Действие лигандов рецепторов прогестерона на клетки мононуклеарной фракции периферической крови при гиперпластических процессах эндометрия тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.06, кандидат наук Тихонов, Дмитрий Александрович

• Тихонов, Дмитрий Александрович
• кандидат наук
• 2015

Оглавление диссертации кандидат наук Тихонов, Дмитрий Александрович

ОГЛАВЛЕНИЕ

Список сокращений ^

Введение §

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Лиганды рецепторов прогестерона ^

1.2. Лиганды рецепторов прогестерона и иммунная система ^

1.3. Гиперпластические процессы эндометрия 3 \

1.4. Рецепторы половых стероидов в ткани эндометрия

1.5. Лечение гиперпластических процессов эндометрия ^

1.6. Заключение

44

Глава 2. Материалы и методы исследования ^

2.1. Материалы для исследования

46

2.1.1. Используемые реактивы ^

2.1.2.Используемое оборудование ^

2.1.3. Объекты исследования

48

2.1.4. Дизайн исследования ^

2.2. Методы исследования ^

2.2.1. Выделение мононуклеарной фракции клеток

из периферической крови

2.2.2. Определение специфического связывания 3Н-прогестерона с прогестерон-связывающими участками ^ МНФК периферической крови

2.2.3. Определение специфического связывания

синтетических стероидов с рецепторами прогестерона

2.2.4. Жидкостная сцинтилляционная радиометрия

56

2.2.5. Инкубация клеток с прегна-О'-пентаранами и прогестероном

2.2.6. Оценка метаболической активности клеток (МТТ-тест)

2.2.7. Определение уровня ФНО-а с помощью иммуноферментного анализа

2.2.8. Выделение мРНК из клинического материала

58

2.2.9. Реакция обратной транскрипции для получения кДНК

2.2.10. Полимеразная цепная реакция в реальном времени для определения уровня экспрессии генов

2.2.11. Статистическая обработка результатов Глава 3. Результаты исследований и их обсуждение

3.1. Определение специфического связывания прегна-Э'-пентаранов с прогестерон-связывающими участками клеток мононуклеарной фракции периферической крови

3.2. Анализ влияния прегна-П)'-пентаранов на уровень продукции ФНО-а мононуклеарной фракцией периферической крови

3.3. Влияние прегна-О'-пентаранов на жизнеспособность неизмененных и опухолевых гормон-чувствительных клеток

3.3.1. Влияние прегна-О'-пентаранов на

61

63

66

жизнеспособность мононуклеарной фракции клеток периферической крови

3.3.2. Влияние прегна-О'-пентаранов на жизнеспособность опухолевых клеток Hela и MOLT-4

3.4. Влияние прегна-О'-пентаранов на экспрессию генов рецепторов прогестерона и эстрадиола в клетках мононуклеарной фракции периферической крови пациенток с 76 гиперпластическими процессами эндометрия

3.4.1. Экспрессия генов ядерных и мембранных рецепторов стероидных гормонов в МНФК периферической крови пациенток постменопаузального 77 возраста без гинекологической патологии

3.4.2. Экспрессия генов рецепторов эстрадиола и прогестерона МНФК периферической крови пациенток постменопаузального возраста с железисто-фиброзными 85 полипами эндометрия

3.4.3.Экспрессия генов ядерных и мембранных рецепторов эстрадиола и прогестерона МНФК периферической крови пациенток постменопаузального возраста с железистой и железисто-кистозной гиперплазией эндометрия

3.4.4. Экспрессия генов ядерных и мембранных рецепторов стероидных гормонов в МНФК у пациенток постменопаузального возраста с аденокарциномой эндометрия

91

95

3.4.5. Влияние прегна-О'-пентаранов на экспрессию Ю1

генов рецепторов прогестерона и эстрадиола в МНФК

3.5. Структурно-функциональный анализ соединений гомологического ряда прегна-Э'-пентаранов и выбор наиболее активных соединений

Выводы

Список литературы

Список сокращении

Ct - пороговый цикл амплификации

DBD - ДНК-связывающий домен

ERa, ERp - ядерные рецепторы эстрадиола

GAPDH - глицеральдегид 3-фосфат дегидрогеназа

Hela - культура эпителиоидного рака шейки матки человека

IFN - интерферон

IL - интерлейкин

LBD - лиганд-связывающий домен mER - мембранный рецептор эстрадиола MOLT-4 - культура Т-клеточного лейкоза человека

МТТ-тест - реакция на основе превращения 3-(4,5-диметилтиазолил-2)-2,5-дифенилтетразолиума бромида в формазан

NK-клетки - клетки - естественные киллеры

PAQR7, mPR - мембранный рецептор прогестерона

PGRmCl — мембранный рецептор прогестерона компонент

P1BF - прогестерон-индуцированный блокирующий фактор

PR-A, PR-B - ядерные рецепторы прогестерона

Th - лимфоциты группы Т-хелперов

TLR - То11-подобные рецепторы

Treg - Т-регуляторные клетки

аГРГ - агонисты гонадотропин-рилизинг гормон

ГПЭ - гиперпластические процессы эндометрия

ДК - дендритные клетки

ЖФПЭ - железисто-фиброзный полип эндометрия

кДНК - комплементарная ДНК, построенная на основе мРНК

МНФК (МНФ) - мононуклеарная фракция клеток периферической крови

мРНК - матричная РНК

ПЦР-РТ (PCR-RT) - полимеразная цепная реакция в реальном времени ФНО (TNF) - фактор некроза опухолей

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Действие лигандов рецепторов прогестерона на клетки мононуклеарной фракции периферической крови при гиперпластических процессах эндометрия»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность работы

Лечение гиперпластических процессов эндометрия до настоящего времени остается одной из наиболее актуальных задач современной медицинской науки. Это связано с высокой распространенностью данной патологии (в среднем до 9% пациенток) [52, 85], неуклонным ростом заболеваемости, особенно в постменопаузальном периоде [14, 30, 52], частым бессимптомным течением, малигнизацией и низкой эффективностью существующих методов консервативной терапии [17]. Недостаточная эффективность медикаментозного лечения гиперпластических процессов эндометрия может быть следствием отсутствия полной картины этиопатогенеза этого заболевания и ограниченным спектром, разрешенных к применению, лекарственных средств.

Патогенетически обоснованной тактикой медикаментозного лечения гиперпластических процессов эндометрия является снижение эстрогенного влияния на ткань. С этой целью используют гестагены, аналоги гонадолиберинов (аГРГ) и комбинированные пероральные контрацептивы, одним из механизмов действия которых, является снижение концентрации гонадотропинов в крови и, в конечном итоге, продукции яичниками эстрогенов. Однако, наличие эстрогенного компонента в комбинированных пероральных контрацептивах и тяжелые побочные эффекты аГРГ ограничивают их применение в клинической практике. Поэтому, гестагены, с их оптимальным профилем безопасности, являются одной из наиболее востребованных групп препаратов для этой цели [32].

Поиск и изучение новых лекарственных средств, в частности, лигандов рецепторов прогестерона (чистых агонистов и селективных модуляторов рецепторов прогестерона) остается одним из важнейших фундаментальных и прикладных направлений в фармакологии [33]. К настоящему времени синтезированы новые синтетические производные прогестерона - прегна-О'-пентараны - соединения с дополнительным карбоциклом в 16,17-положениях стероидного скелета, перспективные для изучения структурно-функциональных

свойств стероидных лигандов рецепторов прогестерона и поиска новых активных молекул для применения в клинической практике.

Современный системный подход в изучении этиопатогенеза, на основании которого формируется тактика медикаментозного лечения, диктует необходимость анализа взаимодействия эндокринной и иммунной систем, влияния стероидных гормонов на функционирование иммунокомпетентных клеток в норме и при патологии [48, 108]. Тесная взаимная регуляция этих двух контролирующих систем организма давно известна. Так, развитию гормон-зависимых опухолей тканей репродуктивного тракта женщины сопутствуют нарушения иммунной системы [14, 26, 48], с другой стороны - саногенез любого патологического процесса обеспечивается совокупностью усилий локального и системного звеньев иммунитета [6]. Поэтому для повышения эффективности гормональной терапии при гиперпластических процессах эндометрия необходимо изучить функциональное состояние иммунных клеток, которые можно рассматривать в качестве терапевтической мишени действия препаратов стероидных гормонов.

Цель работы: изучение фармакодинамических свойств новых синтетических лигандов рецепторов прогестерона в клетках-мишенях стероидных гормонов.

Задачи:

1. Определить уровень специфического связывания прегна-О'-пентаранов с прогестерон-связывающими участками мононуклеарной фракции периферической крови.

2. Изучить влияние прегна-О'-пентаранов па продукцию ФНО-альфа клетками мононуклеарной фракции крови.

3. Оценить действие прегна-О'-пентаранов на жизнеспособность неизмененных (МНФК) и опухолевых клеток (Hela, MOLT-4).

4. Исследовать влияние прегна-О'-пентаранов на экспрессию генов рецепторов половых стероидных гормонов в мононуклеарной фракции клеток периферической крови у пациенток постменопаузального возраста без

гинекологической патологии, а также у больных с гиперпластическими процессами эндометрия.

5. Выявить соединения в ряду прегна-О'-пентаранов, обладающие наиболее высокой специфической связывающей активностью в отношении прогестерон-связывающих участков мононуклеаров периферической крови, подавлением жизнеспособности опухолевых клеток при отсутствии токсического действия на неизмененные клетки, перспективные для использования в клинической практике.

Научная новизна

Впервые было изучено влияние прегна-О'-пентаранов на мононуклеарную фракцию клеток периферической крови у пациенток с гинекологической патологией, определена экспрессия генов подтипов рецепторов прогестерона и эстрадиола в мононуклеарах периферической крови у женщин постменопаузального возраста без гинекологической патологии и выявлены изменения рецепторного профиля МНФК при развитии гиперпластических процессов эндометрия.

Практическая значимость

На основании полученных данных было показано, что для доклинических испытаний наиболее перспективными соединениями класса прегна-О'-пентаранов являются 6(7Г)-гидрокси-имино-16а, 17а-циклогексано-прегн-4-ен-3,20-дион) и 16а,17а-циклогексано-4-оксапрегн-5-ен-3,20-дион, которые обладают высокой специфической связывающей активностью с прогестерон-связывающими участками клеток мононуклеарной фракции периферической крови, снижают выработку мононуклеарами крови ФНО-альфа, угнетают жизнеспособность опухолевых клеток (НеЬа и МОЬТ-4) и не оказывают токсического действия на неизмененные клетки периферической крови.

Выявлено, что при развитии гиперпластических процессах у женщин с постменопаузальным периодом до 10 лет в мононуклеарной фракции периферической крови увеличивается уровень экспрессии гена рецептора эстрадиола подтипа альфа по сравнению с пациентками без гинекологической патологии в 4 раза (р<0,001). Превышение уровня экспрессии данного гена

более 0,314 (по формуле 0,5"ЛС'*100 относительно гена GAPDH) может свидетельствовать о развитии гиперпластических процессов слизистой оболочки матки у пациенток старшей возрастной группы.

Основные положения диссертации, выносимые на защиту

Исследуемые представители гомологического ряда прегна-О'-пентаранов обладают достаточно высокой специфической связывающей активностью в отношении прогестерон-связывающих участков клеток мононуклеарной фракции периферической крови, по-разному влияют на цитокинопродукцию мононуклеарами периферической крови, способны подавлять жизнеспособность культур опухолевых клеток, при этом не оказывая цитотоксического действия на фракцию мононуклеарных клеток периферической крови, и влияют на стероидно-рецепторный транскриптом МНФК у пациенток с гиперпластическими процессами эндометрия по сравнению с женщинами без гинекологической патологии.

Апробация работы: состоялась на объединенной научно-практической конференции сотрудников кафедры молекулярной фармакологии и радиобиологии им. академика П.В. Сергеева МБФ, аспирантов и сотрудников научно-исследовательской лаборатории молекулярной фармакологии РНИМУ им. Н.И. Пирогова№ 10 от 10 декабря 2013 г.

Публикации

Материалы работы доложены и обсуждены на X Всероссийской научной конференции с международным участием «Отечественные противоопухолевые препараты» (Москва, 2011), Международной научной конференции студентов и молодых ученых «Актуальные вопросы современной медицины 2012» (Харьков, 2012), XXV Международном конгрессе с курсом эндоскопии «Новые технологии в диагностике и лечении гинекологических заболеваний» (Москва, 2012), IV съезде фармакологов России «Инновации в современной фармакологии» (Казань, 2012), VIII Международной (XVII Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2013), VIII Международной (XVIII

Всероссийской) Пироговской научной медицинской конференции (Москва, 2013). По материалам диссертации опубликовано 14 печатных работ. Структура и объем диссертации:

Диссертационная работа состоит из введения, глав, посвященных обзору литературы, описанию методов исследования, изложению результатов работы и их обсуждению, выводов и списка цитируемой литературы, включающего 111 источников. Работа изложена на 119 страницах, иллюстрирована 8 рисунками, содержит 22 таблицы, 15 диаграмм и 1 схему.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ДЕЙСТВИЕ ЛИГАНДОВ РЕЦЕПТОРОВ ПРОГЕСТЕРОНА НА КЛЕТКИ МОНОНУКЛЕАРНОЙ ФРАКЦИИ ПЕРИФЕРИЧЕСКОЙ КРОВИ ПРИ ГИПЕРПЛАСТИЧЕСКИХ ПРОЦЕССАХ ЭНДОМЕТРИЯ

1.1. Лиганды рецепторов прогестерона

Прогестерон (прегн-4-ен-3,20-дион) представляет собой стероидный гормон с молекулярной массой 314,5 дальтон. Прогестерон является гормоном сохранения беременности, участвует в созревании яйцеклетки, дифференцировке эндометрия, имплантации эмбриона, росте плаценты, предотвращении сокращения миометрия, дифференцировке тканей молочной железы. Кроме того, он необходим и для нормального функционирования различных систем организма: обладает нейропротекторным и нейрорегенеративным эффектами, играет важную роль в функционировании иммунной системы [53].

Синтезировано большое число производных прогестерона и изучена их способность влиять на ткани-мишени: матку, яичники и молочные железы, а также на другие органы и системы [20].

Гестагены - группа соединений, проявляющих гестагенную активность, проявляющуюся в изменении секреторной трансформации эндометрия у инфантильных кроликов (тест Клауберга-МакФейла). Они включают в себя вещества как натурального, так и синтетического происхождения (таблица 1, рисунок 1).

Таблица 1.

Классификация прогестагенов на основании их химической структуры (ПО [96]).

Классификация Представитель

1. натуральные прогестерон

К5 X О 2ал ацетилированные прегнаны медроксипрогестерона ацетат, мегестрол ацетат, хлормадинона

(и н о ацетат, ципротерона ацетат

<и (-Н о Он с к 2a.ii неацетилированные прегнаны дигидрогестерон, медрогестон

и к « о <и ЕГ К н и о ц (Я И с 2а.ш ацетилированные 19-норпрегнаны номегестролаацетат, нестерон

сЗ 2a.lv неацетилированные демегестон, промегестон,

<и н я 19-норпрегнаны тримегестон

и Й ав норэтиндрон, норэтиндрона

О а, 2бл этинилированные ацетат, этиндиола диацетат,

<и н о о н о эстраны норэтинодрел, линестренол, тиболон

<и н а 2б.п этинилированные левоноргестрел, дазогестрел,

и о (=1 13-этилгонаны норгестимат, гестоден

ев « < Ю сч 26.Ш неэтинилированные диеногест, дроспиренон

Рисунок 1.

Химическая структура прогестерона и тестостерона.

Для связывания с рецепторами прогестерона необходимо наличие неароматического кольца А (с кетогруппой в положении 3 и двойной связью между атомами С4 и С5) в инвертированной конформации 1(3, 2а, при которой атом Ci находится над, а С2 - под плоскостью, проходящей через атомы С3 - С5 и Сю- Другие рецепторы стероидных гормонов также связываются с таким неароматическим кольцом А, но для обеспечения с ними высокого сродства конформация кольца А должна быть иной.

Биологическая активность гестагенов зависит от их химической структуры. Это обусловлено тем, что свойства соединений зависят от взаимодействия стероидной молекулы с определёнными участками лиганд-связывающего домена (ligand binding domain, LBD) рецептора прогестерона (рисунок 2) [102].

Рисунок 2.

Взаимодействие молекулы прогестерона с аминокислотами лиганд-связывающего домена рецептора прогестерона [102].

Gin 725

nh2 . ^ 3.1

2.5/ 3"3\ X , • > --»- о ^

л W.. '

2.9 \ >2-5

2.8/ ^Q

H2N^TNH2

-nh

3:0-

Arg 766 hn-^R •4.

Примечание: Gin - глутамин, Arg - аргинин, Phe - фенилаланин, W - Ван-дер-Ваальсово взаимодействие между молекулами, числовые обозначения - в Ангстремах (10 10 м).

Важную роль в прогестерон-связывающем кармане играют следующие молекулы: остаток аргинина 766 необходим для правильной ориентации молекулы прогестерона через водородные связи относительно остатка глутамина 725, при этом фенилаланин фиксирует А-кольцо стероида через Ван-дер-Ваальсову связь [102]. При этом другие остатки аминокислот также взаимодействуют с молекулой лиганда, что приводит, в конечном итоге, к проявлению агонистической или антагонистической активности [68].

Так, добавление к молекуле прогестерона гидроксильной группы у 17 атома углерода лишает прогестерон гестагенной активности, а ацетилирование по этой гидроксильной группе увеличивает гестагенную активность, а при добавлении метильной группы к 6 атому углерода активность соединения также может увеличиться [96].

Введение в молекулу медроксипрогестерона ацетата двойной связи между атомами углерода 6 и 7, замещение метильной группы у 6 атома углерода, а также добавление метиленовой группы к 1 и 2 атому углерода повышает прогестагенную активность соединения [96].

Кроме того, изменение положения метильной группы у 10 атома углерода прогестерона с бета на альфа-положение, по-видимому, является причиной отсутствия способности соединения вызывать ингибирование овуляции в течение менструального цикла и изменения базалыюй температуры тела [96].

Введение в молекулу тестостерона этинильной группы в 17 альфа-положение приводит к снижению андрогенной активности, а удаление метильной группы в 10 положении углерода повышает прогестагенные свойства и уменьшает андрогенные [96].

Таким образом, существуют литературные данные о влиянии разных заместителей в молекуле прогестерона на прогестагенную, андрогенную активность полученных веществ. При дальнейшем изменении молекул прогестерона могут появиться новые классы соединений, которые будут обладать другими свойствами. Создание таких классов позволяет более глубоко изучить

структурно-функциональные связи в ряду производных прогестерона и их свойства.

Химическая модификация молекулы прогестерона привела к созданию нового класса синтетических прогестинов - 16а, 17а-циклоалканопрогестеронов (прегна-Б'-пентаранов), полученных в лаборатории химии стероидов и оксилипинов N 22 ИОХ им. Зелинского (зав. д.х.н. И.В. Заварзин) путем введения дополнительного карбоцикла в молекулу прогестерона, конденсированного со стероидным скелетом в 16а,17а-положениях (рисунок 3)[8].

Примечание: X, Y, R(- положения заместителей.

Известно, что стероиды с заместителями в стероидном скелете могут обладать различными видами биологической активности (гормональной и негормональной) в зависимости от особенностей структуры и типа заместителей в стероидном скелете [55].

Прегна-0'п-пентараны - это класс 3,20-дикетопрегнанов с дополнительным 16а, 17а-карбоциклом, содержащим от трех до семи атомов углерода (индекс п-указывает число атомов дополнительного карбоцикла D'), представители которого обладают прогестагенной или антипрогестагенной активностями in vivo.

Рисунок 3.

Структурная формула прегна-О'-пентаранов.

Г)

Прогестерон несет две полярные нехиральные (3- и 20-карбонильные) группы, и в силу своей общей изогнутости представляет большие возможности для стереохимических трансформаций [8].

Прегна-Э'-пентараны, различающиеся только по размеру дополнительного карбоцикла, делятся в соответствии со своей активностью in vivo на три основные группы:

1) высокоактивные соединения (полные агонисты прогестерона);

2) соединения, активные в тесте трансформации эндометрия, но малоактивные в тесте сохранения беременности;

К первой группе полных агонистов прогестерона относится 16а, 17а -циклогексанопрогестерон и его аналоги, несущие в 6а положении заместители и/или дополнительные двойные связи (Д'или Д6) в стероидном скелете.

Соединения с трех-пятичленным дополнительным D'-циклом (вторая группа) характеризуются снижением гестагенной активности, в то время как наличие двойной связи в дополнительном шестичленном карбоцикле (третья группа) несколько увеличивает прогестагенную активность соединения [8].

По результатам исследований, активность прегна-О'-пентаранов по сохранению беременности в эксперименте варьирует от 0 до 100 %, в зависимости от заместителей [8]. Таким образом, среди высокоактивных гормоноподобных веществ ряда пентаранов были обнаружены соединения с высокой гестагенной активностью.

Таким образом, прегна-О'-пентараны являются высокоактивными соединениями с разделенными биологическими функциями в зависимости от модификаций их молекулы, что делает их перспективными для дальнейшего поиска соединений для применения в клинике в качестве активных гестагенов.

Как и у большинства стероидов, действие прогестерона и прегна-О'-пентаранов на клетки-мишени опосредуется путем связывания и активации специфических клеточных рецепторов: ядерных («классических», внутриклеточных) и мембранных («неклассических»). Так, лигады рецепторов прогестерона способны как изменять траскрипцию генов-мишеней, так и

запускать инициированные через мембранные рецепторы сигнальные каскады [25].

В 1998 г. сформулирована Маннхеймская классификация эффектов половых стероидов с учетом их внегеномного действия [49]. Ее суть отражена в таблице 2:

Таблица 2.

Действие прогестерона на ткань-мишень ([49] с модификациями).

А. Прямые эффекты

(стероид действует как агонист сам)

В. Непрямые эффекты

(стероиду требуется партнер агонист для генерации быстрого ответа)

I. Неспецифические

(без рецептора, возможен эффект стероида на физические свойства

плазматической мембраны)

II. Специфические

(рецептор и лиганд обязательны)

а) классический ядерный стероидный рецептор

в) неклассический (мембранный) стероидный рецептор

Первой структурой, с которой взаимодействуют стероидные гормоны в процессе реализации биологической активности на клеточном уровне, является цитоплазматическая мембрана клетки-мишени.

Еще в 1979 году академиком П.В. Сергеевым были опубликованы основные положения мембранорецепторной теории действия стероидных гормонов. В соответствии с этой теорией:

1) стероид узнается плазматической мембраной клетки-мишени;

2) плазматическая мембрана связывает и осуществляет перенос лиганда в клетку, включает систему вторичных посредников;

3) в распознавании и транслокации гормона принимают участие мембраны субклеточных органелл;

4) в превращении химического гормонального сигнала в биологический ответ клетки-мишени первостепенное значение имеют процессы транскрипции и трансляции [21].

В настоящее время для всех классов стероидных гормонов доказано существование на плазматических мембранах клеток-мишеней специфических рецепторов, которые опосредуют быстрые, негеномные эффекты стероидов, индуцируя изменения проницаемости мембраны для различных ионов, или изменяя активность ферментов, образование вторичных посредников внутри. За последнее время выделены, идентифицированы и описаны свойства нескольких плазмамембранных рецепторов прогестерона, наиболее важными из которых являются два варианта: mPR и PGRmC, которые оказывают независимые от транскрипции эффекты на клетки-мишени, в том числе и ткани матки и клетки иммунной системы [25, 65].

Рецепторы mPR относятся к семейству ассоциированных с G-белком, семь раз пронизывающих мембрану рецепторов прогестерона и адипонектина (PAGR) [105]. Различают три субтипа mPR - а, (3 и у, которые отличаются у млекопитающих в зависимости от тканевого распределения, стадии репродуктивного цикла и неогенеза. Эстрадиол 17(3 стимулирует экспрессию mPRa и (3, в то время как прогестерон увеличивает плотность лишь mPR a подтипа мембранных рецепторов.

PGRmC 1 - второй тип мембраносвязанного рецептора прогестерона -представляет собой один раз пересекающий мембрану протеин. О механизме действия данного типа рецепторов известно немного; однако, показано, что он может образовывать комплекс с белком, связывающим ингибитор РНК активатора плазминогена (PAIRBP1), в результате чего активируются цГМФ-зависимые протеинкиназы и протеинкиназа С [47].

После проникновения внутрь клетки стероидные гормоны связываются с цитозольными (классическими) рецепторами половых стероидов, относящихся к суперсемейству ядерных рецепторов (nuclear receptor, NR). В эту группу входят рецепторы для гидрофобных молекул, таких как эстрогены, глюкокортикоиды,

прогестерон, минералкортиконды, андрогены, витамин ДЗ, экдизон, желчные кислоты, ретиноидная кислота, гормоны щитовидной железы, жирные кислоты, лейкотриены и простагландины [86]. Они являются внутриклеточными транскрипционными факторами и вызывают положительный или отрицательный эффект на экспрессию генов-мишеней [10, 21]. К классическим рецепторам прогестерона (подсемейство ИЯзСз) относят РЯ-А и Р11-В. Обе изоформы кодируются единственным геном, но регулируются различными промоторами. Тип В отличается от типа А присутствием в структуре рецептора дополнительного модульного домена, так называемой "функции активации транскрипции". Структура изоформ рецепторов РЯ-А и РИ-В представлена на рисунке 4.

Рисунок 4.

Структурная организация изоформ рецепторов прогестерона [по 50].

ПР-В АБ-3 Ш АР-1 овв АБ-2 ЬВБ

Л "'Ч ПР-А 1Р АБ-1 ввв АР-2 ЬВЭ

Примечание: ПР-А, ПР-В - рецепторы прогестерона типа А и В, соответственно, АР - транскрипционные активационные функциональные единицы, Ш - ингибиторный фактор, ЭВБ - ДНК-связывающий домен, ЬВЭ -лиганд-связывающий домен.

В качестве основных доменов рецепторной молекулы выступают: ОВЭ (ДНК-связывающий домен)- наиболее консервативный домен из стероидных рецепторов, который отвечает за связывание с рецепторной молекулы с ДНК, а также играет роль в димеризации рецептора, взаимодействие с кофакторами; ЬВЭ (лиганд-связывающий домен), который определяет специфичность и аффинность

связывания с лигандом, а также играет роль в димеризации, перемещении в ядро и взаимодействии с шаперонами и кофакторами [96].

Активация специфическим лигандом агонистом рецептора прогестерона типа В приводит к ингибированию экспрессии рецептора прогестерона типа А. В большинстве органов-мишеней экспрессия рецепторов прогестерона усиливается под влиянием эстрадиола и ослабляется под влиянием самого прогестерона.

Основные механизмы действия рецепторов прогестерона является одинаковым для всех стероидных гормонов и указаны на рисунке 5.

Рисунок 5.

Схема механизма действия стероидных гормонов [9|.

юсфолипазаС

ИнЗ Ф^™ Са++

•регуляторы,

имеризация

рецепто

вспомогательные белки Ьф90; 70 иммунофилины

ядро.

^ ми тоге н- -активируемые протеинкиназы

мРНК

белковые синтезы

стероид

аденилаг-циклаза

Примечание: ДАГ - диацилглицерол, ПК-С - протеинкиназа С, ПК-А -протеинкиназа А, ИнЗФ - инозитол-3 фосфат, цАМФ -циклоаденозинмонофосфат.

При связывании лиганда с рецептором прогестерона эффект может осуществляться через два основных пути. Первый (неклассический) -заключается в связывании на плазматической мембране клетки со специфическими рецепторами и активации каскадных реакций систем вторичных посредников, например, фосфолипазы С, инозитол-3-фосфата, ионизированного Са" , протеинкиназы С. Таким образом активируются негеномные эффекты.

Классический путь передачи сигнала заключается в лиганд-зависимой активации рецепторов и последующем осуществлении своего действия через активацию или ингибирование транскрипции генов-мишеней. Геномный механизм действия лигандов рецепторов прогестерона на клетки-мишени начинается с трансмембранного переноса молекул стероидных гормонов в клетку. В отсутствии лигандов рецепторы прогестерона находятся в комплексе с несколькими вспомогательными белками - шаперонами (Ь8р 90, Ивр 70, Ибр 40), иммунофиллином РКВР-52 и р23, которые оставляют открытым на поверхности глобулы лишь лиганд-связывающий домен. Попав внутрь клетки, гормон связывается с цитозольным рецептором прогестерона, после чего образовавшийся комплекс гормон-рецептор димеризуется и отправляется в ядро клетки, где происходит связывание активированного ДНК-связывающего домена рецептора с молекулой ДНК. Это приводит к увеличению (трансактивации) или снижению (трансрепрессии) процессов транскрипции генов. Направление регуляции транскрипции зависит от типа корегуляторов, присоединившихся к мультикомплексу (коактиваторы - ЫСОА1, ЫСОАЗ, СЯЕВВР, 811А1, Ю?2 или корепрессор - N00112) [19].

Таким образом, рецепторы прогестерона гетерогенны и состоят из различных подтипов ядерных и мембранных рецепторов, которые осуществляют

различные эффекты в клетке-мишени. А поскольку именно рецепторы отвечают за эффект лигандов, в данном случае, стероидных гормонов, они могут быть использованы как молекулярные мишени для более эффективной терапии.

Если классические рецепторы давно и с успехом используются в качестве скрининг-систем для отбора селективных лигандов рецепторов прогестерона, мембранные рецепторы пока не вовлечены в индустрию создания новых препаратов. Тем не менее, учитывая постоянно пополняющиеся сведения об участии альтернативных рецепторов в патогенезе заболеваний тканей не только репродуктивного тракта, но и иммунной, нервной и сердечно-сосудистой систем, это изучение их роли в развитии гормон-зависимых патологий представляется перспективным направлением в медицине.

1.2. Лиганды рецепторов прогестерона и иммунная система

Доказательствами влияния прогестерона на иммунные клетки являются: увеличение частоты аутоиммунных заболеваний после полового созревания у женщин, изменение функции иммунной системы во время беременности, в лютеиновую фазу овуляторного цикла и после лечения прогестипами, а также исследования in vitro, показавшие непосредственное воздействие прогестерона на иммунокомпетентные клетки крови [53].

Известно, что рецепторы прогестерона находятся и на клетках иммунной системы. Так, они представлены в дендритных клетках, естественных киллерах (NK-клетках), макрофагах, Т- и В-лимфоцитах, [25, 53]. Кроме того, доказательствами влияния прогестерона на иммунные клетки являются: увеличение частоты аутоиммунных заболеваний после полового созревания у женщин, изменение функции иммунной системы во время беременности, в лютеиновую фазу овуляторного цикла и после лечения прогестипами, а также исследования in vitro, показавшие непосредственное воздействие прогестерона на иммунокомпетентные клетки крови [53, 54].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Тихонов, Дмитрий Александрович, 2015 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Ашрафян, JI. А. Опухоли репродуктивных органов (этиология и патогенез) / Л.А. Аршафян, В.И. Киселев. - М.: Димитрейд График Групп, 2007. -216 с.

2. Бассалык, Л.С. Рецепторы стероидных гормонов в опухолях человека / под ред. Л.С. Бассалык. - М.: Медицина, 1987. - 224 с.

3. Берштейн, Л.М. Эндокринно-генотоксические переключения как промотор основных неинфекционных заболеваний / Л.М. Берштейн, Е.В. Цырлина, А.Ю. Ковалевский // Вестник Российской АМН. - 2008. - № 1. - С. 12-17.

4. Васильев, С.А. Различия эффектов импульсно-периодического рентгеновского излучения в опухолевых клетках линии MOLT-4 и лимфоцитах периферической крови человека / С.А. Васильев, A.A. Беленко, О.П. Кутенков, М.А. Большаков, H.H. Лебедев, В.В. Ростов // Сибирский онкологический журнал. -2013.-№2.-С. 45-49.

5. Данлыбаева, Г.А. Цитотоксичность карборанилсодержащих соединений / Г. А. Данлыбаева, А. А. Жылкибаев, В. А. Рыков, В. С. Тритек, Д. В. Силаев, А. Е. Гуляев // Биотехнология. Теория и практика. - 2012. - № 3. - С. 49-54.

6. Добротина, H.A. Теоретическое и практическое значение системности в изучении гомеостаза человека / H.A. Добротина, Т.В. Копытова // Вестник нижегородского университета им. H.H. Лобачевского. - 2012. - № 2. - С. 127-134.

7. Железнов, Б.И. О некоторых гиперпластических процессах эндометрия (вопросы терминологии и тактики врача) / Б.И. Железнов // Акушерство и гинекология. - 1973. - № 5. - С. 1-7.

8. Камерницкий, A.B. Прегна - D'-пентараны - прогестины и антипрогестины I. Разделение биологических функций стероидных гормонов /

A.B. Камерницкий, И.С. Левина // Биоорганическая химия. - 2005. - № 2. - С. 115129.

9. Карева, E.H. Эстрогены и головной мозг / E.H. Карева, О.М. Олейникова,

B.О. Панов // Вестник РАМН. - 2012. - № 2. - С. 48-59.

10. Карева, E.H. Мифепристон и миома матки/ E.H. Карева // Фарматека - 2010. - № 14. - С. 18-30.

11. Карева, E.H. Половые стероиды и иммунитет / E.H. Карева, Л.В. Ганковская, H.J1. Шимановский // Российский иммунологический журнал. - 2012. - № 1.-С. 3-14.

12. Коган, Е.А. Рецепторный статус полипов эндометрия у женщин в постменопаузе / Е.А. Коган, Ш.Н. Саттаров, С.Э. Саркисов, М.А. Бойко, И.О. Мамиконян // Акушерство и гинекология. - 2014. - № 2. - С. 60—66.

13. Кузьмина, И.Ю. Дифференцированные подходы к выбору лечебной тактики у больных с гиперпластическими процессами эндометрия / И.Ю. Кузьмина, Н.М. Пасиешвили, О.Н. Пащенко // Международный медицинский журнал. - 2011. - № 4 - С. 61-64.

14. Кулаков, В.И. Гинекология. Национальное руководство / В.И. Кулаков, Г.М. Савельева, И.Б. Манухина. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. - 1150 с.

15. Радзинский, В.Е. Руководство к практическим занятиям по гинекологии / В.Е. Радзинский. - М. : МИА, 2005. - 520 с.

16. Савельева, Г.М. Гинекология / Г.М. Савельева, В.Г. Бреусенко. - 3-е изд., перераб. и доп. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2007. - 432 с.

17. Савельева, Г.М. Гинекология / Г.М. Савельева, В.Г. Бреусенко. - 4-е изд., перераб. и доп. — М.: ГЭОТАР-Медиа, 2012. — С. 432.

18. Савельева, Г.М. Современные методы диагностики и лечения гиперпластических процессов эндометрия в постменопаузе / Г.М. Савельева, В.Г. Бреусенко, Ю.А. Голова // Международный медицинский журнал. - 2005. - № 2. -С. 73-77.

19. Сергеев, П.В. Биохимическая фармакология / П.В. Сергеев, Н.Л. Шимановский. - М. : Медицинское информационное агентство, 2010 г. - 624 с.

20. Сергеев, П.В. Очерки биохимической фармакологии / П.В. Сергеев, П.А. Галенко-Ярошевский, Н.Л. Шимановский. - М. : "Фармединфо", 1996. - 384 с.

21. Сергеев, П.В. Рецепторы физиологически активных веществ / П.В. Сергеев, H.JI. Шимановский, В.И. Петров. - 2-е изд., перераб. и доп. - М.Волгоград : Изд-во Семь ветров, 1999. - 640 с.

22. Сидорова, И.С. Современный взгляд на проблему гиперпластических процессов в эндометрии / И.С. Сидорова, H.A. Шешукова, A.C. Федотова // Российский вестник акушера-гинеколога. - 2008. - № 5. - С. 1922.

23. Соснина, A.B. Роль цитокинов в патогенезе злокачественных новообразований / A.B. Соснина, Н.В. Великая, А.И. Аутеншлюс. - Новосибирск : Вектор-Бест, 2013. - 80 с.

24. Табакман, Ю.Ю. Рак эндометрия / Ю.Ю. Табакман. - М. : Практическая медицина, 2009. - 176 с.

25. Токмаков, А. А. Внегеномные механизмы действия прогестерона /

A.A. Токмаков, Я. Фуками // Цитология. - 2009. - № 5. - С. 403 - 416.

26. Учакин, П.Н. Нейроэндокринная регуляция иммунитета / П.Н. Учакин, О.Н. Учакина, Б.В. Тобин, Ф.И. Ершов // Вестник Российской АМН. -2007.-№ 9.-С. 26-31.

27. Фисенко, В.П. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред.

B.П. Фисенко. - М. : Ремедиум, 2000. - 398 с.

28. Чепик, О.Ф. Морфогенез гиперпластических процессов эндометрия / О.Ф. Чепик // Практическая онкология. - 2004. - № 1. - С. 9-15.

29. Чернобровкина, А.Е. Важнейшие события в онкогинекологии: результаты к 2010 году и перспективы / А.Е. Чернобровкина // Практическая онкология. - 2011. - № 1. - С. 43-44.

30. Чиссов, В.И. Злокачественные новообразования в России в 2007 году (заболеваемость и смертность) [Электронный ресурс] / В.И. Чиссов, В.В. Старинский, Г.В. Петрова. - М. : ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий», 2009. - Режим доступа: http://w\vw.oncology.ru/service/statistics/.

31. Чиссов, В.И. Состояние онкологической помощи населению России в 2011 году [Электронный ресурс] / В.И. Чиссов, В.В. Старинский, Г.В. Петрова. -М.: ФГУ «МНИОИ им. П.А. Герцена Росмедтехнологий», 2012. - Режим доступа: http://www.oncology.ru/service/statistics/.

32. Шимановский, H.JI. Молекулярная и нанофармакология / Н.Л. Шимановский, М.А. Епинетов, М.Я. Мельников. - М.: ФИЗМАТЛИТ, 2010. - С. 338-389.

33. Яворский, А.Н. Новые знания о лекарственных средствах и информационное обеспечение регуляторного процесса / А.Н. Яворский // Клиническая фармакология и терапия. - 2010. - № 6. - С. 59-60.

34. Aerts, J.L. Evaluation of progesterone receptor expression in eosinophils using real-time quantitative PCR / J.L. Aerts, M.R. Christiaens, P. Vandekerckhove // Biochim Biophys Acta. - 2002. - Vol. 1571. - № 3. - P. 167-72.

35. Arruvito, L. NK cells expressing a progesterone receptor are susceptible to progesterone-induced apoptosis / L. Arruvito, S. Giulianelli, A.C. Flores, N. Paladino, M. Barboza, C. Lanari, L. Fainboim // J Immunol. - 2008. - Vol. 180. - № 8. -P. 5746-53.

36. Balmer, N.N. Steroid receptor coactivator AIB1 in endometrial carcinoma, hyperplasia and normal endometrium: Correlation with clinicopathologic parameters and biomarkers / N.N. Balmer, J.K. Richer, N.S. Spoelstra, K.C. Torkko, P.L. Lyle, M. Singh//Mod Pathol. - 2006. - Vol. 19.-№12.-P. 1593-605.

37. Ben-Hur, II. Menopause is associated with a significant increase in blood monocyte number and a relative decrease in the expression of estrogen receptors in human peripheral monocytes / H. Ben-Hur, G. Мог, V. Insler, I. Blickstein, Y. Amir-Zaltsman, A. Sharp, A. Globerson, F. Kohen // Am J Reprod Immunol. - 1995. - Vol. 34. - № 6. - P. 363-9.

38. Boyum, A. Separation of leukocytes from blood and bone marrow / A. Boyum // Scand. J. Lab. Investig. - 1968 - Vol. 21 - № 97. - P. 1 -9.

39. Butts, C.L. Progesterone inhibits mature rat dendritic cells in a receptor-mediated fashion / C.L. Butts, S.A. Shukair, K.M. Duncan, E. Bowers, C. Horn, E.

Belyavskaya, L. Tonelli, E.M. Sternberg // Int Immunol. - 2007. - Vol. 19. - № 3. - P. 287-96.

40. Chakravarty, D. Estrogen receptor beta (ERbeta) in endometrial simple hyperplasia and endometrioid carcinoma / D. Chakravarty, R. Srinivasan, S. Ghosh, A. Rajwanshi, S. Gopalan // Appl Immunohistochem Mol Morphol. - 2008. - Vol. 16. - № 6.-P. 535-42.

41. Chang, C.P. Non-genomic rapid inhibition of Na+/H+-exchange 1 and apoptotic immunosuppression in human T cells by glucocorticoids / C.P. Chang, S.W. Wang, Z.L. Huang, O.Y. Wang, M.I. Huang, L.M. Lu, D.C. Tarng, C.H. Chien, E.J. Chien // J Cell Physiol. - 2010. - Vol. 223. - № 3. _ p. 679-86.

42. Chen, Y. Mifepristone increases the cytotoxicity of uterine natural killer cells by acting as a glucocorticoid antagonist via ERK activation / Y. Chen, Y. Wang, Y. Zhuang, F. Zhou, L. Huang // PLoS One. - 2012. - Vol. 7. - № 5. - P. 36413.

43. Collins, F. Expression of oestrogen receptors, ERalpha, ERbeta, and ERbeta variants, in endometrial cancers and evidence that prostaglandin F may play a role in regulating expression of ERalpha / F. Collins, S. MacPherson, P. Brown, V. Bombail, A.R. Williams, R.A. Anderson, H.N. Jabbour, P.T. Saunders // BMC Cancer. -2009.-Vol. 9.-P. 330.

44. De Carvalho, S. Differential expression of estrogen and progesterone receptors in endometrial polyps and adjacent endometrium in postmenopausal women / S. de Carvalho, A.B. Campaner, S.M. Lima, M.A. Silva, P.A. Ribeiro // Anal Quant Cytol Histol. - 2011. - Vol. 33. - № 2. - P. 61 -7.

45. Druckmann, R. Progesterone and the immunology of pregnancy / R. Druckmann, M.A. Druckmann // J Steroid Biochem Mol Biol. - 2005. - Vol. 97. -№ 5. -P. 389-96.

46. Ehring, G.R. A nongenomic mechanism for progesterone-mediated immunosuppression: inhibition of K+ channels, Ca2+ signaling, and gene expression in T lymphocytes / G.R. Ehring, H.H. Kerschbaum, C. Eder, A.L. Neben, C.M. Fanger, R.M. Khoury, P.A. Negulescu, M.D. Cahalan // J Exp Med. - 1998. - Vol. 188. - № 9. -P. 1593-602.

47. Engmann, L. Progesterone regulation of human granulosa/luteal cell viability by an RU486-independent mechanism / L. Engmann, R. Losel, M. Wehling, J.J. Peluso // J Clin Endocrinol Metab. - 2006. - Vol. 91. - № 12. - P. 4962-8.

48. Enninga, E.A. Immunomodulatory effects of sex hormones: requirements for pregnancy and relevance in melanoma / E.A. Enninga, S.G. Holtan, D.J. Creedon, R.S. Dronca, W.K. Nevala, S. Ognjanovic, S.N. Markovic // Mayo Clin Proc. - 2014. - Vol. 89. - № 4. - P. 520-35.

49. Falkenstein, E. Multiple actions of steroid hormones-a focus on rapid, nongenomic effects / E. Falkenstein, H.C. Tillmann, M. Christ, M. Feuring, M Wehling // Pharmacol Rev. - 2000. - Vol. 52. - № 4. - P. 513-56.

50. Giangrande, P.H. The opposing transcriptional activities of the two isoforms of the human progesterone receptor are due to differential cofactor binding / P.H. Giangrande, E.A. Kimbrel, D.P. Edwards, D.P. McDonnell // Mol Cell Biol. -2000. - Vol. 20. - № 9. - P. 3102-15.

51. Gul, A. Immunohistochemical expression of estrogen and progesterone receptors in endometrial polyps and its relationship to clinical parameters / A. Gul, M. Ugur, C. Iskender, E. Zulfikaroglu, G. Ozaksit // Arch Gynecol Obstet. -2010. - Vol. 281. -№3.- P. 479-83.

52. Howlader, N. SEER Cancer Statistics Review, 1975-2009 (Vintage 2009 Populations) [Электронный ресурс] / N. Howlader, A.M. Noone, M. Krapcho, N. Neyman, R. Aminou, W. Waldron, S.F. Altekruse, C.L. Kosary, J. Ruhl, Z. Tatalovich, H. Cho, A. Mariotto, M.P. Eisner, D.R. Lewis, H.S. Chen, E.J. Feuer, K.A. Cronin // National Cancer Institute. Bethesda, MD. - 2012. - Режим доступа: http://seer.cancer.gov/csr/1975 2009_pops09/.

53. Hughes, G.C. Progesterone and Autoimmune Disease / G.C. Hughes // Autoimmun Rev. - 2012. - Vol. 11. - № 6-7. - P. 502-514.

54. Hughes, G.C. The intracellular progesterone receptor regulates CD4+ T cells and T cell-dependent antibody responses / G.C. Hughes, E.A. Clark, A.H. Wong // J Leukoc Biol. - 2013. - Vol. 93. - № 3. - P. 369-75.

55. Ibrahim-Quali M. Recent advances in oxasteroid chemistry / M. Ibrahim-Quali // Steroids. - 2007. Vol. 72. - № 6-7. - P. 475-508.

56. Inceboz, U.S. Hormone receptor expressions and proliferation markers in postmenopausal endometrial polyps / U.S. Inceboz, N. Nese, Y. Uyar, H.T. Ozcakir, O. Kurtul, Y.B. Baytur, A.R. Kandiloglu, H. Caglar, I.S. Fraser // Gynecol Obstet Invest. -2006. - Vol. 61. - № 1. - p. 24-8.

57. Ivvai, K. Prognostic significance of progesterone receptor immunohistochemistry for lymph node metastases in endometrial carcinoma / K. Iwai, K. Fukuda, T. Hachisuga, M. Mori, M. Uchiyama, T. Iwasaka, H. Sugimori // Gynecol Oncol. - 1999. - Vol. 72. - № 3. - P. 351-9.

58. Jarboe, E.A. Endometrial intraepithelial neoplasia / E.A. Jarboe, G.L. Mutter//Semin Diagn Pathol. - 2010. - Vol. 27. -№ 4. - P. 215-25.

59. Jazaeri, A.A. Well-differentiated endometrial adenocarcinomas and poorly differentiated mixed mullerian tumors have altered ER and PR isoform expression / A.A. Jazaeri, K.J. Nunes, M.S. Dalton, M. Xu, M.A. Shupnik, L.W. Rice // Oncogene. - 2001. - Vol. 20. - № 47. - P. 6965-9.

60. Jeon, Y.T. Steroid receptor expressions in endometrial cancer: clinical significance and epidemiological implication / Y.T. Jeon, I.A. Park, Y.B. Kim, J.W. Kim, N.H. Park, S.B. Kang, H.P. Lee, Y.S. Song // Cancer Lett. - 2006. - Vol. 239. - № 2. - P. 198-204.

61. Jones, L.A. Differential modulation of TLR3- and TLR4-mediated dendritic cell maturation and function by progesterone / L.A. Jones, S. Kreem, M. Shweash, A. Paul, J. Alexander, C.W. Roberts // J Immunol. - 2010. - Vol. 185. - № 8. - P. 4525-34.

62. Jongen, V. Expression of estrogen receptor-alpha and -beta and progesterone receptor-A and -B in a large cohort of patients with endometrioid endometrial cancer / V. Jongen, J. Briet, R. de Jong, K. ten Hoor, M. Boezen, A. van der Zee, H. Nijman, H. Hollema // Gynecol Oncol. - 2009. - Vol. 112. - № 3. - P. 537-42.

63. Kamat, A.A. EphA2 overexpression is associated with lack of hormone receptor expression and poor outcome in endometrial cancer / A.A. Kamat, D. Coffey,

W.M. Merritt, E. Nugent, D. Urbauer, Y.G. Lin, C. Edwards, R. Broaddus, R.L. Coleman, A.K. Sood // Cancer. - 2009. -Vol. 115. - № 12. - P. 2684-92.

64. Kidd, P. Thl/Th2 balance: the hypothesis, its limitations, and implications for health and disease / P. Kidd // Altern Med Rev. - 2003. - Vol. 8. - № 3. - P. 223-46.

65. Kowalik, M.K. The putative roles of nuclear and membrane-bound progesterone receptors in the female reproductive tract / M.K. Kowalik, R. Rekawiecki, J. Kotwica // Reprod Biol. - 2013. - Vol. 13. - № 4. - P. 279-89.

66. Kudela, M. Prognostic importance of selected molecular immunohistochemical markers and DNA ploidy in endometrial cancer / M. Kudela, R. Pilka, M. Lubusky, P. Hejtmanek, P. Dzubak, S. Brychtova // Eur J Gynaecol Oncol. -2012. - Vol. 33. - № 2. - P. 159-63.

67. Lopes, R.G. Analysis of estrogen- and progesterone-receptor expression in endometrial polyps / R.G. Lopes, E.C. Baracat, L.C. de Albuquerque Neto, J.F. Ramos, S. Yatabe, D.B. Depesr, U.G.Lippi // J. Minim Invasive Gynecol. - 2007. -Vol. 14.-№3.-P. 300-3.

68. Lusher, S.J. X-ray structures of progesterone receptor ligand binding domain in its agonist state reveal differing mechanisms for mixed profiles of lip-substituted steroids / S.J. Lusher, H.C. Raaijmakers, D. Vu-Pham, B. Kazemier, R. Bosch, R. McGuire, R. Azevedo, H. Hamersma, K. Dechering, A. Oubrie, M. van Duin, J. de Vlieg // J Biol Chem. - 2012. - Vol. 287. - № 24. - P. 20333-43.

69. Lysenko, O.N. Immunohistochemical study of the expression of receptors to steroid hormones in endometrial hyperplastic processes / O.N. Lysenko, M. Kh. Ashkhab, N.V. Strizhova, I.I. Babichenko // Arkh Patol. - 2004. - Vol. 66. - № 2. -P. 7-10.

70. Maeda, Y. Effect of progesterone on Thl/Th2/Thl7 and regulatory T cell-related genes in peripheral blood mononuclear cells during pregnancy in cows / Y. Maeda, H. Ohtsuka, M. Tomioka, M. Oikawa // Vet Res Commun. - 2013. - Vol. 37. -№ 1. - P.43-9.

71. Mariani, A. HER-2/neu overexpression and hormone dependency in endometrial cancer: analysis of cohort and review of literature / A. Mariani, T.J. Sebo, J.A. Katzmann, D.L. Riehle, S.C. Dowdy, G.L. Keeney, T.G. Lesnick, K.C. Podratz // Anticancer Res. - 2005. - Vol. 25. - № 4. - P. 2921-7.

72. Markova, I. Selected immunohistochemical prognostic factors in endometrial cancer / I. Markova, M. Duskova, M. Lubusky, M. Kudela, J. Zapletalova, M. Prochazka, R. Pilka // Int J Gynecol Cancer. - 2010. - Vol. 20. - № 4. - P. 576-82.

73. Matsuzaki, J. Immunosteroid as a regulator for Thl/Th2 balance: its possible role in autoimmune diseases / J. Matsuzaki, T. Tsuji, I. Imazeki, H. Ikeda, T. Nishimura // Autoimmunity. - 2005. - Vol. 38. - № 5. - P. 369-75.

74. Molloy, E.J. Sex-specific alterations in neutrophil apoptosis: the role of estradiol and progesterone / E.J. Molloy, A.J. O'Neill, J.J. Grantham, M. Sheridan-Pereira, J.M. Fitzpatrick, D.W. Webb, R.W. Watson // Blood. - 2003. - Vol. 102. - № 7.-P. 2653-9.

75. Morville, R. The bioavailability of natural progesterone given by mouth. Measurement of steroid concentrations in plasma, endometrium and breast tissue / R. Morville, F. Dray, J. Reynier, J. Barrat // J Gynecol Obstet Biol Reprod. - 1982. - Vol. ll.-№3.-P. 355-63.

76. Mutter, G.L. Benign endometrial hyperplasia sequence and endometrial intraepithelial neoplasia / G.L. Mutter, R.J. Zaino, J.P. Baak, R.C. Bentley, S.J. Robboy // Int. J. Gynecol. Pathol. - 2007. - Vol. 26. - № 2. - P. 103-114.

77. Mylonas, I. Normal and malignant human endometrium express immunohistochemically estrogen receptor alpha (ER-alpha), estrogen receptor beta (ER-beta) and progesterone receptor (PR) / I. Mylonas, U. Jeschke, N. Shabani, C. Kuhn, S. Kriegel, M.S. Kupka, K. Friese // Anticancer Res. - 2005. - Vol. 25. - № 3A. -P. 1679-86.

78. Ndiaye, K. Progesterone effects on lymphocytes may be mediated by membrane progesterone receptors / K. Ndiaye, D.H. Poole, S. Walusimbi, M.J. Cannon, K. Toyokawa, S.W. Maalouf, J. Dong, P. Thomas, J.L. Pate // J Reprod Immunol. -2012. - Vol. 95. - № 1 -2. - P. 15-26.

79. Orejuela, F.J. Estrogen and progesterone receptors and cyclooxygenase-2 expression in endometrial cancer, endometrial hyperplasia, and normal endometrium / F.J. Orejuela, L.M. Ramondetta, J. Smith, J. Brown, L.B. Lemos, Y. Li, L.M. Hollier // Gynecol Oncol. - 2005. - Vol. 97. - № 2. - P. 483-8.

80. O'Toole, S.A. Oestrogen regulated gene expression in normal and malignant endometrial tissue / S.A. O'Toole, E. Dunn, B.L. Sheppard, O. Sheils, J.J. O'Leary, W. Wuttke, D. Seidlova-Wuttke // Maturitas. - 2005. - Vol. 51. - № 2. - P. 187-98.

81. Pauklin, S.Progesterone inhibits activation-induced deaminase by binding to the promoter / S. Pauklin, S.K. Petersen-Mahrt // J Immunol. - 2009. - Vol. 183. -№2.-P. 1238-44.

82. ......Petrlova, B. Comparison of steroid metabolism markers in

endometrium of women with endometriosis, endometrial hyperplasia and without pathological changes of endometrium / B. Petrlova, V. Hejda, Z. Ulcova-Gallova, P. Mukensnabl, Z. Rokyta // Ceska Gynekol. - 2004. - Vol. 69. - № 3. - P. 218-24.

83. Pieczycska, B. Analysis of PTEN, estrogen receptor and progesterone receptor expression in endometrial hyperplasia using tissue microarray / B. Pieczynska, S. Wojtylak, A. Zawrocki, W. Biernat // Pol J Pathol. - 2011. - Vol. 62. - № 3. - P. 133-8.

84. Plataniotis, G., Castiglione M. Endometrial cancer: ESMO Clinical Practice Guidelines for diagnosis, treatment and follow-up / G. Plataniotis, M. Castiglione // Ann Oncol. - 2010. - Vol. 21. - № 5. - P. 67-76.

85. Reed, S.D. Incidence of endometrial hyperplasia / S.D. Reed, K.M. Newton, W.L. Clinton, M. Epplein, R. Garcia, K. Allison, L.F. Voigt, N.S. Weiss // Am J Obstet Gynecol. - 2009. Vol. 200. - № 6. - P. 678.

86. Robinson-Rechavi, M. The nuclear receptor superfamily / M. Robinson-Rechavi, G. H. Escriva, V. Laudet // J Cell Sci. - 2003. - Vol. 116. - Pt. 4. - P. 585-6.

87. Samarnthai, N. Molecular Profiling of Endometrial Malignancies [Электронный ресурс] /N. Samarnthai, K. Hall, I.T. Yeh // Obstet Gynecol Int. - 2010. - Режим доступа: http://www.hindawi.com/iournals/ogi/2010/162363/

88. Sánchez Anguiano, L.F. Estrogenic receptors in hyperplasia and endometrial adenocarcinoma: immunohystochemical study with image analysis / L.F. Sánchez Anguiano, L. Puente Ledesma, E.F. Lares Bayona, R.H. Milla Villeda // Ginecol Obstet Mex. - 2007. - Vol. 75. - № 9. - P. 501 -8.

89. Schmittgen, T. D. Analyzing real-time PCR data by the comparative CT method / T. D. Schmittgen, K. J. Livak //Nat Protoc. - 2008. - Vol. 3. - № 6. - P. 11018.

90. Schubert, A.K. Effects of progesterone antagonists on the eosinophilic granulocytes in the rat uterus / A.K. Schubert // Ann Anat. - 1998. - Vol. 180. - № 5. P. 401-8.

91. Silverberg, S.G. Endometrial Tumours and related Lesions. WHO Classifications of Tumours, Pathology & Genetics. Tumours of the Breast and Female Genital Organs / S.G. Silverberg, G.L. Mutter, P.A. Kubik-Huch, F.A. Tavassoli -Lyon, France: IARC Press, 1994. - P. 221-232.

92. Smith, H.O. GPR30: a novel indicator of poor survival for endometrial carcinoma / H.O. Smith, K.K. Leslie, M. Singh, C.R. Quails, C.M. Revankar, N.E. Joste, E.R. Prossnitz // Am J Obstet Gynecol. - 2007. - Vol. 196. - № 4. - P. 386.el -9.

93. Smuc, T. Aberrant pre-receptor regulation of estrogen and progesterone action in endometrial cancer / T. Smuc, T.L. Rizner // Mol Cell Endocrinol. - 2009. Vol. 301. -№ 1-2.-P. 74-82.

94. Snider, H. Sex hormones and modulation of immunity against leishmaniasis / H. Snider, C. Lezama-Davila, J. Alexander, A.R. Satoskar // Uroimmunomodulation. - 2009. - Vol. 16.-№ 2. - P. 106-13.

95. Srijaipracharoen, S. Expression of ER, PR, and Her-2/neu in endometrial cancer: a clinicopathological study / S. Srijaipracharoen, S. Tangjitgamol, S. Tanvanich, S. Manusirivithaya, J. Khunnarong, T. Thavaramara, S. Leelahakorn, K. Pataradool // Asian Pac J Cancer Prev. - 2010. - Vol. 11. - № 1. - P. 215-20.

96. Stanczyk, F.Z. Progestogens used in postmenopausal hormone therapy: differences in their pharmacological properties, intracellular actions, and clinical effects

/ F.Z. Stanczyk, J.P. Hapgood, S. Winer, D.R. Jr. Mishell //Endocr Rev. - 2013. - Vol. 34. -№2.-P. 171-208.

97. Stoian, S.C. Endometrial carcinomas: correlation between ER, PR, Ki67 status and histopathological prognostic parameters / S.C. Stoian, C. Simionescu, C. Margaritescu, A. Stepan, M. Nurciu // Rom J Morphol Embryol. - 2011. - Vol. 52. - № 2.-P. 631-6

98. Su, L. Progesterone inhibits Toll-like receptor 4-mediated innate immune response in macrophages by suppressing NF-kappaB activation and enhancing SOCS1 expression / L. Su, Y. Sun, F. Ma, P. Lu, H. Huang, J. Zhou // Immunol Lett. -2009.-Vol. 125,-№2.-P. 151-5.

99. Suba, Z. Carcinogenesis theory based on estrogen deficiency / Z. Suba // Orv Hetil. - 2009. - Vol. 150. - № 25. - P. 1155-66.

100. Suthipintawong, C. Prognostic significance of ER, PR, Ki67, c-erbB-2, and p53 in endometrial carcinoma / C. Suthipintawong, C. Wejaranayang, C. Vipupinyo // J Med Assoc Thai. - 2008. - Vol. 91. - № 12. - P. 1779-84.

101. Tait, A.S. The role of glucocorticoids and progestins in inflammatory, autoimmune, and infectious disease / A.S. Tait, C.L. Butts, E.M. Sternberg // J Leukoc Biol. - 2008. - Vol. 84. - № 4. - P. 924-31.

102. Tanenbaum, D.M. Crystallographic comparison of the estrogen and progesterone receptor's ligand binding domains / D.M. Tanenbaum, Y. Wang, S.P. Williams, P.B. Sigler // Proc Natl Acad Sci USA.- 1998. - Vol. 95. - № 11. - P. 5998-6003.

103. Taylor, R.N. Promegestone (R5020) and mifepristone (RU486) both function as progestational agonists of human glycodelin gene expression in isolated human epithelial cells / R.N. Taylor, J.F. Savouret, C. Vaisse, J.L. Vigne, I. Ryan, D. Hornung, M. Seppala, E. Milgrom // J Clin Endocrinol Metab. - 1998. - Vol. 83. - № 11.-P. 4006-12.

104. Teleman, S. An immunohistochemical study of the steroid hormone receptors in endometrial hyperplasia / S. Teleman, M. Hilgarth, N. Freudenberg, H.

Bettendorf, M.S. Mihailovici // Rev Med Chir Soc Med Nat Iasi. - 1999. - Vol. 103. -№ 1-2.-P. 138-41.

105. Thomas, P. Steroid and G protein binding characteristics of the seatrout and human progestin membrane receptor alpha subtypes and their evolutionary origins / P. Thomas, Y. Pang, J. Dong, P. Groenen, J. Kelder, J. de Vlieg, Y. Zhu, C. Tubbs // Endocrinology. - 2007. - Vol. 148. - № 2. - P.705-18.

106. Vandenput, I. Evolution in endometrial cancer: evidence from an immunohistochemical study /1. Vandenput, J. Trovik, K. Leunen, E. Wik, I. Stefansson, L. Akslen, P. Moerman, I. Vergote, H. Salvesen, F. Amant // Int J Gynecol Cancer. -2011.-Vol. 21,-№2.-P. 316-22.

107. Vrachnis, N. Immune aspects and myometrial actions of progesterone and CRH in labor [электронный ресурс] / N. Vrachnis, F.M. Malamas, S. Sifakis, P. Tsikouras, Z. Iliodromiti // Clin Dev Immunol. - 2012. - Vol. 2012. - Режим доступа: http://dx.doi.org/10.1155/2012/937618

108. Witkiewicz, A.K. Increased natural killer cells and decreased regulatory T cells are seen in complex atypical endometrial hyperplasia and well-differentiated carcinoma treated with progestins / A.K. Witkiewicz, T. McConnell, M. Potoczek, R.V. Emmons, R.J. Kurman // Hum Pathol. - 2010. - Vol. 41. - № 1. - P. 26-32.

109. Wolfson, M.L. Progesterone reverts LPS-reduced FAAH activity in murine peripheral blood mononuclear cells by a receptor-mediated fashion / M.L. Wolfson, J. Aisemberg, A.I. Salazar, A.P. Domínguez Rubio, С.A. Vercelli, A.M. Franchi // Mol Cell Endocrinol. -2013. - Vol. 381. - № 1-2. - P. 97-105.

110. Xu, Y. Immunosuppressive effect of progesterone on dendritic cells in mice / Y. Xu, H. He, C. Li, Y. Shi, Q. Wang, W. Li, W. Song // J Reprod Immunol. -2011. - Vol. 91. - № 1-2. - P. 17-23.

111. Yao, Y.Y. Relationships between the molecular biomarkers and the clinicopathologic features and prognosis in endometrial carcinoma / Y.Y. Yao, W.Z. Xu, Y. Wang, D.H. Shen, J.L. Wang, L.H.Wei // Beijing Da Xue Xue Bao. - 2011. -Vol. 43.-№5.-P. 743-8.