples / Royo, F., P. Zuniga-Garcia, P. Sanchez-Mosquera, A. Egia, A. Perez, A. Loizaga, R. Arceo, I. Lacasa, A. Rabade, E. Arrieta, R. Bilbao, M. Unda, A. Carracedo, J.M. Falcon-Perez // J Extracell Vesicles - 2016. - V.5 - P.1-8.

156. Rozmyslowicz T. Platelet- and megakaryocyte-derived microparticles transfer CXCR4 receptor to CXCR4-null cells and make them susceptible to infection by X4-HIV / Rozmyslowicz, T., M. Majka, J. Kijowski, S. L. Murphy, D. O. Conover, M. Poncz, J. Ratajczak, G. N. Gaulton, M. Z. Ratajczak // AIDS -2003. - V.17 - №1 - P.33-42.

157. Rubio D. Molecular characterization of spontaneous mesenchymal stem cell transformation / D.Rubio, S. Garcia, M. F. Paz, T. De la Cueva, L. A. Lopez-Fernandez, A. C. Lloyd, J. Garcia-Castro, A. Bernad // PLoS One - 2008. - V.3 -№1 - P.1-10.

158. Sahoo S. Exosomes from human CD34(+) stem cells mediate their proangiogenic paracrine activity / S.Sahoo, E. Klychko, T. Thorne, S. Misener, K. M. Schultz, M. Millay, A. Ito, T. Liu, C. Kamide, H. Agrawal, H. Perlman, G. Qin, R. Kishore, D. W. Losordo // Circ Res - 2011. - V.109 - №7 - P.724-728.

159. Scherfeld D. Lipid dynamics and domain formation in model membranes composed of ternary mixtures of unsaturated and saturated phosphatidylcholines and cholesterol / D.Scherfeld, N. Kahya, P. Schwille // Biophys J - 2003. - V.85 -№6 - P.3758-3768.

160. Shan L. Near-infrared fluorescence 1,1-dioctadecyl-3,3,3,3-tetramethylindotricarbocyanine iodide (DiR)-labeled macrophages for cell imaging / L.Shan // - Molecular Imaging and Contrast Agent Database - 2004. - P.1-4.

161. Simpson R.J. Exosomes: proteomic insights and diagnostic potential / R.J.Simpson, J. W. Lim, R. L. Moritz, S. Mathivanan // Expert Rev Proteomics -2009. - V.6 - №3 - P.267-283.

162. Siroky J. Comparison of the coverslip and the discontinuous Percoll density gradient methods of enucleation of mouse cells / J.Siroky // Gen Physiol Biophys -1984. - V.3 - №2 - P.119-126.

163. Skog J. Glioblastoma microvesicles transport RNA and proteins that promote tumour growth and provide diagnostic biomarkers / J.Skog, T. Wurdinger, S. van Rijn, D. H. Meijer, L. Gainche, M. Sena-Esteves, W. T. Curry, Jr., B. S. Carter, A. M. Krichevsky, X. O. Breakefield // Nat Cell Biol - 2008. - V.10 - №12 - P.1470-1476.

164. Soekmadji C. Exosomes in prostate cancer: putting together the pieces of a puzzle / C.Soekmadji, P. J. Russell, C. C. Nelson // Cancers (Basel) - 2013. - V.5 -№4 - P.1522-1544.

165. Spees J.L. Mitochondrial transfer between cells can rescue aerobic respiration / J.L.Spees, S. D. Olson, M. J. Whitney, D. J. Prockop // Proc Natl Acad Sci U S A - 2006. - V.103 - №5 - P.1283-1288.

166. Sprong H. How proteins move lipids and lipids move proteins (vol 2, pg 504, 2001) / Sprong, H., P. van der Sluijs, G. van Meer // Nature Reviews Molecular Cell Biology - 2001. - V.2 - №9 - P.698-698

167. Steinemann D. Genetic instability of modified stem cells - a first step towards malignant transformation? / D.Steinemann, G. Gohring, B. Schlegelberger // Am J Stem Cells - 2013. - V.2 - №1 - P.39-51.

168. Stoltz J.F. Stem Cells and Regenerative Medicine: Myth or Reality of the 21th Century / J. F.Stoltz, N. de Isla, Y. P. Li, D. Bensoussan, L. Zhang, C. Huselstein, Y. Chen, V. Decot, J. Magdalou, N. Li, L. Reppel, Y. He // Stem Cells Int - 2015. - V.2015 - - P.1-12.

169. Stoorvogel W. The biogenesis and functions of exosomes / W.Stoorvogel, M. J. Kleijmeer, H. J. Geuze, G. Raposo // Traffic - 2002. - V.3 - №5 - P.321-330.

170. Sturk A. Cell derived vesicles in health and disease / A.Sturk // Ned Tijdschr Klin Chem Labgeneesk - 2012. - V.37 - P.65-68.

171. Szajnik M. Exosomes in Plasma of Patients with Ovarian Carcinoma: Potential Biomarkers of Tumor Progression and Response to Therapy / M.Szajnik,

M. Derbis, M. Lach, P. Patalas, M. Michalak, H. Drzewiecka, D. Szpurek, A. Nowakowski, M. Spaczynski, W. Baranowski, T. L. Whiteside // Gynecol Obstet (Sunnyvale) - 2013. - V. 4 - P.3. - P.1-11.

172. Takahashi M. Cytokines produced by bone marrow cells can contribute to functional improvement of the infarcted heart by protecting cardiomyocytes from ischemic injury / M.Takahashi, T. S. Li, R. Suzuki, T. Kobayashi, H. Ito, Y. Ikeda, M. Matsuzaki, K. Hamano // Am J Physiol Heart Circ Physiol - 2006. - V.291 -№2 - P.886-893.

173. Thakur B.K. Double-stranded DNA in exosomes: a novel biomarker in cancer detection / B. K.Thakur, H. Zhang, A. Becker, I. Matei, Y. Huang, B. Costa-Silva, Y. Zheng, A. Hoshino, H. Brazier, J. Xiang, C. Williams, R. Rodriguez-Barrueco, J. M. Silva, W. Zhang, S. Hearn, O. Elemento, N. Paknejad, K. Manova-Todorova, K. Welte, J. Bromberg, H. Peinado, D. Lyden // Cell Res -2014. - V.24 - №6 - P.766-769.

174. Thery C. Amigorena Exosomes: composition, biogenesis and function / Thery, C., L. Zitvogel and S. Amigorena // Nat Rev Immunol - 2002. - V.2 - №8 -P.569-579.

175. Togel F. VEGF is a mediator of the renoprotective effects of multipotent marrow stromal cells in acute kidney injury / F.Togel, P. Zhang, Z. Hu, C. Westenfelder // J Cell Mol Med - 2009. - V.13 - №8B - P.2109-2114.

176. Tong Z.G. Cytochalasin B inhibits the proliferation of human glioma U251 cells through cell cycle arrest and apoptosis / Z.G.Tong, N. Liu, H. S. Song, J. Q. Li, J. Jiang, J. Y. Zhu and J. P. Qi // Genet Mol Res - 2014. - V.13 - №4 - P.10811-10822.

177. Trendowski M. Exploiting the cytoskeletal filaments of neoplastic cells to potentiate a novel therapeutic approach / M. Trendowski // Biochim Biophys Acta

- 2014. - V.1846 - №2 - P.599-616.

178. Trendowski M. Using cytochalasins to improve current chemotherapeutic approaches / M. Trendowski // Anticancer Agents Med Chem - 2015. - V.15 - №3

- P.327-335.

179. Valadi H. Exosome-mediated transfer of mRNAs and microRNAs is a novel mechanism of genetic exchange between cells / H.Valadi, K. Ekstrom, A. Bossios, M. Sjostrand, J. J. Lee, J. O. Lotvall // Nat Cell Biol - 2007. - V.9 - №6 - P.654-659.

180. van der Pol E. Classification, functions, and clinical relevance of extracellular vesicles / E.van der Pol, A. N. Boing, P. Harrison, A. Sturk and R. Nieuwland // Pharmacol Rev - 2012. - V.64 - №3 - P.676-705.

181. VanWijk M.J. Microparticles in cardiovascular diseases / M.J.VanWijk, E. VanBavel, A. Sturk, R. Nieuwland // Cardiovasc Res - 2003. - V.59 - №2 - P.277-287.

182. Veriter S. Human Adipose-Derived Mesenchymal Stem Cells in Cell Therapy: Safety and Feasibility in Different "Hospital Exemption" Clinical Applications / S.Veriter, W. Andre, N. Aouassar, H. A. Poirel, A. Lafosse, P. L. Docquier, D. Dufrane // PLoS One - 2015. - V.10 - №10 - P.1-11.

183. Verma M. Extracellular vesicles: potential applications in cancer diagnosis, prognosis, and epidemiology / M.Verma, T. K. Lam, E. Hebert and R. L. Divi // BMC Clin Pathol - 2015. - V.15 - P.1-12.

184. von Figura K. Inhibition of pinocytosis by cytochalasin B. Decrease in intracellular lysosomal-enzyme activities and increased storage of glycosaminoglycans / K.von Figura, H. Kresse // Eur J Biochem - 1974. - V.48 -№2 - P.357-363.

185. Vrijsen K.R. Cardiomyocyte progenitor cell-derived exosomes stimulate migration of endothelial cells / K. R.Vrijsen, J. P. Sluijter, M. W. Schuchardt, B. W. van Balkom, W. A. Noort, S. A. Chamuleau, P. A. Doevendans // J Cell Mol Med - 2010. - V.14 - №5 - P.1064-1070.

186. Wei X. Mesenchymal stem cells: a new trend for cell therapy / X.Wei, X. Yang, Z. P. Han, F. F. Qu, L. Shao, Y. F. Shi // Acta Pharmacol Sin - 2013. - V.34 - №6 - P.747-754.

187. Wendel H. Kinetics of actin depolymerization: influence of ions, temperature, age of F-actin, cytochalasin B and phalloidin / H.Wendel, P. Dancker // Biochim Biophys Acta - 1986. - V.873 - №3 - P.387-396.

188. Wise G.E. Ultrastructure of enucleated mammalian cells in culture /

G.E.Wise, D. M. Prescott // Exp Cell Res - 1973. - V.81 - №1 - P.63-72.

189. Witwer K. W. Standardization of sample collection, isolation and analysis methods in extracellular vesicle research / K. W.Witwer, E. I. Buzas, L. T. Bemis, A. Bora, C. Lasser, J. Lotvall, E. N. Nolte-'t Hoen, M. G. Piper, S. Sivaraman, J. Skog, C. Thery, M. H. Wauben and F. Hochberg // J Extracell Vesicles - 2013. -V.2 - P.1-12.

190. Wolf P. The nature and significance of platelet products in human plasma / P. Wolf // Br J Haematol - 1967. - V.13 - №3 - P.269-288.

191. Xin H. Systemic administration of exosomes released from mesenchymal stromal cells promote functional recovery and neurovascular plasticity after stroke in rats / H.Xin, Y. Li, Y. Cui, J. J. Yang, Z. G. Zhang, M. Chopp // J Cereb Blood Flow Metab - 2013. - V.33 - №11 - P.1711-1715.

192. Yamada N. Colorectal cancer cell-derived microvesicles containing microRNA-1246 promote angiogenesis by activating Smad 1/5/8 signaling elicited by PML down-regulation in endothelial cells / N.Yamada, N. Tsujimura, M. Kumazaki, H. Shinohara, K. Taniguchi, Y. Nakagawa, T. Naoe, Y. Akao // Biochim Biophys Acta - 2014. - V.1839 - №11 - P.1256-1272.

193. Yamamoto D. Enucleated L929 mouse fibroblasts support invasion and multiplication of Shigella flexneri 5a / D.Yamamoto, V. C. Coimbra, K. Okuda, M. Rabinovitch // Braz J Med Biol Res - 2006. - V.39 - №6 - P.749-758.

194. Yumoto K. A novel method for monitoring tumor proliferation in vivo using fluorescent dye DiD / K.Yumoto, J. E. Berry, R. S. Taichman, Y. Shiozawa // Cytometry A - 2014. - V.85 - №6 - P.548-555.

195. Zhang H.C. Microvesicles derived from human umbilical cord mesenchymal stem cells stimulated by hypoxia promote angiogenesis both in vitro and in vivo /

H. C.Zhang, X. B. Liu, S. Huang, X. Y. Bi, H. X. Wang, L. X. Xie, Y. Q. Wang,

X. F. Cao, J. Lv, F. J. Xiao, Y. Yang, Z. K. Guo // Stem Cells Dev - 2012. - V.21 -№18 - P.3289-3297.

196. Zhang J. Exosome and exosomal microRNA: trafficking, sorting, and function / J.Zhang, S. Li, L. Li, M. Li, C. Guo, J. Yao, S. Mi // Genomics Proteomics Bioinformatics - 2015. - V.13 - №1 - P.17-24.

197. Zhang M. SDF-1 expression by mesenchymal stem cells results in trophic support of cardiac myocytes after myocardial infarction / M.Zhang, N. Mal, M. Kiedrowski, M. Chacko, A. T. Askari, Z. B. Popovic, O. N. Koc, M. S. Penn // FASEB J - 2007. - V.21 - №12 - P.3197-3207.

198. Zhao R.C. Essentials of mesenchymal stem cell biology and its clinical translation / R. C.Zhao - Netherlands: Springer Netherlands, 2013 - 313p.

199. Zhou S. The effects of nrf2 on tumor angiogenesis: a review of the possible mechanisms of action / S.Zhou, W. Ye, M. Zhang, J. Liang // Crit Rev Eukaryot Gene Expr - 2012. - V.22 - №2 - P.149-160.

200. Zitvogel L. Eradication of established murine tumors using a novel cell-free vaccine: dendritic cell-derived exosomes / L.Zitvogel, A. Regnault, A. Lozier, J. Wolfers, C. Flament, D. Tenza, P. Ricciardi-Castagnoli, G. Raposo, S. Amigorena // Nat Med - 1998. - V.4 - №5 - P.594-600.

201. Zomer A. Exosomes: Fit to deliver small RNA / A.Zomer, T. Vendrig, E. S. Hopmans, M. van Eijndhoven, J. M. Middeldorp, D. M. Pegtel // Commun Integr Biol - 2010. - V.3 - №5 - P.447-450.