Изучение физиологической роли особого эстроген-связывающего белка печени крыс тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.13, кандидат биологических наук Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна

• Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна
• кандидат биологических наук
• 1985

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна

Введение.

Глава I. Эстрогенные рецепторы клеток органов половой сферы и печени (обзор литературы).

1. Роль рецепторов в механизме действия эстрогенов.

2. Основные свойства эстрогенных рецепторов и краткие сведения о механизмах стероид-рецеп-торного взаимодействия.

3. Современная модель действия стероидных гормонов.

4. Мультирецепторная гипотеза действия стероидных гормонов.

5. Современные представления о механизмах реализации эффектов ГРК.

6. Эстрогенсвязывающие белки печени.

7. Гетерогенная система эстрогенсвязывающих белков печени и ее особенности.

Глава П. Материалы и методы.

А. Материалы, буферные растворы и реактивы.

1. Экспериментальные группы животных.

2. Введение гормонов.

3. Буферные растворы, реактивы и препараты.

Б. Методы.

1. Получение цитозоля печени крыс.

2. Получение частично очищенного препарата

ОЭСБ.

3. Получение ядер печени.

4. Изучение гормонсвязывающих свойств ОЭСБ. а) общие принципы метода. б) определение /1/ и к^ ОЭСБ в экспериментах. в) определение концентрации Е2-связывающих мест ОЭСБ по связыванию минимальной добавки гормона. г) изучение стереоспецифичности ОЭСБ.

5. Исследование транслокации гормон-рецепторных комплексов в ядра Uro vivo

6. Определение белка и ДНК.

7. Статистическая обработка результатов.

Глава Ш. Стереоспецифичность сродства ОЭСБ к гормональным стероидам и его возможная физиологическая роль.

1. Количественная характеристика взаимодействия ОЭСБ с рядом стероидных и нестероидных соединений.

2. Структурный анализ взаимодействия исследуемых лигандов с ОЭСБ.

3. Модель структуры связывающего центра ОЭСБ.

4. Возможная физиологическая роль связывания гормональных лигандов с ОЭСБ.

Глава 1У. Влияние ОЭСБ на аккумуляцию эстроген-рецепторных комплексов в ядрах гепатоцитов.

Глава У. ОЭСБ как объект программирующего и регулирующего действия эстрогенов и андрогенов.

1. Роль андрогенов в детерминации ОЭСБ.

2. Андрогены как регуляторы содержания ОЭСБ.

3. Эстрогены как регуляторы содержания ОЭСБ.

4. Взаимодействие регулирующих эффектов эстрогенов и андрогенов на уровень ОЭСБ.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Изучение физиологической роли особого эстроген-связывающего белка печени крыс»

Исследования последних лет позволяют рассматривать печень как, важнейший объект, модулятор и посредник многообразных программирующих и регуляторннх эффектов эстрогенов и андрогенов. Половые стероиды оказывают свое действие в этом органе в нескольких направлениях: во-первых, они регулируют проявление собственной активности, а также активности некоторых других гормонов, определяя интенсивность гормонального метаболизма, транспорта и рецепции; во-вторых, посредством комплекса секретируемых печенью факторов оказывают системное влияние на организм (артериальное давление, водносолевой обмен, гемостаз, и др.) (В.Б.Розен, А.Н. Смирнов, 1981; А.Г.Резников, 1981; , 198Ъ&ин^е^АЬегь

1979).

Для реализации множественного влияния половых гормонов печень обладает гетерогенной системой специфически связывающих их белков, на уровне которой в определенной степени, видимо, осуществляется дискриминация гормональных эффектов. Для эстрогенов такая рецеп-торная система впервые была выявлена и охарактеризована в лаборатории эндокринологии МГУ (О.В.Смирнова с соавт., 1975; А.Н.Смирнов с соавт., 1975,1977; Г.Д.Матарадзе с соавт., 1979). Показано, что в печени крыс содержится три цитоплазматических белка, специфически связывающих эстрадиол. Два из них аналогичны классическим рецепторам матки и являются, видимо, изоформами. Третий, особый эстрогенсвязывающий белок (ОЭСБ), обнаруживаемый только у самцов крыс, существенно отличается от предыдущих целым рядом параметров (А.Н.Смирнов с соавт.,1977; Г.Д.Матарадзе с соавт., 1979). Этот растворимый мономерный белок связывает не только многие эстрогены, но и некоторые аццрогены; сродство его к гормону на два порядка ниже, а концентрация связывающих мест - на три порядка выше, чем у классических эстрогенных рецепторов; комплексы, образуемые им с эстрадиолом, отличаются лабильностью и, наконец, ОЭСБ, в отличие от рецепторов, не транслоцируется из ци-тозоля в ядро в комплексе с гормоном в системе и^ ^¿¿ъо . в то же время функциональные характеристики этого белка практически не изучены. Можно было лишь предполагать, что поскольку печень является одновременно и объектом действия, и центральным органом метаболизма эстрогенов и андрогенов, то ОЭСБ как органоспецифический белок может иметь существенное значение для цроцессов рецепции и метаболизма половых стероидов. Актуальность вопроса о функциональной роли ОЭСБ определяется важностью понимания динамики половых гормонов в организме, что необходимо для объективной оценки ее роли в физиологическом контроле многих системных процессов.

Раскрытие физиологической роли любого фактора требует разностороннего подхода как в отношении аспектов рассмотрения, так и в отношении уровня исследования. Мы считали целесообразным подойти к вопросу о физиологической роли ОЭСБ с трех сторон.

1. Изучить стереоспецифичность этого белка к различным гормональным соединениям и их метаболитам, для того, чтобы представить себе круг связываемых им лигандов.

2. Исследовать влияние ОЭСБ на аккумуляцию эстроген-рецеп-торных комплексов в ядрах гепатоцитов для того, чтобы оценить роль ОЭСБ в процессе рецепции половых стероидов.

3. Изучить регулируемость ОЭСБ со стороны эстрогенов и андрогенов в опытах: и>ъ I'¿их

Необходимо отметить, что к началу нашей работы сведений по указанным вопросам в литературе практически не имелось.

Заключение диссертации по теме «Физиология», Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна

ВЫВОДЫ

I. Особый эстрогенсвязываклций белок (ОЭСБ) печени самцов крыс специфически связывает биологически активные эстрогены и андрогены, а также некоторые их метаболиты и аналоги.

2* Сродство ОЭСБ к активным эстрогенам на порядок выше, чем к андрогенам.

3. Участки связывания эстрогенов и аддрогенов молекулы ОЭСБ частично перекрываются, но не совпадают полностью:

4. ОЭСБ у самцов крыс участвует в регуляции рецепции эстрогенов, а также опосредует влияние одних стероидов на динамику рецепции других.

5. ОЭСБ в естественных условиях подвергается неонатальной детерминации андрогенами.

6. ОХБ является объектом реципрокной регуляции со стороны андрогенов и эстрогенов: эстрогены обратимо снижают уровень этого белка в генатоцитах, а андрогены повышают его содержание в случае пониженного его уровня и препятствуют проявлению эстроген-ного эффекта.

7. ОЭСБ, вероятно, выполняет буферно-резервирующую и модулирующую функции в общей динамике половых гормонов в клетках печени самцов крыс.

заключение

Б последние годы со всей определенностью показано, что половые гормоны способны оказывать многообразные программирующие и регуляторные влияния на функции печени. В связи с этим интенсивно изучается система циторецепции половых стероидов ге-патоцитами. Показано, что по крайней мере для эстрогенов в печени крыс она гетерогенна и цредставлена тремя формами специфических эстрогенсвязывающих белков. Форма I эст-радиолсвязывающих белков, видимо, идентична классическим эстро-генным рецепторам матки (Г.Д. Матарадзе с соавт., 1979). Форма П аналогична по свойствам высокосолевой субъединице формы I и отличается от нее в основном неспособностью образовывать в среде с низкой ионной силой олигомер 8 £ (Я.Ю. Кондратьев с соавт. 1980). Третья форма, особый эстрогенввязывающий белок, занимает в этой системе уникальное место. ОЭСБ имеется в значительных количествах только у самцов крыс и обладает рядом необычных для эстрогенных рецепторов свойств. Так, образование и распад комплексов эстрадиола с ОЭСБ происходит в течение нескольких минут при 0-4° С; за его связывающие участки с эстрогенами относительно хорошо конкурируют некоторые андрогены; Ка для взаимодействия эстрадиола с ОЭСБ на 2 порядка ниже, а концентрация связывающих мест на 2-3 порядка выше, чем для других Ез-связывающих белков печени крыс (А.Н. Смирнов с соавт., 1977). ОЭСБ, в отличие от рецепторов, не транслоцируется в комплексе с эстрадиолом из цитозоля в ядро клетки (Г.Д. Матарадзе с соавт. 1981). Показано, что этот белок не только фактор, связывающий оба типа половых стероидов, но и объект их действия : в печени самок ОЭСБ может быть индуцирован введением им тестостеронцропионата. Для поддержания же уже имеющегося в печени уровня ОЭСБ андрогены не являются необходимыми: отмена введения андрогенов овднзстомирова-нным самкам или кастрация интактных самцов не приводит к исчезновению ОЭСБ даже через 50-60 дней (О.В. Смирновас соавт., 1980).

К началу наших исследований функциональная роль ОЭСБ была неясна. Однако перечисленные данные позволяли предполагать, что этот белок выполняет в клетке печени самостоятельную функцию, отличную от функции классических рецепторов стероидов. Факт высокой чувствительности содержания ОЭСБ в печени к действию половых стероидов указывал на то, что функция ОЭСБ имеет весьма существенное значение для поддержания зависимых от пола процессов жизнедеятельности крыс.

Целью наших исследований и послужило выяснение возможной физиологической роли ОЭСБ. Мы сочли целесообразным рассмотреть эту проблему в трех взаимосвязанных аспектах:

1. Определить круг гормонов, их метаболитов и аналогов, которые сопосбны взаимодействовать с ОЭСБ, а также оценить интенсивность этого взаимодействия.

2. Изучить роль этого белка в процессе аккумуляции гормон-рецепторннх комплексов в ядрах гепатоцитов.

3. Исследовать физиологический контроль содержания ОЭСБ эстрогенами и андрогенами.

Изучение стереоспецифичности сродства ОЭСБ к 57 различным гормональным соединениям в первом разделе нашего исследования позволило нам прийти к следующим заключениям:

1. В основе функционирования ОЭСБ лезщт способность специфически связывать и, очевидно, концентрировать оба типа биологически активных половых стероидов.

2. Наиболее конкурентоспособные в отношении связывания с ОЭСБ лиганды ряда эстрана на порядок активнее производных андро-стана.

3. Структурными детерминантами для взаимодействия с ОЭСБ производных эстрана являются ароматизированное кольцо А, 3и - гидроксилы; детерминанты производных андростана - 17/5 -гидроксил, транс-сочленение колец А и В, некоторые особенности структуры кольца А.

4. Участки связывания эстрогенов и андрогенов перекрываются, но не совпадают полностью.

5. Во многих случаях степень биологической активности стероидов (оцениваемая по известным эффектам в:;классических органах-мишенях) прямо соотносится с их сродством к ОЭСБ.

Наличие конкурентных отношений мевду эстрогенами и андро-генами, с одной стороны, и между различными представителями внутри каждого из этих типов стероидов, с другой, в совокупности с лабильностью комплексов ОЭСБ с лигандами могут создать реальную основу для функционирования этого белка в качестве резервирующего фактора и посредника взаимного влияния половых стероидов и их метаболитов на внутриклеточную концентрацию и проявление эффектов этих гормональных соединений в ткани печени. Уступая эстрогенам в сродстве к ОЭСБ, андрогены значительно преобладают в количественном отношении фьЬ-Оуь, \AZuttktj 1975). Это в первом приближении выравнивает возможности двух групп гормонов в образовании комплексов с ОЭСБ. Изменение концентрации в крови и, соответственно, в гепатоцитах стероидов одного ряда за счет конкуренции за связывающие центры ОЭСБ и благодаря лабильности стероид-белковых комплексов может привести к временному изменению с противоположным знаком количества комплексов с ОЭСБ стероидов другого ряда. В результате соотношение гормонов в клетке восстанавливается. Аналогично может поддерживаться количественное соотношение уровней разных стероидов внутри одного ряда.

Таким образом, оценивая роль ОЭСБ в общей динамике половых стероидов, можно, видимо, говорить о нем как о буферном белке, сглаживающем в клетках печени перепады концентраций гормонов в с крови. Высокая емкость ОЭСБ в печеночной ткани, 10 м (А.Н. Смирнов с соавт., 1977), также свидетельствует в пользу"этого предположения. Очевидно, что стабилизирующая функция ОЭСБ проявляется лишь в условиях отклонения от состояния динамического равновесия между продукцией и деградацией гормонов, что практически постоянно имеет место в естественных условиях.

ОЭСБ, видимо, может функционировать и как модулятор интенсивности метаболических превращений, причем, как в пределах одного ряда стероидов, так и при трансформации андрогенной активности в эстрогенную. Последняя возможность основана, как известно, на ароматизации андрогенов (А.Г. Резников, 1982).

В обоих случаях ОЭСБ может усиливать метаболизм того или иного стероида по типу положительной обратной связи, при уеловии, что конечный или промежуточный продукт метаболических превращений конкурирует с субстратом этой реакции за связывание белком.

С другой стороны, возможно, что по отношению к эстрогенам, сродство к которым у ОЭСБ на порядок выше, чем к андрогенам, он может выполнять цротивоположную по физиологическому смыслу функцию, предохраняя их от воздействия ферментов стероидного метаболизма и способствуя их рецепции. Это предположение кажется реальным, поскольку ОЭСБ в большом количестве содержится в печени самцов крыс и практически отсутствует у самок, в то же время концентрация эстрогенов у самцов на порядок ниже, чем у самок (Ъбккг, 1А/иЛке., 1975). Может быть, выступая в роли "ловушки" для эстрогенных гормонов у самцов, ОЭСБ сохраняет их дяя реце-пторного аппарата гепатоцитов и, тем самым для их биологического действия. Таким образом, буферирующая функция ОЭСБ может проявляться и при взаимодействии гормонов с рецепторами.

Проверкой этого цредположения послужили эксперименты второго раздела нашей работы. Результаты их позволяют сформулировать следующее заключение:

1. ОЭСБ у самцов участвует в регуляции рецепции эстрогенов.

2. ОЭСБ способен опосредовать влияние одних половых стероидов на динамику рецепции других.

3. Буферирующим эффектом ОЭСБ объясняется половой диморфизм в характере аккумуляции эстроген-рецепторных комплексов в ядрах гепатоцитов крыс при введении животным эстрадиола.

Иными словами, при увеличении концентрации в крови секрети-рующего эстрогена или андрогена ОЭСБ тормозит накопление соответствувдих гормон-рецепторяых комплексов, в то время как для других гормонов, способных взаимодействовать с ОЭСБ, возможности образования комплексов с рецепторами увеличится. При постоянной концентрации половых гормонов в крови влияние ОЭСБ на их рецепцию, видимо, не должно цроявляться.

Следует подчеркнуть, что буферизующий эффект ОЭСБ в отношении рецепции стероидов не является единственным. ОЭСБ способен проявлять свойства истинного регулятора, модулируя ядерную аккумуляцию комплексов рецепторов со стероидами.

Показанная нами важная роль ОЭСБ в обп$ динамике и рецепции половых стероидов делает закономерным вопрос о физиологических механизмах регуляции содержания ОЭСБ в гепатоцитах со стороны эстрогенов и андрогенов.

С этой целью в третьем разделе нашей работы был проведен ряд экспериментов си- vivo , результаты которых позволили заключить:

1. Андрогены являются как первичными детерминаторами, так и последующими регуляторами и стабилизаторами уже индуцированного •уровня этого белка.

2. Сущность обратимого регуляторного влияния эстрогенов сводится к снижению уровня ОЭСБ, при этом они не препятствуют индукции ОЭСБ андрогенами.

Физиологический смысл такого рода влияний эстрогенов, возможно, состоит в следующем. Стабильно и длительно повышенная концентрация эстрогенов в клетках печени самцов может привести к феминизации ряда функций. ОЭСБ прочно связывает эстрогенные гормоны и, вероятно, цредохраняет их от действия ферментов стероидного метаболизма, поэтому поддержание его количества на фоновом физиологическом уровне в такой ситуации биологически нецелесообразно. В регуляцию эндокринного равновесия в таком случае, видимо, включаются механизмы, контролирующие содержание ОЭСБ (уменьшающие его уровень в клетке цри повышенной концентрации эстрогенов). Это предположение подтверждается поставленным нами модельным экспериментом: при достаточно длительном введении самцам крыс Е2 (рис. II) содержание ОЭСБ уменьшалось.

Андрогены в свою очередь оказывают на уровень ОЭСБ два типа регуляторных эффектов. С одной стороны, эти гормоны обладают стимулирующим действием, но только в тех ситуациях, когда исходная концентрация ОЭСБ понижена. Причины возникновения низкого уровня ОЭСБ могут быть различны: дефицит эндогенных андрогенов в связи с неполовозрелостью или кастрацией, ингибиторное действие эстрадиола. Во всех етих случаях регуляторное действие андрогенов нацравлено на восстановление и поддержание оптимального уровня ОЭСБ, характерного для половозрелых самцов. С другой стороны, введение андрогенов, не влияя црямо на уровень ОЭСБ в печени половозрелых самцов, способно стабилизировать нормальную концентрацию ОЭСБ у них, снижая степень реализации тормозного эффекта эстрадиола.

Наличие у крыс обоего пола сопоставимых количеств половых стероидов (В.Б. Розен, 1983, /1/ог^бЛ, 1981), делает возможным в естественных условиях комплексную регуляцию содержания ОЭСБ, отражающую изменение как концентрации половых стероидов, так и их соотношение.

Как уже неоднократно отмечалось, содержание ОЭСБ в гепатоци-тах самцов крыс резко преобладает над концентрацией этого белка у самок. Наши исследования показали, что такая шмовая дифференцировка является результатом андрогенизации сшад в . неона-тальном периоде их о тогенеза в естественных условиях.

Возможно, что 0Э0Б необходим самцам I) Для предотвращения феминизации в условиях повышения по какой-либо причине уровня эстрогенов (буферная роль белка);

2) для сохранения эффективного уровня этих гормонов, содержащихся у них обычно в низкой концентрации, но необходимых для различных эффектов в печени (резервирующая роль).

С другой стороны, буферно-резервирующий белок, подобный ОЭСБ, может быть весьма полезен в условиях высокого и постоянно меняющегося уровня авдрогенов как стабилизирующий фактор в печени.

В отличие от самцов крыс, у самой отсутствует столь резкая разница в содержании эстрогенов и авдрогенов, а их колебания в физиологических условиях, вероятно, имеют хорошо отрегулированный на уровне гипоталамо-гипофизарно-гонадальной системы, ритмичный характер. Возможно, что поэтому сажа не нуждается в специальных механизмах поддержания баланса двух типов половых стероидов на уровне печени. Более того, белок, обладающий большой емкостью и высоким сродством к эстрогенам, мог бы оказать нежелательное сглаживание эффекта кратковременного повышения концентрации эстрогенов в проэструсе у самок крыс.

Все полученные в нашей работе результаты обобщены на схеме, изображенной на рис. 13.В клетках печени самцов крыс половые стероиды, во-первых, связываются соответствующими рецепторами половых гормонов, во-вторых, взаимодействуют с ферментами стероидного метаболизма, в-третьих, комплексируются с ОЭСБ. При стабильном эндокринном статусе организма эта система находится в состоянии

ЭФФЕКТЫ^

ОЭСБ Э = ОЭСБ А

ОЭСБ М, а ОЭСБ Мд

Рис; 13, Схема распределения половых стероидов в гепатоцитах самцов крыс.

Условные обозначения: Э - эстрогены; А - андрогены;

Ф - ферменты стероидного метаболизма; Рэ- рецепторы эстрогенов; Ра- рецепторы андрогенов; Мэ и Ма - соответствующие метаболиты. динамического равновесия: часть гормонов в комплексе с цитоплаз-матическими рецепторами транслоцируется в ядро, осуществляя специфические гормональные эффекты, часть - подвергается метаболизму. Стероиды, связанные с ОЭСБ, выключены из сферы биологического действия и метаболических превращений. В этом состоит резервирующая функция белка. При изменении концентрации эстрогенов или андрогенов (суточные, сезонные ритмы, стресс и др.) реализуется буферная функция ОЭСБ.

ОЭСБ, вероятно, может выступать в роли модулятора внутриклеточной концентрации обоих типов свободных половых стероидов, поскольку изменение по какой-либо причине количества гормонов одного ряда цриведет к изменению количества свободных гормонов другого ряда за счет конкуренции эстрогенов и андрогенов за связывающие участки белка и лабильности образуемых ими комплексов с ОЭСБ.

Кроме того, как уже отмечалось, ОЭСБ подвержен реципрокной регуляции со стороны связываемых им половых стероидов, что создает возможность изменения степени участия ОЭСБ в динамике половых гормонов в клетках печени.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Мирошниченко, Маргарита Леонтьевна, 1985 год

1. Бейли Н. Статистические методы в биологии М; Мир, 1962, 260с.

2. Вундер П.А. Эндокринология поля М; Мир, 1976, 196 с.

3. Гайцхоки В.Б. Информационные РНК клеток животных М; Медицина, 1980, 221 с.

4. Матарадзе Г.Д., Кондратьев Л.Ю., Гонтарь Е.В., Смирнов А.Н., Розен В.Б. Закономерности транслокации различных форм эстро-генных рецепторов печени из цитоплазмы ядра Бюлл. экспер. мол. мед., 1981, №5, с. 568-571.

5. Матарадзе Г.Д., Гонтарь Е.В., Кондратьев Я.Ю., Розен В.Б. Сравнительный анализ изучения взаимодействия различных форм эстрогенных рецепторов с клеточным ядром. Биохимия, 1982,. т. 47, вып. 5, с. 869-878.

6. Мэйнуоринг У. Механизм действия андрогенов, М., Мир, 1979,224с.

7. Ю.Резников А.Г. Половая диффернцировка обмена стероидных гормонов Пробл. эндокринологии, 1981, т.27, ЖЗ, с.86-91.

8. Резников А.Г. Половые гормоны и дифференциация мозга, Киев, "Наукова душа", 312 с.

9. Розен В.Б. Вопросы эндокринной регуляции образования транс-кортина в организме в кн.: Актуальные проблемы физиологии, биохимии и патологии эндокринной системы., Москва, 1972,с. 132-133.

10. Розен В.Б. Некоторые актуальные вопросы динамики стероидныхгормонов в кн.: Физиология человека и животных, т.II Физиология эндокринной системы, М., 1973, с. 49-107.

11. Розен В.Б. Половые гормоны и их циторецепция во множественном контроле функций печени. Вестник АМН СССР, 1983, № 2, с. 80-86.

12. Розен В.Б. Основы эндокринологии М., "Высшая школа", 1984, 336 с.

13. Розен В.Б.»Смирнов А.Н. Рецепторы и стероидные гормоны, М., изд-во МГУ, 1981, 312 с.

14. Розен В.Б. Циторецепторы и чувствительность клетки к гормонам. Мёд. реф. журн., 1977, разд. 20, № I с. 1-12.- но

15. Розен В.Б., Смирнова О.В., Волчек А.П. О комплексировании стероидных гормонов с клеточными рецепторными белками. -Пробл. эндокринол., 1971, т.17, $ 5, с. 109-120.

16. Романов Г.А., Романова H.A., Розен В.Б., Ванюшин Б.Ф. Глю-кокортикоид-рецепторные комплексы печени крыс. I. Кинетические и равновесные параметры взаимодействия с ДНК: влияние ионной силы и температуры. Мол. биол., 1981а, т. 15, 3, с. 601612.

17. Романов Г.А., Соколова H.A., Розен В.Б., Ванюшин В.Ф. Взаимодействие дексаметазон-рецепторных комплексов с ядрами печени крыс и с ДЩ Биохимия, 1976, т.41, вып. 12, с. 2140-2149.

18. Романов Г.А, Романова H.A., Розен В.Б. Ванюшин. Б.Ф. Глюко-кортиковд-рецепторные комплексы печени крыс. Взаимодействиес естественными и синтетическими йолинуклеотидами Мол. биол, 19810,т. 15, № 4 с. 857-873.

19. Романова H.A., Романов Г.А., Розен В.Б., Ванюшин Б.Ф. Взаимодействие дексаметазон-рецепторных комплексов с ДНК как основа их трашзлокации в клеточное ядро ¿и. о ДАН СССР, 1978, т. 243, Ж 6: с. 1585-1588.

20. Селезнев Ю.М., Данилов С.М. Стабилизация дексометазонсвязы-вающего белка цитозоля сердца крысы. Пробл. эндокринол., 1979, т.25, № 3, с. 70-74.

21. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Выявление и предварительная характеристика особого эстрогенсвязывающего белкав печени самцов крыс. Биохимия, 1977, т.42, вып.З, с.560-571,

22. Смирнов А.Н. Проблема гетерогенности рецепторов стероидных гормонов. Пробл. эндокринол., 1978, т. 24, Я 6, с. 98-117.

23. Смирнов A.H., Смирнова О.В., Розен В.Б. Выявление и предварительная характеристика особого эстрогенсвязывающего белка в печени самцов крыс. Биохимия, 1977, т.42, вып. 3, с. 560-571.

24. Смирнов А.Н., Смирнова О.В., Розен В.Б. Рецепторы к эстрадиолу в цитозоле почек, печени и матки крыс. ДАН СССР, 1975, серия Биология, т.220, № 1,2,3, с. 244-247.

25. Смирнова О.В., Смирнов А.Н., Ходакова Т.Д., Розен В.Б. Рецепторы к эстрадиолу в органах половой сферы и некоторых других органах самцов крыс. Пробл. эндокринол., 1975, т.21,3, с. 71-78.

26. Смирнова О.В., Смирнов А.Н., Фишер У.М., Розен В.Б. Изучение некоторых структурных форм цитоплазматических рецепторов к эстрадиолу матки, почек и печени крыс ДАН СССР, 1976, т. 226, £ 2, с. 474-477.

27. Смирнова О.Б., Кизим Е.А., Смирнов А.Н., Николов И.Т., Розен В.Б. Влияние некоторых эндокринных факторов на содержание особого эстрогенсвязывающего белка в печени крыс. Бюлл. экс-пер. биол. мед., 1980, т.90, № 10, с. 480-483.

28. Смирнова О.В., Смирнов А.Н. Идентификация эстрогенсвязываю-щих белков в печени человека. Пробл. эндокринол., 1982, т. 28, № 6, с. 35-38.

29. Смирнова О.В., Смирнов А.Н., Розен В.Б. Многокомпонентная . система белков связывающих эстрадиол в цитозоле печени крыс. Зависимость от половых стероидов. Бюлл. эксперим. биол. мед., 1977, т.83, № 5, с. 548-551.

30. Фанченко Н.Д., Минина Л.С., Щедрина Р.Н., Стурчак С.В., Пив-ницкий К.К. Характеристика эстрогенрецепторной системы маток морских свинок. Бюлл. экспер. биол. мед., 1978 а, т. 85,4, с. 467-470.

31. W\ol. UM. ¿tUocunoí., /Si3y v.U,46. всас&Ш, ¿.í. члел^охл QM^CL коъи^опс cutia-Cjobusí$. ( ^cukPe m ujozkskûp ouïs /и>г^ч?/-7£ олл,& ал>оЪ1ъогШ)ис action aé taiQCt ctéí^ У2ï<fz iU

32. Ьъа.^, <yf 4(¡fajóte ojcj<('ue,ib?b С'^шеС ó<^í^íí¿¿ayíúb- j^ol СОUHÍi'M ClâUecot-J ÓO¿utiOl4,S Lli Ce и<'Л> ó eck, i/' ¿¿oyé' vn. üo^-btt.- CliaU lbt'0G&t>i*,J.f Í$é0/

33. BouJúwl M.M kcujH¿Lu¿¿J.P. T/ie zz&Li/ancz. &f lt'm.tb'c¿> ращcu, tÂL ^е^гим'мэьЬд/л, oj i/ec^/c L/Lbcü'u^ izofyz-zj-tzo(je,i/L zectftoz. — J. Ste-LOCcl бгосЖещ./ /9?<?, t/. 9./p 9-/S

34. HiiztobL k. CL iiüuoUj oj tiit, CDLtch'íiOOL^ СШd ¿¿71 fyccJiq^ IAjSIm oj tfat ctf'jDhe,iMj@-CL'\AAAii£ ъе. osteoid faí- севох/'яге&сf. w p 3/t- 323

35. C-htLuire.au. Шои de Oy £¿Uot'4¿ez (f. 7doêa.iiOl^ Ûjfриге. ÛM-cL LUa-OlÍÍе.глt/гъ touLcdct:58. cht^l f.c. y\a.f pi^'wi^ уи.р скъоыс е-жъо^е^ tze.oj:lme.bt

36. ХЛсЬлШ CLkXjfotebLSlld. .Г ~ULcj>Ú)t¿ (U. ¿h-L CbUutcu'O^ -¿tA.c¿oc7¿iAo&,jn /Щ V.H3p. №03 -ДУЯ59^ CPazk P^ok /l/uc¿e.<ii zecLptoi-t-fé-bDjboMe pQzcLiMe.ti&¿- У14: Ho.c.e.ptoi¿ j-оъ. ßQ-pbociu^dt^z

37. НоLMhí¿ M-y.-doiAcée,^ /Э?Х />. /SS9. 60. Po-teío ¿y Pec£ M^cêeaz í/bdfujleéeM&'GH' ej thz. Teczpíoz eáí^ojett. свил^&х: Légateos-Lo "imt cl^ovuhu qm-cL qmacltjoïuàjfc pzoptvtfe^ ojedtb/o£ vuLocutootoauf 19tf i/. /00 />9/-96.

38. C&bz-k J.H.f feci. ¿.¿J. PeiMaù. dtezofcfj. euL £tA.cLúczt'w¿oQüt i/JLfJ ïp-u'fitje^ Ôzzù^ /9?g62. ^ailtJ.H., iLfpohubcM S., MaïlcLvevdi ву

39. Цохсйn J. U/. тлсьрЬоъ. hetebOQenct^. сщ<£ ccéezo~ -tbopkíc XtájЬои-ie,- У&лг. ß-Qcju£. Jtezocd £/оъ(моь11.7% р. $9-/01/

40. Uo¿ítj ff.%. H&cjOL&ttioiA. of keJ>ct£;с cLzau^ cuu^cL die. IMttœlôobliM b^ OMj.-uDjêMA^ W ¿¿¿тяжелы — y4: Ctducutcej ùl Hotmaui He. leaicA, i/.1/, ¿/-y.f I5<¥0,[)

41. MClùolIA Ùi/£1—J<A: GLcilS. SttZoií ét'OotíÁtf. CUA-ci Pf¡4llM¿Lco(1. t(oiAcUk/ /$19; p 9/-//Ï У1. U)iMpa ъеЫ/'иеliu.cLj ¿y Cuubïotu: bcLupo-L^t âf

42. CLU-'kcUjrùâ^'-i нлл oj ы -Ьъо^елп^ sÉlH/u ¿ CUA-ci ùfjec£i vu, -¿¿tiojUt ue.c-L.p~éû-z.fy) ¡m, * юоt ¡>jm-№.

43. Fed h Илак, ff. H.j F/dkiMCLK. J. %;ffe г¿¿«.б, -¿Cí/'ок, of -Áfo¿ XLCLpton LU 7A.-6 LuteHue. c^rtodó¿ Ly é-o -tcuMoxijeiiL — biûUttAju. ßiöffiijs. Aei. й>шши.н4 jgïQ^Jïp.syossù

44. F-¿e*'ííh/Ha.t1{Л У.J Betcéô м бк^ъИсЫъ'Ъ-аЖгба, of pwjjatez¿cefto^ of ъеиб^'б zu^ urf-tb ^и-U\e¿rd ргодаьЪ'и /ú^^UfifÁ-^/-^dzox^'/s-uoou^^-fyebt-b^cíiQvit б/о oh eu*. Ol с/аi/.JVôp soo

45. Jéi^eM ê.V. ! frôohdQïL H. 3. ßa-^'c 6o Ûje те-ок&^'бш ojj и^гючш — Ji^: HCCLMUL Ръодъ. ttâztoOhe Im. y-y.-oUbidAOt^t is Ib, /BU ß pW-4/ï83. 1-СЛлАеАл é.l/. Mûh^L -f., J/ozeMT. ГОЛАЖ* S' Яе.i J / s /

46. Soi^oix ê,t. ¿¿èrop^^e zio ¡ллмс £eoptu 6c ù* тЬиго- g. dttwcl óioáevu., im^ i/З.^л/З^ p. ^-t-^jt84. ¿.u/., MoUa^ ifoie£¿'rf ё'ъесбегр.^ ÍoiaaLu £,f( ¿jizoietb 'иа.р'Ьг ¿гтз^огша^гок, asuc¿m.c¿ea i Ц.Ц/А Syu W¿íH Ùu ¿ц ex pe Ukieitt* £

47. MLCUCHAÍ oaa¿ t V.5(j : ß<f-oz tepbötluc/;^ю-гжом^. оСы1оиь1 ; р èO-ЭЗ

48. CL¿ pi dut Сил^ъоиесС HAe^ùioct ^oi e^1.'gLt Gjcf i lu'ûj pte ъо CcL bcbjLtufi : o&átvb cL'ol b*tais (ta ilt ilqaLl ClvlcL j>(íüu-fa70.- гоСа^ С. /yb. ??393. УогьЬ J.

49. ЪоЛ -éübLCj Í ЬП\ЦЛЛ wat Cu UÍ РъОС. .

50. CLUXCL. SU. USA-, ¡Ш} i/. ?я А/Г p. лf?-s/6/

51. Kik-<j ^ ¡M&uuciUug. l^.ip. S te t -a-cèroiAj. lliaxj.i/C2sf'fcj po гк puas, ба&Угиви /9

52. PhaltMocoé.j /I/. 33. Л/2; рГОй-Г/Z

53. MubcíjakAOL Pkícu' F.f ИагоЛо T У^Ы&ЬАО^ОТ.s^bocj ей, uujiéoz, coüj илегои cha zax ¿^lиа^/i/ß txkd hzoiej. ßfoUit4».,jvjöl v-h л/ч*p 9sf-jtf123. Mи,ъхиаац a p Utk cu' p. ^^^^//^'¿¿tíf/^t oj/- ел£ъо

54. Mfrti(Lu A.c., НычШок Я) .fy /hut* H.E. Л Li^Uic

55. CLKO,&Í¿5 ojj the etíioj&n, uœptoz é оъи*a¿ic>n 7

56. CfjCivi., I9?f, кЗЩр- 3Q4S-39S0. 126 .Mot¡du A.C.J к/¡ il $ Си./É. a IWÙuiÙLb Osud kinetic oJlcl-ùsa e¿iwjtK uur/itn Siewtd Bio191 Г., 1/6., л/ з/ц

57. MuiecLt ^U/zdKje йу ?/uiiajsjoHj.//. MuUik*u*u>. \ясЛ ïiQuPaùoh of) Ûi ¿¿¿годен хясир^г ¿u z&¿ ùi/ег o-uwotobu /QJIj i/./OJ, л/1/ bll9ù~/ig?128. idizcLclei h/. Tk¿ leufréoi JÍtzJtd Олалля., /9}6 A/kl jo 33-94

58. OtaM.¡ Sedo T(tÍQ.bac¡u- S.y ßt*o S. ТгД*и ¿oc/vt.'**, 0¡r k¿f>aÁic &ucizß<jtu XJiCcpto^ 6o ¿<ULcé>¿tLj>i/0 ¿U iM^te ^<xt ç. ¿KЪелк,-^

59. OtcL Afy Sato M Ta-ko.LaoUS y Оно J. Parral fubfr-CùjtiQh- 4 ujtûpQumCc амАыае^ъ zeucht ¿u^é Фи&г. cUvwt. Jaf^ /М/Г, к 281 У/ f. П9~ <?3¿

60. PoJfrh \л/., ¡Cïm jc.; И/zost ¡4/y SoofrfUd У. £//eUs

61. StK клгиллщ ôh ÏXU Ùùofbb-Luiu ~~ ¿^clôCV^oédùM MJGfilûJI'/ôM y

62. S-Luclfei ou. j-u-to.ctiOto.aJi ifjjuujtcab.se. o^ cuté/w^ect-tilùljiiots lh xjqot -j- ô/&-0. /9?jl¿4?,irt/6 -/SrY.

63. C4I. Roui {4GLU -êr/ Pù(j<j,ù*4 S-J.f Ôaxlzzj.yu.L?eai accepto^ ¿¿be^ jox jj£tcCocoi.i,,cjoCcC Uczjéo'ïA "JAteuoid b^diun*., (9W.J A/r D 93r-93S 42. Roy h f IMs/'&it Bj ai^clvovevL, -ucjL^-éû^ ¿u tatb& iau,'c uctp^d^ QMCI ¿{i cotn-e0(4^, UT/

64. Ct^ctw^eiA. dzjïeiA.ôLei'uL ¿yiA.'éhzMl o^ ¿jLu-cj@AkuMiii,—

65. BioohèM. bicj>k¿±. Uctccf /39Ц

66. HüLiwhcLUgk ß. С} ûêLcj ¿/.Ъ. id ßlöüjlUi ¡ьогиьиоие ^Uul pCtcüia. jeiwuvuii/lLq jac£oz mediated aoLfOti sj) ¿¿tiacLoi si^l hipCL&t dijLcQ duuL £-htw¿c¿- ¿^¿ocuvuoíocLy ( /MOt (/. №•? t Í/.Ъ fVtf íM

67. HuhaUujA u.c.t C£aTÂJ.C.t !Mc%cluj*j? OJt¿uc/ci$ FaiAAst ivi г cuùon o^ the- oovLa.iut^&LÍ:('ou¿ hejm&c

68. Ьъод&л- bind*ид pwíef'kd ¿y ic-iopCc jotiuJ-bazy -¿UcLo~ CUW0ÍÚQ4, \S*b4 I/.112, л/к, b Aé3-&6â145. ku-h /J ; ícLÍienMei^beyi^ 6Á, ta¿Mk¿é¿eu¿ojett

69. J. fi-. &ót¿í¿(J. ¿sitóle ¿оЛьгсиЖо!«. иъоиб uJzíTuj ¿n ui-bbo x/LSfouce CLMCL 1лис£ем.г сер ~t CJL г ~ndocuuoíoj,^ !9Ï2>; t/. 3*'jf>. av.146. , \Á/CLÁÍ ( ch Í/ИХ. auLcl^OMu ¿educed шлс-Реаг a<JLu.\M.uícuti out s>j Ы-Ьъо^&ои

70. UU^töxA S-itVùicii, /9 7-Гу (/ ЦТ. р,

71. ScuLob.j fi/ùskitaunL У.j Моша. ишо^о ijd\AA^\MWba èf ¿disbojen, ¿ucLep&u.djiuùL иисс€еаъ b(ti.ct¡tA¿j ofj t£C&j>£o>¿, ргсЬ&ь. oj¡ UsUüHe. aptojoë ^ x¿\m6uol¿ ojy ¿dut \a*jo&luülz<xi oni^ut crdu lfíot-¿ia¿o~

72. SaAo b М&И4Л С } A/íjlu'¿aura ü/akajo ^ ШсиЬ

73. SllImo'ÍO ¡Lj fycuAAûLtMWbCL Шc.cMclvU ^ acifva&OU, o£) j~íewid tici^-b^ ; ¿и1/оёи&1ллелл£ Ô^ ¿6u^ iMjoêea^êab bJQstc^bi: с^Ь'к/Ьоъ ¿t*- aXi uœti olí. ojj ¿u^dzofjей./ ' cové¿u)C¿J t^í-w^e^L uc^p/jO'b ¿и.сЬэсъ/'ил^оьч;

74. JdíOap: /06 . л/*/ p НЧХ //<//

75. Socio 6V Otee JU., Ohabéb ¡c. Ртмеисе. e¡> kttcüucj соиььо-imaÁ(<>J jot, ЬолbosЫъомл, ¿t*. ъ&Ь -¿¡vert cctdo-C-uuvgI сер., /91051, I/. № p. 3/S-3/3.

76. S aío 6. j MC s Li zaurcu êf ¡MatcLa Á/вица ¡с. Hw** F iMdiiuiAAeto je. íijtxoid ztc^p ¿зг <feZJ^L-S OM^CI1.ítzcucíiOh^ uTcfyi cytob£a¿iM¿¿ ¡ш)¿aj.êatób¿~ У. JiszoôcC

77. Oolma'h. tw ¿амр&ыскьЬогд ^A/ê ам-cl 1ьог1млк£ u^iatioi^ ¿u. Uuc Oviduct ~ (fu: Pwiefu ¿guífa-ejrj iu. ЯергосЬл. obi (se TtMuef /9?3/ р. ЗУр -j?/

78. Чоор T.c.f Cía-ÜL {J.c4 LuiMbaccgk, 1СУ ¿ииеъ -У. IV. ¿MfUu--éùitcj ôjj k&jxubíc e¿~t*uQCjeM,~ hcuditAJCj pboieiU-i ¿y

79. TûLÎieq iï.J.j , ¿SA., ¿¡-eta. С Я bioOiekntcGLiсOWl^)CL~U!>ÔVb ôj Ь TJLCjLj)~b.ût& ôj th-C k-LciMlie.^ Itypotlna.icu\AAU¿ CUVLCL uiert^.— £ (лЖосииоёойч f ^^p /8-Г- ПУЧ

80. TeetcuTht cl££ bCo&o^ij ¿butrón, ¿jjg"üouftlikobiMúUéA.— bvi: P%ô<juAi Си hccJzuOh, Keuaxctif CLiMítezJ^UM; !9î6 }pt/09-t//<o.

81. Tcu^iox. Lñ/. SurcLfieol У-Е.; Shnitk A. CoizeéaJÓ/ott, oß tw-tiecit euue.j>tßx $L-ée¿ ZA^tojetL ъш^ЬоъьlXL^ic iJp^iDH. ш и/¿lo 6/OcM-Mt.^., IS<YÛJ е. /S^A/ifi&T-Jfj

82. Tevuj HcL^i&to^i T. H. Яо£е o^ сЬъощейЬ/йе ¿h es¿zo~

83. OLcÂtOfa un, tote . ¿. Jh*. co^ítod c^f&uáe.cjx^Clu 1ч сцл~А cJneLvUca,^ cQiAjLbe4*t(0H* CLuA jUu,^-eAttdcUoi-R^r-Pböc ^oZ. acaá.; $>dy US/Í/ /МиМ fa.'9/04 НИ

84. Tonq g.H.jXaghe. ^Ojía&t ¿jUAte/Atusen Я.У.cdhUj ¿wuL ùùte,zjus>- $ S-¿ezoLcI ßtotJoe.^/9^ isi^ A/3, P Цъ-Ш.

85. Toj-t^.j №ou,tc)/¿ Uj Яокыаг P. IsoícctíoH, амс!с^цъаей-ъъаЛ/otv sjptoses ¿егюье ъгси^в^.—Зс* : f/огшоие-Rec&pto-ь Su,te,zac¿coiA,¡ ¡Мвёесибаъ cupe.c¿$. M (f.- ЬоАлЛ, !3H/ р.МЪ-Щ.

86. T^ci^ét ¿ . SíexocdL (ьоьмонс. £>¿OJJJn&teáe.kucUetty -му., m*.

87. U. Siaucd -pwteLb. сtaction.1. UJflion. E.M.j F^iacJi F. 0. ßciAclcu.<j f>Tbújo¿tú¿4 abcffoqtto. rtULjoi-ö^i . EisïcLtHO. <fùX CCÍZUÁÍ C¿L¿ Z<LaLjO¿á*r-i ¿u xjoj: ~iea-b¡s> ej)¿cl¡ jujuvuc, ewudl p^oíta-te- j- 3¡o£. /9*6, V. Ш j p f6¿0~ S6 M

88. VfiUan Я>7 ículfaíu У у ttaïtïs A/%ôugêai Ñ.fzcLofjÍQj

89. ТЫpitdLicéíoh. ojj -iícihd-azt cuiiru aud -e/inôti. /вь ¿fac. ai-Souy. ôj bitiA-cLiot ky cJdiMj)ií(ín/e. Uudt'uvrl<W, vif, pí?'9o.

90. WotCt И-Н., tucLícb M, tyitnX, h/luiêeztf ¿ш-j)¿deci e¿ízü(jei<bí on ^¿ttcLcUoí eífdéecf -aujpoHdeA-^. Stebo/'cfiocjtM. , ¡9W-, I/. 3:/рШ.