Внутриядерные функции цитоплазматического рецептора тироксина тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Гарафутдинова, Елена Амировна

• Гарафутдинова, Елена Амировна
• кандидат биологических наук
• 1984

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гарафутдинова, Елена Амировна

ВВЕДЕНИЕ. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Индукция синтеза белков и нуклеиновых кислот тиреоид-ными гормонами

1.2. Ядерные сайты связывания тиреоидных гормонов

1.3. Связывание тиреоидных гормонов в цитоплазме

1.4. Современная модель внутриядерной функции тиреоидных гормонов.

ЭКШРШШТАЛЬНАЯ ЧАСТЬ

2.1. Материалы.

2.2. Методы исследований.

2.2.1. Получение препарата ядер

2.2.2. Получение цитоплазматического рецептора тироксина

2.2.3. Получение рецептора тироксина из микросомальной . фракции печени крыс

2.2.4. Получение ядерных 30-40 Б РНП-частиц и иммунологическая идентификация в их составе тироксин связывающего белка.

2.2.5. Выделение ДНК.

2.2.6. Выделение РНК из препарата рецептора

2.2.7. Электрофорез РНК

2.2.8. Взанмодействие гормон-рецепторного комплекса тироксина с ядрами.

2.2.9. Взаимодействие гормон-рецепторного комплекса с

2.2.10. Определение общей РНК-полимеразной активности изолированных ядер

2.2.11. Изучение ядерно-цитоплазматического транспорта

3Н-РБК.

3. РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ И ОБСУЖДЕНИЕ

3.1. Изучение взаимодействия цитоплазматического гормон-рецепторного комплекса с изолированными ядрами клеток печени.

3.2. Характеристика нуклеинового компонента цитоплазматического рецептора тироксина.

3.3. Исследование влияния гормон-рецепторных комплексов из нормальных и опухолевых тканей на РИК-полимеразную активность изолированных ядер печени крыс

3.4. Исследование взаимодействия гормон-рецепторного ком-лекса с ДНК.

3.5. Исследование ядерно-цитоплазматического транспорта ^-РНК.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Внутриядерные функции цитоплазматического рецептора тироксина»

Выяснение механизмов регуляции генетическом активности ти-реоидными гормонами является одной из важнейших проблем молекулярной эндокринологии.

В настоящее время не вызывает сомнения факт, что эффект гормонального воздействия опосредован взаимодействием гормонов щитовидной железы со специфическими рецепторными белками. Несмотря на то, что специфическое связывание Tg и Тд было обнаружено и в ядре (Ор-penheimer J., 1979; Baxter J.D. , 1979) и в ЦИТОЗОЛе (Spanld-ing et-al. , 1971; Defer et al. , 1975; Csaba et al. , 1977) гормон-чувствительных клеток, большинство исследователей считают, что ящерные хроматиновые сайты связывания являются первичными рецепторами тиреоидных гормонов. Цитоплазматическим же белкам отводится вторичная роль и до сих пор оспаривается их функция в опосредовании генотропного эффекта гормонов. Основанием для такого заключения служило большее сродство цитоплазматических рецепторов к Т^ , чем к Тд , способность тиреоидных гормонов акцептироваться хроматином при непосредственной инкубации с ним в отсутствие цитоплазмы, одинаковое количество ядерных тиронинсвязывающих сайтов в ядрах печени тиреоидэктомированных и нормальных крыс ( Oppenheimer et al. , 1974; Surks et al. , 1975; Defer N. et al. , 1975) и неспособность цитоплазматических ТСБ связываться с ДНК ( Mac Le-od et al. , 1976). Вместе с тем, ряд других экспериментов свидетельствует о том, что аккумуляция тироксина ядрами зависит от температуры, от концентрации гормона и увеличивается при инкубации с гормоном интактных клеток ( Samuels, Tsai , 1973; Kistler et al., 1975). В опытах Tata J.R., Widnell С.С. (1966), Cohen p.p. (1970), Griswold M.D., Cohen p.p. (1972) было показано, что свободный тироксин в отсутствии цитоплазмы инертен в регуляции матричной активности хроматина и РНК-полимеразной реакции в изолированных ядрах, что свидетельствует об участии цитоплазмы или ее компонентов в эффекте тироксина на генетически!'! аппарат клетки.

В 1976 году Абдукаримовым А. и др. была высказана гипотеза о генетической функции цитоплазматического рецептора, согласно которой специфический рецепторный белок, являющийся продуктом гена-регулятора, взаимодействует с гормоном и приобретает способность узнавать специфические акцепторные сайты ДНК, входящие в состав ре-гуляторной части оперона.

В экспериментах по изучению матричной активности хроматина и РНК-полимеразной активности изолированных ядер было показано, что цитоплазматическин гормон-рецепторный комплекс является посредником генетического действия тиреоидных гормонов (Адылова А.Т., 1978). Это подтверждает и транслокация очищенного %-цитоплазматического рецептора в ядра и обнаружение его в составе метафазных хромосом эукариотов (Абдукаримов А., 1978 б).

Однако, механизм проникновения ГРК в ядро не известен, поэтому одной из наших целей было выяснение условий транслокации ГРК из цитоплазмы в ядро. Обработка цитоплазматического ШС смесью РНК-аз А и Tj , показала, что необходимым условием его взаимодействия с ядрами является диссоциация РНКового компонента, ассоциированного с молекулой рецептора.

Современная модель механизма действия тиреоидных гормонов предполагает, что определяющим эффектом взаимодействия ГРК с генетическим аппаратом клетки является стимуляция транскрипции специфических мРНК ( Baxter et ai. , 1979), и менно в результате этого обеспечивается избирательная регуляция функционирования генома.

Однако, известно, что избирательное выражение генетической информации обеспечивается не только на уровне последовательной транскрипции индивидуальных пре-мРНК, но и на этапе их процессин-га и сплайсинга, а также избирательностью ядерно-цитоплазматичес-кого транспорта РНК и трансляции специфических белковых молекул на матрице РЖ.

Логично, поэтому предположить, что тиреоидине гормоны, контролирующие огромное количество функций и метаболических реакции организма, имеют Енутри ядра множественные функциональные сайты связывания, взаимодействие с которыми позволяет им координировать работу ядерного генетического аппарата. Б подтверждение этого предположения сайты связывания тиреоидных гормонов были обнаружены в составе хроматина ( Oppenheimer et al., 1972 ), ядерных PHÏÏ-частиц ( Defer B.D. et al. , 1977) и в белках ядерного матрикса (Wilson B.D. et al., 1982).

Исходя из этого, а также показанного ранее (Азимова и др., 1982) структурного отличия цитоплазматического рецептора тироксина опухолевых тканей от рецептора нормальных тканей мы провели сравнительное изучение их участия в регуляции ассоциированной с хроматином РНК-полимеразной активности, а также в процессе ядерно-цито-плазматического транспорта вновь синтезированной РНК.

Наши данные показывают, что Т^-рецепторный комплекс включается в регуляцию как на транскрипционном уровне, так и на посттранскрипционном, однако степень участия нормального и трансформированного ГРК в стимуляции этих двух процессов различна: IPK из нормаль-\ ных тканей эффективен как в регуляции РНК-полимеразной активности изолированных ядер, так и в ядерно-цитоплазматическом транспорте %-РНК, а ГРК опухолевых тканей не влияет на РНК-полимеразную активность, но более цитоплазматического нормального ГРК эффективен в транспорте %-РНК в цитоплазму. Кроме этого ГРК опухолевой ткани в отличие от нормального ГРК не способен взаимодействовать , с

ДНК.

Таким образом, наши данные в совокупности с данными литературы свидетельствуют, что цитоплазматический рецептор Т^ способен транслоцироваться в дцра клеток и опосредовать как ассоциированные с хроматином, так и посттранскрипционные генетические процессы.

I. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

I.I. Индукция синтеза белков и нуклеиновых кислот тиреоидными гормонами

Гормоны щитовидной железы обладают самым широким спектром действия. Под контролем трийодтиронина и тироксина находится ряд важнейших биохимических реакции белкового, углеводного, липидного и водно-солевого обмена, процессы дыхания, роста и дифференцировки клеток и всего организма в целом.

Но несмотря на столь большое значение тиреоидных гормонов в жизнедеятельности организма, молекулярные механизмы их действия остаются до сих пор неизвестными.

Многочисленными исследованиями было доказано, что в различных субклеточных структурах тиреоидные гормоны связываются со специфическими белками-рецепторами. Так, наличие специфических сайтов связывания тироксина и трийодтиронина с высоким сродством и низкой емкостью было показано в матриксе и внутренних мембранах митохондрий (Туракулов и др., 1974; sterling et al. , 1975, 1978), на плазматической мембране ( Rao et al. , 1976; Pliaci , Goldfine , 1977; Gbarbi-Chini , 1981; Little , 1984), в растворимой фракции цит030ля ( Toccafondi, Sufi , 1973; Samuels ïsai , 1973; Oppenheimer et al., 1974 a; Davis et al. , 1974; Defer N. et al. , 1975; Goldfine et al. , 1976), в хроматине ( Grisv/old,Cohen , 1972; Oppenheimer et al. , 1972; De Groot L. et al. , 1974;

Baxter J. et al., 1975), ядерном матриксе ( Wilson B.D. et al. , 1982), ядерных РНП-частицах ( Defer n.efc al, 1977), липосомах ( Gharbi-Chini et al., 1979).

О ключевой роли взаимодействия гормона с молекулой специфического рецептора в механизме реализации гормонального воздействия в клетке свидетельствует зависимость степени ответа клеток на гормон от концентрации гормон-связывающих сайтов в ядре ( Samuels et al., 1979), нечувствительность к тиреоидным гормонам больных с пониженной концентрацией гормон-связывающих сайтов ( Bernai et al. ,1978), нечувствительность к тиреоидным гормонам клеток Drosophila при совершенном отсутствии в них рецепторных молекул для Tg и Т^ (Charles et al. , 1975).

Таким образом, наличие специфических рецепторов в различных компартментах клетки хорошо согласуется с гипотезой Hoch , высказанной в 1962 году о множественности направлений в механизме действия тиреоидных гормонов. Однако, в настоящее время наиболее изученным является генотропныи эффект тиреоидных гормонов.

После ОПЫТОВ Tata ( Tata J.R., Widnell С.С. , 1963, 1966), показавших, что наиболее ранние эффекты трийодтиронина связаны с синтезом новой ядерной РЖ и увеличением активности ДНК-зависимой РНК-полимеразы, внимание исследователей сконцентрировалось на клеточном ядре, как месте первичного действия тиреоидных гормонов.

Исследование вновь синтезированной РНК методом гибридизации позволило Тата установить, что под действием тироксина увеличивается синтез рибосомальной РБК , что согласуется с показанным ранее увеличением активности РНК-полимеразы I изолированных ядер ( Wyatt, Tata j.R. , 1968). Далее было показано, что трийодтиронин увеличивает не только специфическую активность фермента, участвующего в синтезе рибосомальной РНК, но и его количество ( Бmue1er, Tata J.Е., 1971; De Groot et al., 1980).

Griswold, Cohen (1972, 1973), Flicinger et al. (1972) также отмечали преимущественное увеличение под действием тироксина РНК-полимеразы I и соответственно - индукцию синтеза рибосомальной РНК.

По данным Jothy et al. (1975) при введении трийодтиронина тиреоидэктомированным крысам активность РБК-полимеразы I остается неизменной в течение 3 часов, • но уже через 40 минут резко возрастает (на 200-300%) активность РНК-полимеразы II, ответственной за транскрипцию пре-м-РНК.

Повышение активности обеих форм РНК-полимераз было показано De Groot L. et ai. (1980) через 8-10 часов после инъекции трийод-тиронина гипотиреоидным крысам. Кроме того, в этом же интервале времени наблюдалось увеличение количества поли-А-содержащей РНК, причем РЖ, синтезированная изолированными ядрами крыс в среде с Тд, качественно была подобна таковой у гипотиреоидных крыс, получавших Tg, ( De Groot L. et al., 1980).

Суммируя приведенные данные можно заключить, что наиболее ранний метаболический ответ на введение Тд - генерализованная индукция синтеза как мРНК, так и рибосомальной РНК.

Следует отметить, что в условиях in vivo эффект тиреоидных гормонов на индукцию синтеза нуклеиновых кислот сложным образом связан с общим гормональным статусом организма. Так, введение гипотиреоидным крысам соматотропного гормона изменяет концентрацию восьми фракций мРНК, причем уровень 4-х мРНК снижается, а уровень других 4-х мРНК повышается ( Liaw Chen et al., 1983). Для двух мРНК показана необходимость одновременного введения трийодтиронина и соматотропного гормона для восстановления их нормальной концентрации. С другой стороны, содержание крыс на обезжиренной диете с высоким содержанием углеводов изменяет уровень 10 мРНК. Во всех случаях, кроме одного, эти мРНК зависят от тиреоидного статуса животных ( Liaw Сben et al., 1983)*

Выражением стимуляции синтеза РНК является синтез специфических белков на матрице этой мРНК. С этой точки зрения важно отметить влияние тиреоидных гормонов на уровень синтеза гормона роста в культивируемых клетках гипофиза . Martial et al. (1977) обнаружили стимуляцию тиреоидными гормонами синтеза гормона роста в 2,5 раза, причем повышению уровня содержания гормона роста предшествовало соответственное увеличение уровня специфической мРНК.

Весьма интересны также данные Barbanel и Assenmacher о неопосредованном уровнем эстрогенов в крови влиянии гормонов щитовидной делезы на синтез эстрогенсвязывашцих белков ( Barbanel G., Assenmacher J., 1982).

Тиреоидине гормоны контролируют также и синтез рецепторов глго-кокортикоидов в легких новорожденных крысят: подавление функции щитовидной железы у них путем пре- или постнатальном обработки про-пилтиоурацилом предотвращало увеличение содержания глюкокортикодд-ных рецепторов в легких, характерное для нормальных животных. Введение таким крысятам I мкг Tg приводило к увеличению количества рецепторов глюкокортикоидных гормонов в легких в течение 48 часов после инъекции ( Morishige Walter К., 1982).

Эти данные в совокупности с данными Martial et al.(1977), Samuels et al. (1973), Dobner et al. (1981) О том, что тиреоид-ные гормоны контролируют степень влияния глюкокортикоидов на уровень мРНК гормона роста не только дают представление об участии ти-реоидных гормонов в регуляции транскрипционных процессов, но и способствуют пониманию молекулярных механизмов взаимодействия гормонов и взаимозависимости их эффектов в целом организме.

Возвращаясь к индукции синтеза белков тиреоидными гормонами, следует отметить, что показано образование под действием Тд новых молекул орнитин-декарбоксилазы ( Raymondjen M. et al. , 1983). В гепатоцитах взрослых крыс Mariash, Oppenheimer обнаружили индукцию при введении Тд внутриклеточной декарбоксилирующей малатдегид-рогеназы (Mariash C.N. , Oppenheimer J.H. , 1983), причем эта индукция была пропорциональна концентрации гормона в среде и кожчеотву Tg , связавшемуся с ядерными рецепторами.

Используя метод двумерного электрофореза по О'Фареллу'гшсойет V. et ai. показали изменение под действием тироксина спектра ядерных белков ( Nikodem V.M. et al., 1981).

Заметим, однако, что изменения клеточных белков при различных тиреоидных состояниях нельзя автоматически рассматривать как следствие прямого эффекта гормонов щитовидной железы на экспрессию генов, кодирующих эти белки. Так, например, показано, что у гипотире-оидных животных уровень синтеза 2-х субъединиц ферритина снижается в два раза, однако уровень мРНК, кодирующей эти субъединицы, не снижается соответственно ему, что предполагает возможность, посттранскрипционного контроля тканевого уровня ферритина ( Jump et al., 1982).

Классическим примером увеличения синтеза белка через индукцию специфических мРНК является стимулируемый тироксином синтез de novo карбамилфосфатсинтетазы (КФС) - ключевого фермента цикла мочевины. ( Cohen Р. , 1970). Mori et al. (1979) показали, что в первый день после введения головастикам тироксина происходит двухкратное увеличение уровня транслируемой мРНК карбамилфосфатсинтетазы, который незначительно изменяется в течение последующих 4-х дней. Ингибирование индуцированного тироксином синтеза КФС актино-мицином Д, одновременное увеличение матричной активности хроматина in vivo , а также усиление фосфорилирования и ацетилирования гис-TOHOB ( Cohen Р. et al. , i978; Mori et al. , 1979) свидетельствуют о том, что тироксин контролирует синтез КФС на транскрипционном уровне.

Доказано, что изменение количества выделяемого с мочой-глобулина - андроген-зависимого белка печени крыс, при различных тиреоидных состояниях положительно коррелирует с уровнем мРНК для / р -глобулина в печени ( Roy м.к. et al. , 1976), что свидетельстЕует о роли тироксина б регуляции транскрипции мРНК для I 2и -глобулина.

К такому же выводу пришли Kurtz et al. (1976) при изучении синтеза -глобулина в бесклеточной системе. Ими было показано, что Тд и Т^ стимулируют синтез 2и-глобулина, и что эта стимуляция параллельна увеличению функционального уровня мРНК, кодирующей этот белок ( Kurtz et al., 1976).

Следствием индукции под действием Тд либо Т^ специфических мРНК является также синтез de novo митохондриальной ¿/-глицерофос-фатдегидрогеназы в печени мышей (ïishler, Hammond , 1975; Наша da et al. , 1979), большой субъединицы Na-К-АТФазы в почках и других тканях мишенях (Lo, Edelman , 1976), увеличение количества J>--адренергических рецепторов в гипотиреоидном сердце ( Williams Lefkowitz, 1977).

Самым убедительным доказательством участия тиреоидных гормонов в регуляции специфической генетической активности является индукция синтеза гормона роста в культивируемых GH^ -клетках гипофиза. Dobner et al. (1981) показали, что 3-дневная инкубация GH^-клеток гипофиза крыс с Тд (50 нТЯ), дексаметазоном (80 нМ) или с обоими гормонами одновременно, приводит к возрастанию уровня пре- • м-РНК для гормона роста приблизительно в 4,22 и 13 раз соответственно. При этом уровень мРНК в цитоплазме увеличивается на 30-40% больше, чем синтез самого гормона роста ( Dobner et al., 1981). Несоответствие в уровне мРНК и синтезируемого белка, очевидно, свидетельствует о действии на посттранскрипционном уровне каких-то факторов, снижающих транскрипционный эффект трийодтиронина.

Данные Spindier et al. (1982) по изучению меченых продуктов транскрипции в стимулированных Tg GC-клетках гипофиза гибридизацией с клонированной последовательностью гена гормона роста, иммобилизованной на нитроцеллюлозных фильтрах, показывают, что глюкокортикоидные и тиреоидине гормоны повышают уровень мРНК для гормона •роста в GC -клетках опухоли гипофиза по крайней мере частично, путем прямого и быстрого увеличения объема транскрипции гена гормона роста РНК-полимеразой II ( Spindler et al., 1982).

Таким" образом, усиление РНК-полимеразной активности, индукция синтеза специфических РНК и ряда белков и ферментов под влиянием как Tg, так и Т^ является несомненным доказательством участия тире-оидных гормонов в регуляции генетической активности чувствительных к гормону клеток.

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Гарафутдинова, Елена Амировна

вывода

1. Цитоплазматическии и микросомальный рецепторы тироксина из печени крыс отличаются по количественному соотношению небелковых компонентов, что отражается на функции транслокации гормона в ядро.

2. Цитоплазматический рецептор тироксина как из печени нормальных крыс, так и из клеток саркомы MI крыс содержит нуклеиновый компонент, способный к диссоциации под действием повышающихся концентраций солей (в частности KCl ) и чувствительный к РНКазной атаке.

3. Необходимым условием для превращения цитоплазматического рецептора тироксина в форму, способную транслоцироваться в ядро, в экспериментах in vitro является комплексирование его с гормоном и удаление РНКового компонента.

4. В отличие от ГРК из цитозоля нормальной печени ГРК из цито-золя саркомы слабо взаиглодействует с ДНК и не влияет на изменение РНК-полимеразной активности изолированных ядер печени крыс.

5. В составе ядерных 30-40s РНП-частиц печени тироксинизиро-ванных крыс обнаружен тироксин связывающий белок, идентичный по антигенным детерминантам цитоплазматическому рецептору тироксина, что свидетельствует о причастности тиреоидных гормонов к посттранскрипционным модификациям гетерогенной ядерной РНК.

6. Цитоплазматические гормон-рецепторные комплексы печени и саркомы Ж крыс опосредуют внутриядерные посттранскрипционные эффекты тироксина, стимулируя ядерно-цитоплазматический транспорт новосинтезированной РНК, причем в модельных экспериментах с ядрами нормальной печени крыс эффект ГРК из саркомы Ш на 34^ превышает стимулирующее влияние цитоплазматического ГРК нормальной печени.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Наличие цитоплазматических тиронин связывающих белков, обладающих высокой специфичностью связывания, продемонстрировано во МНОГИХ органах ( Spaulaing et al., 1971; Sufi et al., 1973? Sterling et al.,1975; Hamada et al., 1976; Davis et al., 1974).

Как показано электрофорезом в ПААГе и изучением кинетики диссоциации это уникальный класс белков (Defer et al. , 1975). Однако, сравнение констант ассоциации с гормоном ядерных и цитоплазматических сайтов, преимущественное сродство цитоплазматических сайтов к Т^, а ядерных к Тд, а также неудачные попытки доказать роль цитоплазматических белков для внутриядерной локализации гормонов щитовидной железы стали причиной преобладания в литературе мнения об отсутствии генетической функции цитоплазматических Тд и Т^ -связывающих белков.

Несмотря на это имеется ряд фактов, которые трудно объяснить отвергая функциональное значение цитоплазматических рецепторов. Одним из них является отсутствие стимуляции РНК-полимеразной активности изолированных ядер и. матричной активности хроматина под действием Т^ in vitro в отсутствие цитоплазмы и наличие этих эффектов в случае хроматина, выделенного из тканей, прединкубирован-ных с гормоном (Cohen , 1970). Разрешение этих противоречий, равно как и точная оценка роли цитоплазматических Тд, Тд-связывающих белков в опосредовании генетического эффекта тиреоидных гормонов, как нам представляется, возможно только при использовании препаратов индивидуальных белков, а не цельного или частично фракционированного цитозоля, ибо только в этом случае полностью исключается влияние различных регуляторных факторов, присутствующих в цитоплазме и подавляющих истинную рецепторную функцию йодтиронинсвязывающих белков.

Успехи, достигнутые в последнее время в выделении хроматино-вого рецептора ( Latham et al. , 1978; Eberhardt et al. , 1979 a, 6) и изучение его связывающих свойств, дают все больше доказательств близкого родства между цитоплазматическим и ядерным рецептором, а также ТСПА сыворотки крови. Именно очистка хромосомального рецептора Tg позволила Baxter выдвинуть гипотезу, согласно которой в цитозоле существует "сore" -рецептор, связывающий преимущественно Т^ и имеющий больше сходства с преальбумином сыворотки, чем это считалось раньше ( Baxter et al., 1979).

Хроматиновые рецепторы Tg и Т^ не являются единственными ядерными сайтами связывания тиреоидных гормонов, так как высокоспецифическое связывание Tg и Т^ тлеется так же и в ядерном матриксе (Wilson , 1982) и в ядерных РШ-частицах, что предполагает участие тиреоидных гормонов в регуляции посттранскрипционных внутриядерных процессов ( Defer et al., 1977).

Абдукаримовым и сотр. (1977) был выделен и охарактеризован цит оплазматиче с кий рецептор Т^ из печени взрослых крыс, доказана его иммунологическая идентичность с ядерным рецептором и тироксин-связывающим преальбумином сыворотки крови ( Abdukarimov ,1983). Показано его взаимодействие с ДНК (Мучник O.E., 1978; Гулямова Т.Г., 1982), участие в процессе синтеза пре-м-РНК (Адылова А.Т., 1978). Кроме того, обнаружены также существенные отличия функциональных свойств рецепторов, выделенных из нормальных и трансформированных тканей (АрипдааноЕ A.A., 1983).

В настоящей работе, являющейся продолжением многолетних исследований лаборатории по выяснению функциональной роли цитоплазма-тического гормон-рецепторного комплекса проведена его дальнейшая структурная и функциональная характеристика.

Показано, что фракция цитоплазматического.рецептора тироксина имеет высокое отношение ^260:^280 Б спектРе поглощения и содержит в своем составе рибонуклеиновый компонент.

Наличие в цитозоле почек собак тироксин связывающего белка, обладающего большим отношением &26>0:^280 и с°ДеРжаЩего 5,16 мг пентоз на мг белка показано Katsumi Yoshida et al. (1979). По мнению авторов этот белок может вовлекаться в процесс трансляции, так как такое высокое содержание пентоз может свидетельствовать либо об обогащенности рибонуклеопротеидами, либо о наличии АДФ-рибози-лированных белков или полипептидов. Однако, дальнейшее исследование функции этого белка авторы не проводили.

РНК, обнаруженная нами в ассоциации с рецептором, гетероген-на и очевидно, быстро обменивается, поскольку радиоактивность обнаруживается в рецепторе уже через 45 минут после введения животным %-оротовой кислоты.

Аналогично цитоплазматическому рецептору стероидных гормонов, взаимодействие ТСБ с РНК является, очевидно, механизмом рефляции проникновения образованного в цитозоле тироксин-рецепторного комплекса в ядра клеток. Процесс транслокации цитоплазматического тироксин-рецепторного комплекса в ядра не зависит от температуры и усиливается при удалении из молекулы рецептора нуклеинового компо-н ента в результате обработки РНКазой в опытах in vitro. Это обстоятельство предполагает, что в условиях in vivo в механизме, регулирующем количество гормон-рецепторных комплексов »поступающих в ядра из цитоплазмы, могут принимать участие эндогенные нуклеазы, активность которых в свою очередь может контролироваться разнообразными внутри- и внеклеточными факторами. Возможно также, что существование такой многоступенчатой системы,обеспечивающей доступность внутриядерных компонентов для HPK,и являлось причиной, вследствие которой долгое время не удавалось продемонстрировать взашлодействие цитоплазматических ТСБ с ядерным генетическим аппаратом при условии использования цельного цитозоля.

Следует отметить, что взаимодействие регуляторных белков с РНК в цитоплазме клеток является весьма распространенным явлением: подобным образом контролируется синтез' 5S РНК ( Pelham et al.,

1980), комплексирование с РНК ингибирует взаимодействие с ДНК эст-рогеновых и глюкокортшгаидных рецепторных комплексов (Романов Г.А., 1982).

Таким образом, для приобретения цитоплазматическим рецептором способности транслоцироваться в ядро необходимо его комплексирование с гормоном и .диссоциация РНКового компонента.

Нами обнаружено, что состав небелковых компонентов рецептора отражается на его способности транслоцироваться в ядро. Так, комплекс с рецептором, выделенным из микросомальной фракции печени, имеющий отличное от цитозольного рецептора содержание нуклеиновых кислот и углеводов, связывается с ядрами в два раза менее эффективно, чем цитоплазматический ГРК. Это свидетельствует о различии функциональных свойств рецепторов, выделенных из различных компартментов клетки, что совпадает с идеей о множественности точек приложения тиреоидных гормонов ( Hoch, 1962).

Следующим этапом после проникновения гормон-рецепторного комплекса в ядро является его взаимодействие с ДНК, или другими компонентами хроматина, ибо только в результате такого взаимодействия может быть обеспечена избирательная активация или репрессия соответствующих генов.

Многочисленные исследования, проведенные.различными методами, показывают, что ядерные ТСБ в комплексе с гормоном, способны взаимодействовать с ДНК (Mac Leod et al.,1976; Defer, Inoue et al.,

1981). Отсутствие взаимодействия с ДНК цитозольных белков привело к установлению мнения, что взаимодействие с генетическим материалом является преимущественной функцией исключительно ядерных рецепторов.

Наши эксперименты по совместной гелъфильтрации на сефадексе Г-200 очищенного цитоплазматического тироксин-рецепторного комплекса и нативной высокополимерной ДНК печени крыс показывают, что Т^-рецепторный комплекс из цитозоля печени крыс в условиях высокого отношения белок:ДНК полностью связывается с последней.

Менее выраженное взаимодействие с ДНК рецептора- из саркомы Mj крыс, очевидно, является причиной показанного ранее отсутствия меченого гормона в метафазных хромосомах клеток Hela , несмотря на способность трансформированного рецептора проникать из цитоплазмы в ядро (Абдукаримов А. и др., 1978 б).

Рецепторы тироксина из нормальной и трансформированной тканей различаются не только по способности взаимодействовать с ДНК, но и в отношении стимуляции РНК-полимеразной активности изолированных ядер. Значительно менее выраженная стимуляция общей РНК-полимеразной активности гормон-рецепторным комплексом из саркомы ГЯ по сравнению с гормон-рецепторным комплексом из нормальной печени крыс указывает на то, что в злокачественно трансформированных тканях тироксин связывающий белок либо лишен биологической активности в регуляции транскрипции, либо его функция изменяется на противоположную, а тленно: контроль ограничения транскрипции, характерной для опухолевых клеток (Дворкин и др., 1974). Последнее предположение совпадает с представлением об участии тиреоидных гормонов в злокачественной трансформации клеток ( Borek et al. , 1982), но противоречит данным об увеличении количества ядерных рецепторов при злокачественной трансформации (Seiliti et al., 1983).

В отношении же нормальных клеток стимуляция РНК-полимеразной активности является одним из первых функциональных ответов на введение . гормона (De Groot et al., 1930).

Наличие Tg, Т^-связывающих сайтов с высоким сродством в ядерном матриксе ( Wilson et al. , 1982) и ядерных РНП-частицах ( Defer et al. , 1976) свидетельствует, что взаимодействие тиреоддных гормонов с ядром не ограничивается регуляцией ассоциированных с хроматином процессов, а очевидно, гормон-рецепторные комплексы участвуют в работе внутриядерных механизмов, контролирующих дальнейшие метаболические превращения пре-м-РНК, вплоть до ее транспорта из ядра в цитоплазму. Основанием для такого предположения являются данные, что в составе информосом пре-м-РНК проходит стадии процес-синга, сплайсинга, полиаденилирования ( сlawson et al., 1982), a также современные представления, что информосомы являются организованной формой транспорта РНК (Spirin, 1978).

В литературе в настоящее время не рассматривается вопрос об участии тиреоидных гормонов в регуляции названных выше процессов, но тлеются сведения, что под влиянием эстрогенов происходит более залетная активация выброса РНК в цитоплазму (Юдаев и др., 1974), а в более поздних работах показано участие инсулина в усилении транспорта вновь синтезированной РНК, но не в ее сплайсинге (Schümm et al. , 1981; Бару, 1983). Кроме того, в цитоплазме определен и частично охарактеризован белок, ответственный за ядерно-цитоплаз-матический транспорт РНК ( Moffet et al., 1983).

Наши данные по обнаружению в составе ядерных РНП-частиц белка, идентичного по антигенным детерминантам цитоплазматическому рецептору тироксина предполагают участие тироксина в посттранскрипционных внутриядерных процессах.

В свете различий метаболизма мРНК, ее ядерно-цитоплазматическо-го транспорта в нормальных и опухолевых тканях (Арбузов, 1980), весьма интересно сравнение участия рецепторов нормальных и трансо формированных тканей в регуляции выброса Н-РНК в цитоплазму.

Наши эксперименты по изучению in vitro ядерно-цитоплазматиq ческого транспорта вновь синтезированной Н-РНК свидетельствуют о различной степени стимуляции данного процесса в присутствии ци-топлазматических ГРК из печени нормальных крыс и саркомы Ml. При э том наибольшим стимулирующим влиянием обладает гормон-рецепторный комплекс из опухолевой ткани: его эффект на 34% превышает эффект нормального ГРК. Примечательным является также то, что свободный опухолевый рецептор также обладает, хотя и меньшей, стимулирующей активностью, а под влиянием свободного нормального рецептора не о происходит изменения транспорта Н-РНК вообще.

Таким образом, установлено участие цитоплазматических гормон-рецепторных комплексов тироксина в регуляции генетической экспрессии как на транскрипционном, так и на посттранскрипционном уровне. Однако имеется различие в функциональной значимости рецепторов из нормальных и трансформированных тканей в регуляции этих двух уровней экспрессии генов: нормальный гормон-рецепторный комплекс участвует в регуляции обоих этапов, а раковый ГРК не вызывает усиления транскрипции, но значительно больше, чем нормальный ГРК стимулирует ядерно-цитоплазматический транспорт РНК.

Проведенные нами исследования однозначно свидетельствуют об участии цитоплазматического гормон-рецепторного комплекса тироксина в регуляции внутриядерных процессов и позволяют проследить его судьбу, начиная с образования в цитоплазме чувствительных клеток гормон-рецепторного комплекса (рис. 16). Нагл представляется следующая последовательность событий:

- Т^-рецепторный комплекс активируется в результате диссоциации РНК-ового компонента и присоединения гормона и транслоцируется в ядро;

- транслоцированный комплекс взаимодействует с ДНК в составе хроматина (или другими его компонентами), при этом не исключается

Рис. 16. Клеточный цикл рецептора тироксина возможность изменения молекулы рецептора и приобретение ею новых свойств);

- стимуляция РНК-полимеразной активности и синтез новых моле-.кул пре-м-РНК;

- гормон-рецепторный комплекс вместе с синтезированной РНК переходит в состав информосом и сопутствует РНК в процессах сплайсинга, процессинга, участвуя в регуляции ее транспорта из ядра в цитоплазму;

- ГРК выходит в цитоплазму и участвует в трансляции м-РНК;

- ГРК деградируется в микросомальной фракции или подвергается рециклизации.

На каждом из этапов не исключается возможность разнообразных модификаций рецепторной молекулы, меняющей ее свойства, что позволяет ей "переключаться" с одного процесса на другой.

Вероятна также возможность, что для каждого из перечисленных этапов существует своя строго определенная в каждом случае форма рецептора, отличающаяся набором небелковых компонентов (гликозили-рование, АДФ-рибозилирование, фосфорилирование, метилирование и т.д.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гарафутдинова, Елена Амировна, 1984 год

1. Абдукаримов А., Мучник С.Е., Адылова А.Т., Туракулов Я.Х.,

2. Хамидов Д.Х. Регуляция дифференциальной активности генов гормонами. В сб. "Механизм действия гормонов", Ташкент, 1976, 31-36.

3. Абдукаримов А., Мучник С.Е., 1"уесаковский Е.Е., Хамидов Д.Х.,

4. Туракулов Я.Х. Выделение, очистка, физико-химические свойства внутриклеточного рецептора тиреоидных гормонов. Докл. АН СССР, 1977, т. 236, В 4, с. I0I5-I0I7.

5. Абдукаримов А., Адылова А., Арипдаанов А., Гулямова Т., Хамидов

6. Д.Х. Влияние Т4 на РНК-полимеразнуго активность клеток печени крыс и куриных эмбрионов. Докл. АН УзССР, 1978 а, 2, 64-67.

7. Абдукаримов А., Мучник С.Е., Арипдаанов А., Гулямова Т., Хамидов Д.Х. Роль цитоплазматического рецептора Т^ в транслокации и акцепции гормона хромосомами клеток HeLa . Докл. АН СССР, 1978 б, 243, 6-9.

8. Абдукаримов А., Шамсиева Д.М., Мучник С.Е., Арипдаанов A.A.;

9. Хамидов Д.Х. Об участии тиреоидных гормонов в регуляции генетической активности нормальных и трансформированных клеток человека. Бгалл. экспер. биол. и мед., 1979, № 7, 81-83.

10. Абдукаримов А., 1улямова Т.Г., Арипдаанов A.A., Кхан М.З.

11. Регуляция генетической активности тиреоидными гормонами. П. Специфичность взаимодействия цитоплазматического рецептора с ДНК. Проблемы эндокринологии, 1981 а, т. 27, $ 2, с. 66-70.

12. Абдукаримов А., Адылова А.Т., Кхан М.З. Регуляция генетическойактивности тиреоидными гормонами. I. Влияние очищенного цитоплазматического гормон-рецепторного комплекса на матричную активность хроматина. Проблемы эндокрин., 1981 б, т. 27, № I, с. 50-53.

13. Адылова А.Т. Влияние тироксина на биосинтез нуклеиновых кислоти некоторые аспекты механизма его действия. Дисс. канд. биол. наук, 1978, Ташкент.

14. Азимова Ш.С., Гулямова Т.Г., Абдукаримов А. 0 природе внутриклеточного рецептора тиреоидных гормонов. Проблемы эндокрин., 1982, т. 28, № 3, с. 66-68.

15. Арбузов В.А. Особенности метаболизма мРНК в опухолевых клетках. Успехи биологической химии, т. 21, 79-III, 1980.

16. Арипджанов A.A., Норматов К., Полищук О.С., Кхан М.З., Абдукаримов А. Сравнительная характеристика цитоплазматического рецептора тироксина первичной культуры фибробластов эмбриона человека и раковых клеток HeLa . ДАН УзССР, 1982, № I, с. 43-45.

17. Арипджанов A.A. Особенности взаимодействия регуляторных веществ с генетическим аппаратом нормальных и трансформированных клеток. Дисс. канд. биол. наук, 1983, Ташкент.

18. Бару В.А., Маковоз Р.К. Возрастные особенности стимуляции инсулином транспорта быстрометящейся РНК из изолированных ядер клеток печени крыс. Тезисы докладов симпозиума. Ядерные белки и экспрессия генома. Канев, 1983, стр. 37.

19. Георгиев Т.П. В кн.: "Химия и биохимия нуклеиновых кислот".1968, Л. Медицина.15. 1*удкова H.A., Сонина М.В., Шуппе Н.Г. Изучение транспорта

20. РБК из изолированных ядер культивируемых клеток джунгарс-кого хомячка. Биохимия, 1982, 47, № 3, 419-424.

21. Гулямова Т.Г., Девятов И.И., Абдукаримов А., Хамидов Д.Х.

22. Выделение и очистка цитоилазматического и ядерного рецептора тироксина аффинным методом. Докл. АН УзССР, 1979, В 2, с. 64-65.

23. Гулямова Т.Г. Природа внутриклеточного рецептора тироксинаи его возможная роль в функционировании генома. Дисс. канд. биол. наук, 1982, Ташкент.

24. Дворкин Г.А., Ефимова В.Ф., Коганицкая М.И. Исследование ядерно-цитоплазматических взаимоотношений в бесклеточной сисIтеме с изолированными ядрами клеток печени крыс. Молекулярная биология, 1974, т. 8, 78-83.

25. Зборовская И.Б., Алехина Р.П., Лихтенштейн A.B., Шалот B.C.

26. Сравнительное исследование ядерных и цитоплазматических

27. РНК клеток нормальной печени мыши, гепатомы 22А Гельштейн и печени животного-опухоленосителя. Биохимия, 1978, т.43, В 8, I516-1524.

28. Зубжицкий О.Н. Лабораторное дело, I960, № 5, стр. 8-9.

29. Коен Я.М., Пескин A.B., Бару В.Н., Федорченко В.В., Збарский

30. И.Б., Константинов A.A. Транспорт РНК из ядер клеток печени in vitro.Биохимия, 1978, т. 43, 2II5-2I29.

31. Мецлер Д Биохимия. 1980, М. "Мир".

32. Монцевючюте-Эрингене Е.В. Упрощенные математико-статистические методы в медицинской исследовательской работе. Пат. физ. и экспер. тер., 1964, т.8, № 4, с. 71-78.

33. ОДучник С.Е. Внутриклеточные тироксин связывающие белки и некоторые аспекты генотропного действия тироксина. Дисс. канд. биол. наук, Ташкент, 1978.

34. Рачев P.P., Ещенко Н.Д. Тиреоидные гормоны и субклеточныеструктуры. "Медицина", Москва, 1975.

35. Розен Б.Б. Циторецепторы и чувствительность клетки к гормонам. Мед. реферативный журнал, 1977, разд. 20, № I, с. I-I2.

36. Розет Е.Г., Тетерев Н.И., Панченко Л.Ф., Шуппе Н.Г. Освобождение новообразованной РЖ из изолированных ядер нормальной и регенерирующей печени. ДАН СССР, 1974, т. 216, $5, II88-II9I.

37. Романова H.A., Романов Т.А., Розен В.Б., Ванюшин Б.Ф. Характеристика взаимодействия дексометазон-рецепторных комплексов печени крыс с ДЖ. Биохимия, 1979, т.44, вып. 3, с. 529-542.

38. Романов Г.А. Возможная функция РЖ-связывающих белков эукариотов: блокирование доступа к РЖ взаимодействующих с ДЖ (регуляторных) белков. Биохимия, 1982, т.47, вып. 3, с. 339-342,.

39. Самарина О.П., Луканидин Е.М., Георгиев Г.П. Ядерные рибонуклеопротеиды содержащие информационную РЖ. 1У. Общий принцип структурной организации ядерных комплексов. Мо-лек. биология, вып. I, том 2, 79-88.1968

40. Спирин A.C. Спектрофотометрическое определение суммарногоколичества нуклеиновых кислот. Биохимия, 1958, 23, вып.5, 658-660.

41. Туракулов Я.Х., Мирахмедов М., Янгунаев Р. Исследование тироксин связывающих белков и тканевых йодпротеинов печени. Бюлл. экспер. биол. и мед., 1972, 12, 41-44.

42. Туракулов Я.Х., Хамидов Д.Х., Винокурова Т.И., Абдукаримов

43. A.A., Гагельганс 0 тироксинсвязывающем факторе митохондрий печени крыс. ДАН СССР, 1974, 218, 238-241.

44. Фролькис В.В., Безруков В.В., %радян Х.К. Синтез фракций

45. РНК печени крыс при однократном и многократном раздражении гипоталамуса. Вопр. мед. хим., 1978, 24, № I, с. 12-17. 35«10даев Н.А., Покровский Б.В. Сравнительное изучение действия эстрогенов и андрогенов на биосинтез РЖ в матке крыс.

46. Биохимия, 1970, № I, с. 72-79.

47. Abdukarimov A. Regulation of Genetic Activity by Thyroid Hormones. In: International Review of Cytology, 1983, supplement 15, s. 17-18.

48. Agutter P.S., McArdle H.J., McCaldin B. Factors involved ininitiation of haemoglobin synthesis can be phosphory-lated in vitro. Nature, 1976, 263, 165.

49. Appriletti J.W., Eberhardt M.L., Latham E.R., Baxter J.D.

50. Affinity chromatography of thyroid hormone receptors. Bio-specific elution from suuport matrices, characterization of the partially purified receptor. J. Biol. Chem., 1981, 256, 12094-12101.

51. Barbanel G., Assenmacher J. Effects of thyroid hormones on theontogeny of estradiol-binding sites in the rat. Mol. and Cell Endocrinol., 1982, 28, N 3, p. 247-261.

52. Baxter J.D., Charles M., Ryffel G., McCarthy В., McLeod K.

53. Proceedings of the Annual Meeting of the American Societyfor clinical investigation. Inc. Atlantic City, 1974.

54. Bernal J., Refetoff S., DcGroot L.J* Abnormalities of triiodothyronine binding to lymphocyte and fibroblast nuclei from a patient with peripheral tissue resistance to thyroid hormone action. J. Clin. Endocrinol. Metab., 1978, 47, 12661272.

55. Biro J. Some theoretical questions of mechanisms of thyroidhormone action. Med. Hypotheses, 1983, 10, N 2, 151-166.

56. Bishop J.O., Morton J.J., Rosbash M. Nature, 1974, 250, 129.

57. Blake C.C.F., Oatley S.J. Protein-DNA and protein-hormone interaction in prealbumin! a model of the thyroid hormone nuclear receptor? Nature, 1977» 268, M 5616, 115-120.

58. Borek C., Guernsey D.L., Ong A. Thyroid hormone modulates radiation and chemically induced neoplasmic transformation in vitro. Proc. Am. Assoc. Cancer. Res., 1981, 22, 1319.

59. Borek C., Guernsey D.L.r Edelman J.C. Hormones and the singlecells a relationship prerequisite for transformation. JARC Sci. Publ., 1982, N 39* 269-278.

60. Brtko J., Knopp J. Rat thymus: demonstration of specific thyroxine receptors in nuclear extract. Endocrinol, exp., 1983, 17, N 1, 3-9.

61. Charles M., Ryffel G., Obinata M., McCarty B., Baxter J.

62. Csaba G., Sudar F., Dobosy 0. Triiodothyronine receptors inlymphocytes of newborn and adult rats. Horm. Met. Res., 1977, 9, 499-501.

63. Davis P., Haudwerger B.H., Glaser P. Physical properties ofdog liver and kidney cytosol protein that binds thyroid Hormone. J. Biol. Chem., 1974, 249, 6208-6217.

64. Defer N., Dastugue B., Sabatier M.M., Thomopoulos P., Kruh J.

65. Defer N., Sabatier m.M., Kruh J., Dabauvalle M.C., Creuset C.,1.eb J. Glucocorticoid and thyroid hormone-binding to nuclear ribonucleoprotein particlei. FEBS Letters, 1977» v.76, H 2, 320-324.

66. De Groot L.J., Refetoff S., Strausser J., Barsano C. Nucleartriiodothyronine-binding proteins: partial characterisation and binding to chromatin. Proc. Nath. Acad. Sci. USA, 1974, v.71, p. 4042-4046.

67. De Groot L.J., Hill L., Rue P. Binding of nuclear triiodothyronine binding protein-T^ complex to chromatin. Endocrinology, 1976, 95, N 6, 1605-1611.

68. De Groot L.J., Torresani J., Carrayon P., Tirard P. Factorsinfluencing triodothyronine binding properties of Liver Nuclear receptors Acta endocr., 1976, 83, N 2, 293-304.

69. De Groot L., Rue P. Effect of on DNA-dependent PNA-polymerase function in rat liver nuclei. Endocrinology, 1980, 107, 1989-1996.

70. De Groot L., Rue P. Uptake of T^ -complex by liver cell nucleiin vitro. Acra Endocrinologiea, 1980, 93» 201-207.

71. Eberhardt N., Ringg, Johnson L., Latham R., Aprilettiy, Kitsis R., Baxter J. Regulation of activity of chromatin receptors for thyr. hormone: Possible involvement of hist onelike proteins. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1979 b, 76, N 10, p. 5005-5009.

72. Felding P., Eex G. Cellular origin of prealbumin in the rat.

73. Biochem. Bioph. Acta, 1982, 710, 446-449.

74. Flicinger R., Roche .?. Effects of triiodothyronine on thetranscription of deoxyribonucleic acids of different degress of redundancy in frog liver. Biochem. J., 1972, 130, 319-320.

75. Galton V. Thyroxine metaboslim in rat liver: effect of varying doses of exogenous thyroxine. Acta Endocrinol., 1975»78, 7/l4-71?.

76. Gardner R.S. Nuclear thyroid hormone receptors: evidence forassociation with nucleolar chromatin. Biocbem. Biophys. Res, Communs., 1975, v.67, N 2, 625-635.

77. Gehring V., Tomkins J.M. A new mechanism for steroid unresponsiveness : loss of nuclear binding activity of a steroid hormones Cell., 1974, v.3, p. 301-306.82.•Georgiev G.P. J. Theoret. Biol., 1969, 25, 473.

78. Georgiew G.P. In "The Cell Nucleus" Ed. Busch-N-rY-London: Acad.

79. Press, 1974, N 3, p. 67-108.

80. Gharbi-Chini J., Torressani J. High affinity ^binding topuriefied rat liver plasma membranes. Biochem. Biophys. Res, Comm., 1979, 88, 170-177.

81. Gharbi-Chini J., Torressani J. Thyroid hormone binding toplasma membrane preparation: studies in different states and tissues. J. Endocrinol. Invest., 1981, 4, 177-183.

82. Goldfine J.I)., Smith G.J., Simons C.S., Ingbar S.H., Jorgensen E.C. Activities of thyroid hormones and related compounds in an in vitro thymocyte assay. J. Biol. Chem., 1976, v. 251, 4233-4238.

83. Grady L.J., Campbell N.P. Nature, 1975, 254, 356.

84. Gribnau A., Schoenmarkers J.G., Van Kraaikamp M., Hilak M.,

85. Bloemendal H. Further studies on the ribonuclease inhibitor from rat liver: stability and other properties. Biochim. et biophys. acta, 224-, 55, 1970.

86. Griswold M.D., Coben P.P. Alteration of Deoxyribonucleic Aciddependent Ribonucleic Acid Polymerase Activités in Amphibian Liver Nuclei during Thyroxine-induced metamorphosis-J. Biol. Chem., 1972, 247, 353«

87. Griswold M.D., Coben P.P. Thyroxine-mediated control of ribonucleic acid polymerase activity in liver of Rana cates-biana. J. Biol. Chem., 1973» 248, 5854.

88. Hayashi 0., Veda Annu. Rev. Biochem., 1977, 46, 95-116. 95* Hoch F.L. Biochemical action of thyroid hormone. Physiol. Rev. 1962, 42, 605.

89. Hocman Gabriel. Gel filtration of tyroxine-binding proteins.

90. Sistematic study of rat liver. J. of Chromatography, 1973, v. 77, 439-441.

91. Horiuchi Ryuya, Cheng Sheue-Yann, Willingham Mark, Pastan1.a. Inhibition of the nuclear entry of 3,3^-triiodo-L-thyronine by monodansylcadaverine in GH^ cells. J. Biol. Chem., 1982, 257, N 6, 5159-5144.

92. Hulbert A.J. The Thyroid hormones: a thesis concerning theiraction. J. Theor. Biol., 1978, 75, N 1, 81-100.

93. Hutchens T., William Markland Francis S., Hawkins Edward F.

94. RNA induced reversal of glucocorticoid receptor activation. Biochem. and Biophys. Res. Commun., 105, N 1, 20-2?, 1982.

95. Jothy S., Bilodeau J., Champsaur H., Simpkins H. The earlyenhancement of rat liver deoxyribonucleic acid-dependent ribonucleic acid polymerase 2 activity by triiodothyronine. Biochem. J., 1975, 150, 133.

96. Jump D.B., Oppenhiemer J. Thyroid hormone receptor-containing fragment released from chromatin by deoxyribonuclease I and micrococcal nuclease. Science, 1980, v.209» p.811-813.

97. Jump D.B., Mariash C.N., Oppenheimer J.H., Conlonhollingshead C., Munro H. Evidence for post-transcriptional effects of T^ on Hepatic ferritin syntesis. Bioch. Bioph. Res. Comm., 1982, N 2, 29.

98. Jnoue A., Nakagawa K., Morisawa S. Effect on DNA of thyroidhormone binding by specific receptor proteins from rat liver nuclei. Eur. J. Biochem., 1981, 114, 509.

99. Kanda Y., Goodman De.W., Canfield R., Morgan F. The aminoacid sequence of human plasma prealbumin. J. Biol. Chem., 1974, 249, 6796-6805»

100. Kistler A., Yosbizato K., Frieden Binding of thyroxineand triiodothyronine by nuclei of isolated tadpole liver cell. Endocrinology, 1975, 97, 1036-1042.

101. Klaude M., DeCken A. Transcription activity of liver chromatin after administration of dimethylnitrosamine to mice. Von der. "Hoppe-Scylerts Z. Physiol. Chem., 1982, 363, N 9, 929.

102. Latham K., Ring J., Baxter J. Solubilized nuclear receptorsfor thyroid hormones: physical characteristics and binding properties, evidence of multiple forms. J. Biol. Chem., 1976, 251, 7388-7397.

103. Latham K., Mac Leod K., Papavasiliou S., Martial J., Seeburg

104. P., Goodman H., Baxter J. Regulation of gene expression by thyroid hormones. Receptors and Hormone action, v. Ill Acad. Press, 1978, 76-102.

105. Latham K.R., Apriletti J.W., Eberhardt N.L., Baxter J.D.

106. Lievendahl R. Intracellular thyroxine binding proteins inrabbit muscle and liver. J. Chromatogr., 1974, 92, 119123.'

107. Mac Leod K., Baxter J.D. Chromatin receptors for thyroidhormones. Interactions of the solublized proteins with DNA. J. Biol. Chem., 1976, 251, 7380-7387.

108. Mariash C.N., Oppenheimer J.H. Interrelationship of triiodothyronine concentration, metabolism, protein binding and nuclear accupance in the induction of malic enzyme by cultured adult rat hepatocytes. Endocrinology, 1983, 112, N 1, 80-85.

109. Martial J., Seeburg P., Baxter J., Goodman H. Regulation ofgrowth hormone mRNA by thyroid and glucocorticoid hormones. Proc. Nath. Acad. Sci. USA, 1977(a), 74, 1816-1820.

110. Martial J., Seeburg P., Guensic D., Goodman H., Baxter J.

111. Regulation of growth hormone gene expression: synergistic effects of thyroid and glucocorticoid hormones. Proc. Nath Acad. Sci. USA, 1977(b), 74, 4293-4295«

112. McCain T.A., Hausler M.R., Okrent D., Hughes M.R. Partialpurification of the chick intestinal receptor for 1.25-dihydroxyvitamin D by ion exhcange and blue dextransepha-rose chromatography. FEBS Letters, 1978, 86, 65-70.

113. Moffett R., Brucc, Webb Tomas E. Characterization of messenger RNA transport protein. BBA, 1983, 740, N 3, 231-242.

114. Munch A., Wira C., Young D.A., Mosher K.M., Hallahan C.,

115. Bell P.A. Glucocorticoid-receptor complexes and the earliest steps in the action of glucocorticoids on thymus cells. J. Steroid Biochem., 1972, v.3, p. 567-578.

116. Navab M., Smith J., Goodman D. Rat plasma prealbumin. Metabolic studies on effect of vitamin A status and on tissue distribution. J. Biol. Chem., 1977, 252, 5107-5114.

117. Nikodem Vera, Trus Benes L., Rail J. Two-dimensional gel analyses of rat liver nuclear proteins after thyroidectomy and thyroid hormone treatment. Proc. Nath Acad. Sci. USA Biol. Sci., 1981, 78, 4411-4415.

118. Ohno S. Simplicity of mammalian regulatory systems inferredby single gene determination of sex phenotypes. Nature, 1971, v. 234-, p. 134-138.

119. Ouchterlony 0. Gel-diffusion techigues. Ins Immunochemic. 15«

120. Colloquim Gas. Physiol Chem. Springer, Berlin, Heidelberg, New-York, 1965, p. 13-35.

121. Pelham H.R.B., Brown D.D, A specific transcription factorthat can bind either the 5S RNA gene or 5S RNA. Proc. Nat. Acad. USA, 77, 4170-4174.

122. Perry R.P., Kelley D.E. J. Mol. Biol., 1973, 79, 681.

123. Pliam N.B., Goldfine J.D. High affinity thyroid hormone binding sites on purified rat plasma membranes. Biochem. Bio-phys. Res. Comm., 1977, 79, 166.

124. Rao G.E., Eckel J., Rao M., Breuer H. Uptake of thyroid hormone by isolated rat liver cells. Biochem. Biophys. Res. Comm., 1976, 73, 98-102.

125. Ring J.C., Latham R.R., Baxter J.D. Program 57th Annu. Meet.

126. Endocrine Soc. Endocrinology, 1975* v.96, Suppl. 117.

127. Ryffel G.U. Comparison of cytoplasmic and nuclear poly(A)-containing RNA sequences in Xenopus liver cells. Eur. J. Biochem., 1976, 62, 417-423.

128. Schümm D.e., Webb T.E. The in vivo equivalence of a cell-freesystem for RNA processing and transport. Biochem. Biophys. Res. Comm., 1974, 58, 354-360.

129. Schümm. D.E., Webb T.e. Differential effect of ATP on RNA and

130. DNA Release from nuclei of normal and neoplastic liver. Biochem. and Biophys. Res. Communs, 1975, v.67, p. 706-713.

131. Sellitti Donald F., Tseng Yuch-Chu L., Latham Keith R. Nuclear thyroid hormone receptors in C3H/HeN mouse mammary glands and spontaneous tumors. Cancer. Res., 1983, 43, N3, 1030-1038.

132. Silva E., Astier H., Thakare U, Schwartz H., Oppenheimer J.

133. Partial purification of the triiodothyronine receptor from rat liver nuclei. J. Biol. Chem., 1977, 292, N 19, 6799-6805

134. Smith M.J., Hough B.R., Chamberlin M.E., Davidson E.H. Repetitive and. non-repetitive sequence in Sea Urchin heterogeneous nuclear RNA. J. Mol. Biol., 1974-, 85, 105-126.

135. Smucler E., Tata J. Changes in hepatic nuclear DNA-dependent

136. RNA-polymerase caosed by growth hormone and.triiodothyroni-ne. Nature, 1971, 254, 57-59.

137. Sokoloff L., Francis C.M., Cambell P.L. Proc. Nat. Acad. Sci.1. USA, 1964, 52, 728.

138. Spindler В., MacLeod K., Ring J., Baxter J. Thyroid hormonereceptors. Binding characteristics and lack of hormonal dependency for nuclear localization. J. Biol. Chem.,1975, 250, 4115-4119.

139. Spindler S.R., Mellon S.H., Baxter J.D. Growth hormone genetranscription is regulated by thyroid and glucocorticoid hormones in cultured rat pituitary tumor cells. J. Biol. Chem., 257, N 19, 11627-11652.

140. Spirin A.S. Eucariotic messenger RNA an,d informosomes. Omniamea mecum porto. FEBS Lett., 1978, 88, p. 15-17»

141. Sterling M.J., Milch P.O. Thyroid hormone binding by a component of mitochondrial membrane. Proc. Nat. Acad. Sci. USA, 1975, 72, 5225-5229.

142. Sterling K., Lazarus J., Milch P., Sakurada F., Brenner M.

143. Mitochondrial thyroid hormone receptors: localization andphysiological significance. Science, 1978, 201, 1126.

144. Sufi S.B., Toccafondi R.S., Malan P.G., Ekins R.P. Bindingof thyroid hormones to a soluble fraction from porcine anterior pituitary. J. Endocrinology, 1973, v.58, H 1, 41-52.

145. Surks M.J., Koerner D.H., Oppenheimer J.H. In vitro bindingof L-triiodothyronine to receptors in rat liver nuclei. Kinetics of binding extraction properties and lack of requirement for cytosol proteins. J. Clin. Invest. 55, 50-60,1975.

146. Tata J.R., Widnell C.C. Ribonucleic Acid Synthesis duringthe Early Action of Thyroid Hormones. Biochem. J., 1966, 98, 604.

147. Thomson L.R., McCarthy B.J. Stimulation of nuclear DNA and

148. RNA synthesis by cytoplasmic extracts in vitro. Bioch. Biophys. Res. Communs, 30, 2, 166, 1968.

149. Tishler P., Hammond M. Studies on the mechanism of inductionof mitochondrial L-glycerophosphate dehydrogenase by thyroid hormone. The role of different gene activation. Enzyme, 1975, 20, 349-359.

150. Toccafondi P., Sufi S. Thyroid hormone binding to anteriorpituitary gland. Horm. Met. Res., 1973, 5, 62.

151. Webb T.E., Schumm D.E. Insulin-modulated transport of RNA fromisolated liver nuclei. Arch. Biochem. and Biophys., 1981, v.210, N 1, 275-279.

152. Webster R.A., Pikler G.M., Spelsberg T.C. Nuclear binding ofprogesterone in hen oviduct. Role of acidic chromatin proteins in high-affinity binding. Biochem. J., 1975, 156, 409-418.

153. Widnell C.C., Tata J.R. Stimulation of nuclear RNA polymerase activity during the latent period of action of thyroid hormones. Bioch. Biophys. Acta, 1963, 72, 506.

154. Widnell C.C., Tata J.R. Studies on the stimulation by ammoniumsulfate of the DNA-dependent RNA-polymerase by isolated Rat-Liver nuclei. Bioch. Bioph. acta, 1966, 123, 478.

155. Williams L., Lefkowitz R, Thyroid hormone regulation of adrenergetic receptor number. J. Biol. Chem., 1977, 252, 27872789.

156. Wilson D., Gorewit R. Specific thyroxine receptors in mammary cytosol from casttle. Bioch. Bioph. Res. Comm.,1980, 95, 807-815.

157. Wilson B.D., Albrecht C.F., Wium Cherylymr A. The specificbinding of the thyroid hormones to matrix isolated from rat liver nuclei. S. Afr. Med. J., 1982, 81, N 2, 44-49.

158. Wyatt G., Tata J.R. Hybridization capacity of RNA producedduring hormone activity. Biochem. J., 1968, 109, 255-257.

159. Yoshida K., Davis P., Schoenl M. Dissociable and non-dissociable cytoplasmic protein-thyroid hormone interactions. Bioch. Biophys. Acta, 1979, 582, p. 552-545.

160. Yoshizato K., Kistler A., Frieden E. Binding of thyroid hormones by nuclei of cells from bullfrog tadpole tail fins. Endocrinology, 1975, 97, 1050-1035.