Изучение трансгенных растений с гетерологичным геном, детерминирующим синтез двунитевой РНК тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.15, кандидат биологических наук Коростылева, Татьяна Викторовна

• Коростылева, Татьяна Викторовна
• кандидат биологических наук
• 2006

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Коростылева, Татьяна Викторовна

Оглавление.

Список сокращений.

Введение.

Глава 1. Обзор литературы

1.1. Подходы к изучению и созданию устойчивости.

Искусственно детерминированная устойчивость растений к вирусам. ^

1.1.1. Устойчивость, обусловленная встраиванием генов вирусного происхождения (pathogene-derived resistance). 10 1.1.1.1 Устойчивость, детерминированная встраиванием гена белка оболочки вируса.

1.1.1.2. Устойчивость, обеспечиваемая встраиванием гена репликазы.

1.1.1.3. Устойчивость, определяемая встраиванием гена транспортного белка.

1.1.1.4. Введение в геном растений вирусных нуклеотидных последовательностей.

1.1.1.5. Проблемы, связанные с использованием PDR-трансгенов, и перспективные направления PDR-защиты растений.

1.1.2. Устойчивость, основанная на использовании механизмов замолкания.

1.1.3. Создание устойчивости с использованием генов растений.

1.1.4. Устойчивость, обеспечиваемая встраиванием гетерологичных, «экзотических» генов.

1.1.4.1. Введение генов белков, инактивирующих рибосомы.

1.1.4.2. Введение генов нуклеаз.

1.1.4.3. Использование генов иммунной системы животных.

1.1.4.3.а. Введение генов интерферонов.

1.1.4.3.Ь Введение компонентов 2-5А системы.

1.1.4.З.С. Введение генов, кодирущие антитела.

1.2. Двунитевая РНК в организме животных и растений.

1.2.1. Важнейшие свойства PTGS.

1.2.2. Общий механизм PTGS.

1.2.3. РНК-зависимое метилирование ДНК и транскрипционное умолкание генов.

1.2.4. Микро РНК (miRNA) растений.

1.2.4.1. Происхождение и структура miRNA.

1.2.4.2. Механизм действия и функции микроРНК.

1.2.5. Генетический контроль процессов PTGS /РНК-интерференции и связанного с ними метилирования у растений.

1.2.6. Проблемы неспецифичности действия дцРНК.

Глава 2. Материалы и методы.

2.1. Штаммы бактерий.

2.2. Плазмиды.

2.3. Растения.

2.4. Штаммы вируса табачной мозаики.

2.5. Ростовые среды.

2.6. Получение бинарного агробактериального вектора.

2.7. Получение трансгенных растений.

2.7.1. Трансформация табака.

2.7.2. Процедура трансформации пшеницы.

2.7.3. Отбор трансгенных растений табак, устойчивых к канамицину.^

2.7.4. Тестирование на устойчивость к канамицину потомства трансформантов пшеницы.^

2.8. Молекулярно-биохимические исследования.

2.8.1. Выделение ДНК и РНК из растительных тканей.

2.8.2. ПЦР.

2.8.3. Саузерн и Нозерн гибридизация.

2.9. Исследование растений на вирусоустойчивость.

2.9.1. Процедура заражения.

2.9.2. Оценка устойчивости.

2.9.3. Экстракция белков листьев.

2.9.4. Электрофорез растворимых белков листьев.

2.10. Анализ белков.

2.10.1. Гидролиз белка.

2.10.2. ВЭЖХ триптических пептидов.

2.10.3. Секвенирование пептидов.

2.11. Статистическая обработка и компьютерный анализ.

Глава 3. Результаты и обсуждение.

3.1. Трансформация растений табака и исследование трансгенных растений табака.

3.1.1. Характеристика Т-ДНК экспрессионноговектора.

3.1.2. Получение трансгенных растений табака.

3.1.3. Наследование трансгенной вставки.

3.2. Исследование вирусоустойчивости трансгенных растений табака.

3.2.1. Изучение фитопатологических характеристик трансгенных растений.

3.2.2. Изучение спектра растворимых белков.

3.3. Исследование морфофизиологических характеристик трансформантов табака.

3.4. Трансформация пшеницы.

3.4.1. Выделение трансформантов пшеницы.

3.4.2. Наследование трансгенной вставки.

3.4.3. Анализ на отсутствие агробактерий.

3.4.4. Тестирование на устойчивость к канамицину.

3.4.5. Эффективность трансформации пшеницы.

3.4.6. Изменения признаков у трансформантов пшеницы Т2.

3.4.7. Наследуемость изменения признаков.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение трансгенных растений с гетерологичным геном, детерминирующим синтез двунитевой РНК»

Устойчивость к вирусным заболеваниям растений является одной из наиболее актуальных проблем современной генетики, биотехнологии и физиологии растений. Раскрытие сложных механизмов взаимодействия хозяина и патогена, процессов, приводящих к формированию иммунитета у растений, выделение генов, контролирующих разные этапы этих процессов - все это представляет не только теоретический, но и прикладной интерес. С применением методов генной инженерии удалось не только детально исследовать особенности физиологии вирусов растений, но и создать устойчивые к вирусным инфекциям формы: трансгенные растения, экспедирующие ген белка оболочки вирусов

Powell-Abel et al., 1986), геном транспортного белка (Malyshenko et al., 1993) и у генрЦ репликазы (Golemboski et al., 1990). Несмотря на успехи и практические достижения в этой области, молекулярно-генетические процессы, отвечающие за формирование различных типов устойчивости, изучены далеко не полностью. С 80-х годов прошлого века в поле научного интереса исследователей иммунитета растений попала двунитевая РНК. Было показано, что двунитевая РЖ, в том числе и синтетическая (поли-I) участвует в формировании устойчивости растений к вирусам (Gat-Edelbaum et al., 1983; Бистрицкайте, 1986). Создание трансгенных растений, экспрессирующих антисмысловые последовательности вируса и обладающих устойчивостью к нему (как предполагалось, за счет образования дуплекса РНК с геномной РНК вируса) положило начало отдельной «антисмысловой» стратегии создания устойчивости (Izant, Weintraub, 1984; Powell et al., 1989; Bejarno et al., 1992). В 1998-1999 г. В серии работ Гамильтон и Болкомб раскрыли механизм РНК-интерференции (Hamilton A.J, Baulcombe D.C., 1999), показав ключевую роль рестрикции двунитевой РНК в ингибировании экспрессии генов, обладающих гомологией с последовательностью такой же РНК. Хотя нокаутная' с использованием антисмысловых РНК при создании вирусоустойчивых растений нашла практическое применение еще до открытия молекулярной сути процессов, лежащих в ее основе, многие аспекты проявления РНКинтерференции у растений и ее влияние на экспрессию генов хозяина по настоящее время остаются неисследоваными.

Поэтому представлялось интересным исследовать влияние эндогенно синтезируемой в растении протяженной двунитевой РНК, не имеющей гомологии с геномом растения и геномом вируса, на устойчивость растений к вирусам. В качестве трансгенной кодирующей последовательности, экспрессирующей днРНК, для предотвращения эффекта умолкания генов растения был использован фрагмент бактериального гена.

Цели работы:

Целью работы явилось изучение влияния гетерологичной конструкции, обеспечивающей в растении синтез двунитевой РНК, не несущей гомологии с геномами вирусов и растений, на устойчивость трансгенных растений к вирусным заболеваниям, а также исследование влияния этой гетерологичной вставки на морфофизиологические признаки однодольных и двудольных растений (Nicotiana tabacum и Triticum aestivum).

Для достижения этой цели были поставлены следующие экспериментальные задачи: получить путем агробактериальной трансформации трансгенные растения табака и пшеницы, несущие конструкцию, детерминирующую в растении синтез протяженной (0,35 тпн) двуцепочечной РНК; провести изучение генетической стабильности данной вставки в трансгенных растениях; провести изучение вирусоустойчивости трансгенных растений табака к разным штаммам ВТМ; исследовать изменения в спектрах растворимых белков листьев трансгенных растений табака при инфицировании их вирусом; провести сравнительное исследование морфофизиологических признаков трансгенных растений с оценкой их наследуемости.

Заключение диссертации по теме «Генетика», Коростылева, Татьяна Викторовна

Выводы:

1. Получены трансгенные растения табака Nicotiana tabacum cv. Samsun (8 линий) и трансгенной пшеницы Triticum aestivum L. (43 линии) несущие гетерологичную последовательность бактериального происхождения, организованную в виде инвертированного повтора и детерминирующую в растении синтез двунитевой РНК. Показано, что трансгенные растения табака и пшеницы сохраняют данную вставку на протяжении трех поколений (ТрТз). На трансгенных растениях табака поколении Т2 показана экспрессия двунитевой РНК.

2. Впервые показано, что в трансгенных растениях табака с чувствительным к ВТМ генотипом, экспрессирующих гетерологичную двунитевую РНК, не несущую гомологии с геномом вируса, повышен уровень устойчивости при поражении ВТМ. Проявление устойчивости зависит от степени патогенности штамма ВТМ, при заражении слабопатогенным штаммом изменения уровня устойчивости не наблюдается.

3. Показано, что изменение уровня устойчивости трансгенных растений табака при инфицировании штаммом ВТМ N2 сопровождается синтезом de novo полипептидов с молекулярной массой 25 и 30 кДа, индуцирующихся до формирования выраженных симптомов заболевания.

4. Проведено автоматическое секвенирование аминокислотных последовательностей триптических пептидов белка с молекулярной массой 30 кДа. Компьютерным анализом установлена его гомология с ферментами семейства /3-эндоглюканаз растений. Гомологии с известными PR-белками растений рода Nicotiana не выявлено.

5. У потомства трансформантов поколений Т2 и Т3 выявлены множественные изменения как морфологических, так и количественных признаков, связанных с продуктивностью. У трансгенных растений табака (90 % линий) и пшеницы (41,25 % линий) показано нарушение всхожести семян, полученных от растений поколения TV Все изменения, кроме повышения продуктивного кущения у пшеницы, не являются наследуемыми. Для обоих видов наблюдаемые изменения, по - видимому, обусловлены экспрессией двунитевой РНК в растениях.

Заключение

В результате проведенных экспериментов были получены 8 трансгенных линий табака и 43 линии трансгенной пшеницы, стабильно сохраняющие на протяжении 3-х поколений (до Т3) конструкцию, несущую экспрессируемую последовательность бактериального происхождения в виде протяженного инвертированного повтора. Данная конструкция обеспечивает синтез в трансгенных растениях РНК, имеющую шпилечную, двунитевую структуру, что было показано ранее (Смирнов и др., 1993), а также подтверждено в нашем эксперименте с трансгенными растениями табака.

Нами было выявлено повышение уровня устойчивости к ВТМ у трансгенных растений табака разных линий, экспрессирующих днРНК, выражавшееся в задержке развития заболевания у инфицированных растений, изменения характера симптомов, а при заражении штаммом ВТМ N22 -уменьшении накопления белка оболочки вируса. Наблюдаемое у трансгенного табака повышение уровня устойчивости к вирусу нельзя отнести за счет интерферирующего действия днРНК, так как ее нуклеотидная последовательность не имеет гомологии с ВТМ. Можно предположить, что конститутивный синтез днРНК в растении, индуцируя начальные стадии PTGS/PHK-интерференции, активирует и ряд участвующих в нем белковых факторов (или увеличивает увеличивает уровень их экспрессии). Их активное состояние, повышенный уровень содержания этих факторов в трансгенных растениях в момент начальных событий инфекции может обеспечивать наблюдаемое повышение уровня устойчивости. Таким белком, к примеру, может быть так называемый антивирусный фактор (АВФ) табака, индуцирующийся в растениях при вирусном заражении и способный ограничивать репликацию ВТМ при экзогенном нанесении. Он активно изучался с 80-х годов, был клонирован (Akad, et al., 1999), по недавно полученным сведениям, гомологи АВФ у дрожжей, семейство генов ski, являются частью системы РНК-интерференции (Orban, 2005). Также возможно влияние на устойчивость со стороны протеинкиназы р68 (гл. 1.2.), синтез которой индуцируется двунитевой РНК. На основании полученных и имеющихся данных можно сделать заключение, что трансгенная экспрессия гетерологичной двуцепочечной РНК влияет на уровень устойчивости растений с разными генетическими системами защиты от вируса, однако повышенная устойчивость растений не обусловлена специфичным (основанным на гомологии транскриптов) действием РНК- интерференции на репликацию вируса.

Нами были выявлены неизвестные полипептиды, с молекулярной массой 25 и 30 кДа, синтезирующиеся de novo в трансгенных растениях при вирусной инфекции. Проведенное исследование полипептида массой 30 кДа позволило определить аминокислотную последовательность фрагмента молекулы и выявить его гомологию с растительными /3-эндоглюканазами.

На основании приведенных данных можно предположить, что индуцированный инфекцией в трансгенных растениях белок с молекулярной массой ЗОкДа является новым неизвестным представителем семейства /3 -эндоглюканаз, в регуляции экспрессии которого участвует днРНК. Видимо, активация его синтеза зависит не только от присутствия днРНК, но требует участия некоторого вирусного фактора, поскольку данный белок обнаруживался в зараженных трансгенных растениях только в случае инфицирования высокопатогенным штаммом

N2 . Это говорит о том, что его функции в растении, по-видимому, связаны с защитой или патогенезом. При этом следует отметить, что индукция этой /З-эндоглюканазы происходит не под контролем гена N, как у известных глюканаз из группы PR-белков.

На двух видах растений - табаке и пшенице, на независимо полученных линиях, наблюдались множественные изменения морфологических, физиологических и количественных признаков, большинство из которых оказались ненаследуемыми. Если морфологические отклонения, наблюдаемые достаточно часто при применении агробактериальной трансформации, обычно связывают с сомаклональной изменчивостью (как результат культивирования организма в условиях in vitro), то использование способа трансформации in planta исключает такое объяснение. Сходство наблюдаемых нами отклонений у разных видов, повторяемость однотипных отклонений в разных линиях, (повышенное боковое побегообразование у Табаков и повышенная продуктивная кустистость у пшеницы; пониженная всхожесть семян, полученных от Т0) при разных способах трансформации указывает на роль общего фактора - экспрессии трансгенной вставки. Мы предполагаем что наблюдаемые отклонения связаны с синтезом двунитевой РНК. Допуская роль дцРНК в формировании этих морфозов, можно предположить, что ненаследуемость может быть обусловлена непродолжительностью неспецифического воздействия экспрессии дцРНК. Согласно данным, полученным на трансгенных растениях, уровень синтеза мРНК, экспрессируемой конструкцией с инвертированными повторами, уменьшается на 50-100 % (подвергается умолканию) на протяжении жизни растения (Waterhouse et al., 1998; Wesley et al., 2001). Остается не вполне понятным факт наследственного закрепления признака увеличенной продуктивной кустистости у отдельных линий пшеницы.

Полученные нами данные по множественным морфофизиологическим отклонениям и нарушению всхожести семян у трансгенных растений мы связываем с неспецифическими влиянием процессов сайленсинга, запускаемых экспрессируемой в растениях дцРНК. С начала использования антисмысловой технологии для изучения функций генов и решения прикладных задач достаточно регулярно поступают сообщения о нарушениях у нокаутных трансгенных растений морфологии, об отклонениях по признакам, связанным с генеративной сферой, с продуктивностью (Поройко и др., 2000; Xiao et al., 2003; De Ronde, 2004;). Исследователи обычно интерпретируют эти факты как плейотропное действие выключения функции исследуемого гена, часто неожиданное и труднообъяснимое. В главе 1.2.6. подробно обсуждались причины, которые могут обуславливать неожиданные побочные эффекты при инициации процессов РНК-интерференции.

В заключение можно сказать, что, по-видимому, при планировании исследований растительных объектов с использованием антисенс-методов, как и для таких экспериментов на животных, необходимо минимизирование длины двунитевой РНК во избежание нежелательных вторичных эффектов. Также нежелательно использование конститутивных промоторов, конструкций в виде инвертированных повторов, обеспечивающих синтез чужеродной днРНК на эмбриональных и ранних стадиях развития растений.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Коростылева, Татьяна Викторовна, 2006 год

1. Аравин А.А., Кленов М.С., Вагин В.В., Розовский Я.М., Гвоздев В.А. Рольдвуцепочечной РНК в подавлении экспрессии генов у эукариот // Молекулярная биология. 2002. Т. 36. № 2. С. 240-251.

2. Бистрицкайте Г.Б., Стасявичуте З.Б. Индукция устойчивости растений квирусу табачной мозаики и Х-вирусу картофеля двунитевыми РНК, выделенными из дрожжей-сахаромицетов // Труды АН Литовской ССР. Серия В. 1986. Т. 4(96). С. 3-8.

3. Гребинский С.О. Рост растений. Львов: Издательство Львовскогоуниверситета. 1961.

4. Дорохов Д.Б., Клоке Э.Быстрая и экономичная технология RAPD-анализарастительных геномов // Генетика. 1997. Т.ЗЗ. С. 476-483.

5. Дрейпер Дж., Скотт., Армитадж Ф., Уолден Р. Генная инженерия растений.

6. Лабораторное рукводство. М.: Мир, 1991. 408 с.

7. Крашенинникова Л.В., Бабоша А.В., Хромова Л.М., Мусин С.М.

8. Ладыгина М.Е., Бабоша А.В. Физиолого-биохимическая природавирусного патогенеза устойчивости и регуляции антиинфекционной активности // Физиология растений. Физиология растений. 1996. Т. 43. №5. С. 729-742.

9. Огарков В.И., Атабеков И.Г., Каплан И.Б., Тальянский М.Э., Малышенко

10. С.И. Влияние интерферона человека на репродукцию фито- и миковирусов // Известия АН СССР. Серия биологическая. 1987. № 3. С. 341-345.

11. Ю.Озерецковская О.Л., Роменская И.Г. Олигосахарины как регуляторные молекулы растений // Физиология растений. 1996. Т. 43. №5. С. 743-752.

12. И.Поройко В.А., Рукавцова Е.Б., Орлова И.В., Бурьянов Я.И. Фенотипические изменения трансгенных растений табака с антисмысловой формой гена hmgl //Генетика. 2000. Т. 36. №9. С. 1200-1205.

13. Ралдугина Г.Н., Горелова СБ., Кожемякин А.В. Стабильность и наследование транстеяов в растениях рапса // Физиология растений. 2000. Т. 47. №3. С. 437-445.

14. Сидоров В.А., Пивень Н.М., Глеба Ю.Ю., Сытник К.М. Соматическая гибридизация пасленовых. Киев: Наукова думка, 1985. С. 43.

15. Смирнов С.П. Теверовская Э.Х., Крашенинникова JI.B., Пухальский В.А. Создание экспрессионного интегративного вектора и его использование для введение в растения гена рекомбинантного альфа-интерферона человека//Генетика. 1990. Т. 26. №12. С. 2111-2121.

16. Смирнов С.П., Крашенинникова Л.В., Пухальский В.А. Эффект синтеза молекул двунитевой РНК в трансгенных растениях табака на устойчивость к вирусу табачной мозаики // ДАН. 1993. Т. 331. №2. С. 241245.

17. Степанова А.Ю., Терешенок Д.В, Осипова Е.С., Гладков Е.А., Долгих Ю. И. Получение трансгенных растений пшеницы (Triticum aestivum L.) методом агробактериальной трансформации // Биотехнология. 2006. №2. С. 20-27.

18. Тарчевский И.А. Метаболизм растений при стрессе. Казань: Фэн, 2001. 448 с.

19. Тарчевский И.А. Сигнальные системы клеток растений. Москва: Наука, 2002. 294 с.

20. Р.Трифонова Е.А., Комарова М.Л., Сырник О.А., Кочетов А.В., В.К. Шумный. Трансгенные растения табака Nicotiana tabacum SRI, экспрессирующие ген, кодирующий нуклеазу Serratia marcescens II Генетика. 2002. Т. 38. № 2. С. 274-277.

21. Херрингтон С., Макги Дж. Молекулярная клиническая диагностика. Методы. М.: Мир, 1999. 558 с.

22. Aaziz R.and Tepfer М. Recombination in RNA viruses and in virus-resistant transgenic plants // Journal of General Virology. 1999. V.80. P. 1339-1346.

23. Abbink Т.Е., de Vogel J., Bol J.F., Linthorst H.J. Induction of a hypersensitive response by chimeric helicase sequences of tobamoviruses U1 and Ob in N-carrying tobacco // Mol Plant Microbe Interact. 2001. V. 14(9). P. 1086-1095.

24. Agrawal N., Dasaradhi P.V., Mohmmed A., Malhotra P., Bhatnagar R.K., Mukherjee S.K. RNA interference: biology, mechanism, and applications // Microbiol Mol Biol Rev. 2003. V. 67(4). P. 657-685.

25. Ahlquist P. RNA-dependent RNA polymerases, viruses, and RNA silensing // Science. 2002. V. 296. P. 1270-1273.

26. Akad F., Teverovsky E., David A., Czosnek H., Gidoni D., Gera A. and G. Loebenstein. A cDNA from tobacco codes for an inhibitor of virus replication(IVR)-like protein // Plant Molecular Biology. 1999. V. 40. P. 969976.

27. Anandalakshmi R., Marathe R., Ge X., Herr J.M.Jr., Май C., Mallory A., Pruss G., Bowman L., Vance V.B. A calmodulin-related protein that supresses posttrascriptional gene silencing in plants // Science. 2000. V. 290. P. 142-144.

28. Anandalakshmi R., Pruss G. J., Ge X., Marathe R., Mallory A. C., Smith Т. H., and Vance V. B. A viral suppressor of gene silencing in plants // PNAS. 1998. V. 95. P. 13079-13084.

29. Anfsats W., Mette M.F., Van der Winden J., Matzke E.A. and Matzke M. RNA -directed DNA methilation in Arabidopsis // PNAS.2002. V. 99. P. 1649916506.

30. Aufsatz W., Mette M.F., van der Winden J., Matzke M., Matzke A.J. HDA6, a putative histone deacetylase needed to enhance DNA methylation induced by double-stranded RNA // EMBO J. 2002. V. 21(24). P. 6832 6841.

31. Baulcombe D.C. Mechanisms of pathogen-derived resistance to viruses in transgenic plants // The Plant Cell. 1996. V. 8. P. 1833-1844.

32. Baulcombe D.C. Replicase-mediated resistance: A novel type of virus resistance in transgenic plants? // Trends Microbiol. 1994. V. 2. P. 60-63.

33. Beck D.L. and Dawson W.O. Deletion of repeated sequences from tobacco mosaic virus mutants with two coat protein genes // Virology. 1990. V. 177. P. 462-469.

34. Beffa R., Meins F.J. Pathogenesis-related function of plant beta-l,3-glucanases investigated by antisense transformation a review // Gene. 1996. V. 179. P. 97-103.

35. Beffa R.S., Neunaus J.-M., Meins Jr. Physiological compensation in antisense transformants: Specific induction of an "erstatz" glucan endo-l,3-b-glucosidase in plant infected with necrotizing viruses // PNAS. 1993. V. 90. P. 8792-8796.

36. Bejarno E.R., Day A.G., Paranjape V., Lichtenstein C.P. Antisense genes sa tools to engineer virus resistanse in plants // Biochemical Society Transactions. 1992. V. 20. P. 757-761.

37. Bender J. A vicious cycle: RNA silencing and DNA methylation in plants // Cell. 2001. V. 106. P. 129-132

38. Bol J.F., Linthorst H.J.M., Cornelissen B.J.C. Plant pathogenesis-related proteinsindused by virus infection // Annu Rev Phytopathol. 1990. V. 28. P. 113-138.

39. Bucher G.L., Tarina C., Heinlein M., Di Serio F., Meins F.Jr., Iglesias V.A. Local expression of enzymatically active class I beta-1, 3-glucanase enhances symptoms of TMV infection in tobacco // Plant J. 2001. V.28. P. 361-369.

40. Bujarski J.J. and Kaesberg P. Genetic recombination between RNA components of a multipartite plant virus//Nature. 1986. V.321. P. 528-531.

41. Chapman E.J., Prokhnevsky A.I., Gopinath K., Dolja V.V., Carrington J.C. Viral RNA silencing suppressors inhibit the microRNA pathway at an intermediate step //Genes Dev. 2004. V. 18(10). P. 1179-86.

42. Chen J., Li W.X., Xie D., Peng J.R., Ding S.W. Viral virulence protein suppresses RNA silencing-mediated defense but upregulates the role of microrna in host gene expression // Plant Cell. 2004. V. 16(5). P. 1302-13.

43. Chen Y., Peumans W.J., Van Damme E.J.M. The Sambucus nigra type-2ribosome-inacivating protein SNA-1' exibits in planta antiviral activity in transgenic tobacco // FEBS Letters. 2002. V.516. P. 27-30.

44. Cheng M., Fry J.E, Pang S., Zhou H., Hironaka C.M., Duncan D.R., Conner T.W., and Wan Y. Genetic transformation of wheat mediated by Agrobacterium tumefaciens //Plant Physiol. 1997. V. 115. P. 971-980.

45. Chomczynski P., Sacchi N. Single-step method of RNA isolation by acid guanidinum tiocyanate-phenol-chloroform extraction // Analytical Biochemistry. 1987. V. 162. P. 156-159.

46. Cillo F., Finetti-Sialer M.M., Papanice M.A., Gallitelli D. Analysis of mechanisms involved in the Cucumber mosaic virus satellite RNA-mediated transgenic resistance in tomato plants // Mol Plant Microbe Interact. 2004. V. 17(1). P. 98-108.

47. Cote F., Cutt J.R., Asselin A., Klessig D.F. Pathogenesis-related acidic beta-1,3-glucanase genes of tobacco are regulated by both stress and developmental signals // Mol. Plant. Microbe Interact. 1991. V.4. P. 173-181.

48. Cote F., Ham K.S., Hahn M.G., Bergmann C.W. Oligosaccharide elicitors in host-pathogen interactions. Generation, perception, and signal transduction // Subcell Biochem. 1998. V. 29. P.385-432.

49. Dalmay Т., Horsefield R., Braunstein Т.Н., Baulcombe D.C. SDE3 encodes an RNA helicase required for post-transcriptional gene silencing in Arabidopsis // EMBO J. 2001. V. 20(8) P. 2069-2078.

50. De Jaeger G., De Wilde C., Eeckhou D.t, Fiers E. and A. Depicker. The plantibody approach: expression of antibody genes in plants to modulate plant metabolism or to obtain pathogen resistance // Plant Molecular Biology. 2000. V. 43. P. 419-428.

51. Delp G., Palva E.T. A novel flower-specific arabidopsis gene related to both pathogen-induced and developmentally regulated plant beta-l,3-glucanase genes //Plant Mol. Biol. 1999. V. 39. P. 565-575.

52. De Ronde J.A., Cress W.A., Kruger G.H.J., Strosser R.J and Van Staden J. Fhotosynthetic response of transgenic soybean plants arabidopsis P5VR gene during heat and drought stress // J. Plant Physiol. 2004. V. 161. P. 1211-1224

53. Dickman MB, Park YK, Oltersdorf T, Li W, Clemente T, French R.Abrogation of disease development in plants expressing animal antiapoptotic genes / PNAS. 2001. V. 98. P. 6957-6962.

54. Djikeng A., Shi H., Tschudi C., Ullu E. RNA interference in Trypanosomabrucei: cloning of small interfering RNAs provides evidence for retroposon-derived 24-26-nucleotide RNAs // RNA. 2001. V. .7(11). P. 1522-1530.

55. Elbashir S.M., Lendeckel W., Tuschl T. RNA interference is mediated by 21- and 22- nucleotide RNAs // Genes Dev. 2001.V. 15. P. 188-200.

56. Elmayan Т., Balzergue S., Beon F., Bourdon V., Daubremet J., Guenet Y., Mourrain P., Palauqui J.C., Vernhettes S., Vialle Т., Wostrikoff К., Vaucheret H. Arabidopsis mutants impaired in cosuppression // Plant Cell. 1998. V. 10(10). P. 1747-1758.

57. English G., Mueller E. and Baulcombe D.C. Supression of virus accumulation intransgenic plants exhibiting silensing of nuclear genes // Plant Cell. 1996. V. 8. P. 179-188.

58. Flor H. Current status of the gene-for-gene concept // Annu. Rev. Phytopath. 1971. V. 9. P. 275-296.

59. Fojtova M., Van Houdt H., Depicker A., Kovarik A. Epigenetic switch from posttranscriptional to transcriptional silencing is correlated with promoter hypermethylation//Plant Physiol. 2003. V. 133(3). P. 1240-50. .

60. Fraser C.M., Kerlavage A.R., Mariani A.P., Venter J.C. Structural analysis of purified beta-adrenergic receptors // Proteins. 1987. V. 2. P. 34-41.

61. Gal S., Pisan В., Hohn Т., Grimsley N. and Hohn B. Agroinfection of transgenic plants leads to viable cauliflower mosaic virus by intermolecular recombination //Virology. 1992. V.187. P. 525-533.

62. Gat~Edelbaum 0., Altman A., end Sela I. Polyinjsic- polycytidilic acid in association with cyclic nucleotides activates the antiviral factor (AVF) in plant tissues // J. Gen. Virol. 1983. V. 64. P.211-214.

63. Goldbach R., Bucher E., Prins E. Resistanse mechanisms to plant viruses: an overview // Virus Research. 2003. V. 92. P. 207-212.

64. Golemboski, D.B., Lomonossoff, G.P., and Zaitlin, M. Plants transformed with a tobacco mosaic virus nonstructural gene sequence are resistant to the virus // PNAS. 1990. V. 87. P. 6311-6315.

65. Green A.E. and Allison R.F. Recombination between viral RNA and transgenicplant transcripts // Science. 1994. V. 263. P. 1423-1425.

66. Griffiths-Jones S. miRBase: the microRNA sequence database // Methods Mol Biol. 2006. V. 342. P.129-138.

67. Gurr S.J., Rushton P.J. Engineering plants with increased disease resistance: how are we going to express it? //Trends Biotechnol. 2005. V. 23(6). P. 283-290.

68. Haliloglu H. and Baenziger P.S. Response of wheat genoypes to Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation // Cereal Research Communication. 2003. V. 31. №3-4. P.241-248.

69. Hamilton A., Voinnet O., Chappell L. and Baulcombe D. Two classes of short interfering RNA in RNA silencing // EMBO J. 2002. V. 21. P. 4671-4679.

70. Hamilton A.J, Baulcombe D.C. A species of small antisense RNA in posttranscriptional gene silencing in plants // Science. 1999. V. 286(5441). P. 950-952.

71. Hammond J. and Kamo K.K. Effective resistance to potyvirus infection conferred by expression of antisense RNA in transgenic plants // Mol. Plant Microbe Interact. 1995. V. 5. P. 674-682.

72. Hammond J., Lecoq H. and Raccah B. Epidemiological risks from mixed virus infections and transgenic plants expressing viral genes // Adv. Virus Res. 1999. V.54. P. 189-314

73. Hannon G.J. RNA interference //Nathure. 2002. V.418. P. 396-400.

74. Heidel J.D., Hu S., Liu X.F., Triche T.J., Davis M.E. Lack of interferon response in animals to naked siRNA // Nature Biotechnology. 2004. V. 22. P. 1579-1582.

75. Hemenway С., Fang R.F., Kaniewski W.K., Chua N.H., Turner N.E. Analysis of the mechanism of protection in transgenic plants expressing the potato virus X coat protein or its antisense RNA // EMBO J. 1988. V. 7. P. 1273-1280.

76. Hennig J., Dewey R.E., Cutt J.R., Klessig D.F. Pathogen, salicylic-acid and developmental dependent expression of a beta-l,3~glucanase Gus gene fusion in transgenic tobacco plants // Plant J. 1993. V. 4. P. 481-493.

77. Hess D., Dressier K., Nimmrichter R. Transformation experiments by pipetting Agrobacterium into the spikelets of wheat (Triticum aestivum L.) // Plant sci. 1990. V. 72. Iss.2. P. 233-244.

78. Jones L., Hamilton A.J., Voinnet O., Thomas C.L., Maule A.J., Baulcombe D.C. RNA-DNA interaction and DNA methilation in post-transcriptionalgene silencing // Plant Cell. 1999. V. 11. P. 2291-2302.

79. Kaido M., Mori M., Mise K., Okuno Т., and Furusawa. Inhibition of brome mosaic virus (BMV) amplification in protoplasts from transgenic tobacco plants expressing replicable BMV RNAs // J. Gen. Virol. 1995. V.76. P. 2827-2833.

80. Kalaitzis P., Hong S.B., Solomos Т., Tucker M.L. Molecular characterization of a tomato endo-beta-l,4-glucanase gene expressed in mature pistils, abscission zones and fruit // Plant Cell Physiol. 1999. V. 40. P. 905-908.

81. Kashkush K, Feldman M, Levy AA. Transcriptional activation of retrotransposons alters the expression of adjacent genes in wheat //Nat Genet. 2003.V. 33(1). P. 102-106.

82. Kidner, C.A. and Martienssen, R.A. The developmental role of microRNA in plants // Curr. Opin. Plant Biol. 2005. V. 8. P. 38-44.

83. Kisielow M., Kleiner S., Nagasawa M., Faisal A. and Nagamine Y. Isoform-specific knockdown and expression of adaptor protein ShcA using small interfering RNA // Biochem. J. 2002. V. 363. P. 1-5.

84. Kollar A., Dalmay Т., Burgyan J. Defective interfering RNA-mediated resistanse against cymbidium ringspot tombusvirus in transgenic plants // Virology. 1993. V. 193. P. 313-318.

85. Kumar M. and Carmichael G.G. Antisense RNA: function and fate of duplex RNA in cells of higher eukaryotes // Microbiology and Molecular Biology Reviews. 1998. V. 62 (4). P. 1415-1434.

86. Lapidot, M., Gafny, R., Ding, E., Wolf, S., Lucas, W.J., and Beachy, R.N. A dysfunctional movement protein of tobacco mosaic virus that partially modifies the plasmodesmata and limits vims spread in transgenic plants // Plant J. 1993. V. 4. P. 959-970.

87. Lee R.C., Feinbaum R.L., Ambros V. The C. elegans heterochronic gene lin-4 encodes small RNAs with antisense complementarity to lin-14 II Cell. 1993. V. 75. P.843-854.

88. Lippman Z, May B, Yordan C, Singer T, Martienssen R. Distinct mechanisms determine transposon inheritance and methylation via small interfering RNA and histone modification // PLoS Biol. 2003.V. 1(3):E67.

89. Lim L.P., Lau N.C., Weinstein E.G., Abdelhakim A., Yekta S, Rhoades M.W., Burge C.B., Bartel D.P. The microRNAs of Caenorharbditis elegans II Genes Dev. 2003. V. 17. P. 991-1008.

90. Lindbo, J.A., Silva-Rosales, L., Proebsting, W.M., and Dougherty, W.G. Induction of a highly specific antiviral state in transgenic plants: Implications for regulation of gene expression and virus resistance // Plant Cell. 1993. V. 5. P. 1749-1759.

91. Linthorst H.J., Melchers L.S., Mayer A., van Roekel J.S., Cornelissen B.J., Bol J.F. Analysis of gene families encoding acidic and basic beta-l,3-glucanases of tobacco. // PNAS. 1990. V. 87. P. 8756-8760.

92. Lipardi C., Wei Q., Paterson B.M. RNAi as a random degradative PCR:si RNA primers convert mRNA into dsRNA that are degraded to generate new siRNAs //Cell. 2001. V. 107. P. 297-307.

93. Llave С., Kasschau K.D., Rector M.A., Carrington J.C. Endogenous and silencing-associated small RNAs in plants // Plant Cell. 2002. V. 14. P. 16051619.

94. Lodge J.K., Kaniewski W.K., Turner N.E. Broad-spectrum virus resistance in transgenic plants expressing pokeweed antiviral pbrotein // PNAS. 1993. V. 90. P. 7089-7093.

95. Lu C, Fedoroff N. A mutation in the Arabidopsis HYL1 gene encoding a dsRNA binding protein affects responses to abscisic acid, auxin, and cytokinin //Plant Cell. 2000. V. 12(12). P. 2351-2366.

96. Lynn K, Fernandez A, Aida M, Sedbrook J, Tasaka M, Masson P, Barton MK. The PINHEAD/ZWILLE gene acts pleiotropically in Arabidopsis development and has overlapping functions with the ARGONAUTE1 gene // Development. 1999. V. 126(3). P. 469-481.

97. Mallory A.C., Reinhart B.J., Bartel D., Vance V.B., Bowman L.H. A viral suppressor of RNA silencing differentially regulates the accumulation of short interfering RNAs and micro-RNAs in tobacco // PNAS. 2002. V. 99. P. 1522815233.

98. Maniatis Т., Fritsch E.F., Sambrook J. Molecular cloning, a laboratory manual (2nd edn). Cold Spring Harbor, NY: Cold Spring Harbor Press.

99. Mette M.F, van der Winden J., Matzke M., Matzke A.J. Short RNAs can identify new candidate transposable element families in Arabidopsis // Plant Physiol. 2002. V. 130. P. 6-9.

100. Mitra A, Higgins DW, Langenberg WG, Nie H, Sengupta DN, Silverman RH. A mammalian 2-5A system functions as an antiviral pathway in transgenic plants // PNAS. 1996. V. 93(13). P. 6780-6785.

101. Mittelsten Scheid O, Paszkowski J. Transcriptional gene silencing mutants // Plant Mol Biol. 2000. V. 43(2-3). P. 235-241.

102. Nicholson A.W. Structure, reactivity, and biology of double-stranded RNA //. Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 1996. V.52. P. 1-65.

103. Nykanen A., Haley В., Zamore P.D. ATP requirement and small interfering RNA structure in the RNA interference pathway // Cell. 2001. V. 107. P.309-321.

104. Obregon P., Martin R., Sanz A., Castresana C. Activation of defence-related genes during senescence: a correlation between gene expression and cellular damage // Plant Mol. Biol. 2001. V. 46. P. 67-77.

105. Orban T.I., Izaurralde E. Decay of mRNAs targeted by RISC requires XRN1, the Ski complex, and the exosome // RNA. 2005. V. 11(4). P. 459-469.

106. Papp I., Mette MF., Aufsatz W., Daxinger L., Schauer S.E., Ray A., van der Winden J., Matzke M., Matzke A.J. Evidence for nuclear processing of plant micro RNA and short interfering RNA precursors // Plant Physiol. 2003. V. 132(3). P. 1382-1390.

107. Park W, Li J, Song R, Messing J, Chen X. CARPEL FACTORY, a Dicer homolog, and HEN1, a novel protein, act in microRNA metabolism in Arabidopsis thaliana // Curr Biol. 2002. V 12(17). P. 1484-1495.

108. Patrick M. Finnegan and Gregory G. Brown . Autonomously replicating RNA in mitochondria of maize plants with S-type cytoplasm // PNAS. 1986. V. 83. P. 5175-5179.

109. Peumans W.J., Hao Q., Van Damme E.J.M. Ribosome-inactivating proteins from plants: more than RNA N-glycosidases? // FASEB J. 2001. V. 15. P. 1493-1506.

110. Pfeiffer P. Nucleotide sequence, genetic organization and expression strategy of the double-stranded RNA associated with the '447' cytoplasmic male sterility trait in Viciafaba II J. Gen. Virol. 1998. V. 79. P.2349-2358.

111. Powell P.A., Stark D.M., Sanders P.R., Beachy R.N. Protection aganst tobacco mosaic vims in transgenic plants that express tobacco mosaic vims antisense RNA // PNAS. 1989. V. 86. P. 6949-6952.

112. Powell-Abel, P., Nelson, R.S., De, В., Hoffmann, N., Rogers, S.G.,Fraley, R.T., and Beachy, R.N. Delay of disease development in transgenic plants that express the tobacco mosaic vims coat protein gene // Science. 1986. V. 232. P. 738-743.

113. Prins M. Broad virus resistance in transgenic plants // Trends Biotechnol. 2003. V. 21. N 9. P. 373-375.

114. Provost P., DishartD., Doucet J., Frendewey D., Samuelsson B. and Radmark 0. Ribonuclease activity and RNA binding of recombinant human Dicer // The EMBO Journal. 2002. V. 21. No. 21. P. 5864-5874

115. Pruss G.J., Lawrence C.B., Bass Т., Li Q.Q., Bowman L.H., Vance V. The potyviral suppressor of RNA silencing confers enhanced resistance to multiple pathogens // Virology. 2004. V. 320. N 1. P. 107-20.

116. Reichman M., Devash Y., Suhadolnic R.G., Sela I. Human leukocyte interferon and antiviral factor (AVF) from virus-infected plants stimulate plant tissues to produce nucleotides with antiviral activity // Virology. 1983. V. 128. P.240.

117. Reinhart B.J., Weinstein E.G., Rhoades M.W., Bartel B. and Bartel D.P. MicroRNAs in plants // Genes Dev. 2002. V. 16. P. 1616-1626.

118. Rhoades M., Reinhart В., Lim L., Burdge C., Bartel В., Bartel D. Prediction of plant microRNA targets // Cell. 2002. V. 110. P.513-520.

119. Rubio Т., Borja M., Scholthof H.B., Feldstein P.A., Morris T.J., Jackson A.O. Broad-spectrum protection against tombusviruses elicited by defective interfering RNAs in transgenic plants // Journal of Virology. 1999, V. 73 (6). P. 5070-5078

120. Sanford, J.C., and Johnston, S.A. The concept of parasite-derived resistance-Deriving resistance genes from the parasite's own genome// J. Theor. Biol. 1985.V. 113. P. 395-405.

121. Sano H. and Ohashi Y. Involvement of small GTP-binding proteins in defencesignal transduction pathways of higher plants // PNAS. 1995. V. 92. P. 41384144.

122. Sano Т., Nagayama A., Ogawa Т., Ishida I., Okada Y. Transgenic potato expressing a double-stranded RNA-specific ribonuclease is resistant to potato spindle tuber viroid//Nat. Biotechnol. 1997. V. 15. P. 1290-1294.

123. Savenkov E.I., Valkonen J.P. Silencing of a viral RNA silencing suppressor in transgenic plants. J Gen Virol. 2002. V. 83(9). P. 2325-2335.

124. Schauer SE, Jacobsen SE, Meinke DW, Ray A. DICER-LIKE 1: blind men and elephants in Arabidopsis development // Trends Plant Sci. 2002. V. 7(11). P. 487-491.

125. Schillberg S., Zimmermann S., Zhang M.Y., Fischer R. Antibody-based resistance to plant pathogens // Transgenic Res. 2001. V. 10. Iss. 1. P. 1-12.

126. Sher N., Edelbaum O., Barak Z., Grafi G., Stram Y., Raber J., Sela I. Induction of an ATP-polymerizing enzyme in TMV-infected tobacco and its homology to the human 2'-5' A synthetase // Virus Genes. 1990. V. 4(1). P. 27-39.

127. Shoelz J.E and Wintermantel W.M. Expansion of viral host range through complementation and recombination in transgenic plants // Plant Cell. 1993.V. 5. P 1669-1675.

128. Sijen T. and Kotel J.M. Post-transcriptional gene silencing: RNAs on the attack orthe defence // Bioassays. 2000. V.22. P. 520-531.

129. Sijen Т., Fleenor J., Simmer F., Thijssen K.L., Parrish S., Timmons L., Plasterk R.H., Fire A. On the role of RNA amplification in dsRNA-triggered gene silencing // Cell. 2001. V. 107(4). P. 465-476.

130. Sleds C.A., Holko M., de Veer M.J., Williams B.R.G. Activation of the interferon system by short-interfering RNAs // Nat. Cell Biol. 2003. V.5. P. 771-772.

131. Song E.K., Koh H.K., Kim J.K., Lee S.Y. Genetically engineered transgenic plants with the domain-1 sequence of tobacco mosaic virus 126 kDa protein gene are completely resistant to viral infection // Molecules and Cells. 1999. V. 9. Iss 6, P. 569-575

132. Schramke V, Allshire R. Hairpin RNAs and retrotransposon LTRs effect RNAi and chromatin-based gene silencing // Science. 2003. V. 301(5636). P. 10691074

133. Stanley J., Frischmuth Т., Ellwood S. Defective viral DNA ameliorates simptoms of gemivirus infection in transgenic plants // PNAS. 1990. V. 87. P. 6291-6295.

134. Takeuchi Y., Yoshikawa M., Takeba G., Tanaka K., Shibata D., Horino O. Molecular cloning and ethylene induction of mRNA encoding a phytoalexin elicitor-releasing factor, beta-l,3-endoglucanase, in soybean // Plant Physiol. 1990. V. 93. P. 673-682.

135. Takeuchi Y., Yoshikawa M., Takeba G., Tanaka K., Shibata D., Horino O. Molecular cloning and ethylene induction of mRNA encoding a phytoalexin elicitor-releasing factor, beta-l,3-endoglucanase, in soybean // Plant Physiol. 1990. V. 93. P. 673-682.

136. Tang G., Reinhart B.J., Bartel D.P. and Zamore P.D. A biochemical framework for RNA silensing in plants // Genes Dev. 2003 .V. 17. P. 49-63.

137. Taraporewala Z.F., Culver J.N. Identification of an elicitor active site within the three-dimensional structure of the tobacco mosaic tobamovirus coat protein //Plant Cell. 1996. V. 8(2). P. 169-178.

138. Tavladoraki P., Benvenuto E., Trinca S., De Martinis D., Cattaneo A., Galeffi P. Transgenic plants expressing a functional single-chain Fv antibody are specifically protected from virus attack // Nature. 1993. V. 366. P. 469-472.

139. Tenllado F., Martinez-Garcia В., Vargas M. and Diaz-Ruiz J.R. Crude extracts of bacterially expressed dsRNA can be used to protect plants against virus infections // BMC Biotechnology. 2003. 3 : 3

140. Thomas P.E., Hassan S., Kanievski W.K., Lawson E.C., Zalewski J.C. A search for evidence of virus/transgene interactions in potatoes transformed with the potato leafroll virus replicase and coat protein genes // Mol. Breed. 1998. V. 4. P. 407-413.

141. Turner L.A., Harriman R.W. and Handa A.K. Isolation and nucleotide sequence of three tandemly arranged pectin methylesterase genes from tomato //PlantPhysiol. 1996. V. 112. P. 1398 1403.

142. Thomas P.E., Lawson E.C., Zalewski J.C., Reed G.L., Kaniewski W.K. Extreme resistance to Potato leafroll virus in potato cv. Russet Burbank mediated by the viral replicase gene // Virus Res. 2000. V. 71(1-2). P. 49-62.

143. Vaistij F.E., Jones L. and Baulcombe D.C. Spreading of RNA targeting and DNA methylation in RNA silencing requires transcription of the target gene and a putative RNA-dependent RNA polymerase // Plant Cell. 2002 V. 14. P. 857867.

144. Vazquez F., Gasciolli V., Crete P., Vaucheret H. The nuclear dsRNA binding protein HYL1 is required for microRNA accumulation and plant development, but not posttranscriptional transgene silencing // Curr Biol. 2004. V. 14(4). P. 346-351.

145. Wakarchuk D.A., Hamilton R.I. Partial nucleotide sequence from enigmatic dsRNAs in Phaseolus vulgaris // Plant Mol Biol. 1990. V. 14(4). P. 637-639.

146. Vargason J.M., Szittya G., Burgyan J., Tanaka Hall T.M. Size selective recognition of siRNA by an RNA silencing suppressor // Cell. 2003. V. 115(7). P. 799-811.

147. Watanabe Y., Ogawa Т., Takahashi H., Ishida I., Takeuchi Y., Yamamoto M., and Okada Y. Resistance against multiple plant viruses in plants mediated by a double stranded-RNA specific ribonuclease // FEBS Lett. 1995. V. 372. P. 165168.

148. Waterhouse P.M., Graham M.W.and Wang M.-B. Vims resistance and gene silensing in plants can be indused by simultaneous expression of sense and antisense RNA//PNAS. 1998. V. 95. P. 13959-13964.

149. Whitham S., McCormick S., Baker B. The N gene of tobacco confers resistance to tobacco mosaic virus in transgenic tomato 11 PNAS. 1996. V. 93. P. 87768781.

150. Wu H, Sparks C, Amoah B, Jones HD. Factors influencing successful Agrobacterium-mediated genetic transformation of wheat // Plant Cell Rep. 2003. V. 21(7). P. 659-668.

151. Xie Z., Johansen L.K., Gustafson A.M., Kasschau K.D., Lellis A.D, Zilberman D., Jacobsen S.E., Carrington J.C. Genetic and Functional Diversification of Small RNA Pathways in Plants // PLoS Biology. 2004. V. 2. Iss. 5. P. 06420652.

152. Xie Z, Allen E., Wilken A., Carrington J.C. DICER-LIKE 4 fonctions in transacting small interfering RNA biogenesis and vegetative phase change in Arabidopsis thaliana // PNAS. 2005. V. 102(36). P. 12984-12989.

153. Yang S.J., Carter S.A., Cole A.B., Cheng N.H., Nelson R.S. A natural variant of a host RNA-dependent RNA polymerase is associated with increased susceptibility to viruses by Nicotiana benthamiana // PNAS. 2004. V. 101(16). P. 6297-6302.

154. Yepes L.M., Fuchs M., Slightom J.L., Gonsalves D. Sense and antisense coat protein gene constmcts confer high-levels of resistanse to tomato ringspot nepovirus in transgenic Nicotiana species // Phytopathology. 1996. V. 86. P. 417-424.

155. Zeng J.Z., Wang D.J., Wu Y.Q., Zhang J., Zhou W.J., Zhu X.P., Xu N.Z. Transgenic wheat plants obtained with pollen pathway method // Science in China. Series В Chemistry Life Sciences and Earth Sciences. 1994. V. 37. Iss. 3. P. 319-325.

156. Zhang L., French R., Langenberg W.G., Mitra A. Accumulation of barley stripe mosaic vims is significantly reduced in transgenic wheat plants expressing a bacterial ribonuclease // Transgenic Res. 2001. V. 10(1). P. 13-19.

157. Zilberman D., Cao X., Jacobsen S.E. ARGONAUTE4 controls of locus-specific siRNA accumulation and DNA and histone methilation // Science. 2003. V. 299. P. 716-719.

158. Zimmermann, S., Schillberg, S., Liao, Y.-C. and Fisher, R. Intracellular expression of TMY-specific single-chain Fv fragments leads to improved virus resistance in Nicotiana tabacum //Mol. Breed. 1998. V. 4. P. 369-379.

159. Zoubenko O., Uckun F., Hur Y., Chet I, Turner N. Plant resistance to fungal infection induced by nontoxic pokeweed antiviral protein mutants // Nat. Biotechnol. 1997. V. 15, Iss 10. P. 992-996.