Клинико-экспериментальное обоснование и внедрение современных методов моделирования и коррекции ортопедических патологий у животных тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, доктор наук Качалин Михаил Дмитриевич

• Качалин Михаил Дмитриевич
• доктор наук
• 2024

Оглавление диссертации доктор наук Качалин Михаил Дмитриевич

ВВЕДЕНИЕ

1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Распространённость и структура ортопедических патологий у сельскохозяйственных животных

1.2. Особенности патологий опорно-двигательного аппарата у домашних животных и их клинико-морфологическая характеристика

1.3. Видовые особенности этиологии и патогенеза деструктивных процессов в суставах у животных

1.4. Современные подходы к изучению модельных процессов в суставах в экспериментальной артрологии

1.5. Методология коррекции наиболее значимых ортопедических патологий у животных

1.4.1. Классические подходы к диагностике и консервативному лечению животных с ортопедическими патологиями

1.4.2. Оценка эффективности хирургических методов коррекции и перспективны их совершенствования при патологиях суставов

2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Материалы исследования

2.1.1. Материалы ретроспективного анализа распространённости патологий опорно-двигательного аппарата тазовой конечности у животных

2.1.2. Материалы разработки и обоснования методов индуцирования остеоартроза коленного сустава у овец

2.1.3. Материалы разработки и обоснования методов индуцирования травм сухожилий на лабораторных крысах

2.1.4. Материалы разработки и обоснования методов коррекции ортопедических патологий в области коленного сустава у собак

2.2. Методы исследования

2.2.1. Общенаучные методы исследований для всех групп животных

2.2.2. Методика и материальное обеспечение выполнения операций на коленном суставе у овец

2.2.3. Методика и материальное обеспечение выполнения операций у крыс

2.2.4. Методика и материальное обеспечение выполнения операций на коленном суставе у собак

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ

3.1. Распространённость и характеристика патологий опорного аппарата тазовых конечностей у животных

3.1.1. Распространённость и характеристика патологий опорного аппарата тазовых конечностей у крупного рогатого скота

3.1.2. Распространённость и характеристика структуры патологий опорного аппарата тазовых конечностей у собак

3.2. Разработка эффективных методик индуцирования экспериментального остеоартроза у овец

3.2.1. Результаты разработки метода индуцирования локального гонартроза у овец

3.2.2. Результаты разработки метода индуцирования генерализованного гонартроза у овец

3.3. Разработка и совершенствование методов коррекции деструктивных процессов в суставах у животных

3.3.1. Результаты клинических, ортопедических и гематологических исследований в III группе

3.3.2. Результаты лучевых методов исследований в III группе

3.3.3. Результаты патологоанатомических и микроморфологических исследований в III группе животных

3.4. Выявление особенностей регенерации сухожилий в условиях применения препарата, содержащего цитокины у крыс

3.4.1. Результаты патологоанатомических и микроморфологических исследований у экспериментальных крыс

3.4.2. Результаты микроморфометрических исследований у экспериментальных крыс

3.4.3. Результаты биомеханических исследований у экспериментальных крыс

3.5. Совершенствование методов коррекции и лечения вывиха коленной чашки у собак

3.5.1. Клинико-рентгенографическая характеристика вывиха коленной чашки у собак

206

3.5.2. Анализ осложнений после хирургической коррекции вывиха коленной

чашки

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Выводы

Рекомендации по практическому использованию выводов

Перспективы дальнейшей разработки темы исследований

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клинико-экспериментальное обоснование и внедрение современных методов моделирования и коррекции ортопедических патологий у животных»

Актуальность темы исследования.

В числе приоритетных направлений Стратегии научно-технологического развития Российской Федерации особое внимание уделяется созданию научной базы для перехода к высокопродуктивному и экологически чистому агрохозяйству, разработке рационального применения средств химической и биологической защиты животных, созданию безопасных и качественных продуктов питания. Выполнение поставленных в Стратегии задач, как и современное развитие отечественного животноводства России невозможно без качественного ветеринарного обеспечения благополучия животных. Наряду с рядом инфекционных, инвазионных заболеваний, патологий репродуктивной и пищеварительной систем для обеспечения здоровья и реализации продуктивного потенциала животных необходимо совершенствовать меры лечения и профилактики хирургических патологий, среди которых особое место занимают ортопедические заболевания, в большинстве своем протекающих субклинической или хронической форме. Ортопедические патологии наносят высокий экономический ущерб в продуктивном, спортивном и служебном животноводстве, приводя к выбраковке ценных в племенном отношении животных, а также животных с высоким уровнем рабочих качеств (Доманский К.Н., Самошкин И.Б., Стекольников А.А., 2012; Концевая С.Ю., Нефедов А.М., Луцай В.И. и др., 2021; Лазутина Р.Р., 2011; Волотко И., Безин А., Бутакова Н., 2015; Комаров В.Ю., 2021; Веретников А.А., Шуклин С.И., 2023).

Среди патологий конечностей у продуктивных животных традиционно значительное внимание уделяется решению вопросов, связанных с патологическими процессами в области пальца. В основном изучаются вопросы этиологии и патогенеза пододерматитов, ламинитов, язвенных и инфекционных поражений копытец (Стекольников А.А., Семенов Б.С., Суховольский О.К., 2014; Стекольников А.А., 2011; Гимранов В.В., Тимофеев С.В., 2006; Марьин Е.М., Ермолаев В.А. и др., 2012; Кудряшов И.Р., Ермолаев В.А., Марьин Е.М., 2022;

Руколь В.М., 2023). Вместе с тем у животных широко распространены патологии суставов и сухожильно-связочного аппарата: артриты и артрозы, тендениты и ряд других. Известно, что патологии суставного хряща, сухожилий и связок протекают хронически, ткани имеют слабый потенциал для регенерации, а восстановление занимает значительной время, приводя к снижению продуктивных и рабочих качеств. В доступной научной литературе имеются публикации, посвященные изучению деструктивных патологий в области суставов, тендинитов и травм сухожильно-связочного аппарата в первую очередь у домашних животных, акцентируя внимание не на фундаментальных исследований патогенеза этих патологий, а в большинстве своем на их распространённости и опыте применения ряда лечебных схем (Позябин С.В., 2020; Азарова М.С., Хатович А.Р., 2018; Денисов Л.Н., 2016; Сотников В.В., 2010; Кейни С., 2008; Алварес А., 2011; Послов В.Г., Пахмутов И.А., 2010; Торба А.И., 2003; Calve S., Dennis R.G., Kosnik P.E. et al 2004).

Невозможно решить задачи по лечению и восстановлению хозяйственных качеств высокопродуктивных животных, спортивных лошадей, служебных собак и собак компаньонов, больных патологиями опорно-двигательной системы без фундаментальных исследований этиологии и патогенеза деструктивных патологий в структурах, наиболее подверженных травмированию, а также поиска новых инновационных методов контроля репарации в поврежденных тканях. С этой целью ряд авторов указывает на необходимость создания модели патологического процесса в суставах как эталона для изучения эффективности различных схем лечения в сравнительном аспекте. В этой связи большое значение приобретает такая модель остеоартроза, которая может быть легко воспроизводима в условиях эксперимента, показывает стабильные результаты и соответствует структурно-функциональным изменениям, регистрируемым в клинической практике (Широкий А.А., Крылов П.А., Новочадов В.В., 2022; Щелкунова Е.И., Воропаева А.А., Русова Т.В., Штопис И.С.В., 2019; Демкин С.А., Маланин Д.А., Рогова Л.Н., Снигур Г.Л., Григорьева Н.В., Байдова К.В., 2016; Павлова В.Н., Копьева Т.Н. и др., 1988).

По данным литературы очаговый остеоартроз с последующим тестированием препаратов или схем лечения чаще всего моделируют на лабораторных животных, а также собаках и свиньях, однако данные модельные животные не отвечают ряду требований: свиньи наиболее близки по ряду биологических факторов к человеку, но их содержание в экспериментальных целях и проведение операций затруднено, ввиду ограничений связанных с угрозами распространения африканской чумы свиней и необходимостью соблюдать требования компартментализации, установленные Приказом Минсельхоза России от 23.07.2010 № 258 "Об утверждении Правил определения зоосанитарного статуса свиноводческих хозяйств, а также организаций, осуществляющих убой свиней, переработку и хранение продукции свиноводства". Использование собак в острых экспериментах остаётся сложным морально-этическим вопросом, а грызуны и зайцеобразные не могут обеспечить той биомеханической нагрузки на структуры суставов и сухожильно-связочного аппарата, которая возникает у более крупных животных и человека (Щелкунова Е.И., Воропаева А.А., Русова Т.В., Штопис И.С.В., 2019; Каркищенко Н.Н., 2007; McCoy, A.M., 2015; Ribitsch I., Baptista P.M., Lange-Consiglio A., Melotti L. et al., 2020; Smith S.Y., Varela A., Samadfam R., Gasser J.A., Kneissel M., 2017; Reece W.O., Rowe E.W., 2017; Ribitsch I., Baptista P.M., Lange-Consiglio A., Melotti L. et al., 2020; Haffner-Luntzer, M. et al., 2019; Ahern B.J., Parvizi J. et al., 2009; Fortier L.A. et al., 2012).

До сих пор недостаточно изучена возможность использования с этой целью овец (Miozzari H.H., Clark J.M., Jacob H.A. et al. 2004). В зарубежной литературе имеются фрагментарные данные об исследовании на овцах эффектов композитных материалов, стимулирующих репаративный хондрогенез. Так, S. Bordbar, B.N. Lotfi et al., 2020 г. при моделировании остеоартроза использовали инъекционный гидрогель, полученный из внеклеточного матрикса овечьего хряща. Клетки, встроенные в гидрогель, были способны дифференцироваться в хондроциты с ограниченными признаками гипертрофии и остеогенеза. Kostesic P., Vukasovic Barisic A. et al., 2022 г. и Levinson C., Cavalli E. et al., 2021 г. для

восстановления субхондральной кости у овец успешно применяли аутологичные костно-хрящевые трансплантаты, пир этом результат был положительным. Кроме того, для моделирования артроза у овец Miozzari H.H., Clark J.M., Jacob H.A. et al. 2004 г. предложили методику частичной резекции вертлужной впадины тазобедренного сустава, однако быстрое восполнение дефекта за счет фиброзного хряща не позволяет считать эту модель соответствующей изучаемому патологическому процессу и не подходит для индуцирования остеоартроза. Таким образом, нами представляется перспективным поиск новых методов индуцирования патологических процессов в суставах у овец в первую очередь в области коленного сустава (Huey D.J., Hu J.C., Athanasiou K.A., 2012; McLure S.W., Fisher J., Conaghan P.G., Williams S., 2012; Sophia Fox A.J., Bedi A., Rodeo S.A., 2009; Walter E.L.C., Spreng D., Schmöckel H. et ak., 2007).

На фоне развития деструктивных патологий суставов практически всегда в патологический процесс вовлекается и сухожильно-связочный аппарат конечности, локализующийся в непосредственной анатомической близости. Ввиду этого актуальными являются исследования, направленные на изучение влияния препаратов, содержащих цитокины на репаративную регенерацию сухожилий. С другой стороны, тендинит как самостоятельная нозологическая единица весьма широко распространен у животных, особенно крупного рогатого скота и лошадей, а в спортивном и любительском коневодстве заболевания сухожильно-связочного аппарата и суставов в области дистального отдела конечностей стоят на ведущих ролях в выбраковке спортивных лошадей и снижении рабочих качеств животных, нанося существенный экономический ущерб отрасли (Борхунова Е.Н., Позябин С.В., Сароян С.В., Довгий А.И., 2022; Laver L., Marom N., Dnyanesh L., 2017; Malda J., Benders K.E., Klein T.J. et al., 2012). Особенностью лечения тенденитов заключается в том, что ткань сухожилия гиповаскулярна, что приводит к заживлению его путём рубцевания, структурно-функциональной неполноценности и, как следствие - к перманентному травмированию с постоянным рецидивированием тендинита. В этих условиях использование препаратов, способствующих улучшению микроцеркуляции

области заживления, может быть значительно эффективным при лечении пациентов с такими патологиями. Решение данной задачи возможно путём изучения влияния препаратов, содержащих цитокины на процессы регенерации в суставах и сухожильно-связочном аппарате у животных. Использование клеточных технологий в лечении деструктивных процессов нашло свое отражение в области ветеринарной офтальмологии, дерматологии, при коррекции раневых процессов и имеет большой потенциал для дальнейшего применения. Наиболее распространённым лекарственным биопрепаратом, который используется в этих целях, является препарата на основе тромбоцитарной аутоплазмы, хотя он обладает некоторыми общепринятыми недостатками, такими как невозможность контроля количественного и качественного содержания цитокинов. Также применяется и введение стволовых клеток, с разной результативностью и стабильностью получаемых результатов. Изучение возможности препаратов, содержащих цитокины даёт возможность не только провести поиск наиболее эффективных методов коррекции ортопедических заболеваний, но и получить фундаментальные данные о характере их влияния на патогенез и сроки реабилитации (Довгий А.И., Воеводин Д.С., 2021; Лисицын М.П., Губарь Е.А., Плеханов А.Н., Лисицына Е.М., Атлуханов Р.Я., 2020 г, Рябинин С.В., Самодай В.Г., 2018; Пигарева Ю.В., 2016; Juneja S.C., Veillette С, 2013).

Значительным социально-экономическим аспектом являются вопросы оказания качественной ветеринарной помощи мелким домашним животным, в первую очередь собакам и кошкам. В связи с этим, разработка и обоснование методов коррекции ортопедических патологий у домашних и служебных собак является актуальной задачей ветеринарной хирургии. Исходя из статистики патологий опорно-двигательного аппарата у собак известно, что наиболее предрасположен к травмированию коленный сустав, как наиболее сложный и функционально нагруженный у всех представителей семейства псовых. Изучением патологий коленного сустава у собак занимались многие исследователи, однако до сих пор не решены задачи по разработке и внедрению новых, высокоэффективных методов коррекции ряда патологий в этой области

(Квочко А.Н., Хоришко П.А., 2015; Ватников Ю.А., 2004; Воронцов А.А., Ватников Ю.А., Крючков Д.В., 2009; Крыжановский С.В., Ватников Ю.А., Вилковыский И.Ф., 2014; Капустин Р.Ф., Старченко Н.Ю., 2017; Ягникова Я.А., Ягников С.А., 2018; Торба А.И., 2003; Давыдов В.Б., 2000).

Аспекты диагностики, лечения, выявления морфологических характеристик коленного сустава при разрыве передней крестообразной связки у собак достаточно подробно изучены в диссертационных работах Альменшави Э.Г., 2019 г., Подскрёбкиной О.А., 2019 г. и других отечественных и иностранных авторах, (Niebauer G. W., Restucci B., 2023; Boge G. S., Engdahl K., Bergström A. et al., 2020; Wemmers A.C. et al. 2022) в связи с чем, по нашему мнению, на данном этапе дальнейшие поиски в направлении совершенствования методов диагностики и лечения разрыва передней крестообразной связки у собак не целесообразны. В тоже время большой процент встречаемости и фрагментарные данные о новых методах коррекции вывиха коленной чашки у собак (Широкова Е.О., Гасангусейнова Э.К., 2019; Candela Andrade M. et al., 2022; Di Dona F. et al., 2018) диктует необходимость более подробно изучить вопрос развития и внедрения комплексного подхода к профилактике и коррекции данной патологии.

Таким образом, изучение этиологии, патогенеза развития деструктивных патологий суставов и сухожильно-связочного аппарата у животных, а также поиск новых методов их коррекции является актуальным, целесообразным с точки зрения общебиологических знаний, и перспективным с экономической точки зрения, актуальным для народнохозяйственной деятельности.

Степень разработанности темы.

В результате анализа доступной научной литературы нами установлено, что проблемами изучения этиологии и патогенеза ортопедических патологий у животных, в том числе возникновением и развитием артропатологий и тендопатий занималось достаточное количество исследователей, что подтверждает актуальность работы в этом направлении.

Наиболее обстоятельные сведения в области артрологии изложены в работах отечественных (Самошкин И.Б., Слесаренко Н.А., 2008; Слесаренко Н.А., Широкова Е.О., Иванцов В.А., 2022; Ягников С.А., Барсегян Л.С., Ягникова Я.А. и др., 2015; Позябин С.В., Филиппов Ю.И., 2015; Сотников В.В., 2014; Воронцов

A.А., Мордас Е.М., 2010) и иностранных исследователей (Fujii Y., Liu L., Yagasaki L., 2022; Stoppiello L.A., Mapp P.L., Wilson D.R. et al., 2014; Jansen M.P., van der Weiden G.S. et al., 2018; Pozzi A., Hildreth B.E., Rajala-scultz P.J., 2008; Necas A., 2006; Osmond C.S., Marcellin-Little D.J., 2006; Hayashi K., 2004;. Luyten F.P., 2004).

Наряду с этим, значительное количество исследований посвящено изучению структуры и распространенности патологий конечностей у продуктивных животных, а также их влиянию на эффективность животноводства. Результаты исследований в области ортопедии сельскохозяйственных животных представлены в работах Российских авторов (Кудряшов И.Р., Ермолаев В.А., Марьин Е.М., 2022; Позябин С.В., Борхунова Е.Н., Белогуров В.В., Борисов М.С. и др. 2021; Гимранов В.В., Утеев Р.А., Гилязов А.Ф., 2010; Тимофеев С.В., Филлипов Ю.И., Гимранов В.В., 2009; Стекольников А.А., Семенов Б.С., Веремей Э.И., 2009; Мищенко В.А., Яременко Н.А., Павлов Д.К., Мищенко А.В., 2005; Глазунов Ю.В., Крапивко И.С., Глазунова Л.А., 2014; Коломийцев С.М., Толкачев

B.А., Бледнов А.И., 2018; Белогуров В.В., Борхунова Е.Н. и др., 2022; Ковалев А.В., 2020 г.) и иностранных (Руколь В.М., Макеенко Е.В., Ховайло В.А., 2023; Williams N.J., Streeter R.N., 2021; Yadav G.P., Sangwan V., Kumar A., 2019; Feist M., Rieger A., Müller C., Knubben-Schweizer G., 2019; Potterton S.L. et al., 2012; Holzhauer M., Hardenberg C., Bartels C.J., Frankena K., 2006; Hague B.A., Watkins J.P. et al., 1997).

Вопросы диагностики, этиологии, и коррекции патологий коленного сустава у собак нашли отражение в ряде публикаций отечественных (Позябин С.В., Альменшави Э.Г., 2018; Крючков Д.В., Рожков Д.В., Дандал А., 2011; Самошкин И.Б., Булгаков В.Г., Гаврюшенко Н.С., Самошкин И.И., 2011; Руденко К.А., 2017) и зарубежных авторов (Мортелларо К.М., Петаццони М., Веццони А., 2008;

Besselink N.J., Vincken K.L., Bartels L.W. et al., 2020; Döring A.K.,. Junginger J., Hewicker-Trautwein M., 2018; Pinna S., Lanzi F., Tassani C., Mian G., 2020; Bula E., Perry K.L., 2021; Sasaki A., Hidaka Y., Mochizuki M., Honnami M., 2022; Perry K.L., Déjardin L.M., 2021; Coletti T.J., 2014; Mullaji A.B., Marawar S.V., Luthra M., 2008; Lopez M.J., 2004; Curl W.W., Krome J. et al., 1997).

Цель исследований: на основании комплексного подхода разработать и научно обосновать новые методы моделирования и коррекции наиболее значимых ортопедических патологий у животных и предложить их практическое применение в животноводстве для сохранения рабочих и продуктивных качеств.

Задачи исследования:

1. определить наиболее значимые для животноводства, спортивного и служебного собаководства ортопедические патологии и представить новые данные об их распространённости, клинико-морфологических, породных, возрастных и видовых особенностях;

2. разработать и научно обосновать методику индуцирования очагового артроза коленного сустава у овец, включающую оперативный доступ, оперативный приём и дальнейшую поэтапную клинико-морфологическую и томографическую характеристику течения индуцированного артроза как общебиологическую модель для использования в экспериментальной ветеринарии;

3. усовершенствовать методику индуцирования генерализованного гонартроза у овец и определить видовые особенности течения такой формы артропатии как модели развития посттравматических деструктивных процессов у животных;

4. на экспериментальных моделях очагового артроза у овец установить влияние на деструктивные процессы в структурах коленного сустава инновационных препаратов, содержащих цитокины и определить их эффективность по сравнению с применением классической клеточной терапии аутоплазмой, обогащённой тромбоцитами;

5. в экспериментальных условиях на модели разрыва пяточного сухожилия у крыс определить эффективность применения клеточного препарата, содержащего цитокины Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) и Growth-Regulated Oncogene Keratinocyte-Derived Cytokine (GRO-KC) и внедрить результаты при лечении животных с патологиями сухожильно-связочного аппарата;

6. разработать и внедрить в практику методику коррекции вывиха коленной чашки у животных с использованием оригинального подхода к оценке биомеханики тазовой конечности для уменьшения количества послеоперационных осложнений и сокращения времени реабилитации служебных собак и собак компаньонов.

Научная новизна.

Изучена структура распространённости отдельных нозологических форм ортопедических патологий и их корреляция между собой, позволяющая дифференцировать основные заболевания от сопутствующих, что стало возможным благодаря применению современных подходов к диагностике с применением инновационных методов, в том числе ультрасонографических и компьютерно-томографических исследований. В рамках проведения ортопедических диспансеризаций балы разработана и запатентована полезная модель для фиксации рентгеновской кассеты при проведении рентгенографии дистального отдела конечностей у крупного рогатого скота (Патент № 211 201 U1 Российской Федерации).

Разработана методика оценки степени хромоты у животных при гонартрозе коленного сустава с учётом клинических, функциональных, патоморфологических и рентгенографических особенностей развития патологии, позволяющая достоверно определять характер и динамику развития ортопедической патологии и унифицировать анализ результатов научных исследований.

Впервые представлены научные данные о клинических, патологоанатомических, рентгенографических, компьютерно-топографических, гематологических, цитологических и микроморфологических изменениях в структурах коленного сустава у овец при моделировании очагового артроза. На основании результатов разработан и внедрён в практику хирургический способ индуцирования очагового остеоартроза в области дистального метаэпифиза бедренной кости у овец, как общебиологической модели развития локального гонартроза (охраняется патентом на изобретение № 2 732 877 C1 Российской Федерации).

Изучена и подтверждена возможность индуцирования генерализованного гонартроза у овец путём десмотомии передней крестообразной связки с последующей ретракцией сустава для увеличения межсуставной щели до 5 мм, который может рассматриваться как создание общебиологической модели развития генерализованного гонартроза. Изучены клинико-морфологические особенности патогенеза данного процесса и определены реперные точки контроля его течения.

Установлено, что применение препаратов, содержащих цитокины Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) и Growth-Regulated Oncogene Keratinocyte-Derived Cytokine (GRO-KC) в комплексной коррекции деструктивных патологий суставов, является эффективным способом стимуляции кровообращения путём реваскуляризации атрофических и дистрофических состояний в тканях. Объективность полученных данных подтверждается общеклиническими, патологоанатомическими, рентгенографическими, гематологическими, микроморфологическими и микроморфометрическими исследованиями.

Доказано, что применение препаратов, содержащих цитокины в лечении животных с травмами и разрывами сухожилий целесообразно, приводит к более раннему образованию регенерата, а структура регенерата формируется в оптимальном биомеханическом плане, что подтверждается общеклиническими,

патологоанатомическими, микроморфологическими, микроморфометрическими и биомеханическими исследованиями.

Изучена структура распространённости патологий тазовых конечностей у служебных собак и собак компаньонов в Московском регионе с учётом породно-возрастных особенностей. Учтановлены группы риска к развитию ортопедических патологий, необходимые для разработки предложений по профилактике наиболее значимых из них.

Разработан, научно обоснован и внедрён в практику способ хирургической коррекции медиального вывиха коленной чашки у декоративных пород собак с применением парциальной остеотомии и транспозиции гребня большеберцовой кости в анатомически правильное расположение, который применяется у самой многочисленной группы животных с данной патологией и применяется в лечении собак компаньонов и служебных собак (охраняется патентом на изобретение № 2 745 652 О Российской Федерации).

Теоретическая и практическая значимость работы. Разработаны и успешно внедрены в практику хирургические способы индуцирования, как очагового, так и генерализованного остеоартроза в области дистального метаэпифиза бедренной кости у овец. Данные методики позволяют стабильно воспроизводить комплекс деструктивных явлений в суставах, что является важным этапом в разработке новых способов лечения таких патологий и исследовании новых лекарственных препаратов для их лечения, применяющихся как в ветеринарии, так и в медицине.

Выявленная динамика изменений свойств и состава синовиальной жидкости у овец при моделировании деструктивных процессов в суставах позволяет утверждать, что проведение таких исследований позволяет объективно оценивать характер и степень развития таких патологий.

Изучено и оценено с практической точки зрения влияние препаратов, содержащих цитокина на процесс развития артроза у овец, заключающееся в

реваскуляризации параартикулярных тканей и нормализации кровообращения сустава, как одного из важных факторов восстановления его функции.

В результате применения препарата, содержащего цитокины в остром эксперименте по моделированию разрыва сухожилия у крыс доказан терапевтический эффект в виде ускоренной регенерации и последующего биомеханически адекватного ремоделирования скудно васкуляризированных тканей.

Полученные результаты о применении цитокинов в коррекции артропатий являются основополагающими в разработке новых схем и способов лечения заболеваний суставов и сухожильно-связочного аппарата у животных с применением клеточной медицины, в частности в любительском и спортивном коневодстве.

Результаты исследований создают теоретическую базу для совершенствования методов изучения видовых и породных особенностей течения ортопедических патологий у животных, а также позволяют более глубоко понять закономерности процессов, происходящих в суставах и сухожилиях при использовании различных методов стимуляции регенеративных процессов.

Методология и методы исследования. В работе использован комплексный методологический подход, включающий статистическую обработку результатов, общеклинические, патологоанатомические, морфологические,

микроморфологические, гематологические, цитологические, биомеханические, рентгенографические, томографические методы исследования, а также экспериментальное моделирование с использованием лабораторных и продуктивных животных. В ходе исследований выполняли диагностику патологий и лечение клинически больных продуктивных, служебных, спортивных и животных компаньонов. Применены такие методы научного познания, как наблюдение, анализ, интерпретация и обобщение.

Соответствие паспорту специальности. По специальности 4.2.1. Патология животных, морфология, физиология, фармакология и

токсикология, диссертационная работа выполнена в следующих направлениях исследований:

1. Изучение и описание закономерностей морфогенеза, цито-, гисто- и органогенеза, дифференцировки клеток и внутриклеточных структур, межклеточных взаимодействий, регенераторных процессов в индивидуальном развитии, их адаптации к воздействию экзогенных и эндогенных факторов у животных на макро-, микро- и ультраструктурном уровне с использованием морфологических и других методов исследования.

2. Этиологические факторы, патогенетические механизмы развития заболеваний, типовые патологические процессы и реакции организма животных на воздействие патогенного фактора, механизмы исходов и осложнений болезни. Разработка этио- и патогенетической терапии с учётом взаимодействия терапевтических факторов с защитно-приспособительными механизмами организма.

3. Общепатологические процессы у животных, патогенетические механизмы и патоморфологические изменения при болезнях различной этиологии. Методы установления основного заболевания, его осложнений при сопутствующих патологических процессах и их роль в танатогенезе.

4. Реконструктивно-восстановительная хирургия, трансплантация органов и тканей, разработка оперативных методов и приёмов у животных в эксперименте и при патологиях. Военно-полевая хирургия животных.

5. Исследование клинической эффективности лекарственных средств, биологически активных препаратов, кормовых добавок и их сочетаний при различных болезнях с учетом видовых, возрастных и других особенностей животных.

Положения, выносимые на защиту:

1. Характеристика структуры, видовых и породных особенностей развития ортопедических патологий у животных является основой для выбора

приоритетного направления в разработке эффективных методов их коррекции и профилактики.

2. Авторская методика индуцирования локального и генерализованного артроза у овец - объективная и воспроизводимая модель для изучения и совершенствования методов коррекции артропатий в ветеринарной медицине.

3. Клинико-морфологические, цитологические и томографические показатели модельного остеоартроза у овец как фундаментальная основа в расширении общебиологических знаний об артропатиях крупных суставов у различных видов животных.

Список литературы диссертационного исследования доктор наук Качалин Михаил Дмитриевич, 2024 год

tJ - - *

* ~ -

' «. 3 • -

\ 4 ^ N

^ > \ V

• r ; , v.

R

. I-1

А

% V-vv 4

□

^^^AW 4 ЧТб

Рисунок 3.4.1.12. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия на 30

3

сутки после тенорафии у крыс I - контрольной группы: А - область регенерата, гематоксилин и эозин, об. 20, ок. 10: 1 - рыхло расположенные пучки коллагеновых волокон, 2 - плотно расположенные пучки коллагеновых волокон, 3 - перитенон с признаками склероза и умеренной макрофагально-лимфоцитарный инфильтрацией, на фоне кровеносных сосудов (стрелки); Б -очагово расположенный макрофагально-лимфоцитарный инфильтрат, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: 1 -. область деструкции в ткани регенерата.

Спустя 60 суток регенерат имеет пучковое строение, в перитеноне признаки склероза, однако на этом фоне очагово встречаются адипоциты. Пучки коллагеновых волокон отличаются неравномерной плотностью упаковки, неодинаковым пространственным взаиморасположением, что характеризует рубцовые изменения сухожилия. Среди них встречается как параллельное, так и косое взаиморасположение, в связи с чем они неодинаково окрашиваются.

Паравазально отмечены признаки фиброза и вплоть до 60-х суток после тенорафии отмечается умеренная макрофагально-лимфоцитарная инфильтрация (Рисунок 3.4.1.13.).

Рисунок 3.4.1.13. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия на 60 сутки после тенорафии у крыс I - контрольной группы: А - фиброзная ткань регенерата, гематоксилин и эозин, об. 10, ок. 10: 1 - плотно упакованные разнонаправленные пучки коллагеновых волокон, 2 - перитенон с явлениями склероза; Б -регенерат с сосудами венозного типа (стрелки) с признаками склероза стенки, пучки коллагеновых волокон извитой конфигурации, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10.

Несмотря на то, что в структуре регенерата преобладают области с плотной упаковкой пучков коллагеновых волокон прямолинейной или волнистой микроархитектоники, богатые фибробластами и фиброцитами, наряду с этим видны области мукоидного и фибриноидного набухания с макрофагальной инфильтрацией, а также области с апоптозом клеток фибробластического дифферона, что нужно рассматривать как признаки продолжающегося ремоделирования регенерата (Рисунок 3.4.1.14.).

Рисунок 3.4.1.14. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия на 60 сутки после тенорафии у крыс I - контрольной группы: А -структура регенерата, гематоксилин и эозин, об. 20, ок. 10: очаг дезорганизации фиброзной ткани в толще регенерата (овал); Б -структура регенерата, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10: фибробциты с признакаим апоптоза (стрелки).

Таким образом, учитывая то, что крысы относятся к стопоходящим животным и при осуществлении статолокомоторных актов нагрузка на пяточное

сухожилие несравнимо пропорционально меньшая, чем у пальцеходящих, спустя 60 суток после тенорафии без дополнительного лечения, всё ещё активно протекают процессы ремоделирования тканевых элементов.

Результаты микроморфологических исследований у крыс из II - опытной группы. Через 24 часа наблюдали некроз ткани сухожилия в области разреза и наложения шва и перифокальную воспалительную инфильтрацию (Рисунок 3.4.1.15.).

Рисунок 3.4.1.15. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в области тенорафии через 24 часа после операции у крыс II - опытной группы: А -общий вид, гематоксилин и эозин, об. 10, ок. 10: 1 - область дистрофических и некротических изменений в ткани сухожилия, 2 -отёк межклеточного вещества и воспалительная инфильтрация; Б - область некроза сухожилия, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: отёк межклеточного вещества, дезорганизация пучков коллагеновых волокон, фибробласты в состоянии некроза (овал).

Следует отметить, что нейтрофильно-макрофагальная инфильтрация в перитеноне и эндотеноне была выражена в большей степени, чем у животных из I - контрольной группы, при этом инфильтрат располагался в межволоконных пространствах и характеризовался полосовидным расположением (Рисунок 3.4.1.16.).

.»'— '»-'-о* ■

' я— -.4 - V ¿it.tr -

1

* * * ■ /

' * *

»V * Г ' *

ы

* - - Т», • . * • : ^

п. .

1

А

К ¥

мм*

> . - '

щ

а Ш - > 4

тжиР

^ШН

Рисунок 3.4.1.16. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в области тенорафии через 24 часа после операции у крыс II - опытной группы: А -воспалительный инфильтрат, гематоксилин и эозин, об. 10, ок. 10: 1 - инфильтрат распространяющийся из эпитенона, 2 - инфильтрат распространяющийся в перитенон; Б - паравазальный нейтрофильно-макрофагальный инфильтрат, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: 1 - перитенон, 2 - ткань сухожилия в состоянии дистрофии.

Примечательно, что инфильтрат в области эпитенона и поверхностных слоях сухожилия состоял из нейтрофилов и макрофагов, а в толще сухожилия в нём регистрировали многочисленные макрофаги (число их больше, чем в контроле). Это может указывать на локальное более раннее завершение нейтрофильной реакции и начало процесса резорбции детрита в толще сухожилия (Рисунок 3.4.1.17.).

, .. г I ^ ^ а ^ I < I

I ЖеЗЕч 5 г^ЙШ

■ > ■

■ дта™ _. г- _ -.-•

2»:т

4 .

□

■ 4

Ч Г Ш Г г

и . Г1

Шъ

Рисунок 3.4.1.17. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в

области тенорафии через 24 часа после операции у крыс II - опытной группы: А, Б - клеточный инфильтрат в толще пучков сухожилия представленный макрофагами и лимфоцитами, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10: 1 -межклеточное вещество с признаками отёка и дезорганизации пучков коллагеновых волокон.

Через 7 суток в области шва наблюдается зона некроза ткани сухожилия с макрофагально-нейтрофильной инфильтрацией. При этом некротически измененный тяж окружен зрелыми грануляциями с взаимопараллельно расположенными тонкими пучками коллагеновых волокон и крупными молодыми фибробластами. Между пучков некротизированной ткани расположены крупные отростчатые фибробласты и тонкие, хорошо структурированные пучки коллагеновых волокон. Кроме того, между пучками коллагеновых волокон наблюдаются прослойки соединительной ткани с большим содержанием адипоцитов, её расположение соответствует перитенону, а представительство её значительно меньше, чем в контрольной группе (Рисунок 3.4.1.18.).

Рисунок 3.4.1.18. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в области тенорафии через 7 суток после операции у крыс II - опытной группы, гематоксилин и эозин, об. 10, ок. 10: 1 - некротически измененная ткань сухожилия, в межволоконных пространствах которого находится клеточный инфильтрат (стрелки), 2 - перифокально расположенные зрелые грануляции; 3 -область прохождения нити.

Рядом со швом находится некротически измененная ткань сухожилия, здесь видна воспалительная инфильтрация. Среди дистрофически измененных пучков коллагеновых волокон сухожилия видны фибробласты и вновь образованные тонкие пучки коллагеновых волокон регенерата, которые расположены главным образом взаимопараллельно (Рисунок 3.4.1.19.).

Рисунок 3.4.1.19. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в области тенорафии через 7 суток после операции у крыс II - опытной группы, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: в регенерате сухожилия видны фибробласты и тонкие пучки коллагеновых волокон, имеющие преимущественно продольное расположение, стрелками показаны кровеносные сосуды.

Через 14 суток небольшие очаги некроза сохраняются только около нити, которая инкапсулируется и постепенно резорбируется с помощью макрофагов и гигантских многоядерных клеток. Перифокально от нити также видны признаки макрофагальной резорбции детрита.

Регенерат сформирован фиброзной тканью, которая имеет пучковое строение. Пучки коллагеновых волокон толще, чем в контроле, отличаются плотным расположением и выраженной волнистостью конфигурации, что может соответствовать активному коллагеногенезу. Фибробласты крупные, отростчатые, регенерат хорошо васкуляризован. Между пучками коллагеновых волокон расположен перитенон, сформированный прослойками соединительной ткани с кровеносными сосудами и многочисленными сидерофагами. Он тоньше, чем в контрольных образцах, и содержит лишь единичные адипоциты. В регенерате паравазально сохраняется умеренная лимфоидно-макрофагальная инфильтрация (Рисунок 3.4.1.20.).

Рисунок 3.4.1.20. - Микроморфологическая картина пяточного сухожилия в области тенорафии через 14 суток после операции у крыс II - опытной группы, гематоксилин и эозин, об. 4, ок. 10: 1 - пучковое строение фиброзной ткани

регенерата в области шва; 2 - область прохождения нити; 3 - область некроза.

Регенерат сформирован зрелой фиброзной тканью с признаками ремоделирования (Рисунок 3.4.1.21.).

Рисунок 3.4.1.21. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 14 суток после операции у крыс II -опытной группы: А - регенерат ткани сухожилия, гематоксилин и эозин, об. 20, ок. 10: область с плотно упакованными пучками коллагеновых волокон волнистой конфигурации, сосуд венозного типа (стрелка); Б - регенерат ткани сухожилия, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10: среди крупных фибробластов виден сидерофаг (стрелка).

Через 30 суток регенерат имеет пучковую структуру, между пучками коллагеновых волокон видны прослойки перитенона, содержащие адипоциты. Около шва наблюдаются признаки выраженного фиброза, представленные зрелой фиброзной тканью. Соединительнотканный регенерат сформирован волнистыми, плотно упакованными, разнонаправленными пучками коллагеновых волокон, среди которых видны многочисленные фибробласты.

В перитеноне также отмечены признаки фиброза в виде уплотнения пучков коллагеновых волокон среди адипоцитов, деструкции адипоцитов и замещения их долек фиброзной тканью (Рисунок 3.4.1.22.).

МЦ

-

_ _ в!4

□

ч ^ -

ч №

^Р^ КЗ -- гч.

Ч V ч

А

Б

Рисунок 3.4.1.22. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 30 суток после операции у крыс II -опытной группы: А - пучки коллагеновых волокон регенерата, гематоксилин и эозин, об. 10, ок. 10: 1 - коллагеновые волокна тонкие, плотно расположены, видны многочисленные фибробласты; 2 - перитенон; Б - перитенон ткани сухожилия, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: 1 - явления склероза в перитеноне, деструктивно измененные адипоциты (овал).

Кроме того, наблюдается умеренная макрофагальная инфильтрация, многочисленны области с апоптозом фибробластов, деструкцией межклеточного вещества и признаками макрофагальной резорбции, что указывает на продолжающиеся процессы ремоделирования ткани на всей площади регенерата (Рисунок 3.4.1.23.).

-

шршш

Рисунок 3.4.1.23. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 30 суток после операции у крыс II -опытной группы: А - регенерат сухожилия, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10: 1 - клетки фибробластического дифферона с признаками апоптоза, межклеточное вещество с признаками дезорганизации (овал); Б - макрофагальный инфильтрат в паравазальной области, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10.

На 60-е сутки регенерат сохраняет своё пучковое строение. Пучки коллагеновых волокон плотно расположены, могут иметь прямолинейную или волнистую конфигурации. Большая часть пучков коллагеновых волокон расположена взаимопараллельно. Вместе с этим встречается разнонаправленные пучки, что характерно для рубцовых изменений (Рисунок 3.4.1.24., 3.4.1.25.).

Рисунок 3.4.1.24. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 60 суток после операции у крыс II -опытной группы, гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10: 1 - пучки коллагеновых волокон регенерата; 2 - перитенон с признаками фиброза.

Пучки коллагеновых волокон в ткани регенерата толстые, плотно упакованы, количество фиброцитов значительно. Видны области дистрофических изменений с макрофагальной резорбцией (Рисунок 3.4.1.25.).

Рисунок 3.4.1.25. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 60 суток после операции у крыс II -опытной группы: А - область с разнонаправленными пучками коллагеновых волокон, гематоксилин и эозин, об. 4, ок. 10; Б - пучки коллагеновых волокон хорошо структурированы, среди них видны фиброциты, сосуд венозного типа (стрелка), гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10; В - область регенерата с толстыми пучками коллагеновых волокон с выраженной волнистой конфигурацией, между ними видны фиброциты, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10; Г - область регенерата с прямолинейными тонкими пучками коллагеновых волокон, среди них видны фиброциты и фибробласты, гематоксилин и эозин, об. 100, ок. 10.

Наряду с этим встречаются области с массовым апоптозом фиброцитов и макрофагальной резорбцией - признаки ремоделирования регенерата, выраженные в большей степени, чем в контроле (Рисунок 3.4.1.26.).

Рисунок 3.4.1.26. - Микроморфологическая картина регенерата пяточного сухожилия в области тенорафии через 60 суток после операции у крыс II -опытной группы: множество клетки фибробластического дифферона находящихся в состоянии апоптоза (стрелки), гематоксилин и эозин, об. 40, ок. 10.

Таким образом, после применения секретома в области воздействия через 24 часа в инфильтрате появляются многочисленные макрофаги. Через 7 суток ткань регенерата имеет более зрелый вид во II - опытной группе, чем в I -контрольной. Это проявляется структурированностью пучков коллагеновых волокон, большей плотностью их упаковки. Очаги некроза ткани сохраняются до 14 суток в области шва, прогрессивно уменьшаясь в размерах и замещаясь тканью регенерата.

Регенерат приобретает пучковое строение на 14 сутки, оно сохраняется на 30-е и 60-е сутки опыта. К 60-м суткам в перитеноне регенерата развивается склероз, пучки коллагеновых волокон фиброзной ткани имеют плотную упаковку и преимущественно взаимопараллельное расположение, однако встречаются области с их разнонаправленной ориентацией. С 14-х суток отмечаются признаки ремоделирования: апоптоз фиброцитов и фибробластов, который выражен в

большей степени, чем в контрольных образцах, макрофагальная инфильтрация регенерата. Эти признаки регистрируются и на 60-е сутки эксперимента, что свидетельствует о продолжающихся процессах ремоделирования ткани. Ткань регенерата представляется более зрелой, чем в контрольных образцах, так как большинство пучков коллагеновых волокон располагается взаимопараллельно. Можно полагать, что именно этот фактор наряду со склеротическим уплотнением перитенона, эпитенона и утолщением всего сухожильного тяжа пяточного сухожилия и определяет восстановление биомеханических свойств сухожилия. Регенерат сухожилия выдерживает физиологические растягивающие нагрузки, действующие в продольном направлении при поступательном движении конечности, благодаря продольному расположению пучков коллагеновых волокон в фиброзной ткани регенерата, что продемонстрировано в разделе «3.4.3. Результаты биомеханических исследований у экспериментальных крыс».

У животных из I - контрольной группы отмечали разнонаправленное расположение пучков коллагеновых волокон в фиброзной ткани регенерата, их расположение не соответствует биомеханической оси конечности. При действии растягивающей нагрузки в продольном направлении такие пучки не могут обеспечить надлежащие прочностные и упруго-деформативные характеристики сухожилия, что является морфологической основой для повторных его травм.

3.4.2. Результаты микроморфометрических исследований у экспериментальных крыс

Микроморфометрические исследования позволяют оценить количественные характеристики регенератов сухожилий. В ходе выполнения исследования определяли общую толщину регенерата (мкм); толщину пучков коллагеновых волокон 1 порядка (мкм); толщину пучков коллагеновых волокон 2 порядка (мкм); толщину перитенона (мкм); количество фибробластов в поле зрения (при увеличении в 400 раз); количество гемокапилляров в поле зрения (при увеличении в 400 раз).

Результаты микроморфометрических исследований регенератов сухожилия представлены в таблицах 3.4.2.1., 3.4.2.2., 3.4.2.3.

Таблица 3.4.2.1. - Динамика толщины регенерата сухожилия (мкм); Me (Q1-Q3)

Срок эксперимента, Толщина регенерата сухожилия в разных группах, мкм

интактные сухожилия

сут I - контрольная II - опытная

7 1070* 1430*

(1063-1079) (1419-1442)

14 889* 1240*

(878-897) (1231-1249) 725

30 834* 1160* (695^ 734)

(822-843) (1152-1170)

60 582* 743*

(572-598) (732-756)

* Статистически значимые отличия группы I - контрольная от групп II - опытная и интактных

сухожилий (p<0,05).

Таблица 3.4.2.2. - Сравнительная характеристика толщины пучков коллагеновых волокон регенерата сухожилия 1 и 2 порядков (мкм) и

толщины перитенона (мкм); Me (Q1-Q3)

Срок эксперимента и группа Показатели

Толщина пучков коллагеновых волокон 1 порядка, мкм Толщина пучков коллагеновых волокон 2 порядка, мкм Толщина перитенона, мкм

7 суток

I - контрольная 2,5 (2,2-2,7) Не организованы Не организованы

II - опытная 2,3 (2,0-2,5) Не организованы Не организованы

14 суток

I - контрольная 4,8 (4,2-5,0) 124 (110-134) 35 (28-39)

II - опытная 4,1 (2,5-4,3) 126 (112-136) 36 (29-40)

30 суток

Срок эксперимента и группа Показатели

Толщина пучков коллагеновых волокон 1 порядка, мкм Толщина пучков коллагеновых волокон 2 порядка, мкм Толщина перитенона, мкм

I - контрольная 5,0 (4,8-5,2) 272* (262-281) 65* (56-70)

II - опытная 4,2 (4,0-4,5) 215*(209-225) 25* (19-31)

60 суток

I - контрольная 5,1 (4,8-5,3) 172* (157-181) 17 (16-21)

II - опытная 4,9 (4,8-5,1) 123*(117-131) 19 (17-24)

Интактная группа 6,2 (5,9+6,4) 106 (99+109) 12 (10+15)

* Статистически значимые отличия группы I - контрольная от групп II - опытная и интактных сухожилий (р<0,05)

Таблица 3.4.2.3. - Сравнительная характеристика регенератов сухожилия по количеству фибробластов и гемокапилляров (в поле зрения при х400), Ме (0^03)

Срок эксперимента и группа Показатели

Кол-во фибробластов Кол-во гемокапилляров

7 суток

I - контрольная 47*(41-52) 10(9-12)

II - опытная 68* (65-72) 11 (10-12)

14 суток

I - контрольная 70* (65-74) 8 (7-10)

II - опытная 52*(46-55) 6 (4-8)

Срок эксперимента и группа Показатели

Кол-во фибробластов Кол-во гемокапилляров

30 суток

I - контрольная 65*(60-69) 4* (3-6)

II - опытная 48*(42-51) 6* (4-8)

60 суток

I - контрольная 64*(58-67) 3* (1-4)

II - опытная 44*(40-48) 6* (4-8)

Интактная группа 36 (34+40) 6 (4+8)

* Статистически значимые отличия группы I - контрольная от групы II - опытная и интактных сухожилий (р<0,05)

При оценке межгрупповых отличий показано, что в процессе репарации статистически значимые различия толщины регенерата появлялись между группами I - контрольная и II - опытная на 7-е сутки и сохранялись на всех сроках эксперимента. По данному показателю опытные образцы на 7-е, 14-е, 30-е и 60-е сутки превосходили контрольные и были несколько больше, чем в интактной группе, очевидно за счет рубцовых изменений сухожилий и околосухожильных тканей.

При этом в обеих группах общие закономерности динамики толщины регенерата были идентичны: максимальная толщина выявлена на 7-е сутки, что связано с воспалительной инфильтрацией области заживления. С 14-х по 60-е сутки данный показатель постепенно уменьшается и к концу эксперимента составляет около 50 % от толщины, определенной на 7-е сутки.

Толщина пучков коллагеновых волокон 1 порядка статистически значимых межгрупповых отличий не имела (критерий Тьюки, р<0,05). Это может указывать на строгую генетическую детерминированность данного показателя.

Вместе с тем, в контрольной и опытной группах толщина пучков коллагеновых волокон немного меньше, чем в интактном сухожилии.

В то же время по показателю толщины пучков коллагеновых волокон 2

порядка на 30-е и 60-е сутки эксперимента выявлены различия: контрольные образцы превосходили опытные, что может быть обусловлено более выраженными склеротическими изменениями, регистрируемыми при светооптических исследованиях. И в контрольной, и в опытной группах данный показатель больше, чем в интактных образцах, что также можно объяснить рубцовыми изменениями.

Очевидно, по той же причине толщина перитенона в подопытных группах больше, чем в интактной. При этом толщина перитенона отличается в контрольной и опытной группах только на 30-е сутки эксперимента: по этому показателю контрольные образцы значительно превосходят опытные. К 60-м суткам отличия нивелируются, очевидно, по мере ремоделирования регенерата.

Количественное представительство фибробластов в ткани регенерата имело статистически значимые отличия между группами на всех сроках эксперимента. При этом на 7-е сутки опытные образцы превосходили контрольные по данному показателю, а на 14-е, 30-е и 60-е уступали им. Такая картина может быть связана с ранним усилением пролиферативной и биосинтетической активности клеток фибробластического дифферона, а затем - с более ранним началом ремоделирования в результате действия секретома. Тем не менее, на 60-е сутки в обеих подопытных группах этот показатель выше, чем в интактных образцах.

По показателю количества гемокапилляров статистически значимые отличия установлены между группами на 30-е и 60-е сутки эксперимента: в эти сроки опытные образцы не только превосходят контрольные, но и соответствуют нормальным значениям, что указывает на лучшее кровоснабжение ткани регенерата, сформированного под влиянием секретома.

Сводная таблица, показывающая отличия между изученными показателями, позволяет оценить отличия динамики репарации и проявления процесса ремоделирования в ткани регенерата (Таблица 3.4.2.4.).

Таблица 3.4.2.4. - Сравнительная характеристика динамики отличий микроморфометрических показателей в контрольной и опытной группах

Группы Срок эксперимента и показатели

7 суток 14 суток 30 суток 60 суток

Общая толщина регенерата, мкм

I - контрольная + + + +

II - опытная + + + +

Толщина пучков коллагеновых волокон 1 порядка, мкм

I - контрольная - - - -

II - опытная - - - -

Толщина пучков коллагеновых волокон 2 порядка, мкм

I - контрольная - - + +

II - опытная - - + +

Толщина перитенона, мкм

I - контрольная - - + -

II - опытная - - + -

Количество фибробластов (в поле зрения при х400)

I - контрольная + + + +

II - опытная + + + +

Количество гемокапилляров (в поле зрения при х400)

I - контрольная - - + +

Группы Срок эксперимента и показатели

7 суток 14 суток 30 суток 60 суток

II - опытная - - + +

Обозначения: - статистически значимых отличий нет; статистически значимые отличия есть, показатель больше; + статистически значимые отличия есть, показатель меньше.

Из таблицы 3.4.2.4. следует, что на всех сроках эксперимента наиболее показательными критериями для оценки являются общая толщина регенерата и количество фибробластов. Отличия в течение эксперимента не выявлены по показателю толщины пучков коллагеновых волокон 1 порядка. Отличия между группами по большинству критериев регистрируются на 30-е и 60-е сутки эксперимента, что совпадает со сроком активного ремоделирования регенерата.

Таким образом, на основании микроморфометрических исследований установлено, что в опытной группе процесс ремоделирования регенерата начинается раньше. Структура регенерата по совокупности изученных показателей свидетельствует о его большей функциональной полноценности по сравнению с контролем.

В заключении можно отметить, что выявленные особенности динамики комплекса морфологических и микроморфометрических показателей свидетельствуют о том, что под влиянием клеточного препарата, содержащего цитокины в сухожилии на фоне сохранения общих закономерностей репарации процессы ремоделирования (созревания регенерата) начинаются раньше, что приводит к формированию более полноценного, по сравнению с естественным заживлением, в структурном и функциональном отношении регенерата.

3.4.3. Результаты биомеханических исследований у экспериментальных крыс

После вывода из эксперимента на 60-е сутки изоляцию необходимого участка тазовой конечности, а именно, область пяточного сухожилия, проводили

путём разреза кожи при помощи скальпеля и остроконечных ножниц. Далее проводили тупую препаровку мышц при помощи анатомического пинцета, шпателя, тупоконечных ножниц. После выделения пяточного сухожилия из фасциального футляра проводили его полную изоляцию от конечности лабораторного животного.

Затем фиксировали пяточное сухожилие на пластины, разработанные с использованием 3D моделирования. Проксимальная часть пяточного сухожилия крепилась к пластинам при помощи цианокрилатного клея, дистальная часть крепилась непосредственно к аппарату «универсальная испытательная машина Серия LFM - 50 кН». Результаты биомеханических испытаний на растяжение вплоть до разрушения пяточного сухожилия представлены в таблице 3.4.3.1.

Таблица 3.4.3.1. - Результаты биомеханических испытаний на растяжение пяточного сухожилия у крыс

Группа Образец, № Среднее значение силы разрушения, кН Среднее значение силы разрушения, кгс

0,075 0,058 5,91

I - контроль 0,05

0,048

0,09 0,081 8,26

II - опыт 0,08

0,072

0,085

0,08

Интактные 0,076 0,076 7,75

сухожилия 0,078

0,060

0,079

На основе полученных результатов проведённых испытаний можно утверждать, что прочность пяточных сухожилий у крыс из II - опытной группы

превосходили по силе, прилагаемой для разрушения интактные образцы на 0,005 кН и образцы от крыс I - контрольной группы на 0,023 кН.

3.5. Совершенствование методов коррекции и лечения вывиха

коленной чашки у собак

Исходя из того, что основные регистрируемые патологии опорного аппарата тазовых конечностей, которые вызывают клиническую симптоматику у собак в 23,7 % случаев являются разрывом передней крестообразной связки, а в 20,5 % обуславливается вывихом коленной чашки, мы считаем необходимым уделить особое внимание изучению этих патологий.

Известно, что медиальный вывих коленной чашки у декоративных пород собак - генетически обусловленная патология, имеет четыре степени, при этом классически их определяют положением и свободой движения коленной чашки без учёта углов деформации анатомических структур костной основы тазовой конечности. Нами ранее было определено, что на ранних стадиях заболевания (первая - вторая степень) вывих можно спрогнозировать, а для коррекции патологии применяют различные методики хирургического вмешательства (Качалин М. Д., Позябин С. В., 2013; Качалин М. Д., Позябин С. В., 2014; Качалин М. Д., Белогуров В. В., Позябин С. В., 2018; Tobias K. M., 2012)

Представленный в разделе диссертации «1. Обзор литературы» анализ научной литературы диктует необходимость поиска новых способов восстановления биомеханической оси коленной ветви квадрицепса, при котором коленная чашка стабилизируется в анатомически правильном положении за счёт равнонаправленных боковых усилий, прилагаемых к ней при сгибании и разгибании (Yukihiro F., Hiroki K., 2009).

3.5.1. Клинико-рентгенографическая характеристика вывиха коленной чашки у собак

Результаты изучения распространенности и клинико-рентгенографические особенности вывиха коленной чашки у собак, представлены в таблице 3.5.1.1. У всех животных мы определяли форму, стадию вывиха, отклонения диафизарно-метафизарного угла тел бедренной и большеберцовой кости, а также встречаемость этих форм у собак с разной массой тела с учётом степени патологии для поиска новых подходов к решению ряда вопросов, обусловленных сложностью лечения собак с данной патологией.

Результаты клинико-рентгенографических исследований нами были представлены в научной статье: Качалин, М. Д. Парциальная остеотомия при коррекции медиального вывиха коленной чашки у собак / М. Д. Качалин, С. В. Позябин // Ветеринария. - 2023. - № 4. - С. 49-52.

Установлено, что у собак преобладает медиальный вывих, на долю которого приходится 86 % клинических случаев, а у крупных собак - латеральный. При этом медиальный вывих встречается преимущественно у собак с массой тела менее 5 кг., что составило 67,4 % случаев от 132 животных с таким типом патологии. При этом, латеральная форма патологии у данной группы животных встретилась в 3-х случаях. В породном отношении в исследованиях преобладали йоркширское терьеры, той терьеры и шпицы. Кроме того, из данных исследований определено, что наибольший процент приходится на 2-3 степень медиального вывиха коленной чашки (в сумме 72,8 %), в связи с чем необходимо уделять большее внимание разработке способов и методов лечения животных с данной вариацией патологии.

Таблица 3.5.1.1. - Распространенность и характеристика вывиха коленной чашки у собак (п=153)

Исследуемые данные Направление вывиха коленной чашки

медиальное латеральное

Всего (гол) / % от общего кол-ва 132 86 21 14

Собаки с массой тела:

1-5 кг. 89 67,4 3 14,3

5-10 кг. 34 25,8 6 28,6

Более 15 кг. 9 6,8 12 57,1

Степень патологии:

первая 14 10,6 0 0

вторая 59 44,7 5 23,8

третья 37 28 12 57,1

четвертая 22 16,7 4 19,1

При изучении рентгенометрических показателей отношения диафизов бедренной и большеберцовой костей к биомеханическим осям опоры конечности установлено, что при второй и третей степени у большинства собак происходит вальгусная ангуляция дистального метаэпифиза большеберцовой кости в среднем на 5° - 10° относительно нормальных значений, и варусная деформация проксимальной части большеберцовой кости в тех же интервалах. При этом в качестве средних допустимых значений ангуляционных деформаций дистального эпифиза бедренной кости и проксимального эпифиза большеберцовой кости, мы использовали усреднённый референсный интервал для мезоцефальных пород собак 0° - 7°, так как для каждой породы данные значения варьируются, и даже в пределах одной породы могут различаться из-за изменения фенотипа отдельной особи (Tobias K. M., Johnston S. A., 2012). Суммирование таких деформаций может приводить к искривлению оси конечности на 20 и более градусов и осложнять течение патологии (Таблица 3.5.1.2.). Результаты рентгенограммометрии мы учитывали при совершенствовании и разработке

авторской методики хирургической коррекции данного вида патологии, которая представлена в патенте № 2745652 С1 РФ, МПК А6Ш 1/00, А61В 17/56 - Способ хирургической коррекции медиального вывиха коленной чашки у декоративных пород собак с применением парциальной остеотомии и транспозиции гребня большеберцовой кости в анатомически правильное расположение.

Таблица 3.5.1.2. - Рентгенометрическая и рентгенографическая характеристика медиального вывиха коленной чашки (п=132)

Степень медиального вывиха первая вторая третья четвертая

Количество животных, голов 14 59 37 12

Варусная ангуляция диафизарно-эпифизарного отдела дистальной части бедренной кости, градусы:

0-5° 11 31 17 0

5-10° 3 22 9 4

Более 10° 0 6 11 8

Вальгусная ангуляция диафизарно-эпифизарного отдела проксимальной части большеберцовой кости, градусы:

0-5° 9 18 6 0

5-10° 5 39 22 3

Более 10° 0 2 9 9

Наличие остеоартроза, степень:

- отсутствует 14 28 0 0

- первая 0 14 8 0

- вторая 0 12 19 1

- третья 0 5 10 5

- четвертая 0 0 0 6

Исходя из данных литературы (Yasukawa S. et al., 2016; DeTora M.D., Boudrieau R.J., 2016; Lee J., Sim H., Jeong J. et al., 2020), нормативными показателями эпифизарно-диафизарной ангуляции бедренной кости является искривление ~ 5°, а случаи вывихов коленной чашки с такими результатами

измерений искривлений костей, нами учитывались как патологии не связанные с осевыми деформациями.

Таким образом, из представленной информации можно сделать заключение, что наиболее распространённым в Московским регионе является медиальный вывих коленной чашки второй и третей степеней у собак с массой тела до 5 кг, сопровождающийся вальгусной деформацией большеберцовой кости более 5°, требующие выполнения корректирующих операций.

Очевидно, что встречаемость вывихов коленной чашки первой степени с учётом большой популяции собак из группы риска должна быть представлена в больших объёмах, однако у животных на этой стадии патологии редко регистрируется и клинически проявляются и как следствие такие животные не поступают в клиники для последующего ортопедического обследования и постановки диагноза.

3.5.2. Анализ осложнений после хирургической коррекции вывиха коленной чашки

Нами был проведён анализ послеоперационных осложнений после проведённых хирургических операций, направленных на коррекцию вывихов коленных чашек у собак.

Результаты оценки послеоперационных рисков показывают, что классические подходы к коррекции вывиха коленной чашки у собак протекают с большим количеством осложнений. Так, применение полной остеотомии гребня большеберцовой кости по Tobias K.M., 2012 г. в 10,7 % случаев приводит к несращению линии остеотомии или отрывам гребня, а в 49 % регистрируются послеоперационные боли, протекающие вплоть до удаления металлоконструкций (Johnson A. A., Wolfe E. L. et al., 2018; Payne J., Rimmke N. et al., 2015). Наряду с моно-латерализацией гребня большеберцовой кости широко применяется комбинация методик с добавлением трохлеопластики и дубликатуры капсулы коленного сустава, что безусловно увеличивает травматичность операции и ведёт

к повреждению суставного хряща (Назарова А.В. и др., 2022). Linney W.R., Douglas L. Hammer D.L. и Shott S. в 2011 г. опубликовали данные ретроспективного исследования о частоте встречаемости осложнений с применением такой тактики лечения медиального вывиха коленной чашки у собак, но без использования трохлеопластики. Таким образом Linney W.R. и соавторы наблюдали повторный вывих коленной чашки в 19,8 % случаев (18 из 91 собаки), что сопоставимо с данными предыдущих исследований, в которых применялась трохлеопластика. Количество животных с регистрируемой хромотой составило 11 % случаев (10 из 91 собаки).

Таким образом применение трохлеопластики не должно носить массовый характер, а у клинически больных животных, которым рекомендована такая операция, необходимо предварительно определять индекс внедрения коленной чашки (Назарова А. В. и др., 2022).

В наших исследованиях коррекция медиального вывиха коленной чашки 36-и собакам первой группы осуществляли по авторской методике (Позябин С. В., Качалин М. Д., 2020). Через медиальный оперативный доступ к проксимальной части большеберцовой кости и части коленного сустава, скелетировали медиальную часть гребня большеберцовой кости и выделили шероховатость гребня. Затем с помощью хирургической дрели и спицы Киршнера 0,8 - 1,0 мм формировали отверстие в области основания гребня, отступив 2 мм от края кости (Рисунок 3.5.2.1. - А). Используя линейку и скальпель, отмечали линию остеотомии, проходящую от сформированного отверстия до внутреннего края сухожилия четырёхглавой мышцы. По намеченному ориентиру высокоскоростной пилой кость рассекали так, чтобы гребень не полностью отделялся от основания (Рис. 3.5.2.1. - Б).

Рисунок 3.5.2.1. - Схема выполнения парциальной остеотомии гребня большеберцовой кости у собаки по Позябину С.В., Качалину М.Д., 2020 г.: А -разметка линии остеотомии от точки (2) и сверление отверстия в основании гребня (1); Б - выполнение парциальной остеотомии по линии (3); В - фиксация гребня двумя реперными спицами (4, 5).

После парциальной остеотомии с помощью тонкого распатора, действуя им как рычагом, смещали гребень латерально, пока он не оказывался на проекции середины мыщелков коленного сустава по линии анатомической оси бедренной кости. Гребень фиксировали двумя реперными спицами, имеющими на конце заточку в виде самореза и кортикальную позитивную резьбу длиной 5 мм от их острого конца. Одну спицу вводили в тело большеберцовой кости сбоку от медиального края гребня в каудальном направлении, а вторую - ближе к верхушке гребня таким образом, чтобы она проходила через него и подлежащую кость (Рисунок 3.5.2.1. - В). Первая спица обеспечивала боковую поддержку гребня, предотвращая смещение его медиально, а вторая - создавала компрессию по линии остеотомии, тем самым сокращая срок остеоинтеграции (Рисунок 3.5.2.2.). Завершали операцию наложением кожно-мышечных швов, послеоперационное лечение включало в себя антибиотикотерапию и трёхдневный приём нестероидных противовоспалительных препаратов.

Рисунок 3.5.2.2. - Методика фиксации гребня большеберцовой кости после выполнения его парциальной остеотомии у собак из первой группы: А -интраоперационная макрокартина; Б - послеоперационная рентгенограмма: проксимальная реперная спица проходит через верхушку остеотомированного фрагмента в тело большеберцовой кости (1), дистально расположенная реперная спица выполняет латерализирующую фиксацию остеотомированного фрагмента (2).

Животным второй группы осуществляли хондропластику межмыщелковой ямки дистального эпифиза бедренной кости с последующим выполнением полной остеотомии гребня большеберцовой кости и его фиксацией при помощи двух спиц Киршнера и серкляжной проволоки (K.M. Tobias, S.A. Johnston, 2012).

Эффективность методик оценивали по количеству выздоровевших животных (без хромоты), с остаточной хромотой с учётом её характера и степени, а также с осложнениями в послеоперационный период, такими как отлом и миграция гребня, отторжение металлоконструкций или несращение линии остеотомии.

Установили, что у 31 животного первой группы (86,1 %) хромота исчезала на 8,4±2,1 сутки после операции, у трех (8,3 %) - степень хромоты не изменялась до 21 суток и только у двух (5,6 %) - функция конечности восстановилась к 30-м суткам, однако у них наблюдали осложнения, связанные с усилением степени

хромоты и послеоперационным воспалением. По данным рентгенографии у 34-х собак к 21-м суткам отмечали формирование костных структур на месте остеотомии и полное заживление костного дефекта. Таким образом, для собак декоративных пород эффективность авторской методики коррекции медиального вывиха коленной чашки второй - третьей степени с незначительным углом деформации бедренной кости составляла 94,4 %.

Во второй группе у 15 животных (55,6 %) хромота исчезала на 13,2±3,4 сутки после операции, у четырех (14,8 %) - степень хромоты не изменялась до 21-х суток, у трех (11,1 %) - функция конечности восстановилась к 32-м суткам, а в пяти случаях (18,5 %) наблюдали осложнения, связанные с усилением степени хромоты и послеоперационным воспалением. Это требовало проведения корректирующих операций по другим методикам. У 17 животных к 21-м суткам на месте остеотомии начинали формироваться костные структуры, а к 32,8±3,4 суткам - наблюдали полное заживление костного дефекта. Для собак со второй -третьей степенью вывиха коленной чашки и незначительным углом деформации бедренной кости эффективность классической методики коррекции данной патологии составляла не более 81,5 %.

Таким образом можно утверждать, что авторская методика коррекции вывиха коленной чашки предназначена для использования в самой многочисленной группе животных, а именно у собак с медиальным вывихом коленной чашки 2 и 3 степени. Она позволяет снизить у животных послеоперационные осложнения и сократить сроки их реабилитации. Это достигается частичной (парциальной) продольной остеотомией, смещением гребня большеберцовой кости в анатомически правильное положение и фиксацией двумя реперными спицами. Реперные спицы избавляют хирурга от необходимости применения серкляжной проволоки для стягивания отломков и создания компрессии, тем самым уменьшают количество и объем имплантатов и, как следствие, осложнений, связанных с их отторжением. При этом в 97 % случаев заживление линии остеотомии происходило на 21,6±2,4 сутки.

4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ

В качестве обсуждения итогов проведенных исследований, по нашему мнению, необходимо провести анализ результатов по этапам, а затем сформулировать общие выводы к диссертации.

Изучение структуры ортопедических патологий у животных позволило уточнить многочисленные данные о подверженности к патологиям опорно-двигательно аппарата различных видов животных.

В отношении сельскохозяйственных животных определена распространенность ортопедических патологий у крупного рогатого скота, которая составила 41,36 % с преобладанием пододерматитов всех форм (23,6 %). Такие данные подтверждаются работами Марьина Е.М., Ермолаева В.А. и др., 2012 г. по данным которых патологии копытец могут регистрироваться до 87% поголовья животных, а также исследованиями Руколь В.М., и др. (2023) в части преобладания распространения пододерматитов у крупного рогатого скота.

В отношении распространенности ортопедических патологий у собак полученые нами данные согласуются с проведёнными ранее исследованиями ряда авторов (Самошкин И.Б., Слесаренко Н.А., 2008; Ягников С.А., Барсегян Л.С., Ягникова Я.А., 2015; Вилковыский И.Ф., Колядин С.В. и др. 2023; Бойд Дж.С., 2021; Yukihiro F., Шшй К., 2019), которые подтверждают наши данные о наибольшей подверженности травмированию и развитию артропатий в области тазовой конечности в целом и коленного сустава в частности.

Все патологии у животных сопровождаются патологическим состоянием двигательного аппарата, нарушением шага, хромотой, при этом развивается комплекс деструктивных изменений в структуре хряща, субхондральной кости и параартикулярных тканей, приводя к изменению состава синовиальной жидкости, в первую очередь в области коленного сустава. Вместе с тем, при патологиях костно-связочного аппарата, наиболее часто встречающихся у животных, развивается хромота опирающейся конечности, что служит маркером своевременной диагностики заболевания. Такие патологии приводят к снижению

эффективности ведения сельского хозяйства и снижают рабочие качества служебных собак и собак компаньонов.

Подводя итоги разработки метода индицирования очагового гонартроза у овец, мы установлили, что наиболее адекватным методом индуцирования очагового гонартроза у овец, как базовой модели для совершенствования методов коррекции очаговых деструктивных патологий в суставах у животных с точки зрения удобства выполнения хирургических манипуляций является методика формирования дефекта в инфрапателлярной области дистального эпифиза бедренной кости у овец. По результатам ортопедического наблюдения в экспериментальных подгруппах I-a и I-б мы наблюдали схожую динамику хромоты, которая, уменьшаясь с момента операции вплоть до 45-х суток, а к 60-м вновь нарастала. Стоит отметить, что в подгруппе I-а она носила менее выраженный характер. В подгруппе I-в степень хромоты линейно сокращалась и к 60-м суткам показатель был самым низким из всех экспериментальных подгрупп. В результате гематологических исследований нами установлено, что во всех подгруппах I экспериментальной группы животных динамика показателей крови оказалась схожей, без значительных различий между подгруппами и в рамках адекватных физиологических реакций на такой тип операций.

По результатам лучевых методов исследований установлено, что наилучшая визуализация сформированных дефектов на серии снимков компьютерной томографии оказывалась у животных из подгруппы I-а. Также установлено, что у животных из этой подгруппы к 65-м суткам денситометрическая плотность дна сформированного дефекта увеличивалась, по сравнению с плотностью нормальной губчатой кости, что указывает на процессы склерозирования губчатого вещества этой области. У животных из подгруппы I-б место выполнения дефекта не так отчётливо выражено на срезах компьютерной томографии, и при его поиске мы опирались на анатомо-топографические ориентиры и сглаживание кортикальной структуры костной ткани.

Денситометрическая плотность основания дефекта с 45-х по 65-е сутки также как в подгруппе I-а, продолжает возрастать. У животных в подгруппе 1-в поиск места фрезерования оказался удобнее, чем в подгруппе I-б, а динамика склерозирования дна дефекта оказалась схожей с предыдущими подгруппами.

В результате проведённых цитологических исследований синовиальной жидкости овец I группы нами определены основные маркёры асептических деструктивных процессов в суставах: цитоз, количество белка и относительное соотношение клеточного состава в структуре их популяции. Так, самый высокий уровень цитоза на 120-е сутки наблюдали у животных из подгрупп I-а и I-б. У животных из подгруппы I—в уровень цитоза к 120-м суткам приближался к нормальным физиологическим значениям, в то время как уровень белка сохранялся довольно высоким вплоть до 60-х суток, после чего незначительно снижался в подгруппах I-a и I-б. У животных из подгруппы I-в количественный показатель белка в синовиальной жидкости к 120-м суткам снижался значительнее, чем у животных в других подгруппах, но до предоперационных значений не доходил.

В результате микроморфологических исследований у животных из I-а и I-б подгрупп наблюдали частичное восполнение дефекта регенератом, в структуре которого различались фиброзный хрящ и соединительная ткань. Заживление дефектов хряща происходило за счёт соединительнотканного паннуса и преобладания дистрофических и некротических изменений. Однако у животных из подгруппы I-б соединительнотканный регенерат преобладал, а в его структуре фиброзный хрящ был менее развит. Субхондральная кость к 120-м суткам была частично рарефицирована. У животных из подгруппы I-в при микроморфологических исследованиях отмечали замещение дефекта соединительной тканью, на поверхности которой были очагово расположены синовиоциты, а субхондральная кость уплотнялась.

Полученные данные доказывают преимущества авторской методики формирования очагового индуцированного артроза в области коленного сустава

механическим способом по сравнению с методиками компрессии и дистракции сустава, применением низких температур (McCoy A.M., 2015; Ribitsch I., Baptista P.M., Lange-Consiglio A., Melotti L. et al., 2020). Методика моделирования очагового артроза в области блока бедренной кости показала себя наиболее адекватной и воспроизводимой, по сравнению с методикой частичной резеркции вертлужной впадины, предложенной Miozzari H., Clark J.M., Jacob H.A. et al. в 2004 году. Кроме этого, отработана методика выполнения ортопедических операций у овец, позволяющих использовать этот вид животных в экспериментальной ветеринарии и медицине.

Разработка эффективных методик индуцирования генерализованного артроза у овец. В результате проведённых клинических и гематологических исследований после выполнения десмотомии, послеоперационных осложнений не зарегистрировано. Также к 60-м суткам по результатам ортопедических осмотров у животных из II группы мы регистрировали хромоту средней степени в 4,42±0,3 балла, что сопоставимо со значениями, полученными в ходе выполнения операций в подгруппе I-б, и несколько выше, чем у животных из подгруппы I-а.

Результаты компьютерной томографии подтверждают данные о развитии расслаивающего остеохондрита у животных, что коррелирует с полученными дынными после проведённых микроморфологических исследований. Так, к 60-м суткам соединительнотканный регенерат замещает собой кальцифицированный хрящ и частично субхондральную кость в области прилегания коленной чашки и по периферии от неё. Выявленные патологические изменения в результате проведённых микроморфологических исследований костных и хрящевых тканей дистального эпифиза бедренной кости у овец на 120-е сутки после десмотомии передней крестообразной связки соответствуют картине деформирующего артроза.

Осуществление цитологического контроля деструктивных процессов в коленном суставе после десмотомии передней крестообразной связки, путём исследования свойств синовиальной жидкости представляется не

целесообразным, ввиду выраженного гемартроза у животных в раннем послеоперационном периоде, в связи с чем достоверность таких методов исследований очень низкая.

Полученная методика индуцирования генерализованного артроза у овец воспроизводима и позволяет получить наиболее близкую к классической форме клинического артроза модель, в отличии от методик введения в сустав раздражающих веществ (скипидар, тальковая суспензия), постоянной стрессовой нагрузки, объемных костно-хрящевых дефектов (Котельников Г.П., 2006; Tawonsawatruk Т., 2018; Haffner-Luntzer, M. et al., 2019)

Таким образом, разработаны методики индуцирования как генерализованного, так и локального гонартроза у овец, как наиболее востребованной биологическая модель для изучения деструктивных процессов в крупных суставах на животных. Кроме этого решены ряд вопросов о выборе объектов для проведения исследований, широко обсуждаемых в научной литературе. Использование собак как биологической модели, работы с которыми выполняли Макушин В.Д., Степанов М.А., Ступина Т.А. в 2012 г. на сегодняшний день затруднительно ввиду спорных этических моментов. Лабораторные животные и зайцеобразные не целесообразно использовать при изучении репаративных процессов кости ввиду того, что у них не развивается гаверсово ремоделирование костной ткани (Smith S.Y., Varela A., Samadfam R., Gasser J.A., Kneissel M., 2017). В тоже время из более крупных животных доступны для проведения экспериментальных исследований лошади, но в этом случае возникает вопрос стоимости проводимых исследований и остаётся вопрос этической составляющей (Olah T., Cai X., Michaelis J.C., Madry H., 2021; Orth P., Meyer H.L. et al., 2013).

Подводя итоги разработке и совершенствованию методов коррекции деструктивных процессов в суставах у животных путём применения различных методов клеточной и регенеративной медицины в лечении

деструктивных процессов в суставах у животных, необходимо обобщить полученные данные.

Исходя из того, что оценка результатов лечения ортопедически больных животных основана на сокращении времени реабилитации, восстановлении рабочих качеств и профилактике дальнейшего перехода процессов артроза в более глубокие слои и окружающие ткани, мы оценивали эффективность изучаемых методов клеточной и регенеративной медицины, опираясь на данные критерии.

В результате применения аутоплазмы, обогащённой тромбоцитами, при лечении индуцированного артроза у овец нами установлено сокращение, по сравнению с контрольной группой времени хромоты, при этом послеоперационный отёк, динамика гематологических показателей оставались без изменений. В тоже время морфологическая характеристика регенерата показывала формирование нормального соединительнотканного паннуса, который функционально был лучше аналогичных тканей, сформированных на фоне применения клеточного препарата, содержащего цитокины VEGF (Vascular-Endothelial-Growth-Factor) и GRO-KC (Growth-Regulated-Oncogene Keratinocyte-Derived Сytokine). Такие данные подтверждают результаты, полученные рядом авторов при использовании аутоплазмы обогащённой тромбоцитами в лечении лошадей и мелких домашних животных (Лисицын М.П. и др., 2020; Демкин С.А. и др., 2016).

Однако, по нашему мнению и мнению некоторых коллег, на сегодняшний день существует множество подходов кратности и интервалам между введениями аутоплазмы, обогащённой тромбоцитами и дальнейшие разработки в этом направлении должны быть направлены на выявление оптимальных алгоритмов внутрисуставных инъекций и разработку схем лечения (Laver L., Marom N., Dnyanesh L., 2017; Martini A., 2017; Dhurat R., Sukesh M., 2014).

Несмотря на то, что клинико-ортопедическая, цитологическая картина синовиальной жидкости и гематологические показатели у овец на фоне

применения секретома стволовых клеток не значительно отличались от таковых в группах сравнения, значимым критерием послужила морфологическая картина, которая выявила значительный ангиостимулирующий эффект и формирование неполноценного в функциональном отношении регенерата. Stephan Barrientos с соавторами (2014 г.) в своей обзорной статье подтверждают интенсивные процессы васкуляризации тканей на фоне применения цитокинов VEGF и GRO-KC.

Такие результаты позволяют сделать вывод, что применение клеточного препарата, содержащего цитокины VEGF и GRO-KC не оказывают существенного положительного влияния на хондрогенез и морфологическую картину артроза. В тоже время выявленная особенность стимуляции кровоснабжения компонентов сустава позволяет предположить возможность его дальнейшего изучения при клеточной терапии атрофических и дистрофических артрозов крупных суставов как у человека, так и у животных, учитывая, что возможность применения стволовых клеток костного мозга для замедления прогрессирования остеоартроза у людей на модели овцы, рассматривается с 2012 г. группой геронтологов Al Faqeh H., Nor Hamdan B.M.Y., Chen H.C., Aminuddin B.S., Ruszymah B.H.

Выявление особенностей регенерации сухожилий в условиях применения препарата, содержащего цитокины у крыс показало, что после применения секретома в области воздействия на первые сутки в инфильтрате появляются многочисленные макрофаги. Через 7 суток ткань регенерата имеет более зрелый вид в опытной группе, чем в контрольной. Это проявляется структурированностью пучков коллагеновых волокон, большей плотностью их упаковки. Очаги некроза ткани сохраняются вплоть до 14 суток в области шва, прогрессивно уменьшаясь в размерах и замещаясь тканью регенерата. Приобретённое пучковое строение сохраняется с 14 суток на всех последующих сроках опыта. К 60-м суткам в перитеноне регенерата развивается склероз, пучки коллагеновых волокон фиброзной ткани имеют плотную упаковку и

преимущественно взаимопараллельное расположение, однако встречаются области с их разнонаправленной ориентацией.

Количественное представительство фибробластов в ткани регенерата различалось между группами на всех сроках эксперимента. При этом на 7-е сутки опытные образцы (n=68) превосходили контрольные (n=47) по данному показателю, а на 14-е (опыт - n=52) / (контроль - n=70), 30-е (опыт - n=48) / (контроль - n=65) и 60-е (опыт - n=44) / (контроль - n=64) уступали им. Такая картина может быть связана с ранним усилением пролиферативной и биосинтетической активности клеток фибробластического дифферона, а затем - с более ранним началом ремоделирования в результате действия секретома.

Количество гемокапилляров на 30-е (опыт - n=6) / (контроль - n=4) и 60-е (опыт - n=6) / (контроль - n=3) сутки эксперимента различалось, в опытной группе этот показатель соответствовал интактным образцам (n=6), что указывает на лучшее кровоснабжение ткани регенерата, сформированного под влиянием секретома.

По результатам биомеханических испытаний у образцов опытной группы выявлена большая прочность сухожилий на разрыв (0,081 кН) не только по отношению к образцам из контрольной группы (0,058 кН), но и к образцам интактных сухожилий (0,076 кН), что превосходит их на 5 Н.

Выявленные особенности динамики комплекса морфологических и микроморфометрических показателей свидетельствуют о том, что под влиянием клеточного препарата, содержащего цитокины в сухожилии на фоне сохранения общих закономерностей репарации процессы ремоделирования, развиваются раньше, что приводит к формированию более полноценного в структурном и функциональном отношении регенерата.

Вместе с тем, существующие исследования (Crovace A., Lacitignola L., Francioso E., Rossi G., 2008) стимуляции регенерации сухожилия у овец под влиянием культивированных мезенхимальных клеток костного мозга и мононуклеарных клеток костного мозга, которые показывают их схожую

способность к восстановлению архитектуры коллагеновых волокон и внеклеточного матрикса. Однако, по нашему мнению, опираясь на данные, полученные на крысах, исследования продолжавшееся 56 суток при выборе такого крупного модельного животного, как овца должны продолжаться более длительное время.

Эффективность применения эмбриональных стволовых клеток рассматривали на модели индуцированного тендинита поверхностного сгибателя пальцев у лошади Watts A.E., Yeager A.E., Kopyov O.V., Nixon A.J. в 2011 г. а по результатам своих исследований пришли к выводу о целесообразности продолжения разработок в этой области. По нашему мнению, получение таких клеток, а также мультипатентных мезенхимальных стромальных клеток для лечения заболеваний сухожильно-связочного аппарата у животных отходит на второй план, на фоне наличия стабильного в количественном и качественном отношении по содержанию цитокинов препарата.

Подводя итоги этапу исследований, направленных на совершенствование методов коррекции и лечения вывиха коленной чашки у собак стоит отметить, что разработанная авторская методика, направленная на хирургическое лечение вывиха коленной чашки у собак 2 и 3 степеней позволяет снизить количество послеоперационных осложнений и повысить эффективность лечения (94,4 %) по сравнению с общепринятым методом (81,5 %) лечения таких патологий указанных в работах частота послеоперационных осложнений колеблется от 17 % до 51 % (Maddox М., 2017; Dokic Z., Lorinson D., Weigel J.P., Vezzoni A., 2015, и др.). Методика позволяет избежать применения серкляжной проволоки, которая может приводить к нарушению васкуляризации костных фрагментов, а также избавляет хирурга от обязательного выполнения артротомии коленного сустава, что отличает методику от большинства, изложенных в доступной литературе (Kalff S., Butterworth S.J., Miller A., Keeley B., Baines S., McKee W.M., 2014; Tobias K.M., Johnston S.A., 2012) и позволяет рекомендовит её к широкому применению.

223 Выводы

1. Наиболее распространенными ортопедическими патологиям крупного рогатого скота, охватывающими до 41,36 % поголовья, являются дерматиты в области пальца (27,9 %), пододерматиты (23,6 %) и бурситы (23,6 %). Эти патологии протекают с развитием сопутствующих заболеваний в топографически сопряженных анатомических структурах суставов конечностей: тенденитами, тендовагинитами и контрактурами (48,3 % случаев), артритами (23,7 % случаев), артрозами (16,3 % случаев), что необходимо учитывать при планировании ортопедической диспансеризации поголовья и совершенствовании методов их коррекции.

2. У служебных и декоративных собак (по данным анализа 747 случаев патологий тазовой конечности) преобладают ортопедические патологии в области коленного сустава (54,2 % случаев), которые чаще обусловлены разрывом передней крестообразной связки (23,7 %) и вывихом коленной чашки (20,5 %). При этом у собак с массой тела до 5 кг преобладает вывих коленной чашки (30,6 %), у собак средних и гигантских пород - разрыв передней крестообразной связки, а у собак гигантских пород с массой тела более 40 кг такая патология протекает с разрывом медиального мениска (72 % случаев). Полученные данные определяют наиболее актуальные для совершенствования методов коррекции направления исследований в области ветеринарной хирургии.

3. Разработаная методика оценки степени хромоты животных, основанная на комплексном анализе результатов ортопедического осмотра, определения функции конечности в статике и динамике, результатов рентенографического исследования позволяет определить степень хромоты по 10-бальной системе и более точно оценить динамику течения заболевания и обеспечить оценку эффективности лечения больных животных.

4. В эксперименте разработана методика индуцирования очагового гонартроза у овец, которая по клиническим и морфологическим характеристикам соответствует изменениям при данной патологии и заключается в формировании дефекта хряща в инфрапателлярной области торцевой фрезой диаметром 8,0 мм и

скоростью вращения фрезы 800 об./с на глубину 2 мм. При этом у модельного объекта до 60-х суток регистрируется хромота, рентгенографическими и томографическими методами выявляются области с увеличением рентгенографической плотности основания дефекта на 66,13 %, что коррелирует с патоморфологическими изменениями: деструкцией суставного хряща, замещением его фиброзным хрящом и соединительной тканью, рарефикацией субхондральной кости с преобладанием в тканях дистрофических и некротических изменений над репаративными.

5. Разработана стабильно-воспроизводимая экспериментальная модель создания генерализованного гонартроза у овец, заключающаяся в десмотомии передней крестообразной связки с последующей интраоперационной дистракцией сустава до 5 мм, что обеспечивает эффективные прогнозируемые изменения структур коленного сустава. При этом на 120-е сутки клинико-рентгенографическими методами с использованием компьютерной томографии в суставе определяются области деструкции губчатой костной ткани, характерные для расслаивающего остеохондрита, а микроморфологически выявляются некротические и дистрофические изменения суставного хряща с полным замещением центральной части дефекта соединительной тканью и выраженным истончением субхондральной кости, что соответствует патоморфологической картине генерализованного артроза.

6. Выявлены особенности влияния препарата, содержащего цитокины Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) и Growth-Regulated Oncogene Keratinocyte-Derived Cytokine (GRO-KC), на ткани коленного сустава, подвергшегося развитию очагового артроза в сравнении с применением клеточного препарата на основе тромбоцитарной аутоплазмы. Так, четырёхкратное ведение цитокинов в ранний посттравматический период способствует увеличению васкуляризации тканей регенерата, что целесообразно использовать в лечении хронических артрозов с преобладанием атрофических процессов. Применение клеточного препарата на основе тромбоцитарной аутоплазмы способствует формированию

субхондральной кости большей толщины, что может свидетельствовать о функциональности регенерата.

7. Доказана возможность стимуляции регенерации сухожилий у животных путём введения препарата, содержащего цитокины, что приводит к сокращению сроков заживления и формированию регенерата, который к 60-м суткам после травмы по биомеханическим свойствам соответствует интактному сухожилию (0,081 кН в опыте при 0,076 кН в норме), а по микроструктурным характеристикам близок к типичной для сухожилия структуре (пучковое строение, нормальная васкуляризация), в то время как в контроле отмечены рубцовые изменения сухожилия, гиповаскулярность и истончение регенерата со значительным снижением его биомеханических свойств (0,058 кН в контроле при 0,076 кН в норме).

8. Разработан новый метод хирургической коррекции вывиха коленной чашки у служебных и декоративных собак, который основан на изучении биомеханических особенностей его развития, а также учитывает сопутствующее патологические изменения в коленном суставе. Достигнута высокая эффективность авторской методики, основанной на использовании частичной остеотомии и применения реперных спиц для фиксации гребня большеберцовой кости, что подтверждаются высокой (94,4 %) эффективностью лечения, отсутствием в раннем послеоперационном периоде к 8 суткам хромоты, а также данными рентгенографического контроля, позволяющими сделать заключение о более раннем сращении места остеотомии.

Рекомендации по практическому использованию выводов

Результаты исследований могут быть широко использованы в клинической и экспериментальной ветеринарной хирургии, а также при клинической апробации лекарственных средств для коррекции патологий опорно-двигательного аппарата.

Полученные статистические данные о распространенности ортопедических патологий у животных необходимо использовать при разработке методических указаний по профилактике и лечению хирургических патологий у крупного рогатого скота и собак, а также при оценке рисков развития патологий у различных групп животных.

Разработанный и апробированный способ индуцирования локального и генерализованного артроза у овец практически должен быть использован при испытании схем лечения и методических подходов к использованию хондропротективных препаратов и выполнения реконструктивно-восстановительных операций. Для этого в контрольной группе животных при проведении исследований, моделирование артроза необходимо выполнять по авторской методике.

Применение препарата, содержащего исследованные цитокины у животных возможно при развитии артроза, осложненного гиповаскуляризацией структур сустава. Для восстановления кровообращения с целью улучшения трофики сустава, нормализации состава и свойств синовиальной жидкости необходимо применять параартикулярные введения препарата Репарин, содержащего цитокины Vascular Endothelial Growth Factor (VEGF) и Growth-Regulated Oncogene Keratinocyte-Derived Cytokine (GRO-KC). Интрасуставные инъекции проводятся с интервалом 5 дней курсом три инъекции, доза выбирается в зависимости от массы тела животного.

Для сокращения времени реабилитации спортивных лошадей, служебных и декоративных собак с травмами сухожилий различной этиологии необходимо во время хирургической операции по восстановлению целостности сухожилия

наносить наружно препарат, содержащий цитокины. В случае надрыва сухожилия необходимо ввести в состав комплексного лечения препарат «Репарин». Для достижения эффекта стимуляции регенерации тканей сухожилия препарат необходимо вводить трехкратно в область травмы паратенониально в объёме 0,2-0,5 мл в одно место введения.

При коррекции патологии коленной чашки у собак для снижения рисков послеоперационных осложнений, а также для профилактики рецидивов заболевания необходимо выполнять реконструкцию положения коленной чашки по авторской методике: с частичной остеотомией гребня большеберцовой кости и фиксации его двумя реперными спицами.

Перспективы дальнейшей разработки темы исследований

Перспективными направлениями дальнейших исследований по теме диссертации на наш взгляд является более глубокое изучение механизмов возникновения ортопедических патологий, особенности развития индуцированного и спонтанного артроза у различных видов животных, поиска новых методов консервативного и оперативного лечения.

Необходимо продолжить всестороннее изучение этиологии и патогенеза ортопедических патологий у животных, в первую очередь уточнить видовые, возрастные особенности их возникновения и течения. Исходя из задач по развитию отечественного животноводства, наибольшее внимание необходимо уделять проблемам ортопедии у крупного рогатого скота и лошадей. Для этого необходимо провести всестороннее изучение алиментарных, метаболических и травматических причин развития патологий опорно-двигательного аппарата и разработать методики их раннего выявления.

Необходимо изучить особенности течения индуцированного артроза у различных видов животных и определить видовые особенности развития хондропатий различного генеза. Это поможет в поиске подходов контроля дегенеративных процессов в гиалиновом хряще, являющихся

основополагающими при разработке методов лечения в ветеринарной медицине и медицине человека.

Необходимо расширить знания о возможность применения исследованных цитокинов при других патологиях у животных. В частности, на наш взгляд целесообразно продолжить исследований при патологиях органа зрения, кожных покровов, при лечении хронических ран. Помимо этого, необходимо провести исследования влияния других цитокинов на процессы регенерации в различных тканях у животных.

Помимо изучения применения цитокинов при разрывах и надрывах сухожилий значительный интерес может представлять применение методов трансплантации для закрытия дефектов сухожилия в комбинации с применением цитокинов.

Необходимо продолжить изучения возможности выполнения реконструктивно-восстановительных операций у животных с применением методов определения степени и характера нарушений биомеханики конечностей. Для этого необходимо провести изучение видовых и породных особенностей приложения биомеханических нагрузок на разные структуры опорно-двигательного аппарата в статике и динамике.

5. СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Азарова, М.С. Рассекающий или расслаивающий остеохондрит / М.С. Азарова, А.Р. Хатович // Журнал ветеринарный Петербург. - 2018. - № 4. - C. 7-10.

2. Алварес, А. Лечение разрыва передней крестовидной связки у собак / А. Алварес // Veterinary focus. - 2011. - № 2. - С. 39-46.

3. Альменшави Э.Г.А. Сравнительная характеристика методов корригирующей остеотомии у собак с разрывом передней крестовидной связки : дис. ... канд. вет. наук: 06.02.04. - Моск. государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии - МВА имени К.И. Скрябина, Москва, 2019 - 121 с.

4. Альменшави, Э.Г. Сравнительная характеристика методов корригирующей остеотомии у собак с разрывом передней крестовидной связки [Текст] : дис. ... канд. ветеринарных. наук: 06.02.04 / Э.Г. Альменшави. ФГБОУ ВО «МГАВМиБ -МВА им. К.И. Скрябина» - Москва, 2019. - 121 с.

5. Андреев, И.Д. Атлас оперативной хирургии для ветеринаров / И.Д. Андреев. - М.: ГЭОТАР-Медиа, - 2009. - 224 с.

6. Анников, В.В. Методические указания по применению обогащенной тромбоцитами аутоплазмы при лечении больных остеоартрозами собак / В.В. Анников, Ю.В. Пигарева, А.С. Рыхлов, С.Д. Клюкин. - Саратов: Техно-Декор, 2016. - 24 с.

7. Анников, В.В. Оценка эффективности PRP-технологии лечения животных с асептическими остеоартрозами / В.В. Анников, Ю.В. Пигарева, А.С. Рыхлов, Л.В. Анникова // Аграрный научный журнал. - 2015. - № 3. - С. 3-6.

8. Антипов, А.В. Артроскопическое замещение дефектов суставной поверхности костно-хрящевыми трансплантатами при рассекающем остеохондрите коленного сустава: дис. ... канд. мед. наук. / А.В. Антипов. -Курган, 2003. - 137 с.

9. Басок, Ю.Б. Технологии тканевой инженерии и регенеративной медицины в лечении дефектов хрящевой ткани суставов / Ю.Б. Басок, В.И. Севастьянов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2016. - Т. 18, № 4. - С. 102122.

10. Батанова, А.И. Перспективы применения клеточных технологий в травматологии и ортопедии / А.И. Батанова, В.В. Павлов, И.А. Кирилова, Е.А. Анастасиева, Д.И. Батанов // Вестник трансплантологии и искусственных органов. - 2020. - Т. 22, № 5. - С. 132.

11. Белогуров, В.В. Диагностика скрытых патологий у КРС молочного направления / В.В. Белогуров, Е.Н. Борхунова, М.Д. Качалин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии, биотехнологии и экспертизы сырья и продуктов животного происхождения: Сборник трудов научно-практической конференции, Москва, 08 ноября 2022 года / Под общей редакцией С.В. Позябина, Л.А. Гнездиловой. - Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2022. - С. 82-83.

12. Белогуров, В.В. Структурная характеристика патологий у КРС молочного направления / В.В. Белогуров, Е.Н. Борхунова, М.Д. Качалин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии, биотехнологии и экспертизы сырья и продуктов животного происхождения: Сборник трудов научно-практической конференции, Москва, 8 ноября 2022 года / Под общей редакцией С.В. Позябина, Л.А. Гнездиловой. - Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2022. - С. 84-85.

13. Бойд, Дж.С. Топографическая анатомия собаки и кошки с основами клинической анатомии / Дж.С. Бойд, К. Патерсон, А.Х. Мэй. - М.: Аквариум, 1921. - 224 с.

14. Борхунова, Е.Н. Особенности репаративной регенерации роговицы в условиях применения секретома стволовых клеток / Е.Н. Борхунова, С.В. Позябин, С.В. Сароян, А.И. Довгий // Клиническая и экспериментальная морфология. - 2022. - Т. 11, № 3. - С. 45-55.

15. Борхунова, Е.Н. Особенности репарации раны кожи в условиях применения секретома стволовых клеток / Е.Н. Борхунова, С.В. Позябин, М.Д. Качалин, А.И. Довгий // Актуальные проблемы ветеринарной медицины, зоотехнии, биотехнологии и экспертизы сырья и продуктов животного происхождения: Сборник трудов научно-практической конференции, Москва, 08 ноября 2022 года / Под общей редакцией С.В. Позябина, Л.А. Гнездиловой. - Москва: Сельскохозяйственные технологии, 2022. - С. 38-39.

16. Брянская, А.И. Артропластика с использованием аутологичных мультипотентных мезенхимальных клеток и коллагеновой мембраны Chondro-Gide / А.И. Брянская, Т.А. Куляба, Н.Н. Корнилов, В.П. Румакин, В.С. Горностаев // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. - 2014. - № 1. - С. 6266.

17. Будаев, Р.Д. Функциональные результаты после артроскопических вмешательств на локтевом суставе у собак средних и крупных пород / Р.Д. Будаев, О.А. Кулешова, Я.А. Ягникова, С.А. Ягников // Российский ветеринарный журнал. - 2018. - № 5. - С. 18-25.

18. Бунятян, Н.Д. Пути решения проблемы безопасности применения клеточных технологий / Н.Д. Бунятян // Вестник росздравнадзора. - 2009. - № 6. -С. 45-49.

19. Бурмистров, Е.Н. Шанс-био: лабораторная диагностика / Е.Н. Бурмистров -М.: ООО Независимая ветеринарная лаборатория «Шанс Био». - 2021. - 322 с.

20. Ватников, Ю.А. Организация репаративного остеогенеза животных / Ю.А. Ватников. - М.: МГУПБ, 2004. - 146 с.

21. Веремей, Э.И. Лечение коров при гнойно-некротических процессах в области копытцев и пальцев / Э.И. Веремей, В.А. Журба, В.А. Лапина // Ветеринария. - 2014. - № 3. - С. 39-41.

22. Веретников, А.А. Инцидентность регистрации суставной патологии у собак в породном аспекте / А.А. Веретников, С.И. Шуклин // Молодежная наука -

развитию агропромышленного комплекса: материалы III Международной научно-практической конференции студентов, аспирантов и молодых ученых, Курск, 15 ноября 2022 года. Том ч.2. - Курск: Курская государственная сельскохозяйственная академия имени И.И. Иванова, 2023. - С. 42-45.

23. Волотко, И. Профилактика и лечение болезней дистального отдела конечностей коров / И. Волотко, А. Безин, Н. Бутакова // Ветеринария сельскохозяйственных животных. - 2015. - № 1-2. - С. 40-45.

24. Воронцов, А.А. Артроскопическая диагностика остеохондропатий головки плечевой кости у собак / А.А. Воронцов, Ю.А. Ватников, Д.В. Крючков // Ветеринария. - 2009. - № 12. - С. 45-46.

25. Воронцов, А.А. Артроскопические методы диагностики и лечение остеохондропатий грудной конечности у собак / А.А. Воронцов, Е.М. Мордас // Российский ветеринарный журнал - мелкие домашние животные. - 2010. - № 4. -С.20-24.

26. Воронцов, А.А. Артроскопические методы диагностики и лечение патологий суставов у собак / А.А. Воронцов // Травматология и ортопедия. Материалы XIX Московского международного ветеринарного конгресса. - 2001. -С.11.

27. Воронцов, А.А. Клинический случай эндопротезирования локтевого сустава у собаки с остеоартрозом / А.А. Воронцов // Российский ветеринарный журнал -мелкие домашние животные. - 2012. - № 6. - С.26-27.

28. Воротников А.В., Направленная миграция и мезенхимальные прогениторные клетки: участие в воспалении, репарации и регенерации ткани / А.В. Воротников, Ю.Г. Суздальцева, Ю.П. Рубцов, Н.В. Аниол, К.В. Горюнов, Т.В. Кудряшова, П.А. Тюрин-Кузьмин, В.А. Ткачук // В сборнике: Стволовые клетки и регенеративная медицина / Под ред. В.А. Ткачука. - Москва: МаксПресс, 2012. - С. 57-91.

29. Гимранов, В.В. Классификация болезней в области пальцев у крупного рогатого скота / В.В. Гимранов, С.В. Тимофеев // Ветеринария. - 2006. - № 2. - С. 48-49.

30. Гимранов, В.В. Обоснование и разработка комплексных методов диагностики, лечения и профилактики гнойно-некротических поражений в области пальцев у крупного рогатого скота : специальность 06.02.04 "Ветеринарная хирургия" : автореферат диссертации на соискание ученой степени доктора ветеринарных наук / Гимранов Валиян Валиуллович. - Казань, 2006. - 32 с.

31. Гимранов, В.В. Этиология, характер распространенности и особенности патологий в области пальцев у коров голштино-фризской породы / В.В. Гимранов, Р.А. Утеев, А.Ф. Гилязов // Аграрный вестник Урала. - 2010. - № 3(69). - С. 77-79.

32. Гладкова, Е.В. Хирургические подходы к формированию экспериментального посттравматического остеоартроза коленных суставов и его структурно-метаболические паттерны / Е.В. Гладкова // Вестник новых медицинских технологий. - 2021. - Т. 28, № 1. - С. 35-40.

33. Глазунов, Ю.В. Распространение ортопедических патологий у крупного рогатого скота в ООО "Земля" Тюменской области / Ю.В. Глазунов, И.С. Крапивко, Л.А. Глазунова // Вестник государственного аграрного университета северного зауралья. - 2014. - № 4(27). - С. 22-25.

34. Головаха, М.Л. Ранняя нагрузка после микрофрактуризации дефектов хряща коленного сустава / М.Л. Головаха // Ортопедия, травматология и протезирование: научно-практический журнал. - 2007. - № 1. - С. 9-12.

35. Горбатенко, А.И. Применение обогащенной тромбоцитами аутоплазмы в комплексной терапии остеоартроза коленных суставов / А.И. Горбатенко, Н.О. Костяная // Вестник травматологии и ортопедии им. Н.Н. Приорова. - 2016. - № 2. - С. 40-45.

36. ГОСТ Р 58090-2018 «Клиническое обследование непродуктивных животных. Общие требования.».

37. ГОСТ р 57547-2017 «Патологоанатомическое исследование трупов непродуктивных животных».

38. Губарь, Е.А. Опыт применения обогащенной тромбоцитами аутоплазмы в лечении остеоартроза коленного сустава / Е.А. Губарь, А.Н. Плеханов, Р.Д. Ринчинов, С.А. Алексеев // Вестник Бурятского государственного университета. Медицина и фармация. - 2018. - № 3-4. - С. 42-45.

39. Давыдов В.Б. Сравнительная оценка эффективности применения различных хондропротективных средств при остеоартрозах у собак: дис. ... канд. вет. наук: 16.00.05. - Моск. академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И. Скрябина, Москва, 2000 - 126 с.

40. Даут, А.В. Клинический случай: остеоартроз локтевого сустава у собаки / А.В. Даут // Сборник клинических случаев "из практики начинающего ветеринарного врача": Сборник тезисов по результатам региональной конференции молодых ученых, Екатеринбург, 15 декабря 2021 года. -Екатеринбург: уральский, 2021. - С. 35-37.

41. Деев, Р.В. Клеточные технологии в травматологии и ортопедии: пути развития / Р.В. Деев, А.А. Исаев, А.Ю. Кочиш, P.M. Тихилов // Гены и клетки. -2007. - Т. 2, № 4. - С. 18-30.

42. Демкин, С.А. Экспериментальная модель остеоартроза коленного сустава у крыс на фоне внутрисуставного введения обогащенной тромбоцитами аутологичной плазмы / С.А. Демкин, Д.А. Маланин, Л.Н. Рогова, Г.Л. Снигур, Н.В. Григорьева, К.В. Байдова // Волгоградский научно-медицинский журнал. -2016. - № 1(49). - С. 28-31.

43. Денисов, А.В. Регенеративная медицина в ортопедии коленного сустава. Клинический случай / А.В. Денисов, А.А. Денисова, А.Н. Безин // VetPharma научно-практический журнал. - 2023. - № 2(59). - С. 16-23.

44. Денисов, Л.Н. Алгоритм лечения остеоартрита коленного сустава Европейского общества по клиническим и экономическим аспектам остеопороза и остеоартрита (ESCEO) применим в российской клинической практике: совместное заключение ведущих российских специалистов и экспертов ESCEO по остеоартриту / Л.Н. Денисов, Е.С. Цветкова, Г.Ш. Голубев, О.В. Бугрова, И.С. Дыдыкина, А.И. Дубиков, Л.В. Меньшикова, Л.К. Пешехонова, А.П. Ребров, А.Н. Торгашин, Е.А. Трофимов, С.П. Якупова, Е.В. Зонова, О. Брюйер, С. Купер, Ж. Реджинстер, Л.А. Князева // Научно-практическая ревматология. - 2016. - Т. 54, № 6. - С. 641-653.

45. Денисов-Никольский, Ю.И. Морфофункциональная характеристика кости как органа / Ю.И. Денисов-Никольский, И.В. Матвейчук // Актуальные проблемы теоритической и клинической остеоартрологии. - 2005. - № 3. - С. 15-35.

46. Денни, Х. Ортопедия собак и кошек / Х. Денни, С. Баттервоф - М.: Аквариум-Принт, 2007. - 696 с.

47. Довгий, А.И. Регенеративный препарат Репарин-Хелпер® как эффективное и безопасное средство для лечения постоперационных ран / А.И. Довгий, Д.С. Воеводин // Ветеринария, зоотехния и биотехнология. - 2021. - № 8. - С. 6-13.

48. Доманский, Н.К. Остеоартроз у собак (клинико-рентгено-морфологические корреляции). Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии / К.Н. Доманский, И.Б. Самошкин, А.А. Стекольников // Изд.: Санкт-Петербургская государственная академия ветеринарной медицины. - 2012. - № 2. - С.33-40.

49. Доценко, Т.Г. Исследование синовиальной жидкости. Клиническая значимость полученных результатов / Т.Г. Доценко, Г.И. Шлыкова, О.В. Теплякова // Клиническая лабораторная диагностика. - 2016. - Т. 61, № 8. - C. 478484.

50. Дремина, Н.Н. Клеточные технологии в травматологии: от клетки до тканевой инженерии / Н.Н. Дремина, И.С. Трухан, И.А. Шурыгина // Acta Biomedica Scientifica (East Siberian Biomedical Journal). - 2020. - Т. 5, № 6. - С. 6676.