Оценка экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции с помощью МАТ тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.00.36, кандидат медицинских наук Алексинская, Марина Анатольевна

• Алексинская, Марина Анатольевна
• кандидат медицинских наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат медицинских наук Алексинская, Марина Анатольевна

Оглавление

Список нежшоиишх сокращений.

Введение .♦„.„♦.♦«*««♦„.*„.,„««„„„,.,.„.

Глава I. Обзор литературы.

1.1. Эгиология мужского бесплодия

1.2. Антигены сперматозоидов

1.3. Физиологическая и патофизиологическая роль ангиотензнипреврашающего фермента в репродукции.

Глава 2. Материалы и методы исследования.„.

2.1, Организация работы и объем исследования

2.2. Клинические методы исследован к я.

2-3 - Лабораторно-лнапюстичеекне методы.—.

2.4. Получение клеточных образцов.

2-4.1. Трансформированные клетки яичника китайского хомячка.

2-4.2, Эндотелиальные клетки пупочной вены человека.

2.4.3, Клетки перитонеалъной жидкости.,.

2.4.4. Выделение сперматозоидов из нативной спермы.

2-4.4.1. Отмывка сперматозоидов нвтнвнои спермы от семенной жидкости.,,.

2,4.4.2. Получение фракции активно-подвижных сперматозоидов методом флотации.

2-4.5. Фиксация сперматозоидов.-.

2.4.5.1, Фиксация сперматозоидов параформальдегндом.

2.4.5.2. Фиксация сперматозоидов метанолом

2-4.6, Разделение сперматозоидов в градиенте перколла

2.5. Получение моноклональиых а1ггнтел к тестнкулярной изоформе алгиог сизин-превращающего фермента.

2-5.1, Выделение АПФ из клеток и тканей.

2.5.2. Получение гибридом, продуцирующих моноклоиальные антитела к аигнотензнн-превращающему ферменту.

2-5.3, Выделение моиоклои альных антител

2.6. Выявление ангиотензии-превращающего фермента на поверхности клеток.„.,.,.„.„.

2-6,1, Выявление аигаотеизин-превращающего фермента на поверхности грансформнрованных снеток яичника китайского хомячка.

2.6.1.1, Выявление ангиотензии-превращающего фермента на поверхности трансформированных клеток яичника китайского хомячка методом клеточного иммуноферментного анализа

2.6.1.2. Выявление ангиотензии-превращающего фермента на поверхности трансформированных клеток янчннка китайского хомячка методом проточной интофдуорометрии . с з g S <*i i

SSÍ E-|í

P I, lililí!I ill■T|eîie

I -si

IЯ £ il i iaÍli

Il||I ti If 9j ji fifí! Sí l3! "l S ! l'

3.4. Экспрессия тестнкулярной инофирмы ангиотеизин-превращающего фермента на поверхности нормальных сперматозоидов н клеток с нарушенной морфологией и подвижностью 66 3-5. Зависимость между -экспрессией тсетикуляркой изоформы ангиотекзнн-превращающего фермента на поверхности клеток и морфо-функинональиыми характеристиками сперматозоидов

3-5.1- Оценка зависимости между экспрессией аитиотензин-превращающего фермента н подвижностью сперматозоидов-„„.,75 3.5.2, Оценка зависимости между экспрессией ангиотеизин-превращающего фермента и акросомальной реакцией.

3.6. Выявление антител к ангиотеизин-превращающему ферменту в семенной жидкости бесплодных пациентов.

3.6Л. Выявление антител к ангиотеизин-превращающему ферменту в семенной жидкости пациентов методом нммуноферментного анализа

3.6.2. Выявление антител к аш-нотензмн-превращающему ферменту в семенной жидкости пациентов методом иммуноблаттинга.

3.7. Оценка уровня ангиотеизин-превращающего фермента в норме и при нарушениях репродуктивной функции.

3.7.1. Сравнение экспрессии тсстнкулярной изоформы ангиотеизин• превращающего фермента на поверхности сперматозоидов фертнльных доноров и пациентов с иммунным фактором бесплодия

3.7.2, Сравнение экспрессии тсстнкулярной нюформы ангиотеизин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов у фертилъных мужнин и пациентов с асгеиозооспермней.

3.7.1- Сравнение экспрессии тсстнкулярной нюформы ангиотеизин превращающего фермента на поверхности сперматозонлов у фертилъных мужчин и пациентов с бесплодием неясного генеза.

3.8. Клиническая значимость выявления тсстнкулярной изоформы ангнотензин-нревращаюшего фермента на поверхности сперматозоидов.

Выводы. „„., „„,„. . ««,*««♦.««*«

Список ли тературы.

Список исполыошшнмх сокращений

АГ - антиген

АПФ ■ ангиотеизии-преврашаюший фермент ЛР - акросомальиая реакция АСАТ - антисисрмальные антитела AT - антитело

ДФК - активные формы кислорода

БСА - бычий сывороточный альбумин

ДМСО - днметилсульфокснл

ДНК - дезоксирнбонуклекновая кислота

ДСН - долепил сульфат натрия

ИФ - интенсивность флуоресценции

ИФА - нммуноферментный аналн j кДНК - комплементарная дезокенрибонукленновая кислота

ККС - кал нкреи н-кики но идя система

МАТ - моноклоиальные антитела мРКК - матричная рибонуклеиновая кислота

ОИФ ■ относительная интенсивность флуоресценции

ПААГ - полиакрилвмидиый гель

ПАФ - полный адъювант Фрейнда

ПЖ - перитонеальная жнлкость

ПЦМ - проточная цнтофлуорометрня

ПЦМ% - процент клеток, покрытых антителами, выявляемых методом ПЦМ РААС - рснин-ангиотенэнн-альдостсроновая система сАПФ - соматическая иэоформа ангнотенэнн-превращающего фермента СЖ - семенная жнлкость тАПФ - тестикулярная иэоформа ангнотензин-прс вращающего фермента

ФБД - фосфатный буфер Дульбекко

ФИТЦ - фяуорес цеинн юти о цн анят

ЭДТА - гтилскдкамннтетра уксусная кислота

С AS А - Computer Assisted Seine л Analysis (компьютерный анализ спермы) CD - cluster of differentiation (кластер дифференцировки) СНО - Chinese hamster ovaiy (яичник китайсхого хомячка) FgG - иммуноглобулин класса G

MAR - mixed agglutination reaction (реакция смешанной агглютинации) PMWM - protein molecular weight marker (белки-маркеры с известным молекулярной массой) P.sativum - лектнн PtAum sativum

ROC - Receiver Operating Characteristics (характеристическая кривая) VAP - average path velocity (путевая скорость движения сперматозоидов) VC-L - curvi linear vetocily (трековая скорость движения сперматозоидов) VSL - straight-line velocity (прямолинейная скорость движения сперматозоидов)

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оценка экспрессии ангиотензин-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции с помощью МАТ»

АКТУАЛЬНОСТЬ ПРОБЛЕМЫ

В последнее время нее больше внимания уделяется молекулярным механизмам репродукции и характеристике поверхностных структур сперматозоидов, определяющих способность клеток к оплодотворению. Изучение роли поверх костных белков важно для пониманий механизмов фертнлнзацин, причин бесплодия н для поиска адекватных способов коррекции нарушении репродуктивной функции.

Наиболее современным подходом к исследованию молекулярных механизмов взаимодействия клеток является использование моноклональных антител (МАТ), Получение МАТ к определенным антигенам (АО сперматозоидов позволяет изучать роль этих АГ в процессе оплодотворенкя. Исслелуется возможность использования МА'Г к АГ сперматозоидов при разработке новых способов нммуноконтрацепннн [27|.

Одним нз белков, специфичных для сперматозоидов н привлекающих ьннмание исследователей, является тестнкулярная изоформа ангнотензии-преврашаюшего фермента» впервые описанная ЕЫ>оггу с соавторами [146].

Ангиотензнн-иревращающнй фермент (ЕС 3.4.15,1, СШ43) -гликопротенн, расположенный на мембране клеток, выявляемый во многих тканях и жидкостях млекопитающих и имеющий широкий спектр действии. Акгнотензнн-превращающий фермент (АПФ) играет ключевую роль в реннн-акгиотензин-альдостсроиовой (РААС) и кал и крен н-кинн новой (К КС) системах, регулируя давление кроим и гомеостаз электролитов 183,601,

АПФ - цинк-зависимая неитндил-дипегпндаза, удаляющая С-кокневой днпептнд Н15-Ьеи, и осуществляющая превращение ангнотензина I в ангиотензнн II (вазопреесор) и инактивацию брадикнннна (вазо дилятатор). АПФ может участвовать в метаболизме рада других физиологически активных пептидов; вещества Р, энхефалннов, нейротензнна. гонадотронин-релиэннг гормона. Экспрессия АПФ была выявлена ка поверхности эыдотелиальных клеток легких, эпителиальных клеток кишечника, почек. иейроэпителнальных клеток мозга [142.102].

О важности РААС для процессов оплодотворения может свидетельствовать высокая концентрация АПФ в семенной жидкости (СЖ), которая в SO раз превышает концентрацию этого фермента в плазме крови [63, 30]. В 1982 году было описано наличие двух иэоформ АПФ [146], одна т которых, тестикулярная, расположена на поверхности сперматозоидов. Накопленные к тому моменту знания позволили предположить, что АПФ участвует в регуляции репродуктивной функции человека н побудили к более легальному исследованию его рати в рспролукинн.

Было показано, что самцы мышей, у которых выключен (нокаутирован) ген АПФ. стерильны [94, 144]. В тоже время, прн возобновлении экспрессии тсстнкулярной изоформы АПФ (тАПФ), но не соматической изоформы АПФ (сАПФ). фертильность у самцов мышей восстанавливается [35, (29, 1121

При попытках выявил, связь между уровнем тАПФ и морфо-функцнонапьиыми характеристиками сперматозоидов были получены противоречивые результаты. В работе Kancko с соавторами была отмечена позитивная корреляция между активностью АПФ н подвижностью сперматозоидов человека |6В]. Такая же зависимость показана и для сперматозоидов крупного рогатого скота. Однако в более поздних работах выявлена негативная корреляция между активностью фермента и подвижностью сперматозоидов свиньи и человека [31. ]49, 24]. В то же время, Kühn с соавторами [149] выявили отсутствие зависимости между уровнем активности АПФ н концентрацией/морфологией сперматозоидов. Использование фармакологических ингибиторов АПФ не оказывало влияния на подвижность сперматозоидов [145), но негативно отражалось на результатах взаимодействия сперматозоида и яйцеклетки [77, 67], Было показано, что ) АПФ высвобождается с поверхности сперматозоидов во время ка пади га ими и акросомальной реакции [149.91 ].

Несмотря на то. что исследования в этой области идут уже не один десяток лет, механизм влияния тАПФ на фертильность до енх пор не изучен.

Л нал и1i ферментативной активности и использование полнклональных AT не позволяют выявлять тАПФ, а оценивают суммарную активность/экспрессию как тестикуляркой АПФ, эяспресснрухлцеЙся на поверхности сперматозоидов, так и соматической АПФ. сорбируемой клетками из семенной жидкости,

Таким образом, основной проблемой, связанной с определением роли тАПФ in vivo, является отсутствие адекватных методов количественной оценки экспрессии тАПФ на поверхности сперматозоидов. Следовательно, получение МАТ к тАПФ н изучение роли АПФ в репродукции является актуальной задачей.

ЦЕЛЬ РАБОТЫ

Оценка жспресснн ангиотеизин »превращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции с помощью моноклональиых антител.

ЗАДАЧИ ИССЛЕДОВАНИЯ

1 Получить м охарактеризовать моноклокальные антитела к тсстн хуля р нон изоформе акгиотензнн-нревращающего фермента.

2. Разработать метод количественной оценки ангнотензнн-превращающего фермента на поверхности сперматозоидов с помощью моноклональньга антител.

3. Определить зависимость между экспрессией тестикуляркой нзоформы ангиотензни-превращающего фермента и морфо-фуикцнональнымн характеристиками сперматозоидов.

4. Количественно оценить ■экспрессию тестикулярной нзоформи ангиотеизин-иревращающего фермента на поверхности сперматозоидов человека в норме и при нарушениях репродуктивной функции.

5. Определить возможность продукции антител к АПФ у мужчин с иммунным фактором бесплодия.

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ ЗНАЧИМОСТЬ

- Впервые получены мококлопальные антитела, обладающие высокой специфичностью к катимой конфорыацни тестикулярной изофорны АПФ человека.

- Показано, что слу щи ванне тАПФ с поверхности живых патологически измененных сперматозоидов в ходе экспериментальных манипуляций приводит к ложно-негативным результатам гтри выявлении АИФ на поверхности клеток.

- Разработан способ количественной оценки тАПФ на поверхности сперматозоидов человека с помощью моноклональиых антител I ЕЮ с использованием метода проточной цнтометрии,

- Установлено, что уровень тАПФ на поверхности сперматозоидов зависит от ыорфо-функциональимх характеристик клеток. Максимальный уровень экспрессии тАПФ выявляется на поверхности морфологически измененных сперматозоидов и функционально-активных сперматозоидов с нормальной морфологией. Снижение функциональной активности морфологически-нормальных сперматозоидов - уменьшение скорости поступательного движения и увеличение вероятности спонтанной АР. сопровождается снижением экспрессии тАПФ на их поверхности.

- Обнаружено что на поверхности морфологически нормальных сперматозоидов тАПФ локализуется в постакросомальной области головки, на шейке и средней части хвоста сперматозоидов. У сперматозоидов с патологически измененной морфологией головки тАПФ экспресеируегея на всей поверхности головкн клеток.

- Аутоантнтела к АПФ в семенной жидкости фертнльных доноров и пациентов с бесплодием иммунного и неиммунного генеза не выявлены.

- Показано, что уровень экспрессии тАПФ на поверхности сперматозоидов фертнльных доноров выше, чем в группах пациентов с астенозооспермней и с бесплодием неясного генеэа.

Заключение диссертации по теме «Аллергология и иммулология», Алексинская, Марина Анатольевна

выводы

1. Получены моноклоиалиные антитела к натнвнон форме ангнотензин-п рс в ра ша ю шс г о фермента человека. Моноклональные антитела 1Е10 специфичны к тести кулярнон АПФ, моноклональные антитела 4ЕЗ взаимодействуют как с тсстикулярной. так и с соматической нзоформамн фермента.

2- Разработан способ количественной оценки экспрессии ангиотензнн-прс вращающего фермента на поверхности сперматозоидов с помощью моноклональных антител и метода проточной щггомстрнн.

3- Уровень тсстикулярной нзоформы АПФ на поверхности сперматозоидов зависит от морфо-фуккцнональных особенностей клеток. Максимальный уровень экспрессии тсстикулярной нзоформы АПФ выявляется на поверхности патологических форм сперматозоидов и функционально-активных сперматозоидов с нормальной морфологией. Снижение экспрессии тсстикулярной нзоформы АПФ на поверхности морфологически нормальных сперматозоидов сопровождается снижением их функциональной активности уменьшением скорости поступательного движения и увеличением вероятности спонтанной акросомалыюй реакции.

4. На поверхности большинства сперматозоидов с нормальной морфологией тесгикулярная нэоформа АПФ выявлена в постакросомальной области головки, на шейке и средней части хвоста клеток. У сперматозоидов с дефектами головки тесгикулярная изоформа АПФ экспресснруется на всей поверхности головки клеток.

5. Уровень экспрессии тсстикулярной нзоформы АПФ на поверхности сперматозоидов пациентов с иммунным фактором бесплодия не отличается от такового у фертнльных доноров. При этом аутоантитела к ангнотен зин-превращакнцему ферменту в семенных жидкостях пациентов не обнаружены.

6. Выявлены нарушения экспрессии тести куляриой нзоформы АПФ на поверхности сперматозоидов у пациентов с бесплодием неясного генеза н у бесплодных пациентов с астенозооспермней: количество тсстнкулярной изоформы АПФ на поверхности сперматозоидов пациентов с бесплодием было значительно ниже, чем на поверхности сперматозоидов фертнльных доноров

Список литературы диссертационного исследования кандидат медицинских наук Алексинская, Марина Анатольевна, 2006 год

1. Бесплодие при глобулоэооспермин н отсутствие акросомы сперматозоидов Текст. / Бр&гина Е.Е, (и др.] И Проблемы репродукции. 1997.-Т. 1. №3.-0.53-55.

2. Вовк. И.Б., Роль аитиспермальных антител в диагностике и лечении бесплодия супружеских пар (Текст) : материалы 3-го Всесоюзного симпозиума с межл Участием (1987 г.) I Вовк И.Б., Дубчак А.Е. Киев: (б.м.1. 1987.-С. 23.

3. Говалло, В.И. Иммунология репродукции Текст. / В.И. Говалло. — М. : Медицина, 1987, 304 с,

4. Гормонотерапии бесплодного брака Текст!' практическое руководство / Под ред. Т.В, Овсянниковой, М.: Органон, 1997. - с.41.

5. Горюнов, В,Г, Воспаление придаточных половых желез и мужское бесплодие Текст. / Горюнов В,Г., Кул^мии Г.Е., Скнтомидн BJI- // Диагностика и лечение бесплодного брака / Горюнов В.Г., Кузьмин Г.Е., Скнтомидн В.Л М.: |б,н ], 1988. С. 214-218.

6. Карнаух. В,И. Варикоцелс и бесплодие у мужчин (Текст. автореф. дис. канд. мед, наук: 14.00.01 ( Карнаух В.И. Москва, 1986. - 24 с.

7. Кейт, Л.Г, Общие инфекции Текст. I Под ред. Л.Г. Кейта, Г,С Бергера, Д.А Эдельмана. М.: Медицина, 1988. - Т. I. - С I,

8. О структуре бесплодного брака Текст. I Аяипов В.И. [и др-1 И Акушерство н гинекология. 1986. С. 7.

9. Тср-Аванесонг Г.В. Диагностика и возможности терапии мужского бесплодия Текст. : автореф. лис. . канд. мед. наук 14.00.01 / Тер-Аванесов Габриэль Вартаиович. Москва, 1996. - 23 с.

10. И.Терехнна, ЛI I Клиническое значение антксиермальиых антител в цервнкальной слизи и эякуляте в гснеэс бесплодия супружеских пар Текст.; автореф, дис. . канд. мед. наук 14.00.01 и 14.00,36/ Терехина

11. Лариса Николаевна; ВНИЦ по охране здоровья матери и ребенка Минздрава СССР. Москва, 1991. - 25 с.

12. Тнктннский, OJI- Заболевания половых органов у мужчин (Текст. / Тнктннский О Л., Новиков И.Ф. Мнхаилнчекко ВВ. Л. Медицина,1985. С. 230-231.

13. Фнллнпов. 0,С Эпидемиология и структура бесплодного брака и г.Томске |Текст.: автореф. дне. . канд. мел. наук : 14,00,01 / Филлнпов О.С,- Томск, 1995.-20 е.

14. Чередсев. АЛ. Моноклональныс антитела как диагностические реагенты нового тина Текст. / Чередеев А Н. // Лаб. дело. 1984 - № 6 - С 323327.

15. Ярнлнн, А.А. Основы иммунологии Текст) / А,А, Ярнлнн, М. : Медицина. 1999. - 608 с. - ISBN 5-225-02755*5.

16. А novel ongioten&in-converting enzyme-related earboxypeptidase (ACE2) converts angiotensin I to angiotensin 1-9 (Text. / Donoghue M. et at.) U Circ. Res. 2000, - Vol. 87. - P. E1-E9.

17. A potential fusion peptide and an intcgrin ligand domain in a protein active in sperm-egg fusion Text. / Blobel C.P. [et al.] // Nature. 1992. - Vol 356. -P. 248-252.

18. Acrosomal morphology as a novel criterion for male Fertility diagnosis: relation with acrosin activity morphology (strict criteria) and fertilization in vitro Text. / Menkveld R [et al.| // Fértil. Stcril. 1996 - Vol. 65. - P. 637644.

19. Acrosome reaction in human sperm Text. / Nagae T (et ol.] U Fértil. Steril.1986. Vol. 45. - P. 701-707.

20. Activiiy of angiotensiп-converting enzyme (ACE) in reproductive tissues of the stallion and effects of angiotensin IE on sperm motility (Text. / Ball B.A. et al.] //Theriogenology. 2003. - Vol. 59. ■ P. 901-914

21. Activity of testis angiotensin converting enzyme (ACE) in ejaculated human spermatozoa Text. / Shibahara H. [et al.J // Int. J. Andrei. 2001. - Vol. 24. -P. 295-299.

22. Aitkcn. R.J. Significance of reactive oxygen species and antioxidants in defining the efficacy of sperm preparation techniques (Text. / Aitken R J , Clarfcson J.S. Hi- Androl. 1988 - Vol. 9. P. 367-376

23. An analysis of «perm function in case» of unexplained infertility: conventional criteria, movement characteristics and fértilizmg capacity (Tcxtl / Aitkcn R J, let al. //Fértil. Steril. 1982. - Vol. 38. - P. 212-221.

24. Analysis of a human sperm CD52 glycoform in primates: identification of an animal model for iinmunocontraceptive vaccine development (Text. / McCauley T.C et al.) ft Biol Reprod 2002. - Vol. 66. - P, 1681 ■ 1688,

25. Anderson, D,J. A new look at infertility vaccines Text. / Anderson D.J., Alexander N.J. // Fértil. Stcril. 1983. - Vol, 40. - P. 557-571.

26. Anderson, DJ. World Health Organization Sperm Antigen Workshops and

27. Sperm Antigen Projcct Text) / Anderson D.J. ft Gamete Interaction: prospects for Inununoeontraeeption. / Eds. N.J. Alexander fet al,., New York : Wifcy-Uss Inc. 1990. - P. 103-109.

28. Angiotensin converting enzyme in human seminal plasma is synthesized by the testis, epididymis and prostate |Tcxtj / Krassnigg F. |cl al. // Int. J. Andrei. 1989. - Vol. 12. - P. 22-28.

29. Angiotensin I-converting en/ytnc and other peptidolytic enzymes in human semen and relations to its spermatologic parameters ¡Text. / Stems W.E, ct ■].]// Andrologia, 1991 - Vol 23. - P 185-189.

30. Angiotensin I-converting enzyme and potential substrates in human testis and testicular tumours Text. / Franke F.E. let al ] II APM1S. 2003. - Vol. 111. -P. 234-244.

31. Angiotensin II in human seminal fluid Text. / O'Mahony O A. [et al.] It Hum. Rcprod, 2000, - Vol. 15. - P. 1345-1349.

32. Angiotensin It stimulates sperm motility JTcxt. / Vinson C.P- (et al.| // Regul. Pept. 1996 - Vol.67. - P. 131-135.

33. Angiotensln-convert.ing enzyme and male fertility (Text. / Hagaman J.R ct al ] II Proc. Natl. Acad- Sci USA- 1998 - Vol. 95 - P. 2552-2557.

34. Angiotensin-converting enzyme is a GPI-anchored protein releasing factor crucial for fertilization JTexl. / Kondoh G. (et al.] // Nat. Med. 2005. - Vol. II. - P. 160-166.

35. Angiotensin-eonverting enzyme-2 (ACE2): comparative modeling of the activc site, spceificity requirements and chloridc dependents Text) / Guy J.L. [et al.// Biochemistry. 2003 - Vol. 42. - P. 13185-13192.

36. Angiotcnsino£cn-dcfieicni mice with hypotension Text. / Tanimoto K- [et al] //J, Biol Chcm, 1994 - Vol. 269. - P 31334-31337.

37. Antibody mediated lung endothelium targeting; I. In vitro mode) of lung endothelium targeting using a cell line expressing angiotensin-converting enzyme |Tcxll t Balyasnikova I V. et al . // Tumor Targeting. 1999 - Vol 4. - P. 70-83

38. Assessment of the viability and acrosome status of fresh and frozen-thawed human spermatozoa using single-wavelength fluorescencc microscopy Text. / Ccntola G.M. [et al.J // Mol Reprod Develop, 1990. - Vol. 27 ■ P 130135,

39. Association and dissociation kinetics of bobwhite quail lysozymc with monoclonal antibody HyHEL-5 Text. / Xavicr K.A, [ct al,| H Protein Eng. -1999. Vol. 12. - P. 79-83.

40. Austin, C.R. The "capaeitation" of ihe mammalian sperm fText. i Austin C.R, ti Nature. 1952. - Vol. 170. - P, 326.

41. Autoantibodies to vasoactive peptides and angiotensin converting enzyme in patients with systemic diseases of the connective tissue IText. / Stanislav Ml. et al] II Tcr. Arkh- 2001 - Vol. 73. - P. 20-25.

42. Bcyler, S.A. Binding of antibodies against antigenic domains of murine lactate dchydrogenasc-Ci to human and mouse spermatozoa Text. / Beyler S.A„ Wheat T.E., Goldberg E. II Biol. Reprod, 1985. - Vol. 32. - P, 12011210.

43. Biochemical and morphological characterization of the intra acrosomal antigen SP-10 from human sperm ITcxt. I Herr J.C. et al.] II Biol. Reprod. -1990, ~ Vol, 42. P. 181-193,

44. Biochemical characterization of sperm agglutination antigen-1. a human spenn surface antigen implicated in gamete interactions Text. / Diekman A B Itf al ] II Biol, Reprod, 1997. - Vol, 57. - P. U36-1144

45. Boar sperm membranes antigens. I. Topography of a mobile glycoprotein of the sperm cell membrane Text. / TSpfer-Pctcrson E, ]ct al,| U Histochemistry, 1990. - Vol. 93. - P. 485-490.

46. Clarfcc, G.N. Detection of Antispermatozoal Antibodies of IgG. IgA and IgM Immunoglobulin Classes in Cervical Mucus Text. I Clarke G,N. II Amer J Reprod. Immunol. Microbiol. 1984. - Vol. 6. - P. 195-197.

47. Clarke, G.N. Immunoglobulin class and regional specificity of antispcrmalozoaj autoantibodies bloking cervical mucus penetration by human spermatozoa Text. / Clarke G-N. U Am. J. Reprod. Immunol, Microbiol, -1988 Vol. 16. -P, 135-138.

48. Ctassiftcaiion of male factor infertility relevant to in vitro fertilization insemination strategies using mannosc Eigands, acrosomc status and anti-cyioskeletal antibodies Text. / Benoff S. [et al.] U Hum. Reprod. 1996. ■ Vol. II P. 1905-1918

49. Clinical relevance of sperm morphology assessment using strict criteria and relationship with sperm-mucus interaction in vivo and in vitro |Tcxt| / EggertKruse W et al. // Fertil Steril. 1995. - Vol 63. - P. 612-624

50. Coulam, C.B. Investigating unexplained infertility Text. / Coulam C.B., Moore S B,. 0'Fallon W, // Am. J Obstet, Gynecol, 1988, - Vol 158, Pi 1 -P. 1374-1381.

51. Cross, N.L, Reorganization of lipid rafts during capacitation of human sperm Text. / Cross N.L. // Biol. Reprod. 2004. - Vol. 71 - P. 1367-1373.

52. Depierre, D. Dipcptidyl carboxypcptidase from human seminal plasma Text. / Dcpicrrc D.T Barget/j J P., Roth M, // Biochim, Biophys, Acta. 1978. -Vol 523.-P.469-476,

53. Diagnostic implications of detecting antibodies to angiotensin-converting enzyme and its substrates |Tcxt) I Kostrikm D.S. el al.| U Klin. Med 2003. -Vol. 81.-P. 31-34.

54. Dickman, A.B. Characterisation of a human antigen with sera from infertile patients Text. / Dickman A.B. Goldberg E. tt Biol. Rcprod, 1994. - Vol, 50.-P. 1070-1087.

55. Eddy. E M. The spermatozoon Text. t Eddy E.M., O'Brien D A. // The Physiology of Reproduction, 2nd edn, / Eds . E Knobil, J. Ncill, New York ; Raven Press, 1994. P 22-77,

56. Ehlcrs, M.R, Angiotensin-convening enzyme: new concepts concerning its biological role {Text} / Ehlers M.R„ Riordan J.F, // Biochemistry. 1989. -Vol. 28.-P.5311-5318,

57. Ehlers, M.R- Spontaneous solubilization of membrane-bound human testis angiotcnsin-convcrting enzyme expressed in Chinese hamster ovary cells ITcxtJ / Ehlen M R. Chen Y.N. Rmrdan J.F. // Proc Natl. Acad. Set. USA. -1991. Vol. 88. - P. 1009-1013,

58. Ehlers, M-R. The unique N-terminal sequence of testis angiotcnsin-convcrting enzyme is heavily O-glycosylated and unessential for activity or .stability ITextl / Ehlers MR. Chen Y.N,, Riordan J,F. // Biochcm Biophys, Res

59. Commun, 1992, - Vol. 183. - P. 199-205.

60. Epitope-specific antibody-induccd cleavage of angiotensin-convetting enzyme from the cell surface Text. / Balyasnikova I V. |ct ah) II Biochem, J. 2002. -Vol, 362,-P. 585-595.

61. Erickson, R.P. Localization of lactate dchydrogenase-X on the surfaces of mouse spermatozoa Text. t Erickson R.P. Friend D.S. Tennenbaum D. // Exp. Cell Res. 1975. - Vol. 91, - P 1 -5.

62. Fully effective contraception in male and female guinea pigs immunized with the sperm protein PH-20 Text. I Prunakoff P. [et al.] U Nature. 1988. - Vol 335. P 543-546

63. Further characterization of reproductive abnormalities in mCd59b knockout mice: a potential new function of mCd59 in male reproduction Text. / Qin X. [et al.] It J. Immunol. 2005. - Vol. 175- - P. 6294-6302.

64. Hooper, N.M. Angiotensin converting enzyme: implications from molecular biology for its physiological functions Text. / Hooper N.M, // Int. J Biochem. 1991. - Vol. 23. -P, 641-647.

65. Hooper, N.M. Membrane protein sccretases Text. / Hooper N.M., Karrjn EH,, Turner AJ, U Biochem J. 1997 - Vol. 321, - P 265-279.

66. Induction of angiotensin I-converting enzyme transcription by a protein kinase C dependent mechanism in human endothelial cells Text. / Viilard H. fct al.| HI Biol. Chem. 1998 - Vol. 273- - P. 25191-25197.

67. Interaction of mAb to angiotensin-converting enzyme (ACE) with antigen in vitro and in vivo: antibody targeting to the lung induces ACE antigenic modulation Tcxt| / Danilov S, [et al.| It Int. Immunol. 1994. - Vol. 6. - P 1153 1160.

68. Isoforms of angiotensin l-converting enzyme in the development and differentiation of human testis and epididymis (Text. t Pauls ft, et al.j ft Andrologia. 2003, - Vol. 35. - P. 32-43.

69. Kohler G, Continuous cultures of fused cclls sccreting antibody of predefined spceificily Text. / Köhler G-, Milslein C. H Nature. 1975. - Vol. 256. - P 495-497.

70. Kühn, F.-M. Release of angiotensin converting enzyme (ACE) from human spermatozoa during capacitation and acrosomc reaction Text| / Kohn F.-M., Miska W., Schill W -B. //J. Androl 1995. - Vol. 16. - P 259-265.

71. Landstciner. K Zur Kenntnis der spezifisch auf Blutkörperchen wirkenden Sera Text. / Undstciner K. // Zentrbl Bakt. Parasit Kde. 1899 Vol. 25. -P. 546-549.

72. Localization and characterization of die acrosomal antigen recognized by GB24 on human spermatozoa |Tcxt|! Fentchcl P. ct al.j // Mol. Reprod, Dev. -1990. Vol.27. P 173*178.

73. Male-female differences in fertility and blood pressure in ACE-dcficient mice IText. / Krege J,H. let al ] tl Nature 1995. - Vol. 375. - P 146-148.

74. Mammalian oocytes exihibit specific recognition of the RGD (Arg-Gly-Asp) tripeptidc and express oolemma! intcgrins |Text. f Fusi F.M. (ct al.j tf MoL Reprod Dev. 1993. - Vol. 36. - P. 212*219.

75. Meri. S. Distribution of proteetin (CD59), a complement membrane attack inhibitor, in normal human tissues Text! / Meri S„ Waldmann H-. Lachmann PJ. It Lab Invest, 1991, -Vol. 65. - P, 532-537.

76. Metchnikoff, E. Etudes sur la resorption des cellules |Texl. / Mctchnikoff E. tl Annls. Irtst. Pasteur. 1899. - Vol. 13. - P- 727-770.

77. Molecular and developmental studies of a sperm areosomc antigen recognized by HAS-63 monoclonal antibody Text. / Lui M S, |et al.] tt Biol. Reprod. -1992. Vol. 46. - P. 937*948

78. Monoclonal antibodies IB3 and 5C8 as a probes for monitoring the integrity of the C terminal end of soluble angiotensin-convcrting enzyme Text. / Balyasnikova I V. [et al.| U Hybridorna. 2005. - VoJ. 24. - P. 14-26,

79. Monoclonal antibodies to a human germ cell membrane glycoprotein that inhibits fertilization Text. / Na? R.K. [ct al j // Science 1984. Vol. 225. * P. 342-344.

80. Monoclonal antibody to human lung angiotensm-convcrting enzyme Text! / Danilov S.M. [ct al.J // Bioiechnol. Appt. Biochem. 1987. - Vol. 9. - P. 319322.

81. Mylcs, D.C, Sperm proteins thai serve as rcccptors for the zona pcllucida and their post-testicular modification |Text. f Myles D.G., Primakoff P, U Ann, N. Y. Acad. Sci. -1991. Vol. 637 - P. 486-493.

82. Naz, R.K. Involvement of fertilisation antigen (FA-1) in involuntary immunoinfcrtilily in humans Text! / Naz R.K. // J. Clin, InvesL 1987, - Vol. 80. - P. 1375-1383.

83. Normal Human Immune peritoneal Cells: Subpopulations and Functional Characteristics Text. / Kubicka U. [et al.] II Scand. J. Immunol. 1996. -Vol.44 - P. 157-163

84. O* Rand. M,G, Isolation of a sperm membrane sialoglycoprotcin autoantigen from rabbit testes Text. / O'Rand M.G., Porter J.P. H J. Immunol. 1979, -Vol. 122.-P. 1248-1254.

85. Oxidative inactivation of angiotcn.sin-con verting enzyme Text. / Sakbarov f Yu. [ct al.] // Biokhimiia, ~1991 Vol. 56. - P, 55-62

86. U) Pauls, K. Angiotensin-convcrting enzyme (CD143) in neoplastic germ cells Text. I Pauls K., FinJc L., Franke F.E. // Lab. Invest. 1999. - Vol. 79 - P, 1425-1435.

87. Physiological nonequivalence of the two (soforms of angiotcnsin-convcrting enzyme |Text. I Kessler S.P et al ] II). Biol. Chem, 2000 - Vol, 275. - P, 26259-26264,

88. Predictive value of abnormal sperm morphology in in vitro fertilization Text. / KnigcrT F. [ct al.J II Fcrtil. Steril. 1988. - Vol. 49- - P 112-117

89. H 9. Regulated expression of testis angiotcosm-converting enzyme during spermatogenesis in mice |Text. / Langford K.G. et al.) // Biol. Rcprod.1993.-Vol 48.-P. 1210-1218.

90. Regulation of the human sperm acrosome reaction by two second messenger pathways lText| / Dc Jongc CJ, ct aL. // Comparative spermutology 20 years after, / Ed, Baccctti B, New York: Raven Press, I99L -Vol. 75, - P, 143147.

91. Richardson, R.T. Molecular comparison of two sperm autoantigens Text. / Richardson R.T., Widgren E,EH O'Rand M.G. Serono Symposia Publications: reproductive immunology / Eds. F. Donderu. P.M. Johnson. New York ; Raven Press, 1993. - P. 41 -46.

92. Rooncy. A. Complement in human reproduction: activation and control |Text. / Rooncy LA,, Oglesby T.J., Atkinson J.P II Immunol. Res. 1993. -Vol. 12. P. 276-294.

93. Rooncy, LA. Membrane attack complex (MAC)-mediated damage to spermatozoa: protection of the cells by the presence on their membranes of MAC inhibitory proteins jText. ! Rooncy LA., Davies A., Morgan B.P. // Immunology 1992. - Vol. 75. - P. 499-506.

94. Sabcur. K. Characterization of angiotensin-convening enzyme in canine testis |TcxtJ / Sabcur K,, Vo AT. Ball B.A, // Reproduction 2001, - Vol. 122, -P. 139-146,

95. Sating, P.M. Monoclonal antibody against mouse sperm blocks a specific event in the fertilization process Text) / Saling P.M. Raines LM„ O'Rand M,G. HI, Exp. Zool. 1983. - Vol, 227 - P 481-486

96. Saling, PM, Mouse sperm antigens chat participate in fertilization. IV. A monoclonal antibody prevents zona penetration by inhibition of the acrosome reaction ITcxl. I Saling P.M, II Dcvd. Biol, 1986, - Vol, f 17. P. 511-519.

97. Samuel, T. Auto-antigcnicity of human protamines (TextJ / Samuel T,, Kolk A // Vasectomy: Immunologic and Pathophysiologic Effects in Animals and

98. Man / Eds. Í.H. Lepow. R. Croxier. New York ; Academic Pre,« inc., 1979- P. 203-220.

99. Schill, W.U. Possible effects of ihe kallikrein-kinin system on male reproductive functions |Texl. / Schill W.B., Miska W. H Andrologie. 1992.- Vol. 24. P. 69-75.

100. Selective restoration of male fertility in mice lacking angiotcnsin-converling enzymes by sperm-specific expression of the testicular isozyme Text. / Ramaraj P fet al] // J. Clin. Invest 1998 - Vol. 102 . - P 371-378.

101. Several vascular complement inhibitors arc present on human sperm Text. / Bo/as S.E. [et al.] // Biol Reprod. 1993. - Vol. 48. - P 503-511.

102. Shaha, C. Antibody-induced changes on rabbit sperm surface inhibit gamete interaction Text. t Shaha C II Mol. Reprod Dev. 1994, - Vol. 38, - P, 393403.

103. Shedding of the germinal angiotensin l-coii verting enzyme (gACE) involves a serine protease and is activated by epididymal fluid Text. /Thimon V. {et al.] ft Biol. Repmd. 2005. - Vol. 73. - P 881 -890.

104. Stbony, M. Angiotensin-Converting enzyme in murine testis; step-specific expression of the germinal isofonn during spermiogene&is Text. / Sibony M. Segretain D »Gase J.M. // Biol Reprod 1994. - Vol, 50, - P. 1015-1026,

105. Source, eatabolism and role of the tetrapeptide N-acctyl-ser-asp-lys-Pro within the testis (Text. / Stephan J. |ct al ] // J. Cell. Sei. 2000. - Voh 113, PL I.-P. 113-121.

106. Sperm DNA fragmentation: threshold value in male fertility |Text. / Scrgcric M. let af,J II Hum. Reprod. 2005. - Vol. 20. - P 3446-3451

107. Sperm morphologic features as a prognostic factor in in vitro fertilization Text. I Kniger T.F. [et al ] II Feral Steril. 1986 - Vol, 46. - P 1118-1123.

108. Sperm morphology as diagnosed by strict criteria; probing the impact of tcratozoospcrmia on fertilization rate and pregnancy outcome in a large in vitro fertilization population Tenl. / Grow D R. [et al.| U Fenil. Steril. 1994.- Vol. 62. P. 559-567.

109. Structure-function analysis of angiotensin l-convcrting enzyme using monoclonal antibodies. Selective inhibition of the amino-terminal active site {Text. J Danilov S. et al.] It J. Biol. Chem. 1994. - Vol. 269. - P 2680626814.

110. Subcellular localization or pulmonary an tiotensin-convening enzyme (kininase II) (Text! / Ryan, J.W. fd al l H Biocbcm. J. 1975. - Vol. 146 P. 497-499.

111. The critical role of tissue angiotensin-converting enzyme as revealed by gene targeting in mice (Text) t Esther C R |cl al l H J Clin. InvesL 1997 - Vol. 99, - P, 2375-2385,

112. The enzymatic degradation of bradykinin in semen of various spccics |Tcxt. / Heder G el al.J // Andrologie 1994. - Vol. 26. - P. 295-301

113. Tissue-specific expression of mRNAs for dipeptidyl carboxypeptidase isoenzymes Text} / El-Dorry H.A. [d al. // Pn>c- Natl. Acad. Sei. USA. -1982, Vol. 79. - P. 4295*4297.

114. Transcription of testicular angiotensin-converting enzyme (ACE) is initiated within the 12th intmn of the somatic ACE gene (Text. I Howard T.E. let al.J // Mol. Cell. Biol. 1990. - Vol. 10. - P. 4294-4302.

115. Trimmer, J.S- Monoclonal antibodies inducc the translocation, patching, and shedding of surfacc antigens of sea urchin spermatozoa Text. / Trimmer J.S., Vacquier V.D. H Exp- Cell Res 1988- - Vol. 175 . - P. 37-51.

116. Ultra&tructural localization of angiotensin-convening enzyme in ejaculated human spermatozoa! Köhn F, M, Jet al.J // Hum, Reprod, 1998, - Vol, 13. -P. 604-610,

117. Vellctri, P.A, Testicular angiotensin l-convcrting enzyme Text. / Velletri P.A. II Life. Sei. 1985. - Vol. 36. - P. 1597-1608

118. Welch, J.E. Characterization of a sperm-specific nuclear autoamigenie protein. II- Expression and localization in the testis Tcxt| / Welch J.E,, O Rand M G. H Biol, Reprod. 1990. - Vol. 43. - P. 569-578.

119. WHO Laboratory Manual for the examination of Human Semen and Scmen-Cervical Mucus Interaction, World Health Organization 4th edn. Cambrige : Cambrige University Press, 1999.

120. Zweig. M.H. Recciver-opcxating characteristic (ROC) plots, a fundamental evaluation tool in clinical mcdicinc TextJ t Zweig M.H., Campbell G. H Clin. Chcmistry. 1993. - Vol. 39. - P. 561-577.