Механизмы и роль атерогенной модификации липопротеидов в атерогенезе тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 14.03.03, кандидат наук Мельниченко, Александра Александровна

• Мельниченко, Александра Александровна
• кандидат наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат наук Мельниченко, Александра Александровна

Содержание

ВВЕДЕНИЕ

Цель настоящей работы

Основные задачи исследования:

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость

Основные положения, выносимые на защиту

Реализация результатов работы

Структура и объем диссертации

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Роль множественно модфицированных ЛНП в атерогенезе

1.2 Циркулирующие множественно модифицированные липопротеиды низкой плотности

1.3 Атерогенность липопротеидов низкой плотности

1.4 Усиление способности вызывать накопление внутриклеточных липидов модифицированных липопротеидов после их ассоциации

1.5 Взаимодействие липопротеидов низкой плотности с компонентами внеклеточного матрикса

1.6 Липопротеидсодержащие циркулирующие иммунные комплексы

2 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Аутопсийный материал

2.2 Гистохимическое выявление липидов

2.3 Исследование посредством трансмиссионной электронной микроскопии (ТЭМ)

2.4 Электронно-микроскопический гистохимический анализ

2.5 Хроматографическое определение липидов на криостатном срезе

2.6 Первичная культура субэндотелиальных клеток аорты человека

2.7 Культура моноцитов-макрофагов крови человека

2.8 Получение сыворотки крови

2.9 Оценка антиатерогенного эффекта в модели in vitro

2

2.10 ' Определение пролиферативной активности

2.11 Определение синтеза клеточного белка

2.12 Определение синтеза коллагена

2.13 Изучение внутриклеточного метаболизма эфиров холестерина

2.14 Изучение внутриклеточного синтеза липидов

2.15 Выделение и фракционирование липопротеидов низкой плотности

2.15.1 Доноры

2.15.2 Получение плазмы и сыворотки крови

2.15.3 Выделение суммарной фракции липопротеидов низкой плотности из плазмы крови

2.15.4 Определение концентрации белка в препаратах ЛНП

2.15.5 Получение фракций нативных и циркулирующих множественно модифицированных липопротеидов низкой плотности

2.16 Анализ ЛНП

2.16.1 Экстракция л ипидов из ЛНП

2.16.2 Анализ липидов ЛНП при помощи тонкослойной хроматографии

2.16.3 Электрофорез в полиакриламидном геле

2.16.4 Электрофорез в агарозном геле

2.16.5 Определение тиобарбитуровая кислота (ТБК)-реактивных продуктов

2.16.6 Определение содержания сиаловой кислоты в ЛНП

2.17 Определение степени ассоциации ЛНП и размера ассоциатов

2.17.1 Определение относительного размера ЛНП (метод флуктуации светопропускания)

2.17.2 Определение размера ассоциатов ЛНП

2.18 Основные характеристики использованных в работе полоксамеров

3

2.19 Ультразвуковое сканирование сосудов

2.20 Статистическая обработка данных

3 РЕЗУЛЬТАТЫ

3.1 Морфологическая визуализация и анализ распределения липидов в атеросклеротических поражениях человека

3.2 Оптимизация клеточной модели для оценки атерогенности ЛНП

3.3 Ассоциация ЛНП - ключевой фактор их атерогенности

3.3.1 Самоассоциация ЛНП

3.3.2 Разработка метода определения степени ассоциации (сравнение методов светопропускания и светорассеяния)

3.3.3 Ассоциация с внеклеточным матриксом

3.3.4 Образование циркулирующих иммунных комплексов

3.4 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами

3.4.1 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами Р85 и L64

3.4.2 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамером F68

3.4.3 Модуляция самоассоциации ЛНП полоксамерами L61 и L81

3.4.4 Влияние полоксамеров L81 и L64 на внутриклеточное накопление липидов

3.5 Разработка методов диагностики факторов атерогенности

3.5.1 Разработка и модификация метода определения уровня цммЛНП в сыворотке

3.5.2 Сравнение диагностической значимости цммЛНП и ЦИК-ЛНП

3.5.3 Оценка диагностической и прогностической значимости ЦИК

3.5.4 Разработка аналитической тест-системы для оценки атерогенных свойств сыворотки

4 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ

4.1 Морфологическая визуализация и анализ распределения липидов в атеросклеротических поражениях человека

4.2 Ассоциация ЛНП - ключевой фактор их атерогенности

4.3 Модуляция самоассоциации ЛНП

4.4 Диагностическое и прогностическое значение ЦИК

4.5 Заключение

5 ВЫВОДЫ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

ПРИЛОЖЕНИЯ

ПРИЛОЖЕНИЕ А Описание макета аналитической тест-системы

ПРИЛОЖЕНИЕ Б Состав макета аналитической тест-системы

ПРИЛОЖЕНИЕ В Методика использования макета аналитической тест-

системы

ПРИЛОЖЕНИЕ Г Протоколы тестирования функциональных свойств и потребительских характеристик макета аналитической тест-системы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Механизмы и роль атерогенной модификации липопротеидов в атерогенезе»

ВВЕДЕНИЕ

Сердечно-сосудистые заболевания стоят на первом месте в качестве причины смерти в России, США и Европе (Windecker S., 2013; Quarles L.D., 2013). Подавляющая часть сердечно-сосудистых заболеваний является следствием атеросклероза магистральных сосудов (Pranavchand R., 2013). Еще в 1947 году Н. Н. Аничковым было продемонстрировано, что накопление холестерина в интиме артерий является одним из первых проявлений атеросклероза (Аничков H.H., 1947; Cianciola N.L., 2011). Транспорт холестерина в организме осуществляется липопротеидами. Источником липидов в интиме сосудов являются липопротеиды низкой плотности (ЛНП) (Vukovic I., 2006; Alaupovic, 1971 Р.; Cookson F.B., 1971). Нативные ЛНП, выделенные из крови здоровых людей, не вызывают накопления липидов в культуре клеток (Badimön L., 2009). С другой стороны, многими исследователями (Soran Н., 2011; Orsö Е., 2011) было показано, что почти любая модификация (окисление, дегликозилирование, вортексирование, протеолиз, липолиз и др.) нативных ЛНП (нЛНП) приводит к их усиленному захвату как субэндотелиальными, так и другими видами клеток.

Возникает вопрос, почему столь различные изменения в ЛНП приводят к одному и тому же эффекту - внутриклеточному накоплению липидов. При изучении внутриклеточного накопления холестерина, вызванного ЛНП, модифицированными нейраминидазой, липолитическими, протеолитическими, дегликозилирующими ферментами в нашей лаборатории (Orekhov A.N., 1989; Sobenin I.A., 1996; Tertov V.V., 1998) было показано, что все эти модификации приводят к самоассоциации ЛНП. Также было продемонстрировано, что именно ассоциаты модифицированных ЛНП

обладают атерогенными свойствами, то есть вызывают накопление холестерина в клетках. Другими исследователями также были получены аналогичные данные о том, что интенсивное встряхивание или вортексирование (Walters M.J., 2010), окисление медью и железом (Satchell L., 2012; Saputri F.С., 2012), обработка гипохлоритом (Guha M., 2010), миелопероксидазой (Панасенко О.М., 2004), фосфолипазой А2 (Yamamoto К., 2011), сфингомиелиназой (Sneck M., 2012), протеазами (Piha M., 1995), гликозидазами (Панасенко О.М., 2006) приводит к самоассоциации ЛНП и их последующему внутриклеточному накоплению.

В крови больных сердечно-сосудистыми заболеваниями не были обнаружены ЛНП, совпадающие по строению с модифицированными in vitro. Нашей группой были выделены из крови и изучены циркулирующие множественно-модифицированные ЛНП (цммЛНП) (Orekhov A.N. et al., 1989; Tertov V.V. et al., 1990), которые характеризовались пониженным содержанием сиаловой кислоты, маннозы и других Сахаров. Эти же частицы были обнаружены другими исследователями - так называемые мелкие, плотные ЛНП (La Belle M. et al., 1990; Avogaro P. et al., 1991) и электроотрицательные (Avogaro P. et al., 1988) ЛНП. Циркулирующие в крови модифицированные ЛНП, как и модифицированные in vitro ЛНП обладали двумя общими свойствами: вызывали внутриклеточное накопление липидов и обладали склонностью к самоассоциации. Причем было показано, что существует прямая зависимость между размером ассоциатов и их атерогенными свойствами (Orekhov A.N. et al., 1991 a; Tertov V.V. et al., 1990; Tertov V.V. et al., 1992).

Однако оставались не вполне понятными механизмы атерогенной модификации ЛНП и её роль в атерогенезе. Оставались без ответа другие

вопросы. Каков механизм ассоциации ЛНП? Можно ли повлиять на этот процесс?

Известно, что ЛНП способны не только к самоассоциации, но к ассоциации с компонентами внеклеточного матрикса (Soto Y, 2012) и образованию циркулирующих иммунных комплексов (Lopes-Virella M.F., 2013; Tertov V.V., 1996). Но как сам процесс ассоциации, так и атерогенные свойства ассоциатов изучены недостаточно. Циркулирующие иммунные комплексы могут служить маркерами предрасположенности к инфаркту миокарда (Lopes-Virella M.F., и др., 2012), но неизвестно, насколько велика прогностическая и диагностическая роль этого параметра. Не разработаны тест-системы для оценки атерогенного потенциала крови больного на основе измерения показателей атерогенной модификации ЛНП, которые могли бы применяться в клинической практике.

Цель настоящей работы

Целью настоящей работы явилось углублённое изучение механизмов атерогенной модификации липопротеидов низкой плотности (ЛНП), циркулирующих в крови пациентов; исследование роли этой модификации в атерогенезе; разработка на основе накопленных знаний инновационных подходов к диагностике и терапии атеросклероза, в том числе:

- способов диагностики бессимптомного атеросклероза на основе принципиально новых атерогенных показателей,

средств, имеющих антиатеросклеротический терапевтический потенциал, проявляющийся в предотвращении самоассоциации ЛНП, которая ведёт к инициации атеросклероза на уровне клеток сосудистой стенки.

Для достижения поставленной цели были сформулированы следующие задачи:

Основные задачи исследования:

1. с помощью морфологических методов изучить локализацию липидов в начальных атеросклеротических поражениях;

2. исследовать механизмы устойчивости к ассоциации циркулирующих в крови человека множественно модифицированных ДНИ;

3. разработать клеточную модель липоидоза для изучения клеточных проялений атеросклероза и оценки атерогенности компонентов крови;

4. изучить роль самоассоциации ЛНП в усилении атерогенного потенциала липопротеидов;

5. найти эффективные ингибиторы ассоциации ЛНП и накопления ассоциатов в артериальных клетках;

6. оценить диагностическую и прогностическую значимость таких показателей атерогенности липопротеидов как уровень цммЛНП в крови и уровень холестерина в циркулирующих иммунных комплексах, создать на их основе диагноститческую тест-систему.

Научная новизна

Разработана новая клеточная модель на основе макрофагов моноцитарного происхождения, выделенных из крови человека. Данная модель, проще, доступнее и экономичнее используемой ранее клеточной модели на основе субэндотелиальных клеток аорты человека. Результаты экспериментов, проведённых на разработанной модели, аналогичны

результатам, полученным на культивируемых субэндотелиальных клетках. Показано, что для изучения атерогенеза на клеточном уровне и оценки атерогенного потенциала ЛНП данная модель является информативной и адекватной моделью.

Продемонстрировано, что липопротеиды низкой плотности образуют крупные нерастворимые комплексы (ассоциаты). Изучено три варианта ассоциации - самоассоциация ЛНП, ассоциация с компонентами внеклеточого матрикса и образование циркулирующих иммунных комплексов, содержащих цммЛНП. Во всех трех случаях образуются ассоциаты, которые стимулируют захват липопротеидов клетками и подавляют деградацию липидов цммЛНП, и, тем самым, вызывают накопление внутриклеточных липидов, то есть усиливают атерогенный потенциал цммЛНП.

Исследованы возможности модуляции самоассоциации ЛНП. Выявлены амфифильные полимеры (полоксамеры), которые в зависимости от их гидрофобных свойств влияют на самопроизвольную ассоциацию ЛНП. Показано, что полоксамеры с большей гидрофобностью останавливают процесс ассоциации ЛНП, но не вызывают диссоциацию образовавшихся комплексов. Эти вещества можно рассматривать как перспективные агенты с точки зрения прямой антиатеросклеротической терапии.

В новых экспериментальных условиях подтверждены ранее полученные данные о том, что иммунные комплексы, состоящие из модифицированных ЛНП и аутоантител против модифицированных ЛНП, обладают высоким атерогенным потенциалом на уровне артериальных клеток. Разработаны оптимизированные методики для определения в крови уровня циркулирующих множественно модифицированных ЛНП и

холестерина циркулирующих иммунных комплексов, которые являются маркерами развития атеросклероза. Выявлена диагностическая значимость в отношении раннего атеросклероза двух параметров: уровня циркулирующих множественно модифицированных ЛНП и холестерина циркулирующих иммунных комплексов (Х-ЦИК). Проведено сравнение данных параметров. Впервые установлена прогностическая значимость ЛНП-содержащих ЦИК, определяемых по уровню Х-ЦИК, в отношении прогрессирования раннего атеросклероза. По диагностической и прогностической значимости цммЛНП и Х-ЦИК значительно превосходят широко применяемые для диагностики ат;еросклеротических болезней показатели липидного обмена.

Теоретическая и практическая значимость

Впервые установлена прогностическая значимость ЛНП-содержащих ЦИК, определяемых по уровню Х-ЦИК, в отношении прогрессирования раннего атеросклероза. По диагностической и прогностической значимости цммЛНП и Х-ЦИК значительно превосходят широко применяемые для диагностики атеросклеротических болезней показатели липидного обмена.

Выявлены амфифильные полимеры (полоксамеры), которые в зависимости от их гидрофобных свойств влияют на самопроизвольную ассоциацию ЛНП. Показано, что полоксамеры с большей гидрофобностью останавливают процесс ассоциации ЛНП, но не вызывают диссоциацию образовавшихся комплексов. Эти вещества можно рассматривать как перспективные агенты с точки зрения прямой антиатеросклеротической терапии.

В результате проведенной работы было продемонстрировано, что

уровень холестерина ЦИК (Х-ЦИК) коррелирует со степенью выраженности

11

и распространенностью атеросклеротических поражений и обладает высокой диагностической и прогностической значимостью. Разработан макет аналитической тест-системы (мАТС) для одновременного определения контролируемых специфических биомаркеров, в частности, холестерина ЦИК, общего холестерина, холестерина ЛНП и ЛВП, а также триглицеридов. Созданный мАТС предназначен для применения в практической медицине в целях экспрессной диагностики сердечно-сосудистых патологий.

Основные положения, выносимые на защиту

1. Уточнено, что на начальных стадиях атерогенеза существенная часть липидов накапливается в клетках сосудистой стенки, а не только вне клеток, инициация атерогенеза сопровождается накоплением внутриклеточных липидов (клеточным липоидозом).

2. Для воспроизведения клеточного липоидоза - ключевого процесса атерогенеза на клеточном уровне - разработана модель на основе первичной культуры моноцитов-макрофагов, выделенных из крови человека. Разработанная клеточная модель адекватна задачам изучения механизмов липоидоза и может быть использована для оценки атерогенного потенциала плазмы (сыворотки) крови, липидных и нелипидных компонентов крови.

3. На разработанной клеточной модели липоидоза показано, что ассоциация ЛНП усиливает атерогенный потенциал липопротеидов, стимулируя захват ЛНП макрофагами.

4. Самоассоциация ЛНП подавляется амфифильными блок-

сополимерами окиси пропилена и окиси этилена, так называемыми

полоксамерами. Способность полоксамеров ингибировать ассоциацию

зависят от гидрофильно-липофильного баланса и критической концентрации

12

мицеллообразования, что свидетельствует об определяющей роли гидрофобных взаимодействий в ассоциации ЛНП.

5. Результаты клинического исследования бессимптомного атеросклероза позволили установить, что уровень холестерина циркулирующих иммунных комплексов и уровень цммЛНП в сыворотке, являющиеся маркерами атеросклероза, обладают высокой диагностической значимостью.

6. Результаты клинического исследования показали, что уровень холестерина циркулирующих иммунных комплексов имеет высокую прогностическую значимость для оценки развития бессимптомного атеросклероза

Реализация результатов работы

Материалы диссертации были представлены в виде докладов и тезисов докладов на следующих научных мероприятиях: 78th European Atherosclerosis Society Congress (EAS), Hamburg, Germany, June 20-23, 2010; 79th European Atherosclerosis Society Congress (EAS), Gothenburg, Sweden, 2629 June, 2011; 80th European Atherosclerosis Society Congress (EAS), Milan, Italy, May 25 -28 , 2012; Arteriosclerosis, Thromdosis and Vascular Biology. 2011 Scientific Sessions. April 28-30, 2011, Chicago, Illinois; Arteriosclerosis, Thrombosis and Vascular Biology Scientific Sessions 2013. May 1-3, 2013, Lake Buena Vista, Flopida.

На основе полученных в работе данных зарегистрирован 1 патент: Орехов АН, Собенин ИА, Кириченко ТВ, Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова ВА. Способ профилактики и лечения атеросклероза. Патент на

изобретение № 2455016 от 07 октября 2012 г.

13

На основе полученных в работе данных зарегистрированы 9 патентных заявок, представленных в списке опубликованных работ по теме диссертации.

На основе результатов проведённых исследований разработан лабораторный регламент макета аналитической тест-системы для применения в медицине при экспрессной диагностике атерогенных дислипидемий при сердечно сосудистых патологиях.

Работа апробирована 25 сентября 2013 года в ФГБУ "НИИ ОПП" РАМН на межлабораторной конференции с участием лаборатории клеточных механизмов атерогенеза, лаборатории молекулярной физиологии, лаборатории регуляции репаративных процессов, лаборатории общей патологии микроциркуляции.

Личный вклад автора.

Автор принимала непосредственное участие в получении исходных данных и их обработке, представляла полученные результаты на международных конференциях, принимала активное участие в подготовке публикаций по выполненной работе. К защите представлены только те положения и результаты экспериментов, в получении которых роль автора была определяющей.

Публикации по теме диссертации.

По результатам исследований опубликовано 29 научных работ, в том числе 9 тезисов докладов на международных и всероссийских конференциях, 6 статей в научно-практических рецензируемых сборниках и 11 статей в

рецензируемых научных журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ, одна глава в книге и две монографии.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 252 страницах машинописного текста и состоит из следующих разделов: введение, обзор литературы, материалы и методы, результаты и их обсуждение, заключение и выводы. Библиографический список использованной литературы содержит 230 источников, в том числе 16 отечественных и 214 иностранных. Текст • иллюстрирован 37 рисунками и 7 таблицами.

1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Накопление холестерина и его эфиров в виде диффузных липидных точек и пятен в интиме артерий является одним из первых изменений, которые можно наблюдать на ранних стадиях развития атеросклероза (Windecker S, 2013; Quarles, 2013; Аничков, 1947). На более поздних стадиях атерогенеза в сосудах образуются липидные бляшки, с липидным ядром, состоящим из так называемых «пенистых» клеток. Пенистые клетки - это макрофаги, наполненные липидными каплями. Источником, вызывающих внутри- и внеклеточное накопление липидов в интиме сосудов, являются циркулирующие в крови человека липопротеиды низкой плотности (ЛНП), (Goldstein JL, 1979; Bates SR, 1976).

Структура ЛНП узучена достаточно подробно. Известно, что липидная часть ЛНП состоит из этерифицированного холестерина (1600 молекул), фосфолипидов (примерно 700 молекул), свободного холестерина (600 молекул) и примерно 170 молекул триглицеридов (Davis HR Jr, 2011; Esterbauer H, 1992). Фосфолипиды предсатавлены 500 молекулами фосфатидилхолина и 200 молекулами сфингомиелина. Известно, что апобелок связывается в-основном с фосфатидилхолином (Greig FH, 2012; Dominiczak МН, 2011; Ghesquiere SA, 2005), а холестерин предпочтительно связывается со сфингомиелином (Nilsson А, 2006).

Известно, что липопротеиды, полученные от здоровых лиц, не вызывают внутриклеточного накопления липидов ни в одном из изученных типов клеток (Kruth, 2011; Oörni К, 2006). Это является следствием того, что существует специфические ЛНП-рецепторы, через которые липопротеиды попадают в клетку. Данные рецепторы обладают механизмом отрицательной

обратной связи (Armengol С, 2013; Goldstein JL', 1977). Таким образом осуществляется регуляция внутриклеточного содержания липидов. Известно, что при семейной гиперхолестеринемии у больных наблюдается частичное или полное отсутствие специфического ЛНП-рецептора, но липопротеиды все-таки попадают в клетки, преобразуя их в пенистые. Значит, должны существовать альтернативные пути захвата ЛНП клетками. Брауном и Гольдштейном (Armengol С, 2013; Goldstein JL, 1979) был обнаружен скэвенджер-рецептор, через который осуществляется неконтролируемый захват ацетилированных ЛНП клетками. В дальнейшем были обнаружены еще несколько . групп скэвенджер-рецепторов, через которые модифицированные ЛНП попадают внутрь клетки (Krieger , 2001; Mineo С, 2012). Существует 2 класса рецепторов к ацетилированным ЛНП - Al и А2 (Kodama Т, 1990 ). Известно также, что рецепторы CD68, CD36, SR-B1 и LOX-1 отвечают за захват клетками модифицированных различным образом ЛНП (Krieger , 2001). В частности, недавно группой Зя (Xia F, 2013) было показано, что поглощение модифицированных липопротеинов, таких как окисленные ЛНП, происходит посредством СОЗб-рецептора, и IRGM1, играет важную роль в актин-зависимом CD36 опосредованным поглощении окисленных ЛНП макрофагами. IRGM/IRGM1 эксперессируются макрофагами вокруг атеросклеротической бляшки и их количество зависит от уровня окисленных ЛНП как in vitro, так и in vivo. Кроме того, удаление IRGM/IRMG1 значительно снижает захват окисленных ЛНП макрофагами как у мышей, так и у человека. Кроме того, IRGMl-нокаутные мыши характеризуются нарушениями интернализации CD36 макрофагов, что связано с дефицитом полимеризации a-актина. Эти результаты

продемонстрировали новую функцию 1ЬЮМ1 в регулировании поглощения макрофагами окисленных ЛНП при атеросклерозе.

Семейная гиперхолестеринемия, при которой происходит неконтролируемое накопление нативных ЛНП в интимальном слое аорты, -очень редкое заболевание. Это генетически обусловленное заболевание, которое встречается в гомозиготной форме у 1 человека на миллион, а в гетерозиготной у 1 пациента на 300 тысяч. Сердечно-сосудистые заболевания, в основе которых лежит атеросклероз, наблюдается примерно у половины населения. Как было показано во многих исследованиях жировые капли и полосы можно наблюдать уже у детей (Guardamagna О, 2013; 1иопа1а М, 2013), почти у каждого мужчины после сорока лет и у многих женщин после климакса. Каким же образом нативные ЛНП накапливаются в интиме сосудов у людей с неповрежденным апоВ,Е- рецептором? Очевидно, что нативные липопротеиды не могут попадать в клетку через скэвнджер-рецепторы к ацетилированным ЛНП, также не может происходить неконтролируемый захват через апоВ,Е-рецепторы, т.к. существует механизм обратной отрицательной связи (С1апсю1а МЬ, 2011). Следовательно, в крови присутствуют ЛНП, модифицированные таким образом, чтобы происходил их неконтролируемый захват, например, через скэвенджер-рецепторы.

В кровеносном русле и интимальном слое артерий существуют различные липолитические, дегликозилирующие и протеолитические ферменты, способные модифицировать ЛНП. В экстрацеллюлярном пространстве интимы группой Кованена были обнаружены химаза и триптаза, две нейтральные протеазы, выделяемые тучными клетками (Коуапеп, 2007; КаагЬпеп М, 1994), металлопротеиназы, выделяемые

макрофагами и гладкомышечными клетками (Packard RR, 2008; Galis ZS, 1994), плазмин (Suzuki, 2010; Grainger DJ, 1994) и тромбин (Kassel KM, 2012; Smith E, 1996).

В экстрацеллюлярном матриксе интимы были обнаружены фосфолипаза А2 (Ghesquiere SA, 2005; Plihtari R, 2010; Yamamoto К, 2011) и сфингомиелиназа (Nilsson А, 2006; Plihtari R, 2010; Marathe GK, 2000). Фосфолипаза A2 гидролизует фосфатидилхолин ЛНП (Yamamoto К, 2011), при низких значениях pH сфингомиелиназа расщепляет молекулы сфингомиелина, наиболее эффективно это происходит после предварительного гидролиза липопротеидов при нейтральной pH фосфолипазой А2 (Hurt-Camejo Е, 2000).

В интиме сосудов присутствут pH-зависимая холестеролэстераза (Suriyaphol Р, 2002), которая гидролизует лизофосфолипиды в окисленных ЛНП и эфиры холестерина в присутствии холата. Также известно, что пенистые клетки (макрофаги, наполнение липидными каплями) синтезируют в стенке сосуда лизосомальную кислую липазу (Fouchier SW, 2013).

В интиме аорты присутствуют ферменты, которые окисляют ЛНП: миелопероксидаза (Delporte С, 2013), 15-липоксигеназа (Keidar S, 1995), гемоксигеназа-1 (Csiszar А, 2007). Области атеросклеротического поражения содержат также церулоплазмин (Turgut А, 2013) и ионы металлов переходной валентности (Turgut А, 2013), которые способны к окислению ЛНП.

1.1 Роль множественно модфицированных ЛНП в атерогенезе

Итак, в интиме магистральных сосудов присутствует множество ферментов, которые способны изменять структуру ЛНП. Для моделирования этого явления исследователи подвергали липопротеиды механическому, химическому или ферментативному воздействию.

Выше было упомянуто, что Браун и Гольдштейн (Goldstein et al., 1979) обнаружили скэвенджер-рецепторы, через которые ацетилированные ЛНП попадают в клетку, и это провоцирует неконтролируемое внутриклеточное накопление липидов в них. Однако in vivo ацетилированные липопротеиды не были обнаружены. И не понятно, каким образом они могут появиться в кровотоке, для этого нет никаких предпосылок. Несмотря на это, Браун и Гольдштейн полагали, что могут иметь место другие, еще не выявленные, изменения в ЛНП, вследствие которых они будут попадать в клетку через скэвенджер рецептор (Goldstein et al., 1979). Через несколько лет Хенриксен с соавт. (Henriksen et al., 1981) выяснили, что инкубация липопротеидов с эндотелиальными клетками приводит к появлению у ЛНП атерогеных свойств. Причем транспорт этих ЛНП в клетки осуществляется именно через скэвенджер рецептор к ацетилированным ЛНП.

Одновременно было продемонстрировано, что ЛНП, подвергнутые обработке малоновым диальдегидом (МДА), также приобретают атерогенные свойства (Fogelman et al., 1980). Причем скорость захвата и деградации макрофагами модифицированных малоновым диальдегидом липопротеидов не изменялась при внесении ацетилиированных или нативных ЛНП. Следовательно, транспорт модифицированных таким образом ЛНП происходит не через апоВ,Е- или скэвенджер рецепторы.

Известно, что в местах разветвления сосудов имеет место повышенное турбодинамическое напряжение, было выдвинуто предположение, что это может служить причиной модификации ЛНП. Для моделирования данного явления применяется вортексирование - интенсивное встряхивание. Ху с соавт. (Khoo et al., 1990) продемонстровал, что такие ЛНП также вызывают накопление липидов в клетках. При встряхивании липопротеиды образуют ассоциаты, которые, которые попадают в клетки путем фагоцитоза.

ЛНП также могут подвергнуться гликозилированию в кровеносном русле (это наиболее вероятно при наличии диабета). ЛНП были гликозилированы in vitro (Klein RL, 1995) и было показано, что они вызывают в 3 раза большее накопление липидов в клетках, чем нативные ЛНП. Продемонстрировано, что обработка ЛНП липоксигеназой, миелопероксидазой, фосфолипазами А2 и С и сфингомиелиназой (Oestvang J, 2006; Adameova А, 2009) также вызывает увеличение атерогенности ЛНП.

Так как частицы ЛНП, которые попадают в интиму артерий, подвергаются протеолитической и липолитической модификации, группой Kovanen в сотрудничестве с Hurt-Camejo (Plihtari R, 2010) был изучен эффект последовательного протеолиза и липолиза на слияние ЛНП и последующее связывание образовавшихся частиц с протеогликанами стенки сосудов человека. Обработка химазой и катепсином S привела к более обширному протеолизу и высвобождению пептидных фрагментов ЛНП, чем обработка плазмином. Фосфолипаза типа 2-IIa не способна гидролизовать немодифицированные ЛНП и даже протеолиз частицы ЛНП не привел к повышению липолиза этим ферментом. Тем не менее, протеолиз с помощью

химазы и катепсина S приводил к ускоренному липолизу с помощью фосфолипазы типа 2-V и сфингомиелиназы, что ускоряло слияние частиц ЛНП между собой и связывание с протеогликанами. Взятые вместе, результаты показали, что протеолиз делает частицы ЛНП более чувствительными к гидролизу под воздействием фосфолипазы 2-V и сфингомиелиназы, таким образом, способствуя самоассоциации ЛНП и связыванию их с протеогликановым слоем, что в конечном итоге приводит к

накоплению липидов в стенке сосудов.

» •

1.2 Циркулирующие множественно модифицированные липопротеиды низкой плотности

Очевидно, что в крови больных должны присутствовать модифицированные ЛНП. И практически одновременно группой А.Н. Орехова и В.В. Тертова с соавт. (Тертов, 1999; Орехов АН, и др.) и другими исследователями (Avogaro Р, 1988; Avogaro Р, 1991) в крови пациентов больных ИБС были обнаружены липопротеиды, отличающиеся от нативных ЛНП уменьшенным содержанием остатков сиаловой кислоты (терминального сахара биантенных цепей частицы ЛНП см рис. 1). Именно это свойство и было использовано для их выделения из общей фракции ЛНП. Ricinus communis агглютинин (RCA120) имеет очень высокое сродство к галактозе - слеудющему после сиаловой кислоты сахару в углеводных цепях ЛНП, поэтому при пропускании общей фракции ЛНП через колонку с пришитым RCA12o десиалированные ЛНП оставались на колонке, в то время как нативные - с неповрежденными углеводными остатками проходили. Десиалированые ЛНП элюировали с колонки 50мМраствором галактозы.

Десиалированые ЛНП имели и другие отличия от нативных ЛНП, поэтму получили название циркулирующие множественно модифицированные ЛНП (цммЛНП) (ОгекЬоу АИ, 1989; ТеНоу УУ, 1990; Орехов АН, 2012; Орехов, 2013).

Рисунок 1 - Последовательность углеводных остатков в биантенной • цепи ЛНП. (Sial - сиаловая кислота, Gal - галактоза, GlcNAc - N-ацетилглюкозоаминогликан, Man - манноза).

Циркулирующие множественно модифицированные ЛНП проявляли атерогенные свойства, т.е. вызывали накопление холестерина и его эфиров в клетках, выделенных из интимального слоя аорты человека (Tertov VV, 1992 ; Орехов АН, 2012; Орехов, 2013). В цммЛНП содержание сиаловой кислоты примерно в 2-3 раза ниже, по сравнению с нЛНП (Tertov VV, 1992 ; Тертов, 1999; Орехов АН, 2012). Существует достоверная обратная связь между атерогенными свойствами цммЛНП и содержанием сиаловой кислоты в них (Tertov VV, 1992 ; Орехов АН, 2012; Орехов, 2013). Более того, было продемонстрировано, что ЛНП здоровых лиц, обработанные нейраминидазой (ферментом, удаляющим сиаловую кислоту) также приобретали атерогенные свойства (Orekhov AN, 1989; Tertov VV, 1990; Орехов АН, 2012; Орехов,

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Мельниченко, Александра Александровна, 2013 год

' СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1 Аксенов Д.В. Модуляция ассоциации липопротеидов низкой плотности крови человека. // Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 14.00.16 - патофизиология, НИИ ОПП РАМН, Москва, 2007г.

2 Андреева Е.Р. Михайлова И.А., Пугач И.М., Орехов А.Н. Клеточный состав атеросклеротических поражений аорты человека. [Журнал] // Ангиол сосуд хир. - 1999 г. - Т. 5 (приложение). - С. 6-26.

3 Андреева Е.Р. Тертов В.В., Мухин Д.Н., Орехов А.Н. Клеточный состав и биохимические особенности аорты человека. [Журнал] // Бюлл ВКНЦ АМН СССР. - 1985 г. - Т. 8. - С. 63-71.

4 Аничков Н. Н. Частная патологическая анатомия. Выпуск II. Сердце и сосуды. Второе издание. [Книга]. - Москва-Ленинград : Медгиз, 1947.

5 Будкина О. А. Демина Т. В., Дородных Т. Ю., Мелик-Нубаров Н. С., Гроздова И. Д. Цитотоксичность незаряженных амфифильных сополимеров [Статья] // Высокомолекулярные соединения. - 2012 г. - Т. 54, № 9. - С. 13851395.

6 Климов А. Н. Денисенко А. Д. Может ли иммунная система защищать нас от атеросклероза? [Статья] // Мед. акад. журн. - 2008 г. - Т. 8. - № 2. - С. 115-117.

7 Климов А.Н. [Раздел книги] // Биохимические основы патогенеза атеросклероза. - Ленинград, 1980.

8 Мельниченко A.A. Агрегация циркулирующих в крови

модифицированных липопротеидов низкой плотности. Роль в накоплении

внутриклеточного холестерина // Диссертация на соискание степени

кандидата биологических наук по специальностям 03.00.04 - биохимия,

154

03.00.02 - биофизика, НИИ ФХМ МЗ РФ, Москва, 2006 г.

9 Орехов А. Н. Атеросклероз. Молекулярно-клеточные механизмы атерогенеза человека; антиатеросклеротическая терапия. [Книга]. -Palmarium Academic Publishing, 2013.

10 Орехов А.Н. Андреева Е.Р. Клеточные механизмы атеросклероза: роль субэндотелиальных клеток интимы [Журнал] // Ангиол сосуд хир. - 1999 г. -Т. 5 (приложение). - С. 96-136.

11 Орехов АН Тертов ВВ, Собенин ИА Модифицированные липопротеиды и атеросклероз. Обнаружение, характеристика, механизмы модификации, атерогенность. [Книга]. - LAP LAMBERT Academic Publishing GmbH, 2012.

12 Орехов АН Тертов ВВ, Собенин ИА. Модифицированные липопротеиды и атеросклероз. Обнаружение, характеристика, механизмы модификации, атерогенность. LAP LAMBERT Academic Publishing GmbH, 2012, 295 с. ISBN: 978-3-8433-8798-9

13 Панасенко ОМ Мельниченко АА, Аксенов ДВ, Вахрушева ТВ, Супрун ИВ, Янушевская ЕВ, Власик ТН, Собенин ИА, Орехов АН Миелопероксидаза, модифицируя поверхность и снижая устойчивость к ассоциации липопротеинов низкой плотности крови человека, повышает их атерогенный потенциал [Статья] // Биол. мембраны. - 2004 г. - Т. 21. - С. 498505.

14 Панасенко ОМ Тертов ВВ, Мельниченко АА, Аксенов ДВ, Собенин PIA, Каплун ВВ, Супрун ИВ, Орехов АН Связь размера дегликозилированных различными ферментами апо-В-содержащих липопротеинов с их атерогенным потенциалом. [Статья] // Биол. мембраны. -2006 г.-Т. 23.-С. 43-52.

15 Супрун И.В. "Изучение взаимодействия липопротеидов с компонентами матрикса аорты человека и его роли в клеточных проявлениях атеросклероза Диссертация на соискание степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.04 - биохимия, РКНПК МЗ РФ, Москва, 2000.

16 Тертов ВВ Множественно-модифицированные липопротеиды низкой плотности, циркулирующие в крови человека [Статья] // Ангиология и сосудистая хирургия. - 1999 г. - Т. 5. - С. 218-236.

17 Adameova A Xu YJ, Duhamel ТА, Tappia PS, Shan L, Dhalla NS. Anti-atherosclerotic molecules targeting oxidative stress and inflammation. [Статья] // Curr Pharm Des. - 2009 г. - T. 15(27). - C. 3094-107.

18 Alaupovic P Apoliproproteins and lipoproteins [Статья]. - 1971 г. - 2 : Т. 13. - С. 141-6.

19 Andreeva E.R. Rekhter M.D., Romanov YuA et al. Stellate cells of aortic intima: II. Arborization of intimal cells in culture. [Журнал] // Tissue Cel. - 1992 г. - T. 24. - C. 697-704.

20 Armengol С Bartoli R, Sanjurjo L, Serra I, Amezaga N, Sala M, Sarrias MR. Role of scavenger receptors in the pathophysiology of chronic liver diseases. [Статья] // Crit Rev Immunol. - 2013 г. - T. 33(1). - C. 57-96.

21 Asatryan L Hamilton RT, Isas JM, Hwang J, Kayed R, Sevanian A. LDL phospholipid hydrolysis produces modified electronegative particles with an unfolded apoB-100 protein. [Статья] // J Lipid Res. - 2005 г. - T. 46(1). - С. 115122.

22 Avogaro P Bon GB and Cazzolato G Presence of a modified low density lipoprotein in humans [Статья] // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. - 1988 г. - T. 8. -C. 79.

23 Avogaro P Cazzolato G and Bittolo-Bon G Some questions concerning a small, more electronegative LDL circulating in human plasma [Статья] // Atherosclerosis. - 1991 r. - 1-2 : T. 91. - C. 163-71.

24 Badimon L Vilahur G, Padro T. Lipoproteins, platelets and atherothrombosis. [Статья] // Rev Esp Cardiol. - 2009 г. - T. 62(10). - С. 1161-78.

25 Baenziger JU Fiete D Structural determinants of Ricinus communis agglutinin and toxinspecificity for oligosaccharides [Статья] // J Biol Chem. -1979 г. - T. 254. - C. 9795-9.

26 Bambauer R Schiel R, Latza R. Low-density lipoprotein apheresis: an overview. [Статья] // Ther Apher Dial. - 2Q03 г. - T. 7(4). - C. 382-90.

27 Bancells С Villegas S, Blanco FJ, Benitez S, Gällego I, Beioki L, Рёгег-Cuellar M, Ordönez-Llanos J, Sänchez-Quesada JL. Aggregated electronegative low density lipoprotein in human plasma shows a high tendency toward phospholipolysis and particle fusion. [Статья] // J Biol Chem. - 2010 г. - T. 285(42). - C. 32425-35.

28 Basu SK Brown MS, Ho YK, Goldstein JL. Degradation of low density lipoprotein, dextran sulfate complexes associated with deposition of cholesteryl esters in mouse macrophages. [Статья] // J Biol Chem. - 1979 г. - T. 254(15). - C. 7141-6.

29 Bates SR Wissler RW. Effect of hyperlipemic serum on cholesterol accumulation in monkey aortic medial cells [Статья] // Biochim Biophys Acta. -1976 г. - 1 :T. 450. - C. 78-88.

30 Bergethon PR Kindler DD, Hallock K, Blease S, Toselli P. Continuous exposure to low amplitude extremely low frequency electrical fields characterizing the vascular streaming potential alters elastin accumulation in vascular smooth muscle cells. [Журнал] // Bioelectromagnetics. - 2013 r. - 5 : T. 34. - C. 358-65.

31 Bing H. Wang J., Zhang С., Cai H. Positive correlation between in vivo oxidized LDL and LDL immune complexes [Статья] // Clin. Biochem. - 2004 r. -T. 37, № l.-C. 72-75.

32 Bobryshev Y. V. Lord R. S. Ultrastructural recognition of cells with dendritic cell morphology in human aortic intima.Contacting interactions of vascular dendritic cells in athero-resistant and athero-prone areas of the normal aorta. [Статья] // Arch. Histol. - 1995 г. - T. 58. - C. 307-322.

33 Brooke B. S. Bayes-Genis A. Li DY. New insights into elastin and vascular disease [Статья] // Trends Cardiovasc. Med. - 2003 г. - T. 13. - C. 176-81.

34 Brown MS Goldstein JL Lipoprotein metabolism in the macrophage: implications for cholesterol deposition in atherosclerosis [Статья] // Annu. Rev. Biochem. - 1983 г. - T. 52. - C. 223-261.

35 Businaro R Tagliani A, Buttari B, Profiimo E, Ippoliti F, Di Cristofano C, Capoano R, Salvati B, Rigano R. Cellular and molecular players in the atherosclerotic plaque progression. [Статья] // Ann N Y Acad Sei. - 2012 г. - Т. 1262.-C. 134-141.

36 Buton X Mamdouh Z, Ghosh R, Du H, Kuriakose G, Beatini N, Grabowski GA, Maxfield FR and Tabas I Unique Cellular Events Occurring during the Initial Interaction of Macrophages with Matrix-retained or Methylated Aggregated Low Density Lipoprotein (LDL) [Статья] // J. Biol. Chem. - 1999 г. - T. 274. - C. 32112-21.

37 Camejo G. Lopez A., Lopez F., Quinones J.t Interaction of low density lipoproteins with arterial proteoglycans. The role of sialic acid content [Статья] // Atherosclerosis. - 1985 г. - T. 55. - C. 93-105.

38 Chazov EI Tertov VV, Orekhov AN, Lyakishev AA, Perova NV, Kurdanov KA, Khashimov KA, Novikov ID, Smirnov VN Atherogenicity of blood serum

from patients with coronary heart disease [Journal] //Lancet. - Sep 13, 1986. - Vol. 2(8507). - pp. 595-8.

39 Cianciola NL Carlin CR, Kelley TJ Molecular pathways for intracellular cholesterol accumulation: common pathogenic mechanisms in Niemann-Pick disease Type С and cystic fibrosis. [Статья] // Arch Biochem Biophys. - 2011 r. -T. 515(1-2). -C. 54-63.

40 Cianciola NL Carlin CR, Kelley TJ. Molecular pathways for intracellular cholesterol accumulation: common pathogenic mechanisms in Niemann-Pick disease Type С and cystic fibrosis. [Статья] // Arch Biochem Biophys. - 2011 r. -T. 515(1-2). - C. 54-63.

41 Cookson FB The origin of foam cells in atherosclerosis [Статья] // Br J Exp Pathol. - 1971 г. - 1 : T. 52. - C. 62-9.

42 Csiszar A Labinskyy N, Zhao X, Hu F, Serpillon S, Huang Z, Ballabh P, Levy RJ, Hintze TH, Wolin MS, Austad SN, Podlutsky A, Ungvari Z. Vascular superoxide and hydrogen peroxide production and oxidative stress resistance in two closely related rodent species with disparate longevity. [Статья] // Aging Cell. - 2007 г. - T. 6(6). - C. 783-97.

43 Daub К Siegel-Axel D, Schönberger T, Leder С, Seizer P, Müller K, Schaller M, Penz S, Menzel D, Büchele B, Bültmann A, Münch G, Lindemann S, Simmet T, Gawaz M. Inhibition of foam cell formation using a soluble CD68-Fc fusion protein. [Статья] // J Mol Med (Berl). - 2010 г. - T. 88(9). - C. 909-20.

44 Davis HR Jr Tershakovec AM, Tomassini JE, Musliner T. Intestinal sterol transporters and cholesterol absorption inhibition. [Статья]. - 2011 г. - Т. 22(6). -С. 467-78.

45 Deevska GM Sunkara M, Morris AJ, Nikolova-Karakashian MN. Characterization of secretory sphingomyelinase activity, lipoprotein sphingolipid

content and LDL aggregation in ldlr-/- mice fed on a high-fat diet. [Статья] // Biosci Rep. - 2012 г. - T. 32(5). - C. 479-90.

46 Delporte С Van Antwerpen P, Vanhamme L, Roumeguere T, Zouaoui Boudjeltia K. Low-density lipoprotein modified by myeloperoxidase in inflammatory pathways and clinical studies [Статья] // Mediators Inflamm. - 2013 г. - C. 971579.

47 Dominiczak MH Caslake MJ. Apolipoproteins: metabolic role and clinical biochemistry applications. [Статья] // Ann Clin Biochem. Nov;:. - 2011 г. - T. 48(Pt 6). - C. 498-515.

48 Elworthy P. H. Ireon J. F. Nonionic Surfactants ed. Shick M. J. [Книга]. -[б.м.] : Marcel Dekker, New York, 1971. - C. 9317.

49 Esterbauer H Gebicki J, Puhl H and Jurgens G The role of lipid peroxidation and antioxidants in oxidative modification of LDL [Статья] // Free Radic. Biol. Med. - 1992 г. - T. 13. - C. 341-390.

50 Fisher E A The degradation of apolipoprotein В100: multiple opportunities to regulate VLDL triglyceride production by different proteolytic pathways. [Статья] // Biochim Biophys Acta. - 2012 г. - T. 1821(5). - C. 778-81.

51 Fogelman AM Shechter I, Seager J, Hokom M, Child JS and Edwards PA. Malondialdehyde Alteration of Low Density Lipoproteins Leads to Cholesteryl Ester Accumulation in Human Monocyte-Macrophages [Статья] // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1980 г. - T. 77. - C. 2214-18.

52 Fouchier SW Defesche JC. Lysosomal acid lipase A and the hypercholesterolaemic phenotype. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2013 г. - T. 24(4). - C. 332-8.

53 Fowler SM Scio' MA, Haley NJ. Characterization of lipid-laden aortic cells from cholestrol rabbits. IV. Investigation of macrophage-like proteins of aortic cell populations. [Статья]. - 1979 г. - Т. 41. - С. 3.72-378.

54 Galis ZS Sukhova GK, Lark MW, Libby. Increased expression of matrix metalloproteinases and matrix degrading activity in vulnerable regions of human atherosclerotic plaques [Статья] // J. Clin. Invest. - 1994 г. - T. 94. - C. 24932503.

55 Garrido-Sánchez L Chinchurreta P, García-Fuentes E, Mora M, Tinahones FJ A higher level of IgM anti-oxidized LDL antibodies is associated with a lower severity of coronary atherosclerosis in patients on statins [Статья] // Int J Cardiol. -2010г. -Т. 145(2).-С. 263-4.

56 Geer J. С. McGill H. C., Strong J. P., Holman R. L. Electron microscopy of human atherosclerotic lesions. [Статья] // Fed. Proc. - 1960 г. - T. 19. - C. 15-8.

57 Ghesquiere SA Hofker MH, de Winther MP. The role of phospholipases in lipid modification and atherosclerosis. [Статья] // Cardiovasc Toxicol. - 2005 r. -T. 5(2).-C. 161-82.

58 Ghesquiere SA Hofker MH, de Winther MP. The role of phospholipases in lipid modification and atherosclerosis. [Статья] // Cardiovasc Toxicol. - 2005 r. -T. 5(2).-C. 161-82.

59 Goldstein JL Brown MS. The low-density lipoprotein pathway and its relation to atherosclerosis [Статья] // Annu Rev Biochem. - 1977 г. - T. 46. - C. 897-930.

60 Goldstein JL Ho YK, Basu SK, and Brown MS Binding site on macrophages that mediates uptake and degradation of acetylated low density lipoprotein, producing massive cholesterol deposition. [Статья] // Proc Natl Acad Sci USA. -1979 г.-T. 76.-C. 333-7.

61 Gorshkova IN Menschikowski M, Jaross W. Alterations in the physiochemical characteristics of low and high density lipoproteins after lipolysis with phospholipase A2. A spin-label study. [Статья]. - 1996 г. - Т. 1300(2). - С. 103-13.

62 Goswami В Rajappa М, Chakraborty В, Patra SK, Kumar S, Mallika V. Comparison of the various lipid ratios and indices for risk assessment in patients of myocardial infarction. [Статья] // Clin Biochem. - 2012 г. - T. 45(6). - C. 445-9.

63 Gown A.M. Tsukada Т., Ross R. Human atherosclerosis. II. Immunocytochemical analysis of the cellular composition of human atherosclerotic

. lesions. [Journal] // Am J Pathol. - 1986. - Vol. 125. - pp. 191-207.

64 Grainger DJ Kemp PR, Liu AC, Lawn RM and Metcalfe JC Activation of transforming growth factor-beta is inhibited in transgenic apolipoprotein(a) mice [Статья] // Nature. - 1994 г. - T. 370. - C. 460-462.

65 Greig FH Kennedy S, Spickett CM. Physiological effects of oxidized phospholipids and their cellular signaling mechanisms in inflammation. [Статья] // Free Radic Biol Med. - 2012 г. - T. 52(2). - C. 266-80.

66 Guardamagna О Cagliero P, Abello F. Management of inherited atherogenic dyslipidemias in children. [Article] // Ther Apher Dial. - 2013. - Vol. 17(2). - pp. 150-61.

67 Guarino AJ Lee SP, Tulenko TN, Wrenn SP Aggregation kinetics of low density lipoproteins upon exposure to sphingomyelinase [Статья] // J Colloid Interface Sci. - 2004 т. - T. 279(1). - C. 109-16.

68 Guarino AJ Tulenko TN, Wrenn SP Sphingomyelinase-to-LDL molar ratio determines low density lipoprotein aggregation size: biological significance. [Статья] // Chem Phys Lipids. - 2006 г. - T. 142(1-2). - C. 33-42.

69 Guha M Gursky О. Effects of oxidation on structural stability and remodeling of human very low density lipoprotein. [Статья] // Biochemistry. -2010 г. - T. 49(44). - C. 9584-93.

70 Guyton J. R. Bocan Т. M., Schifani T. A. Quantitative ultrastructural analysis of perifibrous lipid and its association with elastin in nonatherosclerotic human aorta. [Статья] // Arteriosclerosis. - 1985 г. - T. 5. - C. 644-652.

71 Guyton Ж Klemp KF Ultrastructural discrimination of lipid droplets and vesicles in atherosclerosis: value of osmium-thiocarbohydrazide-osmium and tannic acid-paraphenylenediamine techniques. [Статья] // J. Histochem. Cytochem. - 1988 г. - T. 36. - C. 1319-1328.

72 Hansson G. K. Hermansson A. The immune system in atherosclerosis. [Статья] // Nat. Immunol. - 2011 г. - T. 12. - C. 204-212.

73 Hansson GK Atherosclerosis - an immune disease: the Anitschkov lecture 2007. [Статья] // Atherosclerosis. - 2009 г. - T. 202. - C. 2-10.

74 Hazell LJ van den Berg JJ and Stocker R Oxidation of low-density lipoprotein by hypochlorite causes aggregation that is mediated by modification of lysine residues rather than lipid oxidation [Статья] // Biochem J. - 1994 т. - 1 : T. 302. - C. 297-304.

75 Hehir S Plourde NM, Gu L, Poree DE, Welsh WJ, Moghe PV, Uhrich KE. Carbohydrate composition of amphiphilic macromolecules influences physicochemical properties and binding to atherogenic scavenger receptor A. [Статья] // Acta Biomater. - 2012 г. - T. 8(11). - C. 3956-62.

76 Heinecke JW Suits AG, Aviram M, Chait A. Phagocytosis of lipase-aggregated low density lipoprotein promotes macrophage foam cell formation. Sequential morphological and biochemical events. [Статья] // Arterioscler Thromb. - 1991 г. - Т. 11 (6). - С. 1643-51.

77 Helske S Kupari M, Lindstedt KA, Kovanen PT. Aortic valve stenosis: an active atheroinflammatory process. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2007 г. - T. 18(5).-C. 483-91.

78 Hoff HF Hoppe G. Structure of cholesterol-containing particles accumulating in atherosclerotic lesions and the mechanisms of their derivation. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 1995 г. - T. 6(5). - C. 317-25.

79 Hoff HF Whitaker ТЕ and O'Neil J Oxidation of low density lipoprotein leads to particle aggregation and altered macrophage recognition [Статья] // J. Biol. Chem. - 1992 г. - T. 267. - C. 602-9.

80 Huang AS Gonzalez JM Jr, Le PV, Heur M, Tan JC Sources of Structural Autofluorescence in the Human Trabecular Meshwork. [Журнал] // Invest Ophthalmol Vis Sci. - 2013 г. - Т. 1. - C. 12-11235.

81 Hurt-Camejo E Camejo G, Sartipy P. Phospholipase A2 and small, dense low-density lipoprotein. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2000 г. - Т. 11(5). - C. 465-71.

82 Jayaraman S Gantz D, Gursky O. Structural basis for thermal stability of human low-density lipoprotein. [Статья] // Biochemistry. - 2005 г. - T. 44(10). -C. 3965-71.

83 Jayaraman S Gantz DL, Gursky О Effects of oxidation on the structure and stability of human low-density lipoprotein [Статья] // Biochemistry. - 2007 г. - T. 46(19). -C. 5790-7.

84 Juonala M Viikari JS, Raitakari ОТ. Main findings from the prospective Cardiovascular Risk in Young Finns Study. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2013 г.-T. 24(1).-C. 57-64.

85 Kaartinen M Penttila A, Kovanen PT Mast cells of two types differing in neutral protease composition in the human aortic intima. Demonstration of

tryptase- and tryptase hymasecontaining mast cells in normal intimas, fatty streaks, and the shoulder regions of atheromas. [Статья] // Arterioscler. Thromb. - 1994 г. -T. 14. - C. 966-972.

86 Kacharava AG Tertov VV, Orekhov AN. Autoantibodies against low-density lipoprotein and atherogenic potential of blood. [Журнал] // Ann Med. -1993 r.-T. 25. -C. 551-5.

87 Kassel KM Sullivan BP, Cui W, Copple BL, Luyendyk JP. Therapeutic administration of the direct thrombin inhibitor argatroban reduces hepatic inflammation in mice with established fatty liver disease. [Статья] // Am J Pathol. - 2012 г. - T. 181(4). - C. 1287-95.

88 Katsuda S Kaji T. Atherosclerosis and extracellular matrix. [Статья] // Atheroscler. Thromb. - 2003 г. - T. 10. - C. 267-274.

89 Katsuda S. Boyd H.C., Fluckiger R., et al. Human atherosclerosis. III. Immunocytochemical analysis of the cell composition of lesions of young adults. [Журнал] // Am J Pathol. - 1992 г. - T. 140. - C. 907-14.

90 Kawabe Y Cynshi O, Takashima Y, Suzuki T, Ohba Y and Kodama T Oxidation-induced aggregation of rabbit low-density lipoprotein by azo initiator [Статья] // Arch Biochem Biophys. - 1994 г. - T. 310(2). - C. 489-96.

91 Keidar S Kaplan M, Hoffman A, Aviram M. Angiotensin II stimulates macrophage-mediated oxidation of low density lipoproteins. [Статья] // Atherosclerosis. - 1995 г. - T. 115(2). - C. 201-15.

92 Khoo JC Miller E, McLoughlin P and Steinberg B. Prevention of low density lipoprotein aggregation by high density lipoprotein or apolipoprotein A-I [Статья] // J. Lipid Res. - 1990 г. - T. 31. - C. 645.

93 Kinnunen PK Holopainen JM. Sphingomyelinase activity of LDL: a link between atherosclerosis, ceramide, and apoptosis? [Статья] // Trends Cardiovasc Med. - 2002 г. - T. 12(1). - C. 37-42.

94 Klein RL Laimins M, Lopes-Virella MF. Isolation, characterization, and metabolism of the glycated and nonglycated subfractions of low-density lipoproteins isolated from type I diabetic patients and nondiabetic subjects. [Статья] // Diabetes. - 1995 г. - T. 44(9). - C. 1093-8.

95 Kleinman Y Krul ES, Burnes M, Aronson W, Pfleger B, Schonfeld G. Lipolysis of LDL with phospholipase A2 alters the expression of selected apoB-100 epitopes and the interaction of LDL \yith cells. [Статья] // J Lipid Res. - 1988 г. - T. 29(6). - C. 729-43.

96 Klimov AN Denisenko AD, Vinogradov AG, Nagornev VA, Pivovarova YI, Sitnikova OD, Pleskov VM Accumulation of cholesteryl esters in macrophages incubated with human lipoprotein-antibody autoimmune complex. [Статья] // Atherosclerosis. - 1988 г. - T. 74(1-2). - C. 41-46.

97 Kodama T Freeman M, Rohrer L, Zabrecky J, Matsudaira P, and Krieger M. Type I macrophage scavenger receptor contains alpha-helical and collagen-like coiled coils. [Статья] //Nature. - 1990 г. - T. 343. - C. 531-535.

98 Kovanen P T Mast cells: multipotent local effector cells in atherothrombosis. [Статья] // Immunol Rev. Jun;:Review. - 2007 г. - T. 217. - C. 105-22.

99 Krieger M Scavenger receptor class В type I is a multiligand HDL receptor that influences diverse physiologic systems. [Статья] // J Clin Invest. - 2001 г. - T. 108(6). -C. 793-7.

100 Krieger M Acton S, Ashkenas J, Pearson A, Penman M, and Resnick D. Molecular flypaper, host defense, and atherosclerosis.Structure, binding properties,

and functions of macrophage scavenger receptors. [Статья] // J. Biol. Chem. -1993 г. - T. 268. - C. 4569-^1572.

101 Krieger M The other side of scavenger receptors: pattern recognition for host defense. [Статья] // Curr. Opin. Lipidol. - 1997 г. - T. 8. - C. 275-280.

102 Krisko A Stjepanovic G, Pifat G, Ruysschaert JM, Goormaghtigh E. Detection of apolipoprotein В100 early conformational changes during oxidation. [Статья] // Biochim Biophys Acta. - 2007 г. - T. 1768(11). - C. 2923-30.

103 Kruth H S Receptor-independent fluid-phase pinocytosis mechanisms for induction of foam cell formation with native low-density lipoprotein particles. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2011 г. - T. 22(5). - C- 386-93.

104 Kruth HS Localization of unesterified cholesterol in human atherosclerotic lesions. Demonstration of filipin-positive, Oil-Red-O-negative particles. [Статья] // Am. J. Pathol. - 1984 г. - Т. 114. - C. 201-208.

105 La Belle M Krauss RM Differences in carbohydrate content of low density lipoproteins associated with low density lipoprotein subclass patterns [Статья] // J Lipid Res. - 1990 г. - T. 31. - C. 1577-1588.

106 Lang T.A. Secic M. How to report statistics in medicine: annotated guidelines for authors, editors, and reviewers. Second edition. [Книга]. -Philadelphia : American College of Physicians, 2006. - C. 490.

107 Lappalainen J Lindstedt KA, Oksjoki R, Kovanen PT OxLDL-IgG immune complexes induce expression and secretion of proatherogenic cytokines by cultured human mast cells. [Журнал] // Atherosclerosis. - 2011 г. - T. 214(2). - C. 357-63.

108 Libby P Ridker PM, Hansson GK. Progress and challenges in trans-lating the biology of atherosclerosis. [Статья] //Nature. - 2011 г. - T. 473(7347). - C. 317-325.

109' Lipponen К Liu Y, Stege PW, Oorni K, Kovanen PT, Riekkola ML. Capillary electrochromatography and quartz crystal microbalance, valuable techniques in the study of heparin-lipoprotein interactions. [Статья] // Anal Biochem. - 2012 г. - T. 424(1). - C. 71-8.

110 Lojda Z Ruzickova M, Havrankova E and Synkova V Lysosomal proteases in the normal and atherosclerotic arterial wall [Статья] // Histochem. J. - 1984 r. -T. 16. -C. 399^105.

111 Lopes-Virella M.F. Hunt KJ, Baker NL, Virella G, Moritz T и Investigators. VADT The levels of MDA-LDL in circulating immune complexes predict myocardial infarction in the VADT study. [Статья] // Atherosclerosis. - 2012 r. -T. 224(2). -C. 526-31.

112 Lopes-Virella M.F. Virella G. Pathogenic Role of Modified LDL Antibodies and Immune Complexes in Atherosclerosis. [Статья] // J Atheroscler Thromb. -2013 г. - T. Aug 20. [Epub ahead of print],

113 Lopes-Virella MF Baker NL, Hunt KJ, Lyons TJ, Jenkins AJ, Virella G High concentrations of AGE-LDL and oxidized LDL in circulating immune complexes are associated with progression of retinopathy in type 1 diabetes. [Журнал] // Diabetes Care. - 2012 г. - T. 35(6). - C. 1333-4.

114 Lopes-Virella MF Hunt KJ, Baker NL, Virella G, Moritz T The levels of MDA-LDL in circulating immune complexes predict myocardial infarction in the VADT study. [Журнал] // Atherosclerosis. - 2012 г. - T. 224(2). - C. 526-31.

115 Lopes-Virella MF Hunt KJ, Baker NL, Virella G, Moritz T и Investigators. VADT The levels of MDA-LDL in circulating immune complexes predict myocardial infarction in the VADT study. [Статья] // Atherosclerosis. - 2012 r. -T. 224(2). - C. 526-31.

116 Lopes-Virella MF Klein RL, Lyons TJ, Stevenson HC and Witztum JL Glycosylation of low-density lipoprotein enhances cholesteryl ester synthesis in human monocyte-derived macrophages [Статья] // Diabetes. - 1988 г. - T. 37. - C. 550.

117 Lopes-Virella MF Virella G. Pathogenic Role of Modified LDL Antibodies and Immune Complexes in Atherosclerosis. [Статья] // J Atheroscler Thromb. -2013 г. - T. Aug 20. [Epub ahead of print].

118 Lottin H Motta C, Simard G. Differential effects of glycero- and sphingo-phospholipolysis on human high-density lipoprotein fluidity. [Статья] // Biochim Biophys Acta. - 1996 r. - J. 1301(1-2). - C. 127-32.

119 Lu M Gantz DL, Herscovitz H, Gursky O. Kinetic analysis of thermal stability of human low density lipoproteins: a model for LDL fusion in atherogenesis. [Статья] // J Lipid Res. - 2012 г. - T. 53(10). - C. 2175-85.

120 Lund-Katz S Laboda HM, McLean LR and Phillips MC Influence of molecular packing and phospholipid type on rates of cholesterol exchange [Статья] // Biochemistry. - 1988 г. - T. 27. - C. 3416-3423.

121 Lund-Katz S Phillips MC Packing of cholesterol molecules in human low-density lipoprotein [Статья] // Biochemistry. - 1986 г. - T. 25. - C. 1562-1568.

122 Lunsted L. G. Schmolka I. Block and graft copolymerization. Ed. by R.J.Ceresa. Wiley, London. 1976. V. 2. P. 174-205. [Книга].

123 Maeda S Nakanishi S, Yoneda M, Awaya T, Yamane K, Hirano T, Kohno N. Associations between small dense LDL, HDL subfractions (HDL2, FEDL3) and risk of atherosclerosis in Japanese-Americans [Статья] // J Atheroscler Thromb. -2012 г. -T. 19(5). -C. 444-52.

124 Maiolino G Pedon L, Cesari M, Frigo AC, Barisa M, Rossitto G, Seccia TM, Zanchetta M, Rossi GP. Antibodies to malondialdehyde oxidized low-density

lipoproteins predict long term cardiovascular mortality in high risk patients. [Статья] // Int J Cardiol. - 2013 г. - T. 168(1). - C. 484-9.

125 Marathe GK Harrison KA, Murphy RC, Prescott SM, Zimmerman GA, Mclntyre TM. Bioactive phospholipid oxidation products. [Статья] // Free Radic Biol Med. - 2000 г. - T. 28(12). - C. 1762-70.

126 Marathe S Schissel SL, Yellin MJ, Beatini N, Mintzer R, Williams KJ and Tabas I Human vascular endothelial cells are a rich and regulatable source of secretory sphingomyelinase.Implications for early atherogenesis and ceramide-mediated cell signaling [Статья] // J. Biol. Chem. - 1998 г. - T. 273. - C. 40814088.

127 Mattjus P Slotte JP Does cholesterol discriminate between sphingomyelin and phosphatidylcholine in mixed monolayers containing both phospholipids? [Статья] // Chem. Phys. Lipids. - 1996 г. - T. 81. - C. 69-80.

128 Mayasari DS Emoto N, Yagi K, Vignon-Zellweger N et al Rhodaminelabeled LDL as a tool to monitor the lipoprotein traffic in experimental model of early atherosclerosis in mice [Статья] // Kobe J Med Sci. - Kobe J Med Sci. 2013 Apr 18;59(2):E54-63. Rhodamine-labeled LDL as a tool to monitor the lipoprotein traffic in experimental model of early atherosclerosis in mice., 2013 г. - T. 59(2). -C. 54-63.

129 Melchior JT Sawyer JK, Kelley KL, Shah R, Wilson MD, Hantgan LDL particle core enrichment in cholesteryl oleate increases proteoglycan binding and promotes atherosclerosis. [Статья] // J Lipid Res. - 2013 г. - T. 54(9). - C. 2495503.

130 Mineo С Shaul PW. Functions of scavenger receptor class B, type I in atherosclerosis. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2012 г. - T. 23(5). - C. 487-93.

131 Moghimi S. M. Hunter A. С. Trends Biotechnol [Статья]. - 2000 г. - Т. 1'8-№ 10. - С. 412.

132 Mohty D Pibarot P, Després JP, Côté С, Arsenault В, Cartier A, Cosnay P, Couture C, Mathieu P. Association between plasma LDL particle size, valvular accumulation of oxidized LDL, and inflammation in patients with aortic stenosis. [Статья] // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2008 г. - T. 28(1). - C. 187-93.

133 Morita SY Kawabe M, Nakano M, Handa T. Pluronic L81 affects the lipid particle sizes and apolipoprotein В conformation. [Статья] // Chem Phys Lipids. -2003 г.-T. 126(1).-C. 39-48.

134 Mukhin D. N. Orekhov A. N., Andreçva E. R., Schindeler E. M., Smirnov V. N. Lipids in cells of atherosclerotic and uninvolved human aorta. III. Lipid distribution in intimai sublayers [Статья] // Exp. Mol. Pathol. - 1991 г. - T. 54. - C. 22-30.

135 Murphy HC Ala-Korpela M, White JJ, Raoof A, Bell JD, Barnard ML, Burns SP and Iles RA. Evidence for distinct behaviour of phosphatidylcholine and sphingomyelin at the low density lipoprotein surface [Статья] // Biochem. Biophys. Res. Commun. - 1997 г. - T. 234. - С. 733-737.

136 Murphy НС Burns SP, White JJ, Bell JD, lies RA. Investigation of human low-density lipoprotein by (1)H nuclear magnetic resonance spectroscopy: mobility of phosphatidylcholine and sphingomyelin headgroups characterizes the surface layer. [Статья] // Biochemistry. - 2000 f. - T. 39(32). - C. 9763-70.

137 Mustafa A. Nityanand S., Berglund L. et a Circulating immune complexes in 50-year-old men as a strong and independent risk factor for myocardial infarction [Статья] // Circulation. - 2000 г. - T. 102. - C. 2576-2581.

138 Nagai T Miyaichi Y, Tomimori T, Yamada H. Inhibition of mouse liver sialidase by plant flavonoids. [Журнал] // Biochem Biophys Res Commun. - 1989 г. -T. 163. - C. 25-32.

139 Nalbandian R. M. Henry R. L., Balko K. W., Adams D.V., Neuman N. R. [Статья] // J. Biomed. Mater. Res. - 1987 r. - № 9 : T. 21. - С. 1135.

140 Nilsson A Duan RD. Absorption and lipoprotein transport of sphingomyelin. [Статья] // J Lipid Res. - 2006 г. - T. 47(1). - C. 154-71.

141 Nilsson J Bjorkbacka H, Fredrikson GN. Apolipoprotein В100 autoimmunity and atherosclerosis - disease mechanisms and therapeutic potential. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2012 г. - T. 23(5). - C. 422-8.

142 Noma A. Takahashi Т., Wada T Elastin-lipid interaction in the arterial wall. Part 2. In vitro binding of lipoprotein lipids to arterial elastin and the inhibitory effect of high density lipoproteins on the process [Статья] // Atherosclerosis,. -1979 г.-Т. 33.-C. 373-382.

143 Noma A. Takahashi Т., Wada T Elastin-lipid interaction in the arterial wall. Part 2. In vitro binding of lipoprotein-lipids to arterial elastin and the inhibitory effect of high density lipoproteins on the process. [Статья] // Atherosclerosis. -1981 г. -T. 38. -C. 373-382.

144 Nyyssonen К Kurl S, Karppi J, Nurmi T, Baldassarre D, Veglia F, Rauramaa R, de Faire U, Hamsten A, Smit AJ, Mannarino E et al LDL oxidative modification and carotid atherosclerosis: results of a multicenter study [Статья] // Atherosclerosis. - 2012 г. - T. 225(1). - C. 231-6.

145 Oestvang J Johansen B. PhospholipaseA2: a key regulator of inflammatory signalling and a connector to fibrosis development in atherosclerosis. [Статья] // Biochim Biophys Acta. - 2006 г. - T. 1761(11). - C. 1309-16.

146 ' Oorni К Hakala JK, Annila А, Ala-Korpela M, 'Kovanen PT. Sphingomyelinase induces aggregation and fusion, but phospholipase A2 only aggregation, of low density lipoprotein (LDL) particles. Two distinct mechanisms leading to increased binding strength of LDL to human aortic proteoglycans. [Статья] // J Biol Chem. - 1998 г. - T. 273(44). - C. 29127-34.

147 Oorni К Kovanen PT. Enhanced extracellular lipid accumulation in acidic environments. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 2006 г. - T. 17(5). - C. 534-40.

148 Oorni К Posio P, Ala-Korpela M, Jauhiainen M, Kovanen PT. Sphingomyelinase induces aggregation and fusion of small very low-density lipoprotein and intermediate-density lipoprotein particles and increases their retention to human arterial proteoglycans. [Статья] // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2005 г. - T. 25(8). - C. 1678-83.

149 Orekhov A. N. Andreeva E. R., Andrianova I. V., Bobryshev Y. V. Peculiarities of cell composition and cell proliferation in different type atherosclerotic lesions in carotid and coronary arteries [Статья] // Atherosclerosis. - 2010 т. - T. 212. - C. 436^143.

150 Orekhov A. N. Andreeva E. R., Tertov V. V The distribution of cells and chemical components in the intima of human aorta [Статья] // Soc. Med. Rev. A: Cardiol. - 1987 г. - Т. 1. - C. 75-100.

151 Orekhov A.N. Andreeva E.R., Tertov V.V., Krushinskii A.V. Dissociated cells from different layers of adult human aortic wall [Журнал] // Acta Anat (Basel). - 1984 г. - Т. 119. - C. 99-105.

152 Orekhov A.N. Kalenich O.S., Tertov V.V. Diagnostic value of immune cholesterol as a marker for atherosclerosis. [Статья] // J. Cardiovasc. Risk. - 1995 г. - T. 2. - C. 459-466.

153 Orekhov A.N. Tertov V.V. Atherogenicity of anti-LDL autoantibodies [Статья] // Treatment of Severe Dyslipoproteinemia in the Prevention of Coronary Heart Disease. - Basel, 1992 г. - T. 3. - C. 91-8.

154 Orekhov A.N. Tertov V.V. Atherogenicity of autoantibodies against low density lipoprotein. [Журнал] // Agents and Actions. - 1991 г г. - Т. 32. - С. 1289.

155 Orekhov A.N. Tertov V.V., Kudryashov S.A., Smirnov V.N. Triggerlike Stimulation of cholesterol accumulation and DNA and extracellular matrix synthesis induced by atherogenic serum or low density lipoprotein in cultured cells [Статья] // С ire Res. - 1990 г. - T. 66(2). - C. 311 -320.

156 Orekhov A.N. Tertov V.V., Mukhin D.N., et al. Association of low-density lipoprotein with particulate connective tissue matrix components enhances cholesterol accumulation in cultured subendothelial cells of human aorta [Статья] // Biochim Biophys Acta. - 1987 г. - T. 928(3). - C. 251-258.

157 Orekhov A.N. Tertov V.V., Mukhin D.N., et al. Insolubilization of low density lipoprotein induces cholesterol accumulation in cultured subendothelial cells of human aorta [Статья] // Atherosclerosis. - 1989 г. - T. 79. - C. 59-70.

158 Orekhov A.N. Tertov V.V., Novikov I.D., et al. Lipids in cells of atherosclerotic and uninvolved human aorta. I. Lipid composition of aortic tissue and enzyme-isolated and cultured cells. [Журнал] // Exp Mol Pathol. - 1985 г. - T. 42(1). -C. 117-37.

159 Orekhov AN Kalenich OS, Tertov VV, Novikov ID. Lipoprotein immune complexes as markers of atherosclerosis. [Статья] // Int. J. Tissue React. - 1991b г.-T. 13.-C. 233-6.

160 Orekhov AN Tertov VV, Kabakov AE, Adamova IYu,Pokrovsky SN, Smirnov VN Autoantibodies against modified low density lipoprotein. Nonlipid

factor of blood plasma that stimulates foam cell formation. [Журнал] //' Arterioscler Thromb. - 1991 б г. - Т. 11. - С. 316-26.

161 Orekhov AN Tertov VV, Mukhin DN, Mikhailenko IA Modification of low density lipoprotein by desialylation causes lipid accumulation in cultured cells: discovery of desialylated lipoprotein with altered cellular metabolism in the blood of atherosclerotic patients. [Журнал] // Biochem Biophys Res Commun. - 14 Jul 1989 г. -T. 162(1). -C. 206-11.

162 Orekhov AN Tertov VV, Mukhin DN, Mikhailenko IA Modification of low density lipoprotein by desialylation causes lipid accumulation in cultured cells: discovery of desialylated lipoprotein with altered cellular metabolism in the blood of atherosclerotic patients. [Статья] // Biochem Biophys Res Commun. - 1989 r. -T. 162(1).-C. 206-11.

163 Orekhov AN Tertov VV, Mukhin DN. Desialylated low density lipoprotein -naturally occurring lipoprotein with atherogenic potency. [Журнал] // Atherosclerosis. - 1991 а г. - T. 86. - C. 153-61.

164 Orso E Grandl M, Schmitz G. Oxidized LDL-induced endolysosomal phospholipidosis and enzymatically modified LDL-induced foam cell formation determine specific lipid species modulation in human macrophages. [Статья] // Chem Phys Lipids. - 2011 г. - T. 164(6). - C. 479-87.

165 Packard RR Libby P. Inflammation in atherosclerosis: from vascular biology to biomarker discovery and risk prediction. [Статья] // Clin Chem. - 2008 г. - T. 54(1). - C. 24-38.

166 Pearse A G Histochemistry: theoretical and applied. [Книга]. - London : Churchill Ltd., 1969.

167 Piha M Lindstedt L, Kovanen PT Fusion of proteolyzed low-density lipoprotein in the fluid phase: a novel mechanism generating atherogenic lipoprotein particles [Статья] //Biochemistry. - 1995 r. - 32 : T. 34. - C. 10120-9.

168 Plihtari R Hurt-Camejo E, Oorni K, Kovanen PT Proteolysis sensitizes LDL particles to phospholipolysis by secretory phospholipase A2 group V and secretory sphingomyelinase [Статья] // J Lipid Res. - 2010 г. - T. 51(7). - C. 1801-9.

169 Podet EJ Shaffer DR, Gianturco SH, Bradley WA, Yang CY, Guyton JR. Interaction of low density lipoproteins with human aortic elastin. [Статья] // Arterioscler Thromb. - 1991 г. - T. 11(1). - С. 116-22.

. 170 Pranavchand R Reddy BM. Current status of understanding of the genetic etiology of coronary heart disease. [Статья] // J Postgrad Med. Jan-Mar;:. - 2013 г. -T. 59(1). -C. 30-41.

171 Quarles L D Reducing cardiovascular mortality in chronic kidney disease: something borrowed, something new. [Статья] // J Clin Invest. - 2013 г. - T. 123(2). - C. 542-3.

172 Ravandi A Boekholdt SM, Mallat Z, Talmud PJ, Kastelein JJ, Wareham NJ, Miller ER, Benessiano J, Tedgui A, Witztum JL, Khaw KT, Tsimikas S Relationship of IgG and IgM autoantibodies and immune complexes to oxidized LDL with markers of oxidation and inflammation and cardiovascular events: results from the EPIC-Norfolk Study. [Журнал] // J Lipid Res. - 2011 г. - T. 52(10). -C. 1829-36.

173 Rodriguez-Lee M Bondjers G, Camejo G. Fatty acid-induced atherogenic changes in extracellular matrix proteoglycans. [Статья] // Curr Opin Lipidol. -2007 г. -T. 18(5). -C. 546-53.

174 Ross R Atherosclerosis - an inflammatory disease. [Статья] // N. Engl. J. Med. - 1999 г. - T. 340. - С. 115-126.

175 Salonen JT Yla-Herttuala S, Yamamoto R, Butler S, Korpela H, Salonen R, Nyyssonen K, Palinski W, Witztum JL Autoantibody against oxidised LDL and progression of carotid atherosclerosis. [Статья] // Lancet. - 1992 г. - T. 339(8798). - C. 883-7.

176 Saputri FC Jantan I. Inhibitory activities of compounds from the twigs of Garcinia hombroniana Pierre on human low-density lipoprotein (LDL) oxidation and platelet aggregation. [Статья] // Phytother Res. - 2012 г. - T. 26(12). - C. 1845-50.

177 Satchell L Leake DS. Oxidation of low-density lipoprotein by iron at lysosomal pH: implications for atherosclerosis. [Статья] // Biochemistry. - 2012 г.-T. 51(18):.-C. 3767-75.

178 Schiopu A Bengtsson J, Soderberg I, Janciauskiene S, Lindgren S, Ares MP, Shah PK, Carlsson R, Nilsson J, Fredrikson GN. Recombinant human antibodies against aldehyde-modified apolipoprotein В-100 peptide sequences inhibit atherosclerosis. [Статья] // Circulation. - 2004 г. - Т. 110(14). - C. 2047-52.

179 Schwartz S. M. deBlois D., O'Brien E.R. The intima: soil for atherosclerosis and restenosis. [Статья] // Circ. Res. - 1995 г. - T. 77. - C. 445-465.

180 Seeballuck F Ashford MB, O'Driscoll CM. The effects of pluronics block copolymers and Cremophor EL on intestinal lipoprotein processing and the potential link with P-glycoprotein in Caco-2 cells. [Статья] // Pharm Res. - 2003 г.-T. 20(7).-C. 1085-92.

181 Seyama Y. Wachi H. : Atherosclerosis and matrix dystrophy. [Статья] // Atheroscler. Thromb. - 2004 г. - Т. 11. - C. 236-245.

182 Smith E В The relationship between plasma and tissue lipids in human atherosclerosis. [Статья]. - 1974 т. - Т. 12. - С. 1-49.

183 Smith E Crosbie L, Carey S Prothrombin-related antigens in human aortic intima [Статья] // Semin. Thromb. Hemost. - 1996 г. - Т. 22. - С. 347-350.

184 Sneck М Nguyen SD, Pihlajamaa T, Yohannes G, Riekkola ML, Milne R, Kovanen PT, Oörni К Conformational changes of ароВ-100 in SMase-modified LDL mediate formation of large aggregates at acidic pH [Статья] // J Lipid Res. -2012 г. -Т. 53(9). -С. 1832-9.

185 Sobenin IA Tertov VV, Orekhov AN. Atherogenic modified LDL in diabetes. [Статья] // Diabetes. - 1996 r. - 3 : T. 45. - C. 35-9.

186 Sommer A Prenner E, Gorges R, Stütz H, Grillhofer H, Kostner GM, Paltauf F and Hermetter A Organization of phosphatidylcholine and sphingomyelin in the surface monolayer of low density lipoprotein and lipoprotein(a) as determined by time-resolved fluorometry. [Статья] // J. Biol. Chem. - 1992 г. - T. 267. - C. 24217-24222.

187 Soran H Durrington PN Susceptibility of LDL and its subfractions to glycation. [Статья] // Curr Opin Lipidol. - 201 lr.-T. 22(4). - C. 254-61.

188 Soto Y Acosta E, Delgado L, Pérez A, Falcón V, Bécquer MA et al Antiatherosclerotic effect of an antibody that binds to extracellular matrix glycosaminoglycans [Статья] // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2012 г. - T. 32(3). - C. 595-604.

189 Soto Y Acosta E, Delgado L, Pérez A, Falcón V, Bécquer MA et al Antiatherosclerotic effect of an antibody that binds to extracellular matrix glycosaminoglycans [Статья] // Arterioscler Thromb Vase Biol. - 2012 г. - T. 32(3). - C. 595-604.

190 Srinivasan SR Dolan P, Radhakrishnamurthy B, Berenson GS. Isolation of lipoprotein-acid mucopolysaccharide complexes from fatty streaks of human aorta. [Журнал] // Prep Biochem. - 1972 г. - 1 : T. 2. - C. 83-91.

191 Sukhova GK" Shi GP, Simon DI, Chapman HA and Libby P. Expression of the elastolytic cathepsins S and К in human atheroma and regulation of their production in smooth muscle cells. [Статья] // J. Clin. Invest. - 1998 г. - T. 102. -C.576-583.

192 Suriyaphol P Fenske D, Zahringer U, Han SR, Bhakdi S, Husmann M. Enzymatically modified nonoxidized low-density lipoprotein induces interleukin-8 in human endothelial cells: role of free fatty acids. [Статья] // Circulation. - 2002 г. -T. 106(20). - C. 2581-7.

193 Suzuki Y Role of tissue-type plasminogen activator in ischemic stroke. [Статья] // J Pharmacol Sci. - 2010 г. - Т. 113(3). - C. 203-7.

194 Szondy E Horvath M, Mezey Z, Szekely J, Lengyel E, Fust G, Gero S. Free and complexed anti-lipoprotein antibodies in vascular diseases. [Статья] // Atherosclerosis. - 1983 т. - T. 49(1). - C. 69-77.

195 Szondy E. Horvath M., Mezey Z Free and complexed anti-lipoprotein antibodies in vascular diseases [Статья] // Atherosclerosis. - 1983 г. - T. 49(1). -C. 69-77.

196 Talbot RM del Rio JD, Weinberg PD. Effect of fluid mechanical stresses and plasma constituents on aggregation of LDL [Статья] // J. of Llipid Res. - 2003 г. - T. 44. - C. 837.

197 Taleb A Witztum JL, Tsimikas S. Oxidized phospholipids on apoB-100-containing lipoproteins: a biomarker predicting cardiovascular disease and cardiovascular events. [Статья] // Biomark Med. - 2011 г. - T. 5(5). - C. 673-94.

198 Tani M Kawakami A, Mizuno Y, Imase R, Ito Y, Kondo K, Ishii H, Yoshida M. Small dense LDL enhances THP-1 macrophage foam cell formation. [Статья] // J Atheroscler Thromb. - 2011 г. - T. 18(8). - C. 698-704.

199 Tertov V.V. Sobenin I.A., Orekhov A.N., et al. Characteristics of low density lipoprotein isolated from circulating immune complexes [Статья] // Atherosclerosis. - 1996 г. - T. 122(2). - C. 191-199.

200 Tertov VV Bittolo-Bon G, Sobenin IA, Cazzolato G, Orekhov AN, Avogaro P. Naturally occurring modified low density lipoproteins are similar if not identical: more electronegative and desialylated lipoprotein subfractions. [Статья] // Exp Mol Pathol. - 1995 г. - T. 62(3). - C. 166-72.

201 Tertov VV Kaplun VV, Sobenin IA, Orekhov AN. Low-density lipoprotein modification occurring in human plasma possible mechanism of in vivo lipoprotein desialylation as a primary step of atherogenic modification. [Статья] // Atherosclerosis. - 1998 г. - T. 138(1). - C. 183-95.

202 Tertov VV Kaplun VV, Sobenin IA, Orekhov AN. Low-density lipoprotein modification occurring in human plasma possible mechanism of in vivo lipoprotein desialylation as a primary step of atherogenic modification. [Статья] // Atherosclerosis. - 1998 г. - T. 138(1). - C. 183-95.

203 Tertov VV Kaplun VV, Sobenin IA, Orekhov AN. Low-density lipoprotein modification occurring in human plasma possible mechanism of in vivo lipoprotein desialylation as a primary step of atherogenic modification. [Статья] // Atherosclerosis. - 1998 г. - T. 138(1). - C. 183-95.

204 Tertov VV Orekhov AN, Kacharava AG, Sobenin IA, Perova NV, Smirnov VN. Low density lipoprotein-containing circulating immune complexes and coronary atherosclerosis. [Журнал] // Exp Mol Pathol. - 1990 а г. - T. 52. - C. 3008.

205 Tertov VV Orekhov AN, Sayadyan KhS, Serebrennikov SG, Kacharava AG, Lyakishev AA, Smirnov VN. Correlation between cholesterol content in circulating immune complexes and atherogenic properties of CHD patients' serum

manifested in cell culture. [Журнал] // Atherosclerosis. - 1990 б г. - Т. 81. - С. 183-9.

206 Tertov VV Orekhov AN, Sobenin IA, Gabbasov ZA, Popov EG, Yaroslavov AA, Smirnov Three types of naturally occurring modified lipoproteins induce intracellularlipid accumulation due to lipoprotein aggregation [Журнал] // Circ Res. - 1992 г. - 1 : T. 71. - C. 218-28.

207 Tertov VV Orekhov AN. Metabolism of native and naturally occurring multiple modified low density lipoprotein in smooth muscle cells of human aortic intima. [Статья] // Exp Mol Pathol. - 1997 г. - T. 64(3). - C. 127-45.

208 , Tertov VV Sobenin IA, Tonevitsky AG, Orekhov AN, Smirnov VN Isolation of atherogenic modified (desialylated) low density lipoprotein from blod of atherosclerotic patients: separation from native lipoprotein by affinity chromatogrphy [Статья] // Biochem Biophys Res Commun. - 1990 г. - T. 167. - C. 1122-7.

209 Tsukada T. Rosenfeld M.E., Ross R., Gown A.M. Immunocytochemical analysis of cellular components in atherosclerotic lesions. Use of monoclonal antibodies with the Watanabe and fat-fed rabbit. [Журнал] // Arteriocslerosis. -1986 г.-T. 6.-C. 601-13.

210 Tsukada T. Tippens D., Gordon D., et al. HHF35, a muscle-actin-specific monoclonal antibody. I. Immunocytochemical and biochemical characterization [Журнал] // Am J Pathol. - 1987 г. - T. -126. - C. 51-60.

211 Turgut A Ozler A, Goruk NY, Tunc SY, Evliyaoglu O, Gul T. Copper, ceruloplasmin and oxidative stress in patients with advanced-stage endometriosis. [Статья] // Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2013 г. - T. 17(11). - C. 1472-8.

212' Velican С Velican D Heterogeneity in the composition and aggregation patterns of coronary intima acid mucopolysaccharides (glycosaminoglycans) [Статья] // Atherosclerosis. - 1978 г. - T. 29. - C. 141-159.

213 Velican C. Velican D., Tancu I. The relationship between intimal necrosis and lipid accumulation during the onset and progression of atherosclerotic lesions. [Статья] // Med. Interne. - 1988 г. - T. 26. - C. 97-107.

214 Vijayagopal P Menon PV. Varied low density lipoprotein binding property of proteoglycans synthesized by vascular smooth muscle cells cultured on extracellular matrix. [Статья] //Atherosclerosis. - 2005 г. - T. 178(1). - C. 75-82.

215 Viola M B.artolini B, Vigetti D, Karousou E, Moretto P, Deleonibus S, Sawamura T, Wight TN, Hascall VC, De Luca G, Passi A. Oxidized LDL affects hyaluronan synthesis in human aortic smooth muscle cells. [Статья] // J Biol Chem. - 2013 г. - T. Aug 26. [Epub ahead of print].

216 Virella G. Atchley D., Koskinen S. et al. Proatherogenic and proinflammatory properties of immune complexes prepared with purified human oxLDL antibodies and human oxLDL [Статья] // Clin. Immunol. - 17. P // -. -Vol. -P., 2002 г.-T. 105, № l.-C. 81-92.

217 Vukovic I Arsenijevic N, Lackovic V, Todorovic V The origin and differentiation potential of smooth muscle cells in coronary atherosclerosis. [Статья] // Exp Clin Cardiol. - 2006 г. - Т. 11(2). - C. 123-8.

218 Walters MJ Wrenn SP. Effect of sphingomyelinase-mediated generation of ceramide on aggregation of low-density lipoprotein. [Статья] // Langmuir. - 2008 г.-T. 24(17).-C. 9642-7.

219 Walters MJ Wrenn SP. Size-selective uptake of colloidal low density lipoprotein aggregates by cultured white blood cells. [Статья] // J Colloid Interface Sci. - 2010 г. - T. 350(2). - C. 494-501.

220 Wang J. Qiang H., Zhang C. et al. Detection of IgG-bourid lipoprotein(a) immune complexes in patients with coronary heart disease [Статья] // Clin. Chim. Acta.-2003 г. - T. 327, № 1-2. - C. 115-122.

221 Wang X Greilberger J, Levak-Frank S, Zimmermann R, Zechner R, Jiirgens

G. Endogenously produced lipoprotein lipase enhances the binding and cell association of native, mildly oxidized and moderately oxidized low-density lipoprotein in mouse peritoneal macrophages. [Статья] // Biochem J. - 1999 г. - T. 343 Pt 2:. - C. 347-53.

222 Wang YT von Zychlinski A, McCormick SP.

Dimyristoylphosphotidylcholine induces conformational changes in apoB that lowers lipoprotein(a). [Статья] // J Lipid Res. - 2009 г. - T. 50(5). - C. 846-53.

223 Warren A. Benseler V., Cogger V. C., Bertolino P., Le Couteur D. G. [Статья] // Toxicol Pathol. - 2011 г. - T. 39. - № 2. - C. 390.

224 Windecker S Bax JJ, Myat A, Stone GW, Marber MS. Future treatment strategies in ST-segment elevation myocardial infarction. [Статья] // Lancet. -2013 г. - T. 382(9892). - C. 644-57.

225 Xia F Li R, Wang C, Yang S, Tian L, Dong H, Pei C, He S, Jiang P, Cheng

H, Fang IRGM1 regulates oxidized LDL uptake by macrophage via actin-dependent receptor internalization during atherosclerosis [Статья] // Sci Rep. -2013r.-T.3.-C. 1867.

226 Yamamoto К Isogai Y, Sato H, Taketomi Y, Murakami M. Secreted phospholipase A2, lipoprotein hydrolysis, and atherosclerosis: integration with lipidomics. [Статья] // Anal Bioanal Chem. - 2011 г. - T. 400(7). - C. 1829-42.

227 Yla-Herttuala S. Palinski W., Rosenfeld M.E., et al. Evidence for the presence of oxidatively modified low density lipoprotein in atherosclerotic lesions of rabbit and man. [Статья] // J Clin Invest. - 1989 г. - T. 84(4). - C. 1086-1095.

228 Zhang W-Y Gaynor PM and Kruth HS Aggregated low density lipoprotein induces and enters surface-connected compartments of human monocyte-macrophages. Uptake occurs independently of the low density lipoprotein receptor [Статья] // J. Biol. Chem. - 1997 г. - T. 272. - C. 31700-31.

229 Zhang WY Ishii I, Kruth HS Plasmin-mediated macrophage reversal of low density lipoprotein aggregation [Статья] // J Biol Chem. - 2000 г. - T. 275(42). -C. 33176-83.

230 Zhao YH Zou YG, Sun QJ, Xi D, Xing CY. Treatment of hyperlipidemia with a modified low density lipoprotein apheresis system with dextran sulfate. [Статья] // Ther Apher Dial. - 2007 г. т Т. 11(4). - C. 249-54.

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ Статьи в научных журналах, рекомендованных ВАК РФ:

1. Добрецов Г.Е., Гуларян С.К., Панасенко О.М., Мельниченко A.A., Орехов А.Н. Заряд поверхностного слоя циркулирующих множественно модифицированных липопротеинов низкой плотности. // Биологические мембраны. - 2006. - Т. 23. - №5. - С. 420-425.

2. Никитина H.A., Собенин И.А., Мясоедова В.А., Коренная В.В., Мельниченко A.A., Халилов Э.М., Орехов А.Н. Антиатерогенный эффект флавоноидов винограда в модели ex vivo. // Бюлл. эксп. биол. мед. - 2006. - Т. 141.-№6. -С. 660-663.

3. Панасенко О.М., Мельниченко A.A., Аксенов Д.В., Тертов В.В., Каплун В.В., Собенин И.А., Орехов А.Н. Агрегация ЛПНП, индуцированная окислением, приводит к увеличению их захвата гладкомышечными клетками аорты человека. // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины -2007. - Т. 143. - № 2. - С. 159-162

4. Букринский М.И., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П., Собенин И.А., Сазонова М.А., Коренная В.В., Орехова В.А., Иванова М.М., Мясоедова В.А., Мельниченко A.A., Савинкова И.Г., Орехов А.Н. Повреждение механизмов обратного транспорта холестерина, вызванное вирусом иммунодефицита человека: роль ABC Al -зависимого пути. // Бюллетень Московского общества испытателей природы - 2009. - Т. 114. - №3. - С. 297-301.

5. Орехов А.Н., Собенин И.А., Орехова В.А., Мельниченко A.A., Мясоедова В.А., Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П. Клеточные модели для поиска веществ, способствующих обратному транспорту холестерина. // Физиотерапия - 2011. - Т. 12. - С. 1134-1146.

6. Собенин И.А., Карагодин В.П.,' Мельниченко A.A., Орехов А.Н. Иммунный холестерин в крови - прогностическая ценность. // ФИЗИОТЕРАПИЯ-2011. - Т. 12. - С. 1147-1155.

7. Бобрышев Ю.В., Карагодин В.П., Ковалевская Ж.И., Мясоедова В.А., Шапырина Е.В., Салямов В.И., Каргаполова Ю.М., Галактионова Д.Ю., Мельниченко A.A., Орехов А.Н. Численность клеток и клеточная пролиферация в интиме различных артерий человека. // Цитология — 2011.— Т. 53 -№ 10.-С. 59-69.

8. Sobenin I.A., Suprun I.V., Karagodin V.P., Feoktistov A.S., Melnichenko A.A., .Orekhov A.N. The interaction of plasma sialylated and desialylated lipoproteins with collagen from the intima and media of uninvolved and atherosclerotic human aorta. // J Lipids - 2011. - V. 2011. - P. 254-267.

9. Melnichenko AA, Aksenov DV, Myasoedova VA, Panasenko OM, Yaroslavov AA, Sobenin IA, Bobryshev YV, Orekhov AN. Pluronic block copolymers inhibit low density lipoprotein self-association. // Lipids - 2012. - V. 47. -№ 10. - P. 995-1000.

10. Sobenin I.A., Karagodin V.P., Melnichenko A.A., Bobryshev Y.V., Orekhov A.N. Diagnostic and Prognostic Value of Low Density Lipoprotein-Containing Circulating Immune Complexes in Atherosclerosis. // J Clin Immunol. - 2013. - V. 33. - № 2. - P. 489-495.

11. Sobenin I.A., Orekhova V.A., Melnichenko A., Bobryshev Y.V., Orekhov A.N. Low density lipoprotein-containing circulating immune complexes have better prognostic value in carotid intima-media thickness progression than other lipid parameters. // Int J Cardiol. - 2013. - V. 166. - № 3 - P. 747-748.

Глава в книге

Melnichenko A.A., Aksenov D.V., Myasoedova V.A., Panasenko O.M., Yaroslavov A.A., Sobenin I.A., Bobryshev Y.V., Orekhov A.N.// 2012. - V. 47. -No. 10. - P. 995-1000. Orekhov AN, Sobenin IA, Melnichenko AA, Myasoedova VA, Bobryshev YV. Use of natural products for direct anti-atherosclerotic therapy. Current Trends in Atherogenesis, Rita Rezzaniln (ed), Tech, 2013, Chapter 9, pp.187-217. ISBN 980-953-307-832-3, http://dx.doi.org/10.5772/5296

Патент

Орехов АН, Собенин ИА, Кириченко ТВ, Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова ВА. Способ профилактики и лечения атеросклероза. Патент на изобретение № 2455016 от 07 октября 2012 г.

Монографии

Мельниченко A.A., Аксенов Д.В., Орехов А.Н. Атерогенность липопротеидов. Механизмы, роль ассоциации.// LAP LAMBERT Academic Publishing, Saarbrucken, Germany, 2012. 178 с.

МельниченкоА.А., Орехов А.Н., Собенин И.А.. Механизмы и роль атерогенной модификации липопротеидов в атерогенезе. .// LAP LAMBERT Academic Publishing, Saarbrucken, Germany, 2013. 242c. ISBN: 978-3-65924312

Статьи в иных рецензируемых научных журналах:

1. Орехов А.Н., Карагодин В.П., Мельниченко A.A., Кириченко Т.В., Смутова В.А., Чернова У.В., Сафонова В.М., Калабушев С.Н., Пшежецкий A.B. Сиаломика и атеросклероз. // Фундаментальные науки и практика -2010. Т. 1.№4.-С. 59-65.

2. Мухамедова Н. М., Свиридов Д. Д., Карагодин В. П., Мельниченко А. А., Мясоедова В. А., Орехова В. А., Собенин И. А., Орехов А. Н. Исследование влияния белков, потенциально вовлеченных в отток холестерина, на экспорт холестерина из макрофагов. // Проблемы и перспективы современной науки. - 2011. - Т. 3. - № 1. - С. 68-73.

3. Орехов А.Н., Собенин И.А., Орехова В.А., Мельниченко A.A., Мясоедова В.А., Мухамедова Н.М., Свиридов Д.Д., Карагодин В.П. Клеточные модели для поиска веществ, способствующих обратному транспорту холестерина. // Проблемы и перспективы современной науки -2011.-Т. 3.-№ 1.-С. 98-103.

4. Мельниченко A.A., Аксенов Д.В., Панасенко О.М., Ярославов A.A., Орехов А.Н. Подавление инициирующей атерогенез ассоциации липопротеидов низкой плотности с помощью плюроников. // Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине. Том 3. Сборник статей Второй Международной конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии, фармакологии и медицине», 26-28.10.2011, Санкт-Петербург, Россия. Санкт-Петербург, Издательство Политехнического университета, 2001. С. 191-197.

5. Мельниченко A.A., Аксенов Д.В., Панасенко О.М., Ярославов A.A., Орехов А.Н. Влияние плюроников F68 и Р85 на ассоциацию липопротеидов низкой плотности. // Естествознание и гуманизм - 2011. - Т. 7. - № 1. - С. 6164.

6. Мельниченко A.A. Аксенов Д.В., Панасенко О.М., Ярославов A.A., Орехов А.Н. Влияние плюроников L61 и Р85 на процесс ассоциации

липопротеидов низкой плотности. // Естествознание и гуманизм - 201 Г. - Т 7. -№ 1.-С. 64-67.

Патентные заявки:

1. Орехов АН, Собенин ИА, Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова В А. Патентная заявка от 05.03.2011 «Способ профилактики атеросклероза у женщин старшего возраста», регистрационный № 2011108528

2. Орехов АН, Собенин ИА, Кириченко Т.В., Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова ВА. Патентная заявка от 01.06.2011 «Способ профилактики и лечения атеросклероза», регистрационный номер № 2011121976

3. Орехов АН, Собенин ИА, Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова В А. Патентная заявка от 03.11.2011 «Способ лечения атеросклероза, основанный на воздействии на иммунокомпетентные клетки сосудистой стенки», регистрационный номер № 2011144530

4. Орехов АН, Собенин ИА, Мельниченко АА. Патентная заявка от 03.11.2011 «Способ экспресс-диагностики атерогенных дислипидемий при сердечно-сосудистых патологиях», регистрационный номер № 2011144523

5. Орехов АН, Собенин ИА, Мясоедова В А, Мельниченко АА, Орехова В А. Патентная заявка от 03.11.2011 «Противовоспалительное антицитокиновое средство, обладающее прямым антиатеросклеротическим действием», регистрационный номер № 2011144526

6. Орехов АН, Собенин ИА, Кириченко Т.В., Мясоедова ВА, Мельниченко АА, Орехова ВА. Патентная заявка от 03.11.2011 «Антиатеросклеротическое средство, обогащенное фитоэстрогенами,

предназначенное для женщин после менопаузы», регистрационный номер № 2011144528

7. Орехов АН, Собенин ИА, Карагодин ВП, Мельниченко АА, Мухамедова НМ. Патентная заявка от 03.11.2011 «Способ профилактики атеросклероза, основанный на оттоке холестерина из клеток сосудистой стенки», регистрационный номер № 2011144524

8. Орехов АН, Собенин ИА, Кириченко ТВ, Мясоедова В А, Бобрышев ЮВ, Мельниченко АА, Орехова ВА. Патентная заявка от 24.10.2012 «Способ лечения атеросклероза, основанный на антицитокиновом действии», регистрационный номер №2012145159

9. Орехов АН, Чернова ЕВ, Бобрышев ЮВ, Мельниченко АА, Орехова ВА. Патентная заявка от 24.10.2012 «Способ оценки риска сердечнососудистых заболеваний», регистрационный номер № 2012145160

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

апоВ-100 - аполипопротеид В-100

БСА - бычий сывороточный альбумин

ГЛБ - гидрофильно - липофильный баланс

ИФА - иммуноферментный анализ

ИФБ - изотонический фосфатный буфер, рН 7,4

ККМ - критическая концентрация мицеллообразования

ЛНП - липопротеиды низкой плотности

ЛВП - липопротеиды высокой плотности

МДА - малоновый диальдегид

МПО - миелопероксидаза

ПААГ - полиакриламидный гель

ПЭГ - полиэтиленгликоль со средней молекулярной массой 6000 ТБК - 2-тиобарбитуровая кислота

Х-ЦИК - холестерин, содержащийся в циркулирующих иммунных комплексах

ЦИК - липопротеидсодержащие циркулирующие иммунные комплексы

цммЛНП - циркулирующие множественно модифицированные ЛНП

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ИМС - интимомедиальный слой

ГЛБ - гидрофильно-липофильный баланс

ККМ-критическая концентрация мицеллообразования

Abstract

Melnichenko Alexandra Alexandrovna

The Mechanisms and the Role of Atherogenic Modification of LDL in

Atherogenesis

In most industrialized countries, cardiovascular disease (CVD) takes the leading position in the structure of morbidity and mortality, and leads to escalation of health care costs. Atheroslerosis is the primary pathogenetic background for the development of most cases of CVD, including acute myocardial infarction, chronic heart failure, stroke, and peripheral arteriosclerosis. This study was undertaken to elucidate biochemical mechanisms, which lead to atherosclerosis development, namely, atherogenic modification of low density lipoprotein (LDL). It was shown that MDA-induced LDL modification, as well as the treatment of native LDL with proteolytic, lipolytic and deglycosilating enzymes lead to substantial changes in protein, lipid and polysaccharide moieties of LDL particles, and promotes self-association of the modified LDL. Native and in vitro modified LDL differ in spatial arrangement of apoB-100 on the surface of LDL particles, while naturally occurring modified LDL demonstrate another pattern of apoB-100 arrangement. These differences explain the increase in hydrophobic properties of in vitro and in vivo modified LDL, which, in turn, promotes self-association of modified LDL. The effects of several block copolymers of ethylene and propylene oxide (polaxamers) characterized by different hydrophilic-lipophilic properties on LDL association were studied. Moderately lipophilic polaxamers (P85, L64 and L61) inhibited the process of LDL self-association; on the opposite, highly hydrophilic polaxamer F68 produced no effect on LDL aggregation.

Since in vivo modified LDL possesses high antigenic properties,' it induces the production of anti-LDL autoantibodies followed by formation of LDL-containing circulating immune complexes (LDL-CIC). In the two-years prospective study performed in 98 asymptomatic men aged 40-74, it has been shown that the increased level LDL-CIC has a high diagnostic and prognostic significance in subclinical atherosclerosis. In this study, the rate of atherosclerosis progression was estimated by high-resolution B-mode ultrasonography as the increase in intima-media thickness (IMT) of common carotid arteries. Among all baseline lipid parameters, only LDL-CIC and LDL cholesterol were contingent with the extent of early carotid atherosclerosis. The increased levels of LDL-CIC, total serum cholesterol and LDL cholesterol had similar prognostic significance with the respect of atherosclerosis progression. The normal level of LDL-CIC (below than 16.0 |J.g/ml) was the only lipid parameter that predicted the absence of carotid atherosclerosis progression for two following years at prognostic value of 78.3 %. The results of clinical study allowed assuming that LDL-CIC level is not only as a marker of early atherosclerosis, but also has a sufficient prognostic value for clinical implications.

The automated test system designed for diagnostics of subclinical atherosclerotic disease based on quantitative measurement of LDL-CIC level and other lipid parameters was developed.