Молекулярная фармакология глюкокортикоидов на основе природных и синтетических структур наноразмеров тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат наук Малкин, Петр Александрович

• Малкин, Петр Александрович
• кандидат наук
• 2014

Оглавление диссертации кандидат наук Малкин, Петр Александрович

Раздел I. ВВЕДЕНИЕ.................................................................5

Раздел II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Глава 2.1. Молекулярная фармакология глюкокортикоидов: механизмы преобразования гормонального сигнала в биологический ответ клеток-

мишеней...................................................................................10

Глава 2.2. Методы модификации лекарственных средств на наноуровне..21

Глава 2.3. Эволюция топических глюкокортикоидов, применяемых в

дерматологии............................................................................35

Раздел III. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ..............43

Раздел IV. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ.

Глава 4.1. Идентификация и изучение свойств специфических «систем

узнавания», локализованных на плазматических мембранах фибробластов

кожи......................................................................................56

Глава 4.2. Определение молекулярных мишеней апоптотического

действия глюкокортикоидов на фибробласты кожи...........................62

Глава 4.3. Использование наноразмерного кортизол-полимерного комплекса для изучения механизмов регуляции функциональной

активности фибробластов кожи.....................................................69

Раздел V. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ РАБОТЫ.....................77

ВЫВОДЫ................................................................................91

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ............................................................92

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ 5'-Н - 5'-нуклеотидаза 11-ДОК -11-дезоксикортикостерон АДФ - аденозиндифосфат АКТГ - адренокортикотропный гормон АМФ - аденозин 5'-монофосфат АТ - антитела АТФ - аденозин 5'-трифосфат АД - аденилатциклаза АЦС - аденилатциклазная система БАВ - биологически активные вещества БГП - 1>бутилгидропероксид ГДФ - гуанозин 5'-дифосфат ГК - глюкокортикоиды ГКР - глюкокортикоидный рецептор ГМФ - гуанозинмонофосфат ГРК - гормон-рецепторный комплекс ГТФ - гуанозин 5'-трифосфат ГЦ - гуанилатциклаза ДАГ - диацилглицерин ДНК - дезоксирибонуклеиновая кислота ИЛ - интерлейкин ИМФ - инозинмонофосфат ИФ3 - 1,4,5-инозитолтрифосфат Кд - равновесная константа диссоциации КМ - кальмодулин ЛС - лекарственное средство мРНК - матричная РНК

НР-ГК - наноразмерный кортизол-полимерный комплекс

ПВП - поливинилпирролидон

ПГ - простагландин

ПК - протеинкиназа

ПМ - плазматическая мембрана

ПНФ - пуриннуклеозидфосфорилаза

ПФЗ - потенциалчувствительные флуоресцентные зонды

ПЭГК - полиэтиленгликоль

РНК - рибонуклеиновая кислота

СКК - стволовая кроветворная клетка

СТГ - соматотропный гормон

Т3 - трийодтиронин

ТМП - трансмембранный потенциал

ТФП- трифлуоперазин

ТХУ - трихлоруксусная кислота

ФИА - фенилизопропиладенозин

ФИФг - фосфатидилинозитолдифосфат ФД - фармакодинамика

ФК - фармакокинетика

фл - фемтолитры (10'15 литра)

Фл - фосфолипиды

ФлА2- фосфолипаза А2

Фл С - фосфолипаза С

ФМА - форболмеристатацетат

Ф н - неорганический фосфат

ФНОа - фактор некроза опухоли альфа

цАМФ - аденозин 3',5'-циклический монофосфат

цГМФ - гуанозин-3,5-циклический монофосфат

Афм - митохондриальный трансмембранный потенциал

Аф„ - плазматический трансмембранный потенциал

[Са ] цит - внутриклеточная концентрация ионов кальция

Втах - концентрация участков связывания лиганда

БМРХ - диметилпропаргилксантин

в} - ингибирующий ГТФ-связывающий белок

- стимулирующий ГТФ-связывающий белок

- трансдуцин

в-белки - ГТФ-связывающие белки ТОТ-у - фактор некроза опухоли-гамма Укл - объем клетки

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Молекулярная фармакология глюкокортикоидов на основе природных и синтетических структур наноразмеров»

Раздел I. ВВЕДЕНИЕ Актуальность исследования

В настоящее время топические стероиды активно применяются при лечении различных воспалительных и аллергических заболеваний кожи - атопического, контактного аллергического дерматитов, псориаза и других дерматозов. Использование гидрокортизона, первого препарата в данной группе, в дерматологической практике выявило недостаточную его эффективность при тяжелых и хронических процессах [Шимановский Н.Л., 2005; Gessi S. et al., 2010]. Поиск препаратов, имеющих более выраженный противовоспалительный эффект привел к созданию галогенизированных стероидов, вызывающих выраженные системные и местные побочные эффекты (синдром Кушинга, снижение иммунитета и скорости заживления, психозоподобные реакции и т.д.). Ранее считали, что противовоспалительный, противоаллергический, десенсибилизирующий, антитоксический и иммунодепрессивный эффекты стероидов реализуются через один рецептор и поэтому неотделимы друг от друга [Cidlowski JA. et al., 1998]. Однако использование современных инновационных технологий открывает новые возможности в этом направлении, в частности применение нанотехнологий для разделения фармакологических эффектов глюкокортикоидных препаратов [Labeur M. et al., 2010]. Заданное изменение свойств лекарственных веществ с помощью нанотехнологического подхода включает два основных способа [Шимановский Н.Л. и др., 2010]. Первый подход - синтез лекарственных соединений, имеющих наноразмеры на основе полимерной модификации лекарственных веществ (конъюгация молекулы лекарственного вещества и полимера) [Wang, Y.S., 2002]. Второй -включение лекарственного вещества в состав наноматериалов представленных мицеллами, дендромерами, сферами (фуллерены) [Boas U. et al., 2004]. Так, конъюгация лекарственного вещества с полиэтиленгликолем или пэгилирование (ПЭГК) увеличивает растворимость лекарственного вещества за счет собственной гидрофильности, увеличивает размер и массу частицы,

снижая, таким образом, интенсивность почечной экскреции. ПЭГК уменьшает доступность лекарственного вещества для протеолитических ферментов и антител. Примеры препаратов такого рода, одобренных FDA: ПЭГ-аспарагиназа (Oncaspar®), предназначенная для лечения острой лимфоцитарного лейкоза и других лимфоидных опухолевых заболеваний; ПЭГ-аденозина деаминаза (Adagen®), для лечения тяжелых комбинированных иммунодефицитов.

В настоящее время ведутся разработки по модификации различных лекарственных веществ с помощью дендримеров. Наиболее интенсивно разрабатываются модификации следующих классов лекарственных веществ: НПВС, противомикробные и противовирусные препараты, противоопухолевые средства (цитостатики, радионуклиды, фоточувствительные соединения), что объяснимо не только особенностями их физико-химических свойств, но и эпидемиологической значимостью соответствующих патологий. Одной из новых возможностей, связанной с получением синтетических структур глюкокортикоидов наноразмеров (наностероидов), является изучение молекулярных механизмов ранних, мембранотропных эффектов глюкокортикоидов на клетки-мишени. За последние годы появились серии публикаций, описывающих быстрые экстрагеномные мембранотропные эффекты стероидов [Stahn С. et al., 2008; Lowenberg М. et al., 2008; Revollo JR, Cidlowski JA, 2009]. К ним можно отнести инотропное и вазоконстрикторное действие альдостерона, быстрые нейрональные эффекты прогестерона, ранние эффекты витамина ДЗ на уровень кальция и цАМФ в клетках костной ткани. Получены также сведения об участии мембранных рецепторов эстрогенов и гестагенов в регуляции активности мембранносвязанных ферментов аденилатциклазы, протеинкиназы С, 5'-нуклеотидазы в норме и при опухолевом росте [Dindia L. et al., 2012]. Ранее было показано, что повысить тропность стероидных гормонов к плазматическим мембранам и модифицировать их генотропную активность можно с помощью комплексирования с полимерными

материалами, в частности с поливинилпирролидоном [Духанин A.C. и др., 2003]. Комплекс поливинилпирролидон- глюкокортикоид, не проникая в клетку, способен через мембранные структуры усиливать эффекты (пермиссивное действие) адреномиметиков (изадрина), и свободного глюкокортикоида на модели тимоцитов крыс - повышать уровень цАМФ и цитостатическую активность глюкокортикоидов. Создание комплексов, не проникающих в клетку, но потенцирующих, например, эффекты адреномиметиков и антиаллергических средств может позволить создать новые антиаллергические, противовоспалительные средства с избирательным типом действия.

Цель исследования

Целью данной работы было определение фармако-биохимических особенностей действия на фибробласты мономерных глюкортикоидов и наноразмерного кортизол-полимерного комплекса.

В качестве объекта исследования были выбраны фибробласты кожи - клетки-мишени фармакологического действия глюкокортикоидов, участвующие в воспалительных и аллергических реакциях при дерматозах. Задачи исследования

1) Разработка экспериментальной модели для изучения геномных и негеномных эффектов глюкокортикоидов с использованием культуры клеток фибробластов.

2) Определение фармако-биохимических маркеров начальных этапов апоптоза фибробластов, индуцированного глюкокортикоидами.

3) Сравнительное исследование геномного и негеномного действия глюкокортикоидов на фибробласты с помощью наноразмерного кортизол-полимерного комплекса.

4) Изучение молекулярных механизмов влияния наноразмерного кортизол-полимерного комплекса на обмен вторичных мессенджеров в культуре фибробластов кожи.

Научная новизна

Впервые показано, что ранние этапы апоптоза фибробластов, индуцированного глюкокортикоидами, включают изменение внутриклеточного гомеостаза, которые определяются уменьшением рН цитоплазмы и увеличением внутриклеточной концентрации ионов кальция. Молекулярными мишенями действия глюкокортикоидов являются Na/H-обменник и Са-каналы плазматических мембран фибробластов.

Впервые показано, что величина внутриклеточного рН может служить ранним дифференциальным маркером апоптотической и некротической форм гибели фибробластов.

Впервые установлено, что в терапевтической области концентраций кортизол подавляет кальциевый ответ фибробластов на ангиотензин II (All). В физиологическом диапазоне концентраций кортизол потенцирует действие АП, его эффект опосредован взаимодействием с мембранными рецепторами минералкортикоидов.

Практическая значимость

Предложен новый подход для изучения молекулярных механизмов ранних, мембранотропных эффектов глюкокортикоидов на клетки-мишени, основанный на использовании наноразмерных глюкокортикоидов.

Применение наноразмерного кортизол-полимерного комплекса позволяет избирательно регулировать функциональную активность фибробластов на уровне мембранной рецепторной системы, что открывает новые предпосылки дальнейшей эволюции топических глюкокортикоидов, применяемых в дерматологии, с помощью наноразмерного дизайна оригинальных молекулярных комплексов - разделение терапевтического и побочных эффектов гормонотерапии.

Положения выносимые на защиту

1. Ранние этапы апоптоза фибробластов, индуцированного глюкокортикоидами, включают изменение внутриклеточного гомеостаза, которые определяются

уменьшением рН цитоплазмы и увеличением внутриклеточной концентрации ионов кальция. Молекулярными мишенями действия глюкокортикоидов являются Na/H-обменник и Са-каналы плазматических мембран фибробластов.

2. Использование наноразмерного кортизол-полимерного комплекса позволяет разделить геномные и негеномные механизмы регуляции активности клетки-мишени.

3. Выявлены два типа экстрагеномного влияния глюкокортикоидов на фибробласты: 1) потенцирующее действие ГК на эффект All, реализуемое через минералкортикоидные рецепторы; 2) антагонистический мембранотропный глюкокортикоидов, выявляемый при использовании фармакологических концентраций стероидов.

Внедрение результатов исследования

Результаты настоящего исследования используются в учебной работе кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии им. академика П.Сепгеева РНИМУ им. Н.И.Пирогова г.Москвы. Апробация

Основные положения диссертации доложены на 7-ой международной научно-практической конференции «Достижения фундаментальных наук в решении актуальных проблем медицины», май 2010 г., Астрахань; на совместной научной конференции кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии и НИЛ молекулярной фармакологии РНИМУ им Н.И.Пирогова. Публикации

По теме диссертационной работы опубликовано 6 печатных работ, в том числе 3 работы в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России.

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__10

Раздел II. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 2.1. Молекулярная фармакология глюкокортикоидов: механизмы преобразования гормонального сигнала в биологический ответ клеток-мишеней.

Согласно классической «двухступенчатой» модели, рецепторный цикл состоит из нескольких этапов (рис. 1).

• Проникновение стероидов в клетку и связывание с внутриклеточными

(цитозольными или ядерными) рецепторами ГК, представляющими минорную

-12

фракцию протеинов (10 от общего количества клеточного белка) [Vig Е et al., 1994].

• Трансформация гормон-рецепторного комплекса в активную форму. Активация, возможно, осуществляется за счет фосфорилирования in vivo рецепторного белка с использованием АТФ в качестве субстрата [Tang Y, DeFranco DB, 1996].

• Взаимодействие комплекса "гормон-рецептор" с акцепторными сайтами в хроматине. После связывания освободившийся рецептор покидает ядро и возвращается в цитоплазму клетки [Голиков П.П., 1988, 2002]. Таким образом, биологическая роль рецепторов цитоплазмы сводится к захвату, первичной аккумуляции и доставке гормона в ядро.

Биохимические свойства внутриклеточных рецепторов глюкокортикоидов. Рецепторы глюкокортикоидов (РГ) были первыми рецепторами стероидных гормонов, обнаруженными в различных тканях [Beato М., 1989]; предполагают, что они имеются в подавляющем большинстве органов и тканей [Розен В.Б., 1985, 1990]. Доказано наличие специфических рецепторов к ГК в коже, легочной ткани, печени и других органах.

Внутриклеточные рецепторы глюкокортикоидных гормонов представляют собой ядерные факторы транскрипции, которые относятся к суперсемейству рецепторов стероидных гормонов/тиреоидных гормонов/ретиноидов/витамина Дз. Они состоят из одной полипептидной цепи (рис. 2), содержащей около 700 аминокислотных остатков, в их третичной

Рис. 1. Классическая «двухступенчатая» модель действия глюкокортикоидов, опосредованная внутриклеточными рецепторами [Rang Н.Р., Dale М.М., Ritter J.M., 2005].

CBS

Nucleus

DNA -

Cytoplasm

Receptor activation

Transcription

mRNA

Translation

Mediator proteins

структуре выделяют домены, которые связывают глюкокортикоидную молекулу, ДНК, участки, ответственные за регуляцию транскрипции и димеризацию рецепторов (табл.1). Точечные мутации в центральной области 4 домена приводят либо к полной, либо к значительной потере способности рецептора связывать гормон [Sato A et al., 1996]. В отсутствие гормона рецепторы представляют собой неактивные гетеротетрамерные комплексы, содержащие белки теплового шока (hsp90 и hsp70) и иммунофилины (рис. 3).

Рис. 2. Структурно-функциональная карта рецептора глюкокортикоидов

[Miesfeld,Bloom,1996],

GCS ♦

C*IT tmmbrtn*

iUpeeortln-1

e,-Adr«noc«p(or» Cytoplaim

ЫиеЬиш +QRE ......... „ORE " вигоМ-гвшрвмШ

targrt gin*»

+ГЧЭ: ГГТАЦАпппТГТТЦТ^где n - любой нуклеотид -ГЧЭ: АТУАЦппТпТГАТЦп (15 bp)

Рис. 3. Схема взаимодействия глюкокортикоид-рецепторного комплекса с гормончувствительными элементами генома клеток-мишеней [Weigel NL, Zhang Y„ 1998].

Одна из функций белков теплового шока заключается в способствовании перехода гормонсвязывающего домена рецептора в конформацию, характеризующуюся высоким сродством к стероиду. Другим важным свойством комплексообразование рецепторов ГК с белками теплового шока является предотвращение гидролиза рецепторной молекулы специфическими протеазами [Сергеев и соавт., 1998].

В интактных клетках в отсутствии лиганда указанные гетерокомлексы 9S глюкокортикоидных рецепторов связаны с микротубулярным аппаратом (колхицин - вещество, разрушающее микротрубочки, ингибирует ряд геномных эффектов глюкокортикоидов). Иммунофиллины, взаимодействующие с гетерокомплексами рецепторов стероидных гормонов всех типов, имеют молекулярную массу около 59 кДа и принимают участие в разворачивании молекулы рецептора.

Число генов в клетке, экспрессия которых напрямую регулируется ГК, варьирует между 10 и 100, но транскрипция многих других генов опосредованно регулируется РГ путём их взаимодействия с другими факторами транскрипции. После активации рецепторы ГК образуют димер, который связывается соответствующим гормончувствительным элементом (ГЧЭ) ДНК, находящимся в 5-промоторной зоне стероидо-чувствительных генов. Это взаимодействие изменяет порядок транскрипции, вызывая индукцию или репрессию данного гена [Beato, 1989]. ГЧЭ стимулирующего типа - это последовательность нуклеотидов, включающая 15 пар оснований ГГТАЦАпппТГТТЦТ (где п - любой нуклеотид). Репрессию транскрипции осуществляют негативные ГЧУ (нГЧЭ), которые имеют более изменчивую последовательность расположения нуклеотидов (АТЦАЦппТпТГАТЦп). К генам, экспрессия которых негативно регулируется ГК относятся гены цитокинов и их рецепторов, гены коллагеназы и стромелизина - т.е. БАВ, принимающих участие в воспалении и иммунных реакциях.

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__14

Помимо этих простых ГЧЭ существуют комбинированные ГЧЭ, которые имея другую последовательность нуклеотидов, являются акцепторами действия других ядерных факторов транскрипции, в частности фактора транскрипции АР-1, состоящего из продуктов онкогенов Fos и Jun [Rang et al., 2005]. AP-1 образует белок-белковый комплекс с активным рецептором ГК, предотвращая его взаимодействие с ДНК и соответственно снижая ответ на действие стероидов.

Ряд исследователей придерживаются мнения о гетерогенности внутриклеточных рецепторов ГК, основанное на различиях параметров связывания меченых лигандов. Так, на периферических лимфоцитах имеются рецепторы с Kdi - 0,088±0,025 нМ и K<i2 - 4,2+0,6 нМ, причем В-лимфоциты имеют рецепторы с Kdi в 3 раза больше, чем Т-лимфоциты. Митогенная и антигенная стимуляция приводит к увеличению в несколько раз рецепторов с Kdi [Reichardt НМ et al., 1998].

Некоторые авторы считают, что не существует подтипов рецепторов ГК [Shahidi Н et al., 1999], хотя одна изоформа рецептора (ГР/?), не связывающая гормон и являющаяся транскрипционно неактивной, была описана [Lu NZ, Cidlowski JA, 2006]. ГР/? был обнаружен в человеческих тканях, но функциональная его значимость неясна.

Участие системы вторичных мессендэ/серов в механизме действия глюкокортикоидов.

Данные последних лет значительно расширили представления о молекулярных механизмах действия ГК на клеточные функции [Nordeen S.K. et al., 1994]. Допускается возможность реализации отдельных ранних эффектов ГК через посредство вторичных мессенджеров - внутриклеточной системы сравнительно небольших молекул и ионов, с помощью которой осуществляется передача и реализация внеклеточного сигнала в клетке-мишени. В настоящее время выделяют следующие вторичные мессенджеры: цАМФ, продукты гидролиза фосфотидилинозитола, ионы кальция, цГМФ.

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__15

цАМФ. За счет изменения уровня этого мессенджера происходит регулирование фосфорилирования белков клетки. Синтез цАМФ из АТФ катализирует аденилатциклаза (АЦ) - интегральный белок цитоплазматических мембран, активный центр которого расположен на внутренней стороне мембраны. Мембранный рецептор и фермент сопрягаются через ГТФ-связывающий белок (G-белок). Для перехода АЦ в активное состояние необходимо взаимодействие ее каталитической субьединицы с G-белком. Субстратом для аденилатциклазы является Mg-АТФ или Mn-АТФ, свободный АТФ является ее конкурентным ингибитором. Образовавшийся цАМФ через цАМФзависимую протеинкиназу осуществляет фосфорилирование любого белкового субстрата. Гидролиз цАМФ осуществляется фосфодиэстеразами, которые делятся на два типа, в зависимости от сродства к цАМФ. цАМФ может регулировать освобождение кальция из митохондриальной фракции и/или участвовать в освобождении кальмодулина из мембранных структур за счет фосфорилирования мембранных белков.

Возможное участие цАМФ в проведении гормонального сигнала ГК основывается на том, что активация внутриклеточных гормон-рецепторных комплексов, предваряющая их транслокацию в ядро, является цАМФ зависимым процессом [Perez-Martinez L. et al., 1998]. Поэтому колебание концентрации цАМФ может приводить к изменению внутриклеточной рецепции ГК. В этом случае мембранные рецепторы, передающие внешний сигнал на аденилатциклазу, выполняют модулирующую роль: они подготавливают клетку к "восприятию" гормонального сигнала [Christ М. et al., 1999].

Стероидные гормоны потенцируют опосредованное активаторами аденилатциклазы повышение уровня цАМФ в лимфоцитах [Hirano Т. et al., 1998; Shahidi Н. et al., 1999; Dosiou С. et al., 2008]. Этот механизм реализации гормонального влияния не чувствителен к действию актиномицина D и циклогексимида. В ряде работ указывается на снижение активности фосфодиэстеразы цАМФ в присутствии стероидов [Buttgereit F, Scheffold А.,

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__16

2002]. Однако, как правило, рассматриваемые эффекты проявляются при концентрации гормонов в среде 1-10 мкмоль/л. Поэтому, мало вероятно, что в физиологических условиях увеличение содержания цАМФ при действии ГК связано с их ингибирующим влиянием на активность фосфодиэстеразы цАМФ. Возможно, влияние стероидов на аденилатциклазную систему реализуется на уровне цАМФ-зависимых протеинкиназ, функция которых регулируется цАМФ и стероидами [Gekle М. et al., 2014].

Полифосфоинозитидная система. Стимуляция данной системы запускает два каскада реакций, приводящих к увеличению концентрации внутриклеточного кальция и активации протеинкиназы С (посредством ее осуществляется дальнейшее фосфорилирование мембранных белков) [Berridge, 1993]. Фактически все клетки млекопитающихся содержат в плазматической мембране малые количества фосфоинозитида (PI), фосфоинозитидфосфата (PIP) и фосфоинозитиддифосфата (PIP2) [Gordeladze et al., 1994]. Их присутствие поддерживаются в равновесии двумя "холостыми циклами", катализируемыми киназами и фосфолеоноэстеразами. Внешний сигнал от различных веществ, в том числе и гормонов, после взаимодействия с мембранными рецепторами через G-белок активирует фосфолипазу С, которая гидролизует Р1Р2 с образованием диацилглицерола и IP3. Инозитолтрифосфат осуществляет освобождение Ca из внутриклеточных депо (митохондрии, везикулы ЭПР). Диацилглицерол через протеинкиназу С модулирует потенциало- и рецепторозависимые кальциевые каналы [Авдонин, Ткачук, 1996]. Показано, что стероидные гормоны по-разному влияют на активность фосфолипазы С и, следовательно, на гидролиз Р1Р2. Эстрогены, в частности эстрадиол, витамин Д3 вызывают усиление гидролиза PIP2 [Pedram A, Razandi М, Levin ER., 2006; Toran-Allerand CD, Singh M, Setalo GJr, 1999]; ГК (дексаметазон, гидрокортизол) блокируют атиген-индуцированный распад PIP2 в базофилах и лимфоцитах, оказывая тем самым антипролиферативное действие [McEwen, 1991; Solito Е. et al, 2003].

______ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__17

Ионы кальция. Кальций является одним из универсальных посредников в реализации внешнего сигнала, причем он филогенетически более древний, чем гормоны и циклические нуклеотиды. Установлено, что увеличение цитоплазматической концентрации ионов кальция (Са ) является событием, необходимым для активации ряда физиологических процессов внутри клетки [Ткачук, 1983]. В покоящейся клетке концентрация свободного Са2+ поддерживается на довольно низком уровне, в лимфоцитах человека она составляет в среднем 100 нМ, концентрация же Са в межклеточной среде на 4 порядка выше. Такое низкое содержание кальция, по-видимому, необходимо клетке для реализации различного вида сигналов, когда его концентрация возрастает почти трехкратно [Орлов, Лабас, 1989]. Источники повышения концентрации Са2+ цитоплазмы могут находится во внешней среде, внутриклеточных органеллах и в самой цитоплазме клетки. Са2+ , присутствующий в цитоплазме, связан с фосфолипидами и белками, однако его количество незначительно. В выбросе кальция из внутриклеточных депо возможно участие кальциевых каналов, во многом напоминающих таковые на плазматической мембране, однако механизм их действия до сих пор

с

недостаточно изучен. Вход внеклеточного кальция осуществляется за счет небольшого постоянного неспецифического тока, основанного на разности концентраций внутри и вне клетки. Благодаря этому возникает направленный внутрь клетки электрохимический градиент кальция. Поток ионов имеет низкий температурный коэффициент и не чувствителен к метаболическим ингибиторам, что говорит о его независимости от источников энергии. Для входа кальция в клетку существуют также специфические потенциало- и рецепторо-зависимые каналы. Выход иона осуществляется за счет работы Са-АТФазы, участвующей в активном транспорте иона против градиента концентрации, т.е. это - энергозависимый процесс. Са-АТФазные насосы поддерживают постоянное низкое содержание кальция, что обеспечивает быстрое прекращение ответа на биологический стимул и предупреждает повреждающее действие внутриклеточного кальция при его избытке. Таким

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__18

образом, основным механизмом входа Са2+ в клетку является, по-видимому, облегченная диффузия, а выход осуществляется путем активного транспорта.

На роль ионов кальция в реализации гормонального влияния ГК указывают данные о том, что в случае отсутствия в среде Са2+ катаболическое

действие ГК на лимфоидную ткань (ингибирование синтеза РНК и белка) не

2+

проявляется. В тоже время показано, что ГК подавляют транспорт Са внутрь клеток-мишеней и уменьшают внутриклеточное содержание кальция пропорционально биологической активности стероидов и их действующей концентрации [Doolan С.М., O'Sullivan G.C., Harvey B.J., 1998]. Описанные эффекты могут объясняться способностью стероидных гормонов стимулировать обмен фосфоинозитидов плазматической мембраны, что вызывает мобилизацию кальция из внутриклеточных депо и внеклеточной жидкости. Подтверждением этого предположения служат исследования, в которых показано, что стероидные гормоны изменяют обмен мембранных фосфолипидов [Сергеев П.В. и соавт., 1996, Baran D.T. et al., 2004]. Эти и целый ряд других данных последних лет подтверждают целесообразность рассмотрения действия ГК на систему вторичных медиаторов в качестве возможного пути реализации биологической активности стероидов в клетках-мишенях.

Экстрагеномные эффектыглюкокортикондов. В последние годы установлено, что гормонрецепторные комплексы (в виде мономера) непосредственно и через молекулы СВР взаимодействуют с факторами транскрипции (активирующий протеин 1 (API), NF-kB и др.), которые активируются под влиянием медиаторов воспаления, оксидантов и вирусов [Zeng J et al., 2013]. Итогом этого является торможение транскрипции "воспалительных" генов (трансрепрессия) (схема 1). Последнее, в свою очередь, уменьшает образование в клетках следующих белков и пептидов [Шимановский Н.Л., 2005; Schacke Н et al., 2004]:

провоспалительных цитокинов (интерлейкинов 1—6, 9, 11—13, 16—18,

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__19

фактора некроза опухоли а, гранулоцитарно-макрофагального колониестимулиующего фактора);

- хемокинов (интерлейкина 8, эотаксина, КАЫТЕБ, моноцитарного хемотаксического белка_4> воспалительного белка макрофагов-1а), привлекающих клетки в зону воспаления;

- индуцибельной циклооксигеназы (ЦО-2), участвующей в образовании простагландинов;

- индуцибельной фосфолипазы А2, катализирующей синтез арахидоновой кислоты;

- молекул адгезии (1САМ-1, УСАМ-1) лейкоцитов;

- рецепторов субстанции Р (МК1-рецепторов).

ГМОКОКОРТИКОИД 1

Цитоплазматическнй рецептор

Геномный эффект (транеактивацня)

Внсгеномньш эффект (трансрепрессия)

Связывание с ДНК, ацеталировшме гистонов

Взаимодействие с факторами транскрипции (АР-1, NF-kB и др.) Деацетилмрование гистонов

Активизация стгтеза противовоспалительных белкой

Побочные эффекты

{метаболические, эндокринные и Ali )

Снижение синтеза 'воспалительных" белков (цнтокнпов, 11)ерментов, адгезивных молекул ц д]>.)

АР-1 — активирующий протеин-1, NF-kB — ngcpiujй <}хшпоркВ Рисунок. Механизм действия глюкокоргикоидоп

Схема 1. Эффекты глюкокортикоидов, опосредованные цитозольными рецепторами.

Сравнительно недавно было показано, что одним из молекулярных механизмов подавления стероидами экспрессии "воспалительных" генов является деацетилирование гистонов хромосом, приводящее к уплотнению структуры хроматина и ограничению доступа к ДНК факторов транскрипции [Tang Y, DeFranco DB., 1996; Reichardt HM et al., 1998]

_ОБЗОР ЛИТЕРА ТУРЫ__20

Также помимо непосредственного влияния на процесс транскрипции генов, топические глюкокортикоиды, по-видимому, могут оказывать влияние на стабильность матричной РЕК, уменьшая ее стабильность на посттранскрипционном уровне, и на продукцию воспалительных белков в рибосомах в процессе трансляции. Экспериментально подтверждено, что это является одним из механизмов снижения синтеза ИЛ-1,6, циклоксигеназы, гранулоцитально-макрофагального колониестимулирующего фактора, фактора некроза опухоли [Тгус АВ а1., 2006].

Описанный выше механизм действия глюкокортикоидов лежит в основе их действия на различные клетки (табл.2).

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Малкин, Петр Александрович, 2014 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Авдонин П.В., Ткачук В А., Рецепторы и внутриклеточный кальций.-М.: Наука, 1994.

2. Базисная и клиническая фармакология / Пер.с англ. Под ред. Бертрама Г.Катцунга. -М.: Бином. 1998.-Т. 1,2.

3. Владимиров 10.А. Дизрегуляция проницаемости мембран митохондрий, некроз и апоптоз // Дизрегуляционная патология. М., 2002. -С. 127-157.

4. Голиков П.П. Рецепторные механизмы глюкокортикоидного эффекта. М., "Медицина", 1988. 286с.

5. Голиков П.П. Рецепторные механизмы антиглюкокортикоидного эффекта при неотложных состояниях. М.: Медицина, 2002. - 312 С.

6. Гублер Е.В., Генкин A.A. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях. Л.- 1973.

7. Добрецов Г.Е. Флуоресцентные зонды в исследовании клеток, мембран, и липопротеинов. М.- Наука.-1989.

8. Духанин A.C., Сергеев П.В., Патрашев Д.В. Молекулярные механизмы реализации начальных этапов глюкокортикоид-индуцированного апоптоза // Иммунология. 1998. №1. С.18-21.

9. Лига А.Б., Ухина Т.В., Ржезников В.М., Шимановский Н.Л. Исследование пролиферативной активности фибробластов кожи крыс при воздействии глюкокортикоидов и гестагенов // Экспер. и клин, фармакол. 2008. Т.71. №5. С.44-47.

Ю.Лушников Е.Ф., Загребин В.М. Апоптоз клеток: морфология, биологическая роль, механизмы развития.//Архив анатомии, гистологии и эмбриологии.- 1990.- 99(12).- С. 68-77.

11.Никитин В.Б. Поиск новых противовоспалительных и антиаллергических препаратов в ряду производных 17(а-гидроперокси-16р-метилпрегнанов //Автореф.канд.дисс., М., 1991.

12.0мельяновский В.В. Состояние пуриновой рецепции у больных бронхиальной астмой и влияние различных методов лечения на рецепторный статус//Автореф. дис. канд. мед. наук. Москва.- 1992.- с.24.

13.Орлов С.Н., Лабас Ю.А. // Биологические мембраны. - 1989. - 6(9). - с. 901938.

М.Палеев Я. Р., Ильченко В.А., Голиков П.П. и др. Индивидуальная чувствительность больных к глюкокортикоидам и гормонрезистентность при бронхиальной астме // Тер.арх., 1994, N12, с.56-59.

15.Патрашев Д.В., Духанин A.C., Огурцов С.И. Внутриклеточный pH на ранних стадиях апоптоза и некроза тимоцитов // Бюл. экспер. биол. и мед. 1999. №10. С.387-390.

16.Попова НЮ, Духанин АС, Шимановский HJI. Негеномный эффект андрогенов на содержание ионов кальция в лимфоцитах человека. // Бюл. экспер. биол. и мед. 2007; т. 142, № 5: 542-544

17.Розен В.Б. Циторецепторы в молекулярных механизмах действия гормонов. //Пробл.эндокринол., 1985, N5, с.21-26.

18.Самойликов РВ, Семейкин АВ, Духанин АС, Шимановский HJI. Геномные и негеномные механизмы антиглюкокортикоидного эффекта гестагенов. //Экспер. фармакология и терапия. 2006; №4: 43-46.

19.Сергеев П.В., Шимановский H.JL, Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. М.: 1998.- с 400.

20.Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А., Ханкоева А.И., Духанин А.С. Исследование влияния бефола на кальциевый обмен в кардиомиоцитах с помощью флуоресцентного зонда Fura-2 // Бюл. экспер. биол. и мед. 1996. №3. С.288-291.

21.Сергеев П.В., Галенко-Ярошевский П.А., Шимановский H.JI. Очерки биохимической фармакологии.- М.: РЦ"Фармединфо", 1996.- с.384.

22.Сергеев П.В., Духанин А.С., Шимановский H.JI. Плазматическая мембрана клетки-мишени и стероидные гормоны: начало спора или его завершение. //Бюл.эксперим.биол. и мед. 1995. -Т. 120. -№10. - С. 342- 348.

23.Сергеев П.В., Шимановский H.JI, Петров В.И. Рецепторы физиологически активных веществ. М.- Волгоград, 1999. - 638 С.

24.Сергеев П.В., Шимановский Н.Л. Рецепторы. М., 1987. - 400 С.

25.Чучалин А.Г., Шмушкевич Б.И., Мавраев Д.Э. Кортикозависимая форма бронхиальной астмы (вопросы клиники, патоге- неза и лечения) // Тер.арх., 1984, N3, с.142-150.

26.Шимановский Н.Л. Резистентность к глюкокортикоидам: механизмы и клиническое значение // Фарматека. 2005. №3. С.7-12.

27.Шимановский Н.Л., Епинетов М.А., Мельников М.Я. Молекулярная и нанофармакология. М.: Физматлит, 2010. - 624 с.

28.Ярилин А.А. Апоптоз и его место в иммунных процессах. //Иммунология.-1996.-6.- С. 10-23.

29.Abdalla, S., Lother, Н., Abdel-tawab, А. М. and Quitterer, U. The angiotensin II AT2 receptor is an ATI receptor antagonist // J Biol Chem. 2001.-V.276.-№.43 .-P.39721 -39726

30.Amsterdam A., Sasson R. The anti-inflammatory action of glucocorticoids is mediated by cell type specific regulation of apoptosis // Mol Cell Endocrinol. 2002. V. 189. P. 1-9.

31.Amsterdam A., Tajima K., Sasson R. Cell-specific regulation of apoptosis by glucocorticoids: implication to their anti-inflammatory action // Biochem Pharmacol. 2002. V.64. P.843-850.

32.Ashwell JD, King LB, Vacchio MS. Cross-talk between the T cell antigen receptor and the glucocorticoid receptor regulates thymocyte development. // Stem Cells 1996 Sep; 14(5): 490-500.

33.Ayroldi E, Cannarile L, Migliorati G, Nocentini G, Delfino DV, Riccardi C. Mechanisms of the anti-inflammatory effects of glucocorticoids: genomic and nongenomic interference with MAPK signaling pathways.// FASEB J. 2012 Dec;26(12):4805-20.

34.Bartholome B, Spies CM, Gaber T, Schuchmann S, Berki T, Kunkel D, et al. Membrane glucocorticoid receptors (mGCR) are expressed in normal human peripheral blood mononuclear cellsand up-regulated after in vitro stimulation and in patients with rheumatoid arthritis. FASEB J 2004;18:70-80.

35.Bartis D, Boldizsar F, Szabo M, Palinkas L, Nemeth P, Berki T. Dexamethasone induces rapid tyrosine-phosphorylation of ZAP-70 in Jurkat cells. J Steroid Biochem Mol Biol 2006;98:147-54.

36.Baschant U., Tuckermann J. The role of the glucocorticoid receptor in inflammation and immunity // J Steroid Biochem Mol Biol. 2010. V.120. P.69-75.

37.BauIieu EE. Neurosteroids: A new function in the brain. // Biol Cell 1991; 71:310.

38.Beato M. Gene regulation by steroid hormones. // Cell 1989; 56:335-344.

39.Bedner E., Li X., Gorczyca W., Melamed M.R., Darzynkiewicz Z. Analysis of apoptosis by laser scanning cytometry .//Cytometry. - 1999. - 35(3). - P.181-195

40.Benten WP, Lieberherr M, Giese G, Wrehike C, Stamm O, Sekeris CE, Mossmann H, Wunderlich P. Functional testosterone receptors in plasma membranes of T cells. // FASEB J 1999;13:123-133.

41.Boas U., Heegaard P.M.H. Dendrimers in drug research. // Chem. Soc. Rev. -2004. - Vol.33, P.43-63

42.Boldizsar F, Talaber G, Szabo M, Bartis D, Palinkas L, Nemeth P, et al. Emerging pathways of non-genomic glucocorticoid (GC) signalling in T cells. Immunobiology 2010; 215:521-6.

43.Boonyaratnakonkit V., McGowan E., Sherman L. et al. The Role of Extranuclear Signaling Actions of Progesterone Receptor in Mediating Progesterone Regulation of Gene Expression and the Cell Cycle. // Mol Endocrinol, 2007; Vol.21, P.359-375.

44.Bowen I.D., Bowen S.M. Programmed cell death in tumors and tissues. London.- 1990.-P. 4-45.

45.Boyan BD, Posner GH, Greising DM, White MC, Sylvia VL, Dean DD, Schwartz Z. Hybrid structural analogues of l,26-(OH)2D3 regulate chondrocyte proliferation and proteoglycan production as well aa protein kinase C through a

nongenomic pathway. // J Cell Biochem 1997;66:457-470.

46.Brilla CG, Maisch B, Zhou G, Weber KT. Hormonal regulation of cardiac fibroblast function. //Eur Heart J. 1995.Vol.16, Suppl C:45-50.

47.Buttgereit F, Burmester GR, Lipworth BJ. Optimised glucocorticoid therapy: the sharpening of an old spear. Lancet 2005;365: 801-3.

48.Buttgereit F, Scheffold A. Rapid glucocorticoid effects on immune cells. Steroids 2002;67:529-34.

49.Chang A.S., Chang S.M. Nongenomic steroidal modulation of high-affinity serotonin transport. //Biochim. Biophys. Acta. - 1999. - 1417(1). -P.157-166

50.Christ M., Gunther A., Heck M., Schmidt B.M., Falkenstein E., Wehling M. Aldosterone, not estradiol, is the physiological agonist for rapid increases in cAMP in vascular smooth muscle cells. // Circulation. - 1999. - 99(11). - P. 14851491

51.Croxtall JD, Choudhury Q, Flower RJ. Glucocorticoids act within minutes to inhibit recruitment of signalling factors to activated EGF receptors through a receptor-dependent, transcription-independent mechanism. Br J Pharmacol 2000;130:289-98.

52.De Giusti VC, Nolly MB, Yeves AM, Caldiz CI, Villa-Abrille MC, Chiappe de Cingolani GE, Ennis IL, Cingolani HE, Aiello EA. Aldosterone stimulates the cardiac Na(+)/H(+) exchanger via transactivation of the epidermal growth factor receptor. // Hypertension. 2011 Nov;58(5):912-9.

53.Dindia L, Murray J, Faught E, Davis TL, Leonenko Z, Vijayan MM. Novel nongenomic signaling by glucocorticoid may involve changes to liver membrane order in rainbow trout.// PLoS One. 2012;7(10):e46859 - 62.

54.Doolan C.M., O'Sullivan G.C., Harvey B.J. Rapid effects of corticosteroids on cytosolic protein kinase C and intracellular calcium concentration in human distal colon.//Mol. Cell. Endocrinol. - 1998. - 138(1-2). -P.71-79

55.Dopp E., Vollmer G., Hahnel C., Grevesmuhl Y., Schiffmann D. Modulation of the intracellular calcium level in mammalian cells caused by 17beta-estradiol, different phytoestrogens and the anti-estrogen ICI 182780.//J. Steroid Biochem. Mol. Biol. - 1999. - 68(1-2). - P.57-64

56.Dosiou, C., Hamilton, A. E., Pang, Y., Overgaard, M. T., Tulac, S., Dong, J., Thomas, P., Giudice, L. C. Expression of membrane progesterone receptors on human T lymphocytes and Jurkat cells and activation of G-proteins by progesterone //Endocrinology 2008; 196 (1): 67-77

57.Engmann L, Losel R, Wehling M, Peluso JJ. Progesterone regulation of human granulosa/luteal cell viability by an RU486-independent mechanism. // J Clin Endocrinol Meta, 2006; Vol.9l,P.4962-4968.

58.Falkenstein E, Norman AW, Wehling M. Mannheim classification of nongenomically initiated (rapid) steroid action(s). // J Clin Endocrinol Metab, 2000, 85, 2072-2075.

59.Frye CA, Vongher JM. Progesterone has rapid and membrane effects in the facilitation of female mouse sexual behavior. // Brain Res 1999; 815: 259-269.

60.Funder JW. Mineralocorticoids, glucocorticoids, receptors and response elements. //Science 1993;259:1132-1133.

61.Gekle M, Bretschneider M, Meinel S, Ruhs S, Grossmann C. Rapid mineralocorticoid receptor trafficking. // Steroids. 2014 Mar;81:103-8.

62.Gekle M, GolenhofenN, Oberleithner H, Silbernagi S. Rapid activation of Na+/FT exchange by aldosterone in renal epithelial cells requires Ca2+ and stimulation of a plasma membrane proton conductance. // Proc Natl Acad Sci USA 1996; 93:10500-10504.

63.Gessi S, Merighi S, Borea PA Glucocorticoid's pharmacology: past, present and future.//CurrPharmDes. 2010; 16(32):3540-53.

64.Grinstein S., Woodside M., Goss G.G., Kapus A. Osmotic activation of the Na+/H+ antiporter during volume regulation. // Biochem.Soc.Trans.- 1994.-22(2).- P.512-516.

65.Hafizi S, Wharton J, Morgan K, Allen SP et al. Expression of functional angiotensin-converting enzyme and ATI receptors in cultured human cardiac fibroblasts. // Circulation. 1998, Vol.98, P.2553-2559

66.Haller J, Mikics E, Makara GB. The effects of non-genomic glucocorticoid mechanisms on bodily functions and the central neural system: a critical evaluation of findings. Front Neuroendocrinol 2008;29:273-91.

67.Hirano T, Homma M, Oka K, Tsushima H, Niitsuma T, Hayashi T. Individual variations in lymphocyte-responses to glucocorticoids in patients with bronchial asthma: comparison of potencies for five glucocorticoids.// Immunopharmacology 1998 Jul;40(l):57-66.

68.Huang MH, So EC, Liu YC, Wu SN. Glucocorticoids stimulate the activity of large-conductance Ca2_-activated K_ channels in pituitary GH3 and AtT-20 cells via a non-genomic mechanism. Steroids 2006;71:129-40.

69.Jiang CL, Liu L, Tasker JG. Why do we need nongenomic glucocorticoid mechanisms? // Front Neuroendocrinol. 2014 Jan;35(l):72-5.

70.Kadmiel M, Cidlowski JA. Glucocorticoid receptor signaling in health and disease.//Trends Pharmacol Sci. 2013; 34(9):518-30.

71.Klein-Hitpass L., Schwerk C., Kahmann S., Vassen L. Targets of activated steroid hormone receptors: basal transcription factors and receptor interacting proteins.//J. Mol. Med. - 1998. - 76(7). - P.490-496

72.Koukouritaki SB, Theodoropooulos PA, MargiorisAN, GravanisA, Stournaras C. Dexamethasone alters rapidly actin polymerization dynamics in human endometrial cells: Evidence for nongenomic actions involving cAMP turnover. // J Cell Biochem 1996; 62:251-261.

73.Labeur M, Holsboer F. Molecular mechanisms of glucocorticoid receptor signaling.// Medicina (B Aires). 2010; 70(5):457-62.

74.Lau T, Heimann F, Bartsch D, Schloss P, Weber T. Nongenomic, glucocorticoid receptor-mediated regulation of serotonin transporter cell surface expression in embryonic stem cell derived serotonergic neurons.// Neurosci Lett. 2013 Oct 25;554:115-20.

75.Lee SR, Kim HK, Youm JB, Dizon LA, Song IS, Jeong SH, Seo DY, Ko KS, Rhee BD, Kim N, Han J. Non-genomic effect of glucocorticoids on cardiovascular system. // Pflugers Arch. 2012 Dec;464(6):549-59.

76.Li L, Haynes MP, Bender JR. Plasma membrane localization and function of the estrogen receptor _ variant (ER46) in human endothelial cells. Proc Natl Acad Sci USA 2003;100:4807-12.

77.Liu G, Liu G, Alzoubi K, Umbach AT, Pelzl L, Borst O, Gawaz M, Lang F. Upregulation of Store Operated Ca Channel Orail, Stimulation of Ca(2+) Entry and Triggering of Cell Membrane Scrambling in Platelets by Mineralocorticoid DOCA.// Kidney Blood Press Res. 2013;38(l):21-30.

78.Liu L, Wang YX, Zhou J, Long F, Sun HW, Liu Y, et al. Rapid non-genomic inhibitory effects of glucocorticoids on human neutrophil degranulation. Inflamm Res 2005;54:37-41.

79.Lou S.J., Chen Y.Z. The rapid inhibitory effect of glucocorticoid on cytosolic free Ca2+ increment induced by high extracellular K+ and its underlying mechanism in PC12 cells./ZBiochem. Biophys. Res. Commun. - 1998. - 244(2). - P.403-407

80.Lowenberg M, Stahn C, Hommes DW, Buttgereit F. Novel insights into mechanisms of glucocorticoid action and the development of new glucocorticoid receptor ligands.// Steroids. 2008;73(9-10): 1025-9.

81 .Lowenberg M, Tuynman J, Bilderbeek J, Gaber T, Buttgereit F, van Deventer S, et al. Rapid immunosuppressive effects of glucocorticoidsmediated through Lck andFyn. Blood 2005;106:1703-10.

82.Lowenberg M, Verhaar AP, Bilderbeek J, Marie J, Buttgereit F, Peppelenbosch MP, et al. Glucocorticoids cause rapid dissociation of a T-cell-receptor-associated protein complex containing LCK and FYN. EMBO Rep 2006;7:1023-9.

83.Lu NZ, Cidlowski JA. Glucocorticoid receptor isoforms generate transcription specificity. Trends Cell Biol 2006;16:301-7.

84.Lubman R.L., Chao D.C., Crandall E.D. Basolateral localization of Na(+)-HC03- cotransporter activity in alveolar epithelial cells. // Respir.Physiol.- 1995.-100(1).-P. 15-24.

85.Luconi M, Bonaccorsi L, Maggi M, Pecchioli P, Krausz C, Forti G, Baldi E. Identification and characterization of functional nongenomic progesterone receptors on human sperm membrane. // J Clin Endocrinol Metab 1998; 83:877885.

86.Machelon V, Nome F, Tesarik J. Nongenomic effects of androstenedione on human granulosa luteinizing cells. // J Clin Endocrinol Metab 1998; 83: 263-269.

87.Maier C, Runzier D, Schindelar J, Grabner G, Waldhausl W, Kohler G, et al. G-protein-coupled glucocorticoid receptors on the pituitary cell membrane. J Cell Sei 2005;118:3353-61.

88.Medh RD, Lay RH, Schmidt TJ. Agonist-specific modulation of glucocorticoid receptor-mediated transcription by immunosuppressants.// Mol Cell Endocrinol 1998Mar 16;138(1-2):11-23.

89.Monje P., Boland R. Characterization of membrane estrogen binding proteins from rabbit uterus. //Mol. Cell Endocrinol. - 1999. - 147(1-2). -P.75-84

90.Moore F.L., Orchinik M., Lowry C. Functional studies of corticosterone receptors in neuronal membranes.//Receptor.- 1995.-vol.5, N1.-p.21-28.

91.Nemere I, Schwartz Z, Pedrozo H, Sylvia VL, Dean DD, Boyan BD. Identification of a membrane receptor for 1,25-dihydroxyvitamin D3 which mediates rapid activation of protein kinase C.// J Bone Miner Res 1998; 13:13531359.

92.Norman AW, Wehling M. Overview of the first international meeting on rapid responses to steroid hormones. // Steroids 1999; 64:3-4.

93.Pedram A, Razandi M, Levin ER. Nature of functional estrogen receptors at the plasma membrane. Mol Endocrinol 2006;20: 1996-2009.

94.Pedram A, Razandi M, Sainson RC, Kim JK, Hughes CC, Levin ER. A conserved mechanism for steroid receptor translocation to the plasma membrane. J Biol Chem 2007;282:22278-88.

95.Perez-Martinez L, Carreon-RodriguezA, Gonzalez-Alzati ME. Morales C Charii JL, Joseph-Bravo P. Dexamethasone rapidly regulates TRH mRNA levels in hypothalamic cell cultures: interaction with the cAMP pathway. // Neuroendocrinology 1998 Nov;68(5):345-354.

96.Rang H.P., Dale M.M., Ritter J.M. Pharmacology. - Churchill Livingstone edinburgh, london, N.Y., Philadelphia, Sydney, Toronto, 2005.

97.Reichardt HM, Kaestner KH, Tuckermann J, Kretz 0, Wessely 0, Bock R, Gass P, Schmid W, Herrlich P, Angel P, Schutz G. DNA binding of the glucocorticoid receptor is not essential for survival. // Cell 1998 May 15;93(4):531-541.

98.Revollo JR, Cidlowski JA. Mechanisms generating diversity in glucocorticoid receptor signaling.//Ann N Y Acad Sei. 2009 Oct;l 179:167-78.

99.Samarasinghe RA, Di Maio R, Volonte D, Galbiati F, Lewis M, Romero G, DeFranco DB. Nongenomic glucocorticoid receptor action regulates gap junction intercellular communication and neural progenitor cell proliferation.// Proc Natl Acad Sei U S A. 2011 Oct 4; 108(40): 16657-62.

100. Sato A, Sheppard KE, Fullerton MJ, Funder JW. cAMP modulates glucocorticoid-induced protein accumulation and glucocorticoid receptor in cardiomyocytes. // Am J Physiol 1996 Nov; 271(5 Pt 1):E827-E833.

101. Schacke H, Docke WD, Asadullah K. Mechanisms involved in the side effects of glucocorticoids. Pharmacol Ther 2002;96:23-43.

102. Schacke Н, Schottelius A, Docke WD, Strehlke Р, Jaroch S, Schmees N, et al. Dissociation of transactivation from transrepression by a selective glucocorticoid receptor agonist leads to separation of therapeutic effects from side effects. Proc Natl Acad Sci U S A 2004;101:227-32.

103. Schmidt B, Gerdes D, Feuring M et al. Rapid, Nongenomic Steroid Actions: A New Age?//Frontiers in Neuroendocrin. 2000, 21, 57-94.

104. Schmidt B.M., Christ M., Falkenstein E., Wehling M. Nongenomic steroid actions: completing the puzzle. Aldosterone as an example.//Exp. Clin. Endocrinol. Diabetes. - 1998. - 106(6). -P.441-445

105. Schoneveld JL, Fritsch-Stork RD, Bijlsma JW. Nongenomic glucocorticoid signaling: new targets for immunosuppressive therapy? //Arthritis Rheum. 2011 Dec;63(12):3665-7.

106. Shahidi H, Vottero A. Stratakis CA, Taymans SE, Kari M, Longui CA, Chrousos GP, Daughaday WH, Gregory SA, Plate JM. Imbalanced expression of the glucocorticoid receptor isoforms in cultured lymphocytes from a patient with systemic glucocorticoid resistance and chronic lymphocytic leukemia.// Biochem Biophys Res Commun 1999 Jan 27;254(3):559-65

107. Sheppard KA, Phelps KM, Williams AJ, Thanos D, Glass CK, Rosenfeld MG, Gerritsen ME, Collins T. Nuclear integration of glucocorticoid receptor and nuclear factor-kappaB signaling by CREB-binding protein and steroid receptor coactivator-1. // J Biol Chem 1998 Nov 6;273(45):29291-29294.

108. Solito E, Mulla A, Morris JF, Christian HC, Flower RJ, Buckingham JC. Dexamethasone induces rapid serine-phosphorylation and membrane translocation of annexin 1 in a human folliculostellate cell line via a novel nongenomic mechanism involving the glucocorticoid receptor, protein kinase C, phosphatidylinositol 3-kinase, and mitogen-activated protein kinase. Endocrinology 2003; 144:1164-74.

109. Song IH, Buttgereit F. Non-genomic glucocorticoid effects to provide the basis for new drug developments. Mol Cell Endocrinol 2006;246:142-6.

110. Spies CM, Schaumann DH, Berki T, Mayer K, Jakstadt M, Huscher D, et al. Membrane glucocorticoid receptors are down regulated by glucocorticoids in patients with systemic lupus erythematosus and use a caveolin-1-independent expression pathway. Ann Rheum Dis 2006;65:1139-46.

111. Stahn C, Buttgereit F. Genomic and nongenomic effects of glucocorticoids. Nat Clin Pract Rheumatol 2008;4:525-33.

112. Stahn C, Lowenberg M, Hommes DW, Buttgereit F. Molecular mechanisms of glucocorticoid action and selective glucocorticoid receptor agonists. Mol Cell Endocrinol 2007;275:71-8.

113. Strehl C, Buttgereit F. Optimized glucocorticoid therapy: teaching old drugs new tricks. // Mol Cell Endocrinol. 2013 Nov 5;380(l-2):32-40.

114. Strehl C, Buttgereit F. Unraveling the functions of the membrane-bound glucocorticoid receptors: first clues on origin and functional activity.// Ann N Y Acad Sci. 2014 Feb 25. doi: 10.111 l/nyas.12364.

115. Strehl C, Gaber T, Lowenberg M, Hommes DW, Verhaar AP, Schellmann S, et al. Origin and functional activity of the membranebound glucocorticoid receptor. Arthritis Rheum 2011;63:3779-88.

116. Szondy Z. Adenosine stimulates DNA fragmentation in human thymocytes by Ca(2+) -mediated mechanisms.//Biochem. J.- 1994.-vol.304.-p.877-885.

117. Tang Y, DeFranco DB. ATP-dependent release of glucocorticoid receptors from the nuclear matrix. // Mol Cell Biol 1996 May; 1 6( 5): 1989-2001.

118. Tatton W.G., Olanow C.W. Apoptosis in neurodegenerative diseases: the role of mitochondria./ZBiochim. Biophys. Acta. - 1999. - 1410(2). -P.195-213

119. Toran-Allerand CD, Singh M, Setalo GJr. Novel mechanisms of estrogen action in the brain: new players in an old story. // Front Neuroendocrinol 1999; 20: 97-121.

120. Tryc AB, Spies CM, Schneider U, Kunkel D, Berki T, Sieper J, et al. Membrane glucocorticoid receptor expression on peripheral blood mononuclear cells in patients with ankylosing spondylitis. J Rheumatol 2006;33:2249-53.

121. Vernocchi S, Battello N, Schmitz S, Revets D, Billing AM, Turner JD, Muller CP. Membrane glucocorticoid receptor activation induces proteomic changes aligning with classical glucocorticoid effects. //Mol Cell Proteomics. 2013 Jul; 12(7): 1764-79.

122. Viegas L.R., Hoijman E., Beato M., Pecci A. Mechanisms involved in tissue-specific apoptosis regulated by glucocorticoids // J Steroid Biochem Mol Biol. 2008. V.109. P.273-278.

123. Vig E., Barrett T.J., Vedeckis W.V. Coordinate regulation of glucocorticoid receptor and c-jun mRNA levels: evidence for cross-talk between two signaling pathways' at the transcriptional level.//Mol. Endocrinol.- 1994.- vol.8, N10.-p.1336-1346.

124. Wang, Y.S. Structural and biological characterization of pegylated recombinant interferon alpha-2b and its therapeutic implications. // Adv. Drug Deliv. Rev., 2002, Vol. 54, P.547-570.

125. Watson C.S., Gametchu B. Membrane-initiated steroid actions and the proteins that mediate them.//Proc. Soc. Exp. Biol. Med. - 1999. - 220(1). - P.9-19

126. Wehling M, Spes CH, Win N, Janson CP, Schmidt BM, Theisen K, Christ M. Rapid cardiovascular action of aldosterone in man.// J Clin Endocrinol Metab 1998; 83:3517-3522.

127. Wehling M. Specific, nongenomic actions of steroid hormones.//Annu. Rev. Physiol. - 1997. - 59. - P.365-393

128. Weigel NL, Zhang Y. Ligand-independent activation of steroid hormone receptors. //Mol Med 1998 Jun; 7 6(7): 469-479.

__СПIК 'OK ЛИТЕРА ТУРЫ__(^ТоЗ^"'

129. Zeng J, Li М, Xiao Z, Chen Y, Chang Q, Tian H, Jin H, Liu X. Rapid elevation of calcium concentration in cultured dorsal spinal cord astrocytes by corticosterone.// Neurochem Res. 2013 Feb;38(2):382-8

130. Zhang T, Shi WL, Tasker JG, Zhou JR, Peng YL, Miao CY, Yang YJ, Jiang CL. Dexamethasone induces rapid promotion of norepinephrine-mediated vascular smooth muscle cell contraction. // Mol Med Rep. 2013 Feb;7(2):549-54.