Оптимизация мембранотропных свойств ингибиторов белок-белкового взаимодействия MDM2-P53 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.10, кандидат наук Григорьева, Татьяна Алексеевна

• Григорьева, Татьяна Алексеевна
• кандидат наук
• 2016

Оглавление диссертации кандидат наук Григорьева, Татьяна Алексеевна

ОГЛАВЛЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Роль химио- и таргетной терапии в лечении опухолей мозга

1.2. Гематоэнцефалический барьер

1.2.1. Особенности строения и транспортных механизмов ГЭБ

1.2.2. Способы доставки лекарственных средств в мозг

1.2.3. Методы оценки способности веществ преодолевать ГЭБ

1.3. Опухолевый супрессор р53

1.3.1. Строение и функции р53

1.3.2. Регуляция активности р53

1.3.3. Ингибиторы MDM2

1.4. Заключение

ГЛАВА 2. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

2.1. Выбор объектов исследования

2.2. In silico изучение влияния мембранотропных заместителей на целевую активность и способность веществ преодолевать ГЭБ

2.3. Синтез соединений

2.4. Разработка in vitro метода для сравнительного анализа способности веществ преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ

2.5. Способность 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов преодолевать мембраны

2.6. Валидация метода оценки способности изоиндолинонов провоцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток

2.7. ^особнос^ изоиндолинонов провоцировать р53-опосредованный

апоптоз

2.8. Выделение и целевая активность диастереомеров 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов

2.9. Целевая активность диастереомеров 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов

2.10. Модификация производного 3-иминоиндолинона

ГЛАВА 3. ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

3.1. Выбор объектов исследования

3.2. Расчетные методы

3.2.1. Липофильность и растворимость веществ

3.2.2. Способность веществ преодолевать ГЭБ

3.2.3. Способность веществ взаимодействовать с р53-связывающей полостью MDM2

3.2.4. Квантово-химические расчеты ЯМР спектров

3.3. Синтез производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона

3.3.1. Химические реактивы и оборудование

3.3.2 Получение простых эфиров 2,3-замещенных

3-гидроксиизоиндолин-1-онов

3.3.3 Получение сложных эфиров 2,3-замещенных изоиндолин-1-онов

3.4. Оценка мембранотропности соединений с использованием искусственных мембран

3.4.1. Состав искусственных мембран

3.4.2. Метод РАМРА

3.4.3. Расчет величин Са и logPe

3.5. Оценка биологической активности веществ

3.5.1. Использованные клеточные линии

3.5.2. Подготовка клеточных культур и исследуемых веществ

3.5.3. Клеточный скрининг

3.5.4. Влияние исследуемых веществ на уровень белков р53 и MDM2

3.5.5. Исследование апоптоза методом проточной цитометрии

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ

МГМ - метастазы в головной мозг ГЭБ - гематоэнцефалический барьер

NVU - neurovascular unit, клеточный комплекс, образующий ГЭБ ЦНС - центральная нервная система ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

РАМРА - parallel artificial membrane permeability assay, метод оценки мембранотропности веществ

QSAR - Quantitative Structure-Activity Relationship, метод предсказания свойств соединений на основании их структуры

Pgp - гликопротеин-Р

АТФ - аденозинтрифосфат

PDB - Protein Data Bank, база данных белковых структур

ТГФ - тетрагидрофуран ДМСО - диметилсульфоксид ДМАП - ^№-диметиламинопиридин ДЦК - 1,3-дициклогексилкарбодиимид ТФУ - трифторуксусная кислота

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография ТСХ - тонкослойная хроматография ЯМР - ядерный магнитный резонанс

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Оптимизация мембранотропных свойств ингибиторов белок-белкового взаимодействия MDM2-P53»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы

По данным 2015 года, у 35-50% больных со злокачественными опухолями развиваются метастазы в головном мозге (МГМ), причем в лучшем случае треть из них имеют симптомы, позволяющие осуществить своевременную диагностику. Рост числа выявленных метастатических поражений обусловлен как успехами онкотерапии, способствующей увеличению продолжительности жизни больных, так и усовершенствованием методов диагностики первичных и метастатических опухолей.

Основным препятствием для лекарственного лечения МГМ является наличие гематоэнцефалического барьера (ГЭБ), который контролирует попадание в мозг различных ксенобиотиков, в частности, лекарственных препаратов. Малые, неполярные, гидрофобные молекулы, к числу которых относятся многие потенциальные лекарства, преодолевают барьер в основном по механизму пассивной диффузии сквозь мембраны эндотелиоцитов ГЭБ.

В лечении некоторых МГМ (рака легкого, почек, меланомы) нашли применение отдельные ингибиторы киназ и моноклональные антитела; используется и темозоломид, известный своими побочными действиями. Однако эффективность современных препаратов, направленных на борьбу с метастазами, оставляет желать лучшего.

Схема лекарственного лечения МГМ определяется структурой и свойствами первичной опухоли, а также схемой противоопухолевой лекарственной терапии, проведенной до выявления метастазов. Химиотерапия МГМ имеет смысл, только если первичная опухоль не проявляет резистентности к конкретному препарату, но даже в этом случае лечение может быть неэффективным, если действующее вещество не способно преодолевать ГЭБ.

За последние годы создание реактиваторов проапоптотического белка р53 стало одним из ключевых направлений в разработке таргетных противораковых препаратов. Известно, что развитие онкологических заболеваний обусловлено, в частности, подавлением активности этого белка за счет связывания с ЕЗ-лигазой MDM2.

Таким образом, при создании препаратов для лечения МГМ представляется актуальным подход, основанный на рациональной структурной оптимизации низкомолекулярных противораковых агентов, в том числе ингибиторов взаимодействия МОМ2-р53, для повышения способности активных соединений преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ.

Степень разработанности темы

В настоящее время идет активное развитие противораковых агентов, механизм действия которых основан на реактивации проапоптотического белка р53 за счет ингибирования его взаимодействия с лигазой MDM2. Большой объем информации о функции и структуре этих белков позволяет осуществлять рациональную разработку препаратов и на каждом этапе последовательно оптимизировать структуры соединений с учетом новых знаний. В качестве ингибиторов MDM2 заявлены представители различных классов - цис-имидазолины, изоиндолиноны, спирооксиндолы и др. Однако, несмотря на многолетнюю работу, ни один из них не дошел до клинического применения. На I стадии клинических испытаний находятся два ингибитора от Hoffmann-La Roche (III стадию испытаний против миелоидного лейкоза проходит идазанутлин), а также кандидаты от Novartis Pharmaceuticals и M.D. Anderson Cancer Center. При этом ни один из них не заявлен для борьбы с МГМ. С 2012 года разработкой низкомолекулярных ингибиторов взаимодействия MDM2-p53 занимается лаборатория молекулярной фармакологии, созданная на базе СПбГТИ(ТУ) под руководством Дженнаро Мелино в рамках реализации гранта № 11.G34.31.0069 Правительства РФ для

государственной поддержки научных исследований, проводимых под руководством ведущих ученых в российских ВУЗах.

Цель и задачи диссертационного исследования

Создание мембранотропных реактиваторов белка р53 на основе исследования белок-белкового взаимодействия MDM2^53.

В рамках поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

- идентификация структурных модификаций 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов, повышающих их способность преодолевать ГЭБ с сохранением оптимальных показателей ингибирования взаимодействия МОМ2-р53 для последующей оптимизации производного 3-иминоиндолинона;

- разработка и осуществление направленного синтеза новых производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона;

- разработка метода количественного определения способности индолинонов и изоиндолинонов преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ; in silico и in vitro изучение влияния модифицирующих заместителей на мембранотропность производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона;

- разработка метода количественного определения способности индолинонов и изоиндолинонов индуцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток; in silico и in vitro изучение влияния модифицирующих заместителей на целевую активность производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона;

- модификация соединений ряда 3-иминоиндолинона с использованием выявленных мембранотропных структурных модификаций, изучение мембранотропности и целевой активности вновь созданных соединений.

Объекты исследования

Объектами исследования являются производные 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона и 3-иминоиндолинона, а также фосфолипидные мембраны, используемые для определения мембранотропности соединений.

Научная новизна

Разработан метод сравнительного анализа способности низкомолекулярных соединений преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ, основанный на использовании искусственных липидных мембран. Разработана методика высокоинформативного скрининга производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона.

Впервые синтезирован ряд новых производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона. Изучено влияние мембранотропных заместителей на способность вновь синтезированных соединений преодолевать ГЭБ и индуцировать апоптоз раковых клеток. Моделирование методом молекулярного докинга позволило объяснить участие мембранотропных заместителей во взаимодействии 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов с р53-связывающей полостью белка MDM2. На основании полученных данных предложены способы оптимизации новых ингибиторов взаимодействия MDM2-р53 - производных 3-иминоиндолинона.

Установлено, что простые эфиры 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона неустойчивы в кислой среде. Показано, что, в отличие от энантиомеров 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов, диастереомеры их сложных эфиров, получаемых при реакции с №Вос-£-аминокислотами, могут быть выделены препаративно с использованием флэш-хроматографии на ахиральных носителях.

Теоретическая и практическая значимость

В ходе работы был синтезирован ряд производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона, которые обладают высокой способностью преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ и ингибировать взаимодействие белков MDM2-р53. Такие соединения являются более

перспективными кандидатами в противораковые препараты для лечения метастатических или первичных опухолей мозга, чем исходный ряд 2,3-замещенных 3-гидроксиизоиндолинонов с заявленной в литературе противораковой активностью. Благодаря применению разработанного подхода оптимизирована структура представителя нового класса ингибиторов взаимодействия MDM2^53 на основе замещенного 3-иминоиндолинона.

Предложенный в работе метод сравнительного анализа способности низкомолекулярных соединений преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ с использованием искусственных липидных мембран является универсальным и может быть использован для широкого круга объектов, обладающих достаточной растворимостью и детектируемых в УФ и видимом диапазоне, либо по флуоресценции. Он может быть использован при создании препаратов для лечения различных заболеваний, связанных с нарушениями деятельности головного мозга - как метастатических или первичных опухолей мозга, так и нейродегенеративных заболеваний. Представленный метод оценки способности веществ индуцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток может быть использован для аналогичных исследований.

Методы исследования

В работе использованы in silico и in vitro методы: молекулярный докинг и QSAR для предсказания свойств веществ, метод на основе искусственных мембран для оценки мембранотропности соединений, клеточный скрининг для оценки способности веществ индуцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток с подтверждением по связыванию аннексина V и с использованием вестерн-блоттинга. Строение и чистоту полученных в работе соединений исследовали с использованием ЯМР и ВЭЖХ-МС, для очистки продуктов использовали флэш-хроматографию.

Положения, выносимые на защиту

- способ оптимизации ингибиторов взаимодействия MDM2^53, основанный на использовании мембранотропных заместителей, не снижающих целевую активность соединений;

- in vitro метод на основе искусственных липидных мембран для количественного определения способности индолинонов и изоиндолинонов преодолевать мембраны эндотелиоцитов ГЭБ;

- in vitro метод на основе высокоинформативного скрининга для количественного определения способности индолинонов и изоиндолинонов провоцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток;

- метод синтеза новых производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона;

- применение мембранотропных заместителей, влияющих на способность производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона преодолевать мембраны ГЭБ и провоцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток;

- способ оптимизации производных 3-иминоиндолинона с использованием заместителей, идентифицированных в ходе оптимизации производных 2,3-замещенного 3-гидроксиизоиндолинона; влияние модификации соединения на способность преодолевать мембраны ГЭБ и провоцировать р53-опосредованный апоптоз раковых клеток.

Апробация результатов исследования

Основные положения диссертационной работы представлены на VI научно-технической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых с международным участием «Неделя науки - 2016» (СПб, 2016), VI Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация - потенциал будущего» (СПб, 2016), Симпозиуме "Биоинформатика и компьютерное конструирование лекарств" (Москва, 2015, в рамках XXII Российского национального конгресса «Человек и лекарство»), XI конференции по фундаментальной

онкологии «Петровские чтения» (СПб, 2015, в рамках 1-ого Российского онкологического научно-образовательного форума с международным участием «Белые Ночи - 2015»), II Всероссийской научной конференции молодых ученых «Медико-биологические аспекты химической безопасности» (СПб, 2015), международном симпозиуме EuroQSAR-2014 (СПб, 2014), международной научной конференции «Science of the future» (СПб, 2014), VIII всероссийской конференции с международным участием молодых учёных по химии «Менделеев-2014» (СПб, 2014), VI Международной конференции молодых ученых «Органическая химия сегодня» InterCYS-2014 (СПб, 2014) и др.

Публикации

По теме диссертации опубликовано 8 работ в журналах, рекомендуемых ВАК, а также материалы в сборниках тезисов конференций.

Объем и структура работы

Диссертация состоит из введения, обзора литературы, изложения полученных результатов и их обсуждения, описания материалов и методов, заключения, выводов и списка цитируемой литературы. Материал изложен на 152 страницах, содержит 10 таблиц и 44 рисунка. Список литературы включает 179 ссылок.

Работа выполнена при финансовой поддержке Правительства РФ (гранты №№ 11.G34.31.0069, 14.В37.21.0855), Совета по грантам Президента РФ (Стипендия Президента РФ 2013-2015 гг.), грантов РФФИ (мол_а № 14-04-31684) и РНФ (№ 16-13-10358).

ГЛАВА 1. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР

1.1. Роль химио- и таргетной терапии в лечении опухолей мозга

Одной из серьезных проблем при лечении больных с онкологическими заболеваниями является развитие метастатических поражений головного мозга [1]. В зависимости от особенностей первичной опухоли такие метастазы развиваются у 2-50% больных [1-3].

В нашей стране нет единого учёта случаев метастатического поражения ЦНС, в отличие от первичных опухолей головного мозга [4], хотя метастазы в головном мозге составляют 20-30% всех внутричерепных новообразований [5]. С каждым годом количество выявленных случаев МГМ увеличивается. Это объясняется улучшением методов диагностики и визуализации (использования высокоинформативных методов исследования, таких, как компьютерная и магнитно-резонансная томография), кроме того, современное эффективное лечение увеличивает продолжительность жизни онкологических больных, в результате чего расширяется временной диапазон для развития метастатических очагов [4, 6]. Среди злокачественных опухолей наиболее высокий метастатический потенциал имеют меланома и мелкоклеточный рак легкого, при которых за год метастазы головного мозга развиваются у 50-80% пациентов с диссеминированным процессом. При этом метастазы меланомы имеют наихудший прогноз опухолевого контроля и выживаемости [3].

По самым скромным оценкам, у 8-10% больных злокачественными опухолями развиваются симптомные метастазы в головном мозге. При этом по данным аутопсии установлено, что у 25-45% онкологических пациентов они являются бессимптомными и не диагностируются при жизни [3, 7, 8]. У 50-63% пациентов метастазы имеют множественный характер и могут локализоваться в различных анатомических образованиях мозга: в паренхиме, в твердой или мягкой мозговой оболочках, в субарахноидальном пространстве и желудочках мозга [3].

Таким образом, особенности, как первичного опухолевого очага, так и метастатических поражений являются факторами, влияющими на общую продолжительность жизни при онкологических заболеваниях.

Стандартом лечения одиночных операбельных метастазов в головном мозге является хирургическая резекция с последующим облучением всего головного мозга (ОВГМ). В случае множественных МГМ роль хирургии ограничена получением биопсии или устранением симптомов масс-эффекта, вызванных большими МГМ. Радиохирургия, являясь по сути методом лучевой терапии, позволяет осуществлять воздействия на опухоли, недоступные для классической нейрохирургии, однако ее эффект проявляется спустя месяцы, что, учитывая продолжительность жизни пациентов с МГМ, зачастую неприемлемо. Облучение всего головного мозга, хотя и уступило главенствующую роль другим методам, остается основным способом лечения как при монотерапии, так и в составе комплексной терапии нерезектабельных МГМ, множественных МГМ или в случае пациентов с плохим прогнозом [3].

Несмотря на развитие современных методов радио- и нейрохирургии, первым этапом лечения МГМ остается системная противоопухолевая терапия (химио- и таргетная терапия), особенно в случаях бессимптомных метастатических поражений головного мозга и МГМ, чувствительных к такому лечению. К последним относятся в первую очередь больные раком молочной железы при наличии гиперэкспрессии рецептора факторов роста HER2 и больные немелкоклеточным раком легкого при наличии мутации гена EGFR или транслокации киназы ALK.

Выбор схемы лекарственного лечения пациента с метастатическим опухолевым процессом в головном мозге зависит в первую очередь от морфологии первичной опухоли и ее биологических характеристик, а также от схемы противоопухолевой лекарственной терапии, проведенной до выявления метастазов в головном мозге [3].

При проведении таргетной терапии в случае изолированного метастатического поражения головного мозга или при прогрессировании опухолевого процесса в головном мозге возможно продолжение таргетной терапии в сочетании с локальным контролем опухолевых очагов в головном мозге (нейрохирургическое лечение, стереотаксическая лучевая терапия/радиохирургия, облучение всего головного мозга).

Применение лекарственного лечения после хирургического вмешательства может в несколько раз увеличивать медиану общей выживаемости больных [4]. При этом изучение морфологических и биологических характеристик удаленной опухоли позволяет спланировать схему дальнейшей лекарственной терапии.

В настоящее время для лечения метастатических опухолей в зависимости от природы первичной опухоли назначают различные цитостатические/цитотоксические препараты для химиотерапии (цисплатин, гемцитабин, паклитаксел и др.) [3], и лишь в отдельных случаях - таргетную терапию:

а) в случае метастазов НЕК2-положительного рака молочной железы применяют моноклональные антитела к рецепторам эпидермального фактора роста человека 2-го типа НЕК2 (трастузумаб и пертузумаб), а также лапатиниб, ингибитор внутриклеточной тирозинкиназы, связывающейся с рецепторами семейства ЕгЬБ, в том числе НЕЕ2 [9]. Таргетная терапия подобных метастазов в сочетании с химиотерапией обладает достаточно высокой эффективностью [10], но возможности лечения таких пациентов все равно остаются ограниченными [6];

б) в случае метастазов меланомы с активирующими мутациями киназы БЕЛБ возможно использование соответствующих ингибиторов -вемурафениба и дабрафениба, рисунок 1.1 [11, 12];

о

г/

Р,

С1

н

Вемурафениб

Дабрафениб

Рисунок 1.1 - Таргетные препараты для борьбы с МГМ меланомы с активирующими мутациями БЯЛГ

в) при метастазах колоректального рака применяют рекомбинантные антитела против рецептора БОБЯ (цетуксимаб, панитумумаб и бевацизумаб) [3];

г) при метастазах АЬК-положительной аденокарциномы легкого назначают ингибитор рецепторов тирозинкиназ кризотиниб, а при мутации гена БОБЯ - ингибиторы тирозинкиназы рецепторов эпидермального фактора роста (эрлотиниб, гефитиниб) и блокатор протеинтирозинкиназных рецепторов семейства ЕгЬБ афатиниб (рисунок 1.2).

Кризотиниб

Эрлотиниб

Гефитиниб р Афатиниб

Рисунок 1.2 - Таргетные препараты для борьбы с МГМ ЛЬК-положительной аденокарциномы

С1

г

Следует отметить, что ни один из представленных препаратов не был разработан специально для борьбы с МГМ, все они были созданы для лечения первичных опухолей в соответствии с их особенностями и применяются при МГМ в условиях отсутствия альтернативных препаратов.

Развитие МГМ является фактором неблагоприятного прогноза и эффективная терапия МГМ имеет первостепенное значение для повышения продолжительности и качества жизни пациентов. Таким образом, несмотря на то, что в случае лечения онкологических поражений мозга таргетная и химиотерапия являются лишь одним из целого ряда инструментов, таких как хирургия или радиотерапия [13-16], медикаментозное лечение метастазов головного мозга является неотъемлемым этапом и во многом определяет продолжительность жизни пациентов [17], а создание таргетных препаратов, направленных на борьбу с метастатическими опухолями мозга, становится все более актуальной задачей.

1.2. Гематоэнцефалический барьер

При лечении многих заболеваний защищенность ЦНС от лекарственных препаратов является положительным фактором. Так, сонливость при приеме некоторых антигистаминных или антимускариновых препаратов связана со способностью этих препаратов попадать в мозг и взаимодействовать с соответствующими рецепторами (Н1-гистаминовыми и мускариновыми соответственно) [1, 18]. С другой стороны, при разработке препаратов для лечения нарушений в работе ЦНС, а также для борьбы с опухолями мозга, создание препаратов, способных попадать в мозг, становится чрезвычайно важной задачей [19].

Главным препятствием на пути веществ в мозг является гематоэнцефалический барьер (ГЭБ), и каким бы активным ни было действующее вещество, препарат не может быть эффективным против заболевания мозга, если он не способен преодолеть ГЭБ.

При рациональном создании препаратов для борьбы с МГМ можно использовать подход, проиллюстрированный на рисунке 1.3. Поскольку резистентность МГМ к препаратам определяется в первую очередь свойствами первичной опухоли, то за основу для нового препарата имеет смысл брать вещество, эффективное против первичной опухоли

(рисунок 1.3, ). При этом в качестве модифицирующего агента могут выступать как мембранотропные низкомолекулярные фрагменты, образующие с первичным соединением ковалентные связи и повышающие их сродство к ГЭБ, так и различные транспортные векторы (рисунок 1.3, ). Методы преодоления ГЭБ рассмотрены подробнее в разделе 2.2.2.

Высокая

Низкая

Низкая Способность

преодолевать ГЭБ

Высокая

Рисунок 1.3 - Создание препаратов для борьбы с МГМ путем модификации веществ, эффективных против первичных опухолей

1.2.1. Особенности строения и транспортных механизмов ГЭБ

Строение и функции ГЭБ описаны в ряде русскоязычных работ, например [20, 21], однако необходимо остановится на некоторых важных моментах, относящихся к представленной работе.

Гематоэнцефалический барьер - это физиологический барьер, разделяющий кровеносную систему и ЦНС. Основным структрурным элементом ГЭБ являются эндотелиоциты, которые образуют плотный монослой на внутренней поверхности кровеносных сосудов. Вместе с астроцитами, перицитами, микроглией и нейронами они образуют клеточный комплекс (neurovascular unit, NVU), обеспечивающий функционирование ГЭБ [22].

Особенностью эндотелия ЦНС является наличие плотных контактов между клетками. Даже такие малые молекулы, как вода или глицерин, с трудом могут попадать в мозг через просветы между эндотелиоцитами - для них предусмотрены специальные гидрофильные каналы, образованные белком аквапорином. Кроме того, в эндотелиоцитах практически отсутствует трансцитоз.

Для доставки в мозг большинства необходимых ему веществ в эндотелиоцитах предусмотрены специальные транспортные системы. Так, на поверхности клетки со стороны кровеносного русла располагаются рецепторы, связывающие высокомолекулярные вещества - в этом случае вещество переносится сквозь внутриклеточное пространство внутри везикулы. Например, для переноса глюкозы и необходимых мозгу аминокислот в мембраны клеток эндотелия встроены особые белки-переносчики. Семейство транспортных белков LAT обеспечивает перенос нейтральных аминокислот [23, 24]. Семейство GLUT обеспечивает доставку гексоз и является наиболее активно задействованной транспортной системой [25, 26]. Свои транспортные системы предусмотрены также для метаболитов и гормонов [27-29]. Поскольку эти транспортеры обеспечивают перенос вещества из области с меньшей концентрацией (кровь) в область с большей (мозг), то их работа требует затрат энергии, высвобождающейся при гидролизе АТФ. В мозге есть несколько участков, не защищенных полноценным ГЭБ (циркумвентрикулярные органы), что необходимо для переноса белков и гормонов мозга в кровоток, однако и эти зоны

организованы так, чтобы не допускать попадания токсичных веществ в мозг [30].

Таким образом, веществу, для которого не предусмотрена собственная транспортная система, необходимо пройти эндотелиальную клетку насквозь и, следовательно, преодолеть клеточные мембраны (рисунок 1.4). Большинство веществ преодолевает ГЭБ именно путем пассивной диффузии сквозь клетки [31, 32].

Ч

Плотные контакты

Капилляр

Эндотелиоциты Рисунок 1.4 - Строение ГЭБ

Клеточная мембрана

В случае, если чужеродное вещество все же смогло преодолеть первый мембранный барьер, в эндотелиальных клетках ГЭБ работает еще один защитный механизм: специальные транспортные белки семейства ABC обеспечивают выведение веществ обратно в кровяное русло. Наиболее известным из них является гликопротеин-Р, характерный, помимо ГЭБ, также для кишечного эпителия и опухолевых клеток. Этот представитель семейства ABC осуществляет АТФ-зависимый эффлюкс ксенобиотиков и способствует развитию резистентности опухолей к лекарственным препаратам за счет снижения концентрации активного компонента в клетке

(рисунок 1.5) [32, 33]. Показано, что блокирование функции этого белка (генетический или химический нокаут) приводит к увеличению количества попадающих в мозг липофильных лекарственных препаратов в 10-50 раз [34]. Подробно о нем можно прочитать в работах [35, 18].

Внешняя среда

Внутренняя среда

Вещество

Рисунок 1.5 - Гликопротеин-Р

Стоит отметить, что при определенных условиях ГЭБ может перестать выполнять свои барьерные функции, что связано в основном с нарушениями транспортных механизмов, такими как снижение/увеличение экспрессии белков транспортных систем или нарушение целостности плотных контактов. Такие эффекты наблюдаются при черепно-мозговых травмах [36], инсульте [37], менингите [38], диабете [39], нейродегенеративных [40, 41] и некоторых формах онкологических заболеваний [42]. Определенные изменения, в частности, снижение активности гликопротеина-Р, происходят также и в процессе старения [43].

1.2.2. Способы доставки лекарственных средств в мозг

В настоящее время предложено множество методов, обеспечивающих направленную доставку низкомолекулярных соединений в мозг, однако

практически все они находятся в стадии исследования. Принципиально их можно разделить на две группы:

а) методы, связанные с воздействием непосредственно на ГЭБ;

б) методы, основанные на модификации активного вещества.

Модификация ГЭБ

Применение ультразвука

Этот метод в последнее время активно исследуется и предлагается для доставки как низкомолекулярных соединений, так и антител и вирусных векторов. При этом временное открытие ГЭБ происходит в результате локального механического воздействия монодисперсных липидных микропузырьков, вызванного ультразвуком [44].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Григорьева, Татьяна Алексеевна, 2016 год

СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ

1. Насхлеташвили, Д.Р. Роль таргетной терапии в комплексном лечении больных раком почки с метастатическим поражением головного мозга / Д.Р. Насхлеташвили, В.А. Горбунова, А.Х. Бекяшев, В.Б. Карахан, Е.А. Москвина, Е.В. Прозоренко // Опухоли головы и шеи. - 2012. - Вып. 4. -С. 19-25.

2. Mintz, A. Management of single brain metastasis: a practice guideline / A. Mintz, J. Perry, K. Spithoff, A. Chambers, N. Laperriere // Curr Oncol. - 2007. - Vol. 14. - № 4. - P. 131-143.

3. Насхлеташвили, Д.Р. Практические рекомендации по лекарственному лечению метастатических опухолей головного мозга / Д.Р. Насхлеташвили, О.В. Абсалямова, В.А. Алешин, С.М. Банов, А.Х. Бекяшев, Д.М. Белов // Злокачественные опухоли. - 2015. - Вып. 4. - С. 80-98.

4. Зайцев, А.М. Лечение метастатического поражения головного мозга /

A.М. Зайцев, М.И. Куржупов, Е.А. Потапова, О.Н. Кирсанова // Исследования и практика в медицине. - 2015. - Т. 2. - Вып. 2. - С. 8-14.

5. Лошаков, В.А. Интракраниальные метастатические опухоли /

B.А. Лошаков // Клиническая неврология. - 2005. - Т. 3. - Вып. 5. -

C. 402-408.

6. Дашян, Г.А. Роль таргетной терапии в лечении метастатического HER-2-положительного рака молочной железы с поражением головного мозга / Г.А. Дашян, В.Ф. Семиглазов, П.В. Криворотько, Т.Ю. Семиглазова, Э.Э. Топузов, Р.М. Палтуев, К.Ю. Зернов, В.С. Аполлонова, С.С. Ерещенко, А.В. Петрова, Е.К. Жильцова, О.А. Иванова // Опухоли женской репродуктивной системы. - 2016. - Т. 12. - Вып. 1. - С. 46-51.

7. Devriendt, L.M. Treatment of brain metastases from breast cancer / L.M. Devriendt, J. Hildebrand // Breast Cancer and Molecular Medicine. - 2006. -P. 505-523.

8. Palmieri, D. Central nervous system metastasis, the biological basis and

clinical considerations / D. Palmieri // New York: Springer. - 2012. - 234 р.

9. Falchook, G.S. Dabrafenib in patients with melanoma, untreated brain metastases, and other solid tumours: a phase 1 dose-escalation trial /

G.S. Falchook, G.V. Long, R. Kurzrock, K.B. Kim, T.H. Arkenau, M.P. Brown, O. Hamid, J.R. Infante, M. Millward, A.C. Pavlick, S.J. O'Day, S.C. Blackman, C.M. Curtis, P. Lebowitz, B. Ma, D. Ouellet, R.F. Kefford // Lancet. - 2012. -Vol. 379. - № 9829. - P. 1893-1901.

10. Насхлеташвили, Д.Р. Современные возможности таргетной терапии в лечении больных раком молочной железы с гиперэкспрессией her-2/neu и с метастатическим поражением головного мозга / Д.Р. Насхлеташвили,

B.А. Горбунова, Е.А. Москвина // Вопросы онкологии. - 2013. - Т. 59. -Вып. 3. - С. 347-351.

11. Bollag, G. Clinical efficacy of a RAF inhibitor needs broad target blockade in BRAF-mutant melanoma / G. Bollag, P. Hirth, J. Tsai, J. Zhang, P.N. Ibrahim,

H. Cho, W. Spevak, C. Zhang, Y. Zhang, G. Habets, E.A. Burton, B. Wong, G. Tsang, B.L. West, B. Powell, R. Shellooe, A. Marimuthu, H. Nguyen, K.Y. Zhang, D.R. Artis, J. Schlessinger, F. Su, B. Higgins, R. Iyer, K. D'Andrea, A. Koehler, M. Stumm, P.S. Lin, R.J. Lee, J. Grippo, I. Puzanov, K.B. Kim, A. Ribas, G.A. McArthur, J.A. Sosman, P.B. Chapman, K.T. Flaherty, X. Xu, K.L. Nathanson, K. Nolop // Nature. - 2010. - Vol. 467. - № 7315. - P. 596-599.

12. Bachelot, T. Lapatinib plus capecitabine in patients with previously untreated brain metastases from HER2-positive metastatic breast cancer (LANDSCAPE): a single-group phase 2 study / T. Bachelot, G. Romieu, M. Campone, V. Dieras, C. Cropet, F. Dalenc, M. Jimenez, E. Le Rhun, J.Y. Pierga, A. Goncalves, M. Leheurteur, J. Domont, M. Gutierrez, H. Cure, J.M. Ferrero, C. Labbe-Devilliers // Lancet Oncol. - 2013. - Vol. 14. - № 1. -P. 64-71.

13. Caffo, M. Innovative therapeutic strategies in the treatment of brain metastases / M. Caffo, V. Barresi, G. Caruso, M. Cutugno, G. La Fata, M. Venza,

C. Alafaci, F. Tomasello // Int J Mol Sci. - 2013. - Vol. 14. - № 1. -

P. 2135-2174.

14. Olson, J.J. The role of emerging and investigational therapies for metastatic brain tumors: a systematic review and evidence-based clinical practice guideline of selected topics / J.J. Olson, N.A. Paleologos, L.E. Gaspar, P.D. Robinson, R.E. Morris, M. Ammirati, D.W. Andrews, A.L. Asher, S.H. Burri, C.S. Cobbs, D. Kondziolka, M.E. Linskey, J.S. Loeffler, M. McDermott, M.P. Mehta, T. Mikkelsen, R.A. Patchell, T.C. Ryken, S.N. Kalkanis // J Neurooncol. - 2010. -Vol. 96. - № 1. - P. 115-142.

15. Eichler, A.F. Multidisciplinary management of brain metastases /

A.F. Eichler, J.S. Loeffler // Oncologist. - 2007. - Vol. 12. - № 7. - P. 884-898.

16. Thomas, S.S. Modern multidisciplinary management of brain metastases / S.S. Thomas, E.M. Dunbar // Curr Oncol Rep. - 2010. - Vol. 12. - № 1. -P. 34-40.

17. Чиссов, В.И. Диагностика и лечение злокачественных новообразований. Клинические протоколы под ред. академика РАМН

B.И. Чиссова. - М., 2013. - 599 с.

18. Bagal, S. Restricting CNS penetration of drugs to minimise adverse events: role of drug transporters / S. Bagal, P. Bungay // Drug Discov Today Technol. -2014. - Vol. 12. - P. 79-85.

19. Di, L. Demystifying brain penetration in central nervous system drug discovery. Miniperspective / L. Di, H. Rong, B. Feng // J Med Chem. - 2013. -Vol. 56. - № 1. - P. 2-12.

20. Блинов, Д.В. Современные представления о роли нарушения резистентности гематоэнцефалического барьера в патогенезе заболеваний ЦНС. Часть 2: функции и механизмы повреждения гематоэнцефалического барьера / Д.В. Блинов // Эпилепсия и пароксизмальные состояния. - 2014. -Т. 6. - Вып. 1. - С. 70-84.

21. Аляутдин, Р.Н. Транспорт лекарственных веществ через гематоэнцефалический барьер: линия Мажино или волшебный сезам? / Р.Н. Аляутдин // Молекулярная медицина. - 2012. - Вып. 3. - С. 3-13.

22. Abbott, N.J. Structure and function of the blood-brain barrier / N.J. Abbott, A.A. Patabendige, D.E. Dolman, S.R. Yusof, D.J. Begley // Neurobiol Dis. - 2010. - Vol. 37. - № 1. - P. 13-25.

23. Kanai, Y. Expression cloning and characterization of a transporter for large neutral amino acids activated by the heavy chain of 4F2 antigen (CD98) / Y. Kanai, H. Segawa, K. Miyamoto, H. Uchino, E. Takeda, H. Endou // J Biol Chem. - 1998. - Vol. 273. - № 37. - P. 23629-23632.

24. Mastroberardino, L. Amino-acid transport by heterodimers of 4F2hc/CD98 and members of a permease family / L. Mastroberardino, B. Spindler, R. Pfeiffer, P.J. Skelly, J. Loffing, C.B. Shoemaker, F. Verrey // Nature. - 1998. - Vol. 395. -№ 6699. - P. 288-291.

25. Kumagai, A.K. Differential glycosylation of the GLUT1 glucose transporter in brain capillaries and choroid plexus / A.K. Kumagai, K.J. Dwyer, W.M. Pardridge // Biochim Biophys Acta. - 1994. - Vol. 1193. - № 1. - P. 24-30.

26. Tsuji, A. Small molecular drug transfer across the blood-brain barrier via carrier-mediated transport systems / A. Tsuji // NeuroRx. - 2005. - Vol. 2. -№ 1. - P. 54-62.

27. Banks, W.A. Permeability of the blood-brain barrier to peptides: an approach to the development of therapeutically useful analogs / W.A. Banks, K.L. Audus, T.P. Davis // Peptides. - 1992. - Vol. 13. - № 6. - P. 1289-1294.

28. Begley, D.J. The blood-brain barrier: principles for targeting peptides and drugs to the central nervous system / D.J. Begley // J Pharm Pharmacol. - 1996. -Vol. 48. - № 2. - P. 136-146.

29. Kang, Y.S. In vivo and in vitro evidence for a common carrier mediated transport of choline and basic drugs through the blood-brain barrier / Y.S. Kang, T. Terasaki, T. Ohnishi, A. Tsuji // J Pharmacobiodyn. - 1990. - Vol. 13. - № 6. -P. 353-360.

30. Morita, S. Different vascular permeability between the sensory and secretory circumventricular organs of adult mouse brain / S. Morita, S. Miyata // Cell and Tissue Research. - 2012. - Vol. 349. - № 2. - P. 589-603.

31. Banks, W.A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier / W.A. Banks // BMC Neurol. - 2009. - Vol. 9 Suppl 1. - P. S3.

32. Lee, G. Drug transporters in the central nervous system: brain barriers and brain parenchyma considerations / G. Lee, S. Dallas, M. Hong, R. Bendayan // Pharmacol Rev. - 2001. - Vol. 53. - № 4. - P. 569-596.

33. Laquintana, V. New strategies to deliver anticancer drugs to brain tumors / V. Laquintana, A. Trapani, N. Denora, F. Wang, J.M. Gallo, G. Trapani // Expert Opin Drug Deliv. - 2009. - Vol. 6. - № 10. - P. 1017-1032.

34. Ha, S.N. Mini review on molecular modeling of P-glycoprotein (Pgp) / S.N. Ha, J. Hochman, R.P. Sheridan // Curr Top Med Chem. - 2007. - Vol. 7. - № 15. -P. 1525-1529.

35. Ташенова, А.И. Транспортная система гликопротеина-Р и фармакокинетика лекарственных средств / А.И. Ташенова // Биомедицина. -2010. - Вып. 4. - С. 24-32.

36. Slack, R.S. Respiratory dysfunction associated with traumatic injury to the central nervous system / R.S. Slack, W. Shucart // Clin Chest Med. - 1994. -Vol. 15. - № 4. - P. 739-749.

37. Belayev, L. Quantitative evaluation of blood-brain barrier permeability following middle cerebral artery occlusion in rats / L. Belayev, R. Busto, W. Zhao, M.D. Ginsberg // Brain Res. - 1996. - Vol. 739. - № 1-2. -P. 88-96.

38. Kim, B.J. Bacterial induction of Snail1 contributes to blood-brain barrier disruption / B.J. Kim, B.M. Hancock, A. Bermudez, N. del Cid, E. Reyes, N.M. van Sorge, X. Lauth, C.A. Smurthwaite, B.J. Hilton, A. Stotland, A. Banerjee, J. Buchanan, R. Wolkowicz, D. Traver, K.S. Doran // J Clin Invest. -2015. - Vol. 125. - № 6. - P. 2473-2483.

39. Starr, J.M. Increased blood-brain barrier permeability in type II diabetes demonstrated by gadolinium magnetic resonance imaging / J.M. Starr, J. Wardlaw, K. Ferguson, A. MacLullich, I.J. Deary, I. Marshall // J Neurol Neurosurg Psychiatry. - 2003. - Vol. 74. - № 1. - P. 70-76.

40. Desai, B.S. Blood-brain barrier pathology in Alzheimer's and Parkinson's disease: implications for drug therapy / B.S. Desai, A.J. Monahan, P.M. Carvey,

B. Hendey // Cell Transplant. - 2007. - Vol. 16. - № 3. - P. 285-299.

41. Morgan, L. Inflammation and dephosphorylation of the tight junction protein occludin in an experimental model of multiple sclerosis / L. Morgan, B. Shah, L.E. Rivers, L. Barden, A.J. Groom, R. Chung, D. Higazi, H. Desmond, T. Smith, J.M. Staddon // Neuroscience. - 2007. - Vol. 147. - № 3. - P. 664-673.

42. Roelcke, U. Alteration of blood-brain barrier in human brain tumors: comparison of [18F]fluorodeoxyglucose, [11C]methionine and rubidium-82 using PET / U. Roelcke, E.W. Radu, K. von Ammon, O. Hausmann, R.P. Maguire, K.L. Leenders // J Neurol Sci. - 1995. - Vol. 132. - № 1. - P. 20-27.

43. Silverberg, G.D. Amyloid efflux transporter expression at the blood-brain barrier declines in normal aging / G.D. Silverberg, A.A. Messier, M.C. Miller, J.T. Machan, S.S. Majmudar, E.G. Stopa, J.E. Donahue, C.E. Johanson // J Neuropathol Exp Neurol. - 2010. - Vol. 69. - № 10. - P. 1034-1043.

44. Sun, T. Acoustic cavitation-based monitoring of the reversibility and permeability of ultrasound-induced blood-brain barrier opening / T. Sun, G. Samiotaki, S. Wang, C. Acosta, C.C. Chen, E.E. Konofagou // Phys Med Biol. -2015. - Vol. 60. - № 23. - P. 9079-9094.

45. Gonzales-Portillo, G.S. Mannitol-enhanced delivery of stem cells and their growth factors across the blood-brain barrier / G.S. Gonzales-Portillo, P.R. Sanberg, M. Franzblau, C. Gonzales-Portillo, T. Diamandis, M. Staples,

C.D. Sanberg, C.V. Borlongan // Cell Transplant. - 2014. - Vol. 23. - № 4-5. -P. 531-539.

46. Pardridge, W.M. Vector-mediated delivery of a polyamide ("peptide") nucleic acid analogue through the blood-brain barrier in vivo / W.M. Pardridge, R.J. Boado, Y.S. Kang // Proc Natl Acad Sci USA. - 1995. - Vol. 92. - № 12. -P. 5592-5596.

47. Zhang, H. Bradykinin-induced blood-brain tumor barrier permeability increase is mediated by adenosine 5'-triphosphate-sensitive potassium channel /

H. Zhang, Y.T. Gu, Y.X. Xue // Brain Res. - 2007. - Vol. 1144. - P. 33-41.

48. Kemper, E.M. Improved penetration of docetaxel into the brain by coadministration of inhibitors of P-glycoprotein / E.M. Kemper, M. Verheij, W. Boogerd, J.H. Beijnen, O. van Tellingen // Eur J Cancer. - 2004. - Vol. 40. -№ 8. - P. 1269-1274.

49. Obradovic, T. Assessment of the first and second generation antihistamines brain penetration and role of P-glycoprotein / T. Obradovic, G.G. Dobson, T. Shingaki, T. Kungu, I.J. Hidalgo // Pharm Res. - 2007. - Vol. 24. - № 2. -P. 318-327.

50. Lipinski, C.A. Experimental and computational approaches to estimate solubility and permeability in drug discovery and development settings / C.A. Lipinski, F. Lombardo, B.W. Dominy, P.J. Feeney // Adv Drug Deliv Rev. -2001. - Vol. 46. - № 1-3. - P. 3-26.

51. Gabathuler, R. Approaches to transport therapeutic drugs across the blood-brain barrier to treat brain diseases / R. Gabathuler // Neurobiol Dis. - 2010. -Vol. 37. - № 1. - P. 48-57.

52. Kageyama, T. The 4F2hc/LAT1 complex transports L-DOPA across the blood-brain barrier / T. Kageyama, M. Nakamura, A. Matsuo, Y. Yamasaki, Y. Takakura, M. Hashida, Y. Kanai, M. Naito, T. Tsuruo, N. Minato, S. Shimohama // Brain Res. - 2000. - Vol. 879. - № 1-2. - P. 115-121.

53. Ulbrich, K. Transferrin- and transferrin-receptor-antibody-modified nanoparticles enable drug delivery across the blood-brain barrier (BBB) / K. Ulbrich, T. Hekmatara, E. Herbert, J. Kreuter // Eur J Pharm Biopharm. - 2009. - Vol. 71. - № 2. - P. 251-256.

54. Boado, R.J. Insulin receptor antibody-sulfamidase fusion protein penetrates the primate blood-brain barrier and reduces glycosoaminoglycans in Sanfilippo type A cells / R.J. Boado, J.Z. Lu, E.K. Hui, W.M. Pardridge // Mol Pharm. -2014. - Vol. 11. - № 8. - P. 2928-2934.

55. Samad, A. Liposomal drug delivery systems: an update review / A. Samad, Y. Sultana, M. Aqil // Curr Drug Deliv. - 2007. - Vol. 4. - № 4. - P. 297-305.

56. Anand, P. Tailored delivery of analgesic ziconotide across a blood brain barrier model using viral nanocontainers / P. Anand, A. O'Neil, E. Lin, T. Douglas, M. Holford // Sci Rep. - 2015. - Vol. 5. - P. 12497.

57. Huang, F.Y. In vitro and in vivo evaluation of lactoferrin-conjugated liposomes as a novel carrier to improve the brain delivery / F.Y. Huang, W.J. Chen, W.Y. Lee, S.T. Lo, T.W. Lee, J.M. Lo // Int J Mol Sci. - 2013. -Vol. 14. - № 2. - P. 2862-2874.

58. Liu, L. Polymeric micelles anchored with TAT for delivery of antibiotics across the blood-brain barrier / L. Liu, S.S. Venkatraman, Y.Y. Yang, K. Guo, J. Lu, B. He, S. Moochhala, L. Kan // Biopolymers. - 2008. - Vol. 90. - № 5. -P. 617-623.

59. Балабаньян В. Ю. Основные механизмы доставки лекарственных веществ в мозг с помощью полимерных наночастиц / В. Ю. Балабаньян // Фармакокинетика и фармакодинамика. - 2012. - Vol. 2. - C. 3-9.

60. Soni, S. Nanomedicine in Central Nervous System (CNS) Disorders: A Present and Future Prospective / S. Soni, R.K. Ruhela, B. Medhi // Adv Pharm Bull. - 2016. - Vol. 6. - № 3. - P. 319-335.

61. Ehrlich, P. Das Sauerstoff-Bedürfniss des Organismus: Eine Farbenanalytische Studie / P. Ehrlich // August Hirschwald, Berlin (die Habilitationsschrift von Paul Ehrlich). - 1885. - P. 167.

62. Schinkel, A.H. P-glycoprotein in the blood-brain barrier of mice influences the brain penetration and pharmacological activity of many drugs / A.H. Schinkel, E. Wagenaar, C.A. Mol, L. van Deemter // J Clin Invest. - 1996. - Vol. 97. -№ 11. - P. 2517-2524.

63. Takasato, Y. An in situ brain perfusion technique to study cerebrovascular transport in the rat / Y. Takasato, S.I. Rapoport, Q.R. Smith // Am J Physiol. -1984. - Vol. 247. - № 3. - P. 484-493.

64. Montermini, D. Effects of perfusion rate on permeability of frog and rat mesenteric microvessels to sodium fluorescein / D. Montermini, C.P. Winlove, C. Michel // J Physiol. - 2002. - Vol. 543. - № 3. - P. 959-975.

65. Cisternino, S. Screening of multidrug-resistance sensitive drugs by in situ brain perfusion in P-glycoprotein-deficient mice / S. Cisternino, C. Rousselle,

C. Dagenais, J.M. Scherrmann // Pharm Res. - 2001. - Vol. 18. - № 2. -P. 183-190.

66. Zlokovic, B.V. Measurement of solute transport across the blood-brain barrier in the perfused guinea pig brain: method and application to N-methyl-alpha-aminoisobutyric acid / B.V. Zlokovic, D.J. Begley, B.M. Djuricic,

D.M. Mitrovic // J Neurochem. - 1986. - Vol. 46. - № 5. - P. 1444-1451.

67. Allen, D.D. Characterization of the blood-brain barrier choline transporter using the in situ rat brain perfusion technique / D.D. Allen, Q.R. Smith // J Neurochem. - 2001. - Vol. 76. - № 4. - P. 1032-1041.

68. Kakee, A. Brain efflux index as a novel method of analyzing efflux transport at the blood-brain barrier / A. Kakee, T. Terasaki, Y. Sugiyama // J Pharmacol Exp Ther. - 1996. - Vol. 277. - № 3. - P. 1550-1559.

69. Li, L. Brain efflux index to investigate the influence of active efflux on brain distribution of pemetrexed and methotrexate / L. Li, S. Agarwal, W.F. Elmquist // Drug Metab Dispos. - 2013. - Vol. 41. - № 3. - P. 659-667.

70. Timofeev, I. Cerebral extracellular chemistry and outcome following traumatic brain injury: a microdialysis study of 223 patients / I. Timofeev, K.L. Carpenter, J. Nortje, P.G. Al-Rawi, M.T. O'Connell, M. Czosnyka, P. Smielewski, J.D. Pickard, D.K. Menon, P.J. Kirkpatrick, A.K. Gupta, P.J. Hutchinson // Brain. - 2011. - Vol. 134. - № 2. - P. 484-494.

71. Gunaratna, P.C. An automated blood sampler for simultaneous sampling of systemic blood and brain microdialysates for drug absorption, distribution, metabolism, and elimination studies / P.C. Gunaratna, P.T. Kissinger, C.B. Kissinger, J.F. Gitzen // J Pharmacol Toxicol Methods. - 2004. - Vol. 49. -№ 1. - P. 57-64.

72. Benveniste, H. Regional cerebral glucose phosphorylation and blood flow after insertion of a microdialysis fiber through the dorsal hippocampus in the rat / H. Benveniste, J. Drejer, A. Schousboe, N.H. Diemer // J Neurochem. - 1987. -

Vol. 49. - № 3. - P. 729-734.

73. Okada, M. In-vivo imaging of blood-brain barrier permeability using positron emission tomography with 2-amino-[3-11C]isobutyric acid / M. Okada, T. Kikuchi, T. Okamura, Y. Ikoma, A.B. Tsuji, H. Wakizaka, T. Kamakura, I. Aoki, M.R. Zhang, K. Kato // Nucl Med Commun. - 2015. - Vol. 36. - № 12. -P. 1239-1248.

74. Syvanen, S. Using PET studies of P-gp function to elucidate mechanisms underlying the disposition of drugs / S. Syvanen, M. Hammarlund-Udenaes // Curr Top Med Chem. - 2010. - Vol. 10. - № 17. - P. 1799-1809.

75. Sanchez del Pino, M.M. Biochemical discrimination between luminal and abluminal enzyme and transport activities of the blood-brain barrier / M.M. Sanchez del Pino, R.A. Hawkins, D.R. Peterson // J Biol Chem. - 1995. -Vol. 270. - № 25. - P. 14907-14912.

76. Simpson, I.A. Glucose transporter asymmetries in the bovine blood-brain barrier / I.A. Simpson, S.J. Vannucci, M.R. DeJoseph, R.A. Hawkins // J Biol Chem. - 2001. - Vol. 276. - № 16. - P. 12725-12729.

77. Audus, K.L. Characterization of an in vitro blood-brain barrier model system for studying drug transport and metabolism / K.L. Audus, R.T. Borchardt // Pharm Res. - 1986. - Vol. 3. - № 2. - P. 81-87.

78. Miller, D.W. Evaluation of drug efflux transporter liabilities of darifenacin in cell culture models of the blood-brain and blood-ocular barriers / D.W. Miller, M. Hinton, F. Chen // Neurourol Urodyn. - 2011. - Vol. 30. - № 8. - P. 16331638.

79. Trickler, W.J. Porcine brain microvessel endothelial cells show proinflammatory response to the size and composition of metallic nanoparticles / W.J. Trickler, S.M. Lantz-McPeak, B.L. Robinson, M.G. Paule, W. Slikker, jr., A.S. Biris, J.J. Schlager, S.M. Hussain, J. Kanungo, C. Gonzalez, S.F. Ali // Drug Metab Rev. - 2014. - Vol. 46. - № 2. - P. 224-231.

80. Novakova, I. Transport rankings of non-steroidal antiinflammatory drugs across blood-brain barrier in vitro models / I. Novakova, E.A. Subileau, S. Toegel,

D. Gruber, B. Lachmann, E. Urban, C. Chesne, C.R. Noe, W. Neuhaus // PLoS One. - 2014. - Vol. 9. - № 1. - P. e86806.

81. Thompson, S.E. Leucine-enkephalin metabolism in brain microvessel endothelial cells / S.E. Thompson, K.L. Audus // Peptides. - 1994. - Vol. 15. -№ 1. - P. 109-116.

82. Iwanaga, K. Inhibitory effects of furanocoumarin derivatives in Kampo extract medicines on P-glycoprotein at the blood-brain barrier / K. Iwanaga, S. Yoneda, Y. Hamahata, M. Miyazaki, M. Shibano, M. Taniguchi, K. Baba, M. Kakemi // Biol Pharm Bull. - 2011. - Vol. 34. - № 8. - P. 1246-1251.

83. Wang, Q. Evaluation of the MDR-MDCK cell line as a permeability screen for the blood-brain barrier / Q. Wang, J.D. Rager, K. Weinstein, P.S. Kardos, G.L. Dobson, J. Li, I.J. Hidalgo // Int J Pharm. - 2005. - Vol. 288. - № 2. -P. 349-359.

84. Rizzo, A. Melanoma cells homing to the brain: an in vitro model / A. Rizzo, C. Vasco, V. Girgenti, V. Fugnanesi, C. Calatozzolo, A. Canazza, A. Salmaggi, L. Rivoltini, M. Morbin, E. Ciusani // Biomed Res Int. - 2015. - Vol. 2015. -P. 476069.

85. Butt, A.M. Electrical resistance across the blood-brain barrier in anaesthetized rats: a developmental study / A.M. Butt, H.C. Jones, N.J. Abbott // J Physiol. - 1990. - Vol. 429. - P. 47-62.

86. Eigenmann, D.E. Comparative study of four immortalized human brain capillary endothelial cell lines, hCMEC/D3, hBMEC, TY10, and BB19, and optimization of culture conditions, for an in vitro blood-brain barrier model for drug permeability studies / D.E. Eigenmann, G. Xue, K.S. Kim, A.V. Moses, M. Hamburger, M. Oufir // Fluids Barriers CNS. - 2013. - Vol. 10. - № 1. -P. 33-49.

87. Kitamura, A. Cocktail-dosing microdialysis study to simultaneously assess delivery of multiple organic-cationic drugs to the brain / A. Kitamura, T. Okura, K. Higuchi, Y. Deguchi // J Pharm Sci. - 2016. Vol. 105. - № 2. - P. 935-940.

88. Winger, R.C. Rapid remodeling of tight junctions during paracellular

diapedesis in a human model of the blood-brain barrier / R.C. Winger, J.E. Koblinski, T. Kanda, R.M. Ransohoff, W.A. Muller // J Immunol. - 2014. -Vol. 193. - № 5. - P. 2427-2437.

89. Kusch-Poddar, M. Evaluation of the immortalized human brain capillary endothelial cell line BB19 as a human cell culture model for the blood-brain barrier / M. Kusch-Poddar, J. Drewe, I. Fux, H. Gutmann // Brain Res. - 2005. -Vol. 1064. - № 1-2. - P. 21-31.

90. Sano, Y. Establishment of a new conditionally immortalized human brain microvascular endothelial cell line retaining an in vivo blood-brain barrier function / Y. Sano, F. Shimizu, M. Abe, T. Maeda, Y. Kashiwamura, S. Ohtsuki, T. Terasaki, M. Obinata, K. Kajiwara, M. Fujii, M. Suzuki, T. Kanda // J Cell Physiol. - 2010. - Vol. 225. - № 2. - P. 519-528.

91. Weksler, B.B. Blood-brain barrier-specific properties of a human adult brain endothelial cell line / B.B. Weksler, E.A. Subileau, N. Perriere, P. Charneau, K. Holloway, M. Leveque, H. Tricoire-Leignel, A. Nicotra, S. Bourdoulous, P. Turowski, D.K. Male, F. Roux, J. Greenwood, I.A. Romero, P.O. Couraud // FASEB J. - 2005. - Vol. 19. - № 13. - P. 1872-1874.

92. Cucullo, L. Immortalized human brain endothelial cells and flow-based vascular modeling: a marriage of convenience for rational neurovascular studies / L. Cucullo, P.O. Couraud, B. Weksler, I.A. Romero, M. Hossain, E. Rapp, D. Janigro // J Cereb Blood Flow Metab. - 2008. - Vol. 28. - № 2. - P. 312-328.

93. Hong, L. Roles of P-glycoprotein and multidrug resistance protein in transporting para-aminosalicylic acid and its N-acetylated metabolite in mice brain / L. Hong, C. Xu, S. O'Neal, H.C. Bi, M. Huang, W. Zheng, S. Zeng // Acta Pharmacol Sin. - 2014. - Vol. 35. - № 12. - P. 1577-1585.

94. Pastan, I. A retrovirus carrying an MDR1 cDNA confers multidrug resistance and polarized expression of P-glycoprotein in MDCK cells / I. Pastan, M.M. Gottesman, K. Ueda, E. Lovelace, A.V. Rutherford, M.C. Willingham // Proc Natl Acad Sci USA. - 1988. - Vol. 85. - № 12. - P. 4486-4490.

95. Grover, A. Brain-targeted delivery of docetaxel by glutathione-coated

nanoparticles for brain cancer / A. Grover, A. Hirani, Y. Pathak, V. Sutariya // AAPS PharmSciTech. - 2014. - Vol. 15. - № 6. - P. 1562-1568.

96. Chat, M. Drug metabolizing enzyme activities and superoxide formation in primary and immortalized rat brain endothelial cells / M. Chat, C. Bayol-Denizot,

G. Suleman, F. Roux, A. Minn // Life Sci. - 1998. - Vol. 62. - № 2. - P. 151-163.

97. Regina, A. Mrp1 multidrug resistance-associated protein and P-glycoprotein expression in rat brain microvessel endothelial cells / A. Regina, A. Koman, M. Piciotti, B. El Hafny, M.S. Center, R. Bergmann, P.O. Couraud, F. Roux // J Neurochem. - 1998. - Vol. 71. - № 2. - P. 705-715.

98. Гильяно, Н.Я. Характеристика эндотелиальной клеточной линии человека ECV304 / Н.Я. Гильяно, Е.Г. Семенова, Р.Ф. Федорцева, Л.В. Коневега // Цитология. - 2008. - Т. 50. - Вып. 7. - С. 576-584.

99. Dirks, W.G. ECV304 (endothelial) is really T24 (bladder carcinoma): cell line cross- contamination at source / W.G. Dirks, R.A. MacLeod, H.G. Drexler // In Vitro Cell Dev Biol Anim. - 1999. - Vol. 35. - № 10. - P. 558-559.

100. Liu, Q. P-glycoprotein mediated efflux limits the transport of the novel anti-Parkinson's disease candidate drug FLZ across the physiological and PD pathological in vitro BBB models / Q. Liu, J. Hou, X. Chen, G. Liu, D. Zhang,

H. Sun, J. Zhang // PLoS One. - 2014. - Vol. 9. - № 7. - P. e102442.

101. Van Breemen, R.B. Caco-2 cell permeability assays to measure drug absorption / R.B. van Breemen, Y. Li // Expert Opin Drug Metab Toxicol. - 2005. - Vol. 1. - № 2. - P. 175-185.

102. Lei, S. Somatostatin ameliorates lipopolysaccharide-induced tight junction damage via the ERK-MAPK pathway in Caco2 cells / S. Lei, T. Cheng, Y. Guo, C. Li, W. Zhang, F. Zhi // Eur J Cell Biol. - 2014. - Vol. 93. - № 7. - P. 299-307.

103. Wilhelm, I. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain / I. Wilhelm, I.A. Krizbai // Mol Pharm. - 2014. - Vol. 11. -№ 7. - P. 1949-1963.

104. Abbott, N.J. An improved in vitro blood-brain barrier model: rat brain endothelial cells co-cultured with astrocytes / N.J. Abbott, D.E. Dolman,

S. Drndarski, S.M. Fredriksson // Methods Mol Biol. - 2012. - Vol. 814. -P. 415-430.

105. Fabulas-da Costa, A. In vitro blood-brain barrier model adapted to repeated-dose toxicological screening / A. Fabulas-da Costa, R. Aijjou, J. Hachani, C. Landry, R. Cecchelli, M. Culot // Toxicol In Vitro. - 2013. - Vol. 27. - № 6. -P. 1944-1953.

106. Xue, Q. A novel brain neurovascular unit model with neurons, astrocytes and microvascular endothelial cells of rat / Q. Xue, Y. Liu, H. Qi, Q. Ma, L. Xu, W. Chen, G. Chen, X. Xu // Int J Biol Sci. - 2013. - Vol. 9. - № 2. - P. 174-189.

107. Avdeef, A. Absorption and drug development: solubility, permeability, and charge state / A. Avdeef. - 2003. - 307 p.

108. Velicky, M. In situ artificial membrane permeation assay under hydrodynamic control: permeability-pH profiles of warfarin and verapamil / M. Velicky, D.F. Bradley, K.Y. Tam, R.A. Dryfe // Pharm Res. - 2010. - Vol. 27. - № 8. - P. 1644-1658.

109. Fortuna, A. Optimization of a parallel artificial membrane permeability assay for the fast and simultaneous prediction of human intestinal absorption and plasma protein binding of drug candidates: application to dibenz[b,f]azepine-5-carboxamide derivatives / A. Fortuna, G. Alves, P. Soares-da-Silva, A. Falcao // J Pharm Sci. - 2012. - Vol. 101. - № 2. - P. 530-540.

110. Ottaviani, G. Parallel artificial membrane permeability assay: a new membrane for the fast prediction of passive human skin permeability / G. Ottaviani, S. Martel, P.A. Carrupt // J Med Chem. - 2006. - Vol. 49. - № 13. -P. 3948-3954.

111. Di, L. High throughput artificial membrane permeability assay for blood-brain barrier / L. Di, E.H. Kerns, K. Fan, O.J. McConnell, G.T. Carter // Eur J Med Chem. - 2003. - Vol. 38. - № 3. - P. 223-232.

112. Tsinman, O. Physicochemical selectivity of the BBB microenvironment governing passive diffusion-matching with a porcine brain lipid extract artificial membrane permeability model / O. Tsinman, K. Tsinman, N. Sun, A. Avdeef //

Pharm Res. - 2011. - Vol. 28. - № 2. - P. 337-363.

113. Boon, J.M. Chemical control of phospholipid distribution across bilayer membranes / J.M. Boon, B.D. Smith // Med Res Rev. - 2002. - Vol. 22. - № 3. -P. 251-281.

114. Joo, H.J. The effect of methanol on the structural parameters of neuronal membrane lipid bilayers / H.J. Joo, S.H. Ahn, H.R. Lee, S.W. Jung, C.W. Choi, M.S. Kim, M.K. Bae, I.K. Chung, S.K. Bae, H.O. Jang, I. Yun // Korean J Physiol Pharmacol. - 2012. - Vol. 16. - № 4. - P. 255-264.

115. Fandy, T.E. In vitro characterization of transport and metabolism of the alkaloids: vincamine, vinpocetine and eburnamonine / T.E. Fandy, I. Abdallah, M. Khayat, D.A. Colby, H.E. Hassan // Cancer Chemother Pharmacol. - 2016. -Vol. 77. - № 2. - P. 259-267.

116. Ledwitch, K.V. Unravelling the complex drug-drug interactions of the cardiovascular drugs, verapamil and digoxin, with P-glycoprotein / K.V. Ledwitch, R.W. Barnes, A.G. Roberts // Biosci Rep. - 2016. - Vol. 36. - № 2.

117. Young, R.C. Development of a new physicochemical model for brain penetration and its application to the design of centrally acting H2 receptor histamine antagonists / R.C. Young, R.C. Mitchell, T.H. Brown, C.R. Ganellin, R. Griffiths, M. Jones, K.K. Rana, D. Saunders, I.R. Smith, N.E. Sore, T.J. // J Med Chem. - 1988. - Vol. 31. - № 3. - P. 656-671.

118. el Tayar, R.S. Percutaneous penetration of drugs: a quantitative structure-permeability relationship study / N. el Tayar, R.S. Tsai, B. Testa, P.A. Carrupt, C. Hansch, A. Leo // J Pharm Sci. - 1991. - Vol. 80. - № 8. - P. 744-749.

119. Camenisch, G. Review of theoretical passive drug absorption models: historical background, recent developments and limitations / G. Camenisch, G. Folkers, H. Van de Waterbeemd // Pharm Acta Helv. - 1996. - Vol. 71. - № 5. - P. 309-327.

120. Лагунин, А.А. Компьютерная оценка взаимодействия фармакологических веществ с P-гликопротеином / А.А. Лагунин, Т.А. Глориозова, А.В. Дмитриев, Н.Е. Волгина, В.В. Поройков // Бюллетень

экспериментальной биологии и медицины. - 2012. - Т. 154. - Вып. 10. -С. 520-524.

121. Раевский, О.А. Компьютерное моделирование проницаемости физиологически активных веществ через гематоэнцефалический барьер / О.А. Раевский, С.Л. Солодова, А.А. Лагунин, В.В. Поройков // Биомедицинская химия. - 2014. - Т. 60. - Вып. 2. - С. 161-181.

122. Dagenais, C. P-glycoprotein deficient mouse in situ blood-brain barrier permeability and its prediction using an in combo PAMPA model / C. Dagenais, A. Avdeef, O. Tsinman, A. Dudley, R. Beliveau // Eur J Pharm Sci. - 2009. -Vol. 38. - № 2. - P. 121-137.

123. Чумаков, П.М. Белок р53 и его универсальные функции в многоклеточном организме / П.М. Чумаков // Успехи биологической химии. - 2007. - Т. 47. - С. 3-52.

124. Wade, M. MDM2, MDMX and p53 in oncogenesis and cancer therapy / M. Wade, Y.C. Li, G.M. Wahl // Nat Rev Cancer. - 2013. - Vol. 13. - № 2. -P. 83-96.

125. Saha, T.R. Structural and sequential context of p53: A review of experimental and theoretical evidence / T. Saha, R.K. Kar, G. Sa // Prog Biophys Mol Biol. - 2015. - Vol. 117. - № 2-3. - P. 250-263.

126. Желтухин, А.О. Повседневные и индкцируемые функции гена р53 / А.О. Желтухин, П.М. Чумаков // Успехи биологической химии. - 2010. -Т. 50. - С. 447-516.

127. Offer, H. Structural and functional involvement of p53 in BER in vitro and in vivo / H. Offer, M. Milyavsky, N. Erez, D. Matas, I. Zurer, C.C. Harris, V. Rotter // Oncogene. - 2001. - Vol. 20. - № 5. - P. 581-589.

128. Bakhanashvili. M. Exonucleolytic proofreading by p53 protein / M. Bakhanashvili // Eur J Biochem. - 2001. - Vol. 268. - № 7. - P. 2047-2054.

129. Janus, F. The dual role model for p53 in maintaining genomic integrity / F. Janus, N. Albrechtsen, I. Dornreiter, L. Wiesmuller, F. Grosse, W. Deppert // Cell Mol Life Sci. - 1999. - Vol. 55. - № 1. - P. 12-27.

130. Chipuk, J.E. Direct activation of Bax by p53 mediates mitochondrial membrane permeabilization and apoptosis / J.E. Chipuk, T. Kuwana, L. Bouchier-Hayes, N.M. Droin, D.D. Newmeyer, M. Schuler, D.R. Green // Science. - 2004. -Vol. 303. - № 5660. - P. 1010-1014.

131. Lujambio, A. Non-cell-autonomous tumor suppression by p53 /

A. Lujambio, L. Akkari, J. Simon, D. Grace, D.F. Tschaharganeh, J.E. Bolden, Z. Zhao, V. Thapar, J.A. Joyce, V. Krizhanovsky, S.W. Lowe // Cell. - 2013. -Vol. 153. - № 2. - P. 449-460.

132. Grigoreva, T.A. The 26S proteasome is a multifaceted target for anti-cancer therapies / T.A. Grigoreva, V.G. Tribulovich, A.V. Garabadzhiu, G. Melino, N.A. Barlev // Oncotarget. - 2015. - Vol. 6. - № 28. - P. 24733-24749.

133. Сорокин, А.В. Протеасомная система деградации и процессинга белков / А.В. Сорокин, Е.Р. Ким, Л.П. Овчинников // Успехи биологической химии.

- 2009. - Т. 49. - С. 3-76.

134. Дакс, А. Роль различных ЕЗ-убиквитинлигаз в регуляции активности онкосупрессора р53. / А. Дакс, Дж. Мелино, Н.А. Барлев // Цитология. - 2013.

- Т. 55. - Вып. 10. - С. 673-687.

135. Oliner, J.D. Amplification of a gene encoding a p53-associated protein in human sarcomas / J.D. Oliner, K.W. Kinzler, P.S. Meltzer, D.L. George,

B. Vogelstein // Nature. - 1992. - Vol. 358. - № 6381. - P. 80-83.

136. Bueso-Ramos, C.E. The human MDM-2 oncogene is overexpressed in leukemias / C.E. Bueso-Ramos, Y. Yang, E. de Leon, P. McCown, S.A. Stass, M. Albitar // Blood. - 1993. - Vol. 82. - № 9. - P. 2617-2623.

137. Saha, M.N. Targeting p53 by small molecules in hematological malignancies / M.N. Saha, L. Qiu, H. Chang // J Hematol Oncol. - 2013. - Vol. 6. - P. 23.

138. Bond, G.L. MDM2 is a central node in the p53 pathway: 12 years and counting / G.L. Bond, W. Hu, A.J. Levine // Curr Cancer Drug Targets. - 2005. -Vol. 5. - № 1. - P. 3-8.

139. Wadgaonkar, R. Murine double minute (MDM2) blocks p53-coactivator interaction, a new mechanism for inhibition of p53-dependent gene expression /

R. Wadgaonkar, T. Collins // J Biol Chem. - 1999. - Vol. 274. - № 20. -P. 13760-13767.

140. Saucedo, L.J. Regulation of transcriptional activation of mdm2 gene by p53 in response to UV radiation / L.J. Saucedo, B.P. Carstens, S.E. Seavey, L.D. Albee, 2nd, M.E. Perry // Cell Growth Differ. - 1998. - Vol. 9. - № 2. -P. 119-130.

141. Chen, J. Mapping of the p53 and mdm-2 interaction domains / J. Chen, V. Marechal, A.J. Levine // Mol Cell Biol. - 1993. - Vol. 13. - № 7. - P. 41074114.

142. Picksley, S.M. Immunochemical analysis of the interaction of p53 with MDM2; fine mapping of the MDM2 binding site on p53 using synthetic peptides / S.M. Picksley, B. Vojtesek, A. Sparks, D.P. Lane // Oncogene. - 1994. - Vol. 9. -№ 9. - P. 2523-2529.

143. Kussie, P.H. Structure of the MDM2 oncoprotein bound to the p53 tumor suppressor transactivation domain / P.H. Kussie, S. Gorina, V. Marechal, B. Elenbaas, J. Moreau, A.J. Levine, N.P. Pavletich // Science. - 1996. - Vol. 274. - № 5289. - P. 948-953.

144. Garcia-Echeverria, C. Discovery of potent antagonists of the interaction between human double minute 2 and tumor suppressor p53 / C. Garcia-Echeverria, P. Chene, M.J. Blommers, P. Furet // J Med Chem. - 2000. - Vol. 43. - № 17. -P. 3205-3208.

145. Vassilev, L.T. In vivo activation of the p53 pathway by small-molecule antagonists of MDM2 / L.T. Vassilev, B.T. Vu, B. Graves, D. Carvajal, F. Podlaski, Z. Filipovic, N. Kong, U. Kammlott, C. Lukacs, C. Klein, N. Fotouhi, E.A. Liu // Science. - 2004. - Vol. 303. - № 5659. - P. 844-848.

146. Lakoma, A.The MDM2 small-molecule inhibitor RG7388 leads to potent tumor inhibition in p53 wild-type neuroblastoma / A. Lakoma, E. Barbieri, S. Agarwal, J. Jackson, Z. Chen, Y. Kim, M. McVay, J.M. Shohet, E.S. Kim // Cell Death Discov. - 2015. - Vol. 1.

147. Davidovich, P. Discovery of Novel Isatin-Based p53 Inducers /

P. Davidovich, V. Aksenova, V. Petrova, D. Tentler, D. Orlova, S. Smirnov, V. Gurzhiy, A.L. Okorokov, A. Garabadzhiu, G. Melino, N. Barlev, V. Tribulovich // ACS Med Chem Lett. - 2015. - Vol. 6. - № 8. - P. 856-860.

148. Anil, B. The structure of an MDM2-Nutlin-3a complex solved by the use of a validated MDM2 surface-entropy reduction mutant / B. Anil, C. Riedinger, J.A. Endicott, M.E. Noble // Acta Crystallogr D Biol Crystallogr. - 2013. - Vol. 69. - № 8. - P. 1358-1366.

149. Parks, D.J. 1,4-Benzodiazepine-2,5-diones as small molecule antagonists of the HDM2-p53 interaction: discovery and SAR / D.J. Parks, L.V. Lafrance, R.R. Calvo, K.L. Milkiewicz, V. Gupta, J. Lattanze, K. Ramachandren, T.E. Carver, E.C. Petrella, M.D. Cummings, D. Maguire, B.L. Grasberger, T. Lu // Bioorg Med Chem Lett. - 2005. - Vol. 15. - № 3. - P. 765-770.

150. Grasberger, B.L. Discovery and cocrystal structure of benzodiazepinedione HDM2 antagonists that activate p53 in cells / B.L. Grasberger, T. Lu, C. Schubert, D.J. Parks, T.E. Carver, H.K. Koblish, M.D. Cummings, L.V. LaFrance, K.L. Milkiewicz, R.R. Calvo, D. Maguire, J. Lattanze, C.F. Franks, S. Zhao, K. Ramachandren, G.R. Bylebyl, M. Zhang, C.L. Manthey, E.C. Petrella, M.W. Pantoliano, I.C. Deckman, J.C. Spurlino, A.C. Maroney, B.E. Tomczuk, C.J. Molloy, R.F. Bone // J Med Chem. - 2005. - Vol. 48. - № 4. - P. 909-912.

151. Allen, J.G. Discovery and optimization of chromenotriazolopyrimidines as potent inhibitors of the mouse double minute 2-tumor protein 53 protein-protein interaction / J.G. Allen, M.P. Bourbeau, G.E. Wohlhieter, M.D. Bartberger, K. Michelsen, R. Hungate, R.C. Gadwood, R.D. Gaston, B. Evans, L.W. Mann, M.E. Matison, S. Schneider, X. Huang, D. Yu, P.S. Andrews, A. Reichelt, A.M. Long, P. Yakowec, E.Y. Yang, T.A. Lee, J.D. Oliner // J Med Chem. - 2009. -Vol. 52. - № 22. - P. 7044-7053.

152. Rew, Y. Structure-based design of novel inhibitors of the MDM2-p53 interaction / Y. Rew, D. Sun, F. Gonzalez-Lopez de Turiso, M.D. Bartberger, H.P. Beck, J. Canon, A. Chen, D. Chow, J. Deignan, B.M. Fox, D. Gustin, X. Huang, M. Jiang, X. Jiao, L. Jin, F. Kayser, D.J. Kopecky, Y. Li, M.C. Lo, A.M. Long,

K. Michelsen, J.D. Oliner, T. Osgood, M. Ragains, A.Y. Saiki, S. Schneider, M. Toteva, P. Yakowec, X. Yan, Q. Ye, D. Yu, X. Zhao, J. Zhou, J.C. Medina, S.H. Olson // J Med Chem. - 2012. - Vol. 55. - № 11. - P. 4936-4954.

153. Galatin, P.S. A nonpeptidic sulfonamide inhibits the p53-mdm2 interaction and activates p53-dependent transcription in mdm2-overexpressing cells / P.S. Galatin, D.J. Abraham // J Med Chem. - 2004. - Vol. 47. - № 17. -P. 4163-4165.

154. Lu, Y. Wang. Discovery of a nanomolar inhibitor of the human murine double minute 2 (MDM2)-p53 interaction through an integrated, virtual database screening strategy / Y. Lu, Z. Nikolovska-Coleska, X. Fang, W. Gao, S. Shangary, S. Qiu, D. Qin, S. Wang // J Med Chem. - 2006. - Vol. 49. - № 13. -P. 3759-3762.

155. Ding, K. Structure-based design of spiro-oxindoles as potent, specific small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 interaction / K. Ding, Y. Lu, Z. Nikolovska-Coleska, G. Wang, S. Qiu, S. Shangary, W. Gao, D. Qin, J. Stuckey, K. Krajewski, P.P. Roller, S. Wang // J Med Chem. - 2006. - Vol. 49. - № 12. - P. 3432-3435.

156. Yu, S. Potent and orally active small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 interaction / S. Yu, D. Qin, S. Shangary, J. Chen, G. Wang, K. Ding, D. McEachern, S. Qiu, Z. Nikolovska-Coleska, R. Miller, S. Kang, D. Yang, S. Wang // J Med Chem. - 2009. - Vol. 52. - № 24. - P. 7970-7973.

157. Hardcastle, I.R. Isoindolinone-based inhibitors of the MDM2-p53 proteinprotein interaction / I.R. Hardcastle, S.U. Ahmed, H. Atkins, A.H. Calvert, N.J. Curtin, G. Farnie, B.T. Golding, R.J. Griffin, S. Guyenne, C. Hutton, P. Kallblad, S.J. Kemp, M.S. Kitching, D.R. Newell, S. Norbedo, J.S. Northen, R.J. Reid, K. Saravanan, H.M. Willems, J. Lunec // Bioorg Med Chem Lett. -2005. - Vol. 15. - № 5. - P. 1515-1520.

158. Hardcastle, I.R. Small-molecule inhibitors of the MDM2-p53 protein-protein interaction based on an isoindolinone scaffold / I.R. Hardcastle, S.U. Ahmed, H. Atkins, G. Farnie, B.T. Golding, R.J. Griffin, S. Guyenne, C. Hutton, P. Kallblad, S.J. Kemp, M.S. Kitching, D.R. Newell, S. Norbedo, J.S. Northen,

R.J. Reid, K. Saravanan, H.M. Willems, J. Lunec // J Med Chem. - 2006. -Vol. 49. - № 21. - P. 6209-6221.

159. Hardcastle, I.R. Isoindolinone inhibitors of the murine double minute 2 (MDM2)-p53 protein-protein interaction: structure-activity studies leading to improved potency / I.R. Hardcastle, J. Liu, E. Valeur, A. Watson, S.U. Ahmed, T.J. Blackburn, K. Bennaceur, W. Clegg, C. Drummond, J.A. Endicott, B.T. Golding, R.J. Griffin, J. Gruber, K. Haggerty, R.W. Harrington, C. Hutton, S. Kemp, X. Lu, J.M. McDonnell, D.R. Newell, M.E. Noble, S.L. Payne, C.H. Revill, C. Riedinger, Q. Xu, J. Lunec // J Med Chem. - 2011. - Vol. 54. - № 5. -P. 1233-1243.

160. Lv P.C. Recent advances of p53-MDM2 small molecule inhibitors (2011-present) / P.C. Lv, J. Sun, H.L. Zhu // Curr Med Chem. - 2015. - Vol. 22. - № 5. -P. 618-626.

161. Zhao, Y. Small Molecule inhibitors of MDM2-p53 and MDMX-p53 interaction as new cancer therapeutics / Y. Zhao, D. Bernard, S. Wang // BioDiscovery. - 2013. - Vol. 8. - № 4.

162. Shaomeng, W. Targeting the MDM2-p53 Protein-Protein Interaction for New Cancer Therapeutics / Shaomeng W., Denzil B., Angelo A., Sanjeev K. // TopMedChem. - 2012. - Vol. 8. - P. 57-80.

163. Zhang, B. Small-molecule MDM2-p53 inhibitors: recent advances / B. Zhang, B.T. Golding, I.R. Hardcastle // Future Med Chem. - 2015. - Vol. 7. -№ 5. - P. 631-645.

164. Ding, K. Structure-based design of potent non-peptide MDM2 inhibitors / K. Ding, Y. Lu, Z. Nikolovska-Coleska, S. Qiu, Y. Ding, W. Gao, J. Stuckey, K. Krajewski, P.P. Roller, Y. Tomita, D.A. Parrish, J.R. Deschamps, S. Wang // J Am Chem Soc. - 2005. - Vol. 127. - № 29. - P. 10130-10131.

165. Michelsen, K. Ordering of the N-terminus of human MDM2 by small molecule inhibitors / K. Michelsen, J.B. Jordan, J. Lewis, A.M. Long, E. Yang, Y. Rew, J. Zhou, P. Yakowec, P.D. Schnier, X. Huang, L. Poppe // J Am Chem Soc. - 2012. - Vol. 134. - № 41. - P. 17059-17067.

166. Showalter, S.A. Quantitative lid dynamics of MDM2 reveals differential ligand binding modes of the p53-binding cleft / S.A. Showalter, L. Bruschweiler-Li, E. Johnson, F. Zhang, R. Bruschweiler // J Am Chem Soc. - 2008. - Vol. 130.

- № 20. - P. 6472-6478.

167. McCoy, M.A. Flexible lid to the p53-binding domain of human Mdm2: implications for p53 regulation / M.A. McCoy, J.J. Gesell, M.M. Senior,

D.F. Wyss // Proc Natl Acad Sci USA. - 2003. - Vol. 100. - № 4. - P. 1645-1648.

168. Uhrinova S. Structure of free MDM2 N-terminal domain reveals conformational adjustments that accompany p53-binding / S. Uhrinova, D. Uhrin, H. Powers, K. Watt, D. Zheleva, P. Fischer, C. McInnes, P.N. Barlow // J Mol Biol. - 2005. - Vol. 350. - № 3. - P. 587-598.

169. Гросс, Э. Пептиды. Основные методы образования пептидных связей / Э. Гросс, И. Майенхофер // М.: Мир, 1983. - 424 с.

170. Гершкович, А.А. Химический синтез пептидов / А.К. Гершкович,

B.К. Кибирев - Киев: Наукова думка, 1992. - 360 с.

171. Cheraiet, Z. N-tert-butoxycarbonylation of structurally diverse amines and sulfamides under water-mediated catalyst-free conditions / Z. Cheraiet, S. Ouarna, S. Hessainia, M. Berredjem, N.E. Aouf // ISRN Org Chem. - 2012. - Vol. 2012. -P. 404235.

172. Fernandez-Bachiller, M.I. New tacrine-4-oxo-4H-chromene hybrids as multifunctional agents for the treatment of Alzheimer's disease, with cholinergic, antioxidant, and beta-amyloid-reducing properties / M.I. Fernandez-Bachiller,

C. Perez, L. Monjas, J. Rademann, M.I. Rodriguez-Franco // J Med Chem. - 2012.

- Vol. 55. - № 3. - P. 1303-1317.

173. Teixido, M. Diketopiperazines as a tool for the study of transport across the blood-brain barrier (BBB) and their potential use as BBB-shuttles / M. Teixido,

E. Zurita, M. Malakoutikhah, T. Tarrago, E. Giralt // J Am Chem Soc. - 2007. -Vol. 129. - № 38. - P. 11802-11813.

174. Kramer, S.D. Lipids in blood-brain barrier models in vitro I: Thin-layer chromatography and high-performance liquid chromatography for the analysis of

lipid classes and long-chain polyunsaturated fatty acids / S.D. Kramer, J.A. Hurley, N.J. Abbott, D.J. Begley // In Vitro Cell Dev Biol Anim. - 2002. - Vol. 38. -№ 10. - P. 557-565.

175. Tewes, B.J. Lipid polarity in brain capillary endothelial cells / B.J. Tewes, H.J. Galla // Endothelium. - 2001. - Vol. 8. - № 3. - P. 207-220.

176. Siakotos, A.N. Isolation of highly purified human and bovine brain endothelial cells and nuclei and their phospholipid composition / A.N. Siakotos, G. Rouser // Lipids. - 1969. - Vol. 4. - № 3. - P. 234-239.

177. Erve, J.C. Chemical toxicology: reactive intermediates and their role in pharmacology and toxicology / J.C. Erve // Expert Opin Drug Metab Toxicol. -2006. - Vol. 2. - № 6. - P. 923-946.

178. Гордон, А. Спутник химика / А.Ф. Гордон, Р. Форд. - М.: Мир, 1976. -541 с.

179. Nadimpally, K. Catalyst and solvent-free amidation of inactive esters of N-protected amino acids / K.T. Nadimpally, N. Palakurthy, B. Mandal // Tetrahedron Letters. - 2011. - Vol. 52. - № 20. - P. 2579-2582.