Новый подход к определению структурных особенностей комплексов белок-лиганд на межфазных границах и в объеме раствора (на примере лизоцима) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 02.00.14, доктор наук Чернышева Мария Григорьевна

• Чернышева Мария Григорьевна
• доктор наук
• 2022

Оглавление диссертации доктор наук Чернышева Мария Григорьевна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. МЕЧЕННЫЕ ТРИТИЕМ БЕЛКИ: ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ (Обзор литературы)

1.1. Метод термической активации трития (основные положения)

1.2. Тритиевая планиграфия в исследовании адсорбционных слоев

1.3. Введение тритиевой метки в лизоцим и его адсорбционные слои

ГЛАВА 2. ОСОБЕННОСТИ АДСОРБЦИИ БЕЛКОВ НА ГРАНИЦАХ РАЗДЕЛА ФАЗ И МЕТОДЫ ЕЕ ИЗУЧЕНИЯ (Обзор литературы)

ГЛАВА 3. ВЗАИМОДЕЙСТВИЕ БЕЛКОВ С ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ В ВОДНЫХ РАСТВОРАХ И НА ГРАНИЦАХ РАЗДЕЛА ФАЗ (Обзор литературы)

ГЛАВА 4. ИЗУЧЕНИЕ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ ЛИЗОЦИМ-ОРГАНИЧЕСКИЙ ЛИГАНД С ПОМОЩЬЮ МОЛЕКУЛЯРНОГО ДОКИНГА (Обзор литературы)

ГЛАВА 5. КОЛЛОИДНО-ХИМИЧЕСКИЕ СВОЙСТВА ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ И ОСОБЕННОСТИ ИХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЯ С БЕЛКАМИ (Обзор литературы)

ГЛАВА 6. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

6.1. Материалы

6.2. Введение тритиевой метки в лизоцим и лиганды с помощью метода термической активации трития

6.3. Определение коэффициента распределения лизоцима и лигандов в системе жидкость-жидкость с помощью метода сцинтиллирующей фазы

6.4. Исследование адсорбции лизоцима и органических лигандов в системе жидкость-жидкость с помощью метода сцинтиллирующей фазы

6.5. Исследование структуры слоя лизоцим-лиганд на границе водный раствор-воздух с помощью атомарного трития

6.6. Измерение поверхностного натяжения

6.7. Спектроскопические методы

6.7.1. Спектрофотомерия

6.7.2. Флуориметрия

5.7.3. Спектроскопия кругового дихроизма

6.8. Молекулярный докинг

ГЛАВА 7. ПОЛУЧЕНИЕ МЕЧЕНЫХ ТРИТИЕМ ВЕЩЕСТВ

7.1. Характеристика используемых веществ

7.2. Получение меченных тритием лизоцима, поверхностно-активных и гуминовых веществ

7.2.1. Особенности получения меченного тритием лизоцима

7.2.2. Получение меченных тритием поверхностно-активных веществ

ГЛАВА 8. МЕТОДИКА ОПИСАНИЯ КОМПЛЕКСООБРАЗОВАНИЯ БЕЛОК-ЛИГАНД НА МЕЖФАЗНОЙ ГРАНИЦЕ РАСТВОР-ВОЗДУХ И ЖИДКОСТЬ-ЖИДКОСТЬ

ГЛАВА 9. СВОЙСТВА КОМПЛЕКСОВ, ОБРАЗОВАННЫХ ЛИЗОЦИМОМ И ПОВЕРХНОСТНО-АКТИВНЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ НА МЕЖФАЗНОЙ ГРАНИЦЕ РАСТВОР-ЖИДКОСТЬ И В ОБЪЕМЕ РАСТВОРА

9.1. Коллоидно-химические характеристики ПАВ и смесей лизоцим-ПАВ

9.2. Исследование взаимного влияния лизоцима и поверхностно-активных веществ на межфазной границе жидкость-жидкость с помощью метода сцинтиллирующей фазы

9.3. Исследование адсорбционных слоев лизоцима и лигандов (поверхностно-активные вещества) на границе раствор-воздух

9.4. Исследование комплексов лизоцим-ПАВ с помощью спектральных методов анализа

9.5. Исследование комплексов лизоцим-ПАВ с помощью молекулярного докинга

ГЛАВА 10. ОБРАЗОВАНИЕ КОМПЛЕКСОВ МЕЖДУ БЕЛКАМИ И ГУМИНОВЫМИ ВЕЩЕСТВАМИ НА МЕЖФАЗНОЙ ГРАНИЦЕ РАСТВОР-ЖИДКОСТЬ И В ОБЪЕМЕ РАСТВОРА

10.1. Исследование поведения гуминовых веществ в системе жидкость-жидкость с помощью метода сцинтиллирующей фазы

10.2. Особенности взаимодействия гуминовых веществ с белками

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПУБЛИКАЦИИ АВТОРА С СОАВТОРАМИ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Статьи, опубликованные в рецензируемых научных журналах, включенных в перечень Минобрнауки РФ, а также индексируемых в базах данных РИНЦ, Web of Science, Scopus

Список сокращений

ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Новый подход к определению структурных особенностей комплексов белок-лиганд на межфазных границах и в объеме раствора (на примере лизоцима)»

Актуальность темы исследования

Механизмы взаимодействия белка и поверхностно-активного вещества (ПАВ) изучались на протяжении десятилетий в связи с широким использованием комплексов белок-лиганд в фармацевтической, пищевой и косметической промышленности и их важностью для биохимических систем, в том числе и при создании биосовместимых сенсоров с применением пленок белок-ПАВ, образующиеся на поверхности жидкость-воздух [1,2]. Здесь могут быть использованы как ионогенные, так и неионогенные ПАВ с разной молекулярной массой. Присутствие в системе белок-ПАВ большого количества компонентов, находящихся в равновесии, которое может быть нарушено изменениями условий, таких как концентрация ПАВ, температура и рН среды, усложняет изучение и требует использования современных физико-химических методов и их комбинации, в том числе, с компьютерными расчетами.

Особую сложность представляют исследования, относящиеся самоорганизации белка и ПАВ в поверхностных слоях. Известно, что белки концентрируются на границе раздела фаз раствор-воздух и жидкость-жидкость, при этом поверхностное натяжение меняется мало, поэтому использование модели адсорбции Гиббса при описании изотерм поверхностного натяжения невозможно [3,4]. Более того, необходимо учитывать денатурацию белка, которая происходит не только в присутствии детергентов, но и в растворах индивидуального белка на границах раздела фаз.

Очевидно, что все еще существуют проблемы более точной характеристики взаимодействий белок-лиганд в объеме раствора и в поверхностных слоях. Таким образом, необходима разработка методологии исследования белоксодержащих комплексов, включающей быстрый и точный количественный анализ межмолекулярных взаимодействий, а также разработка общепринятой аналитической системы, подходящей для разных типов белков и веществ, которые могут рассматриваться в качестве лигандов.

Степень разработанности темы исследования

На момент, предшествующий выполнению данной работы, в литературе были описаны комбинационные подходы для создания рациональных моделей взаимодействий белок-ПАВ, использующих множество аналитических методов, включая различные варианты спектроскопии, калориметрию, микроскопию, электрофорез и молекулярный докинг. При этом сочетание нескольких спектроскопических подходов, например, таких как спектрофотометрия, спектроскопия кругового дихроизма и флуоресценция, было использовано для исследования структурных изменений в белках, индуцированных молекулами ПАВ, и мониторинга поэтапного связывания белка с лигандом, а использование малоуглового рентгеновского рассеяния, статического и динамического светорассеяния позволило получить количественную информацию о растворах смеси белков и лигандов, включая средние молекулярные массы и средние размеры частиц [5]. Более того, калориметрические методы позволили получить информацию о термодинамических характеристиках связывания [6-8].

Необходимо отметить, что помимо экспериментальных исследований, теоретические методы, такие как молекулярный докинг и моделирование молекулярной динамики, также внесли свой вклад в изучение взаимодействий белка и поверхностно-активных лигандов, включая ПАВ разных типов [9-12].

Применительно к границам раздела фаз жидкость-воздух и, особенно, жидкость-жидкость исключительное значение имели подходы, использующие радиоактивные индикаторы [13-19]. Результаты, описанные в цикле работ, выполненных Д. Грехомом и М. Филлипсом по исследованию адсорбции белков на границах раздела фаз жидкость-газ и жидкость-жидкость с использованием меченных С-14 белков [15-19], и в настоящее время используются для сравнения и объяснения результатов [20-27].

В конце прошлого столетия на кафедре радиохимии Химического факультета Московского государственного университета имени М.В.Ломоносова был разработан подход, использующий меченные тритием

белки для определения их концентрирования на границе раздела фаз жидкость-жидкость, получивший название «метод сцинтиллирующей фазы» [28]. Использование низкоэнергетического Р-излучения трития позволило на порядок уменьшить зону регистрации меченого вещества в поверхностном слое. Несомненным достоинством метода радиоактивных индикаторов в целом, и метода сцинтиллирующей фазы в частности, является независимость результатов измерения от содержания в системе других веществ (например, солей и поверхностно-активных веществ, не содержащих радиоактивную метку), рН, температуры и т.п.

Для введения трития в органические вещества используется ряд методов, включающий гидрирование кратных связей тритий-содержащими реагентами и методы изотопного обмена [29-35]. Особый тип каталитического изотопного обмена - реакция атомарного трития, полученного при диссоциации молекул трития на нагретом вольфрамовом катализаторе, с твердой водородсодержащей мишенью, который называется методом термической активации трития, позволяет вводить радиоактивную метку в различные органические вещества [36]. Необходимо отметить, что по результату реакции атомов трития с замороженными водными растворами биополимеров можно сделать вывод о структуре молекул в поверхностном слое. Подход, использующий реакцию атомарного трития с твердой мишенью с последующим анализом распределения трития по компонентам мишени и определением структуры молекулы с помощью компьютерного моделирования, получил название метода тритиевой планиграфии и успешно применялся для исследования структуры макромолекул, в том числе белковых оболочек вирусов [37-43]. Цель и задачи исследования

Цель данного исследования состояла в создании методического комплекса для исследования межмолекулярного взаимодействия белок-лиганд на границах раздела фаз раствор-воздух и жидкость-жидкость, а также в объеме системы, где в качестве лиганда может рассматриваться

органическое соединение различного химического состава, строения и поверхностной активности.

Для достижения поставленной цели было необходимо решить следующие задачи:

1. С помощью меченных тритием соединений и метода сцинтиллирующей фазы исследовать конкурентную адсорбцию лизоцима и лигандов на межфазной границе жидкость-жидкость. Определить параметры конкурентной адсорбции из совокупности данных методов сцинтиллирующей фазы и тензиометрии.

2. Адаптировать методику тритиевой планиграфии для определения положения лизоцима в составе смешенного адсорбционного слоя.

3. Определить константы связывания белок-лиганд на основании результатов спектроскопических методов (спектрофотометрии, флуоресценции) и выявить положение лиганда в составе комплекса с лизоцимом с помощью молекулярного докинга.

4. Провести апробацию подхода на лигандах, обладающих низкой поверхностной активностью и неопределенным составом, - гуминовых веществах с целью определения их инкапсулирующей способности по отношению к лизоциму.

Научная новизна

В работе впервые проведен систематический анализ строения и состава смешанного адсорбционного слоя, образованного одноименно заряженными ПАВ и белком на границах раздела фаз жидкость-жидкость и жидкость-газ. Образование комплексов, в том числе в объеме раствора, подтверждено данными спектроскопических методов анализа.

Впервые проведено систематическое изучение взаимодействия лизоцима с катионными, анионными и неионогенными поверхностно-активными веществами, в том числе высокомолекулярными. Найдено, что на границе раздела фаз жидкость-жидкость и жидкость-воздух образуются

смешанные адсорбционные слои, в которых белок не полностью замещен молекулами ПАВ.

Предложена методика определения параметров межмолекулярного взаимодействия на основании результатов, полученных из совокупности данных методов сцинтиллирующей фазы и тензиометрии.

Предложен способ определения ориентации молекул белка в смешанном адсорбционном слое на основании радиоактивности некоторых аминокислотных остатков, после обработки слоя атомарным тритием с последующим тотальным гидролизом и аминокислотным анализом.

Показана инкапсулирующая способность гуминовых и фульвокислот по отношению к ферменту. Предложен способ определения состава образующихся комплексов. Впервые определен состав комплексов белок-гуминовые вещества, образующихся как на границах раздела фаз, так и в малорастворимом осадке. Теоретическая и практическая значимость

Предложенный в работе подход к анализу системы белок-лиганд является универсальным и его применимость не зависит от химического состава лиганда, его молекулярной массы и поверхностно-активных свойств. Важное условие для реализации подхода - возможность введения тритиевой метки в белок и лиганд. Метод термической активации трития при проведении реакции в оптимальных условиях для конкретного вещества позволяет вводить метку практически в любое водородсодержащее соединение. Поэтому предлагаемый подход открывает широкие перспективы для исследования белок-белковых взаимодействий, играющих ключевую роль в основных биологических процессах, расшифровка которых является сложной научной задачей [44-46].

Предлагаемая система анализа может быть использована для in vitro характеристики новых лекарственных средств при их разработке и исследованиях направленности действия.

Выявленное в работе увеличение ферментативной активности в присутствии некоторых лигандов, в частности мирамистина, может быть использовано для успешного лечения бактериальных заболеваний.

Инкапсулирующее действие фульвокислот по отношению к лизоциму с увеличением его бактериолитической активности открывает новые возможности медицинского использования гуминовых веществ. Методология диссертационной работы

В работе использован метод термической активации трития для введения радиоактивной метки в органические вещества (белки, поверхностно-активные вещества, гуминовые и фульвокислоты), а также для обработки атомарным тритием адсорбционных слоев лизоцима и смешанных адсорбционных слоев белок-ПАВ. Проводили тотальный кислотный гидролиз меченного тритием лизоцима с последующим определением количества аминокислот и их радиоактивности. Для выделения белка после введения в него трития использовали метод гельпроникающей хроматографии. Для выделения лигандов применяли тонкослойную и высокоэффективную жидкостную хроматографию. Измерение радиоактивности Р-излучения трития (период полураспада 12,33 года, максимальная энергия Р-излучения 18,6 кэВ, средняя энергия 5,5-5,7 кэВ [47]) проводили с помощью жидкостной сцинтилляционной спектрометрии. Поверхностное натяжение на границах раздела фаз жидкость-жидкость и жидкость-воздух измеряли методом висящей капли.

Для определения концентрирования вещества в поверхностном слое использовали жидкостную сцинтилляционную спектрометрию в варианте сцинтиллирующей фазы. Были разработаны оригинальные методики определения концентрирования вещества в составе смешанного адсорбционного слоя на фоне второго поверхностно-активного компонента и параметров межмолекулярного взаимодействия белок-лиганд по данным метода сцинтиллирующей фазы и тензиометрии.

Для определения констант связывания белок-лиганд использовали методы спектрофотомерии и флуоресцентной спектроскопии. Для анализа вторичной структуры лизоцима в присутствии лиганда использовали спектроскопию кругового дихроизма. Определение положения лиганда в составе комплекса с белком проводили с помощью молекулярного докинга. Положения, выносимые на защиту:

- Методика определения состава адсорбционных слоев белок-лиганд на межфазной границе раствор-воздух и жидкость-жидкость.

- Физико-химические свойства комплексов, образованных лизоцимом и катионными поверхностно-активными веществами на межфазной границе раствор-органическая жидкость и в объеме водного раствора.

- Методика расчета параметров межмолекулярного взаимодействия белок-лиганд на основании данных, полученных с помощью метода сцинтиллрующей фазы и тензиометрии.

- Формирование комплексов гуминовых и фульвокислот с глобулярными белками, обеспечивающих сохранение структуры белка, посредством электростатического и гидрофобного взаимодействия. Личный вклад автора

Большая часть экспериментальных исследований выполнена автором лично, часть работ выполнено совместно с аспирантами и студентами, работавшими под руководством автора, а также совместно с сотрудниками химического факультета, факультета почвоведения МГУ и Института физико-химической биологии имени А.Н. Белозерского МГУ. Автору принадлежит основная роль при выборе методов и подходов для решения поставленных задач, анализе результатов и их обобщении. Автор в роли руководителя и ответственного исполнителя активно участвовал в выполнении проектов, финансируемых РФФИ и Минобрнауки РФ.

Степень достоверности и апробация работы

Достоверность приведенных в работе результатов обеспечена использованием современного оборудования, стандартных методик измерения, многократным повторением экспериментов с обработкой результатов с использованием статистических критериев и современного программного обеспечения.

Результаты работы были представлены на следующих международных и всероссийских конференциях: 12 Всероссийская (международная) научная конференция «Физико-химические процессы при селекции атомов и молекул» (2008); Всероссийская конференция «Структура и динамика молекулярных систем» (2007, 2008,2009, 2011); Meeting of the International Humic Substances Society (2008, 2010); International Conference on Colloid Chemistry and Physicochemical Mechanics (2008,2013); VIII Finnish-Russian Symposium on Radiochemistry (2009); Российская конференция по радиохимии «Радиохимия» (2009, 2018); 16th Radiochemical Conference (2010); Российская конференция «Радиохимия-наука настоящего и будущего», посвященная 100-летию со дня рождения Ан.Н. Несмеянова (2011); Scientific Conference "Biologically Active Substances: Fundamental and Applied Problems" (2011); Russian-Nordic Symposium on Radiochemistry (2013); 11th International Symposium on Polyelectrolytes (2016); Всероссийская Каргинская конференция «Полимеры» (2017, 2020); 7th International Colloids Conference (2017) Научная конференция "Ломоносовские чтения - 2018"; XVIth International conference Surface forces (2018); III Международная научно-практическая конференция "Радиофарма-2019"; XXI Mendeleev Congress on general and applied chemistry (2019); International Conference of CIS IHSS on Humic Innovative Technologies (HIT-2019,2021)

Соответствие паспорту научной специальности

Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 02.00.14 - Радиохимия по области исследований:

- Получение и идентификация меченых соединений. Химические, физико-химические, ядерно-химические и биохимические методы синтеза.

- Метод радиоактивных индикаторов. Химические аспекты использования радионуклидов в биологии и медицине.

Диссертационная работа соответствует паспорту специальности 02.00.11 — Коллоидная химия по области исследований:

- Теория и практика адсорбции на границах жидкость - газ и жидкость -жидкость.

- Коллоидно-химические свойства растворов полимеров. Публикации

По результатам диссертации опубликовано 24 статьи, индексируемые в системе Web of Science и Scopus, и 20 тезисов докладов. Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 193 страницах, состоит из 10 глав и разделов «Заключение» и «Выводы», содержит 47 рисунков, 16 таблиц, список цитируемой литературы включает 310 ссылок.

ГЛАВА 1. МЕЧЕННЫЕ ТРИТИЕМ БЕЛКИ: ПОЛУЧЕНИЕ И ИССЛЕДОВАНИЕ СТРУКТУРЫ (Обзор литературы)

Меченные тритием белки являются удобным инструментом для исследования их биологических функций, а также проведения in vivo и in vitro исследований. Для введения тритиевой метки в белки и пептиды используются как методы химического синтеза, так и физико-химические подходы [48]. Примером химического синтеза может служить получение человеческого глобулина по реакции алкилирования, где использовали меченный тритием этилметансульфонат, который в свою очередь получали из [3Н]этанола и метансульфонового ангидрида [49]. Удельная радиоактивность продукта, описанного авторами, составила 19 ГБк/моль, хотя в той же работе авторами предполагается возможность ее увеличения за счет изменения условий проведения реакции: рН, температуры и концентрации реагентов. В более поздних работах для введения трития в белки использовали реакцию восстановительного метилирования, которое предложили в 1968 г Мианс и Фееней (Means and Feeney) [50]. Восстановительное метилирование ферментов с целью введения в них трития проводят с помощью формальдегида и [3H]NaBH4, удельная радиоактивность ферментов при этом составляет от 18,5 до 103 ТБк/моль [51-53]. Альтернативным методом химического синтеза меченных тритием белков является метод высокотемпературного твердофазного каталитического изотопного обмена с газообразным тритием при температуре 120°С на катализаторе 5% Pd/BaSO4, которым был получен инсулин с удельной радиоактивностью 1,48 ПБк/моль [54].

Среди физико-химических подходов следует выделить метод активации трития с помощью микроволнового разряда [55], а также метод термической активации трития (МТАТ) [36,56], когда атомы трития получают с помощью диссоциации молекул трития на вольфрамовом катализаторе (проволоке). Однако следует учитывать, что для реакции используют очень небольшие мишени (доли миллиграмм), что затрудняет выделение меченого продукта,

таким образом, выход целевого продукта окажется небольшим. Сравнение возможностей введения тритиевой метки в сахара и диазины методами термической активации трития и твердофазной каталитической гидрогенизацией показало, что несмотря на близкие скорости включения трития в пуриновые и пиримидиновые основания молярная радиоактивность оказывается ниже при использовании МТАТ [32]. Однако при введении тритиевой метки в биологические макромолекулы у метода термической активации есть преимущества: из-за мягких условий воздействия биологические макромолекулы полностью сохраняют свою физиологическую активность и структуру, достигается высокий радиохимический выход, а удельные радиоактивности уже сопоставимы с величинами, получаемыми с использованием метода твердофазной каталитической гидрогенизации. Также следует отметить отсутствие необходимости использования подложки с развитой поверхностью, с которой нужно удалять вещество, что критически важно при введении трития в поверхностно-активные вещества. Рассмотрим подробнее процесс введения трития в органические вещества с помощью МТАТ.

1.1.Метод термической активации трития (основные положения)

Газообразный тритий достаточно просто перевести в реакционную атомарную форму путем диссоциации молекул трития на вольфрамовой проволоке, нагретой электрическим током до высокой температуры (15002200 К). Такой способ получения реакционной формы трития получил название метода термической активации [36]. Реакцию проводят в стеклянных сосудах, примеры которых подробно рассмотрены в работе [36]. Раствор, содержащий вещество, в которое нужно ввести радиоактивную метку (мишень), тонким слоем наносят на стенки реакционного сосуда и удаляют растворитель таким образом, чтобы вещество осталось на стенках.

Процесс образования атомов водорода (или его изотопов) на поверхности вольфрама в простейшем случае может быть описан уравнением

+ Н2 ^ WH + Н (1.1)

и подчиняться модели Лэнгмюра

р = 8,3 х 105^кхрхТ4 (1.2)

где к - константа равновесия реакции; р - давление газа [57,58].

Степень диссоциации (а) водорода на поверхности вольфрамового катализатора зависит от каталитических свойств вольфрама, которые в свою очередь определяются подготовкой поверхности металла к эксперименту, включая и удаление каталитических ядов и загрязнений, чем объясняется большой разброс значений энергии диссоциации водорода на вольфраме, приведенный в литературе от 181 до 238 кДж [59-62]. С давлением газа в системе (р) и температурой (!) величина а связана соотношением [63]:

а = Ч

КР/4Р + КР (13)

logКр = -2,37 X 104/Г + 6,35 (14)

Поток атомов трития, образующихся на поверхности вольфрамовой проволоки, бомбардирует стенки реакционного сосуда. Необходимо отметить, что давление газа в системе выбирается таким образом, чтобы не происходил обмен энергии между атомами в газовой фазе - их тремализация. Температура атомов, достигающих мишени обратно пропорциональна давлению газа [64]. При низком давлении в системе (менее 1 Па) атомы трития практически без потери энергии достигают стенок сосуда, где вступают во взаимодействие с молекулами мишени. Для характеристики потока атомов можно использовать вещества, которые способны вступать в реакцию с атомарным тритием и при этом не образовывать побочных продуктов, например, полиэтилен низкого давления, содержащий минимальное число разветвлений цепи и кратных связей [65].

Для описания взаимодействия атомарного водорода с поверхностью используется так называемый, механизм «горячего-предшественника» (hot-precursor mechanism of adsorption): атом водорода при первом столкновении

переводит водород, изначально связанный с поверхностью, в возбужденное колебательное состояние выше потенциального барьера диффузии связанного водорода [66,67].

В результате взаимодействия атомов трития с молекулами мишени происходит изотопное замещение протия на тритий в молекулах мишени путем двухступенчатой реакции: (1) отрыв водорода в СН-связи, (2) рекомбинация полученного радикала с другим атомом трития: У-СН2-ХН +3Н-► У-СН*-ХН+3НН (1.5)

У-СН*-ХН+3Н -У-СН3Н-ХН (1.6)

В уравнениях 2.5 и 2.6 Y и ХН - функциональные группы в молекулы мишени. Под действием атомов трития возможны и другие реакции, включающие декарбоксилирование, дегалоидирование, замещение на тритий гидроксильной и аминогруппы. При этом образуются меченные побочные продукты.

Замещение водорода при других атомах кроме углерода приводит к образованию так называемой лабильной метки, которая легко замещается на водород при растворении вещества в воде или любом другом протонном растворителе. После проведения реакции тритий из лабильных положений (функциональные группы, способные к обмену протоном с растворителем) удаляют многократным испарением раствора меченого вещества в протонном растворителе или с помощью диализа.

Вероятность протекания основной и побочных процессов зависит от условий проведения реакции: температуры вольфрамовой проволоки, давления молекулярного трития в реакционном сосуде, расстояния от вольфрамовой проволоки до мишени, способа приготовления мишени и времени воздействия атомарного трития на мишень.

В 1976 г была опубликована первая работа по введению трития в пептидный антибиотик А-128 и гуанозинмонофосфат, с помощью метода термической активации, выводом в которой стало, что «при температуре нити

2000 К и времени экспозиции 2-5 минут достигнуты удельные радиоактивности 10-20 Ки/ммоль (для «неподвижного» трития), которые могут быть, по всей видимости, увеличены при больших временах облучения» [68]. Для многих веществ такой подход был оправдан, и были получены удовлетворительные результаты по величине общей и удельной радиоактивности меченых соединений [69]. Однако впоследствии было показано, что для достижения высокого выхода меченого соединения нет необходимости проводить реакцию в течение столь длительного времени. Наиболее ярко влияние избыточного воздействия атомов трития на мишень было показано при получении меченного тритием пантетина [70]. Специфика взаимодействия атомарного трития с пантетином определяется, прежде всего тем, что в составе молекулы пантетина содержится дисульфидный мостик. Учитывая то, что атомарный водород является очень сильным восстановителем, при атаке атомарным тритием пантетина велика вероятность разрыва как Б-Б, так и С-Б связей с образованием меченых побочных продуктов, максимальный выход меченого [3Н]пантетина должен достигаться при небольших интегральных потоках атомов трития на мишень, а увеличение потока будет приводить к разрушению меченых молекул. Интенсивность потока атомов трития на мишень сильно зависит от температуры вольфрамовой проволоки: при температуре вольфрамовой проволоки 1360 К максимальный выход [3Н]пантетина достигался при времени реакции 30 с, а при 2000 К - менее 10 с. Увеличение давления молекулярного трития хотя и увеличивало общую радиоактивность всех продуктов реакции, выход меченого пантетина при этом снижался. Таким образом, оптимальным с точки зрения величины радиоактивности пантетина оказались следующие условия: давление трития 0,5 Па, температура вольфрамовой проволоки 1700 К, время реакции 10 с. Эти условия оказались приемлемы и для других соединений, например, противоопухолевых препаратов асалина и хлогифена [71]. В дальнейшем при исследовании влияния условий генерации атомов на образование меченого материнского соединения и побочных продуктов было

выработано общее правило: «чем деликатнее соединение, тем мягче должны быть условия введения метки» [72].

Влияние времени реакции и давления молекулярного трития на образование меченых аминокислот при воздействии атомарного трития на сложную смесь молекул было продемонстрировано на примере аминокислот [73]. Мишени представляли собой как замороженные водные растворы аминокислот, так и их лиофилизованные смеси. Было обнаружено, что при малых временах воздействия (до 45 с) радиоактивность аминокислот зависела, прежде всего, от их концентрации в приповерхностном слое. При более длительных временах обработки мишеней атомами трития происходило уменьшение выхода меченых продуктов для аминокислот, обладающих поверхностно-активными свойствами за счет протекания побочных реакций. Показано, что увеличение давления трития в системе с 0,5 до 2 Па хотя и увеличивало исходную радиоактивность мишени, но мало сказывалось на эффективности введения трития в аминокислоты. Таким образом, еще раз было продемонстрировано, что для получения меченых соединений с помощью метода термической активации необходимо проводить реакцию с горячими атомами, достигающими мишень без потери энергии из-за столкновений в газовой фазе. Авторами работы [74] проводилось сравнение взаимодействия атомарного трития с растворами и лиофилизованными аминокислотами и глюкозамином. Было показано, что отношение скоростей образования меченого серина и глицина сопоставимо для лиофилизованных мишеней и водных растворов при временах воздействия 45-270 с. Однако при коротких экспозициях (15 с) отношение скоростей образования меченого серина и глицина в случае водных растворов в 1,75 раз превосходило величину, полученную для лиофилизованных мишеней. В случае вещества, легко подвергающегося деструкции под действием атомарного трития, -глюкозамина, увеличение времени реакции резко снижает выход меченого соединения, хотя скорость образования [3Н]глюкозамина существенно выше по сравнению с глицином. Следует также учитывать, что основная причина,

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Чернышева Мария Григорьевна, 2022 год

ЦИТИРУЕМАЯ ЛИТЕРАТУРА

1. Scheibe P. et al. Langmuir-blodgett films of biocompatible poly(HPMA)-block -poly(lauryl methacrylate) and Poly(HPMA)- random -poly(lauryl methacrylate): Influence of polymer structure on membrane formation and stability // Langmuir. 2010. Vol. 26, № 8. P. 5661-5669.

2. Hussain M., Wackerlig J., Lieberzeit P. Biomimetic Strategies for Sensing Biological Species // Biosensors. 2013. Vol. 3, № 1. P. 89-107.

3. Benjamins J. et al. Dynamic and static properties of proteins adsorbed at the air/water interface // Faraday Discuss. Chem. Soc. 1975. Vol. 59. P. 218-229.

4. Douillard R., Lefebvre J., Tran V. Applicability of Gibbs' law to protein adsorption isotherms // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 1993. Vol. 78, № C. P. 109-113.

5. Li Y., Lee J.-S. Staring at protein-surfactant interactions: Fundamental approaches and comparative evaluation of their combinations - A review // Anal. Chim. Acta. Elsevier Ltd, 2019. Vol. 1063. P. 18-39.

6. Neacsu M.V. et al. Interaction between Albumin and Pluronic F127 Block Copolymer Revealed by Global and Local Physicochemical Profiling // J. Phys. Chem. B. 2016. Vol. 120, № 18. P. 4258-4267.

7. Blanco E. et al. Different Thermal Unfolding Pathways of Catalase in the Presence of Cationic Surfactants // J. Phys. Chem. B. 2007. Vol. 111, № 8. P. 2113-2118.

8. Anand U., Mukherjee S. Binding, unfolding and refolding dynamics of serum albumins // Biochim. Biophys. Acta - Gen. Subj. Elsevier B.V., 2013. Vol. 1830, № 12. P. 5394-5404.

9. Akram M. et al. Conformational alterations induced by novel green 16-E2-16 gemini surfactant in xanthine oxidase: Biophysical insights from tensiometry, spectroscopy, microscopy and molecular modeling // Spectrochim. Acta - Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2015. Vol. 150, № 1. P. 440-450.

10. Chaves O. et al. Fluorescence and Docking Studies of the Interaction between Human Serum Albumin and Pheophytin // Molecules. 2015. Vol. 20, № 10. P.

19526-19539.

11. Khan J.M. et al. Effect of cetyltrimethylammonium bromide (CTAB) on the conformation of a hen egg white lysozyme: A spectroscopic and molecular docking study // Spectrochim. Acta Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2019. Vol. 219. P. 313-318.

12. Parray M. ud din et al. Effect of cationic gemini surfactant and its monomeric counterpart on the conformational stability and esterase activity of human serum albumin // J. Mol. Liq. Elsevier B.V., 2018. Vol. 260. P. 65-77.

13. Menger F.M., Rizvi S.A.A. Relationship between surface tension and surface coverage // Langmuir. 2011. Vol. 27, № 23. P. 13975-13977.

14. Wang R., Schienoff J.B. Adsorption of a radiolabeled random hydrophilic/hydrophobic copolymer at the liquid/liquid interface: Kinetics, isotherms, and self-exchange // Macromolecules. 1998. Vol. 31, № 2. P. 494500.

15. Graham D.., Phillips M.. Proteins at liquid interfaces. I Kinetics of adsorption and surface denaturation // J. Colloid Interface Sci. 1979. Vol. 70, №2 3. P. 403414.

16. Graham D.., Phillips M.. Proteins at liquid interfaces. II Adsorption Isotherms // J. Colloid Interface Sci. 1979. Vol. 70, № 3. P. 427-439.

17. Graham D.., Phillips M.. Proteins at liquid interfaces. III Molecular structure of adsorbed film // J. Colloid Interface Sci. 1979. Vol. 70, № 3. P. 427-439.

18. Graham D.., Phillips M.. Proteins at liquid interfaces. IV. Dilatational properties // J. Colloid Interface Sci. 1980. Vol. 76, № 1. P. 227-239.

19. Graham D.., Phillips M.. Proteins at liquid interfaces. V. Shear properties // J. Colloid Interface Sci. 1980. Vol. 76, № 1. P. 240-250.

20. Guckeisen T., Hosseinpour S., Peukert W. Effect of pH and urea on the proteins secondary structure at the water/air interface and in solution // J. Colloid Interface Sci. Elsevier Inc., 2021. Vol. 590. P. 38-49.

21. Mota da Silva A.M., Souza Almeida F., Kawazoe Sato A.C. Functional characterization of commercial plant proteins and their application on

stabilization of emulsions // J. Food Eng. 2021. Vol. 292, № August 2020. P. 1-10.

22. Cejas J.P. et al. Interaction of chlorogenic acid with model lipid membranes and its influence on antiradical activity // Biochim. Biophys. Acta - Biomembr. Elsevier B.V., 2021. Vol. 1863, № 1. P. 183484.

23. Zhou B. et al. Dynamic adsorption and interfacial rheology of whey protein isolate at oil-water interfaces: Effects of protein concentration, pH and heat treatment // Food Hydrocoll. Elsevier Ltd, 2021. Vol. 116, № October 2020. P. 106640.

24. Zhou B. et al. Interfacial properties of milk proteins: A review // Adv. Colloid Interface Sci. Elsevier B.V., 2021. Vol. 295. P. 102347.

25. Kirtil E. et al. Examination of interfacial properties of quince seed extract on a sunflower oil-water interface // Chem. Eng. Sci. Elsevier Ltd, 2021. Vol. 245. P. 116951.

26. Luo Y. et al. Adsorption kinetics and dilatational rheological properties of recombinant Pea Albumin-2 at the oil-water interface // Food Hydrocoll. Elsevier Ltd, 2021. Vol. 120, № January. P. 106866.

27. Zhou Y. et al. Effect of glycosylation with sugar beet pectin on the interfacial behaviour and emulsifying ability of coconut protein // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2021. Vol. 183. P. 1621-1629.

28. Алентьев А.Ю., Филатов Э.С. Радиометрический метод исследования межфазных границ двух несмешивающихся жидкостей // Радиохимия. 1991. Vol. 33, № 6. P. 80-87.

29. Voges R., Heys J.R., Moenius T. Preparation of Compounds Labeled with Tritium and Carbon-14 // Preparation of Compounds Labeled with Tritium and Carbon-14. 2009. 664 p.

30. Шевченко В.П., Нагаев И.Ю., Мясоедов Н.Ф. Меченные тритием липофильные соединения. Москва: Наука, 2003. 246 p.

31. Шевченко В.П., Нагаев И.Ю., Мясоедов Н.Ф. Гетерогенный каталитический синтез меченных изотопами водорода органических

соединений без участия растворителей // Радиохимия. 2018. Vol. 60, № 2. P. 97-127.

32. Сидоров Г.В. et al. Сравнительное изучение реакций термически активированного трития и твердофазной каталитической гидрогенизации тритием c сахарами и диазинами // Радиохимия. 2005. Vol. 47, № 3. P. 284-288.

33. Сидоров Г.В., Мясоедов Н.Ф. Изучение реакций изотопного обмена транс-зеатина с тритием // Радиохимия. 2006. Vol. 48, № 5. P. 465-467.

34. Баитов А.А., Сидоров Г.В., Мясоедов Н.Ф. Исследование твердофазных каталитических реакций трития с углеводами. 1. Изучение влияния температуры, катализаторов и состава твердой фазы на реакцию твердофазной каталитичской гидрогенизации D-рибозы тритием // Радиохимия. 2005. Vol. 47, № 2. P. 182-184.

35. Шевченко В.П. et al. Синтез меченного тритием оланзапина // Биоорганическая химия. 2005. Vol. 31, № 4. P. 420-424.

36. Филатов Э.С., Симонов Е.Ф. Физико-химические и ядерно-химические способы получения меченых соединений и их идентификация. Москва: Энергоатомиздат, 1987. 348 p.

37. Баратова Л.А. et al. Тритиевая планиграфия биологических макромолекул / ed. Шишков А.В. Москва: Наука, 1999. 175 p.

38. Радюхин В.А., Баратова Л.А. Молекулярные механизмы формирования рафтов биологических мембран // Биоорганическая химия. 2020. Vol. 46, № 3.

39. Agafonov D.E., Kolb V.A., Spirin A.S. Proteins on ribosome surface: measurements of protein exposure by hot tritium bombardment technique. // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. National Academy of Sciences, 1997. Vol. 94, № 24. P. 12892-12897.

40. Lukashina E. et al. Analysis of the role of the coat protein N-terminal segment in Potato virus X virion stability and functional activity // Mol. Plant Pathol. 2012. Vol. 13, № 1. P. 38-45.

41. Shishkov A. V. et al. The in situ spatial arrangement of the influenza A virus matrix protein M1 assessed by tritium bombardment // Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. 1999. Vol. 96, № 14. P. 7827-7830.

42. Shtykova E. V. et al. Influenza virus Matrix Protein M1 preserves its conformation with pH, changing multimerization state at the priming stage due to electrostatics // Sci. Rep. 2017.

43. Baratova L.A. et al. In Situ Spatial Organization of Potato Virus A Coat Protein Subunits as Assessed by Tritium Bombardment // J. Virol. 2001. Vol. 75, № 20. P. 9696-9702.

44. Charov K., Burkart M.D. Quantifying protein-protein interactions of the acyl carrier protein with solvatochromic probes // Methods in Enzymology. 1st ed. Elsevier Inc., 2020. Vol. 638. 321-340 p.

45. Rao V.S. et al. Protein-Protein Interaction Detection: Methods and Analysis // Int. J. Proteomics. 2014. Vol. 2014, № ii. P. 1-12.

46. Tsai C. et al. Studies of protein-protein interfaces: A statistical analysis of the hydrophobic effect // Protein Sci. 2008. Vol. 6, № 1. P. 53-64.

47. Беловодский Л.Ф., Гаевой В.К., Гришмановский В.И. Тритий. Москва: Энергоатомиздат, 1985. 248 p.

48. Peng C.T., Hua R.L. Tritium Labeling of Peptides and Proteins // Fusion Technol. 1985. Vol. 8, № 2 pt 2. P. 2265-2272.

49. ROSEN C.-G., EHRENBERG L., AHNSTRÖM G. Tritium Labelling of Antibodies // Nature. 1964. Vol. 204, № 4960. P. 796-797.

50. Means G.E., Feeney R.E. Reductive Alkylation of Amino Groups in Proteins // Biochemistry. 1968. Vol. 7, № 6. P. 2192-2201.

51. Tack B.F. et al. Tritium labeling of proteins to high specific radioactivity by reduction methylation. // J. Biol. Chem. 1980. Vol. 255, № 18. P. 8842-8847.

52. Wahlström R. et al. Cellulose hydrolysis and binding with Trichoderma reesei Cel5A and Cel7A and their core domains in ionic liquid solutions // Biotechnol. Bioeng. 2014. Vol. 111, № 4. P. 726-733.

53. Djajadi D.T. et al. Cellulases adsorb reversibly on biomass lignin // Biotechnol.

Bioeng. 2018. Vol. 115, № 12. P. 2869-2880.

54. Золотарев Ю.А. et al. Твердофазный изотопный обмен водорода на дейтерий и тритий в генно-инженерном инсулине человека // Биоорганическая химия. 2014. Vol. 40, № 1. P. 31-41.

55. Hua R., Peng C.-T. Relative efficiencies of tritium atoms and ionic species in peptide labeling // J. Label. Compd. Radiopharm. 1987. Vol. 24, № 9. P. 10951106.

56. Badun G.A., Chernysheva M.G., Ksenofontov A.L. Increase in the specific radioactivity of tritium-labeled compounds obtained by tritium thermal activation method // Radiochim. Acta. 2012. Vol. 100, № 6. P. 401-408.

57. Langmuir I., Mackay G.M.J. The dissociation of hydrogen into atoms. Part I. Experimental. // J. Am. Chem. Soc. 1914. Vol. 36, № 8. P. 1708-1722.

58. Langmuir I. The dissociation of hydrogen into atoms. III. The mechanism of the reaction. // J. Am. Chem. Soc. 1916. Vol. 38, № 6. P. 1145-1156.

59. Umemoto H. et al. Direct detection of H atoms in the catalytic chemical vapor deposition of the SiH 4 О H 2 system // J. Appl. Phys. American Institute of Physics, 2002. Vol. 91, № 3. P. 1650-1656.

60. Zheng W., Gallagher A. Hydrogen dissociation on high-temperature tungsten. // Surf. Sci. Elsevier B.V., 2006. Vol. 600, № 10. P. 2207-2213.

61. Langmuir I. A chemically active modification of hydrogen // J. Am. Chem. Soc. 1912. Vol. 34, № 10. P. 1310-1325.

62. Otsuka T., Ihara M., Komiyama H. Hydrogen dissociation on hot tantalum and tungsten filaments under diamond deposition conditions. // J. Appl. Phys. American Institute of Physics, 1995. Vol. 77, № 2. P. 893-898.

63. Yang N. Novel aspects of diamond: from growth to applications // Topics in Applied Physics. 2015. 296 p.

64. Бадун Г.А., Филатов Э.С. Характеристики источника атомарного трития, используемого для получения меченых соединений // Атомная энергия. 1987. Vol. 63, № 2. P. 123-124.

65. Бадун Г.А. et al. Мониторинг потока «горячих» атомов трития в методе

термической активации // Радиохимия. 2005. Vol. 47, № 2. P. 178-181.

66. Widdra W. et al. Adsorption, Abstraction, and Pairing of Atomic Hydrogen on Si(100)-(2х1) // Phys. Rev. Lett. 1995. Vol. 74, № 11. P. 2074-2077.

67. Tok E.S., Engstrom J.R., Kang H.C. Precursor states of atomic hydrogen on the Si(100)-(2x1) surface // J. Chem. Phys. 2003. Vol. 118, № 7. P. 32943299.

68. Шишков А.В. et al. Получение меченных тритием биологически-активных соединений // Доклады Академии наук СССР. 1976. Vol. 228, № 5. P. 1237-1239.

69. Шишков А.В., Нейман Л.А., Смоляков В.С. Получение меченых органических соединений действием атомарного трития // Успехи Химии. 1984. Vol. 7, № LIII. P. 1125-1151.

70. Бадун Г.А., Филатов Э.С. О возможности получения 3Н-пантетина методом термической активации трития // Радиохимия. 1991. Vol. 33, № 1. P. 75-77.

71. Гир Х.Д. et al. Получение меченных тритием препаратов асалина для медицинских исследований // Вестник Московского университета. Серия 2 Химия. 1992. Vol. 33, № 5. P. 455-459.

72. Бадун Г.А. Метод термической активации как универсальный способ получения меченых соединений // В сб. науч. статей Биохимия, фармакология и клиническое применение пантотеновой кислоты (под ред. чл.-корр. НАН Беларуси А.Г. Мойсеенка). 2003. P. 9-14.

73. Бадун Г.А., Лукашина, Е.В. Ксенофонтов, А.Л. Федосеев В.М. Кинетические закономерности образования меченых продуктов при действии атомарного трития на замороженные растворы и лиофилизованные смеси аминокислот // Радиохимия. 2001. Vol. 43, № 3. P. 272-276.

74. Бадун Г.А. et al. Сравнительное исследование взаимодействия атомарного трития с глюкозамином и аминокислотами // Радиохимия. 2005. Vol. 47, № 3. P. 281-283.

75. Bogacheva E.N. et al. Tritium planigraphy: From the accessible surface to the spatial structure of aprotein // Proc. Natl. Acad. Sci. National Academy of Sciences, 1998. Vol. 95, № 6. P. 2790-2794.

76. Nemykh M.A. et al. One more probable structural transition in potato virus X virions and a revised model of the virus coat protein structure // Virology. 2008. Vol. 373, № 1. P. 61-71.

77. Гольданский В.И. et al. Исследование пространственной структуры белков при помощи тритиевой метки. II. Внутримолекулярное распределение трития в N-концевой части миоглобина и третичная структура белка // Молекулярная биология. 1982. Vol. 16, № 3. P. 528534.

78. Lee B., Richards F.M. The interpretation of protein structures: Estimation of static accessibility // J. Mol. Biol. 1971. Vol. 55, № 3.

79. Богачева Е.Н., Гедрович А.В., Шишков А.В. АЙСБЕРГОВАЯ МОДЕЛЬ СТРУКТУРЫ АДСОРБЦИОННЫХ СЛОЕВ ГЛОБУЛЯРНЫХ БЕЛКОВ НА ГРАНИЦЕ ФАЗ ВОДА-ВОЗДУХ. ИССЛЕДОВАНИЕ МЕТОДОМ ТРИТИЕВОЙ ПЛАНИГРАФИИ // Коллоидный журнал. 2004. Vol. 66, № 2. P. 166-169.

80. Lukashina E. V., Badun G.A., Chulichkov A.L. Atomic tritium as an instrument for study of protein behavior at the air-water interface // Biomol. Eng. 2007. Vol. 24, № 1 SPEC. ISS. P. 125-129.

81. Volynskaya A.V. et al. Determination of the accessible surface of globular proteins by means of tritium planigraphy // Eur. Biophys. J. 1994. Vol. 23, № 2. P. 139-143.

82. Гедрович А.., Бадун Г.А. Исследование пространственной структуры глобулярных белков методом тритиевой планиграфии. Короткие пептиды как модель полностью развернутой полипептидной цепи // Молекулярная биология. 1992. Vol. 26, № 3. P. 558-564.

83. Badun G.A. et al. Atomic tritium as a surface nanoprobe in a structural investigation of molecular assemblies // Mater. Sci. Eng. C. 2003. Vol. 23, №

6-8. P. 797-802.

84. Волынская А.В. et al. Исследование структуры адсорбционных слоев поверхностно-активных веществ методом тритиевой метки // Доклады Академии наук СССР. 1982. Vol. 266. P. 871-874.

85. Бадун Г.А., Федосеев В.М. Проницаемость липидных мембран для атомарного трития, или эффект «соскальзывания» атомов и его роль в методе тритиевой планиграфии // Радиохимия. 2001. Vol. 43, №2 3. P. 267271.

86. Kordyukova L. V. et al. Studying liposomes by tritium bombardment // Biosci. Rep. 2001. Vol. 21, № 6. P. 711-718.

87. Zolotarev Y.A. et al. New development in the tritium labelling of peptides and proteins using solid catalytic isotopic exchange with spillover-tritium // Amino Acids. 2003. Vol. 24, № 3. P. 325-333.

88. White F.H., Riesz P., Kon H. Free-radical distributions in several gamma-irradiated dry proteins as determined by the free-radical interceptor technique. // Radiat. Res. 1967. Vol. 32, № 4. P. 744-759.

89. White F.H. Tritiation of lysozyme by the free-radical interceptor method and determination of the tritium distribution among individual residues of the chromatographically homogeneous protein. // Radiat. Res. 1968. Vol. 36, № 3. p. 470-482.

90. Rahikainen J.L. et al. Cellulase-lignin interactions-The role of carbohydrate-binding module and pH in non-productive binding // Enzyme Microb. Technol. Elsevier Inc., 2013. Vol. 53, № 5. P. 315-321.

91. Lu J.R. et al. Structural conformation of lysozyme layers at the air/water interface studied by neutron reflection // J. Chem. Soc. Faraday Trans. 1998. Vol. 94, № 21. P. 3279-3287.

92. Rao C.S., Damodaran S. Is surface pressure a measure of interfacial water activity? Evidence from protein adsorption behavior at interfaces // Langmuir. 2000. Vol. 16, № 24. P. 9468-9477.

93. Lu J.R., Su T.J., Howlin B.J. The Effect of Solution pH on the Structural

Conformation of Lysozyme Layers Adsorbed on the Surface of Water // J. Phys. Chem. B. 1999. Vol. 103, № 28. P. 5903-5909.

94. Fainerman V.B. et al. Reversibility and irreversibility of adsorption of surfactants and proteins at liquid interfaces // Adv. Colloid Interface Sci. 2006. Vol. 123-126, № SPEC. ISS. P. 163-171.

95. Singer S.J. Note on an equation of state for linear macromolecules in monolayers // J. Chem. Phys. 1948. Vol. 16, № 9. P. 872-876.

96. Dickinson E. et al. Self-consistent-field modelling of adsorbed casein: Interaction between two protein-coated surfaces // J. Chem. Soc. - Faraday Trans. 1997. Vol. 93, № 9. P. 1785-1790.

97. Douillard R. et al. State Equation of ß-Casein at the Air/Water Interface // J. Colloid Interface Sci. 1994. Vol. 163, № 2. P. 277-288.

98. Silberberg A. THE ADSORPTION OF FLEXIBLE MACROMOLECULES. PART I. THE ISOLATED MACROMOLECULE AT A PLANE INTERFACE 1 // J. Phys. Chem. 1962. Vol. 66, № 10. P. 1872-1883.

99. Rubin R.J. A random walk model of chain polymer adsorption at a surface. II. Effect of correlation between neighboring steps // J. Res. Natl. Bur. Stand. Sect. B Math. Math. Phys. 1965. Vol. 69B, № 4. P. 301.

100. Hoeve C.A.J. Adsorption isotherms for polymer chains adsorbed from 0 solvents // J. Chem. Phys. 1966. Vol. 44, № 4. P. 1505-1509.

101. Fainerman V.., Lucassen-Reynders E.., Miller R. Description of the adsorption behaviour of proteins at water/fluid interfaces in the framework of a two-dimensional solution model // Adv. Colloid Interface Sci. 2003. Vol. 106, № 1-3. P. 237-259.

102. Fainerman V.., Lucassen-Reynders E.., Miller R. Adsorption of surfactants and proteins at fluid interfaces // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 1998. Vol. 143, № 2-3. P. 141-165.

103. Fainerman V.B., Miller R., Wüstneck R. Adsorption of proteins at liquid/fluid interfaces // J. Colloid Interface Sci. 1996. Vol. 183, № 1. P. 26-34.

104. Coreta-Gomes F.M., Vaz W.L.C., Moreno M.J. Effect of Acyl Chain Length

on the Rate of Phospholipid Flip-Flop and Intermembrane Transfer // J. Membr. Biol. Springer US, 2018. Vol. 251, № 3. P. 431-442.

105. Lucassen-Reynders E.H. Competitive adsorption of emulsifiers 1. Theory for adsorption of small and large molecules // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 1994. Vol. 91. P. 79-88.

106. Alahverdjieva V.S. et al. Competitive Adsorption from Mixed Hen Egg-White Lysozyme/Surfactant Solutions at the Air-Water Interface Studied by Tensiometry, Ellipsometry, and Surface Dilational Rheology // J. Phys. Chem. B. 2008. Vol. 112, № 7. P. 2136-2143.

107. Alahverdjieva V.S. et al. Adsorption behaviour of hen egg-white lysozyme at the air/water interface // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2008. Vol. 323, № 1-3. P. 167-174.

108. Alahverdjieva V.S. et al. Adsorption of hen egg-white lysozyme at the air-water interface in presence of sodium dodecyl sulphate // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2008. Vol. 317, № 1-3. P. 610-617.

109. Erickson J.S., Sundaram S., Stebe K.J. Evidence that the Induction Time in the Surface Pressure Evolution of Lysozyme Solutions Is Caused by a Surface Phase Transition // Langmuir. 2000. Vol. 16, № 11. P. 5072-5078.

110. Sengupta T., Razumovsky L., Damodaran S. Energetics of Protein-Interface Interactions and Its Effect on Protein Adsorption // Langmuir. 1999. Vol. 15, № 20. P. 6991-7001.

111. Ter-Minassian-Saraga L. Protein denaturation on adsorption and water activity at interfaces: an analysis and suggestion // J. Colloid Interface Sci. 1981. Vol. 80, № 2. P. 393-401.

112. MacRitchie F., Alexander A. Kinetics of adsorption of proteins at interfaces. Part I. The role of bulk diffusion in adsorption // J. Colloid Sci. 1963. Vol. 18, № 5. P. 453-457.

113. MacRitchie F., Alexander A.. Kinetics of adsorption of proteins at interfaces. Part II. The role of pressure barriers in adsorption // J. Colloid Sci. 1963. Vol. 18, № 5. P. 458-463.

114. Leiske D.L., Shieh I.C., Tse M.L. A Method To Measure Protein Unfolding at an Air-Liquid Interface // Langmuir. 2016. Vol. 32, № 39. P. 9930-9937.

115. Sengupta T., Damodaran S. A New Methodology for Studying Protein Adsorption at Oil-Water Interfaces // J. Colloid interface Sci. 1998. Vol. 206. P. 407-415.

116. Damodaran S., Sengupta T. Dynamics of Competitive Adsorption of a s -Casein and P-Casein at Planar Triolein-Water Interface: Evidence for Incompatibility of Mixing in the Interfacial Film // J. Agric. Food Chem. 2003. Vol. 51, № 6. P. 1658-1665.

117. Ward A.F.H., Tordai L. Time-Dependence of Boundary Tensions of Solutions I. The Role of Diffusion in Time-Effects // J. Chem. Phys. 1946. Vol. 14, № 7. P. 453-461.

118. Пелех В.В. et al. Влияние хлоридов щелочных металлов на распределение сывороточного альбумина в системе вода-межфазный адсорбционный слой-толуол. 2. Влияние солей на равновесное распределение белка в системе // Коллоидный журнал. 1998. Vol. 60, № 2. P. 239-244.

119. Пелех В.В. et al. Влияние хлоридов щелочных металлов на распределение сывороточного альбумина в системе вода-межфазный адсорбционный слой-толуол. 1. Сгущение массы белка на межфазной границе и его концентрация в углеводородной фазе // Коллоидный журнал. 1998. Vol. 60, № 2. P. 235-238.

120. Бадун Г.А. et al. Новый вариант метода сцинтиллирующей фазы // Радиохимия. 2005. Vol. 47, № 6. P. 536-540.

121. Dan A. et al. Interfacial rheology of mixed layers of food proteins and surfactants // Curr. Opin. Colloid Interface Sci. 2013. Vol. 18, № 4. P. 302310.

122. Jones M. A theoretical approach to the binding of amphipathic molecules to globular proteins. // Biochem. J. 1975. Vol. 151. P. 109-114.

123. Turro N.J. et al. Spectroscopic Probe Analysis of Protein-Surfactant Interactions: The BSA/SDS System // Langmuir. 1995. Vol. 11, № 7. P. 2525174

2533.

124. Green R.J. et al. Interaction of lysozyme and sodium dodecyl sulfate at the airliquid interface // Langmuir. 2000. Vol. 16, № 13. P. 5797-5805.

125. Valstar A., Brown W., Almgren M. The Lysozyme-Sodium Dodecyl Sulfate System Studied by Dynamic and Static Light Scattering // Langmuir. 1999. Vol. 15, № 7. P. 2366-2374.

126. Stenstam A., Khan A., Wennerstrom H. The Lysozyme - Dodecyl Sulfate System . An Example of Protein - Surfactant Aggregation // Langmuir. 2001. Vol. 17, № 14. P. 7513-7520.

127. Fainerman V.B. et al. Thermodynamics, interfacial pressure isotherms and dilational rheology of mixed protein-surfactant adsorption layers // Adv. Colloid Interface Sci. Elsevier B.V., 2016. Vol. 233. P. 200-222.

128. Lu W.-J., Smirnov S.A., Levashov P.A. General characteristics of the influence of surfactants on the bacteriolytic activity of lysozyme based on the example of enzymatic lysis of Lactobacillus plantarum cells in the presence of Tween 21 and SDS // Biochem. Biophys. Res. Commun. Elsevier Ltd, 2021. Vol. 575. P. 73-77.

129. Chodankar S. et al. Structure of protein-surfactant complexes as studied by small-angle neutron scattering and dynamic light scattering // Phys. B Condens. Matter. 2007. Vol. 398, № 1. P. 112-117.

130. Кукушкина А.Н. et al. Взаимодействие бычьего сывороточного альбумина с катионными поверхностно-активными веществами по данным флуоресценции // Известия КГТУ. 2008. № 13. P. 59-62.

131. Харлов А.Е. et al. Закономерности взаимодействия бычьего сывороточного альбумина с дифильными молекулами // ВЕСТНИК ВСГУТУ. 2012. Vol. 38, № 3. P. 81-90.

132. Srivastava R., Alam M.S. Spectroscopic studies of the aggregation behavior of Human Serum Albumin and cetyltrimethylammonium bromide // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2020. Vol. 158. P. 394-400.

133. Saha D. et al. Interaction of a bovine serum albumin (BSA) protein with mixed

anionic-cationic surfactants and the resultant structure // Soft Matter. Royal Society of Chemistry, 2021. Vol. 17, № 29. P. 6972-6984.

134. Власова И.М., Журавлева В.В., Салецкий А.М. Денатурация бычьего сывороточного альбумина под действием цетилтриметиламмонийбромида по данным флуоресцентного анализа // Журнал физической химии. 2013. Vol. 87, № 6. P. 1037-1044.

135. Misra P.K., Dash U., Maharana S. Investigation of bovine serum albumin-surfactant aggregation and its physicochemical characteristics // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. Elsevier B.V., 2015. Vol. 483. P. 36-44.

136. Otzen D. Protein-surfactant interactions: A tale of many states // Biochim. Biophys. Acta - Proteins Proteomics. Elsevier B.V., 2011. Vol. 1814, № 5. P. 562-591.

137. Chauhan S., Jyoti J., Kumar G. Non-ionic surfactant interactions in aqueous gelatin solution: A physico-chemical investigation // J. Mol. Liq. Elsevier B.V., 2011. Vol. 159, № 3. P. 196-200.

138. De S., Girigoswami A., Das S. Fluorescence probing of albumin-surfactant interaction // J. Colloid Interface Sci. 2005. Vol. 285, № 2. P. 562-573.

139. Задымова Н.М., Ямполъская Г.П., Филатова Л.Ю. Взаимодействие бычьего сывороточного альбумина с неионогенным ПАВ Твин-80 в водных растворах: комплексообразование и ассоциация // Коллоидный Журнал. 2006. Vol. 68, № 2. P. 187-197.

140. Pugnaloni L.A. et al. Competitive adsorption of proteins and low-molecular-weight surfactants: computer simulation and microscopic imaging // Adv. Colloid Interface Sci. 2004. Vol. 107, № 1. P. 27-49.

141. Rodríguez Patino J.M., Rodríguez Niño M.R., Carrera Sánchez C. Physico-chemical properties of surfactant and protein films // Curr. Opin. Colloid Interface Sci. 2007. Vol. 12, № 4-5. P. 187-195.

142. Maldonado-Valderrama J., Patino J.M.R. Interfacial rheology of protein-surfactant mixtures // Current Opinion in Colloid and Interface Science. Elsevier Ltd, 2010. Vol. 15, № 4. P. 271-282.

143. R.J. G. et al. Competitive adsorption of lysozyme and C12E5 at air/liquid interface // Phys. Chem. Chem. Phys. 2000. Vol. 2. P. 5222-5229.

144. Mackie A.R. et al. Orogenic displacement of protein from the air/water interface by competitive adsorption // J. Colloid Interface Sci. 1999. Vol. 210, № 1. P. 157-166.

145. Miller R. et al. Adsorption characteristics of mixed monolayers of a globular protein and a non-ionic surfactant // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2000. Vol. 161, № 1. P. 151-157.

146. Miller R. et al. Surface tension of mixed non-ionic surfactant/protein solutions: Comparison of a simple theoretical model with experiments // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2004. Vol. 233, № 1-3. P. 39-42.

147. Alahverdjieva V.S. et al. Correlation between adsorption isotherms, thin liquid films and foam properties of protein/surfactant mixtures: Lysozyme/C10DMP0 and lysozyme/SDS // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2008. Vol. 323, № 1-3. P. 132-138.

148. Krägel J., Derkatch S.R., Miller R. Interfacial shear rheology of protein-surfactant layers // Advances in Colloid and Interface Science. Elsevier B.V., 2008. Vol. 144, № 1-2. P. 38-53.

149. Fang Q. et al. The study on interactions between levofloxacin and model proteins by using multi-spectroscopic and molecular docking methods // J. Biomol. Struct. Dyn. Taylor & Francis, 2018. Vol. 36, № 8. P. 2032-2044.

150. Ajmal M.R. et al. Biophysical insights into the interaction of hen egg white lysozyme with therapeutic dye clofazimine: modulation of activity and SDS induced aggregation of model protein // J. Biomol. Struct. Dyn. Taylor & Francis, 2017. Vol. 35, № 10. P. 2197-2210.

151. Bhat I.A. et al. Interaction of a novel twin-tailed oxy-diester functionalized surfactant with lysozyme: Spectroscopic and computational perspective // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2018. Vol. 109. P. 1006-1011.

152. Perez H. et al. Effects of Lysozyme on the Activity of Ionic of Fluoroquinolone Species // Molecules. 2018. Vol. 23, № 4. P. 741.

153. Bhat I.A. et al. Solution behaviour of lysozyme in the presence of novel biodegradable gemini surfactants // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2018. Vol. 117. P. 301-307.

154. Chen S. et al. Study of the noncovalent interactions between phenolic acid and lysozyme by cold spray ionization mass spectrometry (CSI-MS), multi-spectroscopic and molecular docking approaches // Talanta. Elsevier B.V., 2020. Vol. 211, № January. P. 120762.

155. Ansari S.S. et al. Exploring the intermolecular interactions and contrasting binding of flufenamic acid with hemoglobin and lysozyme: A biophysical and docking insight // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2018. Vol. 116. P. 1105-1118.

156. Jing M., Song W., Liu R. Binding of copper to lysozyme: Spectroscopic, isothermal titration calorimetry and molecular docking studies // Spectrochim. Acta - Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2016. Vol. 164. P. 103109.

157. Qu C. et al. Study on the interactions between ginsenosides and lysozyme under acidic condition by ESI-MS and molecular docking // Spectrochim. Acta - Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2011. Vol. 78, № 2. P. 676680.

158. Shanmugaraj K., Anandakumar S., Ilanchelian M. Probing the binding interaction of thionine with lysozyme: A spectroscopic and molecular docking investigation // Dye. Pigment. Elsevier Ltd, 2015. Vol. 112. P. 210-219.

159. Millan S. et al. Interaction of Lysozyme with Rhodamine B: A combined analysis of spectroscopic & molecular docking // J. Photochem. Photobiol. B Biol. Elsevier B.V., 2016. Vol. 162. P. 248-257.

160. Das S. et al. Binding of naringin and naringenin with hen egg white lysozyme: A spectroscopic investigation and molecular docking study // Spectrochim. Acta - Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2018. Vol. 192. P. 211221.

161. Das S., Rohman M.A., Singha Roy A. Exploring the non-covalent binding

behaviours of 7-hydroxyflavone and 3-hydroxyflavone with hen egg white lysozyme: Multi-spectroscopic and molecular docking perspectives // J. Photochem. Photobiol. B Biol. Elsevier, 2018. Vol. 180, №№ January. P. 25-38.

162. Khatun S., Riyazuddeen, Qais F.A. Characterization of the binding of triprolidine hydrochloride to hen egg white lysozyme by multi-spectroscopic and molecular docking techniques // J. Mol. Liq. Elsevier B.V., 2018. Vol. 269. P. 521-528.

163. Hemalatha K. et al. Importance of fluorine in 2,3-dihydroquinazolinone and its interaction study with lysozyme // J. Photochem. Photobiol. B Biol. Elsevier B.V., 2016. Vol. 162. P. 176-188.

164. Quan L. et al. Resurveying the Tris buffer solution: The specific interaction between tris(hydroxymethyl)aminomethane and lysozyme // Anal. Biochem. 2008. Vol. 378, № 2. P. 144-150.

165. Wang Q. et al. Binding properties of drospirenone with human serum albumin and lysozyme in vitro // Spectrochim. Acta - Part A Mol. Biomol. Spectrosc. Elsevier B.V., 2016. Vol. 153. P. 612-618.

166. Stevenson F.J. Humus chemistry : genesis, composition, reactions. Wiley, 1994. 496 p.

167. Muscolo A., Sidari M., Nardi S. Humic substance: Relationship between structure and activity. deeper information suggests univocal findings // J. Geochemical Explor. Elsevier B.V., 2013. Vol. 129. P. 57-63.

168. Yang W. et al. Transport of biochar colloids in saturated porous media in the presence of humic substances or proteins // Environ. Pollut. Elsevier Ltd, 2019. Vol. 246. P. 855-863.

169. Steinberg C.E.W. et al. Humic substances // Environ. Sci. Pollut. Res. 2008. Vol. 15, № 2. P. 128-135.

170. Janot N., Benedetti M.F., Reiller P.E. Colloidal a-Al 2 O 3, Europium(III) and Humic Substances Interactions: A Macroscopic and Spectroscopic Study // Environ. Sci. Technol. 2011. Vol. 45, № 8. P. 3224-3230.

171. Liu X. et al. Effects of natural organic matter on aggregation kinetics of boron

nanoparticles in monovalent and divalent electrolytes // J. Colloid Interface Sci. 2010. Vol. 348, № 1. P. 101-107.

172. Senesi N. Humic Substances as Natural Nanoparticles Ubiquitous in the Environment // Molecular Environmental Soil Science at the Interfaces in the Earth's Critical Zone. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg, 2010. P. 249-250.

173. Nardi S. et al. Physiological effects of humic substances on higher plants // Soil Biol. Biochem. 2002. Vol. 34, № 11. P. 1527-1536.

174. Halpern M. et al. The Use of Biostimulants for Enhancing Nutrient Uptake // Advances in Agronomy. Elsevier Inc., 2015. Vol. 130. P. 141-174.

175. Tschapek M., Scoppa C., Wasowski C. On the surface activity of humic acid // Zeitschrift für Pflanzenernährung und Bodenkd. 1978. Vol. 141, № 2. P. 203-207.

176. Tschapek M., Wasowski C. The surface activity of humic acid // Geochim. Cosmochim. Acta. 1976. Vol. 40, № 11. P. 1343-1345.

177. Tombacz E. Colloidal properties of humic acids and spontaneous changes of their colloidal state under variable solution conditions // Soil Sci. 1999. Vol. 164, № 11. P. 814-824.

178. Jones M.N., Bryan N.D. Colloidal properties of humic substances // Adv. Colloid Interface Sci. Elsevier, 1998. Vol. 78, № 1. P. 1-48.

179. Guetzloff T.F., Rice J.A. Does humic acid form a micelle? // Sci. Total Environ. 1994. Vol. 152, № 1. P. 31-35.

180. Tombacz E. et al. Particle aggregation in complex aquatic systems // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 1999. Vol. 151, № 1-2. P. 233-244.

181. Gaffney J.S., Marley N.A., Clark S.B. Humic and Fulvic Acids and Organic Colloidal Materials in the Environment // ACS Symp. Ser. 1996. Vol. 651. P. 2-16.

182. GHOSH K., SCHNITZER M. MACROMOLECULAR STRUCTURES OF HUMIC SUBSTANCES // Soil Sci. 1980. Vol. 129, № 5. P. 266-276.

183. Попов А.И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование.

Санкт-Петербург: Санкт-Петербургский университет, 2004. 249 p.

184. Essington M.E., Sparks D.L., Essington M.E. Environmental Soil Chemistry // Soil Science. 1997. Vol. 162, № 3. P. 229-231.

185. Chiou C.T., Schmedding D.W., Manes M. Partitioning of organic compounds in octanol-water systems // Environ. Sci. Technol. 1982. Vol. 16, № 1. P. 410.

186. Donovan S.F., Pescatore M.C. Method for measuring the logarithm of the octanol-water partition coefficient by using short octadecyl-poly(vinyl alcohol) high-performance liquid chromatography columns // J. Chromatogr. A. 2002. Vol. 952, № 1-2. P. 47-61.

187. Leo A., Hansch C., Elkins D. Partition coefficients and their uses // Chem. Rev. 1971. Vol. 71, № 6. P. 525-616.

188. Fu H. et al. Quantifying hydrophobicity of natural organic matter using partition coefficients in aqueous two-phase systems // Chemosphere. Elsevier Ltd, 2019. Vol. 218. P. 922-929.

189. Yu L.M.Y. et al. Poly(ethylene glycol) enhances the surface activity of a pulmonary surfactant // Colloids Surfaces B Biointerfaces. 2004. Vol. 36, № 3-4. P. 167-176.

190. Позднякова В.Ю. ПОЛУЧЕНИЕ МЕЧЕННЫХ ТРИТИЕМ ГУМИНОВЫХ ВЕЩЕСТВ И ИССЛЕДОВАНИЕ ИХ СВОЙСТВ. Московский государственный университет имени М.В.Ломоносова, 2006. 122 p.

191. Бадун Г.А. et al. Тритиевая метка - уникальный инструмент для изучения поведения гуминовых веществ в живых системах // ВЕСТН. МОСК. УНТА. СЕР. 2. ХИМИЯ. 2009. Vol. 50, № 5. P. 348-354.

192. Hsu P.-H., Hatcher P.G. New evidence for covalent coupling of peptides to humic acids based on 2D NMR spectroscopy: A means for preservation // Geochim. Cosmochim. Acta. 2005. Vol. 69, № 18. P. 4521-4533.

193. Zang X. et al. Encapsulation of protein in humic acid from a histosol as an explanation for the occurrence of organic nitrogen in soil and sediment // Org.

Geochem. 2000. Vol. 31, № 7-8. P. 679-695.

194. Tomaszewski J.E. et al. Protein Encapsulation by Humic Substances // Environ. Sci. Technol. American Chemical Society, 2011. Vol. 45, № 14. P. 6003-6010.

195. Tan W., Norde W., Koopal L.K. Interaction between lysozyme and humic acid in layer-by-layer assemblies: Effects of pH and ionic strength // J. Colloid Interface Sci. 2014. Vol. 430. P. 40-46.

196. Li Y. et al. Influence of Soil Humic and Fulvic Acid on the Activity and Stability of Lysozyme and Urease // Environ. Sci. Technol. 2013. Vol. 47, № 10. P. 5050-5056.

197. Tan W.F., Koopal L.K., Norde W. Interaction between Humic Acid and Lysozyme, Studied by Dynamic Light Scattering and Isothermal Titration Calorimetry // Environ. Sci. Technol. 2009. Vol. 43, № 3. P. 591-596.

198. Li Y. et al. Influence of lysozyme complexation with purified Aldrich humic acid on lysozyme activity // Eur. J. Soil Sci. 2012. Vol. 63, № 5. P. 550-557.

199. Tombacz E., Meleg E. A theoretical explanation of the aggregation of humic substances as a function of pH and electrolyte concentration // Org. Geochem. 1990. Vol. 15, № 4. P. 375-381.

200. Tombacz E., Rice J.A. Changes of colloidal state in aqueous systems of humic acids // Understanding Humic Substances. Elsevier, 1999. P. 69-78.

201. Giachin G. et al. The mechanisms of humic substances self-assembly with biological molecules: The case study of the prion protein // PLoS One / ed. Zanusso G. 2017. Vol. 12, № 11. P. 1-16.

202. Malcolm R.E., Vaughan D. Humic substances and phosphatase activities in plant tissues // Soil Biol. Biochem. 1979. Vol. 11, № 3. P. 253-259.

203. Sander M. et al. Adsorption of insecticidal Cry1Ab protein to humic substances. 1. Experimental approach and mechanistic aspects // Environ. Sci. Technol. American Chemical Society, 2012. Vol. 46, № 18. P. 9923-9931.

204. Guan Y.-F. et al. Interaction between humic acid and protein in membrane fouling process: A spectroscopic insight // Water Res. 2018. Vol. 145. P. 146182

205. Бадун Г.А. et al. ЖИДКОСТНАЯ СЦИНТИЛЛЯЦИОННАЯ СПЕКТРОМЕТРИЯ ТРИТИЯ В ИССЛЕДОВАНИИ АДСОРБЦИИ ВЕЩЕСТВ НА МЕЖФАЗНОЙ ГРАНИЦЕ ВОДА/НЕПОЛЯРНАЯ ЖИДКОСТЬ // ВЕСТН. МОСК. УН-ТА. СЕР. 2. ХИМИЯ. 2009. Vol. 50, № 5. P. 355-362.

206. Moore S., Spackman D.H., Stein W.H. Chromatography of Amino Acids on Sulfonated Polystyrene Resins. An Improved System // Anal. Chem. 1958. Vol. 30, № 7. P. 1185-1190.

207. Лукашина Е.В. et al. Использование проточного сцинтилляционного счетчика в сочетании с аминокислотным анализатором для измерения низких радиоактивностей меченных тритием аминокислот // Радиохимия. 2002. Vol. 44, № 1. P. 78-82.

208. Hong P., Koza S., Bouvier E.S.P. A review size-exclusion chromatography for the analysis of protein biotherapeutics and their aggregates // J. Liq. Chromatogr. Relat. Technol. 2012. Vol. 35, № 20. P. 2923-2950.

209. Adawy A., Groves M.R. The use of size exclusion chromatography to monitor protein self-assembly // Crystals. 2017. Vol. 7, № 11.

210. Chernysheva M.G., Soboleva O.A., Badun G.A. Competitive adsorption and interactions between lysozyme and ionic surfactants in an aqueous/organic liquid system // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. Elsevier B.V., 2012. Vol. 409. P. 130-137.

211. Maroufi B. et al. Structural studies of hen egg-white lysozyme dimer: Comparison with monomer // Biochim. Biophys. Acta - Proteins Proteomics. 2008. Vol. 1784, № 7-8. P. 1043-1049.

212. Chernysheva M.G., Badun G.A. In vitro study of proteins surface activity by tritium probe // J. Radioanal. Nucl. Chem. 2010. Vol. 286, № 3. P. 835-840.

213. Chernysheva M.G. et al. Lysozyme-surfactant adsorption at the aqueous-air and aqueous-organic liquid interfaces as studied by tritium probe // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2018. Vol. 537. P. 351-360.

214. Chernysheva M.G. et al. Peculiarities of alkylamidopropyldimethylbenzylammonium (Miramistin) in the relationship to lysozyme in comparison with quaternary ammonium surfactants: Coadsorption at the interfaces, enzymatic activity and molecular docking // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2021. Vol. 629. P. 127503.

215. Chauhan S. et al. Micellar and antimicrobial activities of ionic surfactants in aqueous solutions of synthesized tetraalkylammonium based ionic liquids // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. Elsevier, 2017. Vol. 535, №2 July. P. 232-241.

216. Frese C. et al. Adsorption kinetics of surfactant mixtures from micellar solutions as studied by maximum bubble pressure technique // J. Colloid Interface Sci. 2003. Vol. 267, № 2. P. 475-482.

217. Gilanyi T. et al. Adsorption of alkyl trimethylammonium bromides at the air/water interface // J. Colloid Interface Sci. 2008. Vol. 317, №№ 2. P. 395-401.

218. Tedeschi A.M. et al. Micellar aggregation of alkyltrimethylammonium bromide surfactants studied by electron paramagnetic resonance of an anionic nitroxide // Phys. Chem. Chem. Phys. 2003. Vol. 5, № 19. P. 4204-4209.

219. Lah J., Pohar C., Vesnaver G. Calorimetric Study of the Micellization of Alkylpyridinium and Alkyltrimethylammonium Bromides in Water // J. Phys. Chem. B. 2000. Vol. 104, № 11. P. 2522-2526.

220. Tseng H.W. et al. Effect of molecular weight of poly(acrylic acid) on the interaction of oppositely charged ionic surfactant-polyelectrolyte mixtures // J. Taiwan Inst. Chem. Eng. Elsevier B.V., 2018. Vol. 92. P. 50-57.

221. Evans D.F., Wightman P.J. Micelle formation above 100°C // J. Colloid Interface Sci. 1982. Vol. 86, № 2. P. 515-524.

222. Moulik S.P. et al. Micellar Properties of Cationic Surfactants in Pure and Mixed States // J. Phys. Chem. 1996. Vol. 100, № 2. P. 701-708.

223. Kralchevsky P.A., Danov K.D., Denkov N.D. Handbook of Surface and Colloid Chemistry // Handbook of Surface and Colloid Chemistry, Second Edition / ed. Birdi K.S. CRC Press, 2002. 137-344 p.

224. Wu Z. et al. Interaction and Properties of the Synthesized Anionic Surfactant with CTAB: An Experimental and Theoretical Investigation // ChemistrySelect. 2020. Vol. 5, № 5. P. 1663-1670.

225. Sachin K.M. et al. Self-assembly of sodium dodecylsulfate and dodecyltrimethylammonium bromide mixed surfactants with dyes in aqueous mixtures // R. Soc. Open Sci. 2019. Vol. 6, № 3.

226. Santos F.K.G. et al. Molecular behavior of ionic and nonionic surfactants in saline medium // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2009. Vol. 333, № 1-3. P. 156-162.

227. Ivanov I.B., Ananthapadmanabhan K.P., Lips A. Adsorption and structure of the adsorbed layer of ionic surfactants // Adv. Colloid Interface Sci. 2006. Vol. 123-126, № SPEC. ISS. P. 189-212.

228. Shah P., Jha N., Bhattarai A. Physicochemical Studies on the Interaction between Sodium Dodecyl Sulfate and Methylene Blue in Methanol-Water Mixed Solvent Media // J. Chem. / ed. Balasingam S.K. 2020. Vol. 2020. P. 1-13.

229. Царькова Л.А., Лазарева Е.В. Анализ динамического поверхностного натяжения растворов ПАВ для оптимизации смачивающей и солюбилизирующей способности моющих композиций // Сырье и упаковка. 2018. Vol. 202, № 4. P. 20-23.

230. Соболева О.А. et al. Распределение смесей додецилового эфира и бромидом додецилтриметиламмония в системе вода / октан // Журнал физической химии. 2012. Vol. 86, № 3. P. 460-465.

231. Demina T. et al. Relationship between the Structure of Amphiphilic Copolymers and Their Ability To Disturb Lipid Bilayers f // Biochemistry. 2005. Vol. 44, № 10. P. 4042-4054.

232. Patist A. et al. On the measurement of critical micelle concentrations of pure and technical-grade nonionic surfactants // J. Surfactants Deterg. 2000. Vol. 3, № 1. P. 53-58.

233. Hait S.K., Moulik S.P. Determination of critical micelle concentration (CMC)

of nonionic surfactants by donor-acceptor interaction with lodine and correlation of CMC with hydrophile-lipophile balance and other parameters of the surfactants // J. Surfactants Deterg. 2001. Vol. 4, № 3. P. 303-309.

234. Писаев И.В., Соболева О.А., Иванова Н.И. Адсорбция смесей Бридж-35 и бромида додецилпиридиния на границах раздела водный раствор/воздух и раствор/тефлон // Коллоидный журнал. 2009. Vol. 71, № 2. P. 256-261.

235. Lee E.S. et al. Binary mixing of micelles using Pluronics for a nano-sized drug delivery system // Colloids Surfaces B Biointerfaces. Elsevier B.V., 2011. Vol. 82, № 1. P. 190-195.

236. Kozlov M.Y. et al. Relationship between Pluronic Block Copolymer Structure, Critical Micellization Concentration and Partitioning Coefficients of Low Molecular Mass Solutes // Macromolecules. 2000. Vol. 33, № 9. P. 33053313.

237. Grozdova I.D. et al. Increase in the length of poly(ethylene oxide) blocks in amphiphilic copolymers facilitates their cellular uptake // J. Appl. Polym. Sci. 2017. Vol. 134, № 44. P. 45492.

238. Wanka G., Hoffmann H., Ulbricht W. The aggregation behavior of poly-(oxyethylene)-poly-(oxypropylene)-poly-(oxyethylene)-block-copolymers in aqueous solution // Colloid Polym. Sci. 1990. Vol. 268, № 2. P. 101-117.

239. Cardoso da Silva R. et al. Influence of Ionic Surfactants on the Aggregation of Poly(Ethylene Oxide)-Poly(Propylene Oxide)-Poly(Ethylene Oxide) Block Copolymers Studied by Differential Scanning and Isothermal Titration Calorimetry // J. Phys. Chem. B. 2002. Vol. 106, № 6. P. 1239-1246.

240. Budkina O.A. et al. Cytotoxicity of nonionic amphiphilic copolymers // Polym. Sci. Ser. A. 2012. Vol. 54, № 9. P. 707-717.

241. Zhirnov A. et al. Molecular Targets of the Hydrophobic Block of Pluronics in Cells: a Photo Affinity Labelling Approach // Pharm. Res. Pharmaceutical Research, 2018. Vol. 35, № 11. P. 205.

242. Torcello-Gomez A. et al. Block copolymers at interfaces: Interactions with

physiological media // Adv. Colloid Interface Sci. 2014. Vol. 206. P. 414-427.

243. Lopes J.R., Loh W. Investigation of self-assembly and micelle polarity for a wide range of ethylene oxide-propylene oxide-ethylene oxide block copolymers in water // Langmuir. 1998. Vol. 14, № 4. P. 750-756.

244. Chernysheva M.G. et al. Lysozyme-dalargin self-organization at the aqueous-air and liquid-liquid interfaces // Colloids Surfaces B Biointerfaces. Elsevier B.V., 2021. Vol. 202, № March. P. 111695.

245. Janek T. et al. Synergistic effect of hen egg white lysozyme and lysosomotropic surfactants on cell viability and membrane permeability // Colloids Surfaces B Biointerfaces. Elsevier, 2020. Vol. 185, № September 2019. P. 110598.

246. Chernysheva M.G., Badun G.A. Liquid Scintillation Spectrometry of Tritium in Studying Lysozyme Behavior in Aqueous/Organic Liquid Systems. The Influence of the Organic Phase // Langmuir. 2011. Vol. 27, № 6. P. 21882194.

247. Chernysheva M.G. et al. Do low surfactants concentrations change lysozyme colloid properties? // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2013. Vol. 436. P. 1121-1129.

248. Badun G.A., Soboleva O.A., Chernysheva M.G. Surfactant adsorption at the water-p-xylene interface as studied by the scintillation phase method // Mendeleev Commun. 2007. Vol. 17, № 6. P. 357-358.

249. Mehling T. Partition coefficients in mixed surfactant systems Application of multicomponent surfactant solutions in separation processes. Vom Promotionsausschuss der Technischen Universität Hamburg-Harburg zur Erlangung des akademischen Grades, 2013.

250. Phan C.M. et al. Micelle and Surface Tension of Double-Chain Cationic Surfactants // ACS Omega. 2018. Vol. 3, № 9. P. 10907-10911.

251. Chernysheva M.G., Badun G.A. Ionic surfactant adsorption at aqueous/organics interfaces determined by a scintillation phase method // Mendeleev Commun. 2011. Vol. 21, № 2. P. 99-100.

252. Israelachvili J. Self-Assembly in Two Dimensions: Surface Micelles and Domain Formation in Monolayers // Langmuir. 1994. Vol. 10, №2 10. P. 37743781.

253. Salamah A., Phan C.M., Pham H.G. Dynamic adsorption of cetyl trimethyl ammonium bromide at decane/water interface // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. Elsevier B.V., 2015. Vol. 484. P. 313-317.

254. Burlatsky S.F. et al. Surface tension model for surfactant solutions at the critical micelle concentration // J. Colloid Interface Sci. Elsevier Inc., 2013. Vol. 393, № 1. P. 151-160.

255. Postel C., Abillon O., Desbat B. Structure and denaturation of adsorbed lysozyme at the air-water interface // J. Colloid Interface Sci. 2003. Vol. 266, № 1. P. 74-81.

256. Kim H.J., Decker E.A., McClements D.J. Impact of protein surface denaturation on droplet flocculation in hexadecane oil-in-water emulsions stabilized by p-lactoglobulin // J. Agric. Food Chem. 2002. Vol. 50, № 24. P. 7131-7137.

257. Chauhan S. et al. Thermodynamics and micellization of cetyltrimethyl ammonium bromide in the presence of lysozyme // J. Mol. Liq. Elsevier B.V., 2013. Vol. 187. P. 1-6.

258. Skrabkova H.S. et al. Complex of lysozyme and Myramistin: formation and adsorption at the water-xylene interface // Mendeleev Commun. Elsevier, 2020. Vol. 30, № 5. P. 645-646.

259. Kaizu K., Alexandridis P. Effect of surfactant phase behavior on emulsification // J. Colloid Interface Sci. Elsevier Inc., 2016. Vol. 466. P. 138149.

260. Fainerman V.B., Miller R., Aksenenko E. V. Simple model for prediction of surface tension of mixed surfactant solutions // Adv. Colloid Interface Sci. 2002. Vol. 96, № 1-3. P. 339-359.

261. Gochev G.G. et al. p-lactoglobulin adsorption layers at thewater/air surface: 5. adsorption isotherm and equation of state revisited, impact of pH // Colloids

and Interfaces. 2021. Vol. 5, № 1.

262. Ovrutsky A.M., Prokhoda A.S., Rasshchupkyna M.S. Adsorption. The Gibbs Adsorption Equation // Computational Materials Science. Elsevier, 2014. P. 127-149.

263. Tadros T. Encyclopedia of Colloid and Interface Science // Encyclopedia of Colloid and Interface Science / ed. Tadros T. Berlin, Heidelberg: Springer Berlin Heidelberg, 2013.

264. Fainerman V.B. et al. Competitive adsorption from mixed nonionic surfactant/protein solutions // J. Colloid Interface Sci. 2004. Vol. 274, № 2. P. 496-501.

265. Fainerman V.B. et al. Adsorption from Mixed Ionic Surfactant/Protein Solutions: Analysis of Ion Binding // J. Phys. Chem. B. 2004. Vol. 108, № 43. P. 16780-16785.

266. Mitropoulos V., Mütze A., Fischer P. Mechanical properties of protein adsorption layers at the air/water and oil/water interface: A comparison in light of the thermodynamical stability of proteins // Adv. Colloid Interface Sci. 2014. Vol. 206. P. 195-206.

267. Day J.P.R., Pudney P.D.A., Bain C.D. Ellipsometric study of the displacement of milk proteins from the oil-water interface by the non-ionic surfactant C10E8 // Phys. Chem. Chem. Phys. 2010. Vol. 12, № 18. P. 4590.

268. Chernysheva M.G. et al. Competitive adsorption of lysozyme and non-ionic surfactants (Brij-35 and pluronic P123) from a mixed solution at water-air and water-xylene interfaces // Colloid Polym. Sci. 2018. Vol. 296, № 1. P. 223232.

269. Chernysheva M.G. et al. Self-organization of lysozyme—Ionic surfactant complexes at the aqueous-air interface as studied by tritium bombardment // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2017. Vol. 520. P. 1-8.

270. Chernysheva M.G. et al. Structural peculiarities of lysozyme - PLURONIC complexes at the aqueous-air and liquid-liquid interfaces and in the bulk of aqueous solution // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2020. Vol. 158. P.

721-731.

271. Diamond R. Real-space refinement of the structure of hen egg-white lysozyme // J. Mol. Biol. 1974. Vol. 82, № 3. P. 371-391.

272. Yano Y.F. et al. Hofmeister anion effects on protein adsorption at an air-water interface // Langmuir. 2016. Vol. 32, № 38. P. 9892-9898.

273. Samanta N. et al. Soft interaction and excluded volume effect compete as polyethylene glycols modulate enzyme activity // Int. J. Biol. Macromol. Elsevier B.V., 2018. Vol. 118. P. 209-215.

274. Тясто З.А. et al. Неравновесные процессы при взаимодействии горячих атомов трития с охлажденными твердыми мишенями. Ослабление потока атомов трития адсорбционными слоями бромидов алкилтриметиламмония // Радиохимия. 2007. Vol. 49, № 2. P. 163-165.

275. Duman O., Tunç S., Kanci Bozoglan B. Characterization of the Binding of Metoprolol Tartrate and Guaifenesin Drugs to Human Serum Albumin and Human Hemoglobin Proteins by Fluorescence and Circular Dichroism Spectroscopy // J. Fluoresc. 2013. Vol. 23, № 4. P. 659-669.

276. Meersman F. et al. Consistent picture of the reversible thermal unfolding of hen egg-white lysozyme from experiment and molecular dynamics // Biophys. J. 2010. Vol. 99, № 7. P. 2255-2263.

277. D'Auria S. et al. The Combined Use of Fluorescence Spectroscopy and X-Ray Crystallography Greatly Contributes to Elucidating Structure and Dynamics of Proteins // Rev. Fluoresc. 2005. 2007. P. 25-61.

278. BLAKE C.C.F. et al. Structure of Hen Egg-White Lysozyme: A Three-dimensional Fourier Synthesis at 2 Â Resolution // Nature. 1965. Vol. 206, № 4986. P. 757-761.

279. Nigam S., Durocher G. Spectral and Photophysical Studies of Inclusion Complexes of Some Neutral 3 H -Indoles and Their Cations and Anions with p-Cyclodextrin // J. Phys. Chem. 1996. Vol. 100, № 17. P. 7135-7142.

280. Jones M.N., Brass A. Interactions between Small Amphipathic Molecules and Proteins // Food Polymers, Gels and Colloids. Elsevier, 1991. P. 65-80.

281. Salis A. et al. Hofmeister series reversal for lysozyme by change in pH and salt concentration: Insights from electrophoretic mobility measurements // Phys. Chem. Chem. Phys. 2012. Vol. 14, № 13. P. 4343-4346.

282. Parray Z.A. et al. Effects of Ethylene Glycol on the Structure and Stability of Myoglobin Using Spectroscopic, Interaction, and in Silico Approaches: Monomer Is Different from Those of Its Polymers // ACS Omega. 2020. Vol. 5, № 23. P. 13840-13850.

283. Manchenko G.P. Handbook of detection of enzymes on electrophoretic gels, second edition // Handbook of Detection of Enzymes on Electrophoretic Gels, Second Edition. 2002.

284. Шнитко А.В. et al. Плюроники и бридж -35 уменьшают бактериолитическую активность лизоцима // ВЕСТН. МОСК. УН-ТА. СЕР. 2. ХИМИЯ. 2020. Vol. 61, № 2. P. 114-118.

285. Amiji M., Park K. Prevention of protein adsorption and platelet adhesion on surfaces by PEO/PPO/PEO triblock copolymers // Biomaterials. 1992. Vol. 13, № 10. P. 682-692.

286. Ritchie D.W., Kemp G.J.L. Protein docking using spherical polar Fourier correlations // Proteins Struct. Funct. Genet. 2000. Vol. 39, № 2. P. 178-194.

287. Blake C.C. et al. On the conformation of the hen egg-white lysozyme molecule // Proc. R. Soc. London. Ser. B. Biol. Sci. 1967. Vol. 167, № 1009. P. 365377.

288. Pincus M.R., Zimmerman S.S., Scheraga H.A. Structures of enzyme-substrate complexes of lysozyme // Proc. Natl. Acad. Sci. 1977. Vol. 74, № 7. P. 26292633.

289. Osserman E.F., Canfield R.E. Lysozyme / ed. Osserman E.F., Canfield R.E., Beychok S. Elsevier, 1974. 641 p.

290. Kujawinski E.B., Behn M.D. Automated Analysis of Electrospray Ionization Fourier Transform Ion Cyclotron Resonance Mass Spectra of Natural Organic Matter // Anal. Chem. 2006. Vol. 78, № 13. P. 4363-4373.

291. Hertkorn N. et al. Comparative Analysis of Partial Structures of a Peat Humic

and Fulvic Acid Using One- and Two-Dimensional Nuclear Magnetic Resonance Spectroscopy // J. Environ. Qual. 2002. Vol. 31, № 2. P. 375.

292. Tombacz E., Rice J.A.J.A. CHANGES OF COLLOIDAL STATE IN AQUEOUS SYSTEMS OF HUMIC ACIDS // Soil Sci. Elsevier, 1999. Vol. 164, № 11. P. 814-824.

293. Badun G.A. et al. A new technique for tritium labeling of humic substances // Radiochim. Acta. 2010. Vol. 98, № 3. P. 161-166.

294. Chernysheva M.G. et al. Behavior of humic substances in the liquid-liquid system directly measured using tritium label // Chemosphere. 2020. Vol. 238. P. 124646.

295. Chernysheva M.G., Badun G.A. HS-protein associates in the aqueous/oil system: Composition and colloidal properties // J. Soils Sediments. 2014.

296. Baalousha M., Motelica-Heino M., Coustumer P. Le. Conformation and size of humic substances: Effects of major cation concentration and type, pH, salinity, and residence time // Colloids Surfaces A Physicochem. Eng. Asp. 2006. Vol. 272, № 1-2. P. 48-55.

297. Palmer N.E., Von Wandruszka R. Dynamic light scattering measurements of particle size development in aqueous humic materials // Anal. Bioanal. Chem. 2001. Vol. 371, № 7. P. 951-954.

298. Ritchie J.D., Perdue E.M. Proton-binding study of standard and reference fulvic acids, humic acids, and natural organic matter // Geochim. Cosmochim. Acta. 2003. Vol. 67, № 1. P. 85-96.

299. Christl I., Kretzschmar R. Relating ion binding by fulvic and humic acids to chemical composition and molecular size. 1. Proton binding // Environ. Sci. Technol. 2001. Vol. 35, № 12. P. 2505-2511.

300. Snetkov P. et al. Hyaluronic Acid: The Influence of Molecular Weight on Structural, Physical, Physico-Chemical, and Degradable Properties of Biopolymer // Polymers (Basel). 2020. Vol. 12, № 8. P. 1800.

301. Gamble D.S. Na+ and K+ Binding by Fulvic Acid // Can. J. Chem. 1973. Vol. 51, № 19. P. 3217-3222.

302. Chilom G., Bruns A.S., Rice J.A. Aggregation of humic acid in solution: Contributions of different fractions // Org. Geochem. Elsevier Ltd, 2009. Vol. 40, № 4. P. 455-460.

303. Tschapek M., Wasowski C., Sánchez R.M.T. Humic acid as a colloidal surfactant // Plant Soil. 1981. Vol. 63, № 2. P. 261-271.

304. Böhme U., Scheler U. Effective charge of bovine serum albumin determined by electrophoresis NMR // Chem. Phys. Lett. 2007. Vol. 435, № 4-6. P. 342345.

305. Saipetch K. et al. Exploring the fluorescence quenching interaction of amino acids and protein with natural organic matter by a multi-spectroscopic method // Water Supply. 2021. P. 1-14.

306. Guez V. et al. Role of individual disulfide bonds in hen lysozyme early folding steps // Protein Sci. 2002. Vol. 11, № 5. P. 1136-1151.

307. Canfield R.E., Liu A.K. The Disulfide Bonds of Egg White Lysozyme (Muramidase) // J. Biol. Chem. Ä© 1965 ASBMB. Currently published by Elsevier Inc; originally published by American Society for Biochemistry and Molecular Biology., 1965. Vol. 240, № 5. P. 1997-2002.

308. Aiken G. Fluorescence and Dissolved Organic Matter // Aquatic Organic Matter Fluorescence / ed. Coble P. et al. Cambridge: Cambridge University Press, 2017. P. 35-74.

309. Lakowicz J.R. Quenching of Fluorescence // Principles of Fluorescence Spectroscopy. Boston, MA: Springer US, 1983. P. 257-301.

310. Inoue M. et al. Multiple role of hydrophobicity of tryptophan-108 in chicken lysozyme: structural stability, saccharide binding ability, and abnormal pKa of glutamic acid-35 // Biochemistry. 1992. Vol. 31, № 24. P. 5545-5553.