Изучение взаимодействия липопротеидов с компонентами матрикса аорты человека и его роли в клеточных проявлениях атеросклероза тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Супрун, Игорь Валерьевич

• Супрун, Игорь Валерьевич
• кандидат биологических наук
• 2000

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Супрун, Игорь Валерьевич

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ.

ВВЕДЕНИЕ.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.

ГЛАВА 1. Сосудистый внеклеточный матрикс и его взаимодействия с липопротеидами.

1.1. Эластин непораженной и атеросклеротической аорты.

1.1.1. Содержание и состав эластина.

1.1.2. Взаимодействие эластина с липопротеидами.

1.2. Протеогликаны непораженной и атеросклеротической аорты.

1.2.1. Содержание и состав протеогликанов.

1.2.2. Взаимодействие протеогликанов с липидами и липопротеидами.

1.3. Коллаген непораженной и атеросклеротической аорты.

1.3.1 Содержание и состав коллагена.

1.2. Взаимодействие коллагена с липопротеидами.

Глава 2. Модифицированные липопротеиды низкой плотности плазмы крови человека.

Глава 3. Иммунные механизмы в атеросклерозе.

ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

Глава 4 Материалы и методы.

4.1. Выделение эластина из аорты человека.

4.2. Выделение протеогликанов из аорты человека.

4.3. Выделение коллагена из аорты человека.

4.4. Выделение липопротеидов из плазмы крови человека.

4.5. Получение нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов из плазмы крови человека.

4.6. Приготовление иод-меченых препаратов липопротеидов.

4.7. Приготовление комплексов ЛНП с эластином, протеогликанами и коллагеном.

4.8. Получение коллагеназа-резистентного дебриса.

4.9. Определение содержания белка.

4.10. Измерение содержания сиаловой кислоты.

4.11. Измерение уроновой кислоты.

4.12. Измерение содержания гидроксипролина.

4.13. Определение состава протеогликанов.

4.14. Измерение взаимодействия липопротеидов с внеклеточным матриксом.

4.14.1. Измерение связывания ЛНП, ЛОНП, ЛПП с матриксом.

4.14.2. Измерение связывания ЛВП с матриксом.

4.14.3. Измерение связывания липопротеидов с матриксом радиоизотопным методом.

4.14.4. Измерение обратимости связывания ЛНП с внеклеточным матриксом.

4.15. Выделение и культивирование гладкомышечных клеток интимы аорты человека.

4.16. Выделение белых клеток крови человека.

4.17. Культура макрофагов человека.

4.18. Культивирование клеток с исследуемыми липопротеидами низкой плотности и их комплексами.

4.19. Определение содержания внутриклеточного холестерина.

4.20. Измерение клеточного белка.

4.21. Измерение экспрессии молекулы гистосовместимости II типа.

4.22. Измерение экспрессии интерлейкина-1 и фактора некроза опухоли-а.

4.23. Статистическая обработка данных.

Глава 5. Взаимодействие нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с компонентами соединительнотканного матрикса из интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека.

5.1 Взаимодействие нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с эластином, выделенным из интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека.

5.1.1. Эластин непораженной и атеросклеротической аорты человека.

5.1.2. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛНП с эластином.

5.1.2.1. Прочность комплексов ЛНП с эластином.

5.1.3. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛОНП с эластином.

5.1.4. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛПП с эластином.

5.1.5. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛВП с эластином.

5.1.6. Взаимосвязь между аминокислотным составом эластина и связыванием липопротеидов.

5.1.7. Влияние десиалирования на связывание липопротеидов с эластином.

5.1.8. Обсуждение результатов.

5.2. Взаимодействие нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с протеогликанами из интимы и медии непораженной и агеросклеротической аорты человека.

5.2.1. Протеогликаны непораженной и атеросклеротической аорты человека.

5.2.2. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛНП с протеогликанами аорты человека.

5.2.2.1. Прочность комплексов ЛНП с протеогликанами.

5.2.3. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛОНП с протеогликанами.

5.2.4. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛПП с протеогликанами.

5.2.5. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛВП с протеогликанами.

5.2.6. Взаимосвязь между составом глюкозаминогликанов протеогликанов и связыванием липопротеидов.

5.2.7. Влияние десиалирования на связывание липопротеидов с протеогликанами.

5.2.8. Обсуждение результатов.

5.3. Взаимодействие нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с коллагеном, выделенным из интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека.

5.3.1. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛНП с коллагеном.

5.3.2. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛОНП с коллагеном.

5.3.3. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛПП с коллагеном.

5.3.4. Связывание нативных и циркулирующих модифицированных ЛВП с коллагеном.

5.3.5. Влияние удаления сиаловой кислоты на связывание липопротеидов с коллагеном.

5.3.6. Обсуждение результатов.

Глава 6. Влияние комплексов липопротеидов и компонентов соединительнотканного матрикса на аккумуляцию липидов в клетках интимы аорты человека.

6.1. Обсуждение результатов.

Глава 7. Влияние внутриклеточного накопления липидов на экспрессию провоспалительных цитокинов макрофагами и гладкомышечными клетками интимы аорты человека.

7.1. Обсуждение результатов.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение взаимодействия липопротеидов с компонентами матрикса аорты человека и его роли в клеточных проявлениях атеросклероза»

Сердечно-сосудистые заболевания являются основной причиной смертности и инвалидности людей в России и других развитых индустриальных странах. Большинство сердечно-сосудистых заболеваний является следствием атеросклеротического поражения магистральных сосудов человека. Поэтому исследование механизмов развития атеросклероза является важнейшей задачей в борьбе с сердечно-сосудистыми заболеваниями.

Одной из наиболее ранних и ярких черт атеросклеротического поражения сосудов человека является накопление внутри- и внеклеточных липидов. В настоящее время имеется большое количество данных, указывающих на важную роль внеклеточного матрикса в отложении липидов в стенке сосудов при атеросклерозе. Аничков (1947) с сотрудниками описали первичное отложение жира вдоль эластиновых волокон аорты кроликов, получающих холестериновую диету, и человека (Аничков 1947). Ассоциацию сосудистых липидов с эластином позднее описали также Smith et al. (Smith 1967, Smith et al. 1974). Guyton et al., используя электронную микроскопию, установили, что более 74 % липидов может быть связано с эластином аорты человека (Guyton et. al. 1985, Bokan et. al. 1986). Kramsch et al. показали, что эластин, выделенный из аорты человека, содержит липиды (Kramsch et. al. 1971, Kramsch et.al. 1973). В настоящее время установлено, что основным источником липидов в стенках сосудов являются липопротеиды (Wessler 1976,

Hoff 1978, Stender and Hjilms 1984, Hoff and O'Neil 1991, Stenberger et. al. 1992). Поэтому в последнее время активно изучается взаимодействие липопротеидов с компонентами внеклеточного матрикса. Tokita et al. (1977) обнаружили, что подфракции эластина, выделенные из интимы-медии аорты человека с помощью эластазы, способны связывать липиды липопротеидов низкой плотности. Noma et. al. (1979, 1981) показали, что эластин, выделенный из объединенной интимы атеросклеротической аорты человека, способен связывать липиды из липопротеидов очень низкой (ЛОНП), промежуточной (J11111), низкой (ЛЕИ) и высокой (ЛВП) плотности, изолированные из плазмы крови. Mawhinney et. al. и Srenivasan et. al. показали наличие комплексов протеогликанов и ЛНП в аорте кроликов, содержащихся на холестериновой диете, и атеросклеротической аорте человека (Mawhinney et. al. 1978, Srenivasan et. al. 1975). Vijayagopal et.al. выделили фракцию протеогликанов из аорты быка и человека, характеризующуюся высоким сродством к ЛНП, комплексы липопротеидов с этими протеогликанами, стимулируют накопление эфиров холестерина в макрофагах человека. (Srenivasan et. al. 1989, Vijayagopal et. al. 1996). Hoff et. al., используя иммунногистихимические методы, установили, что апоВ в артериях человека колокализован с фибриллами коллагена (Hoff et. al. 1976). Claire et. al. обнаружили, что в интиме-медии аорты человека существует фракция липидов, прочно ассоциированных с волокнами коллагена и эластина (Claire et. al. 1976). Однако, до настоящего времени исследования взаимодействия липопротеидов с компонентами внеклеточного матрикса проводились на препаратах, выделенных из объединенных интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты, без подразделения на субслои и начальные поражения. Кроме того, в предшествующих работах использовали суммарные препараты липопротеидов, полученные из плазмы крови здоровых лиц. Таким образом, механизмы приводящие к внеклеточному отложению липидов}остаются не выясненными.

Недавно мы обнаружили в крови человека циркулирующие модифицированные ЛНП ("десиалированные" ЛНП) (Orekhov et. al 1989, Orekhov et. al. 1991). Циркулирующие модифицированные липопротеиды, в отличие от нативных, вызывали аккумуляцию липидов (в частности эфиров холестерина) в клетках интимы аорты человека и макрофагах, т.е. являлись атерогенными (Tertov et. al. 1992). Одной из основных характеристик циркулирующих модифицированных ЛНП (цмЛНП) является низкое содержание сиаловой кислоты - терминального углевода биантенных цепей апоВ и углеводных цепей ганглиозидов (Tertov et. al. 1989, Tertov et. al. 1992). Это свойство циркулирующих модифицированных липопротеидов позволяет выделить их из суммарной фракции с помощью лектин-хроматографии на Ricinus communis agglutinin (RCA12o)-arapo3e (Tertov et. al 1990). ЦмЛНП характеризуются низким содержанием нейтральных Сахаров и пониженным уровнем нейтральных липидов и фосфолипидов. Для них характерен более высокий отрицательный заряд, большая плотность, уменьшенный размер и повышенная предрасположенность к окислению, за счет пониженного содержания витаминов антиоксидантов (Tertov et. al. 1989, Orekhov et. al. 1991, Tertov et. al. 1992, Tertov et. al. 1993). Недавно нами было описано наличие в плазме крови человека нативных и циркулирующих модифицированных ЛОНП, ЛПП и ЛВП, которые как и подфракции ЛНП имеют различные свойства (Tertov and Orekhov 2000). Однако, до настоящего времени не было исследовано взаимодействие циркулирующих модифицированных липопротеидов с соединительно-тканным матриксом.

В настоящее время исследователи, работающие над изучением механизмов формирования и прогрессирования атеросклеротических поражений у человека, все большее внимание уделяют воспалительному компоненту атеросклеротических поражений. Показано, что количество гематогенных клеток, компонентов комплимента, экспрессия провоспалительных цитокинов значительно увеличивается в атеросклеротических поражениях по сравнению с непораженными участками артерий (Libby and Hansson 1991, Rosenfeld and Pectel, 1994). Подробно охарактеризованы клеточные популяции гематогенных клеток и описаны различные медиаторы воспаления, экспрессируемые этими клетками в очагах атеросклеротических поражений (Kovanen et al. 1995, Katsuda et al. 1993, Gown et al. 1986, Emeson and Robertson 1988; Libby and Hansson 1991, Rosenfeld and

Pectel 1994). Однако, вопрос о том, может ли увеличение количества липидов в сосудистой стенке быть инициирующим моментом для развития воспалительной реакции при атеросклерозе, окончательно не решен.

Целью данной работы явилось исследование механизмов внеклеточного отложения липидов, его роли во внутриклеточном накоплении липидов, и связи между клеточным липоидозом и инициацией воспалительной реакции в сосудистой стенке.

В соответствии с поставленной целью были сформулированы следующие задачи исследования:

1) Изучение взаимодействия нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с эластином из протеогликанового и мышечно-эластического субслоев интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека;

2) Исследование взаимодействия нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с протеогликанами из протеогликанового и мышечно-эластического субслоев интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека;

3) Изучение взаимодействия нативных и циркулирующих модифицированных липопротеидов с коллагеном из протеогликанового и мышечно-эластического субслоев интимы и медии непораженной и атеросклеротической аорты человека;

14

4) Определение влияния комплексов липопротеидов и компонентов соединительно-тканного матрикса на аккумуляцию липидов в клетках интимы аорты человека;

5) Выявление влияния внутриклеточного накопления липидов на синтез провоспалительных цитокинов в гладкомышечных клетках интимы аорты человека и макрофагах.

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Супрун, Игорь Валерьевич

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В нашей работе мы показали, что в модели in vitro ЛНП обладали наибольшим, а ЛОНП и ЛВП наименьшим сродством к эластину и протеогликанам аорты человека. Связывание всех исследованных нативных липопротеидов с коллагеном, выделенным из аорты человека было схожим. При этом липопротеиды связываются с протеогликанами и коллагеном из непораженной интимы с большей эффективностью, по сравнению с пораженными участками. Взаимодействие липопротеидов с эластином в начальных поражениях и жировой полосе выше, а в фиброатероме ниже, чем в норме. Установлено, что эластин, протеогликаны и коллаген из протеогликанового субслоя интимы непораженной и атеросклеротической аорты человека обладают наибольшим сродством к нативным и циркулирующим модифицированным липопротеидам, по сравнению с мышечно-эластическим субслоем и медией аорты человека. Обнаружено также, что циркулирующие модифицированные липопротеиды взаимодействуют с компонентами внеклеточного матрикса с большей эффективностью, чем нативные липопротеиды. Кроме того, циркулирующие модифицированные липопротеиды образуют более прочные комплексы с матриксом, чем нативные, и таким образом могут задерживаться в сосудистой стенке. Было показано, что комплексы липопротеидов с компонентами соединительнотканного матрикса

151 эластином, протеогликанами и коллагеном - вызывают значительное накопление внутриклеточного холестерина в интимальных клетках. Таким образом, можно предположить, что такие комплексы способны формировать пенистые клетки in vivo. Мы также установили, что внутриклеточное накопление липидов, индуцируемое комплексами липопротеидов, стимулирует экспрессию маркеров воспаления: фактора некроза опухоли-а, интерлейкина 1, молекулы гистосовместимости II типа в интимальных клетках. Это наблюдение позволяет предположить, что in vivo внутриклеточное накопление липидов, вызванное модифицированными липопротеидами и их комплексами с матриксом, играют важную роль в инициации воспаления в сосудистой стенке.

1. Показано, что в модели in vitro ЛНП обладали наибольшим, а ЛОНП и ЛВП наименьшим сродством к эластину и протеогликанам аорты человека. Связывание всех исследованых нативных липопротеидов с коллагеном, выделенным из аорты человека было схожим.

2. Липопротеиды связываются с протеогликанами и коллагеном из субслоев непораженной интимы с большей эффективностью, по сравнению с пораженными участками. Взаимодействие липопротеидов с эластином в начальных пораженях и жировой полосе выше, а в фиброатероме ниже, чем в норме.

3. Эластин, протеогликаны и коллаген из протеогликанового субслоя интимы непораженной и атеросклеротической аорты человека обладает наибольшим сродством к нативным и циркулирующим модифицированным липопротеидам, по сравнению с мышечно-эластическим субслоем и медией аорты человека.

4. Все изученные типы циркулирующих модифицированных липопротеидов связываются с эластином, протеогликанами и коллагеном более эффективно, чем нативные липопротеиды. Десиалирование липопротеидов с помощью нейраминидазы in vitro существенно увеличивает их связывание с эластином, протеогликанами и коллагеном аорты человека.

153

5. Комплексы липопротеидов с компонентами внеклеточного матрикса, эластином, протеогликанами и коллагеном, вызывают значительное накопление холестерина в культивируемых клетках гладкомышечных клетках интимы непораженной аорты человека.

6. Внутриклеточное накопление липидов стимулирует экспрессию маркеров воспаления: фактора некроза опухоли-а, интерлейкина 1, молекулы гистосовместимости II типа.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Супрун, Игорь Валерьевич, 2000 год

1. Аничков Н.Н. Сердце и сосуды. / В кн.: Частная патологическая анатомия. М.-Л.: Медгиз, 1947. Том 2. С. 262-558.

2. Тертов В.В., Каплун В.В., Собенин И.А. и др. Липидный состав множественно-модифицированных (десиалированных) липопротеидов низкой плотности // Бюллетень эксп. биол. и мед. 19966. Т.122. N 7. С.37-39.

3. Тертов В.В., Каплун В.В., Собенин И.А. и др. Множественно-модифицированные (десиалированные) липопротеиды низкой плотности: физико-химические свойства // Бюллетень эксп. биол. и мед. 1996а. Т. 121. N 1. С.42-43.

4. Alavi MZ, Richardson М, Moore S. The in vitro interactions between serum lipoproteins and proteoglycans of the neointima of rabbit aorta after a single baloon catheter injury// Am. J. Pathol. 1989. V.134. P.l 87-294.

5. Alves C.S., Mourao P.A.S. Interaction of high molecular weight chondroitin sulfate from human aorta with plasma low density lipoproteins // Atherosclerosis. 1988. Y. 73. P. 113-124.

6. Anber V, Griffin BA, McConnel M et. al. Influence of plasma lipid and LDL-subfractions profile on the interacion between low density lipoprotein with human arterial wall proteoglycans // Atherosclerosis. 1996. Y.124. P. 261-271.

7. Anber V, Millar JS, McConnel M et. al. Interaction of very-low-density, intermediate-density, and low-density lipoproteins with human arterial wall proteoglycans // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V. 17. P. 2507-2514.

8. Aqel N.M., Ball R.Y., Waldmann H et. al. Identification of macrophages and smooth muscle cells in human atherosclerosis usingmonoclonal antibodies // J. Pathol. 1985. V. 146. P. 197.

9. Avogaro P., Bittolo Bon G., Cazzolato G. Presence of a modified low density lipoprotein in humans // Atherosclerosis. 1988. V.8. P.79-87.

10. Avogaro P., Cazzolato G., Kramsh D.M., et al. Oxidative damage to circulating LDL. / In: Drugs affecting lipid metabolism. Kluver: Dordrecht, 1993. P. 183-190.

11. Barath P., Fishbein M.C., Cao J., et al. Detection and localization of tumor necrosis factor in human atheroma // Am. J. Cardiol. 1990a. V 65. P. 297-302.

12. Barath P., Fishbein M.C., Cao J., et al. Tumor necrosis factor gene expression in human vascular intimal smooth muscle cells detected by in situ hybridization // Am. J. Pathol. 19906. V. 137. P. 503-509.

13. Barnes M.J., Gordon J.L., Maclntyre D.E. Platelet-aggregating activity of type I and type III collagens from human aorta and chicken skin // Biochem. J. 1976. V. 160. P. 647-651.

14. Barnes M.J. Collagens in atherosclerosis // Coll. Relat. Res. 1985 V. 5 P. 65-97.

15. Bihari-Varga M., Vegh M. Quantitative studies on the complex formed between aortic mucopolysaccarides and serum lipoproteins // Biochim. Biophys. Acta. 1967. V. 144. P. 202-210.

16. Bihary-Varga M, Gruber E, Rotheneder M, et al. Interaction of Lp(a) and low density lipoprotein with glycosaminoglycans from human aorta // Atherosclerosis. 1988. V.8. P. 851-857.

17. Bilheimer DW, Eisenberg S, Levy RI. The metabolism of very low density lipoprotein proteins. I. Preliminary in vitro and in vivo observations // Biochim. Biphys. Acta. 1972. V. 260. P. 212-224.

18. Camejo G. The interaction of lipids and lipoproteins with the intercellular matrix of arterial tissue: its possible role in atherogenesis // Adv. Lipid Res. 1982. V. 19. P. 1-53

19. Camejo G., Lalaguna F., Lopez F., et. al. Characterization and properties of a lipoprotein-complexing proteoglycan from human aorta // Atherosclerosis. 1980. V. 35. P. 307-320.

20. Camejo G., Lopez A., Lopez F., et. al. Interaction of low density lipoproteins with arterial proteoglycans. The role of charge and sialic acid content // Atherosclerosis. 1985V. 55 P. 93-105.

21. Camejo G., Ponce E., Lypez F., et. al. Partial structure of the active moiety of a lipoprotein complexing proteoglycan from human aorta // Atherosclerosis. 1983. V. 49. P. 241-254.

22. Camejo G., Waich S., Quintero G., et.al. The affinity of low density lipoproteins for an arterial macromolecular complex A study in ishemic heart disease patients and controls // Atherosclerosis. 1976. V. 24. P. 341-355.

23. Cardoso L.E.M., Mourao P.A.S. Glycosaminoglycan fractions from arteries presenting diverse susceptibilities to atherosclerosis have different binding affinities to plasma LDL // Arterioscler. Thromb. 1994. V. 14. P. 115-124.

24. Cazzolato G., Avogaro P., Bittolo-Bon G. Characterisation of a more electronegatively charged LDL subfraction by ion-exchange HPLC // Free Radical Biol. Med. 1991. V.ll. P.247-253.

25. Chen Q., Wei E., Chen X., et. al. Interactions between macrophages and oxidized low density lipoprotein in the presence of type I collagen // Biofactors. 1997. V. 6. P. 131-138.

26. Cherchi G.M., Coinu R., Demuro P., Formato M., et. al. Structural and functional modifications of human aorta proteoglycans in atherosclerosis // Matrix. 1990. V. 10. P. 362-372.

27. Christner J.E, Baker J.R. A competitive assay of lipoprotein: proteoglycan interaction using a 96-well microtitration plate // Anal. Biochim. 1990. V.184. P.388-394.

28. Chung E., Miller E.J. Collagen polymorphism: characterization of molecules with the chain composition (alpha 1 (3)03 in human tissues // Science. 1974. V. 183. P. 1200-1201.

29. Chung E., Rhodes R.K., Miller E.J. Isolation of three collagenous components of probable basement membrane origin from several tissues // Biochim. Biophys. Res. Comm. 1976. V. 71. P. 1167-1174.

30. Claire M., Jacotot В., Robert L. Characterization of lipids associated with macromolecules of the intercellular matrix of human aorta // Connect. Tissue. Res. 1976. V.4.P. 61-71.

31. Curwen K.D., Smith S.C. Heparitin sulfates (heparan sulfates) of atherosclerosis-susceptible and atherosclerosis-resistant pigeon aortas // Atherosclerosis. 19776. V. 27. P.l 13-117.

32. Curwen K.D., Smith S.C. Aortic glycosaminoglycans in atherosclerosis-susceptible and -resistant pigeons // Exp. Mol. Pathol. 1977a. V. 27. P. 121-133.

33. Dejana E., Ji-Ming W., Mantovani A. The recruitment of leukocytes and their interaction with the vessel wall: the role of interleukin-1 and tumor necrosis factor // Scand. J. Rheumatol. 1987. V. 66. P. 19-28.

34. Dinarello C.A. Biology of interleukin 1 // FASEB. J. 1988. V 2. P. 108-115.

35. Emeson E.E., Robertson A.L.Jr. T lymphocytes in aortic and coronary intimas // Am.J.Pathol. 1988. V. 130. P. 369-376.

36. Emeson E.E., Robertson A.L. T lymphocytes in aortic and coronary intimas. Their potential role in atherogenesis // Am. J. Pathol. 1988. V. 130. P. 369-376.

37. Falcone D.J., Mated N., Shio H., et. al. Lipoprotein-heparin-fibronectin-denatured collagen complexes enhance cholesteryl ester accumulation in macrophages // J. Cell. Biol. 1984. V. 99. P. 1266-1274.

38. Filipovic A., Schwarczmann E., Mraz W., et. al. Sialic acid content of low density lipoproteins controls their binding and uptake by cultured cells // Eur. J. Biochem. 1989. V.93. P.51-55.

39. Fukumoto Y., Shimokawa H., Ito A., et. al. Inflammatory cytokines cause coronary arteriosclerosis-like changes and alterations in the smooth-muscle phenotypes in pigs // J. Cardiovasc. Pharmacol. 1997. V 29. P 222-231.

40. Gardais A., Picard J., Hermelin B. Glycosaminoglycan (GAG) distribution in aortic wall from five species // Сотр. Biochem. Physiol. 1973. V. 44B. P. 507-515.

41. Gown A.M., Tsukada Т., Ross R. Human atherosclerosis II. Immunocytochemical analysis of the cellular composition of human atherosclerotic lesions // Am. J. Pathol. 1986. V. 125. P 191-207.

42. Greilberger J., Schmut O., Jergens G. In vitro interactions of oxidatively modified LDL with type I, II, III, IV, and Y collagen, laminin, fibronectin, and poly-D-lysine //Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V. 17. P. 2721-2728.

43. Guyton J.R., Bocan T.M., Schifani T.A. Quantitative ultrastructural analysis of perifibrous lipid and its association with elstin in nonatherosclerotic human aorta // Arteriosclerosis. 1985. V. 5. P. 646-652.

44. Hanson A. N., Bentley J.P. Quantitation of type I to type III collagen ratios in small samples of human tendon, blood vessels, and atherosclerotic plaque // Anal. Biochem. 1983. V. 130. P. 32-40.

45. Hansson G.K., Jonasson L., Holm J., et. al. Class IIMHC antigen expression in the atherosclerotic plaque: smooth muscle cells express HLA-DR, HLA-DQ and the invariant gamma chain // Clin. Exp. Immunol. 1986. V. 64. P. 261-268.

46. Hara A., Radin N.S. Lipid extraction of tissues with a low-toxicity solvent // Anal. Biochem. 1978. V. 90. P. 420-426.

47. Haust M.D. Complications of atherosclerosis in the human abdominal aorta // Monogr. Atheroscler. 1986. V.14.V. 43-48.

48. Hoff , O'Neil. Lesion-derived low density lipoprotein and oxidized low density lipoprotein share a lability for aggregation, leading to enhanced macrophage degradation//Artheroscl. Thromb. 1991. V. 11. P. 1209-1222.

49. Hoff H.F. ApoB concentration in normal human aorta // Biochem. Biophis. Res. Com. 1978. V. 85. P. 1424-1438.

50. Hoff H.F., Kavagas M., Heideman C.L., et. al. Correlation in the human aorta of apoB fractions with tissue cholesterol and collagen content // Atherosclerosis. 1979. V. 32. P. 259-267.

51. Hoff H.F., Clevidence B.A. Uptake by mouse peritoneal macrophages of large cholesteryl ester-rich particles isolated from human atherosclerotic lesions // Exp. Mol. Pathol. 1987. V. 466. P. 331-344.

52. Hoff H.F., Heideman C.L., Noon G.P., et. al. Localization of apo-lipoproteins in human carotid artery plaques // Stroke. 1975. V. 6. P. 531-534.

53. Hoff H.F., Jackson R.L., Gotto A.M. Jr. Apo-lipoprotein localization in human atherosclerotic arteries //Adv. Exp. Med. Biol. 1976. V. 67. P. 109-120.

54. Hoff H.F, Wagner W.D. Plasma low density lipoprotein accumulation in aortas of hypercholesterolemic swine correlates with modifications in aortic glycosaminoglycan composition // Atherosclerosis. 1986. V. 61. P. 231-236.

55. Hoover G. A., McCormick S., Kalant N. Interaction of native and cell-modified low density lipoprotein with collagen gel // Arteriosclerosis. 1988. V. 8. P. 525534.

56. Hurt E., Bondjers G., Camejo G. Interaction of LDL with human arterial proteoglycans stimulates its uptake by human monocyte-derived macrophages // J. Lipid Res. 1990. V. 31. P. 443-454.

57. Hurt-Camejo E., Olsson U., Wiklund O., et. al. Cellular consequences of the association of apoB lipoproteins with proteoglycans. Potential contribution to atherogenesis // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1997. V. 17. P. 1011-1017.

58. Hurt-Camejo E., Rosengren В., Lopez F., et. al. Differential uptake of proteoglycan-selected subfractions of low density lipoprotein by human macrophages // J. Lipid Res. 1990. V. 31. P. 1387-98.

59. Jaakkola О., Solakivi Т., Tertov V.V., et al. Characteristics of low density lipoprotein subtractions from patients with coronary artery disease // Coron. Artery Dis. 1993. Y.4. P.379-385.

60. Jimi S., SakataN., Matunaga A., et. al //Atherosclerosis. 1994. V. 107. P. 109-116.

61. John R., Thomas J. Chemical compositions of elastins isolated from aortas and pulmonary tissues of humans of different ages // Biochem. J. 1972. V. 127. P. 261269.

62. Jonasson L., Holm J., Skalli O., et. al. Regional accumulations of T cells, macropfages, and smooth muscle cells in the human atherosclerosis plaque // Atherosclerosis. 1986. V. 6. P131-142.

63. Kagan H., Lerch R.M. Amidated carboxyl groups in elastin // Biochim. Biophys. Acta. 1976. V 434. P 223-232.

64. Katsuda S., Coltrera M.D., Ross R., Gown A.M. Human atherosclerosis. IV. Immunocytochemical analysis of cell activation and proliferation in lesions of young adults // Am. J. Pathol. 1993. V. 142. P. 1787-1793.

65. Keeley F.M., Partridge S.M. Amino acid composition and calcification of human aortic elastin//Atherosclerosis. 1974. V. 19. P. 287-296.

66. Kovanen P.T., Kaartinen M., Paavonen T. Infiltrates of activated mast cells at the site of coronary atheromatous erosion or rupture in myocardial infarction // Circulation. 1995. V. 92. P. 1084-1088.

67. Kramsch D. The role of connective tissue in atherosclerosis // Adv. Exp. Med. Biol. 1978. V. 109. P. 55-67.

68. Kramsch D.M., Franzblau C., Hollander W. Components of the protein-lipid complex of arterial elastin: Their role in the retention of lipid accumulation in atherosclerotic lesions // Adv. Exp. Med. Biol. 1974. V. 43. P. 193-210.

69. Kramsch D.M., Franzblau C., Hollander W. The protein and lipid composition of arterial elastin and its relationship to lipid accumulation in the atherosclerotic plaque // J. Clin. Invest. 1971. V. 50. P. 1666-1672.

70. Kramsch D.M., Hollander W. J. The interaction of serum and arterial lipoproteins with elastin of the arterial intima and its role in the lipid accumulation in atherosclerotic plaques // Clin. Invest. 1973. V. 5. P. 236-47.

71. La Belle M., Krauss R.M. Differences in carbohydrate content of low density lipoproteins associated with low density lipoprotein subclass patterns // J. Lipid Res. 1990. V.31. P.1577-1588.

72. Libby P., Hansson G.K. Biology of disease. Involvement of the immune system in human atherosclerosis: current knowlege and unanswered questions // Lab.Invest. 1991. V. 64. P. 5-15.

73. Lin R.C., Dai J., Lumeng L., et al. Serum low dencity lipoprotein of alcoholic patients is chemicaly modified in vivo and induces apolipoprotein E synthesis in macrophages // J. Clin. Invest. 1995. V.95. P.1979-1986.

74. Loppnow H., Libby P. Comparative analysis of cytokine induction in human vascular endothelial and smooth muscle cells // Lymphokine Res. 1989. V. 8. P. 293-298.

75. Lowry O.H., Rosenbrough N.J., et. al. Protein mesurement with the Folin reagent // J.B.C. 1951. V. 193. P. 265-275.

76. Macek J., Krajickova J., Adam M. Rapid determination of disaccharides from chondroitin and dermatan sulfhates by high-performance liquid chromatography // J. Chromatogr. 1987. V. 414. P. 156-160.

77. Mawhinney T.P., Augustyn J.M., Fritz K.E. Glycosaminoglycan lipoprotein complexes from aortas of hypercholesterolemic rabbits: Part 1. Isolation and characterization // Atherosclerosis. 1978. V. 31. P. 155-169.

78. Mayne R., Zettergren J.C., Mayne P.M., et. al. Isolation and partial characterization of basement membrane-like collagens from bovine thoracic aorta // Artery. 1980. V. 4. P. 262-280.

79. McCullagh K.G. Increased type I collagen in human atherosclerotic plaque // Atherosclerosis. 1983. V. 46. P. 247-258.

80. McCullagh K.G., Balian G. Collagen characterisation and cell transformation in human atherosclerosis //Nature (Lond.) 1975. V. 258. P. 73-75.

81. Millar J.S., Anber V., Shepherd J., Packard C.J. Sialic acid-containing components of lipoproteins influence lipooprotein-proteoglycan interactions // Atherosclerosis. 1999. V. 145. P. 253-60.

82. Morton L.F., Barnes M.J. Collagen polymorphism in the normal and diseased blood vessel wall. Investigation of collagens types I, III and V // Atherosclerosis. 1982. V. 42. P. 41-51.

83. Mourao P.A., Skreekumar P., DiFerrante V. The binding of chondroitin 6-sulfate to plasma low density lipoprotein // Biochim. Biophys. Acta 1981. V. 674. P. 178187.

84. Mourao P.A., Bracamonte C.A. The binding of human aortic glycosaminoglycans and proteoglycans to plasma low density lipoproteins // Atherosclerosis. 1984. V. 50. P. 133-46.

85. Nakashima Y., Nakamura M., Kikuchi Y. Cerebral atherosclerosis in Japanese part 6: the interaction of plasma lipoproteins with glycosaminoglycans isolated from the cerebral arteries and aortas // Artery. 1981. V. 9. P. 151-155.

86. Newman R.E., Logan M.A. The determination of hydroxyproline // J. Biol. Chem. 1950. V. 184. P. 299-305.

87. Noma A., Hirayama Т., Yachi A. Inhibitory effect of high density lipoprotein subfractions on the in vitro binding of low density lipoproteins to arterial elastin // Atherosclerosis. 1983a. V. 49. P. 171-175.

88. Noma A., Hirayama Т., Yachi A. Studies on the binding of plasma low density lipoproteins to arterial elastin // Connect. Tissue Res. 19836. V. 11. P. 123-133.

89. Noma A., Takahashi Т., Yamada K., et.al. Elastin lipid interaction action in arterial wall. Parti. Extraction of elastin from human aortic intima // Atherosclerosis. 1979a. V. 33. P. 29-39.

90. O'Driscoll S.W., Salter R.B., Keeley F.W. A method for quantitative analysis of ratios of types I and II collagen in small samples of articular catrilage // Anal. Biochem. 1985. V. 145. P. 277-285.

91. Oegema T.R., Hanscall V.C, Eisenstein R. Characterization of bovine aorta proteoglican extracted with guanidine hydrochloride in the presence of protease inhibitors // J. Biol. Chem. 1979. V. 254. P. 1312-1318.

92. Olsson U., Camejo G., Bondjers G. Binding of a synthetic apolipoprotein B-100 peptide and peptide analogues to chondroitin 6-sulfate: effects of the lipid environment // Biochemistry. 1993. V. 32. P. 1858-1865.

93. Olsson U., Camejo G., Olofsson S-O., et. al. Molecular parameters that control the association of low density lipoprotein apo B-100 with chondroitin sulphate // Biochem. Biophys. Acta. 1991. У 1097. P 37-44.

94. Ooshima A. Collagen В chain: Increased proportion in human atherosclerosis // Science. 1981. V. 213. P. 666-668.

95. Orekhov A.N. Tertov V.V. Novikov I.D., et. al. Lipids in cells of atherosclerotic and uninvolved human aorta. I. Lipid composition of aortic tissue and enzyme-isolated and cultured ceils // Exp. Mol. Pathol. 1985. V. 42. P. 117-137.

96. Orekhov A.N., Tertov V.V., Mukhin D.N. Desialylated low density lipoprotein naturally occuring lipoprotein with atherogenic potency // Atherosclerosis. 1991. V.86. P.153-161.

97. Orekhov A.N., Tertov V.V., Mukhin V. et. al. // Biochem. Biophys. Acta. 1987. V. 928. P. 251-258.

98. Orekhov A.N., Tertov V.V., Mukhin V. et. al. //Atherosclerosis. 1989. V.79. P. 59-70.

99. Orekhov A.N., Tertov V.V., Sobenin I.A. et al. Sialic acid content of human low density lipoproteins affects their interaction with cell receptors and intracellular lipid accumulation // J. Lipid Res. 1992. V.33. P.805-807.

100. Parthasarathy S., Quinn M.T., Schwenke D.C., et. al. Oxidative modification of beta-very low density lipoprotein. Potential role in monocyte recruitment and foam cell formation // Arteriosclerosis. 1989. V. 9. P. 398.

101. Podet E.J., Shaffer D.R., Gianturco S.H., et. al. Interaction of low density lipoproteins with human aortic elastin // Arterioscler. Thromb. 1991. V. 11. P. 116-22.

102. Quinn M.T., Parthasarathy S., Fong L.G., et. al. Oxidatively modified low density lipoproteins: a potential role in recruitment and retention of monocyte/macrophages during atherogenesis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1987. V. 84. P. 2995.

103. Rosenfeld M.E., Pestel E. Cellularity of atherosclerotic lesions // Coronary Artery Dis. 1994. V. 5. P. 189-197.

104. Ross R., Bornstein P. The elastic fiber. I. The separation and partial characterization of its macromolecular components // J. Cell Biol. 1969. V 40. P. 366-381.

105. Saito H., Yamagata Т., Suzuki S. Enzymatic methods for the determination of small quantities of isomeric chondroitin sulfates // J. Biol. Chem. 1968. V. 243. P. 1536-1542.

106. Salisbury B.G., Falcone D.J., Minick C.R. Insoluble low-density lipoprotein-proteoglycan complexes enhance cholesteryl ester accumulation in macrophages // Am. J. Pathol. 1985. V. 120. P. 6-11.

107. Saulnier J.M., Hauck M., Fulop T. Jr., et. al. Human aortic elastin from normal individuals and atherosclerotic patients: lipid and cation contents; susceptibility to elastolysis // Clin. Chim. Acta. 1991. V. 200. P. 129-36.

108. Shen M.M.S., Krauss R.M., Lindgren F.T., et al. Heterogenity of serum low density lipoproteins in normal human subjects // J. Lipid Res. 1981. V.22. P.236-244.

109. Shi C., Lee W-S., He Q., et. al. Immunologic basis of transplant-associated arteriosclerosis // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1996. V. 93. P. 4051-4056.

110. Shimokawa H., Ito A., Fukumoto Y., et. al. Chronic treatment with interleukin-1 beta induces coronary intimal lesions and vasospastic responses in pigs in vivo. The role of platelet-derived growth factor// J. Clin. Invest. 1996. V. 97. P. 769-76.

111. Shiomi M., Ito Т., Tsukada Т., et. al. Cell compositions of coronary and aortic atherosclerotic lesions in WHHL rabbits differ. An immunohixtochemical study // Arterioscler. Thromb. 1994. V. 14. P. 931-937.

112. Smith EB, Evans PH, Downham MD. Lipid in the aortic intima. The correlation of morphological and chemical characteristics. //J. Atheroscler. Res. 1967. V. 7. P. 171-186.

113. Smith E.B., Massie LB., Alexander K.M. The release of an immobilized lipoprotein fraction from atherosclerotic lesions by incubation with plasmin // Atherosclerosis. 1976. V. 25. P. 71-84.

114. Smith E.B. The relationship between plasma and tissue lipids in human atherosclerosis // Adv. Lipid. Res.1974. V. 12. P. 1-49

115. Smith J.D., Trogan E., Grinsberg M., et. al. Decreased atherosclerosis in mice deficient in both macrophage colony-stimulating factor (op) and apolipoprotein E //Proc. Natl. Acad. Sci. USA. 1995. V. 92. P. 8264-8268.

116. Spina M., Garbin G. Age-related chemical changes in human elastins from non-atherosclerotic areas of thoracic aorta// Atherosclerosis. 1976. V. 24. P. 267-275.

117. Srenivasan S.R., Dolan P., Radhakrishnamurthy В., et. al. Lipoprotein acid mucopolysaccharide complexes of human atherosclerotic lesions // Biochem. Biophys. Acta. 1975. V. 388. P. 58-72.

118. Srenivasan S.R., Vijayagopal P., Eberle K., et. al. Low-density lipoprotein binding affinity of arterial wall proteoglycan subtraction // Biochem. Biophys. Acta. 1989. V. 1006. P. 159-166.

119. Srinivasan S.R., Dolan P., Radhakrishnamurthy В., et. al. Isolation of lipoprotein acid mucopolysaccharide complexes from fatty streaks of human aortas // Atherosclerosis. 1972. V. 16. P. 95-104.

120. Srinivasan S.R., Yost C., Radhakrishnamurthy В., et. al. Lipoprotein-elastin interactions in human aorta fibrous plaque lesions // Atherosclerosis. 1981. V. 38. P. 137-47.

121. Steele R.H., Wagner W.D., Rowe H.A., et. al. Aretery wall derived proteoglycan-plasma lipoprotein interaction: lipoprotein binding properties of extracted proteoglycans // Atherosclerosis. 1987. V.65. P. 51-62.

122. Steinberger P., Loughead . // Atheroscl. Thromb. 1992. V. 12. P. 608.

123. Stender S., Hjelms E. In vivo influx of free and esterifed plasma cholesterol into human aortic tissue without atherosclerotic lesions // J. Clin. Invest. 1984. V. 74. P. 1871-1881.

124. Stevens R.L., Colombo M., Gonzales J.J., et. al. The glycosaminoglycans of the human artery and their changes in atherosclerosis // J. Clin. Invest. 1976. Y. 58. P. 470-481

125. Szymanowicz A.G., Bellon G., Laurain-Guillaume G., et. al. An evaluation by sequential extraction of the proportions of collagen types from medium sized arteries // Artery. 1982. V. 10. P. 250-265.

126. Taniguchi Т., Ishikava Y., Tsunemitsu M., et al. Stimulation of cholesteryl ester synthesis in human monocyte-derived macrophages by asialo low density lipoproteins //Arteriosclerosis 1989. V.9. P.767-769.

127. Tertov V.V., Bittolo-Bon G., Sobenin I.A. et al. Naturally occuring modified LDL are similar if not identical: more electronegative and desialylated lipoprotein subfraction // Exp. Mol. Biol. 1995. V.62. P. 166-172.

128. Tertov V.V., Orekhov A.N. Deglycosylation is an atherogenic modification of ApoB-containing lipoproteins //Atherosclerosis. 2000. V. 151. P. 288.

129. Tertov V.V., Orekhov A.N. Metabolism of native and naturally occuring multiple modified low density lipoprotein in smooth muscle cells of human aortic intima // Exp. Mol. Pathol. 1997. V.64. P.127.

130. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin I.A. et al. Carbohydrate content of protein and lipid components in sialic acid-rich and -poor low density lipoproteins from subjects with and without coronary artery disease // J. Lipid Res. 1993. V.34. P.365-375.

131. Tertov V.V., Orekhov A.N., Sobenin I.A. et al. Three types of naturally occuring modified lipoproteins induce-intracellular lipid accumulation due to lipoprotein aggregation // Circ. Res. 1992. Y.71. P.218-228.

132. Tertov V.V., Sobenin I.A., Gabbazov Z.A. et al. Multiple-modified desialylated LDL that cause intracellular lipid accumulation. Isolation, fractionation and characterisation//Lab. Investigation. 1992. У.67. P.665-675.

133. Tertov V.V., Sobenin I.A., Orekhov A.N. Similarity between naturally occuring modified desialylated, electronegative and aortic low density lipoprotein // Free Rad. Res. 1996. V.25. P.313-319.

134. Tertov V.V., Orekhov A.N., Martsenyuk O.N., et. al. Low density lipoproteins isolated from the blood of patients with coronary heart disease induce the accumulation of lipids in human aortic cells // Exp. Mol. Pathol. 1989. V. 50. P. 337-348.

135. Tokita K., Kanno K., Ikeda K. Elastin sub-fraction as binding site for lipids // Atherosclerosis. 1977. V. 28. P. 111-119.

136. Toledo O.M.S., Mourao P.A.S. // Artery .1980. V. 6. P. 341-353.

137. Trelstad R.L. Human aorta collagens: evidence for three distinct species // Biochim. Biophys. Res. Comm. 1974. V. 57. P. 717-725.

138. Van der Wal A.C. Atherosclerotic lesions in human. In situ immunophenotypic analysis suggesting an immune mediated response // Lab. Invest. 1989. V 61. P 166.

139. Vassalli P. The pathophysiology of tumor necrosis factor // Ann. Rev. Immunol. 1992. V. 10. P. 411-452.

140. Vedie В., Mayra I., Pech M.A., et al. Fractionation of charge-modified low density lipoproteins by fast protein liquid chromatography // J. Lipid. Res. 1991. V.32. P.1359-1369.

141. Velican D., Velican C. Histochemical study on the glycosamoniglycans (acid mucopolysaccharides) of the human coronary artery // Acta Histochem. Bd. 1977. V. 59. P. 190-200.

142. Vijayagopal P., Srinivasan S.R., Xu J.H., et. al. Lipoprotein-proteoglycan complexes induce continued cholesteryl ester accumulation in foam cells from rabbit atherosclerotic lesions // J. Clin. Invest. 1993. V. 91. P. 1011-1018.

143. Virella G., Munoz J.F., Galbraith G.M., et. al. Activation of human monocyte-derived macrophages by immune complexes containing low-density lipoprotein // Clin. Immunol. Immunopathol. 1995. V. 75. P. 179-89.

144. Volker W., Schmidt A., Buddeke E. Cytochemical changes in a human arterial proteoglycan related to atherosclerosis // Atherosclerosis. 1989. V. 77. P. 117-130.

145. Wagh P.V., Roberts B.I., White H.J., et. al. Changes in the content of human aortic glycoproteins and acid mucopolysaccharides in atherosclerosis // Atherosclerosis. 1973. V. 18. P. 83-91.

146. Wagner S.J.C., Libby P. Human vascular smooth muscle cells: Targent for and source of tumor necrosis factor // J. Immun. 1989. V. 142. P. 100.

147. Walton K.W., Morris C.J. Studies on the passage of plasma proteins across arterial endothelium in relation to atherogenesis // Prog. Biochem. Pharmacol. 1977. V. 13. P. 138-152.

148. Warren L. The thiobarbituric acid assay of sialic acids // J. Biol. Chem. 1959. V. 234. P. 1971-1975.

149. Wessler . "Abnormalities of arterial wall and its metabolism in atherogenesis." Prog. Card. Dis. 1976. V 18. P 341177

150. Wight Т. Cell biology of arterial proteoglycans // Arteriosclerosis. 1989. V. 9. P. 1-20.

151. Williams K.J., Tabas I. The responce-to-retention hypothesis of early atherogenesis // Arterioscler. Thromb. Vase. Biol. 1995. V. 15. P. 551-561.

152. Yla-Herttuala S., Solakivi Т., Hirvonen J., et. al. Glycosaminoglycans and apolipoproteins В and A-I in human aortas. Chemical and immunological analysis of lesion-free aortas from children and adults // Arteriosclerosis. 1987. V. 7. P. 333-40.