Колонизационная активность популяций прокариотов и микроскопических зукариотов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.07, доктор биологических наук Кузнецов, Олег Ювенальевич

• Кузнецов, Олег Ювенальевич
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Кузнецов, Олег Ювенальевич

Введение.

Глава 1. Общие закономерности формирования популяций микроорганизмов на плотной питательной среде

1.1. Развитие микроколоний микроорганизмов как первый этап формирования колоний на плотной питательной среде.

1.2. Развитие популяций микроорганизмов на этапе пространственно локализованных образований колоний.

1.3. Адаптационные процессы в популяциях микроорганизмов. Диффузно-распределенные популяции микроорганизмов как природно существующие в составе различных биоценозов.

1.4. Биотестирование как метод оценки экологического состояния окружающей среды при развитии микробных популяций.

1.5. Информационные показатели, характеризующие адаптивный процесс популяций микроорганизмов при развитии на плотной питательной среде.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Колонизационная активность популяций прокариотов и микроскопических зукариотов»

Актуальность проблемы:

В настоящее время происходит нарастание экологического неблагополучия среды обитания за счет увеличения антропогенного "негативного" прессинга. Ненормированные диссипативные антропогенные нагрузки на окружающую среду, несмотря на колоссальные резервы ее устойчивости, могут явиться первопричиной экологических катастроф. В первую очередь это относится к загрязнению химическими веществами, несвойственными природе, так называемыми, ксенобиотиками (Израэль Ю.А.,1979). Это может также привести к закономерному изменению спектра инфекционной патологии современного человека и смене приоритетов среди микроорганизмов (Литвин В.Ю. с соавторами, 2001). Оценка состояния природной среды подразумевает всесторонний анализ ее изменений. К сожалению, существующие методы экологического мониторинга часто сложны и трудоемки в исполнении. При экологической оценке состояния окружающей среды в первую очередь наблюдают за реакцией биоты под влиянием различных факторов. Реакции биоты обычно оцениваются по обнаружению и реакции определенных тест-организмов, за которыми наблюдают необходимое время. Сравнение полученных данных относительно количества организмов в контроле позволяет делать выводы о благоприятности или неблагоприятности внешних воздействий на экосистему. Вместе с тем, достаточно трудно сопоставлять биологическую активность того или иного организма в составе биоты, поскольку абсолютные величины численности организмов порой невозможно сравнивать между собой. Поиск показателей, позволяющих определить как активность организма в составе биоты (экосистемы), так и сопоставлять активность организмов внутри ее, является актуальной задачей биологической науки. Более простым путем могут быть поиски такого рода показателя для характеристики различных экосистем и организмов внутри их, прибегнув к микробиологическим исследованиям.

Внутри биоты микроорганизмы являются оптимальным индикатором, учитывая их повсеместное распространение, высокую численность, большой вклад в процесс обмена веществ, энергии и быструю смену поколений (Пшеничнов Р.А., 1991). С помощью различных микробиологических методов возможно быстро и достоверно оценить генотоксический (мутагенный и канцерогенный) потенциал химических соединений (Методические указания Института общей генетики АН СССР 1985), установить персистентные характеристики бактериальных популяций, зависящие от степени загрязнения окружающей среды (Бухарин О.В., 1999). Это позволяет быстро прогнозировать и оценивать степень реальной опасности загрязнения экосистемы для человека. Однако практически постоянно исследователи сталкиваются с проблемой значимости того или иного микроорганизма в структуре биоценоза. Оценка развития определенного штамма микроорганизма в чистой культуре и влияние на него различных факторов биотической и абиотической природы является ведущей проблемой микробиологии.

Микроорганизмы (бактерии и грибы) обычно развиваясь, формируют структурно-организованное скопление клеток - колонию. Изучена организация бактериальных колоний отдельных видов, ее цитоархитектоника (Высоцкий В.В. и др. 1984; 1985, Afrikjan E.G. et al., 1971), возрастная и пространственная гетерогенность (Тикк Э.И.,1984, Пузырь А.П., Могильная О.А.,1988). В то же время особенности развития микроскопических эукариотических организмов изучены недостаточно. Возможности познания эукариотических организмов ограничиваются сложностью их культивирования и длительностью клеточного цикла, что ведет к существенному усложнению постановки экспериментов и недостаточностью методов оценки полученных результатов. Кроме того, существует довольно значительное различие между растительными эукариотическими клетками и эукариотическими клетками животного происхождения. Наиболее часто в природе сталкиваются микроорганизмы (прокариоты и эукариоты) в почве, где идет тихая, молчаливая, но от этого не менее напряженная симбиотическая жизнь или борьба за существование. На поверхности питательного субстрата, так и внутри его, многие эукариотические микроорганизмы, также как и бактериальные клетки, способны образовывать колонии. В связи с этим, доступным, оптимальным, и воспроизводимым может оказаться изучение развития колоний на поверхности питательных субстратов, поскольку практически отсутствуют методы исследования микроорганизмов, заключенных внутрь агаризованных питательных сред.

Бактериальная колония, также как и колония эукариотических клеток - это сообщество клеток, развивающееся как единый организм, которое тонко реагирует на изменение химических, физико-химических и биологических факторов среды обитания и, поэтому, именно колонии могут быть использованы в качестве простых индикаторных систем. В настоящей работе предполагалось провести фундаментальное исследование воздействия химических, физических и биологических факторов на процесс формирования колонии бактериальных клеток и предложить морфофизиологическую цитоархитектонику колоний микроорганизмов в качестве простого теста для оценки экологического состояния окружающей среды по особенностям колонизационной активности изучаемых штаммов. Предполагалось также исследовать в аналогичных условиях развитие колоний эукариотических организмов на модели гриба Вешенка, а затем, используя полученные данные определить потенциальную возможность их применения для оценки влияния экологических факторов.

Цель работы:

Выявить особенности роста и развития некоторых популяций прокариотических и эукариотических клеток на плотных и жидких питательных средах, определить наиболее информативные показатели развития этих популяций, возможности и ограничения использования установленных интегративных показателей в различных экологических исследованиях.

Задачи научного исследования:

1. Разработать методическое обеспечение для морфометрического изучения бактериальных колоний и колоний некоторых грибов (эукаритов) на поверхности плотной питательной среды. Исследовать в динамике морфоцитоархитектонику колоний.

2. Изучить закономерности формирования бактериальных колоний (на примере штаммов S.flexneri с генетически детерминированной антигенной структурой) на плотной питательной среде в оптимальных и экстремальных условиях среды обитания.

3. Разработать общие подходы для оценки активности процесса адаптации микроорганизмов (некоторых прокариотов и эукариотов) к различным условиям среды обитания (оптимальным и экстремальным условиям) и созданию индикаторных микробиологических систем для определения экологического состояния среды.

4. Определить возможности и ограничения использования показателя колонизационной активности в различного рода экологических исследованиях, в том числе и при изучении микробной экологии человека.

Объект исследования:

Прокариоты:

• Грамотрицательные бактерии: шигеллы S.flexneri S (Shigella flexneri 50 - S) и Rd (Shigella flexneri 62 - Rd = (За)) из коллекции Симмонса, E.coii M-17 (препарат «Колибактерин»), Е.coli 0-114 из коллекции микробных штаммов кафедры микробиологии, вирусологии Ивановской государственной медицинской академии.

• Грамположительные бактерии: Bacillus subtilis.

• Грамположительные кокки: род. Staphylococcus, Streptococcus и другие микроорганизмы - прокариоты, как промышленные штаммы, так и "дикие", выделенные из различных экологических источников, в том числе и из организма человека. укариоты: штаммы грибов: Candida albicans, музейные штаммы высших грибов Pleurotus ostreatus, Shiitake (Lentinus edodes) и др. аучная новизна:

1. Впервые разработана методология для изучения закономерностей формирования микроколоний прокариотов на плотной питательной среде

2. Предложен и широко апробирован новый метод оценки колонизации популяциями клеток прокариотов и эукариотов питательного субстрата. Показана эффективность применения этого метода при экологических исследованиях в трех средах -почве, воде, воздухе.

3. Установлено, что метод оценки колонизационной активности микроорганизмов, позволяет расшифровать иерархическую структуру микробной популяции. Это дает возможность целенаправленно конструировать (реконструировать) микробные ассоциации для различных биотехнологических целей, в том числе для создания новых оздоровительных и профилактических препаратов для человека.

4. Определено, что комплекс биологически активных веществ, выделенных из сока высшего съедобного гриба Шиитаке, обладает выраженным избирательным действием различной направленности на характеристические виды микрофлоры человека.

5. Разработан оригинальный технологический цикл культивирования съедобных грибов (на примере гриба Шиитаке) и получения на его основе биологически активных компонентов, обладающих ярко выраженным иммуностимулирующим и профилактическим действием.

Практическая ценность исследования и реализация результатов работы:

Создан комплекс методов микрокультивирования, позволяющих проследить закономерности развития микробных популяций от единичных клеток до этапа визуально различимых колоний. Данные разработки могут быть использованы в фундаментальных исследованиях в микробиологических лабораториях различного профиля.

Результаты работы в настоящее время используются в производстве - молочнокислый напиток «Лактис» (фирма «Кумир» г.Иваново). Фитозащитный препарат для применения в условиях закрытого грунта теплиц «Экофит» (ФГСП совхоз «Тепличный г.Иваново). Способы получения зернового мицелия съедобных грибов и метод их культивирования внедрены и имеют крайне важное значение в хозяйствах различных форм собственности, а также личных дачных участках для получения плодовых тел грибов как экологически чистого продукта питания. Получение достаточного количества грибной биомассы как сырья дает возможность последующего фармакологического использования при получении биологически активных компонентов с медицинскими целями.

В целом по результатам работы были получены следующие авторские свидетельства, патенты и отраслевые рационализаторские предложения в различных областях микробиологии:

1. Кузнецов О.Ю., Смирнов С.Г. Способ бестарного выращивания высших грибов. Бюл.изоб.Ы2, 20.01.1 998,А.С.N 2101913.

2. Кузнецов О.Ю. Способ выращивания зернового мицелия высших грибов. A.C.N 2101914 Бюл.изоб.№2 от 20.01.1998.

3. Кузнецов О.Ю., Чистякова М.Н. Способ получения оздоровительного напитка. Патент №2140448 Бюл .изоб.№30, 27.10.1999.

4. Неустроева Н.Р., Воробьев Ю.Г., Смирнов Р.П., Кузнецов О.Ю. 54, 56 - индий(111)хлор:58,60-кобальт(П)оксо-6,11:19,24:32:45,50-тет-раимино-5,52: 13,18: 20,31: 39,44-6,11: 19,24:32,37:45,50тетранит-рилоктабензо[С, G, Е, Р, U, Y, D, Н] (1, 10, 19, 28-тетраазациклогекса-триаконтин, обладающий бактериостатичес-ким действием на стафилококк и кишечную палочку. Патент России №2135500 Бюл.изоб.№24 от 27.08.1999

5. Кузнецов О.Ю., Голубев О.А., Егорова Н.Г., Ащеулов В.И., Рупасов К.И., Марков B.C. Способ получения биологического препарата «Экофит» для защиты растений от фитопатогенов и повышения урожая. Патент России №2170510 Бюл.изоб.№20 от 20.07.2001.

6. Милькова Е.В., Кузнецов О.Ю., Сотникова Н.Ю. Способ получения препарата эубиотика колибактерин. Патент России №2174842, Бюл.изоб.№ 29 от 20.10.2001.

7. Кузнецов О.Ю. Способ выращивания мицелия высших грибов. Патент России №2192119, Бюл.изоб.№ 31 от 10.1 1.2002.

8. Стройкова И.К., Максимов А.И., Галашина В.Н., Кузнецов О.Ю., Морыганов А.П. Способ стерилизации. Патент России №2195961 Бюл.изоб.№1 от 10.01.2003.

9. Егорова Н.Г., Голубев О.А., Кузнецов О.Ю., Слободин В.Б. Способ измерения электрофоретической подвижности биологических микрообъектов. Патент России №2199733 Бюл.изоб.№ 6 от 27.02.2003.

Ю.Егорова Н.Г., Голубев О.А., Кузнецов О.Ю., Слободин В.Б. Способ определения электрофоретической подвижности биологических микрообъектов. Патент РФ № 2199733. Бюллетень изобретений № 6 от 27.02.2003.

11. Голубев О.А., Кузнецов О.Ю., Железняк Н.И., Маклецова Ю.И. Огурцов В.В. Способ измерения электрофоретической подвижности абиотических микрообъектов. Патент РФ №2245539 Бюл.изоб.№ 3 от 27.01.2005.

12. Кузнецов О.Ю., Соснина А.Е., Голубев О.А., Козловский А.С. Емкость для выращивания мицелия высших грибов и их плодовых тел. Патент на полезную модель РФ №38528. Бюллетень изобретений №19 от 10.07.2004.

Связь задач исследований с проблемными планами:

Диссертация выполнялась в рамках научно-исследовательской программы «Снижение инфекционной заболеваемости в условиях социально-экологического неблагополучия» Московский НИИ эпидемиологии и микробиологии им. Г.Н. Габричевского и научного плана Ивановской государственной медицинской академии 1995 -2001 г.

Апробация работы

Материалы диссертации представлены и обсуждены на следующих международных, всесоюзных, республиканских и региональных конференциях:

• Физико-химические исследования патогенных энтеробактерий в процессе культивирования, Иваново, Регион.конф., 1985;

• Конференц. АН СССР, Сиб. отделение «Биофизика микробных популяций», Красноярск, 1987;

• Электр.микроскопия для иссл. функциональных изменений структуры клеток при различных воздействиях//.Всес.семинар НТО РЭС им.А.С.Попова, ИГМИ им.А.С.Бубнова Иваново, 1518 июня 1987;

• Всес. Семинар «Колонизационная резистентность и химиотерапевтические антибактериальные препараты» 28-29 июня Москва, 1 988.

• «Проблемы современной биологии» 20-я науч.конф.биол.фак.МГУ,Москва,24-28 апреля МГУ.М., 1989;

• «Микробиология охраны биосферы в регионах Урала и Сев. Прикаспия» Всес.симпозиум, Оренбург, 1 991;

• Республиканская конференция "Проблемы развития малоотходных ресурсосберегающих экологически чистых технологий в текстильной и легкой промышленности" (г. Иваново, 1 994);

• Всероссийская конференция с международным участием "Озон в биологии и медицине" II Всероссийская научно-практическая конф. с междунар. Участием 6-8 сентября 1995 г., Нижний Новгород, 1995 (г. Нижний Новгород, 1 995);

• Всероссийская конференция "Дисбактериозы и Эубиотики" (г.Москва, 1996);

• Международная конференция "Экология человека и природы" (г. Иваново, 1 997);

• I Международная научно-техническая конференция 22 -23 сентября, Иваново, 1997. Актуальные пробл. Химии и химической технологии (Химия-97). Per.семинар «Экологические проблемы Верхн.-Волжск.региона. Условия перехода к устойчивому развитию (22-23сент.), г.Иваново,1 997;

Международная научно-практической конференция:

Загрязнение окружающей среды и здоровье населения" Смоленск СГМА . 1999;

Внутрибольн.проблемы эпидем. клиники,диагностики, лечения и профилактики. II Росиийская научн. практ.конф. с междун.уч. 30 ноября-2 декабря 1999, Москва; Росс.научн.конф. «Факторы клеточного и гуморального иммунитета при различных физиологических и патологических состояниях». Челябинск, 2000;

Третья научная конф. с международным участием "Дни иммунологии в Санкт-Петербурге - 99" С-П 18-20 мая 1999;

II Всероссийской научной конференции "Молекулярная физика неравновесных систем" Иваново 2000;

Физика и радиоэлектр. в медицине и экологии ФРЭМЭ, 2000. Мат. 4 международн.научно-техн.конф. 27-30 июня 2000, Владимир, 2000;

III Всероссийской науч-пр.кон. «Экологические проблемы биодеградации промышленных, строительных материалов и отходов производства». Пенза, 2000;

Междунар. НТК «Достижения текстильной химии в производстве» (Текстильная химия -2000); III Конгресс РСХТК, Москва -2000;

Международный форум по проблемам науки, техники и образования г. Москва, 2000;

Современные наукоемкие технологии и перспективные материалы текстильной и легкой промышленности (Прогресс-2001). Науч.-практ. конф. Иваново, 2001. ИГТА. Молекулярная биология, химия и физика неравновесных систем. 6-я Международная научная конференция. Иваново,2002.

Научно-практическая конференция «Современное состояние Российской биотехнологии», Москва, 2003, Пущино, 28-29 октября 2003.

II Московский международный Конгресс Биотехнология: состояние и перспективы развития, М., 10-14 ноября 2003. Первый Всероссийский Конгресс медицинских микологов «Успехи медицинской микологии», М.2003.

2-й съезд Общества биотехнологов России, 13-15 октября 2004, Москва.

Второй Всероссийский Конгресс по медицинской микологии. Москва. 2004.

Республиканская конференция «Иммунология репродукции», Иваново, 2005.

Положения выносимые на защиту.

1. Колонизационный потенциал прокариотов и микроскопических эукариотов, определяемый на основе расчета показателя колонизационной активности (ПКА), определяет закономерности и особенности функционирования микробиоценозов в различных средах обитания, адаптивную стратегию конкретного вида в составе микробиоценоза.

2. Для оценки колонизационной активности популяций микроскопических прокариотов и эукариотов предлагается комплекс оригинальных устройств и способов их использования в микробиологической науке и практике, имеющих как фундаментальное, так и прикладное применение.

3. На основе предложенной концепции показателя колонизационной активности микроорганизмов разработан и внедрен в производство биологически активный препарат «Экофит», позволяющий осуществить коррекцию микробиоценозов почвы в ходе выращивания овощных культур растений.

4. Впервые установлено, что комплекс биологически активных веществ, присутствующий в соке высшего съедобного гриба Шиитаке, обладает выраженным избирательным действием различной направленности в отношении характеристических видов микрофлоры человека.

Публикации.

По материалам диссертации опубликовано 81 работа, в том числе 11 изобретений и патентов России.

Структура и объем диссертации

Диссертация изложена на 288 страницах, состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, 3 глав результатов исследования, обсуждения результатов, заключения, выводов, приложения, иллюстрирована 53 рисунками и 40 таблицами. Список литературы включает 256 работ отечественных и 127 публикаций иностранных авторов.

Заключение диссертации по теме «Микробиология», Кузнецов, Олег Ювенальевич

Выводы

1. При развитии популяций прокариотов на плотной питательной среде возможно получить много формализованных показателей для развивающихся клеток. В развитии колоний прокариотов и эукариотов значимыми и определяющими ход развития популяции являются показатели, для которых применяется подход сигмум-функции, т.е. когда оценивается начальное и конечное состояние исследуемого объекта.

2. Установлено, что на клеточно-популяционном уровне изучения популяции микроорганизмов наиболее чувствительными и информативными являются: структурно-адаптивный показатель Lk/L0 (отношение конечной длины клеток к их начальной длине) и т (время генерации клеток).

3. Исследования развития микроколоний прокариотов и эукариотов на плотной питательной среде позволили установить, что развитие микроорганизмов находится под управляющим действием веществ вещества, выделяемых клеточной популяцией в окружающую среду или межклеточное пространство. Эти вещества способны изменять адаптивное поведение клеток, стимулируя или ингибируя их развитие в определенные моменты развития при формировании колонии.

4. Установленный факт наличия внутри бактериальной колонии диссоциативного процесса с помощью определения потенциала клеток из одной колонии штамма шигелл (клеток генетически детерминированных по антигенной структуре) косвенно подтверждает это управляющее воздействие.

5. Теоретически обоснована целесообразность введения показателя колонизационной активности (ПКА) и апробировано его использование на различных штаммах микроорганизмов (прокариотов и эукариотов) для характеристики направленности адаптивного процесса и физиологического состояния популяции.

6. Практическое использование разработанного ПКА в сравнении с общепринятыми в различных экосистемах - в почве, воде и воздухе показало его ценность. Ограничение для применения ПКА в воздушной среде связано с транзиторным характером пребывания микроорганизмов в данной среде.

7. Разработана методика с использованием ПКА для установления иерархической структуры почвенного микробиоценоза, что позволило выполнить частичную реконструкцию микробиоценоза закрытого грунта и, создав оригинальный препарат «Экофит», путем привнесения этого биологически активного препарата в почву, добиться повышения урожайности культурных растений в условиях тепличного производства.

8. Использование ПКА в исследованиях характеристических видов микрофлоры тела человека показало возможность оценки развития данных штаммов при изучении влияния различного рода добавок в среду культивирования. Доказано активное воздействие пектиновых добавок в различной концентрации на развитие отдельных микроорганизмов из состава микрофлоры кишечника человека. На основе определения ПКА создан лечебно-оздоровительный напиток «Лактис», прошедший клинические испытания и внедренный в производство.

9. Разработан способ для выполнения газоразрядной стерилизации водных растворов, отличающийся тем, что необходим короткий период времени для достижения полной стерильности, а полученные при этом растворы обладают длительным биологическим последействием.

10. Разработан комплекс способов и устройств в микологии, позволяющий широкомасштабно получать зерновой мицелий высших грибов и их плодовые тела для последующего использования как пищевого продукта или БАД к пищевым продуктам, а также как сырья для фармакологических исследований при поиске биологически активных компонентов.

11. Установлено наличие избирательного эффекта воздействия компонентов, содержащихся в соке высшего гриба Шиитаке (Lentinus edodes) на развитие характеристических видов микроорганизмов из состава микрофлоры тела человека (прокариотические и эукариотические штаммы). Обнаружено - стимуляция штаммов E.coli М-17, Bifidobacterium sp., Lactobacterium sp. и ингибирование для ряда условно-патогенных штаммов микроорганизмов - E.coli 0-114, Candida albicans, Str.faecalis.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Медико-экологические аспекты колонизационной активности микроорганизмов рассмотрены по оценке показателя колонизационной активности на примере характеристических штаммов микроорганизмов из состава микрофлоры человека.

На основании данных по колонизационной активности установлено, что наиболее оптимальной концентрацией добавления пектина в среду культивирования микроорганизмов является концентрация 4-5%. Вместе с тем было установлено, что и меньшие концентрации также оказывают разноплановое влияние, но не столь выраженное на микроорганизмы исследуемого биоценоза. Пектин в этом случае может выступать в роли «мягкого» эубиотика, т.е. другими словами, это - препарат, который активизирует и стимулирует характеристические штаммы из состава собственной микрофлоры кишечника, подавляя одновременно развитие условно-патогенных видов микроорганизмов при различных дисбактериозах кишечника человека. Тем самым зафиксирована избирательность воздействия пектина в отношении отдельных микроорганизмов.

В ходе выполнения ряда экспериментов данного раздела работы нами была разработана и использована специальная питательная среда для лактобактерий (см.Приложение).

На основе определения ПКА было проведено исследование по обоснованию композитного состава разработанного оригинального напитка «Лактис» и оценке развития входящих в его состав молочнокислых стрептококков. В целом, после подсчета средних значений показателя колонизационной активности (ПКА), было ® зарегистрировано незначительное ингибирование развития клеток в ассоциативной популяции стрептококков культуры напитка "Лактис". Установление значений ПКА оказывается весьма эффективным Jk инструментом при определении возможного действия каких-либо новых компонентов в составе питательных сред при развитии ассоциативных микробиоценозов.

В разделах 5.3. и 5.4 представлены результаты по изучению колонизационной активности микроорганизмов характеристических Ф видов из состава биоценозов тела человека. В ходе работы по данному разделу были разработаны 3 патента России по культивированию высших съедобных грибов (см.Приложение с их описаниями), имеющих большое экономическое значение.

Впервые была обнаружена избирательность действия сока различных волн плодообразования гриба Шиитаке на условно-патогенные штаммы микроорганизмов (даже внутри одного рода) и крайне высокая стимуляция развития штамма E.coli М-17, судя по его колонизационной активности. После многочисленных повторов данного эксперимента, это позволило создать патент России «Способ ® получения препарата эубиотика колибактерин» (№2174842, Б.И. №29 от 20.10.2001, см.Приложение). В ходе выполнения экспериментов данного раздела работы был разработан также патент России

Способ получения оздоровительного напитка» (№2140448 Б.И.№30 от 27.10.1999, см.Приложение).

Таким образом, установление ПКА для оценки развития микроорганизмов из состава микрофлоры тела человека приемлемо как метод исследования, особенно в случаях оценки развития ассоциативных биоценозов и определения степени влияния исследуемого фактора на отдельные штаммы микроорганизмов.

В целом в ходе выполнения работы по данной главе были получены результаты, которые легли в основу создания России в различных разделах микологии и бактериологии более подробно Приложение).

5 патентов (см.выше и

Глава 6. Обсуждение результатов.

Любые микроорганизмы, как живущие в окружающей среде, так и находящиеся в организме человека и животных, ведут преимущественно иммобилизованный образ жизни. Это означает, что в природе в естественных условиях подавляющее большинство микроорганизмов обитают в виде фиксированных к различным поверхностям микроколоний, состоящих из небольшого количества клеток, как правило, дочерних. После нескольких делений клетки в микроколониях находятся уже в несколько слоев. Этот период жизнедеятельности популяций микроорганизмов крайне сложен для изучения. С одной стороны здесь ограничена возможность наблюдения за отдельными определенными клетками, а с другой стороны количество клеток все еще незначительно, чтобы судить о свойствах, присущих колонии бактерий или грибов, в первую очередь о характерных морфологических или других важных таксономических признаках определенного вида микроорганизмов.

Обычно на плотной питательной среде исследуют либо развитие одиночных клеток, получая данные о поведении усредненной микробной клетки, а через массив информации от отдельных клеток формируют представление о поведении всей популяции (клеточно-популяционный подход), либо уже сформировавшихся колоний (популяционный подход). В последнее время микробиологи пытаются установить количественные закономерности роста колоний (Родин В.Б., Паников Н.С., 1998). Чаще всего для такого рода исследований используют бактериальные культуры, где отдельные клетки имеют примерно одинаковый размер и одну морфологическую форму. В ходе развития бактериальной популяции вследствие стохастичности протекания явлений клеточного цикла у отдельных клеток возникает гетерогенность клеток по различным свойствам, способствующая интенсификации адаптивных процессов популяции в изменяющихся условиях среды обитания. На начальном этапе формирования бактериальных колоний требуется обязательное применение специальных микрокультиваторов-камер, совместимых с микроскопом и, позволяющих регистрировать в динамике развитие отдельных клеток в поле зрения. Для изучения развития популяции клеток с использованием высокосильных иммерсионных объективов нами были разработаны собственные оригинальные конструкции микрокамер (А.с.№1339123, 1987: А.с.№ 1414868, 1988) и выполнена модификация широко известной камеры Пешкова (отр.рац.пред. 0-2893,1987 -см.Приложение).

Для изучения закономерностей формирования бактериальных популяций и для выбора наиболее информативных показателей, способных охарактеризовать этот процесс на клеточно-популяционном уровне, нами были выбраны специфические диссоциативные мутанты S.flexneri S и R форм из международного музея Simmons'a с известной генетически детерминированной антигенной структурой липополисахарида оболочки (клеточной стенки). В связи с тем, что получаемый объем первичной информации о морфологии клеток и дальнейшей реконструкции поведенческих реакций популяции в целом весьма значителен, то нами был разработан и использован в работе метод сигмум-морфометрии (определения начала-конца значимых параметров развития отдельных клеток).

В ходе предпринятого нами исследования (Глава 3), было установлено, что наиболее информативными показателями, способными характеризовать процесс адаптации и развития прокариотических клеток на этапе формирования микроколоний, являются - определение структурно-адаптивного показателя (Lk/L0) и времени генерации (т). Обнаруженная нами полимодальность распределений клеток по значению индекса Lk/L0 (Рис.3.3) и х (Рис.3.4), говорит в пользу того, что данные параметры являются весьма чувствительными к воздействиям внешней среды и могут характеризовать поведение клеток и в целом популяции в изменяющихся условиях среды обитания.

Динамическое наблюдение процесса формирования микроколонии бактерий на примере клеток шигелл, выполненное с помощью фазово-контрастного устройства МКУ-1, обнаруживает морфологическую и функциональную гетерогенность клеток, а также высокую степень зависимости управления процессом адаптации к питательной среде от аутофильтратов, выделяемых клетками в ходе их развития (см. Таблицы 3.7 - 3.10.).

Так, установлено, что фильтраты S.flexneri S различного возраста неблагоприятно влияют на клетки S.flexneri Rd уже в первом поколении - происходит увеличение их т и включение SOS-функции I порядка (Беляков В.Д. и др.,1987). Наблюдается тенденция к ингибированию роста клеток, судя по значениям показателя Lk/L0.

Данные Таблицы 3.10 в сопоставлении с Таблицей 3.3 и 3.4 свидетельствуют о том, что 3-х и 18-часовые фильтраты S.flexneri Rd неблагоприятно влияют на исходные клетки S.flexneri Rd (18-часовой инокулят): происходит увеличение их т, активизация SOS-функции первого порядка. Однако, во втором поколении происходит сокращение т клеток относительно контроля (Таблица 3.3).

При использовании клеток 3-часового инокулята S.flexneri Rd вновь обнаруживается активизация SOS-функции первого порядка и увеличение значений х, как в первом, так и во втором поколении клеток при воздействии фильтратов 3-х и 18-часовых культур S.flexneri Rd, что может быть расценено как неблагоприятное воздействие в целом.

В процессе исследования выявлены особенности в адаптивном поведении клеток S и R-формы S.flexneri, заключающиеся в том, что клетки второго поколения S.flexneri S, Rd (3-часовой инокулят) стимулируются в своем развитии независимо от возраста и штаммовой принадлежности фильтрата шигелл, в то время как для клеток R-формы наблюдается ингибирование развития клеток. При использовании 18-часового инокулята вновь во втором поколении клеток S.flexneri S обнаружено, что адаптивное поведение этих клеток отличается от поведения клеток S.flexneri Rd. Так, клетки S.flexneri S ингибируются в своем развитии, а клетки S.flexneri Rd стимулируются независимо от возраста и штаммовой принадлежности фильтратной добавки в среду культивирования.

Обнаружение разнознакового влияния ауторегуляторов на развитие первых поколений клеток различных штаммов свидетельствует о возможном наличии гуморального механизма управления диссоциативным процессом в популяции в неблагоприятных условиях, а это сказывается на взаимной укладке клеток в микроколонии и, очевидно, определяет в дальнейшем цитоархитектонику формирующейся макроколонии.

Практически все определяемые для отдельных клеток показатели, а впоследствии усредненные расчетные показатели развития популяции клеток не в состоянии быстро и эффективно охарактеризовать адаптационный процесс в популяции микроорганизмов из-за сложности и инерционности в получении исходных данных (выполнение цейтраферной фазово-контрастной микрокиносъемки, получении фотоотпечатков, а затем проведения по ним измерений). До настоящего времени в практике микробиологических исследований отсутствуют надежные компьютерные системы распознавания образов, программы для длительного слежения и последующего анализа и реконструкции поведенческих адаптивных реакций бактериальных популяций (прокариотов) на клеточно-популяционном уровне исследования, поэтому поиск новых показателей развития микробных популяций необходим.

Формирующаяся биопленка бактерий на поверхности питательной среды на ранних этапах, состоит из нескольких слоев клеток, которые располагаются плотно относительно друг друга. Прикрепившись, микроорганизмы продуцируют экзополисахаридный гликокаликс, обволакивающий микробную клетку и образующий биопленку, внутри которого происходит деление бактерий и осуществляется межклеточное взаимодействие. Здесь же присутствуют вещества, которые также образовались в ходе гибели клеток при автолитических процессах. Это межклеточное вещество, клеточная стенка самих бактерий обеспечивают надежную иммобилизацию клеток внутри образующейся колонии (Высоцкий В.В. и др., 1984). Межклеточная среда с течением времени претерпевает существенные изменения. Иногда здесь наблюдаются процессы, ведущие к образованию внутри колонии кристаллов-включений различных солей (Медведева С.Е., Пузырь А.П., Могильная О.А., 1991).

Исследование архитектоники бактериальной колонии, выполненные при сопоставлении данных, полученных с помощью различных методов исследования (световой микроскопии, сканирующей и трансмиссионной), как установлено в результате проведенных исследований (раздел 3.2)., не позволяют однозначно ответить на вопрос о воспроизводстве структуры бактериальной колонии. Клетки в колонии находятся на значительных расстояниях друг от друга, но в ряде случаев между ними устанавливаются тесные контакты. Происходит это без каких-либо закономерных повторений и, поэтому, говорить о чисто механической укладке вновь образовавшихся клеток в колонии нельзя. Наши исследования также вновь подтвердили, что в микроколонии присутствуют, по крайней мере, три физиологически различных группы (кластера) клеток -активно растущие и размножающиеся, покоящиеся, а также лизирующиеся клетки. Аналогичные кластеры клеток были обнаружены нами и в макроколониях при проведении экспериментов с использованием пенициллина (как вещества, избирательно воздействующего только на растущие клетки) и сканирующей электронной микроскопии. Наличие этих физиологически частично взаимопереходящих кластеров клеток еще более усложняет картину при изучении прокариотических микроорганизмов.

Для обнаружения механизмов характерной структуризации колонии, определяющей в дальнейшем ее морфологию, нами было высказано предположение, что внутри бактериальной колонии происходит активный диссоциативный процесс, который может накладывать отпечаток на формирование внешней морфологической текстуры колонии. В результате выполненных экспериментов установлено, что даже внутри одной бактериальной колонии генетического мутанта по антигенной структуре (Shigella flexneri S и R), регистрируется диссоциативный процесс (Табл. 3.11. и Рис.3.20).

Это может служить объяснением того факта, почему каждый раз исследователь, изучающий бактериальные колонии получает крайне большой разброс, а порой и несопоставимость полученных данных между собой при оценке других свойств клеток в колониях.

Кроме того, нами было определено, что определение Е,-потенциала клеток может служить достаточно быстрым и объективным методом определения степени диссоциации штаммов бактерий из состава одной колонии. В этом случае не нужно прибегать к оценке диссоциативной принадлежности другими способами, например, определения морфологии колонии в косопроходящем свете, который иногда дает ошибочные результаты и является значительно более инерционным, чем предложенный нами. Необходимость такого рода быстрого определения диссоциативной принадлежности клеток в составе колонии очевидна при выполнения селекционных мероприятий в генетических исследованиях.

Таким образом, ни на уровне микроколоний, ни на уровне колоний для прокариотических клеток невозможно однозначно характеризовать активность исследуемого вида, поскольку каждый раз мы имеем дело с «подобными» колониями в процессе развития исследуемого вида в конкретных условиях культивирования. Исторически сложилось так, что оценка адекватности питательной среды и условий культивирования для любого вида клеток (прокариотических или эукариотических) чаще проводится как простой подсчет колоний этого микроорганизма на плотной питательной среде, образовавшихся в ходе развития жизнеспособных клеток. Для подсчета жизнеспособных клеток в объеме жидкой питательной среды обычно прибегают к высеву на поверхность определенного объема микробной взвеси. Как известно, - это более точный метод подсчета по сравнению с другими, например, нефелометрическим или кондуктометрическим. Именно количество клеток (жизнеспособных клеток), подсчет по колониеобразующим единицам, является основной характеристикой развивающейся популяции. Здесь следует особо оговориться, что это не соответствует развитию микроорганизмов, способных размножаться спорообразованием, как, например, для процесса колонизации субстрата нитчатыми грибами. Сложность изучения эукариотических микроорганизмов уже отмечалась нами ранее (Глава 3, разд.3.3.). Образование на поверхности питательной среды единого пласта из переплетенных гифальных клеток ведет к тому, что достаточно быстро становится совершенно невозможно подсчитать количество клеток в популяции, не говоря уже о вопросе регистрации стимуляции или ингибирования развития клеток. Оценка мощности подобного мицелиального пласта клеток по плотности в баллах (Бухало А.С., 1988) также не является достаточно надежным показателем, в связи с тем, что в исследование привносится субъективный фактор оценки. Более того, даже при стабильных условиях роста в одной чашке Петри на поверхности питательной среды культура эукариотических клеток, как свидетельствуют экспериментальные данные, дает различный по мощности мицелиальный пласт с четко выраженной суточной периодичностью роста (Рис.3.21 .А.). Все это заставляет обратить особое внимание на установление ведущего параметра в жизни развивающейся микробной популяции, способного охарактеризовать образующуюся колонию эукариотических клеток.

Определение жизни в современной трактовке звучит следующим образом: «жизнь как агрессивная форма материи, стремящаяся превратить в саму себя окружающую среду» (Блохинцев Д.И., 1984). Двумя основными признаками этого процесса является воспроизводство биологической материи (т.е. другими словами увеличение ее количества) и как происходит захват среды обитания (питательной среды) конкретным видом. Если первое выражается для микробного объекта такой привычной характеристикой как количество клеток, то второе определяется как процесс колонизации, который может быть охарактеризован с разных сторон в зависимости от метода регистрации этого явления.

Jarvis V.R. (1996) дает определение термину «колонизация» -это присутствие микроорганизма в/или на организме хозяина с ростом и множеством других признаков, либо без каких-либо клинических проявлений или обнаружения в иммунном ответе хозяина. Это определение в целом подходит для характеристики системы взаимодействия «микроорганизм-хозяин», но не дает ответа на вопрос о степени соответствия жизненных потенций микроорганизма и определенных микроэкологических условий, сложившихся в данной экосистеме.

В микробиологии существует общепризнанное понятие колонизационной резистентности, как способности тканей организма противостоять микробной агрессии. Кроме того, издавна есть такие понятия для характеристики специфических биологических особенностей микробов как патогенность и вирулентность, которые вновь показывают заинтересованность человека в предопределении последствий взаимодействия между организмом теплокровного животного и микроорганизмом, виновником инфекционного процесса.

В этом и выражается некоторая заинтересованность человека -определить насколько конкретный микроорганизм может быть потенциально опасен для него как биологического вида. Конечно, это крайне важный аспект микробиологических исследований, но вопрос более полной характеристики для определенного вида микроорганизма может быть поставлен несколько шире - как этот микроорганизм способен освоить окружающую среду, т.е. осуществить процесс колонизации, выразив это в количественном выражении.

В связи с этим, в главе 3 (разд.3.3) теоретически предложен и обоснован новый микробиологический показатель - колонизационная активность. Колонизационная активность - это вероятная способность микроорганизмов закрепляться в структуре биоценозов определенной экосистемы, противодействуя негативным воздействиям абиотических факторов, других биологических агентов, дестабилизирующих потоки веществ, информации и энергии, свойственные данной экосистеме.

Одним из надежных способов определения количественной характеристики микробиологического процесса остается широко известное и давно используемое установление динамики изменения КОЕ и/или определения общего количества клеток микробов, что было положено в основу микробиологического мониторинга воздушной среды (Гарасько Е.В., 1999) или изучения автолиза микроорганизмов (Акайзин Э.С., 2000).

Показатель колонизационной активности (ПКА) определенного штамма микроорганизма дает большую информацию о возможности его адаптивного поведения в окружающих условиях среды обитания, чем разовое определение КОЕ. При установлении ПКА для микроорганизмов по сути выполняется сигмум-расчет конечно значимых величин (для прокариотических организмов - это чаще измерения КОЕ или измерения диаметров образованных колоний, а для эукариотов - измерения диаметров образованных колоний). Определение ПКА для многих штаммов внутри биоценоза может дать информацию о степени соответствия условий культивирования и направленности адаптационного процесса у этих штаммов.

В последующем (глава 4) был апробирован метод определения ПКА для различных микробных культур в сравнении с чувствительными методами, разработанными ранее (Методы исследования. ,1984), хорошо зарекомендовавшими себя в микробиологических исследованиях, как высокочувствительные методы оценки развития микробных популяций (прокариотов и эукариотов). Так, при использовании музейных штаммов бактерий E.coli, S.albus и Bacillus subtilis проведены измерения динамики окислительно-восстановительного потенциала (гН2) этих культур в процессе культивирования. Данные исследования показали, что динамика изменений параметра гН2 тесно сопряжена с изменением значений ПКА (Рис.4.2.). Это дает нам основание утверждать, что ПКА является также достаточно чувствительным методом исследования развивающейся бактериальной популяции. В ходе экспериментов было установлено, что при подсчете ПКА и определении гН2 развивающихся бактериальных культур, перелом кривой для ПКА наступает практически одновременно с введением ингибитора (как дестабилизатора «нормального развития микробной популяции) в состав питательной среды, а значение гН2 изменяется с некоторым опозданием.

Таким образом, определение ПКА может служить вполне адекватным методом оценки адаптивного поведения популяции, однако временная инертность этого метода не дает возможности использовать его в реальном масштабе времени для попыток управления развитием популяции микроорганизмов, но его можно применять тогда, когда требуется точно оценить степень влияния среды обитания на этот процесс. Данная серия экспериментов позволила оценить в ходе сопоставления кривых развития бактериальных популяций на основе ПКА и гН2, что сам метод ОВП может выступать в роли еще одного, но косвенного показателя колонизационной активности. Исследователи, использующие нефелометрию для оценки роста микробной популяции, прекрасно знают, что изменение оптической плотности среды не определяется полностью количеством жизнеспособных клеток в популяции, т.е. и этот метод также является косвенным для оценки развития бактериальной популяции.

Нами были выполнены серии экспериментов с сочетанным использованием косвенных методов оценки колонизационной активности: определение ОВП и нефелометрии - раздел 4.2. Установлено, что оба этих метода вполне адекватно характеризуют динамику процесса колонизации. Однако предоставить точную информацию о количественной характеристике физиологического состояния популяции в какой-либо определенный момент времени ее развития, а также об адаптивном потенциале популяции они не могут. Вместе с тем, использование метода определения ОВП с помощью редокс-индикаторов, как метода оценки различных доз ингибиторов дыхательных систем тест-бактерий, позволяет осуществить конструирование портативных, экономичных бактериальных тест-систем для ориентировочной оценки суммарной токсичности окружающей среды (почвы, воды, воздуха) в течение нескольких часов с момента забора материала на исследование. Эксперименты, предпринятые нами, показали большую перспективность работ в данном направлении, однако разработка микробных тест-систем, как конечная цель на уровне практического внедрения, не входила в круг задач настоящего исследования.

Сравнение работы всех трех методов исследования -определение ОВП, оптической плотности (нефелометрии) и колонизационной активности при внесении ингибиторов в среду обитания бактерий в ходе одного эксперимента (Рис.4.5) позволяют сказать, что наиболее оптимальным является применение метода определения колонизационной активности при какой-либо заключительной оценке влияния тестируемого фактора, а не в динамике воздействия последнего. Это связано с известной инертностью и трудоемкостью получения данных о жизнеспособности бактериальных клеток методом высева на плотные питательные среды и подсчета КОЕ.

Все вышеизложенное определило основные задачи последующих экспериментов. Необходимо было проверить в различных условиях окружающей среды область и границы возможного использования предложенного параметра для оценки адаптивного поведения микробных популяций. Для этого нами были предприняты эксперименты по оценке показателя колонизационной активности в трех средах - почва, вода, воздух (соответственно см. гл.4.3, 4.4, 4.5.).

Как отмечено выше включение в эксперименты по оценке колонизационной активности микрофлоры почвы анализа биоценоза почвы «закрытого грунта», определяется его функционирование как «упрощенного и стабильного» варианта существования фиксированного по видам микробов почвенного микробиоценоза. Знание микробиологических процессов и управление ими имеет особое значение в условиях защищенного грунта, поскольку наряду с полезными (мобилизация основных элементов питания при повышенных температуре и влажности, значительном количестве органического вещества и т.д.) наблюдаются и нежелательные явления, например резкое увеличение численности фитопатогенных микроорганизмов (Петров-Спиридонов А.А., Кубарева О.Г., 1996). Поэтому новые экспериментальные подходы могли бы дать и новую информацию о закономерностях развития сложных микробиоценозов почвы. Исследования были выполнены с параллельным использованием классических микробиологических методик - учета общего количества почвенных микроорганизмов и выделения I микроорганизмов из ризосферы растений по Теппер (1976) и выполнен микробиологического мониторинга за количеством микроорганизмов в ходе всего годового технологического цикла производства сельхозпродукции в совхозе «Тепличный».

В ходе выполнения мониторинга за динамикой общей численности почвенной микрофлоры в условиях закрытого грунта была установлена закономерная смена как количественного, так и качественного состава микроорганизмов в составе изучаемого микробиоценоза почвы.

Эффект термообработки почвы паром приводил к тому, что содержание бактерий на поверхности было меньше в 5,65 раза, чем в более глубоком горизонте почвы (4000+500 КОЕ/г и 22600+1800 КОЕ/г). Концентрация грибов на поверхности оказалась меньше в 2,38 раза, чем в более глубоком горизонте почвы (10500 ± 800 КОЕ/г и 25000 ± 1200 КОЕ/г соответственно). Практически любое выполненное агрономическое мероприятие, например, такое важное как высадка рассады, ведет к перераспределению микроорганизмов по горизонтам почвы, что сводит на «нулевую эффективность» весь дорогостоящий процесс пропаривания почвы и дополнительной обработки ее раствором формалина. В то же время полученные результаты (Табл. 4.2.) свидетельствуют о большой потенциальной способности микроорганизмов поверхностных слоев почвы к восстановлению биоценоза, что подтверждают кривые микробиологического мониторинга (Рис.4.6.), характеризующие динамику численности микроорганизмов из состава микробиоценоза почвы.

В ходе выполнения микробиологического мониторинга по изучению микробиоценоза почвы установлено, что микроорганизмы данного экотопа в большой степени метаболически зависимы от правильности и своевременности привнесения в почву химических удобрений (ом.Рис.4.7.). На примере доминантного по частоте встречаемости штамма - Bacillus sp. были проведены эксперименты по оценке метаболической активности микроорганизмов в отношении К+, Мд++ и Са++ по определению дзета-потенциала клеток. Ожидалось получение результатов об изменениях данного параметра и попытка его использования в качестве экспресс метода определения метаболического усвоения конкретной химической добавки по сравнению с контролем. Электрокинетические свойства бактерий измерялись амплитудно-частотным методом (см.Глава 3 и Приложение) у 100 единичных клеток. Распределение ЭФП бактерий представлено в таблице измерений (Таблица 4.4.). Изменения в электрокинетической подвижности клеток, обнаруженные в ходе этих экспериментов дают реальную основу к продолжению в дальнейшем работ по диагностике микробиоценоза почвы при агрохимической ее обработке с использованием дзета-потенциала клеток отдельных штаммов микроорганизмов.

При выполнении экспериментов, связанных с установлением количественного соотношения микроорганизмов в биоценозе почвы (гл.4.3) нами был обнаружен "парадокс разведений", когда наряду с уменьшением представительства бактерий в исследуемой пробе (Рис.4.8.) наблюдался факт резкого увеличения объема микотической доли (нитчатые грибы) в микробиоценозе почвенных образцов. Это играет большую роль в нормальном развитии растений закрытого грунта, поскольку очень часто первичные поражения растений в теплице начинаются именно с повреждения их корневой системы низшими грибами.

В ходе проведения микробиологического мониторинга нами был создан музей микроорганизмов, насчитывающий более 50 штаммов, относящихся к различным таксономическим группам. Особое значение среди этих микроорганизмов имели представители микрофлоры ризосферы «нормально» развивающихся (здоровых) культурных растений. Использование классических методов определения антагонизма (Рис.4.9.), и учета взаимного воздействия культур, позволило выявить 12 штаммов «значимых» в структуре микробиоценоза микроорганизмов.

Последующая оценка развития этих штаммов и значимости их в исследуемом биоценозе показало, что определение фактической значимости конкретного штамма в структуре ассоциативного микробиоценоза представляет собой сложную задачу, направленную на расшифровку иерархической структуры микробиоценоза. Существующие микробиологические методики не могут дать однозначного ответа на данный вопрос. Для попытки подхода к решению данной задачи были изучены ПКА 12 выделенных штаммов микроорганизмов и было установлено (Табл. 4.5.), что определение КОЕ и их динамики в пробах почвенных образцов не дает достаточной информации о структуре микробиоценоза. Определение ПКА значительно расширяет возможности трактовки полученных результатов. В данном случае удается устанавить иерархическую значимость каждого из исследуемых штаммов в микробиоценозе и, кроме того, становится возможным определение влияния проведенных агрохимических мероприятий как в целом, так и на отдельные его звенья (микроассоциации) внутри.

Исключение из состава ассоциации специально отобранных и протестированных по антагонистической активности 12-ти штаммов, какого-либо штамма бактерий с малыми значениями ПКА ведет к негативной реакции всего микробиоценоза и, особенно, ведущих штаммов - бактерий родов Bacillus и Pseudomonas. Это подтверждает правильный выбор штаммов с аддитивной активностью в развитии всего микробиоценоза. Полученные результаты позволили высказать предположение, что присутствие достаточного количества этих микроорганизмов в почве способно защитить растение от негативного пресса фитопатогенных микробов, их возможного развития (вспышки), способной привести культурное растение к гибели. На основе вышеуказанных штаммов был создан оригинальный биологически активный фитозащитный препарат (патент России №2170510, Б.И.№20 от 20.07.2001) под названием «Экофит». Дополнительные исследования показали, что штаммы из состава У препарата «Экофит» хорошо закрепляются в почвенном микробиоценозе и препятствуют возникновению корневых гнилей у культурных растений. Коррекция почвенного микробиоценоза путем внесения препарата «Экофит» предоставила возможность полностью отказаться от дорогостоящей технологической операции пропаривания грунта и последующей обработки раствором формалина. В течение нескольких лет были выполнены успешные промышленные испытания препарата «Экофит» на базе совхоза «Тепличный» (Ивановская область) с большим экономическим эффектом (см.Приложение).

Таким образом, использование метода определения ПКА в исследованиях почвенных биоценозов может предоставить в распоряжение исследователей дополнительную информацию о ® структуре микробиоценоза, взаимосвязях между определенными штаммами микроорганизмов, а также позволяет целенаправленно конструировать микробиоценозы для последующего использования по ^ типу известной в настоящее время технологии эффективных микроорганизмов (Higa, Т. 1991, Higa, Т. 1994, Higa, Т. and Wididana G.N., 1991а, Higa, Т. and Wididana G.N., 1991b).

Определение ПКА штаммов микроорганизмов с использованием фильтратных добавок в среду культивирования, как было описано Ф нами в начале этого раздела работы, дает возможность исследования ассоциаций микроорганизмов с расшифровкой иерархической структуры биоценоза, что является одной из самых сложных задач в современной микробиологии. В свою очередь «расшифровка» иерархической структуры микробиоценоза позволяет целенаправленно реконструировать/или конструировать оптимальные микробиоценозы для решения определенных задач.

Крайне интересным было решение вопроса о возможности использования метода определения ПКА для микроорганизмов в водной среде обитания (раздел 4.4). В качестве объектов ® исследования для данного раздела работы были использованы декретируемые культуры микроорганизмов-деструкторов текстильно-вспомогательных материалов - СОЖ и др.; Pleurotus ostreatus вешенка - промышленно используемый съедобный гриб) способный дать мицелиальный рост на поверхности агаризованной питательной среды (п.4.4.1.); культуры E.coli М-17, St.aureus (п.4.4.2.). В качестве фактора дестабилизирующего развитие популяций микроорганизмов -различного рода химические и физические воздействия (раздел 4.4).

При определении колонизационной активности гриба Вешенка (раздел 4.3.) при его культивировании на плотной питательной среде методом посева подобных колоний (глава 2). На основании данных ПКА установлено, что янтарная кислота в выбранных концентрациях не оказывает влияния на развитие мицелия гриба Вешенка штамма Флорида.

Сравнение величин ПКА по Таблице 4.7. для двух параллельно выполненных экспериментов по оценке влияния солей калия (KNO3 -0.2 и 0,3 г/л) и глюкозы (1 %,2%,3%)говорит об общем уменьшении ПКА произошедшем под влиянием еще одного неучтенного фактора, который одинаково снижает ПКА в эксперименте и контроле. Кроме того, в пользу данного предположения служит факт о различиях данных ПКА в контроле в различных экспериментах Табл.4.7. относительно данных Табл.4.6. для того же штамма в одинаковых условиях проведения эксперимента. Таким образом, оценка развития штамма Вешенки по динамике ПКА (увеличение диаметра колонии) не позволяет определить степень активизации развития изучаемого штамма на каком-либо определенном временном этапе.

Таким образом, можно констатировать, что определение колонизационной активности (ПКА) для мицелиальных микроорганизмов на плотной питательной среде, позволяет получить дополнительную информацию, которая при обычном расчете статистических средних может быть пропущена.

Результаты, полученные в ходе оценки ингибирующего действия консервантов ТВВ по грибо-и бактериостойкости, позволили установить (Табл.4.8.), что определение ПКА для микроорганизмов на плотной питательной среде, дает возможность быстро сориентироваться среди большого количества экспериментальных статистических данных, выделив наиболее оптимальные для последующего промышленного использования.

В ходе выполнения раздела работы 4.4.2. нами совместно с сотрудниками ИГХТУ разработан патент России (№2135500 Б.И.№24, 27.08.1999) на вещество, обладающее бактериостатическим действием в отношении E.coli и Staphylococcus (см.Приложение).

При изучении влияния различных физических воздействий на водные суспензии микроорганизмов по ПКА использован разработанный способ газоразрядной плазменной обработки (раздел 4.4.3.) в режиме тлеющего и диафрагменного разряда. В качестве тест-культур нами были взяты суточные культуры E.coli М-17 и S.aureus в концентрациях от 104 до 107, способных давать гомогенную взвесь в водных растворах электролита (NaCI - 2 г/л). Первоначальную оценку колонизационной активности проводили по изменению КОЕ, как в процессе обработки, так и при определении наличия последействия. Было определено, что разные режимы обработки обеспечивают различное время достижения стерильности. Так, если при обработке раствора, содержащего клетки E.coli М-17, тлеющим газовым разрядом время стерилизации составляет 15 - 30 минут, то при воздействии диафрагменного разряда, требующего значительно меньших энергетических затрат, полная стерильность достигается быстрее, а именно, в течение 3-12 минут (Рис.4.10.).

Экспериментально доказан факт, что эффект стерилизации обязан своим возникновением именно генерированию газового разряда в растворе, а не сопутствующему этому процессу электролизу. Для этого через контаминированный микроорганизмами раствор пропускался электрический ток той же силы, что и в случае генерирования разряда, но плотность тока в диафрагме была недостаточна для его зажигания. Такая постановка эксперимента приводила к тому, что исходное содержание микробных клеток в растворе не менялось, т.е. эффекта стерилизации не наблюдалось.

В ходе экспериментов с использованием диафрагменного разряда переменного тока обнаружен эффект последействия растворов, подвергнутых газоразрядной активации, в отношении их стерилизующих способностей. Так, было зарегистрировано сохранение наведенного эффекта бактерицидного действия, существовавшего в течение нескольких дней. Крайне интересным, на наш взгляд, является обнаруженное повышение жизнеспособности бактериальных клеток в процессе воздействия в режимах газоразрядной активизации (Рис.4.11.; 4.12) и после нее (Рис.4.17. и 4.18.). Полученные результаты ставят вопрос о том, какие химические вещества, образующиеся в ходе газоразрядной обработки водной среды, позволяют повысить жизнеспособность прокариотических тест-культур, как протекают в этом случае репаративные процессы в клетках, которые требуют последующего изучения.

Обработка водных растворов, содержащих микробные клетки, для достижения эффекта полной стерилизации требовала оценки колонизационной активности в динамике, где одним из главных параметров был временной фактор. В отдельном эксперименте с культурой E.coli проведено сравнение данных по КОЕ и ПКА в динамике изменений (Рис.4.19.). Данные этого эксперимента показали, что динамика изменений параметра ПКА подвержена большим изменениям, чем значения КОЕ в определенных временных срезах. На наш взгляд, это свидетельствует о большей чувствительности метода определения колонизационной активности ПКА, чем общепринятый метод оценки жизнеспособности по динамическому определению КОЕ под воздействием какого-либо фактора.

В ходе выполнения настоящего раздела работы был создан патент «Способ стерилизации» (Патент № 2195961 РФ, 2003).

В разделе 4.5. настоящей главы были предприняты эксперименты по определению ПКА для воздушной среды как при экологических исследованиях внешней среды, так и в закрытых помещениях различного типа. Выполненные эксперименты по разделам 4.5.1. и 4.5.2. показали, что состояние микрофлоры воздуха в большой степени зависят от конвективных потоков воздуха и наличия микрофлоры в начальных точках этих потоков. Значения ПКА всецело зависят от исходной концентрации микроорганизмов и их способности переноситься воздушными массами, что не определяет полностью способность микроорганизмов к равномерному распространению в окружающей среде. В то же время исследования по определению ПКА для воздушной среды (раздел 4.5.3.) показали ограниченность этого метода. При проведении ионизации воздушной среды следует констатировать факт увеличения высеваемости микроорганизмов в воздухе рабочей зоны. Однако, в условиях постоянного фонового технологического пополнения микроорганизмами воздушной среды на текстильных предприятиях (за счет технологических особенностей переработки сырья) этот процесс можно расценивать как негативный и заключить, что ионизация как метод очистки воздушной среды неприемлем, а уровень микробного загрязнения воздушной среды во многом зависит от степени чистоты перерабатываемого сырья.

Однако в целом, можно заключить, что установление ПКА позволяет определить иерархическую структуру видов в микробиоценозе при изучаемом способе обработки воздушной среды -процессе электризации, но вместе с тем следует отметить установление ПКА в динамике для оценки электризации воздушной среды даже усложняет представление динамики картины изменения высеваемости микроорганизмов по КОЕ.

При этом определение ПКА относительно контрольных данных в воздушной среде практически не дает новой информации. В этом случае проще и лучше осуществлять простой мониторинг за концентрацией микроорганизмов в воздухе по КОЕ и оценивать воздействие какого-либо фактора на микрофлору воздуха (в нашем случае - электризации) как результирующий эффект относительно всех контрольных замеров концентрации микроорганизмов, т.е. создание и сравнение графических кривых при микробиологическом мониторинге (Рис.4.22.).

В ходе выполнения данного раздела работы при сопоставительных исследованиях оценки влияния методов ионизации и озонирования на обрабатываемое сырье в воздушной среде нами был разработан способ микробиологической очистки воздушной среды производственных помещений текстильных предприятий (А.С.№ 1762936, Б.И., N 35, 1992 см. Приложение).

Учитывая результаты всех экспериментов по определению ПКА в воздушной среде (раздел 4.5.) следует признать, что определение ПКА не дает полной ясности о процессах, происходящих в этой среде. Простое определение КОЕ в данной среде может оказаться более предпочтительным и простым, а осуществленное в динамике, т.е. как микробиологический мониторинг, способно оперативно осуществлять контроль за состоянием окружающей среды.

Таким образом, в целом нами в главе 4 было установлено, что в ряде случаев определение показателя колонизационной активности дополняет и расширяет представления о возможности конкретного вида микроорганизмов внутри исследуемого экотопа, позволяя в ряде случаев даже расшифровать его иерархическую значимость внутри микробиоценоза для исследований в почве и воде. Определение и оценка ПКА в воздушной среде, имеет существенные ограничения из-за транзиторного нахождения микроорганизмов в данной среде, и позволяет определить иерархическую структурированность микробиоценоза, что недоступно для других методов исследования.

При рассмотрении вопросов, связанных с медико-экологическими аспектами колонизационной активности микроорганизмов (глава 5) проведен ряд экспериментов по оценке колонизационной активности различных представителей микрофлоры человека. Среди микроорганизмов человека исследовали: E.coli (различные штаммы, в том числе и энтеропатогенный E.coli 0-114), Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Candida albicans, Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp. Одной из главных микроэкологических ниш в организме человека, где встречаются все вышеуказанные штаммы микроорганизмов, является кишечник. В разделе работы 5.1. нами было определено влияние пектина на колонизационную активность микроорганизмов постоянных обитателей желудочно-кишечного тракта человека. Причины выбора пектина, как воздействующего фактора, обоснованы нами в указанном разделе. В ходе выполнения экспериментов были использованы специальные питательные среды в том числе и разработанная нами для лактобактерий см.Приложение) для выбранных штаммов микроорганизмов. Полученные результаты представлены в Таблице 5.1.1. наибольшее влияние пектина регистрируется для анаэробов - бифидо- и лактобактерий. Так, ПКА для лактобактерий при использовании добавки пектина в среду культивирования 5% по сравнению с 0,1% составил 0,836 (7,2±1,7*106 и 1,05±0,01*106 КОЕ/мл), а ПКА бифидобактерий в концентрации 4-5% пектина в среде относительно контроля - 2,000. В тоже время другие микроорганизмы реагировали на пектиновую добавку в меньшей степени, но вновь при концентрации 5% обнаруживается полное ингибирование развития штаммов Staphylococcus sp. и Candida sp. При добавке пектина в концентрациях более 5% очевидно изменяются физико-химические свойства среды культивирования, что сказывается на постепенном уменьшении КОЕ/мл в случае культивирования E.coli и Str.faecalis. Показано, что расчет ПКА относительно контроля при добавлении определенных концентраций пектина в среду культивирования (Таблица 5.1,2.) упрощает нахождение значимых концентраций пектина для развития отдельных штаммов микроорганизмов, давая одновременно возможность также сравнить степень стимуляции или ингибирования их колонизационной активности, что при простом сравнении полученных результатов по КОЕ представляется затруднительным.

При определении колонизационной активности штаммов в процессе разработки нового оздоровительного напитка "Лактис" (фирма "Кумир" г. Иваново) подсчет средних значений показателя колонизационной активности (ПКА) в ассоциативной популяции молочнокислых стрептококков (Streptococcus lactis, Streptococcus cremoris, Streptococcus diacetilactis) позволил зарегистрировать тенденцию к незначительному ингибированию развития клеток культуры напитка "Лактис" при добавке в состав среды культивирования крахмала (раздел 5.2.). Крахмал был использован с двойной целью: как связующий компонент в составе напитка для получения молочного сгустка и, как компонент, повышающий адгезивные способности молочно-кислых бактерий, что улучшает лечебные свойства напитка «Лактис». Это было подтверждено независимыми клиническими испытаниями указанного препарата (см.Приложение). Таким образом, установление значений ПКА оказывается весьма эффективным инструментом при определении возможного действия каких-либо новых компонентов в составе питательных сред при развитии ассоциативных микробиоценозов.

Микробиоценозы организма человека являют собой сложные ассоциативные иерархические системы, развивающиеся и функционирующие по вероятностным (стохастическим) законам. Здесь встречаются как прокариотические микроорганизмы, так могут быть обнаружены и эукариотические представители, которые в ряде случаев могут вступать в антагонистические отношения. В качестве модельных объектов для этого раздела исследования выбраны следующие характеристические штаммы микроорганизмов из состава микрофлоры тела человека: Candida albicans, Escherichia coli, Staphylococcus aureus, Streptococcus faecalis, Lactobacillus sp., Bifidobacterium sp. В качестве дестабилизирующего фактора использовано биологическое производное - сок высшего гриба Шиитаке. В последнее время все более пристальное внимание человек обращает на растения, а именно: на грибы класса Basidiomycetes и их биологически активные компоненты (Stamets Р., 1993), получаемые чаще всего путем экстрагирования активных веществ из этих грибов. Нами в доступной литературе не было обнаружено сообщений относительно реакции микрофлоры тела человека на компоненты нативного сока грибов Шиитаке, т.е. чистых «живых» природных веществ, а не экстрагентов, с измененной химической структурой, полученных при использовании каких-либо дополнительных химических реактивов. Для получения нативного сока гриба Шиитаке (Lentinus edodes) разработаны патенты России касающиеся возможности получения плодовых тел гриба Шиитаке (см.Глава 2, Глава 5 и Приложение). Данные патенты возможно применить для широкомасштабного производства любых съедобных грибов как пищевых продуктов или в качестве сырья для фармакологической промышленности, что позволяет сделать вывод об их высокой экономической значимости

Эксперименты по оценке антимикотической и антибактериальной активности сока гриба Шиитаке (раздел 5.3.) выполнены с применением как классических методов исследований, так и путем определения показателя колонизационной активности (ПКА). При этом в качестве действующего начала использовался сок от двух генераций грибов Шиитаке - первой и второй волны плодоношения с блоков субстрата. В экспериментах использовали нативный сок и сок, подвергнутый термической обработке при 90°С в течение 20 минут (с целью дополнительного или альтернативного фильтрации способа стерилизации и возможности его длительного хранения).

Первоначально была выполнена оценка антимикотического ® действия сока гриба Шиитаке, в ходе которой использованы штаммы дикие» штаммы Candida albicans, выделенные от больных с кандидозным вагинитом. Определено, что сок гриба Шиитаке при внесении на плотную или в жидкую питательную среду питательную среду (Рис.5.2, и Рис.5.3.), а так же при отсутствии питательной среды (при инкубации в растворе сока гриба Шиитаке) оказывал выраженное ингибирующее влияние на развитие дрожжеподобного гриба Candida albicans. Это было подтверждено данными экспериментов по оценке Ф развития микроколоний в стационарной микрокамере после контакта с веществами, содержащимися в соке гриба Шиитаке. К сожалению невозможно точно сказать за счет каких механизмов происходит ингибирование, а именно: как следствие уменьшения числа клеток, способных к делению, в результате блокировки механизмов деления, или(и) увеличения времени генерации клеток с возможным переходом в покоящиеся формы (Епифанова О.И., Терских В.В., Полуновский ' Н В.А.,1983, Dow C.S., Whittenbury R., Сагг N.G., 1983). Было также обнаружено, (Табл. 5.3.1.), что сок от первой генерации грибов оказывает достоверно большее подавляющее влияние на ® колонизационную активность Candida albicans, чем сок от второй генерации грибов, что свидетельствует о большей биологической значимости и активности первой волны грибов.

При оценке колониеобразующей способности Candida albicans в зависимости от времени инкубации в растворе 0,9 % хлорида натрия с добавлением сока гриба Шиитаке в концентрации 2,5% - 10% от объема физиологического раствора в экспериментах in vitro обнаружено, что нативный сок гриба Шиитаке в 5% концентрации (при внесении в жидкую и на плотную питательную среду) оказывал ингибирующее влияние на колониеобразующую активность Candida albicans. Данные, представленные в Таблице 5.3.4., свидетельствуют о том, что минимальная фунгицидная концентрация сока при отсутствии питательной среды составляла 10% от объема физиологического раствора. Дополнительный 12-ти часовой контроль показал полное отсутствие роста колоний Candida albicans и через 48 часов инкубации (Рис. 5.6).

Большой интерес представляет обнаруженный факт, что термически обработанный сок гриба Шиитаке при внесении в жидкую питательную среду в концентрации 5% не оказывал влияния на рост Candida albicans. Минимальная ингибирующая концентрация раствора термически обработанного сока гриба Шиитаке для Candida albicans в данном случае составила 50%.

После обнаружения выраженного ингибирующего действия биологически активных компонентов, содержащихся в соке гриба Шиитаке, на колонизационную активность Candida albicans проведена оценка антибактериального действия веществ сока Шиитаке.

При этом оценивая колонизационную активность по расчетному показателю - ПКА можно констатировать факт ингибирования нативным соком гриба Шиитаке (Lentinus edodes) для всех исследованных штаммов бактерий - E.coli, Staphylococcus aureus, Str.faecalis (Таблица 5.4.1.). В результате данного исследования, было обнаружено ингибирующее действие на колонизационную активность исследованных штаммов бактерий, причем наиболее выраженное ингибирующее действие проявлялось в отношении грамположительной микрофлоры при изучении воздействия сока первой волны грибов (Табл.5.4.1.). В тоже время сок, полученный от второй волны грибов (Табл.5.4.2.) в отношении грамотрицательной микрофлоры (на примере E.coli 0-114) оказывал активность лишь с сохранением тенденций ингибирования. Установлена возможность избирательного ингибирования культур микроорганизмов под воздействием компонентов сока (на примере S.faecalis) при сравнении экспериментальных данных Таблиц 5.4.1. и 5.4.2. При анализе средних значений КОЕ и ПКА исследованных штаммов бактерий наблюдается тенденции к ингибированию культур этих микроорганизмов под влиянием сока Шиитаке, но при этом анализ ПКА дает несколько больше информации. Например, совпадение степени ингибирования грамположительных кокковых микроорганизмов (Staphylococcus и Streptococcus), судя по значениям показателя колонизационной активности (Таблица 5.4.1.), может свидетельствовать в пользу существования единого ингибирующего комплекса для данной группы микроорганизмов, который содержится в соке первой волны плодовых тел гриба Lentinus edodes. Однако сок второй волны грибов уже не обладает таким влиянием на S.aureus, но для S.faecalis при этом обнаруживается избирательное ингибирование. Возможным объяснением причин этого, на наш взгляд, является то, что в соке первой волны содержится в процентном отношении больше белковых компонентов, чем полисахаридов. При получении же сока второй волны данных компонентов становится меньше, а полисахаридов больше, и именно эти полисахаридные комплексы оказывают на клетки S.faecalis избирательное ингибирующее действие.

Обнаружение возможного избирательного действия компонентов содержащихся в нативном соке Шиитаке на отдельные бактериальные штаммы побудило повторить эксперименты в отношении бактериальных штаммов, которые наиболее часто используются в лечебной практике для коррекции различных дисбиотических состояний кишечника: E.coli М-17, Bifidobacterium sp., и Lactobacterium sp. При внесении сока Шиитаке на поверхность МПА наблюдалось достоверное увеличение числа КОЕ для E.coli М-17, независимо от использованного разведения культуры E.coli 10"8 и 10" 6 (р<0,005, р<0,001, соответственно). Причем наблюдается усиление к колонизационной активности E.coli М-17 с уменьшением степени разведения (Табл.5.4.3.) . В отношении анаэробных микроорганизмов - Bifidobacterium sp., и Lactobacterium sp. получены результаты (Таблица 5.4.4.), которые свидетельствуют о наступлении ингибирующего действия компонентов сока Шиитаке для Lactobacterium spp., оцениваемое по отсутствию видимого роста бактерий в среде, при содержании более 7% сока от объема питательной среды. Концентрация сока 10% и выше приводила к угнетению роста лактобактерий и бифидобактерий. Однако присутствие больших концентраций сока в среде культивирования не вызывало гибели клеток указанных выше анаэробных бактерий.

Сравнение данных по сводной Таблице 5.4.5. вновь показывают избирательность действия компонентов сока в отношении различных ф культур и штаммов микроорганизмов, даже внутри одного рода (данные со штаммами E.coli М-17 и E.coli 0-114), что было установлено нами впервые. Основываясь на данных многочисленных ^ повторных экспериментов, которые неизменно показывали подобный результат, нами был разработан «Способ получения препарата эубиотика колибактерин» (Патент России №2174842, Б.И. №29 от 20.10.2001, см.Приложение).

Таким образом, установление ПКА для оценки развития микроорганизмов (как эукариотов, так и прокариотов) из состава микрофлоры тела человека приемлем как метод исследования, особенно в случаях оценки развития ассоциативных биоценозов и определения степени влияния исследуемого биологического фактора на отдельные штаммы микроорганизмов.

Выполненные нами микробиологические исследования, касающиеся развития различных популяций прокариотов и эукариотов, У: показали всю сложность оценки данного процесса на клеточном и популяционном уровнях. Каждый используемый метод позволяет установить только частично процесс формирования популяции, и Ф каждый метод имеет свои ограничения и возможности. Предложенный нами метод оценки колонизационной активности микроорганизмов по ПКА также обладает такого рода характеристиками. Достоинством Аметода является его достаточная простота выполнения (как практическая, так и его математического аппарата). Определенный показатель колонизационной активности представляет собой одну безразмерную цифру, которую правомочно сопоставлять и для различных штаммов микроорганизмов и для разнесенных по времени экспериментов.

Установление ПКА возможно практически во всех средах - почве, воде, воздухе. Естественно определение ПКА имеет свои особенности практического исполнения в указанных выше средах. Так, лишь только для воздушной среды нами были установлены некоторые ограничения по его использованию, особенно в экспериментах динамического плана, типа микробиологического мониторинга. Определение ПКА в почве и воде (Глава 4) позволяет установить иерархическую структуру микробиоценоза, что делает этот метод практически незаменимым при проведении экологических исследований, например для реконструкции и коррекции различных микробиоценозов в окружающей среде (что было успешно выполнено в практическом промышленном эксперименте в совхозе «Тепличный»). Таким образом, для всех этих исследованных сред установлено, что определение ПКА в ряде случаев позволяет получить несколько больше информации, чем простое установление КОЕ для отдельных штаммов микроорганизмов, даже выполненное в динамике.

Все вышесказанное подходит не только для крупных экологических экспериментов с микробиоценозами окружающей среды, но и для микроэкологических исследований со штаммами микроорганизмов, которые обитают на/или в организме человека (см. данные Главы 5). Данный метод может быть использован как при оценке взаимодействия различных штаммов, так и при разработке новых препаратов для коррекции различных дисбиотических состояний микрофлоры тела человека или теплокровных животных.

Таким образом, предлагаемый нами метод определения колонизационной активности позволяет оценивать степень соответствия биологических возможностей конкретного штамма микроорганизмов при его обитании в изучаемых условиях культивирования. Сопоставляя полученные данные по ПКА между собой, можно определять микроэволюционного лидера в изучаемой экосистеме. Оценка колонизационной активности как метода, характеризующего особенности развития конкретного штамма микроорганизмов на питательных средах, может быть использована в различных областях микробиологии, что показывает его достаточно высокую чувствительность и функциональность.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Кузнецов, Олег Ювенальевич, 2005 год

1. Андрианова Ю.Е., Бакуридзе Ц.Л., Яргунов В.Г., Жуков И.В., Винтер В.И. Влияние янтарной кислоты на рост картофеля, раувольфии и женьшеня in vitro // Приклад. биохим. микробиология.- 1998.-Т.34, № 4.-С. 435-438.

2. Акайзин Э.С. Управляемая дезинтеграция популяций энтеробактерий (биологические, медицинские и экологические аспекты) // Автореф.докт.диссерт.на соиск. ученой степ. Д.м.н.-М.2000, 35с.

3. Акимов И.Г. Пектиновые вещества и их характеристика: Сб.науч.тр. Ивановского гос.мед.инст. Иваново 1957; 13: 65-72.

4. Аксенова Е.И., Идрисова Н.Х., Бакаева Е.Н. Способ определения токсичности водной среды. А.С. N 1698757 СССР, Опубл. в Б.И. N 46, 1991.

5. Аристовская Т.В., Владимирская М.Е., Голлербах М.М. и др. Большой практикум по микробиологии. -М.:Высшая школа,1962.-285с.

6. Аристовская Т.В., Чугунова М.В. Способ определения биологической активности почвы. А.С. N 1458390 СССР, Опубл. в Б.И. N 6,1989.

7. Андреев B.C., Попов В.Г., Дронова Н.В. Электробиохимический механизм регуляции физиологической деятельности микроорганизмов на популяционном уровне // Биотехнология.-1988. -Т.4, № 1. -С.32-36.

8. Антощина М.М., ИвановаТ.И., Рябченко В.И., Шеметов В.Ю., Эршестова Л.С. Способ определения токсичности водной среды. А.С. N 1748060 СССР, Опубл.в Б.И. N 26, 1992.

9. Бабусенко Е.С., Эль-Регистан Г.И., Градова Н.Б. Динамика ауторегуляторных факторов dl и d2 в периодической культуре Methylococcus capsulatus // Биотехнология.-1991 .-N 57-С.26-28.

10. Бакулин Н.Д., Первушкин С.В., Тумаков С.А., Шаталаев И.Ф. Способ определения токсичности промышленных сточных вод. А.С. N 1622400 СССР, Опубл. в Б.И. N 3, 1991.

11. Балаян А.Э., Стом Д.И., Казаринова Т.Ф. Способ биоиндикации токсичности сточных вод. A.C.N 1578650 СССР, Опубл.в Б.И. N 26,1990.

12. Балаян А.Э., Стом Д.И., Черных В.И., Маслова В.В. Способ оценки токсичности водных сред. А.С. N 655203 СССР, Опубл. в Б.И. N16, 1992.

13. Барановский А.Э., Кудокоцев В.П. Способ определения токсичности водной среды. А.С. 1822976 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1991.

14. Барихин С.Я., Ткаченко А.Г., Пшеничнов Р.А., Колотов В.М. Стимулирующая добавка к синтетической питательной среде длякультивирования микроорганизмов. А.с.№491691, опубл.Б.И.,№ 42, 1975

15. Бахир В.М. Теоретические аспекты электрохимической активации // Тезисы докл. II Международный конгресс «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности», М.: 1999г., с.39-49.

16. Бегма А.А., Власенко В.В., Пеньков Ф.М., Паничев А.Г., Мацкивский В.И. Способ определения токсического воздействия химических веществ, содержащихся в водной среде, на культуру планктонных гидробионтов. А.С. N 1688161 СССР, Опубл. в Б.И. N 40,1991.

17. Беляков В.Д., Голубев Д.Б., Каминский Г.Д., Тец В.В. Саморегуляция паразитарных систем.-М.:Медицина, 1987.-240с.

18. Блохинцев Д.И. Размышление об эволюции. // Ж.»Техника молодежи», 1984, №9, с.36.

19. Болога М.К., Литинский Г.А. Электроантисептирование в пищевой промышленности. Кишинев, «ШТИИНЦА», 1988, 181стр.

20. Бродская К.С. . Некоторые явления в жидкостях под действием импульсных разрядов //Ж. «Электронная обработка материалов», 1971, №1, с.39-44.

21. Бретон Р.А., Руденко Л.А и др. Влияние предварительного электроискрового разряда на стерилизацию сточных вод // Ж. «Электронная обработка материалов», 1971, №3, с.79-81.

22. Бухарин О.В., Усвяцов Б.Я., Дерябин Д.Г., Керашева С.И. Способ определения фагочувствительности микроорганизмов. A.C.N 1409661 СССР, Опубл. в Б.И. N 26, 1988.

23. Бухарин О.В. Персистенция патогенных бактерий. -М.: Медицина,1999, 336 с.

24. Бухало А.С. Высшие съедобные базидиомицеты в чистой культуре. -Киев: Наукова Думка, 1988, 143 с.

25. Вайсман И.Ш. Предпосылки комплексной оценки физиологического состояния бактерий и их популяций // ЖМЭИ.-1984.-№ 4.-С.3-8.

26. Вайсман И.Ш., Сазонова Л.А. К оценке особенностей развития внутривидовых популяций микроорганизмов на основе принципа оптимального фенотипа // Экология.-1973.-№ 1.-С.12-22.

27. Вахитов Т.Я., Алексин Л.М., Ососкова Л.И. Роль внутрипопуляционных факторов на стадии отмирания E.coli II Управл. культивирование микроорганизмов:Тез. докл. Всес. конф. -Пущино, 1986. -С.55-56.

28. Веркман К., Вильсон П. Физиология бактерий. -М.:-1964, 544 С.

29. Воскун С.Е., Смирнов С.Г. Морфологические особенности фаголизиса S и R -форм Sh.flexneri. // ЖМЭИ.-1983.-№2.-С.40-44.

30. Воскун С.Е., Смирнов С.Г. Структура популяции Shigella flexneri в процессе формирования микроколоний // ЖМЭИ.-1984.-С.29-31.

31. Воскун С.Е. Генотипические и фенотипические особенности поведения клеток энтеробактерий на плотной питательной среде // Физико-химические исследования патогенных энтеробактерий в процессе культивирования, Иваново, Иван.Гос.Мед.Инст., 1985.-С.33-39.

32. Воскун С.Е., Кузнецов О.Ю., Смирнов С.Г. Гетерогенность клеток шигелл Флекснера в процессе избирательной синхронизации //ЖМЭИ,1987, N12, с.20-22.

33. Воскун С.Е., Смирнов С.Г., Панова Л.А. Особенности поведения S-и R- мутантов Salmonella minessota на агаризованных питательных средах // ВИНИТИ, Деп.22.07.88, №5865-И88, 33с. Труды Всес. Семинара НТО РЭС им. А.С.Попова, Иваново, 1988.

34. Вострокнутова Г.Н., Капрельянц А.С., Светличный В.А. и др. Мембраноактивные свойства препарата из культуральной жидкостибактерий, обладающий ауторегуляторным действием // Прикл.биохимия и микробиология.-1983.-Т.19.-С.547-551.

35. Высоцкий В.В. Ультраструктура бруцелл. Сообщение III.Ультраструктура S-клеток // ЖМЭИ.-1965.-№11 ,-с.З-б.

36. Высоцкий В.В., Курдина С.Д., Островская Н.Н. Ультраструктура бруцелл. Сообщение 2: Ультраструктура R-клеток // ЖМЭИ,1 967,№3, с.19-21.

37. Высоцкий В.В. Гетероморфизм коринебактрий. Сообщение II. Микроклетки // ЖМЭИ.-1979.-№4.-с.75-78.

38. Высоцкий В.В., Смирнова-Мутушева М.А., Ефимова О.Г., Бакулина Н.А. Влияние пенициллина и среды обитания в организме бактерионосителей на межклеточные связи популяций менингококка и коклюшного микроба // Антибиотики.-1983.-№4.-С.271-278.

39. Высоцкий В.В., Вайсман И. Ill , Ефимова О. Г. Чемурзиева JL R Криофрактографическое изучение межклеточных связей в популяциях агаровыхкультур Bordetella pertussis // ЖМЭИ. -1985. -№9. -С. 54-60

40. Гарасько Е.В., Азимов Р.К., Плешков А.Б. Исследование микробной загрязненности воздуха производственных помещений хлопкоочистительных заводов // Безопасность и гигиена труда. -Сб.науч.работ инст.охраны труда ВЦСПС.-М.:Профиздат.- 1985.-С.47-50.

41. Гарасько Е.В., Силантьев В.В. О борьбе с микробной загрязненностью воздуха производственных помещений // Научные и практические проблемы охраны труда.-Тезисыдокл .Всес.конф.-М.-1988.-С. 101 -102.

42. Гарасько Е.В. Влияние искусственной ионизации и озонирования воздуха на показатели неспецифической иммунологической реактивности организма у текстильщиц // Тез. докл. юбил. науч. конф. И В ГУ. Ива но во.-1994.-С. 208.

43. Гарасько Е.В. Микробиоценоз производственных помещений и микроэкологические аспекты микробной контаминации. // Автореф.на соиск. Уч.ст. Доктора мед. Наук. -М.-1999, 35с.

44. Гашинский В.В., Войцеховский В.Г. Камера для вивчения розвитку бактерий пiд контролем мкроскопа у змшюванному середовиищ // М1кробюл.ж.-1 977.-Т.39.-С.231-234.

45. Герхард Ф. Методы общей бактериологии. -М.:Мир, 1983. -Т.2.-3/Т. 1 -53 6 с.-Т. 2-47 0 с. Т. 3-2 64 с.

46. Голдаев B.C. Обеззараживание жидких материалов высоковольтными разрядами // Ж. «Электронная обработка материалов», 1994, №2 (176), с.70-72.

47. Голуб Е.И., Решетникова В.Н. Факторы, стимулирующие клеточное деление у бактерий Escherichia coli // Докл.АН СССР.-1969.Т.185.-С.693-686.

48. Голуб Е.И., Решетникова В.Н. Факторы, стимулирующие клеточное деление у бактерий Escherichia coli // Докл.АН СССР.-1969.Т.185.-С.693-686.

49. Гудзенко Т.В. Способ определения токсичности растворов загрязняющих веществ и сточных вод. А.С. №866470 СССР Опубл. в Б.И. 33/18,1981.

50. Гороховский Ю.Н., Баранова В.П. Свойства черно-белых фотографических пленок. -М.:Наука, 1970.-388с.

51. ГОСТ 9.085-78 Жидкости смазочно-охлаждающие. Методы испытаний на биостойкость. ГК СССР по стандартам. Москва

52. ГОСТ 9.048-89. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов. Изделия технические. ГК СССР по стандартам. Москва.

53. ГОСТ 9.085-98. Методы лабораторных испытаний на стойкость к воздействию плесневых грибов. Изделия технические. ГК СССР по стандартам. Москва.

54. Громов Б.В., Ждан-Пушкина С.М. О методах анализа бактериальных культур // Микробиология, 1981, т.50, в.2, с.389-391.

55. Гудзенко Т.В. Способ определения токсичности растворов загрязняющих веществ и сточных вод. А.С. 866470 СССР Опубл. в Б.И. 33/18,1981.

56. Гудзенко Т.В. Биотестирование качества воды с использованием культуры клеток рыб. Автореф. диссерт. на соискание ученой степени кандидата биологических наук. М.,1989,26с.

57. Гузев B.C., Левин С.В., Бабьева И.П., Звягинцев Д.Г. Способ определения степени загрязнения почв тяжелыми металлами. А.С. N 10924412 СССР, Опубл. в Б.И. N 18, 1984.

58. Дуда В.И., Пронин С.В., Эль-Регистан Г.И. и др. Образование покоящихся клеток у Bacillus cereus под влиянием ауторегуляторного фактора // Микробиология.-1982.-Т.51 ,№ 1,-С.77-81.

59. Дудка И.А., Вассер С.П., Бисько Н.А. и др. Методические рекомендации по промышленному культивированию съедобных грибов. Киев: Наукова Думка, 1984.-60с.

60. Европейский патент ЕВП (ЕР) N0456667 Способ определения ртути с помощью микроорганизмов с усиливаемой ртутью биолюминесценцией.

61. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 105 747 Испытательный набор для проверки санитарно-гигиенического состояния контактирующей с пищевыми продуктами поверхности.

62. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 281 298 Способ анализа полициклических ароматических соединений.

63. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 390 367 Биологическая индикаторная система.

64. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 411 604 Способ определения компонентов токсикантов внешней среды.

65. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 105 747 Испытательный набор для проверки санитарно-гигиенического состояния контактирующей с пищевыми продуктами поверхности.

66. Европейский патент ЕПВ (ЕР) N 0 281 298 Способ анализа полициклических ароматических соединений.

67. Егоров Н.С. Основы учения об антибиотиках. М.:Высшая школа,1969.-479с.

68. ЕПВ, 5 А 61 L 2/14, публ. 11.03.92., № 11.

69. ЕПВ, 5 А 61 L 2/14, публ.11.02. 92., том 1135 № 2.

70. Еськов А.П., Каюмов Р.И., Лисиченко Г.В. Способ выявления зон химического загрязнения. А.С. N1804482 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1990.

71. Ефременкова О.В., Анисова Л.И., Бартошевич Ю.Э. Регуляторы дифференциации актиномицетов // Антибиотики и мед. биотехнология.-1985.-Т.30,№ 9.-С.687-707.

72. Жданова Л.Г., Баснакьян И.А., Варгина А.К. и др. О начале клеточного деления популяций энтеробактерий // ЖМЭИ.-1971. -№3.-С.27-31.

73. Жигаловская Т.Н., Холикова И.И. Способ биоиндикации загрязнения водной среды. А.С. N1546903 СССР, Опубл. в Б.И. №8, 1990.

74. Жук Е.Г. Действие импульсных электрических разрядов на микробную клетку // Ж. «Электронная обработка материалов», 1971, №1, с.57-59.

75. Зенин С.В. О механизме активации воды // Тезисы докл. II Международн. конгресс «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности». Москва, 1999г., с.123-124.

76. Златоуст М.А., Разумовский П.Н., Чебан Е.Г. Накопление аутостимулирующих веществ культурой Actinomyces griseus 15 // Изд-во АН Молд. ССР. Сер.Биология.-1968.-№ 5.-С.8-11.

77. Золотарев В.А. Способ биоиндикации токсичности водной среды. А.С. N1489371 СССР, Опубл. в Б.И. N 22, 1987.

78. Золотухина Е.Ю., Тропин И.В., Гавриленко Е.Е., Сизов А.Д., Бурдин К.С. Способ выбора видов из морских макроводорослей в качестве тест-организмов для оценки загрязнения воды тяжелыми металлами. // А.С. 1814066 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1990.

79. Зыкина Л.Н., Голдаев B.C. «Обеззараживание речной воды высоковольтными разрядами» // Ж. «Электронная обработка материалов», 1974, №2, с.68-71.

80. Иванов В.В., Швец И.С., Иванов А.В. Подводные искровые разряды. // -Киев: Наукова думка, 1982, 190с.

81. Иванов В.Н., Угодчиков Г.А. Клеточный цикл микроорганизмов и гетерогенность их популяций. -Киев: Наукова Думка, 1984.-280с.

82. Ивашина С.А. Способ определения влияния пестицидов на бактерии. А.С. N1638164 СССР, Опубл. в Б.И. N 12, 1991.

83. Ивашов П.В., Юрьев Д.Н. Способ биогеохимического определения загрязнения вод крупных рек в зимних услових. А.С. N 1682924 СССР, Опубл. в Б.И. N 37, 1991.

84. Иерусалимский Н.Д. Проблема онтогенеза бактерий и пути ее развития. Тр. Ин-та микробиологии АН СССР, 1, 1951, с.5-8.

85. Иерусалимский Н.Д. Основы физиологии микробов. -М. -1963, с.202.

86. Израэль Ю.А. Экология и контроль состояния природной среды. -Л: Гидрометеоиздат.-1979, 376с.

87. Иннис У., Ингрем Д. Жизнь микробов при низких температурах: механизмы и молекулярные аспекты. -В кн.: жизнь микробов в экстремальных условиях. Под ред. Кашнера Д.М., 1981, с.89-124.

88. Иост X. Физиология клетки. -М.,1975, 864 с.

89. Иржак Л.И., Коробкова A.M. Способ биологической оценки токсичности водной среды. А.С. 1837225 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1991.

90. Калакуцкий Л.В., Агре Н.С. Развитие актиномицетов. -М.: Наука,1977.-286с.

91. Капрельянц А.С., Скрыпин В.И., Эль-Регистан Г.И. и др. Изменение структурного состояния мембран Micrococcus iysodeicticus под влиянием препаратов ауторегуляторных бактериальных факторов // Прикладная биохимия и микробиология. -1985. -Т.21 .-С.378-381.

92. Кинке О. Адаптация к изменениям условий окружающей среды; экспериментальные проблемы физиологии и экологии. В кн.: Тихоокеан.науч.конг., Хабаровск, 1979, Сов.-Амер.симп.по физиоло. И биохим. Адаптаций мор.животн.: Тез.докл. -М., 1979, с.17-18.

93. Ковалев Л.М., Козлов Ю.П., Хабадаева М.А., Янова В.М. Способ определения токсичности химических веществ. А.С. № 1564 539 СССР, Опубл.в Б.И. N 18, 1990.

94. Ковров Б.Г., Тирранен Л.С., Титова Т.Г. Метаболические взаимодействия в микробных биоценозах, образующихся при культивировании пшеницы в фитотроне // Микробиология.-1981 .-Т.50,вып.4.-С.700-704.

95. Колотов В.М., Барихин С.Я., Ткаченко А.Г. Метод выявления стимулирующих аутометаболитов в культурал ьных жидкостях развивающихся бактериальных популяций // Экология и популяционная генетика микроорганизмов: Сб.науч.тр.-Свердловск,1975,-С.31-34.

96. Константинова Н.Д., Лаврова А.Н., Гулевская С.А. Использование сканирующей электронной микроскопии для изучения микроорганизмов на уровне популяции // XI ВКЭМ, Таллинн, 1979.-Т.2.-С.61.

97. Коротяев А.И. Механизмы саморегуляции бактериальной клетки. -М.:Медицина, 1973.-272с.

98. Коротяев А.И., Кроличенко Т.Г. Хромосомы и продолжительность клеточного цикла у бактерий. // Факторы развития бактериальных популяций. -Свердловск, 1980. -С.44-49.

99. Красильников А.П. Микробиологический словарь-справочник. -Минск, изд. «Беларусь», 1986, 351стр.

100. Кругер М.Я., Панов В.А., Кулагин В.В. и др. Справочник конструктора оптико-механических приборов.

101. Л.'Машиностроение, 1967. 760с.

102. Кузнецов О.Ю. О.Ю. Покоящиеся клетки популяции Sh.flexneri в условиях "мягкого стресса" // Сб. науч. тр. Физико-хим.исслед.патогенных энтеробактерий в процессе культ.-Иваново,1985.-С.56-61.

103. Кузнецов О.Ю. Влияние продуктов жизнедеятельности на поведение клеток шигелл Флекснера // Тез. докл. науч.сотр.и молодых ученых ИГМИ, 21 октября 1987.- Иваново, 1987.-С. 16-16.

104. Кузнецов О.Ю. Покоящиеся клетки популяции Sh.flexneri в условиях "мягкого стресса" // Сб.науч.тр. Физико-хим.исслед.патогенных энтеробактерий в процессе культ.-Иваново,1985.-С.56-61.

105. Кузнецов О.Ю., Смирнов К.К. Некоторые метрологические аспекты морфометрических измерений клеток бактерий. // Иваново,1990 ИГМИ им.А. С. Бубнова Библ. 24назв.-Рус.-Деп.в ВИНИТИ N 1 374-В90.

106. Кузнецов О.Ю. Адаптивное поведение шигелл Флекснера на начальной стадии образования микроколоний // Автореф. на соис. Уч. ст. к.б.н. 03 00 07,- Челябинск, 1991.

107. Лебединский А.И., Глазачева Л.Е., Ткаченко А.Г. Морфологические аспекты действия фактора, стимулирующего рост микробной популяции // Тр. Ин-та Экологии растений и животных Уральского науч.центра АН СССР.-Свердловск, 1977.-Т.104.-С.48-51.

108. Леонтюк А.С., Леонтюк Л.А., Сыкало А.И. Информационныйанализ в морфологических исследованиях. -Минск, 1981. -160с.

109. Леонов Б.И., Бахир В.М., Вторенко В.И. Электрохимическая активация в практической медицине. // Тезисы докл. II Международн. конгресс «Электрохимическая активация в медицине, сельском хозяйстве, промышленности», Москва, 1999г., с." 1 5-22.

110. Литвин В.Ю., Гинцбург А.Л., Пушкарева В.И., Романова Ю.М., Боев Б.В. Эпидемические аспекты экологии бактерий. -М., Фарарус-Принт. 2001. 256 с.

111. Лопатин Б.А. Теоретические основы электрохимических методов анализа. М., 1975, с.28-28.

112. Малиновский А.А. Теория структур и ее место в системном подходе // Системные исследования. М.,1970, с.21-23.

113. Маргулис М.А. Исследование электрических явлений, связанных с кавитацией // Журн. физ. химии. 1985. - Т.59, № 6. - с.1497-1503.

114. Маргулис М.А. Звукохимия новая перспективная область химической технологии // Журн. Всесоюзн. хим. о-ва. - 1990. -Т. 35, № 5.

115. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэлл В. Биохимия человека //Отв. Редактор д.х.н. Л.М.Гинодмана., Т1 Москва: Мир, 1993. -384с.

116. Медведева С.Е., Пузырь А.П., Могильная О.А. Цитоархитектоника бактериальных колоний // Препринт №149Б,-Красноярск, 1991, 35с.

117. Международная заявка РТС (WO) N 90/10079 Способ и устройство для микробиологического восстановления загрязненной почвы и используемые микроорганизмы.

118. Международная заявка РТС (WO) N 90/04037 Способ обнаружения и идентификации токсичных веществ с помощью клонированных микроорганизмов.

119. Международная заявка РТС (WO) N 90/08836 Способ обнаружения ртути с использованием микроорганизмов, биолюминесценция которых усиливается ртутью.

120. Международная заявка РТС (WO) N 90/09454 Способ и устройство для быстрой проверки действия различных веществ на микроорганизмы.

121. Международная заявка РТС (WO) N 91/00903 Устройство для выполнения микробиологических тестов.

122. Международная заявка РТС (WO) 90/13028 Способ сублетального анализа активности окружающей среды.

123. Межевкина Ю.В., Марченкова Т.В., Углова Л.Г. Изучение влияния аутометаболитов и продуктов лизиса кишечной палочки на ее рост и размножение // Биохимия и биофизика микрорганизмов.-Горький:Изд-во Горьк.ун-та,1977.-С.62-67.

124. Мейнелл Дж., Мейнел Э. Экспериментальная микробиология (теория и практика). //-М.:Мир, 1967.-348с.

125. Мелехова О.П., Колоскова Л.В., Бузинова Н.С., Коссова Г.В. Способ биоиндикации токсичности водной среды. // А.С. N 1546904 СССР, Опубл.в Б.И. N 8, 1990.

126. Методы исследования физических и физико-химических свойств патогенных бактерий. // Методические рекомендации.-Иваново, 1984.-21с.

127. Методические указания Института общей генетики АН СССР 1985. «Методы первичного выявления генетической активности загрязнителей с помощью бактериальных тест-систем».

128. Микулин В.П. Фотографический рецептурный справочник.// -М.: Изд-во «Искусство», 1972.- 319с.

129. Мликовский И. Организм как адаптивная система. В кн.: Современ. Пробл. эволюц. морф. животных: Тез. докл. Междунар.симпозиума, ноябрь, 1981. -М., 1981, с.68-70.

130. Мойсюк Б.Н. Элементы теории оптимального эксперимента. //М., 1975.-120с.

131. Наугольных К.А., Рой Н.А. Электрические разряды в воде (гидродинамическое описание). // М.: Наука, 1971, 155 стр.

132. Николаев Ю.А. Участие экзаметаболиов в адаптации Escherichia coli к стрессам // Микробиология. -1997. -Т.66. №1. -С.38-41.

133. Николенко С.И., Ярмолинец В.Ю. Способ оценки бактерицидности пелоидов. // А.С. N 1809383 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1990.

134. Осин Н.С. Способ определения дыхательной активности микроорганизмов. // А.С. N 1602869 СССР, Опубл. в Б.И. N 40, 1990.

135. Осин Н.С., Румянцева В.Д., Миронов А.Ф., Черномордин В.И., Исаевич В.А. Устройство для определения дыхательной активности микроорганизмов. // А.С. N 1721507 СССР, Опубл. в Б.И. N18, 1992.

136. Осипов Г.А., Эль-Регистан Г.И., Светличный В.А. и др. О химической природе ауторегуляторного фактора d1 Pseudomonas carboxydoflava // Микробиология.-1985.-Т.54.-С. 186-190.

137. Павленко В.В.Демидова Л.А., Трубачеева Л.Я., СимоноваЕ.В., Соловьев С.Ф., Зимина Т.А. Способ оценки токсичности сточных вод. //А.С. N1097947 СССР, Опубл. в Б.И. N22,1984.

138. Павленко В.В., Денисова Т.П. Способ оценки токсичности водных сред. // А.С. N 1234770 , Опубл. в Б.И. N 20,1986.

139. Павлова А.Р., Кореневская С.П. Индикатор для определения наличия микроорганизмов в воде. // А.С. N1788013 СССР, Опубл. в Б.И. N22, 1991.

140. Паников Н.С., Звягинцев Д.Г. Значение различных условий культивирования для физиологических исследований микроорганизмов. // Микробиология, 1983, т.52, в.1, с.161-166.

141. Парди А. Механизмы, контролирующие синтез ферментов и их активность у бактерий. В кн. Регуляция клет. Обмена. - М., 1962. -439 с.

142. Пасынский А.Г. Биофизическая химия. // М., 1968, 432 с.

143. Патент №2318264 Великобритания, МКИ А 61 L 2/10, C02F1/32

144. Патент 3600126, США, А 61 L 1/00, 3/00

145. Патент Болгария (BG) А.С. N 44625 Способ определения остаточных количеств пестицидов.

146. Патент ГДР N 218 392 Способ количественного определения п-алкильных соединений, используемых микроорганизмами.

147. Патент ГДР N 226 017 Тест-полоски для определения ферментативной активности лизоцима.

148. Патент ГДР (DD) N 226 297 Показатель токсичности для биоэффекторов.

149. Патент ГДР (DD) N 253 046 Способ определения антимикробной активности веществ.

150. Патент ГДР (DD) N 262 043 Способ применения биокаталитических тест-полосок Тест-полоски содержат несмываемые зафиксированные биокатализаторы.

151. Патент ГДР (DD) N 271 710 Способ обнаружения холина и патогенных факторов обмена веществ.

152. Патент ГДР (DD) N 282 712 Биодатчик и способ определения концентраций Е-капролактама в растворах.

153. Патент Германии (DE) N 287 276 Способ токсикологического исследования in vitro компонентов водных растворов или растворенных в воде чистых веществ с применением клеточных линий.

154. Патент США, (US), № 3 600 126, А 61 L 1/00, 3/00

155. Патент США (US) N 4 604 351 Способ определения чувствительности микроорганизмов к химическим веществам.

156. Патент Франции (FR) N 2 502 338, 1982 Способ и реактив обнаружения канцерогенных и противораковых веществ.

157. Патент Франции (FR) N 2 664 289 Микробиологический способ определения токсичных веществ неорганического илиф органического происхождения с использованием штаммовдрожжей из рода Saccharomyces.

158. Патент ФРГ (DE) N 3 327 691 Способ обнаружения вредных для окружающей среды веществ.

159. Патент ФРГ (DE) N 3 811 245 Способ определения загруженности вредными веществами наружного воздуха и воздуха внутренних помещений.

160. Патент ФРГ (DE) N 3 815 906 Способ и устройство для измерения токсичности водных растворов, в частности сточных вод.

161. Патент ФРГ (DE) N 3 833 628 Способ обнаружения и идентификации веществ при помощи клонированных микроорганизмов.

162. Патент Японии (JP) N 3-10695 Способ измерения чувствительности штамма микроорганизмов.

163. Патент Японии (JP) N 3-25160 Tarumo С.С. Способ ^ приготовления биологического индикатора (стерилизации).w 166. Патент Японии (JP) N 3-29396 Tarumo С.С. Способ приготовления суспензии микроорганизма для биологической индикации (стерилизации).

164. Перт С. Дж. Основы культивирования микроорганизмов и ^ клеток. //-М.:Мир,1978.-331с.

165. Першина З.Г., Комм С.Г. Морфологические особенности размножения S и R-форм дизентерийных бактерий. В кн.: Изменчивость микроорганизмов. -М., 1957, т.2, с.11.

166. Пожаров А.В., Попечителев Е.П., Лебедев В.Ф., Папутская Н.И. Способ определения токсикантов в жидких средах. // А.С. N 1168854 СССР, Опубл. в Б.И. N 27, 1985.

167. Пожаров А.В., Папутская Н.И., Титаренко Ю.Н. Способ индикации загрязнения объектов окружающей среды химическими веществами. // А.С. N 1283251 СССР, Опубл. в Б.И. N2, 1987.

168. Посудин Ю.И. Способ биотестирования наличия химических h- соединений в водной среде. // А.С. N1739288 СССР, Опубл.в Б.И.1. N21, 1992.

169. Потиевский Э.Г., Бондаренко В.М. Концепция экологического подхода к терапии кишечных инфекций. // Ж микробиол -1997,№2:ф с.98-101.

170. Прилуцкий В.И, Бахир В.М. Электрохимически активированная вода: аномальные свойства, механизм биологического действия //М. 1997.

171. Пронин С.В., Еремин В.А., Эль-Регистан Г.И. и др.и др. Изменения конструктивного и энергетического метаболизма в процессе образования и прорастания покоящихся рефрактильных форм Bacillus cereus // Микробиология.-1981 .-Т.50,№ 6.-С.1062-1065.

172. Пронин С.В. Образование специфических покоящихся форм бактерий под влиянием ауторегуляторных факторов. Автор, дисс.кбн (03.00.07) // -М., -1982. -25ил., ВНИИ отд.прикл.микробиол.

173. Пронин С.В. Влияние культуральной жидкости на реактивацию рефрактильных покоящихся форм и прорастание спор Bacillus cereus // Микробиология.-1988.-Т.57,вып.3.-С.503-507.

174. Пронин С.В., Скопинская С.Н., Феногенова С.А. Выделение, очистка и идентификация протектирующих веществ из культуральной жидкости прорастающих спор Bacillus cereus // Изв.АН СССР.-Сер.Биол.-1989.-№ 1.-С.88-94.

175. Пронин С.В. Влияние культуральной жидкости на устойчивость спор Bacillus cereus к воздействию физических и химических повреждающих агентов // ЖМЭИ.-1990.-№ 1. -С.97-98.

176. Пузырь А.П., Могильная О.А. Электронно-микроскопическое изучение структуры колоний некоторых видов бактерий // Препринт № 88Б. -Красноярск, 1988, 28с.

177. Пшеничнов Р.А., Колотов В.М., Коробов В.П., Барихин С.Я. и др. О существовании специфических факторов, контролирующих развитие микробной популяции//Экология.-1973.-№ 3.-С.5-12.

178. Пшеничнов Р.А., Колотов В.М., Барихин С.Я. и др. Микробная популяция саморегулируемая система // Экология и популяционная генетика микроорганизмов:Сб.науч.тр.-Свердловск,1975.В.98.-С.З-13.

179. Пшеничнов Р.А., Колотов В.М., Барихин С.Я. и др. О существовании системы специфической аутометаболической регуляции развития микробных популяций // Экология.-1975.-№ 3.-С.43-50.

180. Пшеничнов Р.А., Ткаченко А.Г. Природа и направленность внутрипопуляционных сдвигов в бактериальных культурах как отражение меняющихся условий среды обитания // Механизмы регуляции развития микробных популяций. Свердловск, 1977.-С.10-14.

181. Пшеничнов Р.А., Ткаченко А.Г., Зеленин Е.Н. Влияние внеклеточных аутометаболитов на экономический коэффициент популяций Escherichia соli различной плотности // Экология.-1981.-№1.-С.93-95.

182. Работнова И.Л., Позмогова И.Н.Хемостатное культивирование и ингибирование роста микроорганизмов. //-М.:Наука, 1979, 207 с.

183. Работнова И.Л. Об изучениии физиологического состояния исследуемых микрорганизмов // Микробиология, -t.YIX, вып.4, 1980, с.634-638.

184. Рощина Е.К., Петров Л.Н. Выделение белка во внеклеточное пространство как неспецифическая реакция Escherichia coli на стресс // Микробиология. -1997. -Т.66. №2. -С.179-184.

185. РСТ, А 61 L 2/00, публ. 19.03.92 № 7, № док. 92/040577

186. Рубинштейн Д.Л. Физико-химические основы биологии. -М.:-Л.: 1932, 558 с.

187. Рябинин А.Г. К вопросу об обеззараживании воды с помощью высоковольтных электрических разрядов // Ж. «Электронная обработка материалов», 1994, №2 (176), с.77-78.

188. Савельева Н.Д., Эль-Регистан Г.И., Заварзин Г.А. Торможение автотрофного роста водородных бактерий факторами ауторегуляции // Микробиология.-1980.-Т.49.-С.373-376.

189. Савенко Д.В., Мацкивский В.И., Подоба Я.Г. Устройство для контроля токсичности жидкости. // А.С. N 1065774 СССР, Опубл. в Б.И. N 1, 1984.

190. Сазонова Л.А.,Вайсман И.Ш. Моделирование эколого-популяционных отношений в эксперименте на культурах бактерий //Докл. АН СССР.-1973.-№ 5.-С.208-221.

191. Севастьянов В.П., Ракитин С.А. Экстремальные физические воздействия в технологии производства изделий знакосинтезирующей электроники. // -Саратов. 1999. 227 стр.

192. Светличный В.А. Ауторегуляторы роста и развития водородной бактерии Ps.carboxydoflava // Дисс. кбн 03.00.04 М.,1982,-182с.(МТ и ПП) Д-2031.

193. Светличный В.А., Романова А.К:, Эль-Регистан Г.И. Изучение количественного содержания мембранотропных ауторегуляторов при липотрофном росте Ps.carboxydoflava // Микробиология.-1986.-Т.55, вып.1.-С.55-59.

194. Светличный В.А., Савельева Н.Д., Некрасова В.К., Эль-Регистан Г.И. и др. Органотрофный рост и синтез ауторегуляторного фактора у Ps. Carboxydoflava // Микробиология.-1982.-Т. 51.-С.606-610.

195. Светличный В.А., Эль-Регистан Г.И., Романова А.К. Физиологическое действие ауторегуляторного фактора d2 из автотрофной культуры Ps.carboxydoflava -1107 // Изд.АН СССР.-Сер.Биол.-1984.-№ 1, С.109-116.

196. Светличный В.А., Эль-Регистан Г.И., Романова А.К., Дуда В.И. Характеристика ауторегуляторного фактора d2, вызывающего автолиз клеток Ps.carboxydoflava и Bacillus cereus // Микробиология.-1 983.-T752.-C.33-38.

197. Сент-Дъерди А. Биоэнергетика. //~М., 1960, 155 с.

198. Сент-Дъерди А. Биоэлектроника. Исследование в области клеточной регуляции, защитных организмов и рака. // -М., 1971, 79 с.

199. Симаков Ю.Г. Способ определения токсичности сточных вод. //А.С. N 173314 , Опубл. в Б.И. N 30,1985.

200. Симаков Ю.Г. Способ определения токсичности природных и сточных вод. //А.С. N 1194877 , Опубл. в Б.И. N 44,1985.

201. Скворцов Г.Е., Панов В.А., Поляков Н.И., Федин Л.А. Микроскопы. //-Л^Машиностроение, 1969.-512с.

202. Солтон М. Молекулярная бактериология.- В кн.: Молекулярная микробиология. -М., 1977. с.420-454.

203. Смирнов К.К. Способ измерения дзета-потенциала бактериальных клеток амплитудно-частотным методом // А.С. №281748 от 03.07.1970.

204. Смирнов С.Г. Проблема микробиологического времени // Физ,-хим. исслед. патогенных энтеробактерий в процессе культивирования.//Сб.науч.тр.:Иваново, 1982. -С.31-41.

205. Спунер Е., Стокер Б. Анатомия бактерий. // М., "Медгиз", 1960, с.104-105

206. Стейниер Р.,Эдельберг Э., Ингрэм Дж. Мир микробов. Т.1, // -М: М и р, 1979.С.94.

207. Степаненко А.А., Короленко П.И. Ковалев Г.А. Способ определения токсичности водных сред. // А.С. N 1112276 СССР, Опубл. в Б.И. N33,1984.

208. Степанова Н.В., Гевиксман Х.В., Баснакьян И.А., Дубинина Г.П. В кн.: Лимитирование и ингибирование микробных процессов. -Пущино, 1980, с. 124-137.1980

209. Страйер Л. Биохимия. т.З., // -М.: Мир, 1985, 397с.

210. Стрешинский М.О. К проблеме особи у бактерий // Известия АН

211. СССР, сер.Биол. №2, -1956, с.62-73.

212. Сухоруков A.M., Журавлева Т.П., Цветков B.C., Щербакова Э.Г. Способ определения содержания лизоцима. // А.С. N 1143778 СССР, Опубл. в БМ. N9,1985.

213. Сухоцкене Й.Й., Шаломскене Й.Й Способ определения ингибирующих веществ в молоке. // А.С. N 1682926 СССР, Опубл.в Б.И. N 37, 1991. Б.И. N9,1985.

214. Тамбиев А.Х., Шелястина Н.Н., Болдырева Л.С., Читао С.И. Биологическая активность экзометаболитов цианобактерий // Биол. науки.-1981 .-№ 12.-С. 77-80.

215. Тикк Э.И. Изучение динамики ультраструктуры бактерий Erwinia herbicola в растущей бактериальной колонии // Цитология ми кроор га низмов.-Пущино.-1984.-с. 4 5-47.

216. Тимаков В.Д., Петровская В.Г., Бондаренко В.М. Биологические и генетические характеристики бактерий рода Shigella. -М.: Медицина, 1980. -296 с.

217. Туманов А.А., Глухова М.Н., Фролова С.М., Субботина Г.М., Шмелева А.Н. Способ полуколичественного определения органического оловосодержащего соединения. // А.С. N 1175966, Опубл. в Б.И. N 32,1985.

218. Туманов А.А., Филимонова И.А. Способ количественного определения низких концентраций ионов цинка. // А.С. N 1146324 СССР, Опубл. в Б.И. N1 1,1985.

219. Уикли Б. Электронная микроскопия для начинающих. // -М.: М и р, 1975.-235с.

220. Урбах В.Ю. Статистический анализ в биологических и медицинских исследованиях. //-М., 1975.-295с.

221. Хохлов А.С. Регуляторы развития микроорганизмов // Онтогенез микроорганизмов: Сб.науч.тр.:М.:Наука,1979.- С.139-157.

222. Хохлов А.С. Низкомолекулярные микробные ауторегуляторы. //-М.:Наука,1988.-270с.

223. Хохлов А.С., Анисова Л.Н., Блинова И.Н. и др. Регуляторы дифференциации Streptomyces cyanefuscatus // Изв. АН СССР.-Сер.Биол.-1984.-№ 3.-С.98-108.

224. Чекалов В.П. Способ определения численности углеводородоокисляющих бактерий. // А.С. N 1622400 СССР, Опубл.в Б.И. N 3, 1991.

225. Шаталаев И.Ф., Волгина Т.Б., Щеголева Е.В., Первушкин С.В. Способ биотестирования токсичности сточных вод. // А.С. N1684664 СССР, Опубл.в Б.И. N 38, 1991.

226. Шаталаев И.Ф., Первушкин С.В., Волгина Т.Б., Щеголева Е.В., Либерман А.Д. Способ определения токсичности промышленных сточных вод. //А.С. N 1751670 СССР, Опубл.в Б.И. N 28, 1992.

227. Шварц С.С. Эволюционные закономерности эволюции. //-^ М.:Наука,1980. -280с.

228. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Микрофлора человека и животных и ее функции. // М.ГрантЪ, T.I 1998, 288 с.

229. Шендеров Б.А. Медицинская микробная экология и функциональное питание. Микрофлора человека и животных и ее функции. // М.ГрантЪ, Т. III,- 2001, 288 с.

230. Шеховцев В.П., Высоцкий В.В. Цитоархитектоника ® бактериальных колоний (электронно-микроскопическийаспект)/сб.тезисов XI ВКЭМ,- Таллинн, 1979.-М.Наука.-1979.-Т.2.-С.81-83.

231. Шеховцов С.Е., Жарикова Г.Г. Электронно-микроскопическое изучение расположения клеток в колониях бактерий // Б иол. науки. -1984.-№3.-с. 93-97.

232. Шмелев В.М., Евтюхин Н.В., Че Д.О. Стерилизация воды импульсным поверхностным разрядом // Химическая физика. -1996.- Т. 1 5j. N3 .- 140-144.

233. Шлегель Г. Общая микробиология. -М.:Мир,1972. -476с.

234. Шлегель Г. Общая микробиология. -М.:Мир, 1 987. -567с.

235. Эль-Регистан Г.И., Козлова А.Н., Комарова Г.В. и др. Ауторегуляторные внеклеточные метаболиты // Регуляциибиохим.проц.у микроорг.:Тез.докл.М Всес.конф.:-Пущино-на-Оке, 1972.-С.172-172.

236. Г246. Эль-Регистан Г.И., Хохлова Ю.М., Дужа М.В. и др. Выделение характеристика специфических ауторегуляторных факторов, синтезируемых про- и эукариотными микроорганизмами // Изв. АН СССР.-Сер. иол.-1976.-№ 6.-С.869-877.

237. Эль-Регистан Г.И., Дуда В.И., Капрельянц А.С. и др. Регуляция роста и развития микроорганизмов специфическими ауторегуляторными факторами // Регуляция биохим.проц.у микроорг.-Сб. науч.тр. :-Пущино, 1979.-С. 280-290.

238. Эль-Регистан Г.И., Дуда В.И., Козлова А.Н., Поплаухина О.Г. Изменение конструктивного метаболизма и ультраструктурной организаци клеток B.cereus под влиянием специфического ауторегуляторного фактора // Микробиология.-1 979.-Т.X У III, № 2.-С.240-244.

239. Эль-Регистан Г.И., Цышнатий Г.В., Дужа М.В. и др. Регуляция роста и развития Ps. carboxydoflava специфическими эндогенными факторами // Микробиология.-1 980.-Т.49,вып.2.-С.561-562.

240. Эль-Регистан Г.И., Дуда В.И., Козлова А.Н. и др. Индукция процессов автолиза клеток B.cereus специфическими ауторегуляторным фактором // На главных путях научно-технич. прогресса: Тез.докл.YI съезда ВМО.-Т. 1 .-Рига, 1980.-С.72-72.

241. Эль-Регистан Г.И., Дуда В.И., Светличный В.А. и др. Динамика ауторегуляторных факторов d в периодических культурах Pseudomonas carboxydofl. и Bacillus cereus // Микробиология. 1983.-Т. 52, вы п. 2.-С. 238-243.

242. Эль-Регистан Г.И. , Дуда В.И., Козлова А.Н., Грязнова М.Н. Роль ауторегуляторных факторов d1 в образовании анабиотических форм микроорганизмов // Экспериментальный анабиоз.:Тез.докл.II Всем.конф.-Рига, 1984.-С.37-38.

243. Эль-Регистан Г.И., Козлова А.Н., Дуда В.И. и др. Действие ауторегуляторных факторов D1-индукторов образования анабиотических форм микроорганизмов // Экспер. анабиоз.:Тез докл.II Всес.конф.-Рига, 1984.-С. 109-109.

244. Юткин Л.А. О бактерицидных свойствах жидкостей после их электро-гидравлической обработки. // Электронная обработка материалов. 1978.-N1.- С. 67-68.

245. Юткин Л.А. Электрогидравлический эффект и его применение в промышленности. //Л.: Машиностроение, 1986, 253 стр.

246. Юрин В.М., Бобров В.А., Гусев В.В. Способ обнаружения токсичности жидкости. //А.С. N 1702304 СССР, Опубл.в Б.И. №48, 1991.

247. Aaronson S. Chemical communication at the microbial level // Florida: CRC Press.Inc.Boca Raton.-1981 .-v.1-p.1-189;v.2.-203p.

248. Adeno M., Bacci C., Quaranta O. Cycle regulation in Escherichia coli. //-Atti/Acad.naz.Lincei Rend sci. fis. Mat. Nature., 1980, v.68, №2. p.139-144.

249. Afrikjan E.G., Julian G.S., lee A.B. Scanning electron microscopy of bacterial colonies // Appl.Microbiol.-1 971 .-V.25. N6.-P.934-937.

250. Aggab A.M., Cooke R.C. Self-stimulation and self-inhibition in germination ascospores of Sclerotinia curreyama // Tr.Br.Mycol.Soc.-1971.-v.76.-155-157.

251. Aldea M., Herero E., Trueba F.J. IConstancy of diameter through the cell cycle of Salmonella typhimurium L T2. -Curr.Microbiol., 1982, v.7, №3. p.165-168.

252. Babel W., Rosenthal H.A., Rappoport S. A united hypothesis on the canses of the cardinal temperatures of microorganism. The temperature optimum of Bacillus stearothermophilus. -Acta Biol. Med. Germ. , 1972, v.28, p.565-576.

253. Begg K.J., Donachie W.D. Growth of the E.coli cell surface // J.Bacteriology, -1977, v.129. -3. -p. 1 524-1 536.

254. Bianco Coletto G.Bacteriologe virology Immunology. -1981, Jul -Dec, 74 P. 7-12.

255. Bissett K.A. The Cytology and Life-History of Bacteria // 2nd ed. Livingstone, Ltd, Edinburgh, -1955, p. 88.

256. Brown W.L.Jr. An hypothesis concerning the function of the metapleural gland in ants // Am.Naturalist. -1968. -v.102. -p.188-191.

257. Brown W.L.Jr., Eisner Т., Whittaker R.H. Kayromones // Biol.Science. -1970.-v.20. -p.21-29.

258. Buston H.W., Richard B. The effect of a physical barrier on sporulation of Chaetomium globosum // J.Gen.Microbiol. -1956. v.15. -p.194-197.

259. Byers B.R., Powell M.V., Lankford C.E. Iron-chelating hidroxamic acid (schizohinen) active in initiation of cell division of Bacillus megaterium // J. Bacteriology. -1967. -v.93. -p.286-290.

260. Chan R. Recovery of Saccharomyces cerevisiae mating type a cells from G- arrest by L-factor // J.Bacteriology. -1977.-v.130.-p.766-770.

261. Chihara G. Antitumor and immunological properties of polysaccharides from fungal origin. National Cancer Institute, Tokyo. Proceedings of the Tenth International Congress on the Science and Cultivation of Edible Fungi, France. 1978.

262. Chiyokichi lizuka. Patent of England № 20791150; Опубл. 20.01.82. Патент (Великобритания). МКИ А 61К 35/84. Способ получения вирицидного вещества из Basidiomycetes.

263. Chou T.W., Greasham R., Tannenbaum S.R., Deman A.L. Production of an autoinhibitor by a thermophilic Bacillus // J.Bacteriology. -1972. -v.3. -p.459-464.

264. Clark W.M. Public Health Reports. (U.S.), -v.38.443,1923

265. Clark W.M., Cohen В., Public Health Reports. (U.S.), 38,666,1923.

266. Clark W.M., Cohen В., Public Health Reports. (U.S.), 38,933,1923.

267. Sullivan M.X., Cohen В., Clark W.M., Public Health Reports. (U.S.), 38, 1669,1923.

268. Cohen В., Gibbs H.D., Clfrk W.M., Public Health Reports. (U.S.), 39, 381,1924.

269. Gibbs H.D., Cohen В., Cannan R.K., Public Health Reports. (U.S.), 40, 1131, 1925.

270. Clark W.M., Cohen В., Gibbs H.D., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 54, 1926.

271. Cannan R.K., Cohen В., Clark W.M., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 55, 1926.

272. Phillips M., Clark W.M., Cohen В., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 61,1927.

273. Clark W.M., Cohen В., Sullivan M.X., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 66, 1927.

274. Gibbs H.D., Hall W.L., Clark W.M., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 69, 1928.

275. Hall W.L., Preisler P.W., Cohen В., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 71, 1928.

276. Cohen В., Phillips M., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 74, 1929.

277. Cohen В., Preisler P.W., Public Health Reports. (U.S.), Suppl. 92, 1931.

278. Clark W.M., Perkins M.E., J.Am.Chem.Soc.,54,1228,1932.

279. Stiehler R.D., Chen T.-T., Clark W.M., J.Am.Chem.Soc., 55, 891, 1933.

280. Stiehler R.D., Clark W.M., J.Am.Chem.Soc.,55, 4097 ,1933

281. Clark W. M. Oxidation-reduction potentials of organic systems. Huntigton.N.Y.1972.

282. Collins J.F., Richmond M.N. Rate of growth of B.cereus between division // J.Gen.Microbiol. -1962.-v.28,1.-p.15-33.

283. Cooper S., Helmstetter C.E. Chromosome replication and the division cycle of Escherichia coli B/r // J.Mol.Biol.-1968.13.-p.519-540.

284. Cooper S. Cell division and DNA replication following a shift to a richer medium // J.Mol.Biol.-1969.-43.-p.1-11.

285. Cooper S. What is the bacterial growth law during the division cycle? // J.Bacteriology. -1988. -170, 11. -p.5001-5005.

286. Cooper S. The Escherichia coli cell cycle. // Res.Microbiol. -1990. 141. -p.17-29.

287. Crisley F.D., Helz G.E. Some observations on the effect of filtrates of several representative concomitant bacteria on Clostridium botulinum type A. // Can.Microbiol. -1961. -v.7. -p.633-638.

288. Dagley S., Dawes E.A., Morrison G.A. Factors influencing the early phase of growth of Aerobacter aerogenes // J.Gen.Microbiol.-1950. -v.4.-p.437-447.

289. Devreotes P.N. Chemotaxis // The divelopment of Dictiostelium discoidem. -New York:Acad.Press.-1982.-p.117-168.

290. Dixon M. Multi-enzime systems. Cambr. at the university press, 1949.

291. Donachie W.D.,Begg K.J.Growth of the bacterial cell// Nature. -1970.-v.227.-p.1220-1224.

292. Donachie W.D. Regulation of cell division in bacteria // Brit.Med.Bull. 1 973.-v.29,3.-203-208.

293. Donachie W.D., Jones N.C., Teather R. The bacterial cell cycle // Symp.Soc.Gen.Microbiol. -1973, -23.-p.9-44.

294. Dow C.S., Whittenbury R., Carr N.G. The "shut down" or "growth precursor" cell an adaptation for survival in a potentially hostile environment // Microbes.Natur.Envir.Symp.Soc.Gen.Microbiol.War.-1983.-p.187-247.

295. Drucker D.B., Whittaker D.K. Microstructure of colonies of red-shaped bacteria // J.Bacterid. -1971. -v.108, №1, p.2. -p.515-526.

296. Errington F.P., Powell E.O., Thompson N. Growth characteristics of some gram-negative bacteria // J.Gen.Microbiol. -1963. -v.39. -1.-p.109-123.

297. Feschkow J. The autoinhibitor activity of some microbial spicies // Zbl.Bacterid.Parasitenk.Infection.und Hyd. -1976. Abt.1 -v.235.-5. -p.521-526

298. Fisher R.W., Wolk C.P. Substance stimulating the differentiation of spores of the blue-green alga Cylindrospormum licheniforme // Nature. -1976. -v. 259. -p.394-395.

299. Gardner A.D. Cell-division, colony-formation and spore formation. -Asystem of bacteriology, 1 930, v. 1, p. 159.

300. Grabow W.O.K. Growt-inhibiting metabolites of Proteus mirabilis // J.Med.Microbiol.-1972. -v.5. -p.191-196.

301. Graham-Smith G.S. The division and post-fission movements of bacilli when growth on solid media. -Parasitology, 1930, №3, p.17.

302. Grover N.B., Woldringh CL., Zaritsky A., Rosenberger R.F. Elongation of rod-shaped bacteria.// J Theor Biol. -1977, Jul 21. -67(2). -p.181-193.

303. Gudas L.J., Pardee A.B. Deoxyribonucleic acid synthesis during the division cycle of E.coli: a comparison of strains B/r, K-12,15 and 15T under conditions of slow growth II J.Of Bacteriology, -v.117, 3, 1974, p.1216-1223.

304. Helmstetter C.E. Rate of DNA synthesis during the division on cycle of E.coli B/r // J.Mol.Biol. -1967. -v.24.-p.417-427.

305. Helmstetter C.E., Cooper S. DNA synthesis during the division cycle of rapidly growing Escherichia coli B/r // J.Mol.Biol. -1968.-v.31.-p.507-518.

306. Helmstetter C.E., Pierucci O. Cell division during inhibition of DNA synthesis in Escherichia coli //J.Bacteriology -1968. -v.95.-p. 16271643.

307. Herbert E., Kubitschek H.E. Cell growth and abrupt doubling of membrane proteins in Escherichia coli during the division cycle // J.Gen. Microbiol. 1990. - 136. -4. -p.599-606.

308. Higa, T. and G.N. Wididana 1991a. The concept and theories of effective microorganisms, p. 118-124. In Parr, S.B. Hornick, and C.E. Whitman (ed.) Proceedings of the First International Conference on

309. Kyusei Nature Farming. U.S. Department of Agriculture, Washington, D.C., USA.

310. Hirosawa Т., Wolk C.P. Isolation and characterization of a substance which stimulates the formation of akinetes in the cyanobacterium Cylindrospermum licheniforme Kutz // J.Gen.Microbiol. -1979. -v.114. -p.433-441.

311. Jarvis V.R. The epidemiology of colonization // Infect Control Hosp.Epidemiol.,1996, Jan.17(1): 47-52.

312. Joselay-Petit D. Le cycle cellulaire d'Escherichia coli // Biochimie. -1985. -v.67.-1.-45-58.

313. Karlson P., Luscher M. Pheromones:a new term for a class of biologically active substances//Nature.-1959.v.183.-p.55-56.

314. Kepes A., Autissier F. Topology of growth membrane in bacteria. //Biochem. Biopys. Acta, 1972, v.265, p.443-469.

315. Komagata K., Yamada K., Ogawa H. Taxonomic studies on coryneform bacteria // J.Gen.Appl.Microbiol. -1969. -v.15,3. -p.243-259.

316. Komagata K. Division of bacteria cells // Spisy priridoved fac.univ.Brne. -1970. -v.1-16. -p.61-62.

317. Koppes L.J.H., Overbeeke N., Nanninga N. DNA replication pattern and cell wall growth in E.coli PAT-84 // J.Bacteriology. -1978. -v.133,3. -p.1053-1061.

318. Koppes L.J.H., Woldringh C.Z., Nanninga N. Size variations and correlation of different cell events in slow-growing E.coli // J.Bacteriology. -1978.-134,2, -p.423-433.

319. Kubitschek H.E. Bacterial generation times ancestral dependence upon cell size // Exp.Cell Res.-1966. v.43.-p.30-38.

320. Kubitschek H.E. Bilinear cell growth of Escherichia coli // J.Bacteriology. -1981. -v.148.-2. -p.730-733.

321. Labbe R.G., Tang S.S., Franceschini T.J. Partial purification and characterization of an initiation protein for germination from Clostridium perfingens spores // Biochim.et biophys.acta. -1981. -v.678. -p.329-333.

322. Lankford C.E, Walker J.R., Reeves I.R. Inoculum-dependent division lag of Bacillus cultures and its relation to an endogenous factor(s) (shizokinen) // J.Bacteriology. -1966. -v.91. -p. 1070-1079.

323. Law J.H., Regnier F.E. Pheromones // Ann.Rev.Biochem. -1971. -v.40. -p.533-548.

324. Lerauge S., Wertheimer M.R., Marchand R. Sterilization by low-pressure plasma: the role of vacuum-ultraviolet radiation // J. Plasmas and Polymers, Vol.5. 2000. - № 1, P. 31 - 46.

325. Lodge R.M., Hinshelwood C.N. Phisicochemical aspects of bacterial growth: the lag of Bacterium lactis aerogenes // J.Chem.Soc.-1943.-p.213-219.

326. Malek J. Neue Beobachtungen bei der Teilung von Backterien. -Wissensch. Fortschr., 1956, v.6, 12, p.362-263.

327. Marr A.G., Harvey R.J. Growth and division of Escherichia coli // J.Bacterid. -1966, -91: p.2388-2389.

328. Mc Intosh A.F., Meyrath J., Interdepence of inoculum size and trace element supply in growth of Aspergillus oryzae // Arch.Microbiol. -1964. -v.48,5. -p.368-380.

329. Nanninga N., Koppes L.J.H., de Vries Tijssen F.C. The cell cycle of Bacillus subtilis as studied by electron microscopy.// Arch Microbiol 1979 Nov; 123(2): 173-1 81.

330. Newman C.N., Kubitschek H.E. Variation in periodic replication of the chromosome in E.coli B/r // J.Mol.Biol.-1978.-v.121 .-p.461-471.

331. Nurse P. Genetic analisis of the cell cycle// Genetics as a tool in microbiology.-1981.-p.291-315.

332. Oshima T. A pentaamine is present in an extreme thermophile. // J Biol Chem -1982. Sep 10. 257(17). -p.9913-9914.

333. Oshima T. Thermal stability of a protein: thermostable proteins from thermophilic bacteria (author's transl) // Tanpakushitsu Kakusan Koso. -1982. Apr.27(6). -p.840-849.

334. Oshima T. The structure of cortical arousal (author's transl) // Nippon Seirigaku Zasshi. -1982. Jan 1, 44(1). -p.1-11.

335. Percesa T. Citeva aspecte all adaptarii boilogice // Stud.Yniv.Babes-Balyai. -1979.-v.24,2.-p.40-45.

336. Pierucci O., Melzer M., Querini C., Rickert M, Krajewski S. Comparison among patterns of macromolecular synthesis in E.coli B/r at growth rates of less and more than one doubling per hour at 37° С // J. Bacter., 1981, -v.148, 2, p.684-696.

337. Pirt S.J. A kinetic study of the mode of growth of surface colonies of bacteria and fungi // J.Gen.Microbiol. -1967. -v.47. N2. p.181-197.

338. Powell E.O., Errington F.P. Generation times of individual bacteria: some corroborative measurements // G.Gen.Microbiol. -1963.-v.31.p.315-327.

339. Powell E.O., Errington F.P. The size of bacteria as measured with the Dyson image-splitting eyepiece // J.R.micr.Soc.-1963.v.82.-p.39-43.

340. Przybylowicz P., Donoghue J. Shiitake Growers Handbook: The Art@Science of Mushroom Cultivation // Kendall/Hunt Publishing Co,Dubuque,IA, 1988, 113 p.

341. Rahn O. Uber der Einfluss der Stoffwechselprodukte auf dasWachstum der Bacterien // Zbl.Bacterid.Parasitenk. -1906. -p.417-429.

342. Ranta J. On the mathematical modeling of microbial age dynamic and some control aspects of microbial growth process. Acta polytechn. Scand. Math. And Comput. Sci.Ser. , 1982, v.35. p.108.

343. Rogers H.W. Biogenesis of wall in bacterial morphogenesis. // Adv.Microbiol.Physiol. -1979. -v.19. -p.1-62.

344. Rottem S., Linker C., Wilson T. et al. Proton motive force across the membrane of Mycoplasms gallisepticum and its possible role in cell volume regulation. // J.Bacterid. -1981. 145, 3. -p.1299-1304.

345. Sakakida Impuharu Patent Jupan № 57-1230. Патент Япония Сакакида Импухару Способ получения противоопухолевого вещества. МКИ А 61 К 35/84. Заявлено 18.11.78. Опубл. 09.01.82.

346. Shehuta Т.Е. Effect of temperature on the size of E.coli cells // J. Bacterid., 1975, v. 124, p.857-862.

347. Sherman J.M., Gameron G.M. Lethal environmental factors within thenatural range of growth. // J. Bacterid., 1934, v.27,p.341-348.

348. Shida Т., Komagata K., Mitsugi K. Reduction of lag-time in bacterial growth:effect of inoculum size and nutrients //

349. J. Gen. Appl. Microbiol.-1975.-v.21.-p.75-86.

350. Shida Т., Mitsugi K., Komagata K.Reduction of lag-time in

351. Mr bacterial growth:effect of inoculum size and growth phases of seedcultures//J.Gen.Appl.Microbiol.-1977.-v.23.-p.187-200.

352. Simionescu N.M., Simionescu N., Palade P.E. Segmental differentiations of cell functions in the vascular endothelium: the microvasculare // J. Yell. Biol. -1975. -v.6,7. -p.863-869.

353. Sinclair N.A., Stokes J.L. Factors with control maximas growth of bacteria // J.Bacteriology.-1962.-V.83.-p. 1146-1150.

354. Srinivasan V.R. Sporogen-an "inductor" for bacterial cell differentiation//Nature.-1966.-v.209.-p. 537-538.

355. Stamatin N. Blocage de la germination des spores et effect d'autoantibiose exercis par un metabolite synthetise par Bacillus laterosporus // Ann.Inst.Pasteur.-1969.-v.116.-p.19-25.

356. Stephens K., Hegeman G.D., White D. Pheromone produced by

357. A the Myxobacterium Stigmatella aurantica//J. Bacteriology. -1982.v. 149. -p.739-747.

358. Sussman A.S., Dow C.S.,Whittenbury R., Carr N.G. The "shutdown" or "growth precursor" cell an adaptation for survival in a potentially hostile environment.// Microbes. Natur. Envir. Symp. Soc. Gen. Microbiol. War. -1966.-1 9-83.-p. 187-247.

359. Tetz V.V., Rybalchenko O.V., Savkova G.A. Ultrastructure of the surface film of bacterial colonies // J.Gen.Microbiol, -v.139(4),• 1993. -p.855-858.

360. Thorner J. Pheromonal regulation of development in Saccharomyces cerevisiae // Cold Spring Harbor Laboratory. -1981. -p.143-180.

361. Trueba F.J., Woldringh C.L. Changes in cell diameter during the division cycle of Escherichia coli // J. Bacteriol. -1980. -v.142. -p.869-878.

362. Trueba F.J. On the precision and accuracy achieved by Escherichia coli cell at fission about their middle // J. Arch. Microbiol. -1982. -v.131, 1. -p.55-59.

363. Trueba F.J., Neijssel O.M., Woldringh C.L. Generality of growth cinetics of the average individual cell in different bacterial populations // J.Bacteriol. -1982. -v.150. №4. -p. 1048-1055.

364. Trueba F.; van Spronsen E.A.; Traas J.; Woldringh C.L. Effects of• temperature on the size and shape of Escherichia coli cells.// Arch Microbiol. -1982. May.131(3). -p.235-240.

365. Wasser S.P., Weis A.L. Therapeutic effects of substances occurring in higher Basidiomycetes mushrooms: a modern perspective // Crit. Re.v Immunol. 1999. Vol.19. - P. 65-96.

366. Whittaker R.H. Chemical ecology.//-New York-London. Acad. Press.-1970.-p.43-46.

367. Whittaker R.H., Feeny P.P. Allelocemics: Chemical interactions between species // Science. -1971. -v.171. -p.757-770.

368. Woldringh C.L. Morphological analysis of nuclear separation and cell division during the life cycle of Escherichia coli. // J Bacteriol. -1976. Jan. 125(1). -p.248-57.

369. Woldringh C.L., de Jong M.A., van der Berg W. Morphological analyses of the division cycle of two E.coli substrains during slow growth // J.Bacteriology. -1977. -v.131. -p.270-279.

370. Woldringh C.L.; Grover N.B.; Rosenberger R.F.; Zaritsky A. Dimensional rearrangement of rod-shaped bacteria following nutritional shift-up. II. Experiments with Escherichia coli B/r. // J Theor Biol. -1980. -Oct 7. -v.86(3). -p.441-54.