Микроорганизмы-антагонисты Botrytis cinerea Pers.ex.Fr. и эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.01.11, кандидат биологических наук Храбрых, Олеся Леонидовна

• Храбрых, Олеся Леонидовна
• кандидат биологических наук
• 2007

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Храбрых, Олеся Леонидовна

ВВЕДЕНИЕ

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Значение земляники садовой в Западной Сибири

1.2 Вредоносность Botrytis cinerea на землянике садовой

1.3 Защитные мероприятия против серой гнили

1.3.1 Профилактические

1.3.2 Химические средства защиты и устойчивость

Botrytis cinerea к ним

1.3.3 Биологический контроль

2. ОБЪЕКТЫ, МЕТОДИКА И УСЛОВИЯ ПРОВЕДЕНИЯ ЛАБОРАТОРНЫХ И ПОЛЕВЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

2.1 Материалы и методы проведения лабораторных экспериментов in vitro

2.1.1 Культивирование Botrytis cinerea

2.1.2 Культивирование бактерий родов Pseudomonas и Bacillus

2.1.3 Культивирование грибов рода Trichoderma

2.1.4 Культивирование дрожжевых грибов

2.1.5 Инокуляция агаризованной среды полезными микроорганизмами и Botrytis cinerea

2.1.6 Инокуляция жидкой среды

2.2 Условия и методика проведения полевых опытов в 2005-2007 гг.

2.2.1 Климатические условия в годы проведения исследований

2.2.2 Почвенные условия участка

2.2.3 Характеристика сортов земляники садовой

2.2.4 Характеристика биологических препаратов

2.2.5 Методика опрыскивания и учета пораженных ягод серой гнилью

3. ВЗАИМООТНОШЕНИЕ БАКТЕРИЙ РОДОВ PSEUDOMONAS, BACILLUS И ГРИБА-ПАТОГЕНА BOTRYTIS CINEREA

3.1 Взаимоотношение бактерий родов Pseudomonas,

Bacillus и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде

3.2 Проявление антагонистических свойств бактерий по отношению к Botrytis cinerea в жидкой среде

3.3 Влияние бактерий на радиальный рост Botrytis cinerea

4. АНТАГОНИЗМ МЕЖДУ ГРИБАМИ РОДА TRICHО DERM А

И ГРИБОМ-ПАТОГЕНОМ BOTRYTIS CINEREA

4.1 Взаимоотношение Trichoderma и Botrytis cinerea на агаризованной среде

4.2 Влияние Trichoderma на радиальный рост Botrytis cinerea

5. ДРОЖЖЕВЫЕ ГРИБЫ - ИНГИБИТОРЫ РОСТА И РАЗВИТИЯ

BOTRYTIS CINEREA

5.1 Взаимоотношение дрожжевых грибов и гриба-патогена Botrytis cinerea на агаризованной среде

5.2 Влияние изолятов дрожжевых грибов на радиальный рост Botrytis cinerea

5.3 Ингибирование роста Botrytis cinerea в жидкой среде

6. ЭФФЕКТИВНОСТЬ БИОПРЕПАРАТОВ ПРОТИВ

СЕРОЙ ГНИЛИ НА ЗЕМЛЯНИКЕ САДОВОЙ IN VIVO

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Микроорганизмы-антагонисты Botrytis cinerea Pers.ex.Fr. и эффективность биологических препаратов против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области»

В настоящее время химический метод защиты растений является самым распространенным и эффективным методом борьбы с болезнями растений. За короткие сроки снижая степень поражения растения возбудителем, средства химизации имеют ряд негативных характеристик. Одним из существенных недостатков применения химических средств борьбы является их накопление в зрелой продукции, что в последнее время вызывает массу недовольств со стороны потребителя. Зафиксировано отрицательное действие средств химизации на окружающую среду, а также их участие в появлении резистентных штаммов патогенов.

Серая гниль, возбудителем которой является Botrytis cinerea Pers. ex. Fr. -распространенное заболевание многих сельскохозяйственных культур, которое ведет к серьезным экономическим потерям. Более того, этот гриб-патоген относится к ряду опасных фитопатогенов (Suty et al., 1999) с высокой степенью развития устойчивости не только к химическим средствам защиты, но и к антибиотикам, синтезируемым полезной бактерией Pseudomonas fluorescens (Schoonbeek et al., 2002), что усиливает необходимость поиска новых биологических агентов.

Гриб Trichoderma, бактерии рода Pseudomonas, Bacillus зарекомендовали себя как биологические агенты - антагонисты возбудителя серой гнили. В конце 80-х годов гриб Trichoderma являлся наиболее изученным микроорганизмом, который рассматривался как потенциальный биологический агент для подавления роста и развития растительных патогенов (Punja, 2003). Известно, что грибы рода Trichoderma продуцируют вторичные метаболиты с широким спектром антимикробной активности, такие как глиотоксин и глиовирин (Howell, 2003), а также конкурируют с фитопатогенами за питательные вещества и нишу. Явление антагонизма бактерий рода Pseudomonas и Bacillus ко многим микромицетам обусловлена в первую очередь синтезом широкого спектра соединений антибиотической природы (Katz, 1977; Raaijmakers, 1999). Известностью пользуются антибиотики, продуцируемые Pseudomonas fluorescens, 2.4-Диацетилфлорглюцин (2.4-ДАФГ), пирролнитрин и феназины (феназин-1-карбоновая кислота, феназин-1-карбоксамид).

Существенный вклад в разработке биологических препаратов был достигнут за последние 10 лет (Paulitz, 2001) и большинство продуктов нарабатываются как раз на основе грибов Trichoderma (Триходермин, Триходекс) или бактерий Pseudomonas и Bacillus (Планриз, Псевдобактерин, Фитоспорин, Серенадэ). На основе Trichoderma harzianum штамм Т-39, полученного в Центре Волкани Израиля, производится препарат Триходекс, который подавляет рост и развитие Botrytis cinerea (Paulitz, 2001). На основе Bacillus subtilis штамм QST713 в США производят препарат Серенадэ (Paulitz, 2001), применяемый против Botrytis cinerea.

Дрожжевые грибы являются менее изученным объектом для применения в качестве биологического агента для подавления роста и развития Botrytis cinerea, но, как показывают результаты исследований, с огромным потенциалом для использования в практике защиты растений. Одним из главных факторов биологической активности дрожжевых грибов является способность клеток прикрепляться к гифам мицелия патогена, тем самым обеспечивая эффективную работу энзимам, деградирующим клеточную стенку (Cook, et al., 1997). Дрожжевые грибы, действуя, в основном, через конкуренцию за питательные вещества и нишу, не синтезируют токсичные вещества с негативным влиянием на здоровье человека, животных и окружающую среду.

Обладая высокой степенью развития устойчивости к химическим фунгицидам и антибиотикам, синтезируемым биологическими агентами, поиск новых микроорганизмов-антагонистов Botrytis cinerea является актуальной задачей, особенно в эпоху биологизации сельскохозяйственного производства.

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Цель исследований заключалась в поиске новых биологических агентов для подавления роста и развития патогена Botrytis cinerea и апробации биологических препаратов, производимых на основе уже известных запатентованных штаммов Pseudomonas и Trichoderma, против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.

Для реализации этой цели были поставлены следующие задачи:

• проанализировать взаимоотношения возбудителя серой гнили Botrytis cinerea и бактерий родов Pseudomonas и Bacillus при различных условиях культивирования in vitro;

• изучить влияние различных титров бактериального инокулюма Pseudomonas и Bacillus на рост патогена;

• определить характер взаимоотношений между грибом-патогеном и грибами рода Trichoderma in vitro',

• выявить антагонистическую активность изолятов дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea на агаризованной и в жидкой средах in vitro;

• определить эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma против серой гнили на земляники садовой in vivo.

Основные положения, выносимые на защиту:

• возможность использования более широкого разнообразия биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea;

• эффективность биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.

Научная новизна. Впервые детально изучена способность штаммов Р. fluorescens PfI543, P. brassicacearum 1112, В. subtilis SLU3, В. subtilis FDK21 ингибировать рост и развитие возбудителя серой гнили Botrytis cinerea. Проанализирована способность Bacillus subtilis штамм QST713, на основе которого в США производится препарат Серенадэ (Paulitz, 2001), подавлять рост и развитие патогена in vitro. Изучено действие различных титров бактериального инокулюма Pseudomonas и Bacillus на продуктивность спор и рост мицелия Botrytis cinerea в жидкой среде. Впервые изучены взаимоотношения между грибом-патогеном и грибом Trichoderma viride штамм Омский in vitro, а также оценена эффективность препарата Триходермин на основе данного штамма. Впервые изучен характер взаимоотношений новых, ранее неизученных изолятов дрожжевых грибов и возбудителя заболевания серая гниль при различных условиях культивирования. Дана оценка эффективности биологических препаратов, производимых на основе запатентованных штаммов Pseudomonas и Trichoderma, против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области.

Практическая ценность. Продемонстрирована возможность использования в целях защиты сельскохозяйственных культур от возбудителя серой гнили Botrytis cinerea разнообразия бактерий родов Pseudomonas и Bacillus. Исследован характер взаимоотношений патогена и грибов рода Trichoderma, включая штамм Омский. Выявлена антифунгальная активность дрожжевых грибов по отношению к Botrytis cinerea. Показана эффективность и целесообразность применения биологических препаратов на основе Pseudomonas и Trichoderma для снижения степени поражения серой гнилью земляники садовой в условиях Омской области.

Апробация результатов диссертации. Основные материалы диссертации были представлены на российской научно-практической Конференции, посвященной 100-летию со дня рождения Е.В. Талалаева (Иркутск, 2002 г), на HI Всероссийской научной молодежной конференции "Под знаком Сигма" (Омск, 2005 г), на Всероссийском съезде по защите растений "Фитосанитарное оздоровление экосистем" (г. Санкт-Петербург, 2005 г.), на научно-практической конференции профессорско-преподавательского состава и аспирантов ФГОУ ВПО "Омский государственный аграрный университет" (г. Омск, 2006 г.).

Публикация результатов исследований. По результатам исследований опубликовано 9 печатных работ, 3 из них в зарубежных источниках, в т.ч. в журналах "Омский научный вестник", "Аграрный вестник Урала". Федеральное государственное унитарное предприятие "Всероссийский научно-технический информационный центр" зарегистрировало интеллектуальный продукт под названием "Методика обработки земляники садовой Fragaria grandiflora Ehrh. против серой гнили Botrytis cinerea в условиях Западной Сибири" под номером 73200500276 от 29.12.2005.

Структура и объем диссертации. Диссертационная работа состоит из введения, 6 глав, выводов, практических рекомендаций, приложения, библиографического списка, состоящего из 171 наименований, в том числе 134 работ иностранных авторов. Работа изложена на 138 страницах машинописного текста, содержит 23 рисунка и 18 таблиц.

Заключение диссертации по теме «Защита растений», Храбрых, Олеся Леонидовна

ВЫВОДЫ И РЕКОМЕНДАЦИИ ПРОИЗВОДСТВУ

На основании результатов лабораторных исследований и полевых испытаний были получены следующие выводы:

1. Бактерии Pseudomonas Jluorescens штамм Pfl543 в титре бактериального инокулюма 3*106 клеток/мл, Bacillus subtilis штамм QST713 и Bacillus п subtilis штамм FDK21 в титре инокулюма 3*10 клеток/мл ингибируют рост и развитие Botrytis cinerea, предположительно, вследствие синтеза антибиотика. На основании этого перечисленные штаммы могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили Botrytis cinerea;

2. Штамм Омский Trichoderma viride проявил антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea только при условии предварительной инокуляции питательной среды и может быть рекомендован к использованию в качестве биологического агента;

3. Отсутствие роста патогена в присутствии грибов рода Trichoderma artoviride PI и Trichoderma harzianum T39 при титре инокулюма 3*106 спор/мл свидетельствует о целесообразности их использования в качестве биологических агентов;

4. Дрожжевые грибы Aureobasidium pullulans CF10, Aureobasidium pullulans CF40, Cryptococcus laurentii DSM70766, Candida sake DSM70763, Hanseniaspora uvarum DSM2768, Metschnikowia pulcherrima 3, Metschnikowia pulcherrima 4, Metschnikowia pulcherrima MSK1, Pichia guilliermondii DSM6381, Yeastisolate 5, Yeastisolate 6, 1T2 и 2Tla проявляют антагонистическую активность по отношению к Botrytis cinerea и могут быть рекомендованы к использованию в качестве биологических агентов для подавления роста и развития возбудителя серой гнили;

5. Эффективность биологического препарата Псевдобактерина-2, производимого на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, против возбудителя заболевания серая гниль на сортах Павловчанка и Фея, составляющая 73.4% и 66.8% соответственно, статистически не отличается от эффективности химического препарата Фундазол;

6. Эффективность препаратов на основе Trichoderma viride штамм Омский и Trichoderma harzianum штамм 1820 против возбудителя серой гнили составляет 62.7% на сорте раннего срока созревания Павловчанка и статистически не уступает эффективности фунгицида Фундазол 50%» с.п.;

7. Эффективность препарата Триходермин на основе Trichoderma viride штамм Омский против серой гнили составляет 63.4% на сорте среднего срока созревания Фея и статистически не уступает эффективности химического препарата Фундазол 50%» с.п.;

8. Эффективность биологического препарата Планриз, производимого на основе Pseudomonas fluorescens штамм АР-33, при обработке земляники сорта Павловчанка и Фея против серой гнили составляет 49.6% и 60.8% соответственно, которая существенно ниже эффективности химического эталона, свидетельствует о нецелесообразности его использования в целях защиты земляники садовой от серой гнили.

Результаты полевых опытов позволяют сделать следующие рекомендации производству:

1. Биологический препарат Псевдобактерин-2, производимый на основе Pseudomonas aureofascens штамм BS 1393, рекомендуется к использованию в качестве средства защиты против серой гнили на землянике садовой в условиях Омской области с соблюдением титра у

2*10 клеток/мл рабочей суспензии при трехкратном опрыскивании растений в фазу цветения с семидневным интервалом;

2. Рекомендуется создание и использование препаратов на основе Trichoderma viride штамм Омский и Trichoderma harzianum штамм 1820 против серой гнили на сорте раннего срока созревания Павловчанка в условиях Омской области с титром 5*106 спор/мл рабочей суспензии при опрыскивании растений трехкратно с семидневным интервалом, начиная с фазы «начало цветения»;

3. Биологический препарат Триходермин на основе Trichoderma viride штамм Омский рекомендуется к использованию против Botrytis cinerea на землянике садовой сорта Фея в условиях Омской области при трехкратном опрыскивании растений с семидневным интервалом в фазу цветения с соблюдением титра 5*106 спор/мл рабочей суспензии.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Храбрых, Олеся Леонидовна, 2007 год

1. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2004. - 111 с.

2. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2005. - 113 с.

3. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2006. - 110 с.

4. Агроклиматический бюллетень. Омск, 2007. - 108 с.

5. Агроклиматический справочник. Москва, 1953. - 126 с.

6. Актуганов, Г.Э. Хитинолитическая активность бактерий Bacillus Cohn.-антагонистов фитопатогенных грибов. / Г.Э Актуганов, А.И. Мелентьев, Л.Ю. Кузьмина, Н.Ф. Галимзянова, А.В. Широков //Микробиология. 2003. - Том 72. - Номер 3 (Май-Июнь). - С. 356-360.

7. Алексеева, С.А. Культура земляники в Кабардино-Балкарии. / С.А. Алексеева, Т.К. Шогенова, М.П. Артанова // Защита и карантин растений. 2004. - № 9. -С. 49-50.

8. Барайщук, Г.В. Биологическая защита растений. / Г.В. Барайщук // Учеб. пособие. Омск: Изд-во ФГОУ ВПО ОмГАУ. 2006. - 144 с.

9. Белых, A.M. Земляника в Сибири / A.M. Белых // РАСХН. Сиб. отд-ние. НЗПЯОС им. И.В. Мичурина. Новосибирск, 2000.- 110 с.

10. Быстрая, Г.В. Защита виноградников от вредителей и болезней. / Г.В. Быстрая // Защита и карантин растений. 2004. - № 9. - С. 58-59.

11. Голышин, Н. М. Фунгициды в сельском хозяйстве. / Н.М. Голышин // Учебник. 2-е изд перераб. и доп. - М.: Колос, 1982. - 271 с.

12. Гулиий, В.В. Микроорганизмы, полезные для биометода. / В.В. Гулиий, Т.В. Теплякова, Г.М. Иванов // Издательство Наука. Сибирское отделение, Новосибирск, 1998. ~ t'

13. Доспехов, Б.А. Дисперсионный анализ данных многофакторного опыта. Методика полевого опыта: (С основами статистической обработки результатов исследований). / Б.А. Доспехов // Изд. 4-ое, перераб. и доп. Москва: Колос, 1979.-416 с.

14. Коломиец, Э.И. Биологические препараты на смену химическим. / Э.И. Коломиец, Т. В. Романовская, Н.А. Здор // Защита и карантин растений. - 2006. -№10.-С. 18-20.

15. Лутов, В.И. Земляника в промышленном саду. / В.И. Лутов // Научно-экономические проблемы регионального садоводства: Материалы научно-практической конференции, г. (Барнаул, 4-6 марта 2002). Барнаул, 2003. -С.120-129.

16. Монастырский, О.А. Биозащита зерновых культур от токсикогенных микроорганизмов / О.А.Монастырский // Защита и Карантин растений. 2003. -№:2. - С. 5-8.

17. Надыкта, В.Д. Перспективы биологической защиты растений от фитопатогенных микроорганизмов / В.Д. Надыкта // Защита и Карантин растений. 2004. - №6. - С.26-28.

18. Натальина, О. Б. Болезни ягодников. / О. Б. Натальина // М. 1963. -245 с.

19. Осипов, Ю.В. Земляника: возделывание с минимальными затратами труда. / Ю.В. Осипов //М.: Росагропромиздат, 1989. 32с.

20. Рейнгард, Я. Р. Диагностика и классификация почв Омской области и их сельскохозяйственное использование: учеб. пособие / Я. Р. Рейнгард, Л. Н. Мищенко, А. А. Неупокоев, В. И. Убогов, А.И. Семенкин // Омск, 1990. 62 с.

21. Рудаков, О.Л. Защита овощных культур закрытого грунта от корневых гнилей и болезней увядания / О.Л. Рудаков, В.О. Рудаков // Защита и карантин растений. 2000. - № 10

22. Рыжков, А. П. Сибирское плодоводство / А. П. Рыжков // Часть II. Учеб. пособие ОмСХИ. Омск, 1993. - 200 с.

23. Сизенко, Ю.М. Интенсификация производства земляники за рубежом. / Ю.М. Сизенко // Москва, 1989. 55 с.

24. Соловьева, А.Е. Технологические основы питомниководства земляники садовой. /А.Е.Соловьева, A.M. Белых//Новосибирск, 2002. 124 с.

25. Сорокопудова, О.А. Биологические препараты для борьбы с ботритиозом лилий. / О.А. Сорокопудова // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук. 2004. - №6 (Ноябрь-Декабрь). - С. 39-40.

26. Стольникова, Н.П. Повышение эффективности культуры земляники. / Н.П. Стольникова // Научно-экономические проблемы регионального садоводства: Материалы научно-практической конференции, г. (Барнаул, 4-6 марта 2002). -Барнаул, 2003. С. 113-116.

27. Хмель, И.A. Quorum-sensing регуляция экспрессии генов: фундаментальные и прикладные аспекты, роль в коммуникации бактерий. / И.А. Хмель //Микробиология. 2006, - Том 75. - Номер 4 (Июль-Август). - С. 457-464.

28. Чигалейчик, А.Г. Пути совершенствования триходерминовыхбиопрепаратов / А.Г. Чигалейчик, В.Г. Сахаровский // Защита и Карантин растений.- 1999. -№:9. С.32-33.

29. Шашкин, Н. И. Земляника в колхозном саду. / Н. И. Шашкин // М. 1956. -87 с.

30. Штерншис, М.В. Биологическая защита растений. / М.В. Штерншис, Ф. С.-У Джалилов, И.В. Андреева, О.Г. Томилова // Под ред. М.В. Штерншис (Учебники и учеб. пособия для студентов высш. учеб. заведений) М.: КолосС. - 2004.- 264 с.

31. Штерншис, М.В. Роль и возможности биологической защиты растений. / М.В. Штерншис // Защита и карантин растений. 2006. - № 6. - С. 14-17.

32. Avis, T.J. Specificity and mode of action of the antifungal fatty acid cis-9-heptadecenoic acid produced by Pseudozyma flocculosa. / TJ. Avis, R.R. Be'langer //Appl. Environ. Microbiol. 2001. - 67. -P. 956-960.

33. Baek, J.M. The role of extracellular chitinase from Trichoderma virens Gv 29-8 in the biocontrol of Rhizoctonia solani. / J.M. Baek // Curr. Genet. 1999. - 35. - P. 4150.

34. Bailey, B.A. Direct effects of Trichoderma and Gliocladium on plant growth and resistance to pathogens. / B.A. Bailey, R.D. Lumsden // In Trichoderma and Gliocladium. / G.E. Harman, C.P. Kubicek // 1998. Vol. 2 - P. 185-204.

35. Bangera, M. G. Identification and charac-terization of a gene cluster for synthesis of the polyketide antibiotic 2,4-diacetylphloroglucinol from Pseudomonasfluorescens Q2-87. / M. G. Bangera, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 1999. - 181. -P. 3155-3163.

36. Bar-Nun, N. Cucurbitacins repressors of induction of laccase formation. / N. Bar-Nun, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1989. - 28. - P. 1369-1371.

37. Bar-Nun, N. Repression of laccase formation in Botrytis cinerea and its possible relation to phytopathogenicity. / N. Bar-Nun, A. Tal-Lev, E. Harel, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1988. - 27. - P. 2505-2509.

38. Batta, Y.A. Biological effect of two strains of microorganisms antagonistic to Botrytis cinerea: causal organism of gray mold on strawberry. / Y.A. Batta // J. Res.: Natural Sci. 1999. - 13. - P. 67-83.

39. Bhatt, D.D. Preliminary investigation on biological control of grey mold {Botrytis cinerea) of strawberries. / D.D. Bhatt, E.K. Vaughan // Plant Dis. Rep. 1962. - 46. -P. 342-345.

40. Bisson, L.F. Stuck and sluggish fermentations. / L.F. Bisson // Am. J. Enol. Vitic. 1999.-50. P. 107-119.

41. Blakeman, J.P. Potential for biological control of plant diseases on the phylloplane. / J.P. Blakeman, N.J. Fokkema // Annu. Rev. Phytopathol. 1982. - 20. -P. 167-192.

42. Brent, K.J. Fungicide resistance: the assessment of risk. / K.J. Brent, D.W. Hollomon // FRAC Monograph. 1998. - No. 2. - Brussels.

43. Buhagiar, R. W.M. The yeasts of strawberries. / R. W.M. Buhagiar, J. A. Barnett //J. Appl. Bact. 1971. - 34. - P. 727-739.

44. Chand-Goyal, T. Control of postharvest pear diseases using natural saprophytic yeast colonists and their combination with low dosage of thiabendazole. / T. Chand-Goyal, R. A. Spotts // Postharvest Biol. Technol. 1996a. - 7. - P. 51-64.

45. Chand-Goyal, T. Postharvest biological control of blue mold of apples and brown rot of cherries by saprophytic yeasts and their combination with a low dose of fungicides. /Т. Chand-Goyal, R. A. Spotts II Biol. Control. 1996b. - 6. - P. 253-259.

46. Conney, J.M. Trichoderma/pathogen interaction: measurement of antagonistic chemicals produced at antagonist/pathogen interface using tubular bioassay. / J.M. Conney, D.R. Lauren // Lett. Appl. Microbiol. 1998. - 27(5). - P. 283-286.

47. Cook, D.W.M. Attachment of microbes antagonistic against Botrytis cinerea: biological control and scanning electron microscope studies in vivo. / D.W.M. Cook, P.G. Long, L.H. Cheah // Ann. Appl. Biol. 1997. - 131. -P. 503-508.

48. Cook, R. J. Molecular mechanisms of defense by rhizobacteria against root disease. / R. J. Cook, L. S. Thomashow, D. M. Weller, D. Fujimoto, M. Mazzola, G. Bangera, D. S. Kim //Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A. 1995. - 92. - P. 4197-4201.

49. Dassa, E. The ABC of ABCs: A phylogenetic and functional classification of ABC systems in living organisms. / E. Dassa, P. Bouige // Res. Microbiol. 2001. -152.-P. 211-229.

50. De Kievit T.R. Bacterial Quorum Sensing in pathogenic relationship / T.R. De Kievit, B.H. Iglewski // Infect. Immun. 2000. - V. 68. - P. 4839-4849.

51. De La Cruz, J. Purifcation and characterization of an endo-L-l,6-glucanase from Trichoderma harzianum that is related to its mycoparasitism. / J. De La Cruz, J.A. Pintor-Toro, T. Benitez, A. Llobell // J. Bacteriol. 1995. - 177. - P. 1864-1871.

52. De Waard, M. A. Significance of ABC transporters in fungicide sensitivity and resistance. / M. A. De Waard // Pestic. Sci. 1997. - 51. - P. 271-275.

53. Del Sorbo, G. Fungal trans-porters involved in efflux of natural toxic compounds and fungicides. / G. Del Sorbo, H. Schoonbeek, M. A. De Waard // Fungal Genet. Biol. 2000.-30.-P. 1-15.

54. Delaney, S. M. phzO, a gene for biosynthesis of 2-hydrolyated phenazine compounds in Pseudomonas aureofaciens 30-84. / S. M. Delaney, D. V. Mavrodi, R. F. Bonsall, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 2001. - 18. - P. :318-327.

55. Driessen, A. J. Diversity of trans-port mechanisms: Common structural principles. / A. J. Driessen, B. P. Rosen, W. N. Konings // Trends Biochem. Sci. 2000. - 25. -P. 397-401.

56. Droby, S. Characterization of the biocontrol activity of Debaryomyces hansenii in the control of Penicillium digitatum on grapefruit. / S. Droby, E. Chalutz, C.L. Wilson, M. Wisniewski // Can. J. Microbiol. 1989. - 35. - P. 794-800.

57. Droby, S. Induction of resistance to Penicillium digitatum in grapefruit by the yeast biocontrol agent Candida oleophila. / S. Droby, V. Vinokur, B. Weiss, L. Cohen, A. Daus, E.E. Goldschmidt, R. Porat // Phytopathology 92. 2002. - P. 393399.

58. Duffy, B. Pathogen self-defense: Mechanisms to Counteract Microbial Antagonism. / B. Duffy, A. Schouten, J. M. Raaijmakers // Annu. Rev. Phytopathol. -2003.-41.-P. 501-538.

59. Duffy, В. Potential role of pathogen signaling in multitrophic plant-microbe interactions involved in disease protection. / B. Duffy, C. Keel, G. Defago // Applied and environmental microbiology. 2004. - Vol. 70. - No. 3. - P. 1836-1842.

60. Elad, Y. Degradation of plant pathogenic fungi by Trichoderma harzianum. / Y. Elad, I. Chet, Y. Henis // Can. J. Microbiol. 1982. - 28. - P. 719-725.

61. Elad, Y. The role of Trichoderma harzianum protease in the biocontrol of Botrytis cinerea. / Y. Elad, A. Kapat //Eur. J. Plant Pathol. 1999. - 105. - P 177-189.

62. Elad, Y., Shabi, E. and Katan, T. Multiple fungicide resistance to benzimidazoles, dicarboxymides and diethofencarb in field isolates of Botrytis cinerea in Israel. / Y. Elad, E. Shabi, T. Katan // Plant Pathol. 1991. - 41. - P. 41-46.

63. Ellis, M. A. Using fungicides to control strawberry fruit rots in Ohio. / M. A. Ellis // Department of Plant Pathology, the Ohio State University, OARDC. 2004. - 5 p.

64. El-Neshawy, S.M. Nisin enhancement of biocontrol of postharvest diseases of apple with Candida oleophila. / S.M. El-Neshawy, C.L. Wilson //Postharvest Biol. Technol.- 1997.-10.-P. 9-14.

65. Fan, Q. Biological control of postharvest brown rot in peach and nectarine fruits by Bacillus subtilis (B-912). / Q. Fan, S.P. Tian, Y.X. Li, Y. Xu, Y. Wang // Acta Botanica Sin. 2000. - 42. - P. 1137-1143.

66. Fleet, G. H. Yeast interactions and wine flavour. / G. H. Fleet // International Journal of Food Microbiology. 2003. - 86. - P. 11 - 22.

67. Fokkema, N.J. The role of saprophytic fungi in antagonism against Drechslera sorokiniana (Helminthosporium sativum) on agar plates and on rye leaves with pollen. / N.J. Fokkema // Physiol. Plant Pathol. 1973. - 3. - P. 195-205.

68. Forster, B. Basis for use strategies of anilinopyrimidine and phenylpyrrole fungicides against Botrytis cinerea. / B. Forster, T. Staub // Crop Protec. 1996. - 15 (6). - P. 529-537.

69. Fournier, E. Characterization of nine polymorphic microsatellite loci in the fungus Botrytis cinerea (Ascomycota). / E. Fournier, T. Giraud, A. Loiseau, D. Vautrin, A. Estoup, M. Solignac // Molecular Ecology Notes. 2002. - Vol.2. - P. 253-255.

70. Fravel, D. R. Role of antibiosis in the biocontrol of plant diseases. / D. R. Fravel // Annu. Rev. Phytopathol. 1988. - 26. - P. 75-91.

71. Gachon, C. Real-time PCR monitoring of fungal development in Arabidopsis thaliana infected by Alternaria brassicicola and Botrytis cinerea. / C. Gachon, D. Saindrenan // Plant physiology and biochemistry. 2004. - Vol. 42. - P. 367-371.

72. Gullino, M.L. Attempts at biological control of postharvest diseases of apple. / M.L. Gullino, C. Aloi, M. Palitto, D. Benzi, A. Garibaldi // Meded. Fac. Landbouww. Rijksuniv. Gent. 1991. - 56. - P. 195-202.

73. Hammer, P. E. Four genes from Pseudomonas fluorescens that encode the biosynthesis of pyrrolnitrin. / P. E. Hammer, D. S. Hill, S. T. Lam, К. H. Van Pee, J. M. Ligon // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - 63. - P. 2147-2154

74. Harman, G.E. Myths and dogmas of biocontrol-changes in perceptions derived from research on Trichoderma harzianum T-22. / G.E. Harman // Plant Dis. 2000. -84.-P. 377-393.

75. Hileman, B. Food supply safety: U.S. seeks to cut pesticide use. / B. Hileman // Chem. Eng. News. 1993 - 71. - P. 3-4.

76. Howell, C.R. Mechanisms employed by Trichoderma species in the biological control of plant diseases: the history and evolution of current concepts. / C.R. Howell //Plant Dis. 2003. - 87. - P. 4-10.

77. Ippolito, A. Control of postharvest decay of apple fruit by Aureobasidium pullulans and induction of defense responses. / A. Ippolito, A. E. Ghaouth, C. L. Wilson, M. Wisniewski // Postharvest Biology and Technology. 2000. - 19. - P. 265-272.

78. Ippolito, A. Impact of preharvest application of biological control agents on postharvest diseases of fresh fruits and vegetables. / A. Ippolito, F. Nigro // Crop Protection. 2000. - 19. - P. 715-723.

79. Janisiewicz, W. J. Ecological diversity, niche overlap, and coexistence of antagonists used in developing mixtures for biocontrol of postharvest diseases of apples. / W. J. Janisiewicz // Phytopathology. 1996. - 86. - P. 473-479.

80. Jarvis, W.R. Botryotinia and Botrytis Species: Taxonomy, Physiology, and Pathogenicity: A Guide to the Literature. / W.R. Jarvis // Canada Department of Agriculture, Harrow, Ontario, Canada. 1977.

81. Jijakli, M.H. Characterization of an exo-L-l,3-glucanase produced by Pichia anomala strain K, antagonist of Botrytis cinerea on apples. / M.H. Jijakli, P. Lepoivre // Phytopathology. 1998. - 88 (4). - P. 335-343.

82. Kapat, A. Effect of two isolates of Trichoderma harzianum on the activity of hydrolytic enzymes produced by Botrytis cinerea. / A. Kapat, G. Zimand, Y. Elad // Physiol. Mol. Plant Pathol. 1998. - 52. - P. 127-137.

83. Katz, E. The peptide antibiotics of Bacillus: chemistry, biogenesis and possible functions /Е. Katz, A. Demain // Bacteriol. Rev. 1977. - V. 41. - № 2. - P. 449-474.

84. Keel, C. Suppression of root diseases by Pseudomonas fluorescens CHA0: importance of the bacterial secondary metabolite 2,4-diacetylphloroglucinol. / C.

85. Keel, U. Schnider, M. Maurhofer, С. Voisard, D. Burger, D. Haas, G. Defago I I Mol. Plant-Microbe Interact. 1992. - 5. - P. 4-13.

86. Kovach, J. Using honey bees to disseminate Trichoderma harzianum to strawberries for Botrytis control. / J. Kovach // Integrated Pest Management Program Cornell University. 2004. - 6 p.

87. Leibinger, W. Control of postharvest pathogens and colonization of the apples surface by antagonistic micro-organisms in the field. / W. Leibinger, B. Breuker, M. Hahn, K. Mendgen // Phytopathology. 1997. - 87. - P. 1103-1110.

88. Leifert, C. Antibiotic production and biocontrol activity by Bacillus subtilis CL27 and Bacilluspumilus CL45. / C. Leifert, H. Li, S. Chidburee, S. Hampson, S. Workman // J. Appl. Bacteriol. 1995. - 78. - P. 97-108.

89. Lima, G. Activity of the yeasts Cryptococcus laurentii and Rhodotorula glutinis against post-harvest rots on different fruits. / G. Lima, F. De Curtis, R. Castoria, V. De Cicco. // Biocontrol Sci. Technol. 1998. - 8. P. 257-267.

90. Lima, G. Effectiveness of Aureobasidium pullulans and Candida oleophila against postharvest strawberry rots. / G. Lima, A. Ippolito, F. Nigro, M. Salerno // Postharvest Biol. Technol. 1997. - 10. - P. 169-178.

91. Maksimova, O.L. Defense mechanism of Botrytis cinerea against 2.4-Diacetylphloroglucinol, an antibiotic produced by Pseudomonas fluorescens. / O.L. Maksimova // MsC Thesis. Wageningen University. - 2004. - 46 p.

92. Marbach, I. Molecular properties of extracellular Botrytis cinerea laccase. / I. Marbach, E. Harel, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1984. - 23. - P. 2713-2717.

93. March, J.C. Quorum sensing and bacterial cross-talk in biotevhnology / J.C. March, W.E. Bentley //Annu. Rev. Cell Dev. Biol. 2005. - V. 21. - P. 319-346.

94. Masih, E. I. Can the grey mould disease of the grape-vine be controlled by yeast? / E. I. Masih, I. Alie, B. Paul // FEMS Microbiology Letters. 2000. - 189. - P. 233237.

95. Masih, E.I. Characterisation of the yeast Pichia membranifaciens and its possible use in the biological control of Botrytis cinerea, causing the grey mould disease of grapevine. / E.I. Masih, S. Slezack-Deschaumes, I. Marmaras, E. A. Barka, G.

96. Vernet, С. Charpentier, A. Adholeya, B. Paul. // FEMS Microbiology Letters. 2001. -202.-P.227-232.

97. Mavrodi, D. V. A seven-gene locus for synthesis is of phenazine-l-carboxylic acid by Pseudomonas fluorescens 2-19 J D. V. Mavrodi, V. N. Ksenzenko, R. F. Bonsall, R. J. Cook, A. M. Boronin, L. S. Thomashow // J. Bacteriol. 1998. - 180. -P. 2541-2548.

98. Miller M.B. Quorum sensing in bacteria / M.B. Miller, B.L. Bassler // Annu. Rev. Microbiol. 2001. - V. 55. - P. 165-199.

99. Milling, R.J. Mode of action of the anilinopyrimidine fungicide pyrimethanil: Effects on enzyme secretion in Botrytis cinerea. / R.J. Milling, C.J. Richardson // Pestic. Sci. 1995. - 45. - P. 43-48.

100. Paul, B. Biological control of Botrytis cinerea causing grey mould disease of grapevine and elicitation of stilbene phytoalexin (resveratrol) by a soil bacterium. / B.

101. Paul, A. Chereyathmanjiyil, I. Masih, L. Chapuis, A. Benoit // FEMS Microbiol. Lett. 1998.- 165.-P. 65-70.

102. Paul, B. Suppression of Botrytis cinerea causing gray mould disease of grapevine (Vitis vinifera), and its pectinolytic activities by a soil bacteria. / B. Paul, I. Girard, T. Bhatnagar, P. Bouchet // Microbiol. Res. 1997. - 152. - P. 413-420.

103. Paulitz, Т. C. Biological control in greenhouse systems. / Т. C. Paulitz, R. R. Belanger // Annu. Rev. Phytopathol. 2001. - 39. - P. 103-133.

104. Pezet, R. Purification and characterization of a 32-kDa laccaselike stilbene oxidase produced by Botrytis cenerea. Pers.: Fr. / R. Pezet // FEMS Microbiol. Lett. -1998.- 167.-P. 203-208.

105. Piano, S. Characterization of the biocontrol capability of Metschnikowia pulcherrima against Botrytis postharvest rot of apple. / S. Piano, V. Neyrotti, Q. Migheli, M.L. Gullino // Postharvest Biol. Technol. 1997. - 11. - P. 131-140.

106. Punja, Z. K. Using fungi and yeasts to manage vegetable crop diseases. / Z. K. Punja, R. S. Utkhede // TRENDS in Biotechnology. 2003. - Vol.21.

107. Raaijmakers, J. M. Effect of population density of Pseudomonas fluorescens on production of 2,4-diacetylphloroglucinol in the rhizosphere of wheat. / J. M. Raaijmakers, R. E. Bonsall, D. M. Weller // Phytopathology. 1999. - 89. - P. 470475.

108. Raaijmakers, J. M. Frequency of antibiotic-producing Pseudomonas spp. in natural environments. / J. M. Raaijmakers, D. M. Weller, L. S. Thomashow // Appl. Environ. Microbiol. 1997. - 63. - P. 881-887.

109. Reyes, M. E. Q. Microbial antagonists control postharvest black rot of pineapple fruit. / M. E. Q. Reyes, K. G. Rohrbach, R. E. Paull // Postharvest Biology and Technology. 2004. - 33. - P. 193-203.

110. Roberts, R.G. Postharvest biological control of gray mold of apples by Cryptococcus laurentii. / R.G. Roberts // Phytopathology. 1990a. - 80. - P. 526-530.

111. Rogers, B. The pleitropic drug ABC transporters from Saccharomyces cerevisiae. / B. Rogers, A. Decottignies, M. Kolaczkowski, E. Carvajal, E. Balzi, A. Goffeau // J. Mol. Microbiol. Biotechnol. 2001. - 3. - P. 207-14.

112. Rosenberger, D.A. Postharvest fungicides for apples: development of resistance to benomyl, vinclozolin, and iprodione. / D.A. Rosenberger, F.W. Meyer // Plant Dis. -1981.-65.-P. 1010-1013.

113. Rosslenbroich, H.-J. Botrytis cinerea history of chemical control and novel fungicides for its management / H.-J. Rosslenbroich, D. Stuebler // Crop Protection. -2000. -Vol. 19.-P. 557-561.

114. Sansone, G. Control of Botrytis cinerea strains resistant to iprodione in apple with rhodotorulic acid and yeasts. / G. Sansone, I. Rezza, V. Calvente, D. Benuzzi, M. I. Sanz de Tosetti // Postharvest Biology and Technology. -2005. 35. - P. 245-251.

115. Schena, L. Genetic diversity and biocontrol activity of Aureobasidium pullulans isolates against postharvest rots. / L. Schena, A. Ippolito, T. Zahavi, L. Cohen, F. Nigro, S. Droby // Postharvest Biology and Technology. 1999. - 17. - P. 189-199.

116. Schoonbeek, H. The ABC transporter BcatrB affects the sensitivity of Botrytis cinerea to the phytoalexin resveratrol and the fungicide fenpiclonil. / H-J. Schoonbeek, G. Del Sorbo, M. A. De Waard // Mol. Plant-Microbe Interact. 2001. -14.-P. 562-571.

117. Schoonbeek, H-J. Fungal ABC transporters and microbial interaction in natural environments. / H-J. Schoonbeek, J.M. Raaijmakers, M.A. De Waard // Molecular Plant- Microbe Interaction. 2002. - Vol. 15. - № 11. - P.l 165-1172.

118. Schouten, A. Resveratrol acts as a natural profungicide and induces self-intoxication by a specific laccase. / A. Schouten, L. Wagemakrs, F.L. Stefanato, R.M. Van der Kaaij, J.A.L. van Kan // Molecular Microbiology. 2000. - Vol.43 (4).- P. 883-894.

119. Schouten, A. Self-protection of Botrytis cinerea against biocontrol agents. / A. Schouten, G.C.M van den Berg, Y. Cuesta Arenas, O. Maksimova, J.M Raaijmakers // Gewasbescherming. 2004. - Vol. 35 (6). - P.327.

120. Scott, D. H. Strawberries. Advances in Fruit Breeding. / D. H. Scott, F. J. Lawrence // N.Y. University press. -1975. 71 p.

121. Shuman, J. L. Actigard may reduce disease in strawberry. / J. L. Shuman // Virginia vegetable, small fruit and specialty crops. 2003. - Volume 2. - Issue 2. - 1-3p.

122. Silo-Suh, L.A. Biological activities of two fungistatic antibiotics produced by Bacillus cereus UW85. / L.A. Silo-Suh, B.J. Lethbridge, S.J. Raffel, H. He, J. Clardy, J. Handelsman // Appl. Environ. Microbiol. 1994. - 60. - P. 2023-2030.

123. Smilanick, J.L. Strategies for the isolation and testing of biocontrol agents. / J.L. Smilanick // In: Wilson, C.L., Wisniewski, M.E. (Eds.), Biological Control of Postharvest Diseases: Theory and Practice. CRC Press, Boca Raton. 1994. - P. 2542.

124. Spotts, R.A. Populations, pathogenicity and benomyl resistance of Botrytis spp., Penicillium spp. and Mucor piriformis in packinghouses. / R.A. Spotts, L.A. Cervantes //Plant Dis. 1986. - 70. - P. 106-108.

125. Staples, R. Putative virulence factors of Botrytis cinerea acting as a wound pathogen. / R. Staples, A. Mayer //FEMS Microbiol. Lett. 1995. - 134. - P. 1-7.

126. Steel, C.C. Catalase activity and sensivity to the fungicides, iprodione and fludioxonil in Botrytis cinerea / C.C. Steel // Lett. Appl. Microbiol. 1996. - 22. - P. 335-338.

127. Sutton, J.C. Epidemiology and management of Botrytis leaf blight of onion and gray mould of strawberry: a comparative analysis. / J.C. Sutton // Can. J. Plant. Pathol.-1990.- 12. -P 100-110.

128. Suty, A. Fenhexamid- sensitivity of Botrytis cinerea'. Determination of baseline sensitivity and assessment of the risk of resistance. / A. Suty, R. Pontzen, K. Stenzel // Pflanzenschutz-Nachrichten Bayer. 1999. - 52. - P. 145-157.

129. Thomas, E. Phytotoxicity of Pseudomonas chlororaphis 06: role of phenazines and implications for biocontrol. / E. Thomas // MS Thesis. Utah State University. -1998.

130. Thomashow, L.S. Production of the antibiotic phenazine-l-carboxylic acid by fluorescent Pseudomonas species in the rhizosphere of wheat. / L.S. Thomashow, D.M. Weller, R.F. Bonsall, L.S. Pierson // Appl Environ Microbiol 1990. 56. - P. 908-12.

131. Urban, M. An ATP-driven efflux pump is a novel pathogenicity factor in rice blast disease. / M. Urban, T. Bhargava, J. E. Hamer // Eur. Mol. Biol. Organ. J. 1999. -18.-P. 512-521.

132. Vermeulen, T. The ABC transporter BcatrB from Botrytis cinerea is a determinant of the activity of the phenylpyrrole fungicide fludioxonil. / T. Vermeulen, H. Schoonbeek, M. A. De Waard // Pest Manage. Sci. 2001. - 57. - P. 393-402.

133. Vinas, I. Biological control of major postharvest pathogens on apples with Candida sake. / I. Vinas, J. Usall, N. Teixido, V. Sanchis // International Journal of Food Microbiology. 1998. - 40. - P. 9-16.

134. Viterbo, A. Selective mode of action of cucurbitacin in the inhibition of laccase formation in Botrytis cinerea. / A. Viterbo, R.C. Staples, B. Yagen, A.M. Mayer // Phytochemistry. 1994. - 35. -P. 1137 1142.

135. Whipps, J. M. Microbial interactions and biocontrol in the rhizosphere. / J. M. Whipps // J. Exp. Bot. 2001 - 52. - P. 487-511.

136. Whipps, J.M. Success in biological control of plant pathogens and nematodes by microorganisms. / J.M. Whipps, K.G. Davies // See Ref. 2001. - 31 p.

137. Whitehead, N.A. Quorum-sensing in Gram negative bacteria. / N.A. Whitehead, A.M.L. Barnard, H. Slater N.J.L. Simpson, G.P.C. Salmond // FEMS Microbiol. Rev. -2001.-25.-P. 365-404.

138. Woo, S.L. Disruption of the ech42 (endochitinaseencoding) gene affects biocontrol activity in Trichoderma harzianum PI. / S.L. Woo // Mol. Plant Microbe Interact. 1999. - 12. - P. 419^129.

139. Wubben, J.P. Cloning and characterisation of endopolygalacturonase genes from Botrytis cinerea / J.P. Wubben, W Mulder, A. Ten Have, J. A.L. van Kan, J. Visser // Applied and Environmental Microbiology. 1999. - Vol. 65 (4). - P. 1596-1602.

140. Zhang, H. Biological control of postharvest diseases of peach with Cryptococcus laurentii. / H. Zhang, X. Zheng, T. Yu // Food Control. 2007. - 18. - P. 287-291.

141. Zheng, X. Effects of Cryptococcus laurentii (Kufferath) Skinner on biocontrol of postharvest decay of arbutus berries. / X. Zheng, H. Zhang, Y. Xi // Bot.Bull. Acad. Sin.-2004.-45.- P. 55-60.

142. Zwiers, L.-H. Characterization of the ABC transporter genes MgAtrl and MgAtr2 from the wheat pathogen Mycosphaerella graminicoh. / L.-H. Zwiers, M. A. De Waard // Fungal Genet. Biol. 2000. - 30. - P.l 15-125.