Клиническая, молекулярно-генетическая и биохимическая характеристика дефицита лизосомной кислой липазы у российских пациентов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.02.07, кандидат наук Каменец Елена Анатольевна

• Каменец Елена Анатольевна
• кандидат наук
• 2020

Оглавление диссертации кандидат наук Каменец Елена Анатольевна

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования

Степень разработанности темы

Цель исследования:

Задачи исследования:

Методология и методы диссертационного исследования

Положения, выносимые на защиту

Научная новизна

Теоретическая и практическая значимость работы

Степень достоверности результатов

Личный вклад автора в проведение исследования

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Публикации

Структура и объем диссертации

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Лизосомные болезни накопления

1.1.1 Общая характеристика лизосомных болезней накопления

1.1.2 Механизмы патогенеза лизосомных болезней накопления

1.1.3 Классификация лизосомных болезней накопления

1.1.4 Клинические проявления

1.1.5 Эпидемиология

1.1.6 Принципы диагностики лизосомных болезней

1.1.7 Подходы к лечению лизосомных болезней

1.2 Дефицит лизосомной кислой липазы

1.2.1 История открытия

1.2.2 Клиническая гетерогенность

1.2.3 Этиология

1.2.4 Патогенез

1.2.5 Эпидемиология

1.2.6 Подходы к диагностике ДЛКЛ

1.2.7 Ведение больных и подходы к терапии ДЛКЛ

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

2.1. Формирование выборки больных

2.2. Молекулярно-генетические методы

2.2.1. Выделение геномной ДНК

2.2.2. Выделение общей РНК

2.2.3. Полимеразная цепная реакция (ПЦР)

2.2.4. Синтез и амплификация кДНК

2.2.5. Аллель-специфичная количественная ПЦР в реальном времени (ЯТ-ПЦР)

2.2.6. Метод мини-гена

2.2.7. Метод прямого автоматического секвенирования

2.2.8. ПЦР-ПДРФ-анализ для выявления варианта е.8940>Л

2.2.9. Электрофорез в ПААГ

2.2.10. Классификация выявляемых генетических вариантов

2.3. Биохимические методы исследования

2.3.1. Измерение активности ЛКЛ

2.3.2. Измерение активности хитотриозидазы

2.3.3. Измерение концентрации оксистеролов в плазме крови

2.4. Методы статистического анализа

ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Анализ активности лизосомной кислой липазы

3.1.1 Определение референсных значений активности ЛКЛ

3.1.2 Выборка больных для селективного скрининга на ДЛКЛ

3.1.3. Результаты селективного биохимического скрининга на ДЛКЛ

3.2 Молекулярно-генетический анализ

3.2.1. Интерпретация выявленных вариантов

3.2.2 Анализ функциональной значимости варианта c.600G>A

3.2.3. Анализ спектра мутаций гена LIPA

3.2.4. Расчет частоты ДЛКЛ среди новорожденных г. Москвы

3.3 Клиническая характеристика пациентов с подтвержденным диагнозом

ДЛКЛ

3.3.1 Гено-фенотипические корреляции в группе больных ДЛКЛ с различными генотипами

3.3.2. Пациенты с болезнью Вольмана

3.3.3............................Фенотип пациентки П.30, гомозиготной по аллелю c.600G>A

3.3.4. Пациенты с БНЭХ

3.3.5. Критерии отбора для селективного скрининга на ДЛКЛ

3.4 Анализ вторичных биомаркеров

3.4.1. Активность хитотриозидазы при ДЛКЛ

3.4.2 Концентрация оксистеролов при ДЛКЛ

3.4.3. Корреляция между генотипом и уровнем вторичных биомаркеров в группе больных с поздними формами ДЛКЛ

3.4.4. Динамика изменения вторичных маркеров при ДЛКЛ на фоне ФЗТ себелипазой-альфа

3.5 Алгоритм лабораторной диагностики ДЛКЛ

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ВЫВОДЫ

ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ

СПИСОК ПУБЛИКАЦИЙ ПО ТЕМЕ ДИССЕРТАЦИИ

Список статей в рецензируемых изданиях, рекомендованных ВАК МОН РФ

Список публикаций в других изданиях

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Анкета для направления на диагностику ДЛКЛ .... 134 ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Демографические данные и основные характеристики выборки пациентов с установленным диагнозом ДЛКЛ

Список сокращений и условных обозначений

4-MUF - 4-метилумбелиферил 7-КС - 7-кетохолестерин С-триол - холестан-3р,5а,бр-триол DBS - сухие пятна крови [dried blood spots]

dbSNP - база данных коротких генетических вариантов [Database of Short Genetic Variations]

GnomAD - база данных экзомного и геномного секвенирования [Genome Aggregate Database]

HGMD - база данных по мутациям человека [Human Gene Mutation Database] LAMP - лизосомо-ассоциированный мембранный протеин [lysosomal-associated membrane protein]

MLPA - мультиплексная лигазно-зависимая амплификация ДНК-зондов [multiplex ligase-depend probe amplification] АЛТ - аланинаминотрансфераза АСТ - аспартатаминотрансфераза БВ - болезнь Вольмана БМ - биомаркер

БНЭХ - болезнь накопления эфиров холестерина

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

ГХ - газовая хроматография

ДЛКЛ - дефицит лизосомной кислой липазы

ЖК - жирные кислоты

ЖКТ - желудочно-кишечный тракт

КТ - компьютерная томография

ЛБН - лизосомные болезни накопления

ЛД - левая доля печени

ЛКЛ - лизосомная кислая липаза

ЛПВП - липопротеиды высокой плотности

ЛПНП - липопротеиды низкой плотности

ЛПОНП - липопротеины очень низкой плотности

МПС - массовое параллельное секвенирование

МРТ - магнитно-резонансная томография

МС/МС - масс-спектрометрия

НАЖБП - неалкогольная жировая болезнь печени

НБО - наследственные болезни обмена веществ

НПА/В - болезнь Ниманна-Пика типа А/В

НПС - болезнь Ниманна-Пика типа С

ПЦР - полимеразная цепная акция

НЦЛ - нейрональный цероидный липофусциноз

ОХ - общий холестерин

ПД - правая доля печени

ПДРФ - полиморфизм длин рестрикционных фрагментов

ПЦР - полимеразная цепная реакция

СОЭ - скорость оседания эритроцитов

СРТ - субстрат-редуцирующая терапия

СХ - свободный холестерин

ТГ - триглицериды

УЗИ - ультразвуковое исследование

ФГБНУ «МГНЦ» - Федеральное государственное бюджетное научное учреждение «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова»

ФЗТ - фермент-заместительная терапия

ХТ - хитотриозидаза

ЦНС - центральная нервная система

ЭДТА - этилендиаминтетрауксусная кислота

ЭХ - эфиры холестерина

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Клиническая, молекулярно-генетическая и биохимическая характеристика дефицита лизосомной кислой липазы у российских пациентов»

Актуальность темы исследования

Дефицит лизосомной кислой липазы (ДЛКЛ) - редкое аутосомно-рецессивное заболевание из группы лизосомных болезней накопления (ЛБН). ДЛКЛ обусловлен мутациями в гене LIPA, кодирующем фермент лизосомную кислую липазу (ЛКЛ). Недостаточность активности ЛКЛ приводит к накоплению эфиров холестерина (ЭХ) и триглицеридов (ТГ) в лизосомах преимущественно гепатоцитов и клеток макрофагально-моноцитарной системы, а также клеток надпочечников, селезенки, кишечника. Выделяют два основных клинических варианта ДЛКЛ: болезнь Вольмана (БВ), которая приводит к летальному исходу на первом году жизни, и болезнь накопления эфиров холестерина (БНЭХ), имеющей более позднее начало, и сравнительно благоприятный прогноз.

До недавнего времени специфического лечения ДЛКЛ не существовало. Диагностика заболевания существенно затруднена по причине неспецифичной симптоматики, с одной стороны, и малой осведомленности врачей о нем - с другой. Многие биохимические тесты для определения активности кислой липазы имеют большой риск ложноотрицательных результатов. По этим причинам точная частота ДЛКЛ в мире и в Российской Федерации неизвестна, зачастую ДЛКЛ выявляется у пациентов случайно и/или диагностируется ошибочно. С высокой вероятностью значительная доля случаев остается нераспознанной. При этом в отсутствии лечения при младенческой форме наблюдается 100-процентная летальность, а поздняя форма опасна развитием угрожающих жизни осложнений со стороны печени и сердечно-сосудистой системы.

На настоящий момент разработана эффективная ферментная заместительная терапия (ФЗТ) ДЛКЛ, основанная на применении препарата рекомбинантной ЛКЛ человека (Себелипаза альфа) [Burton et al., 2015], в связи с чем ранняя диагностика этой патологии приобретает первостепенную важность.

В разных популяциях может наблюдаться своя специфика частоты и характера мутаций гена LIPA, что находит отражение в проявлениях клинического течения

заболевания. Поэтому актуальным является изучение особенностей спектра и частот мутаций у российских больных для эффективной организации генетического тестирования и своевременного начала терапии заболевания. Ввиду малой изученности генетической структуры, для ДЛКЛ крайне актуальна и проблема определения клинической значимости вновь выявляемых генетических изменений.

Заболевание характеризуется тесной связью генетических, биохимических и клинических особенностей. Ввиду высокой гетерогенности последних, особый интерес представляет выявление и изучение зависимостей характера и степени выраженности патологических процессов от тех или иных мутаций в гене LIPA, их диагностической и прогностической значимости. Особый интерес представляет выявление и изучение фенотипических и биохимических корреляций, поиск новых высокоспецифичных биомаркеров ДЛКЛ.

На сегодняшний день особую актуальность приобретает осведомленность медицинского сообщества о ДЛКЛ, определение истинной частоты заболевания в конкретных популяциях, его правильная и своевременная диагностика.

Степень разработанности темы

По различным оценкам, встречаемость ДЛКЛ в мире может составлять от 1;40000 до 1;300000 [Bernstein et. al,, 2013; Westemeyer et al., 2020], в Российской Федерации соответствующие исследования ранее не проводились, ориентировочно частота оценивается как 1;100000 - 1;150000 [Агеева и др., 2018].

В 2012 году J. Hamilton разработал методику определения активности ЛКЛ с применением высокоспецифичного ингибитора, позволяющую практически полностью избежать ложноположительных и ложноотрицательных результатов [Hamilton et al., 2012]. Наряду с непосредственным измерением активности ЛКЛ для ранней диагностики и лучшего понимания патогенетических механизмов заболевания перспективным представляется поиск и разработка методик с использованием других биомаркеров, называемых вторичными. Так, показано, что в клетках и сыворотке крови пациентов с ДЛКЛ, как и при некоторых других

лизосомных болезнях накопления (ЛБН), повышается концентрация производных холестерина оксистеролов и активность фермента хитотриозидазы (ХТ) [Boenzi et al., 2016; Dahl et al., 1999; Jiang et al., 2011; Malaguarnera, 2006; Крылова и др., 2016].

В практике отечественной медицины исследования на представительных выборках пациентов с ДЛКЛ с целью анализа частот патогенных вариантов и гено-фенотипических корреляций не проводились и особенности спектра мутаций не изучены.

В виду отсутствия четких представлений о реальной встречаемости заболевания и его низкой выявляемости, целесообразным представляется селективный скрининг пациентов с целью раннего выявления ДЛКЛ и своевременного применения современных методов терапии. С другой стороны, для многих европейских популяций показано наличие частых повреждающих аллелей LIPA, чей вклад в структуру заболевания превышает 50% [Bernstein et al., 2013; Reiner et al., 2014]. Исследование широких популяционных выборок на носительство таких вариантов позволило бы точнее оценить частоту ДЛКЛ на территории России.

Данная работа представляет собой продолжение работ посвященных болезням клеточных органелл в рамках научно-исследовательской деятельности ФГБНУ «МГНЦ» и является первой отечественной работой, посвященной ДЛКЛ.

Цель исследования:

Изучение клинических, молекулярно-генетических и биохимических особенностей дефицита лизосомной кислой липазы у российских пациентов, определение значимости первичных и вторичных биохимических маркеров для диагностики, прогнозирования и контроля лечения и разработка алгоритма лабораторной диагностики заболевания.

Задачи исследования:

1. Охарактеризовать спектр и частоты выявляемых патогенных вариантов в гене LIPA в выборке 34 пациентов с генетически подтвержденным диагнозом «дефицит лизосомной кислой липазы».

2. Провести анализ патогенности впервые выявленных изменений в гене LIPA.

3. Определить частоту носительства патогенного варианта c.894G>A в гене LIPA среди 1140 живых новорожденных города Москвы и оценить частоту ДЛКЛ в регионе г. Москва.

4. Оценить диагностическую значимость вторичных биохимических маркеров лизосомных болезней накопления: активности фермента хитотриозидазы и концентрации продуктов перекисного окисления холестерина оксистеролов при дефиците лизосомной кислой липазы.

5. Изучить корреляции между уровнем/активностью биохимических маркеров и генотипами у 31 пациента с диагнозом «болезнь накопления эфиров холестерина».

6. На основании биохимических и молекулярно-генетических данных разработать алгоритм дифференциальной диагностики дефицита лизосомной кислой липазы в группе лизосомных болезней накопления.

Методология и методы диссертационного исследования

Методологической основой исследования являлись селективный биохимический скрининг на ЛБН, работы по изучению молекулярно-генетических причин ДЛКЛ, спектра мутаций гена LIPA, расчет частоты носительства и частоты заболевания ДЛКЛ.

В выборку для молекулярно-генетического исследования вошли пробанды с направляющим клиническим диагнозом Дефицит лизосомной кислой липазы, а также пациенты с биохимическим диагнозом Дефицит лизосомной кислой липазы, выставленным на основании результатов измерения активности ЛКЛ. Участниками исследования или их законными представителями было подписано информированное согласие на участие в исследовании и обработку персональных

данных. Особенностями исследования является формирование выборки на основании как генетических, так и биохимических данных, а также то, что она сформирована из больных, проживающих в различных регионах Российской Федерации. Проведение данного исследования одобрено этическим комитетом ФГНБУ «МГНЦ». В работе использованы общенаучные эмпирические (эксперимент, наблюдение, описание), теоретические (анализ, синтез, обобщение, метод формализации) и специальные методы (изучение литературных источников, молекулярно-генетические методы, методы статистического анализа).

Положения, выносимые на защиту

1. В группе пациентов с генетическим диагнозом Дефицит лизосомной кислой липазы охарактеризован спектр мутаций гена LIPA. Наиболее частыми патогенными генетическими вариантами являются варианты c.894G>A (58,8%) и c.796G>T (10,3%). Выявлено 11 ранее не описанных вариантов гена LIPA с высокой патогенностью, в одном случаев патогенность генетического варианта (c.600G>A) доказана на основании функционального анализа.

2. Установлена популяционная частота носительства патогенных вариантов в гене LIPA - 1:268 (0,4%) и расчетная частота заболеваемости ДЛКЛ в г. Москва, составившая 1:71824 (0,000014).

3. Вторичные маркеры ЛБН оксистеролы высоко информативны при первичной и дифференциальной диагностике ДЛКЛ в группе ЛБН. Диагностическая значимость активности хитотриозидазы при ДЛКЛ низкая.

4. Для ДЛКЛ характерны гено-фенотипические корреляции: мутации гена LIPA, приводящие к полной потере функциональности ЛКЛ, в гомозиготном или компаунд-гетерозиготном состоянии друг с другом служат причиной болезни развития Вольмана; генетический вариант c.894G>A в гомозиготном или компаунд-гетерозиготном состоянии ведет к развитию фенотипа болезни накопления эфиров холестерина, причем уровни оксистеролов и активность ХТ в

группе компаунд-гетерозиготных носителей данного варианта выше в сравнении с пациентами, гомозиготными по c.894G>A.

5. На основе полученных данных разработан алгоритм лабораторной диагностики ДЛКЛ.

Научная новизна

В выборке 34 пациентов с ДЛКЛ проведен полный анализа гена LIPA, выявлены 11 ранее не описанных генетических вариантов гена LIPA с высокой патогенностью и пополнена международная база данных по мутациям. Для впервые выявленного варианта LIPA c.600G>A выполнено исследование кДНК и проведен анализ функциональной значимости с использованием сконструированного на основании кДНК минигена.

Впервые на представительной выборке более 1000 индивидов проведен анализ популяционной частоты генетического варианта c.894G>A и расчетной частоты заболевания ДЛКЛ в г. Москва, которые составили 1:268 (0,4%) и 1:71824 (0,000014) соответственно.

Впервые проведен анализ информативности вторичных биомаркеров хитотриозидазы и оксистеролов при первичной диагностике ДЛКЛ и постановки дифференциального диагноза в группе ЛБН. Показана высокая диагностическая значимость оксистеролов при данном заболевании, диагностическая значимость активности хитотриозидазы при ДЛКЛ низкая.

Впервые выявлены корреляции уровней и активности биохимических маркеров и генотипов у 31 пациента с диагнозом «болезнь накопления эфиров холестерина». Показано, что при мутациях гена LIPA, приводящих к полной потере функциональности ЛКЛ, в гомозиготном или компаунд-гетерозиготном состоянии друг с другом развивается болезнь Вольмана; генетический вариант c.894G>A в гомозиготном или компаунд-гетерозиготном состоянии ведет к развитию фенотипа болезни накопления эфиров холестерина.

Теоретическая и практическая значимость работы

Охарактеризован спектр мутаций гена LIPA, характерный для российских пациентов с ДЛКЛ. Определены наиболее частые для российской популяции патогенные варианты гена LIPA c.894G>A (58,8%) и c.796G>T (10,3%). Анализ информативности вторичных биомаркеров ЛБН при первичной и дифференциальной диагностике ДЛКЛ показал высокую информативность уровней оксистеролов и низкую диагностическую значимость активности хитотриозидазы. На основании биохимических и молекулярно-генетических данных разработан алгоритм диагностики дефицита лизосомной кислой липазы.

Разработанные лабораторные методики могут применяться в молекулярно-диагностических лабораториях, специализирующихся на наследственных заболеваниях. Полученные результаты могут использоваться как платформа для дальнейших исследований по поиску больных с ДЛКЛ и для усовершенствования методов биохимической диагностики. Полученные результаты вносят вклад в изучение генетической структуры и биохимических маркеров заболевания для оптимизации диагностики.

Степень достоверности результатов

Работа проведена на отвечающей поставленной цели выборке пациентов с биохимически и генетически подтвержденным диагнозом ДЛКЛ (n=34). В исследовании использованы современные методы молекулярно-генетического анализа, интерпретация полученных результатов проведена с использованием методов статистической обработки данных. В работе использовано большое количество зарубежной и отечественной литературы. Полученные результаты подкреплены таблицами и рисунками. Сделанные в ходе работы выводы полностью соответствуют поставленным задачам.

Личный вклад автора в проведение исследования

Определение направления диссертационной работы, цели и задач исследования проводились автором совместно с научным руководителем д.м.н. Захаровой Е. Ю.

Автором самостоятельно изучена отечественная и зарубежная литература по теме диссертации и лично написана рукопись данной работы. Автор непосредственно участвовал в подготовке материалов к публикациям по диссертационной теме и их написании.

Экспериментальная работа: измерение активности ЛКЛ в сухих пятнах крови 2670 пациентов с подозрением на ЛБН проводилось самостоятельно. Измерение активности хитотриозидазы в сухих пятнах крови и оксистеролов в плазме крови пациентов с ДЛКЛ при первичной диагностике и на фоне ФЗТ осуществлено совместно с сотрудниками лаборатории наследственных болезней обмена веществ ФГБНУ «Медико-генетический научный центр».

Выполнение и анализ результатов молекулярно-генетической диагностики для пациентов, разработка системы ПДРФ-анализа и анализ образцов 1140 новорожденных на носительство частой мутации е.8940>Л, разработка алгоритма и осуществление исследования по оптимизации дальнейшей диагностики выполнены автором самостоятельно.

Сбор клинических данных выполнен автором совместно с научно-консультативным и поликлиническим отделением ФГБНУ «Медико-генетический научный центр имени академика Н.П. Бочкова», ФГБНУ «Федеральный исследовательский центр питания и биотехнологии» и Морозовской детской городской клинической больницей Департамента здравоохранения г. Москвы.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

В соответствии с областями исследования специальности 03.02.07 - Генетика (медицинские науки) - «Генетика человека. Медицинская генетика. Наследственные болезни. Молекулярные основы наследственности. Мутационная изменчивость. Популяционная генетика». Работа включает в себя обсуждение наследственных болезней, медицинской генетики, генетики человека, проблем популяционной генетики, генетической структуры популяций.

Публикации

Материалы диссертации представлены в 9 печатных работ: 6 статей в рецензируемых научных журналах, рекомендуемых ВАК МОН РФ для соискателей ученой степени кандидата медицинских наук (4 из них SCOPUS, WoS)

Структура и объем диссертации

Диссертация имеет следующую структуру: введение, обзор литературы, материалы и методы исследования, результаты и обсуждение, заключение, выводы, практические рекомендации, список литературы. Работа представлена на 148 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц, 26 рисунков, 2 приложения. Список литературы включает в себя 106 наименования, в том числе 13 отечественных и 103 зарубежных источника.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1 Лизосомные болезни накопления

1.1.1 Общая характеристика лизосомных болезней накопления

Лизосомные болезни накопления (ЛБН) - обширный класс НБО, включающий более 50 нозологических форм, обусловленных нарушением функции внутриклеточных органелл лизосом. Лизосомы являются частью эндомембранной системы клетки и представляют собой одномембранные структуры, специализирующиеся на внутриклеточном расщеплении макромолекул.

1.1.2 Механизмы патогенеза лизосомных болезней накопления

Молекулярные механизмы патогенеза многих ЛБН связаны с дефектами генов, кодирующих ферменты, которые участвуют в процессе внутрилизосомного расщепления различных классов веществ (рисунок 1 ).

ЛИЗОСОМА ЦИТОЗОЛЬ

Рисунок 1. Схема патогенеза ЛБН.

Примечание: В норме (зеленые стрелки) субстрат А под действием фермента -лизосомной гидролазы подвергается расщеплению до продукта В, продукт перераспределяется в клетке с помощью белков-переносчиков. При дисфункции гидролазы субстрат не расщепляется и начинает накапливаться в лизосоме, также возможно образование его патологических метаболитов А*, токсичных для клетки. При дефекте белка-переносчика продукт В не покидает лизосому и также начинает накапливаться, нарушая нормальную функцию органеллы.

Генетические дефекты могут нарушать функцию, а также синтез, созревание и транспорт расщепляющих ферментов (лизосомных гидролаз) или белков-переносчиков, с помощью которых продукты расщепления распределяются в клетках. Вследствие этих изменений в лизосомах накапливаются нерасщепленные макромолекулы и/или продукты их деградации, лизосомы увеличиваются в размерах, при этом может увеличиваться и их количество в клетках. Эти процессы нарушают нормальное функционирование и приводят к гибели клеток [Артур Л. Боде [Arthur L. Beaudet], 1992].

1.1.3 Классификация лизосомных болезней накопления

ЛБН подразделяют на классы в зависимости от природы накапливаемых макромолекул. Основными являются муколипидозы, мукополисахаридозы, сфинголипидозы, гликопротеинозы, также выделяют иные группы, такие как гликогенозы и нейрональные цероидные липофусцинозы (рисунок 2).

1.1.4 Клинические проявления

Сроки манифестации заболевания и тяжесть его клинических проявлений зависят от пораженного метаболического пути, тканей-мишеней и характера генетических нарушений (генетической гетерогенности). Органами-мишенями при ЛБН являются обычные места разрушения макромолекул. Например, у лиц с нарушением процесса разрушения миелина в патогенез вовлекается белое вещество головного мозга, при нарушении процесса разрушения липидов развивается гепатоспленомегалия, а при нарушении процесса разрушения мукополисахаридов — генерализованное повреждение тканей. Накапливающиеся продукты часто вызывает висцеромегалию или макроцефалию, но может развиться и вторичная атрофия, особенно мозга и мышц.

Симптоматика соответствующих болезней обусловливается повреждающим действием накапливающихся веществ.

Рисунок 2. Классификация ЛБН (основано на рисунке из книги Михайловой и др. «Нейрометаболические заболевания у детей и подростков» [Михайлова и др., 2017])

Фенотипы ЛБН очень разнообразны. Многие из них коррелируют с возрастом: различают инфантильные, ювенильные и взрослые формы. При болезнях, обусловленных дефектом одного гена, возможны различные сочетания висцеральных, костных и неврологических аномалий. Для многих форм характерны гено-фенотипические корреляции: различия в тяжести заболевания у разных больных, равно как и разные сочетания висцеральных, скелетных, неврологических, глазных и других проявлений одной и той же болезни, определяются различным характером мутаций. Различные патогенные варианты гена по-разному влияют на активность фермента, могут изменять его способность к посттрансляционной модификации, либо сродство к конкретным субстратам. Гетерогенность еще больше увеличивается из-за рецессивной природы большинства ЛБН, за счет сочетаний мутантных аллелей в одном локусе. Считается, что на молекулярном уровне большинство больных с ЛБН являются компаунд-гетерозиготами [Артур Л. Боде [Arthur L. Beaudet], 1992]. Характер мутаций в двух копиях гена может быть неодинаковым, дефектные гены на обеих хромосомах или один из них могут кодировать фермент с некоторой остаточной активностью по отношению к одному или нескольким субстратам.

Клинические проявления ЛБН варьируют в широком диапазоне, однако характерными признаками практически всех нозологических форм являются прогредиентное течение (возникновение и/или прогрессирование заболевания после периода нормального состояния) и полисистемность - большинство форм ЛБН приводят к ранней инвалидизации и преждевременной смерти [Михайлова et al., 2017].

Повышение внимания к классу ЛБН обусловлено, прежде всего, появившимися на сегодняшний момент возможностями патогенетической терапии с помощью генно-инженерных ферментозамещающих препаратов для коррекции метаболических расстройств.

1.1.5 Эпидемиология

Лизосомные болезни относятся к редким заболеваниям. Частота отдельных форм колеблется от 1:40000 до 1:1000000 и реже; суммарная частота составляет 1:7000-1:8000 живых новорожденных [Новиков, 2014].

Почти все ЛБН наследуются по аутосомно-рецессивному типу. Исключение составляют 3 заболевания, сцепленных с полом: мукополисахаридоз II типа (болезнь Хантера] с Х-сцепленным рецессивным типом наследования, болезнь Фабри с Х-сцепленным рецессивным типом, однако в ряде случаев характеризующаяся клиническими проявлениями у женщин, и синдром Данона, наследующийся Х-сцеплено доминантно.

В таблице 1 представлены частоты некоторых ЛБН в европеоидной популяции.

Таблица 1.

Встречаемость некоторых ЛБН с частотой более 1:1 000 000

Нозологические формы Частота среди живых новорожденных

Болезнь Фабри 1 40 000 - 1:120 000

Болезнь Гоше 1 50 000

Болезнь Ниманна-Пика, тип А 1 400 000

Болезнь Ниманна-Пика, тип В 1 250 000

Болезнь Ниманна-Пика, тип С 1 100 000 - 1:120 000

Мукополисахаридозы [суммарно] 1 40 000 - 1:100 000

Мукополисахаридоз I 1 35 700

Мукополисахаридоз II 1 93 000 — 1:200 000

Мукополисахаридоз Ша 1 53 000 — 1:370 000

Мукополисахаридоз !Уа 1 76 000 — 1:1 420 000

Гликогенозы [суммарно] 1 40 000

Гликогеноз 1 1 100 000 - 1:300 000

Гликогеноз 2 [болезнь Помпе] 1 140 000

Гликогеноз 9 1 160 000

Дефицит лизосомной кислой липазы 1 40 000 - 1:300 000

1.1.6 Принципы диагностики лизосомных болезней

ЛБН можно заподозрить при наличии у пациента прогрессирующей дисфункции нервной системы, висцеромегалии, аномалиях скелета. Отличительной особенностью этих болезней служат прогрессирующие и

дегенеративные процессы [Артур Л. Боде (Arthur L. Beaudet), 1992; Михайлова и др., 2017; Новиков, 2014]. При сборе анамнеза необходимо обращать особое внимание на раннее развитие, неврологические симптомы, включая судороги, а также нарушения зрения и слуха, физический рост и более специфические показатели, такие как огрубение черт лица, помутнение роговицы, усиление ранних рефлюксов, растяжение живота, боли в суставах, их тугоподвижность, грыжи и рецидивирующие инфекции [Артур Л. Боде (Arthur L. Beaudet), 1992].

При подозрении на ЛБН проводят биопсию кожи, костного мозга, печени, периферического нерва, конъюнктивы или других тканей для проведения световой и электронной микроскопии. Общее предположение о ЛБН подтверждается или опровергается по результатам электронно-микроскопического исследования в зависимости от наличия или отсутствия аномальных лизосом.

Первым шагом дифференциальной диагностики ЛБН служит биохимический анализ.

1.1.6.1 Первичные и вторичные биомаркеры в диагностикелизосомных болезней

Биомаркеры (БМ) - это различные по структуре и свойствам биомолекулы, колебания активности и/или уровня которых отражают биохимические процессы в патогенезе того или иного заболевания. По отношению к исследуемому патогенетическому пути выделяют первичные БМ, непосредственно связанные с патологическим процессом, и вторичные - производные первичных или же те, чьи биоактивные свойства меняются под влиянием колебаний первичного БМ [Т. Крылова и др., 2016].

В настоящее время БМ широко применяются при рутинной диагностике, массовом скрининге, для контроля лечения, либо исследования динамики патологического процесса. Помимо своего диагностического значения, они также играют важную роль в фармацевтике при разработке специфичных лекарственных препаратов для НБО.

В последнее десятилетие наблюдается прорыв в области изучения и лечения ЛБН, наибольшее число открытых к настоящему моменту БМ используется именно в связи с этой категорией заболеваний, и ведется активный поиск новых.

1.1.6.2 Массовый и селективный скрининг на лизосомные болезни накопления

Ранняя диагностика НБО - важнейший этап в предупреждении тяжелых осложнений, формирования инвалидизирующих расстройств и ранней смертности. Можно выделить два пути раннего выявления наследственной патологии:

• массовый скрининг - обследование больших детских контингентов на выявление НБО независимо от пола, возраста, указаний на заболеваемость.

• селективный скрининг (скрининг групп риска) - обследование больных детей с определенной клинической симптоматикой.

В зависимости от класса выявляемых заболеваний лабораторная диагностика наследственных болезней часто носит дифференцированный характер.

Традиционный биоматериал для массового неонатального скрининга - бланки фильтровальной бумаги с сухими пятнами крови (dried blood spots, DBS). Для селективного скрининга, напротив, первоначально в основном использовались другие материалы: образцы крови (плазмы) и мочи, биоптаты тканей. Множество методик биохимического анализа специфических маркеров в сухих пятнах крови было разработано сравнительно недавно [Burton et al., 2019; Chamoles et al., 2002; Orsini et al., 2012].

В связи с введением в широкую практику высокопроизводительных технологий биохимического анализа: тандемной масс-спектрометрии (МС/МС), высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии (ВЭЖХ и ГХ), появилась возможность одновременного анализа многих ферментов и метаболитов в одном образце. К тому же, список скринируемых нарушений существенно расширился, c появлением МС/МС была открыта новая эра в

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Каменец Елена Анатольевна, 2020 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Агеева, Н.В., Агапова, И.А., Амелина, Е.Л., Гундобина О.С., Жаркова М.С., Каменец Е.А., Михайлова С.Е., Печатникова Н.Л., Сосновский, А.Е. Прогрессирующее заболевание печени: дефицит лизосомной кислой липазы (клинические наблюдения) - Русский медицинский журнал - 2018 - Т. 2, №5. - С. 96-103

2. Боде А.Л. Лизосомные болезни накопления: общие признаки. Определение: пер. с англ. / под ред. Сучкова А.В., Заваденко Н.Н., Катковского Д.Г.. Москва. - «Медицина». - 1992- 1997 - С.3430

3. Каменец Е.А., Печатникова Н.Л., Какаулина В.С., Михайлова С.В., Строкова, Т.В., Жаркова М.С., Потехина О.Е., Захарова, Е.Ю. Дефицит лизосомной кислой липазы у российских больных: молекулярная характеристика и эпидемиология - Медицинская Генетика - 2019 - Т. 18, №8. - С. 3-16.

4. Захарова, Е. Ю., Ижевская, В. Л., Байдакова, Г. В., Иванова, Т. А., Чумакова О. В., Куцев С. И. Массовый скрининг на наследственные болезни: ключевые вопросы. Мед. Генетика - 2017 - Т.10, № 3. - С.13.

5. Маевская М. В., Ивашкин В. Т., Жаркова М. С., Некрасова Т. П., Аюшева, Г. И., Масленников, Р. В. Редкие формы неалкогольной жировой болезни печени: наследственный дефицит лизосомной кислой липазы. Гепатология -2016 - Т.3. - С.41-51.

6. Михайлова, С. В., Захарова, Е. Ю., & Петрухин, А. С. Нейрометаболические заболевания у детей и подростков. Диагностика и подходы к лечению. 2-е издание, переработанное и дополненное. Москва. - «Литтерра». - 2017 -с.154

7. Новиков, П. В. Лизосомные болезни накопления-актуальная проблема педиатрии и современные возможности патогенетического лечения. Российский вестник перинаталогии и педиатриии. - 2014. -Т.59. - № 4. - с.4-

8. Прошлякова Т.Ю., Байдакова Г.В., Каменец Е.А., Михайлова С.В., Малахова В.А., Захарова, Е.Ю. Оксистеролы в дифференциальной диагностике лизосомных болезней накопления - Медицинская Генетика - 2016 - Т. 17, №5. - С. 37-41.

9. Рыжкова О. П., Кардымон О. Л., Прохорчук Е. Б., Коновалов Ф.А., Масленников А.Б., Степанов В.А., Афанасьев А.А., Заклязьминская Е.В., Костарева А.А., Павлов А.Е., Голубенко М.В., Поляков А.В., Куцев, С. И. Руководство по интерпретации данных последовательности ДНК человека, полученных методами массового параллельного секвенирования (MPS) (редакция 2018, версия 2). Мед. Генетика - 2019. - Т.18, № 2. - С.3-23.

10.Строкова Т.В., Багаева М.Э., Сурков А.Г., Павловская Е.В., Таран Н.Н., Каменец Е.А., Захарова Е.Ю. Дефицит лизосомной кислой липазы у детей. Российский вестник перинатологии и педиатрии. - 2016 - Т.61, № 4. - С. 154.

11.Строкова Т.В.. Нарушение липидного обмена у детей с заболеваниями печени. Эффективная фармакотерапия. - 2016 - Т.16 - С.22-26

12.Крылова Т.Д., Прошлякова Т. Ю., Байдакова Г. В., Иткис Ю. С., Куркина М. В., Захарова Е. Ю. Биомаркеры в диагностике и мониторинге лечения болезней клеточных органелл. Мед. Генетика - 2016 - Т.15,№ 7. - С.3-10

13.Федяков М. А., Барбитов Ю. А., Серебрякова E. A., Первунина Т. М., Власов Н. Н., Корниенко Е. А., Глотов А.С., Сарана А.М., Щербак С.Г., Глотов О.С. Исследование частоты встречаемости дефицита лизосомной кислой липазы в российской популяции. Педиатрическая Фармакология. - 2018 - Т.15, № 2 -с.184-185

14.Abello F., Guardamagna, O., Baracco, V., & Bonardi, R. The treatment of colesteryl storage disease (CESD) by ezetimibe monotherapy //Atherosclerosis Supplements - 2010 - V. 11. - P.28

15.Aguisanda F., Thorne N., Zheng, W. Targeting Wolman Disease and Cholesteryl Ester Storage Disease: Disease Pathogenesis and Therapeutic Development. Current Chemical Genomics and Translational Medicine - 2107 - V.11. - P.1-18

16.Ameis D., Brockmann G., Knoblich R., Merkel, M., Ostlund R. E., Yang J. W., Coates P. M., Cortner J. A., Feinman S. V., Greten, H. A 5' splice-region mutation and a dinucleotide deletion in the lysosomal acid lipase gene in two patients with cholesteryl ester storage disease. Journal of Lipid Research. - 1995 - V.36. -P.241-250

17.Anderson R. A., Bryson G. M., Parks J. S. Lysosomal acid lipase mutations that determine phenotype in Wolman and cholesterol ester storage disease. Molecular Genetics and Metabolism. - 1999 - V.68. - P.333-345

18.Aslanidis C., Ries S., Fehringer P., Buchler C., Klima H., Schmitz G. Genetic and biochemical evidence that CESD and Wolman disease are distinguished by residual lysosomal acid lipase activity. Genomics. - 1996 - V.33. - P.85-93

19.Balwani M., Breen C., Enns G. M., Deegan P. B., Jones S., Kane, J. P., Malinova V., Sharma R., Stock E. O., Valayannopoulos V., Wraith J. E., Burg J., Eckert S., Quinn A. G. Clinical Effect and Safety Profile of Recombinant Human Lysosomal Acid Lipase in Patients with Cholesteryl Ester Storage Disease . Hepatology. -2014 - V.58. - P.950-957

20.Baratta F., Pastori D., Polimeni L., Tozzi G., Violi F., Angelico F., & Del Ben M. Does lysosomial acid lipase reduction play a role in adult non-alcoholic fatty liver disease?. International Journal of Molecular Sciences. - 2015 - V.16. - P.28014-28021

21.Beaudet A. L., Ferry G. D., Nichols B. L., & Rosenberg H. S. Cholesterol ester storage disease: Clinical, biochemical, and pathological studies. The Journal of Pediatrics. - 1977 - V.90. - P.910-914

22.Bernstein D. L., Hulkova H., Bialer M. G., Desnick R. J. Cholesteryl ester storage disease: Review of the findings in 135 reported patients with an underdiagnosed disease. Journal of Hepatology. - 2013 - V.58.. - P.1230-1243

23.Boenzi S., Deodato F., Taurisano R., Goffredo B. M., Rizzo C., & Dionisi-Vici C. Evaluation of plasma cholestane-3p,5a,6^-triol and 7-ketocholesterol in inherited disorders related to cholesterol metabolism. Journal of Lipid Research. - 2016 -V.57. - P.361-367.

24.Boldrini R., Devito R., Biselli R., Filocamo M., Bosman C. Wolman disease and cholesteryl ester storage disease diagnosed by histological and ultrastructural examination of intestinal and liver biopsy. Pathology Research and Practice. -2004 - V.200. - P.231-240

25.Boot R. G., Renkema G. H., Verhock M., Strijland A., Bliek J., De Meulemeester T. M. A. M. O., Mannens M. M. A. M., & Aerts, J. M. F. G. The human chitotriosidase gene - Nature of inherited enzyme deficiency. Journal of Biological Chemistry. - 1998 - V.273. - P.25680-25685

26.Boot R. G., Van Achterberg T. A. E., Van Aken B. E., Renkema G. H., Jacobs M. J. H. M., Aerts J. M. F. G., De Vries C. J. M. Strong induction of members of the chitinase family of proteins in atherosclerosis: Chitotriosidase and human cartilage gp-39 expressed in lesion macrophages. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. 1999 - V.19. - P.687-694

27.Braulke T., & Bonifacino J. S. Biochimica et Biophysica Acta Sorting of lysosomal proteins. BBA - Molecular Cell Research. - 2009. - V.1793. - P.605-614

28.Burton B. K., Balwani M., Feillet F., Baric I., Burrow T. A., Camarena Grande C., Coker M., Consuelo-Sánchez A., Deegan P., Di Rocco M., Enns G. M., Erbe R., Ezgu F., Ficicioglu C., Furuya K. N., Kane J., Laukaitis C., Mengel E., Neilan E. G., Nightingale S., Pters H., Scarpa M., Schwab K.O., Smolka V., Valayannopoulos V., Wood M., Goodman Z., Yang Y., Eckert S., Rojas-Caro S., Quinn A. G. A Phase 3 Trial of Sebelipase Alfa in Lysosomal Acid Lipase Deficiency. New England Journal of Medicine. - 2015 - V.373. - P.1010-1020

29.Burton B. K., Hoganson G. E., Fleischer J., Grange D. K., Braddock S. R., Hickey R., Hitchins L., Groepper D., Christensen K. M., Kirby A., Moody C., Shryock H., Ashbaugh L., Shao R., Basheeruddin K. Population-Based Newborn Screening for Mucopolysaccharidosis Type II in Illinois: The First Year Experience. Journal of Pediatrics. - 2019 - V.214 - P.165-167

30.Bychkov I. O., Kamenets E. A., Filatova A. Y., Skoblov M. Y., Mikhaylova S. V., Strokova T. V., Gundobina O.S., Zakharova E. Y. The novel synonymous variant

in LIPA gene affects splicing and causes lysosomal acid lipase deficiency. Molecular Genetics and Metabolism. - 2019 - V.127. - P. 212-215

31.Cappuccio G., Donti T. R., Hubert L., Sun Q., Elsea S. H. Opening a window on lysosomal acid lipase deficiency: Biochemical, molecular, and epidemiological insights. Journal of Inherited Metabolic Disease - 2019 - V.42. - P.509-518

32.Chamoles N. A., Blanco M., Gaggioli D., Casentini C. Gaucher and Niemann-Pick diseases - Enzymatic diagnosis in dried blood spots on filter paper: Retrospective diagnoses in newborn-screening cards. Clinica Chimica Acta - 2002 - V.317. -P.191-197

33.Crocker A. C., Vawter G. F., Neuhauser E. B. D., Rosowsky A. Wolman's disease: recently described lipidosis. Pediatrics. - 1965 - V.35. - P.627-640

34.Cummings M. H., Watts G. F. Increased hepatic secretion of very-low-density lipoprotein apolipoprotein B-100 in cholesteryl ester storage disease. Clinical Chemistry. - 1995 - V.41. - P.111-114

35.Dahl S. Vom Harzer K., Rolfs A., Albrecht B., Niederau C., Vogt C., Weely S. Van, Aerts J., Müller G., Häussinger D. Hepatosplenomegalic lipidosis: What unless Gaucher? Adult cholesteryl ester storage disease (CESD) with anemia, mesenteric lipodystrophy, increased plasma chitotriosidase activity and a homozygous lysosomal acid lipase -1 exon 8 splice junction mutation. Journal of Hepatology. -1999 - V.31. - P.741-746.

36.Du H., Duanmu M., Witte D., Grabowski G. A. Targeted disruption of the mouse lysosomal acid lipase gene: long-term survival with massive cholesteryl ester and triglyceride storage. Human Molecular Genetics. - 1998 - V.7. - P.1347-1354.

37.Du H., Sheriff S., Bezerra J., Leonova T., Grabowski G. A. Molecular and enzymatic analyses of lysosomal acid lipase in cholesteryl ester storage disease. Molecular Genetics and Metabolism. - 1998 - V.64. - P.126-134

38.Erwin A. L. The role of sebelipase alfa in the treatment of lysosomal acid lipase deficiency. Therapeutic Advances in Gastroenterology. - 2017 -V.10.- P.553-562

39.Filatova A. Y., Vasilyeva T. A., Marakhonov A. V., Voskresenskaya A. A., Zinchenko R. A., Skoblov M. Y. Functional reassessment of PAX6 single

nucleotide variants by in vitro splicing assay. European Journal of Human Genetics. - 2019 - V.27. - P.488-493

40.Freudenberg F., Bufler P., Ensenauer R., Lohse P., Koletzko S. Cholesteryl ester storage disease: An easily missed diagnosis in oligosymptomatic children. Zeitschrift Fur Gastroenterologie. - 2013 - V.51. - P.1184-1187

41.Gelb M. H., Scott C. R., Turecek F. Newborn Screening for Lysosomal Storage Diseases. Clinical Chemistry. - 2015 - V.61. - P.335-346.

42.Ghosh A., Schlecht H., Heptinstall L. E., Bassett J. K., Cartwright E., Bhaskar S. S., Urquhart J., Broomfield A., Morris A. A., Jameson E., Schwahn B. C., Walter J. H., Douzgou S., Murphy H., Hendriksz C., Sharma R., Wilcox G., Crushell E., Monavari A. A.Martin R., Doolan A., Senniappan S., Ramsden S.C., Jones S.A., Banka, S. Diagnosing childhood-onset inborn errors of metabolism by next-generation sequencing. Archives of Disease in Childhood.- 2017 - V.102. -P.1019-1029.

43.Goldstein J. L., Dana S. E., Faust J. R., Beaudet A. L., Brown M. S. Role of lysosomal acid lipase in the metabolism of plasma low density lipoprotein. Observations in cultured fibroblasts from a patient with cholesteryl ester storage disease. Journal of Biological Chemistry. - 1975. - V.25. - P.8487-8495

44.GnomAD v.2.1.1 - 2020. - https://gnomad.broadinstitute.org/

45.Grabowski G.A. Therapy for lysosomal acid lipase deficiency: Replacing a missing link. Hepatology. - 2013 - V.58. - P.850-852.

46.Grabowski G.A., Du H., Charnas L. Lysosomal Acid Lipase Deficiencies: The Wolman Disease/Cholesteryl Ester Storage Disease Spectrum | The Online Metabolic and Molecular Bases of Inherited Disease | OMMBID | McGraw-Hill Medical. The Online Metabolic & Molecular Bases of Inherited Disease, 1-26

47.Guo Y., He W., Boer A. M. I., Wevers R. A., Bruijn A. M. D. E., Groener J. E. M., Hollak C. E. M., Aerts J. M. F. G., Galjaard H. Elevated plasma chitotriosidase activity in various lysosomal storage disorders. J. Inher. Metab. Dis.. - 1995 -V.18. - P.717-722

48.Guy G. J., Butterworth J. Acid esterase activity in cultured skin fibroblasts and

amniotic fluid cells using 4-methylumbelliferyl palmitate. Clinica Chimica Acta. -1978 - V.84. - P.361-371

49.Hamilton J., Jones I., Srivastava R., Galloway P. A new method for the measurement of lysosomal acid lipase in dried blood spots using the inhibitor Lalistat 2. Clinica Chimica Acta. - 2012 - V.413. - P. 1207-1210

50.Hautekeete M. L., Degott C., Benhamou J. P. Microvesicular steatosis of the liver. Acta Clinica Belgica. - 1990 - V.45. - P.311-326.

51.HGMD® Professional 2020.2 - 2020 - https://portal.biobase-international. com/hgmd/pro/search_gene.php

52.Horton J. D., Goldstein J. L., Brown M. S. SREBPs: Activators of the complete program of cholesterol and fatty acid synthesis in the liver. Journal of Clinical Investigation/ - 2002 - V.109. - P.1125-1131

53.H^kova H., Elleder M. Distinctive histopathological features that support a diagnosis of cholesterol ester storage disease in liver biopsy specimens. Histopathology. - 2012 - V.60. - P.1107-1113

54.Ivashkin V., Zharkova M. Cholesteryl Ester Crystals in Lysosomal Acid Lipase Deficiency. New England Journal of Medicine. - 2017 - V.376. - P.14

55.Jeon T. I, Osborne T. F. SREBPs: Metabolic integrators in physiology and metabolism. Trends in Endocrinology and Metabolism. - 2012 - V.23. - P.65-72

56.Jiang X., Sidhu R., Porter F. D., Yanjanin N. M., Speak A. O., Te Vruchte D. T., Platt F. M., Fujiwara H., Scherrer D. E., Zhang J., Dietzen D. J., Schaffer J. E., & Ory D. S. A sensitive and specific LC-MS/MS method for rapid diagnosis of Niemann-Pick C1 disease from human plasma. Journal of Lipid Research. - 2011 - V.52. - P.1435-1445

57.Kamenets E.A., Baydakova G.V., Proshlyakova T.Y., Mikhaylova S.V., Strokova T.V., Maevskaya M.V., Zharkova M.S., Zakharova E.Y. The spectrum of mutations and biochemical characteristics of 21 Russian patients with lysosomal acid lipase deficiency. Journal of Inherited Metabolic Disease. - 2016 - V. 39, Suppl. 1. - P. 207-208

58.Kamenets E., Mikhaylova S., Tylki-Szymanska A., Kakaulina V., Pechatnikova

N., Strokova T., Lipinski P. Characteristics of the Phenotype-Genotype Correlation in Cohort of Russian and Ukrainian Patients with Lysosomal Acid Lipase Deficiency. Journal of Genetics & Genomic Sciences - 2020 - V.4. - P. 013

59.Klima H., Ullrich K., Aslanidis C., Fehringer P., Lackner K. J., Schmitz G. A splice junction mutation causes deletion of a 72-base exon from the mRNA for lysosomal acid lipase in a patient with cholesteryl ester storage disease. Journal of Clinical Investigation. - 1993 - V.92. - P.2713-2718

60.Konno T., Fujii M., Watanuki T., Koizumi K. Wolman's disease: the first case in Japan. Tohoku J Exp Med. - 1966 - V.90. - P.375-389

61.Korade Z., Xu L., Shelton R., Porter N. A. Biological activities of 7-dehydrocholesterol-derived oxysterols: implications for Smith-Lemli-Opitz syndrome. Journal of Lipid Research. -2010 - V.51. - P.3259-3269

62.Krivit W., Peters C., Dusenbery K., Ben-Yoseph Y., Ramsay N., Wagner J., Anderson R. Wolman disease successfully treated by bone marrow transplantation. Bone Marrow Transplantation. - 2000 - V.26. - P.567-570

63.Kyriakides E. C., Filippone N., Paul B., Grattan W., Balint J. A. Lipid studies in Wolman's disease. Pediatrics. - 1970 - V.46. - P.431-436

64.Lee T., Welsh M., Benhamed S., Chung W. Intragenic Deletion as a Novel Type of Mutation in Wolman Disease. Mol Genet Metab. - 2011 - V.104. - P.703-705

65.Lipinski P., Lugowska A., Zakharova E. Y., Socha P., Tylki-Szymanska A. Diagnostic Algorithm for Cholesteryl Ester Storage Disease. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition - 2018 - V.67. - P.452-457

66.Lohse P., Maas S., Lohse, P., Sewell A. C., Van Diggelen O. P., Seidel D. Molecular defects underlying Wolman disease appear to be more heterogeneous than those resulting in cholesteryl ester storage disease. Journal of Lipid Research. - 1999 - V.40. - P.221-228.

67.Malaguarnera L. Chitotriosidase: The yin and yang. Cellular and Molecular Life Sciences. - 2006 -V.63. - P.3018-3029

68.Marshall W. C., Ockenden B. G., Fosbrooke A. S., Cumings J. N. Wolman's

disease: A rare lipidosis with adrenal calcification. Archives of Disease in Childhood. - 1969 - V.44. - P.331-341

69.Masi S., Chennamaneni N., Turecek F., Scott C. R., Gelb H. A Specific Substrate for the Assay of Lysosomal Acid Lipase. Clinical Chemistry. - 2019 - V.64. -P.690-696

70.Miller W. L., Bose H. S. Early steps in steroidogenesis: Intracellular cholesterol trafficking. Journal of Lipid Research. - 2011 - V.52. - P.2111-2135

71.Mukherjee M. Human digestive and metabolic lipases - A brief review. Journal of Molecular Catalysis B: Enzymatic. - 2003 - V.22. - P.369-376

72.Muntoni S., Wiebusch H., Jansen-Rust M., Rust S., Schulte H., Berger K., Pisciotta L., Bertolini S., Funke H., Seedorf U., Assmann G. Heterozygosity for lysosomal acid lipase E8SJM mutation and serum lipid concentrations. Nutrition, Metabolism and Cardiovascular Diseases. - 2013 - V.23. - P.732-736

73.Muntoni S., Wiebusch H., Jansen-Rust M., Rust S., Seedorf U., Schulte H., Berger K., Funke H., Assmann G. Prevalence of cholesteryl ester storage disease. Arteriosclerosis, Thrombosis, and Vascular Biology. - 2007 - V.27. - P.1866-1868

74.Orsini J. J., Martin M. M., Showers A. L., Bodamer O. A., Zhang X. K., Gelb M. H., Caggana M. Lysosomal storage disorder 4+1 multiplex assay for newborn screening using tandem mass spectrometry: Application to a small-scale population study for five lysosomal storage disorders. Clinica Chimica Acta. -2012 - V.413. - P.1270-1273.

75.Pajares S., Arias A., Garcia-Villoria J., Macias-Vidal J., Ros E., de las Heras J., Giros M., Coll M. J., Ribes A. Cholestane-3ß,5a,6ß-triol: high levels in Niemann-Pick type C, cerebrotendinous xanthomatosis, and lysosomal acid lipase deficiency. Journal of Lipid Research. - 2015 - V.56. - P. 1926-1935

76.Patrick A. D., Lake B. D. Deficiency of an Acid Lipase in Wolman's Disease. Nature Publishing Group. - 1969 - V.222. - P.582-587.

77.Piraud M., Pettazzoni M., Lavoie P., Ruet S., Pagan C., Cheillan D., Latour P., Vianey-Saban C., Auray-Blais C., Froissart R. Contribution of tandem mass

spectrometry to the diagnosis of lysosomal storage disorders. J. Inher. Metab. Dis.

- 2018 - V.41. - P.457-477

78.Pullinger C. R., Stock E. O., Movsesyan I., Malloy M. J., Frost P. H., Tripuraneni R., Quinn A. G., Ishida B. Y., Schaefer E. J., Asztalos B. F., Kane J. P. Identification and metabolic profiling of patients with lysosomal acid lipase deficiency. Journal of Clinical Lipidology. - 2015 - V.9. - P.716-726.e1

79.Reiner Z., Guardamagna O., Nair D., Soran H., Hovingh K., Bertolini S., Jones S., Coric M., Calandra S., Hamilton J., Eagleton T., Ros E. Lysosomal acid lipase deficiency - An under-recognized cause of dyslipidaemia and liver dysfunction. In Atherosclerosis. - 2014 - V.235. - P.21-30

80.Reynders J., Burton B. K., del Angel G. Novel LIPA mutations resulting in lysosomal acid lipase deficienc. Molecular Genetics and Metabolism. - 2017 -V.120. - P.114-115

81.Ries S., Büchler C., Schindler G., Aslanidis C., Ameis D., Gasche C., Jung N., Schambach A., Fehringer P., Vanier M. T., Belli D. C., Greten H., Schmitz G. Different missense mutations in histidine-108 of lysosomal acid lipase cause cholesteryl ester storage disease in unrelated compound heterozygous and hemizygous individuals. Human Mutation. - 1998 - V.12 - P.44-51

82.Rosenbaum A. I., Cosner C. C., Mariani C. J., Maxfield F. R., Wiest O., Helquist P. Thiadiazole Carbamates: Potent Inhibitors of Lysosomal. J Med Chem. - 2010.

- V.53. - P.5281-5289.

83.Rosenbaum A. I., Rujoi M., Huang A. Y., Du H., Grabowski G. A., Maxfield F. R. Chemical screen to reduce sterol accumulation in Niemann-Pick C disease cells identifies novel lysosomal acid lipase inhibitors. Biochimica et Biophysica Acta -Molecular and Cell Biology of Lipids. - 2009 - V.1791. - P. 1155-1165. https://doi.org/10.1016/j.bbalip.2009.08.005

84.Roussel A., Canaan S., Egloff M. P., Rivière M., Dupuis L., Verger R., Cambillau C. Crystal structure of human gastric lipase and model of lysosomal acid lipase, two lipolytic enzymes of medical interest. Journal of Biological Chemistry. - 1999

- V.274. - P.16995-17002

85.Ruiz-Andrés C., Sellés E., Arias A., Gort L., Sampedro P. B. G., Bousoño M.M., Rodríguez S., Velasco R., Sasieta P., Arana A., Pérez Rodríguez J., Martinez-Pardo, Artuch, Gallego, R., González. Lysosomal acid lipase deficiency in 23 spanish patients: High frequency of the novel c.966+2T>G mutation in wolman disease. JIMD Reports. - 2017 - V.37. - P.7-12 86.Salvayre R., Negre A., Maret A., Radom J., Douste-Blazy L. Extracellular origin of the lipid lysosomal storage in cultured fibroblasts from Wolman's disease. European Journal of Biochemistry. - 1987 - V.170. - P.453-458 87.Schiff L., Schubert W., McAdams A., Spiegel E., O'Donnell J. Hepatic cholesterol

ester storage disease, a familial disorder. Am J Med. - 1968. - V.44. - P.538-546 88.Scott S. A., Liu B., Nazarenko I., Martis S., Kozlitina J., Yang Y., Ramirez C., Kasai Y., Hyatt T., Peter I., Desnick, R. J. Frequency of the cholesteryl ester storage disease common LIPA E8SJM mutation (c.894G>A) in various racial and ethnic groups. Hepatology. - 2013 - V.58. - P.958-965. 89.Selvakumar P. K. C., Kabbany M. N., Lopez R., Tozzi G., Alisi A., Alkhouri N., Nobili V., Shteyer E., Villenchik R., Mahamid M., Nator N., Safadi R. Low Serum Lysosomal Acid Lipase Activity Correlates with Advanced Liver Disease. Int. J. Mol. Sci. - 2016 - V.17 - P.909-913 90.Silva E.S., Klaudel-Dreszler M., Bakula A., Oliva T., Sousa T., Fernandes P.K., Tylki-Szymanska A., Kamenets E., Martins E., Socha P. Early onset lysosomal acid lipase deficiency presenting as secondary hemophagocytic lymphohistiocytosis: Two infants treated with sebelipase alfa. Clinics and Research in Hepatology and Gastroenterology. - 2018 - V.42 - P.77 - 82. 91.Shteyer E., Villenchik R., Mahamid M., Nator N., Safadi, R. Low serum lysosomal acid lipase activity correlates with advanced liver disease. International Journal of Molecular Sciences. - 2016 - V.17 - P.312 92.Tandra S., Yeh M. M., Brunt E. M., Vuppalanchi R., Cummings O. W., Ünalp-Arida A., Wilson L. A., Chalasani N. Presence and significance of microvesicular steatosis in nonalcoholic fatty liver disease. Journal of Hepatology. - 201 - V.55. -P.654-659

93.Thelwall P. E., Smith F. E., Leavitt M. C., Canty D., Hu W., Hollingsworth K. G., Thoma C., Trenell M. I., Taylor R., Rutkowski J. V., Blamire A. M., Quinn A. G. Hepatic cholesteryl ester accumulation in lysosomal acid lipase deficiency: Noninvasive identification and treatment monitoring by magnetic resonance. Journal of Hepatology. - 2013 - V.59 - P.543-549

94.Tint G. S. T., Entchev P. P., Atta A. K. B., Hefer S. S., Alen G. S., Onda A. H. Cholesterol and oxygenated cholesterol concentrations are markedly elevated in peripheral tissue but not in brain from mice with the Niemann - Pick type C phenotype. J. Inher. Metab. Dis. - 1998 - V.21. - P.853-863

95.Tolar J., Petryk A., Khan K., Bjoraker K. J., Jessurun J., Dolan M., Kivisto T., Charnas L., Shapiro E. G., Orchard P. J. Long-term metabolic, endocrine, and neuropsychological outcome of hematopoietic cell transplantation for Wolman disease. Bone Marrow Transplantation. - 2009 - V.43. - P.21-27

96.Valles-Ayoub Y., Esfandiarifard S., No D., Sinai P., Khokher Z., Kohan M., Kahen T., Darvish D. Wolman Disease (LIPA p.G87V) Genotype Frequency in People of Iranian-Jewish Ancestry. Genetic Testing and Molecular Biomarkers. -2011 - V.15 - P.395-398

97.Vinje T., Wier0d L., Leren T. P., Str0m T. B. Prevalence of cholesteryl ester storage disease among hypercholesterolemic subjects and functional characterization of mutations in the lysosomal acid lipase gene. Molecular Genetics and Metabolism. - 2018 - V.123. - P. 169-176

98.Walterfang M., Velakoulis D. Niemann-Pick disease type C in adulthood - A psychiatric and neurological disorder. European Neurological Review. - 2010. -V.5. - P.83-87

99.Wang R. Y., Bodamer O. A., Watson M. S., Wilcox W. R. Lysosomal storage diseases: Diagnostic confirmation and management of presymptomatic individuals. Genetics in Medicine. - 2011 - V.13 - P.457-484

100.Westemeyer M., Saucier J., Wallace J., Prins S. A., Shetty A., Malhotra M., Demko Z. P., Eng C. M., Weckstein L., Boostanfar R., Rabinowitz M., Benn P., Keen-Kim D., Billings P. Clinical experience with carrier screening in a general

population: support for a comprehensive pan-ethnic approach. Genetics in Medicine. - 2020 - V.22. - P.1320-1328.

101.Wolman M., Sterk V. V, Gatt S., Frenkel M. Primary familial xanthomatosis with involvement and calcification of the adrenals. Report of two more cases in siblings of a previously described infant. Pediatrics. - 1961 - V.28. - P.742-757

102. Xiong H. Y., Alipanahi B., Lee L. J., Bretschneider H., Merico D., Yuen R. K. C., Hua Y., Gueroussov S., Najafabadi H. S., Hughes T. R., Morris Q., Barash Y., Krainer A. R., Jojic N., Scherer S. W., Blencowe B. J., Frey B. J. The human splicing code reveals new insights into the genetic determinants of disease. Science. - 2015 - V.347. - P.1-20.

103. Xu M., Liu K., Swaroop M., Porter F. D., Sidhu R., Finkes S., Ory D. S., Marugan J. J., Xiao J., Southall N., Pavan W. J., Davidson C., Walkley S. U., Remaley A. T., Baxa U., Sun W., Mckew J. C., Austin C. P., Zheng W. Delta-tocopherol reduces lipid accumulation in Niemann-Pick type C1 and Wolman cholesterol storage disorders. The Journal of Biological Chemistry. - 2012 - V.287. -P.39349-39360.

104. Young E. P., Patrick A. D. Deficiency of acid esterase activity in wolman's disease. Archives of Disease in Childhood. - 197. - V.45. - P.664-668.

105. Zakharova E., Kamenets E., Baydakova G., Mikhaylova S., Strokova T., Bagaeva M., Lavrova A., Amelina M., Pichkur N. Lysosomal acid lipase deficiency diagnostics and mutation spectrum of LIPA gene in cohort of patients with hypercolesterolemia. Atherosclerosis. - 2017 - V.263

106. Zhang B., Porto A. F. Cholesteryl ester storage disease: Protean presentations of lysosomal acid lipase deficiency. Journal of Pediatric Gastroenterology and Nutrition. 2013 - V.56. - P.682-685.

ПРИЛОЖЕНИЕ 1. Анкета для направления на диагностику ДЛКЛ

Перед отправкой сухого пятна крови укажите, какие симптомы и лабораторные данные присутствуют у данного пациента,

если известно:

Тромбоциты:

Лейкоциты:

значение

норма

значение

норма

(данные из ОАК, проведенного не ранее 14 дней до отправки СПК на активность ЛКЛ)

«Да»/«Нет», нужное отметить V

Да Нет

Персистирующая гепатомегалия неясного происхождения Спленомегалия

Неалкогольная жировая болезнь печени (НАЖБП) Неалкогольный стеатогепатит Гиперлипидемия типа II или 11В

Персистирующее повышение трансаминаз неясного происхождения (АЛТ выше 1,5 норм)

Липопротеины низкой плотности выше, чем 160 мг/дл или 4,1 ммоль/л Липопротеины высокой плотности выше, чем 40 мг/дл или 1,0 ммоль/л Индекс массы тела меньше 30 или 95% перцинтилей Семейная гиперхолестеринемия неясного происхождения Признаки фиброза/цирроза печени

Исключались ли другие болезни накопления, если «да», укажите, какие:_

ПРИЛОЖЕНИЕ 2. Демографические данные и основные характеристики

выборки пациентов с установленным диагнозом ДЛКЛ.

№ Шифр Регион проживания Пол Первые жалобы пациенты Первые симптомы, отмеченные врачами (возраст проявления ) Лабораторные данные при первой консультации Инструментальные исследования Активность ЛКЛ (нмоль/ч/пятно) Актисность хитотриозидазы (нмоль/ч/мл) Возраст постановки диагноза Генотип

Пациенты с диагнозом БНЭХ, гомозиготные по варианту е.8940>А

1 П.1 Н. Новгород М боль в животе, тошнота гепатомегал ия (4г) АЛТ 180,0 АСТ 95,0 ОХ 8,35 ЛПВП-Х н.д. ЛПНП-Х н.д. ТГ 0,94 Пониженная эхогенность печени при УЗИ, гиперэхогенные включения в паренхиме надпочечников (кальцинаты) Фиброз МЕТАУГО. Б-0 0,00 752 14л c.894G>A/ c.894G>A

2 П.2 Волгоград Ж боль в животе повышение трансаминаз (7л) АЛТ 163,0 АСТ 131,0 ОХ 9,33 ЛПВП-Х 1,20 ЛПНП-Х 7,53 ТГ 8,69 Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ Фиброз METAVIR F-0 0,00 61 8 л c.894G>A/ c.894G>A

3 П.3 Волгоград Ж без жалоб повышение трансаминаз (6л) АЛТ 124,0 АСТ 81,0 ОХ 9,55 ЛПВП-Х 0,92 ЛПНП-Х 8,40 ТГ 1,34 Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ Фиброз METAVIR F-0 0,01 58 7л c.894G>A/ c.894G>A

4 П.4 4 ю о 5 и о и о и о о £ Ж боль в животе повышение трансаминаз гипербилирубине мия (2г) АЛТ 183,2 АСТ 144,0 ОХ 6,16 ЛПВП-Х 1,28 ЛПНП-Х 4,60 ТГ 0,94 Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени на УЗИ Фиброз МЕТАУГО Б-0 Биопсия печени (5л) -вакуоли, наполненные липидами в гепатоцитах и части клеток Купфера 0,00 39 9 л c.894G>A/ c.894G>A

5 П.5 Ленинградская обл. Ж без жалоб повышение трансаминаз (5л) АЛТ 114,0 АСТ 148,0 ОХ 8,20 ЛПВП-Х 1,10 ЛПНП-Х 6,19 ТГ 1,97 Диффузные изменения в паренхиме печени, перипортальный фиброз на УЗИ Фиброз МЕТАУГО. Б-3 0,00 15 13л c.894G>A/ c.894G>A

6 П.6 Московская обл. М увеличение живота гепатомегал ия (7мес) АЛТ 188,0 АСТ 80,0 ОХ 7,01 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 5,02 ТГ 2,56 Порто-портальный фиброз на УЗИ Биопсия печени (17л) -определяется 6 портальных трактов, порто-портальный фиброз, раздутые вакуолизированные гепатоциты округлой формы 0,00 32 32 г c.894G>A/ c.894G>A

7 П.7 Курская обл Ж боль в животе Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (5л) АЛТ 134,0 АСТ 86,0 ОХ 8,00 ЛПВП-Х 1,00 ЛПНП-Х 7,07 ТГ н.д. Диффузная гетерогенность в паренхиме печени на УЗИ 0,00 НД 7л c.894G>A/ c.894G>A

8 боль в АЛТ 88 АСТ 125 Умеренно повышенная эхогенность печени при УЗИ МЕТАУГО. Б-0

животе, повышение ОХ 5,90 c.894G>A/ c.894G>A

П.8 М малый трансаминаз ЛПВП-Х 1,05 Биопсия печени 0,03 10 6л

аппетит, (4г) ЛПНП-Х 4,58 (6л) - порто-портальный

ч Й тошнота ТГ 0,94 фиброз,

& о вакуолизированные

и ч о 03 гепатоциты округлой формы

9 П.9 Тула Ж без жалоб гепатомегал ия, повышение трансаминаз (3г) АЛТ 210,0 АСТ 146,0 ОХ 11,10 ЛПВП-Х 1,14 ЛПНП-Х 9,08 ТГ 1,51 Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ Фиброз METAVIR F-0 0,02 220 9л c.894G>A/ c.894G>A

10 небольшая гепатомегал АЛТ 160,0 АСТ 118,0 Повышенная эхогенность печени при УЗИ

П.10 ч й Ж без жалоб ия, ОХ 9,07 Биопсия печени 0,01 НД 5л c.894G>A/

& X х X X л а повышение трансаминаз (2г) ЛПВП-Х 1,45 ЛПНП-Х 8,24 ТГ н.д. (3л) - вакуолизированные гепатоциты округлой формы c.894G>A

11 АЛТ 32,0

небольшая гепатомегал ия (1г 6мес) АСТ 58,0 Плотность печени без

П.11 Оренбург Ж без жалоб ОХ 6,41 ЛПВП-Х 0,60 ЛПНП-Х 3,79 ТГ 1,68 изменений, уплотнение стенок сосуудов и протоков при УЗИ 0,03 54 2г c.894G>A/ c.894G>A

Пациенты с диагнозом БНЭХ, компаунд-гетерозиготные по варианту е.8940>А

1 П.12 Владимирская обл Ж без жалоб гепатомегал ия (9мес) АЛТ 198,0 АСТ 78,7 ОХ 7,89 ЛПВП-Х 0,70 ЛПНП-Х 6,00 ТГ н.д. Гомогенность, повышенная эхогенность паренхимы печени на УЗИ Фиброз METAVIR F-0 0,00 393 8л c.894G>A/ ^894+Ш^

2 П.13 Москва М без жалоб гепатомегал ия (3г) АЛТ 147,5 АСТ 124,1 ОХ 9,70 ЛПВП-Х н.д. ЛПНП-Х 7,90 ТГ н.д. Данные УЗИ печени не представлены. Биопсия печени (3г) - в препаратах 3-5 портальных трактов, порто-портальный фиброз, определяются небольшие порто-портальные инфильтраты; часть гепатоцитов с очень светлой цитоплазмой и контурирующимися мембранами, большинство гепатоцитов содержит множественные мелкие и крупные вакуоли. 0,02 485 7л c.894G>A/ c.796G>T

3 П.14 Москва Ж боль в животе Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (3г) АЛТ 150,0 АСТ 165,4 ОХ 8,05 ЛПВП-Х н.д. ЛПНП-Х 7,30 ТГ н.д. Пониженная эхогенность печени при УЗИ 0,00 274 4г c.894G>A/ c.796G>T

4 П.15 Тюменская обл. Ж Слабость, тяжесть в правом подреберье Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (7л) АЛТ 122,0 АСТ 99,0 ОХ 8,67 ЛПВП-Х 2,07 ЛПНП-Х 5,57 ТГ 2,26 Умеренная диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ Биопсия печени (10л) -определяются 13 портальных трактов, дольковое и балочное строение сохранено, гепатоциты вакуолизированы, диффузная выраженная преимущественно мелкокапельная жировая дистрофия гепатоцитов 0,00 965 18л c.894G>A/ c.796G>T

5 П.16 Москва М без жалоб гепатомегал ия, повышение трансаминаз (4г) АЛТ 109,0 АСТ 82,0 ОХ 6,18 ЛПВП-Х 0,90 ЛПНП-Х 5,59 ТГ н.д. Диффузные изменения в паренхиме печени, признаки фиброза на УЗИ 0,02 1229 14л c.894G>A/ c.421delG

6 П.17 Москва Ж без жалоб повышение трансаминаз (4г) АЛТ 128 АСТ 62 ОХ 6,18 ЛПВП-Х 1,20 ЛПНП-Х 5,85 ТГ н.д. Диффузные изменения в паренхиме печени, признаки фиброза на УЗИ 0,00 595,5 5л c.894G>A/ c.796G>T

7 П.18 Москва М без жалоб Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (7л) АЛТ 143 АСТ 207 ОХ 7,59 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 4,63 ТГ 1,76 Гомогенность, пониженная эхогенность паренхимы печени на УЗИ Фиброз METAVIR F-4, цирроз 0,01 356 10л c.894G>A/ c.420G>A

8 П.19 Респ. Крым М без жалоб небольшая гепатомегал ия, повышение трансаминаз (3г) АЛТ 258 АСТ 183 ОХ 6,73 ЛПВП-Х 0,59 ЛПНП-Х5,49 ТГ 2,20 Диффузные изменения в паренхиме печени на МРТ Фиброз METAVIR F-1 Биопсия печени (5л) -определяется порто-портальный фиброз; зоны пери-портального фиброза, перигепато-целлюлярного фиброза в дольках; гепатоциты округлой формы, часть увеличена в размерах, имеют очень светлую, мелкозернистую цитоплазму, большинство одержат вакуоли 0,00 398 8л c.894G>A/ c.796G>T

9 П.20 Н. Новгород Ж без жалоб Диагностиро ван при поиске мутаций у родственник ов больного, небольшая гепатомегал ия, повышение трансаминаз (9л) АЛТ 88 АСТ 56 ОХ 9,05 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 7,77 ТГ 2,36 Диффузные изменения в паренхиме печени на УЗИ 0,02 67 9л c.894G>A/ c.420G>A

10 П.21 Н. Новгород М боль в животе небольшая гепатомегал ия, повышение трансаминаз (3г) АЛТ 132 АСТ 106 ОХ 7,04 ЛПВП-Х 0,90 ЛПНП-Х 5,66 ТГ 1,99 Диффузные изменения в паренхиме печени на УЗИ Фиброз METAVIR Б-2 0,01 45 6л c.894G>A/ c.420G>A

11 П.22 Омская обл. Ж боль в животе Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз, гипербилирубине мия (8л) АЛТ 96 АСТ 74 ОХ 9,74 ЛПВП-Х 1,35 ЛПНП-Х 7,94 ТГ 2,17 Мелко-очаговая гетерогенность, повышенная эхогенность в паренхиме печени на УЗИ Фиброз METAVIR F-0 Биопсия печени (12л) -определяется нарушение долькового и балочного строения; гепатоциты крупные, имеются безъядерные, цитоплазма гепатоцитов вакуолизирована; встречаются двуядерные гепатоциты; 0,00 42 12л c.894G>A/ c.817_818delAA

12 П.23 Москва М боль в животе повышение трансаминаз, гипербилирубине мия (3г) АЛТ 115 АСТ 111 ОХ 7,20 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 5,60 ТГ н.д. Диффузные изменения в паренхиме печени, признаки фиброза на МРТ МЕТАУТЯ Б-1 0,00 165 6л c.894G>A/ c.398C>A

13 П.24 Оренбург М без жалоб гепатомегал ия, повышение трансаминаз (6мес) АЛТ 406 АСТ 14 ОХ 6,63 ЛПВП-Х 0,96 ЛПНП-Х 5,30 ТГ н.д. Данные УЗИ печени не представлены. Биопсия печени (2г) -порто-портальный фиброз, небольшие поля перигепато-целлюлярного фиброза; гепатоциты различных размеров, встречаются более крупные с вакуолизированной цитоплазмой, в отдельных гепатоцитах цитоплазма имеет пенистый вид; балочное строение не определяется, клетки Купфера набухшие с вакуолизированной цитоплазмой 0,00 98 5л c.894G>A/ c.309C>A

14 П.25 Оребург М Затянувша яся желтуха, боль в правом подреберье , слабость Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз, гипербилирубине мия (18л) АЛТ 358 АСТ 47 ОХ 5,84 ЛПВП-Х 1,56 ЛПНП-Х 3,69 ТГ 1,29 Умеренная диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ 0,00 43 21г c.894G>A/ c.309C>A

15 П.26 Тула Ж без жалоб небольшая гепатомегал ия, повышение трансаминаз (5л) АЛТ 178 АСТ 247 ОХ 7,27 ЛПВП-Х 1,30 ЛПНП-Х5,86 ТГ 1,21 Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ Фиброз METAVIR F-0 0,01 89 5л c.894G>A/ c.911_912delinsT

16 П.27 Спб М боль в животе Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (2г) АЛТ 203 АСТ 142 ОХ 9,50 ЛПВП-Х 1,10 ЛПНП-Х 7,09 ТГ н.д. Пониженная эхогенность печени при УЗИ 0,01 364 7л c.894G>A/ c.796G>T

17 П.28 Москва М без жалоб небольшая гепатомегал ия (4г) АЛТ 78 АСТ 89 ОХ 6,25 ЛПВП-Х н.д. ЛПНП-Х н.д. ТГ н.д. Гомогенность, пониженная эхогенность в паренхиме печени на КТ Биопсия печени (5л) - перипортальный1 фиброз, вакуоли , наполненные липидами в гепатоцитах и клетках Купфера 0,02 672 15 л c.894G>A/ а348С>А

18 П.29 СПб Ж без жалоб Умеренная гепатомегал ия, повышение трансаминаз (3г) АЛТ 128 АСТ 79 ОХ 7,24 ЛПВП-Х 0,71 ЛПНП-Х 5,85 ТГ 1,20 Диффузные изменения в паренхиме печени на УЗИ 0,02 46 6л c.894G>A/ с.-3А>С

Пациенты с диагнозом БНЭХ и «нетипичными» генотипами без варианте г е.8940>Л

1 П.30 Респ. Азербайджан Ж без жалоб Гепатосплен о-мегалия, повышение трансаминаз (1г 6мес) АЛТ 308 АСТ 441 ОХ 11,80 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 8,98 ТГ 2,30 Цирроз, множественный узлы в паренхиме печени на КТ (14л) МЕТАУГО. Б-4, цирроз 0,01 251 13л c.600G>A/ c.600G>A

2 П.31 Киев Ж без жалоб небольшая гепатомегал ия (7мес) АЛТ 130 АСТ 114 ОХ 10,25 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 5,95 ТГ н.д. Диффузная гетерогенность, повышенная эхогенность печени при УЗИ(3г) 0,00 99 19 л ^177 180dup4/ c.956A>T

Пациенты с диагнозом БВ

1 П.32 Москва Ж Умеренная гипотрофи я Анемия, гипотония, массивная гепато- спленомегал ия и увеличение живота, (3 мес) АЛТ 130 АСТ 424 ОХ 6,80 ЛПВП-Х 0,80 ЛПНП-Х 5,95 ТГ н.д. Повышенная эхогенность печени на УЗИ, увеличение и кальциф икация надпочечников на КТ НД 556 4 мес c.348G>A/ c.398delC

2 П.33 Пенза М Лихорадка Анемия, синдром интоксикаци и, гепато- спленомегал ия (2 мес) АЛТ 33 АСТ 295 ОХ 6,00 ЛПВП-Х н.д. ЛПНП-Х н.д. ТГ н.д. Увеличение и кальциф икация надпочечников на КТ 0,04 17 3 мес c.348G>A/ c.796G>T

3 П.34 Челябинск Ж Желтуха Анемия, гепато-спленомегал ия, гипербилирубине мия (2 мес) АЛТ 99 АСТ 413 ОХ 6,55 ЛПВП-Х 1,49 ЛПНП-Х 5,90 ТГ 3,12 Повышенная эхогенность печени, перипортальный фибрз на УЗИ 0,00 450 3 мес c.442delG/ c.817_818delAA

Примечание:

АЛТ - алалнинаминотрансфераза (<37 Ед./л) АСТ - аспартатаминотрансфераза (<47 Ед./л) ОХ - общий холестерин (3,20-5,20 ммоль/л)

ЛПВП-Х - холестерин в составе липидов высокой плотности (0,90-2,10 ммоль/л) ЛПНП-Х - холестерин в составе липидов низкой плотности (1,55-3,80 ммоль/л) ТГ - триглицериды (0,10-1,70 ммоль)