Исследование особенностей элементарного механохимического процесса и его регуляции в мышце тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.02, кандидат физико-математических наук Сонькин, Борис Яковлевич

• Сонькин, Борис Яковлевич
• кандидат физико-математических наук
• 1983

Оглавление диссертации кандидат физико-математических наук Сонькин, Борис Яковлевич

Введение

Глава I, Обзор- литературы.

X-I. Предполагаемый кинетический механизм механохимического цикла мостика

1-2. Регуляция работы миозиновых мостиков в сократительной системе мышцы.

Глава 2. Методики.«

Глава 3. Исследование элементарного механохимичес-кого процесса в мышце с помощью ванадата

- аналога неорганического фосфата

3-1. Взаимодействие ванадата с сократительной системой в активном, релаксированном и ригорном состояниях

3-2. Обсуждение результатов

Глава 4. Исследование некоторых аспектов кальциевой регуляции механохимического процесса в мышце

4-1. Исследование роли структурной подвижности актина в механизме кальциевой регуляции с помощью фаллотоксинов.

4-I-I. Изучение действия фаллотоксинов на механику сокращения волокон при разных степенях активации

4-1-2. Исследование влияния фаллотоксинов на конформацию актина в теневых волокнах

4-1-3. Исследование влияния фаллоидина на белковый состав миофибрилл.

4-М. Исследование взаимодействия волокон с флуоресцентными аналогами фаллоидина

4-2. Исследование механизма кальциевой активации с помощью ванадата

4-3. Обсуждение результатов

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Исследование особенностей элементарного механохимического процесса и его регуляции в мышце»

Мышечное сокращение происходит при совершении работы белковым комплексом за счет энергии катализируемой им реакции С*5? 37 Элементарным процессом в этом преобразовании энергии считается механо'химический цикл миозинового мостика, в ходе которого происходит гидролиз АТФ и механические превращения: присоединение АТФ вызывает диссоциацию мостика, после чего некоторые миозиновые комплексы, содержащие связанный субстрат или продукты реакции, вновь взаимодействует с актином и в ходе следующих за этим процессом реакций выхода продуктов мостик развивает силу. Предполагается, что сила развивается при десорбции фосфата, поскольку этот процесс происходит с уменьшением свободной энергии системы. Однако в настоящее время связь разных стадий гидролиза АТФ с разными стадиями механического цикла мостика нельзя считать установленной. Остается неясным, взаимодействие каких именно миозиновых комплексов с тонкой нитью необходимо для хемоыеханического преобразования энергии. Неизвестен и механизм освобождения фосфата из актомиозинового комплекса. По-видимому, это многостадийный процесс и роль разных его стадий в генерации силы неизвестна.

Запуск сокращения в поперечно-полосатых мышцах осуществляется ионами кальция, которые, соединяясь с тропонин-тропоми-озиновым комплексом тонких нитей, вызывает в них изменения, позволяющие миозиновым мостикам взаимодействовать с актином.,Однако механизм активации мостиков кальцием остается неясным. Первоначально предполагалось, что в процессе регуляции актин является пассивным участником, а кальций сдвигает тропомиозин, открывая центры взаимодействия с миозином. Однако существует ряд данных, указывающих на наличие конформационных изменений в актине в процессе кальциевой регуляции. Креме того, увеличение концентрации Са^+ приводит не только к росту числа работающих мостиков, но и к изменению их кинетических свойств. Это позволило сделать вывод о существовании в сократительной системе двух способов активации, хотя их механизм не изучен.

Таким образом, следующие вопросы кажутся важными для выяснения молекулярных механизмов функционирования сократительной системы:

1. Исследование роли отдельных стадий - промежуточных состояний ферментативного комплекса в ходе гидролиза АТФ в механо-химическом процессе.

2. Изучение разных способов регуляции ионами кальция элементарного механохимического процесса в сократительной системе.

С целью выяснения стадий биохимического цикла, связанных с генерацией силы, в настоящей работе исследовано влияние вана-дата (VH) - аналога неорганического фосфата (Фн) - на механику мышечного сокращения. В растворах мышечных белков в присутствии ванадата образуется стабильный биохимический аналог долгоживу-щего миозин-продуктного комплекса . Проведенное исследование взаимодействия ванадата с сократительной системой в активном, расслабленном и ригорном состояниях подтвердило существовавший в литературе вывод C^J» что ингибирование силы и ригорактивированной мышцы определяется диссоциирующим действием ванадата на актомиозин вследствие образования стабильного комплекса М-АДФ-VH. Кроме того, наши результаты показали, что взаимодействие этого комплекса с тонкой нитью не приводит к развитию силы, хотя при этом происходит десорбция ванадата. Таким образом, эти эксперименты не подтвердили распространенную точку зрения, что сила генерируется в ходе реакций, следующих за присоединением долгоживущего миозин-продуктного комплекса к тонкой нити. Показано также, что ванадат включается в сократительную систему только в ходе АТФ-азного цикла и не действует (за сравнимое время) на механические свойства мостиков, уже развивших силу (ригорных мостиков и их комплексов с АДФ или /,У-имидо-АТФ), что согласуется с литературными данными для мышц насекомых На основании этих результатов предполагается, что выход фосфата в механохимическом цикле предшествует развитию силы.'

С целью изучения механизма Са -регуляции сократительной системы в настоящей работе были применены ванадат и фаллоидин - вещество, повышающее структурную стабильность фибриллярного актина. Исследовано их влияние на зависимость механических свойств волокон (изометрического натяжения и параметров релаксационных спектров при изменении длины) от концентрации Са?+. Показано, что влияние этих веществ на изометрическое натяжение зависит от рСа. Кроме того, оба воздействия приводят к резкому изменению зависимости релаксационных свойств волокон от степени активации. В рамках представлений о двух способах активации C^J эти данные интерпретированы как ингибирование 1-ого способа регуляции, который у контрольных волокон возникает при малых степенях активации.

Предполагается, что этот эффект ванадата обусловлен его более сильным диссоциирующим действием на мостики, включенные 1-ым способом. Такой механизм может служить объяснением известного факта повышения константы скорости запаздывающего натяжения под влиянием ванадата [ЗД, поскольку включенные 1-ым способом мостики имели относительно малую величину этой константы.

Показано, что ванадат смещает стационарную кривую "сила-рСа" в область более низких значений рСа. Этот сдвиг, по-видимому, отражает уменьшение константы связывания кальция с тонкими нитями при уменьшении числа прочно связанных с актином миозиновых комплексов.

Обнаружено, что при возрастающей ступенчатой активации волокон в области низких концентраций Са2+ в присутствии вала дата наблюдается развитие переходных натяжений, значительно превышающих стационарные значения. Такая кинетика развития силы привела к предположению, что не все мостики могут последовательно активироваться при низких степенях активации.

Исчезновение 1-ого способа включения мостиков под влиянием фаллоидина рассматривается как указание на необходимость большей структурной подвижности актина для этого типа регуляции.

Исследование свойств волокон с выключенным 1-ым типом регуляции показало, что представление о двух способах включения мостиков недостаточно для объяснения изменений кинетических свойств волокон в ходе Са^+-активации.

Заключение диссертации по теме «Биофизика», Сонькин, Борис Яковлевич

выводы

1. Показано, что ванадат - высокоспецифичный по отношению к активному центру миозина - аналог неорганического фосфата включается в сократительную систему только в ходе АТФ-азного цикла. Образовавшийся ванадатный комплекс, очень устойчивый в отсутствие взаимодействия с актином, при взаимодействии с актином распадается.

2. Показано, что ванадат не включается в сократительную систему релаксированной мышцы и не оказывает влияния на сократительную систему ригорной мышцы, а также ригорных комплексов с АДФ и ^,<!Г-имидо-АТФ.

3. Результаты исследований влияния ванадата на механические свойства волокон подтверждают существовавшее в литературе предположение об образовании в сократительной системе комплекса ванадата с миозином, который является очень стабильным биохимическим аналогом долгоживущего миозин-продуктного комплекса, и о наличии различных комплексов АМ-АДФ в мышце.

Сделан вывод, что при достаточно низких концентрациях ванадат может быть использован как метка миозиновых мостиков, взаимодействовавших с тонкой нитью в ходе АТФ-азного цикла в присутствии ванадата.

5. Взаимодействие миозин-ванадатного комплекса с тонкой нитью не приводит к развитию силы. Таким образом, наше исследование не подтверждает точку зрения, согласно которой сила развивается в ходе реакций, следующих за присоединением долгоживущего миозин-продуктного комплекса к тонкой нити.

6. Обнаружено, что сократительная система т.рмъъ кролика, характеризующаяся разным соотношением двух типов регуляции (с разными кинетическими свойствами элементарного цикла) при разных степенях активации кальцием, под влиянием фаллоидина и ванадата становится системой только со вторым типом регуляции, проявляющемся обычно при высоких степенях активации.

7. Действие фаллоидина сопровождается его очень прочным связыванием с тонкими нитями и стабилизацией структуры Ф-актина. Поэтому предполагается, что первый тип регуляции требует относительно большей подвижности актина.

8. Исследование кинетики переходных процессов при ступенчатой Са^+-активации в присутствии ванадата привело к выводу, что при низких степенях активации не все миозиновые мостики могут последовательно активироваться.

9. Показано, что под влиянием ванадата стационарная характеристика "сила-рСа" смещается в область меньших рСа. Этот сдвиг, по-видимому, отражает уменьшение константы связывания Са^+ с тонкими нитями при уменьшении числа прочно связанных с актином миозиновых комплексов.

10. Исследование систем с выключенным первым типом регуляции показало, что второй тип регуляции также не является элементарным и, следовательно, представление о двух типах регуляции является недостаточным для описания механизма Са^+-активации.

11. Показано, что использование флуоресцентных аналогов фаллоидина является новым полезным методом визуализации актин-содер-жащих структур саркомера.

В заключение я хочу выразить благодарность моим руководителям Симону Эльевичу Шнолю и Анне Евгеньевне Букатиной за предложение работать в этом направлении, за постоянную поддержку и помощь на всех этапах работы,

Ш.И. Барилко и сотрудникам его лаборатории в НЙВЦ АН СССР за высококвалифицированную помощь в создании и эксплуатации измерительно-вычислительной части экспериментальной установки на базе мини-ЭВМ Электроника-60 и магнитно-ленточной системы, Т. Виланду (Институт Макса Планка, ФРГ) за любезное предоставление фаллотоксинов, синтезированных в его лаборатории; М.Е. Саксон за предоставление флуоресцеинфаллоидина; Е.П. Четвериковой за предоставление препарата креатинкиназы; А.Г. По-горелову за проведение квалифицированной оценки примеси фаллоидина в детиофаллоидине.

Особую признательность выражаю Н.Н. Торбиной за неоценимую помощь в постановке экспериментов.

С большой благодарностью отмечаю творческую и доброжелательную атмосферу в лаборатории физической биохимии, в которой выполнена эта работа.

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Эта работа посвящена исследованию связи отдельных стадий гидролиза АТФ с механическими стадиями элементарного механо-химического процесса в мышце и путей регуляции активности мостиков.

Особое внимание уделено изучению стадии генерации силы. В течение многих лет было общепринято, что сила в мышце возникает в результате реакций, следующих за присоединением дол-гоживущего миозин-продуктного интермедиата (М-АДФ-Фд) к акти-новой нити, в основном при десорбции неорганического фосфата, хотя кинетическая схема выхода продуктов из актомиозинового комплекса была неизвестна. Однако в последние годы стали развиваться представления, согласно которым с актином могут взаимодействовать также предшествующие стабильному миозин-продук-тному интермедиату миозин-субстратные и миозин-продуктные комплексы.

В нашей работе для исследования роли разных промежуточных состояний миозина в механохимическом цикле был применен ванадат, который образует с миозином и АДФ стабильный биохимический аналог долгоживущего миозин-продуктного интермедиата. Согласно полученным нами данным комплекс с ванадатом не является меха-нохимичеким аналогом миозинового интермедиата, после взаимодействия которого с актиновой нитью развивается сила. Это могло бы указывать, что глвный путь реакции в механохимическом цикле идет через взаимодействие с тонкой нитью предшествующих долго-живущему миозин-лродуктному интермедиату состояний миозина. Однако, возможно этот факт просто отражает различие механохими-ческих свойств комплексов М-АДФ-\/„ и М-АДФ-Ф„.

Поскольку ванадат оказывает релаксирующее действие на активированное волокно, включаясь в сократительную систему в ходе АТФ-азного цикла, и совершенно не действует на комплекс ригор-ных мостиков с АДФ, т.е. мостики уже развившие силу, предполагается, что выход неорганического фосфата в активированной мышце происходит до развития силы.

В исследовании механизма активации мышцы основное внимание уделено особенностям двух способов Са^+-активации сокращения, заключение о существовании которых возникло в литературе в связи с тем, что при разных рСа сила в мышце поддерживается мостиками с разными кинетическими свойствами. Однако молекулярные механизмы, приводящие к появлению разных способов активации остаются неясными. Возможны несколько предположений о причинах возникновения различных способов активации. Два способа могут различаться числом связанных ионов кальция в регуляторных комплексах функциональных единиц, наличием связанных мостиков, так как некоторые из них сами могут поддерживать включенное состояние функциональных единиц, не содержащих кальций, или изменять кинетику взаимодействия миозина с содержащими кальций функциональными единицами ("потенциация" актина), -существованием различных состояний соседних функциональных единиц. Нельзя также исключить изменения состояния миозина в зависимости от концентрации Са~+.

В нашей работе показано, что 1-ый способ включения, который является основным при высоких рСа, исчезает при действии стабилизирующих структуру Ф-актина фаллотоксинов или под влиянием ванадата, вызывающего диссоциацию мостиков в активной мышце. Тот факт, что 2-ой способ активации, обычно характерный для низких величин рСа, когда мышца развивает значительную силу, сохраняется даже при очень малых силах (и малом числе замкнутых мостиков) в присутствии ванадата или фаллоидина, говорит о том, что по-тенциацин актина не существенна для появления 2-ого способа включения. В то же время важная роль ригор-активации в механизме 1-ого способа включения не может быть исключена. Кроме того, реализация 1-ого способа включения требует, по-видимому, относительно большей структурной подвижности актина. Благодаря большей структурной подвижности актина при малом содержании кальция в тонкой нити может происходить включение отдельных глобул в пределах функциональной единицы. Это означает, что включенные глобулы будут доступны не для всех миозиновых мостиков, что согласуется с результатами экспериментов по включению ванадата в активированную мышцу.

Проведенные исследования показали недостаточность представления о двух способах регуляции для объяснения изменений в сократительной системе по мере ее активации.

Результаты экспериментов с применением ванадата позволяют сделать вывод, что ванадат можно рассматривать как метку взаимодействовавших с актином мостиков. Это может быть полезным в изучении возникновения и распространения активации в сократительной системе саркомера.

Для выяснения механизма действия фаллоидина в этой работе применен метод исследования флуоресценции волокон после окраски их флуоресцентными аналогами фаллоидина. Из представленных результатов видно, что этот метод, по-видимому, может быть широко использован в дальнейшем для исследования структурной организации саркомера и ее изменений при сокращении мышцы.

Список литературы диссертационного исследования кандидат физико-математических наук Сонькин, Борис Яковлевич, 1983 год

1. Беядолл Дк. Мышцы, молекулы и движение. М.:Мир,1970 - 256 с.

2. Букатина А.Е.Морозов В.Н. Влияние фаллоидина на сократительные свойства глицеринизированных скелетных мышц позвоночных.- Биофизика,1979,т.24,с.509-512.

3. Букатина А.Е.,Морозов В.Н. Применение фаллоидина для исследования регуляторных процессов в актоыиозиновых системах. -Тезисы докладов III Всесоюзной конференции по биохимии мышц, М.: Наука,1978,с.38.

4. Букатина А.Е.,Чаплий М.Ф.,Алиевская Л.Л. Влияние кальция на временные характеристики мышечного сокращения. Биофизика, 1981,т.26,с.749-751.

5. Дещеревский В.И. Математические модели мышечного сокращения.- М.:Наука,1977 160 с.

6. Иоффе В.А.,Боровиков Ю.С.,Барский И.Я.,Розанов Ю.М. Двухка-нальный поляризационный микрофлуориметр. Цитология,1974, T.I6,c.II2-II6.

7. Карнаухов В.Н.,Яшин В.А. Спектральные исследования морского микропланктона. Пущино, 1980 - 60 с. (Препринт).

8. Леднев В.В. Природа запрещенных меридиональных рефлексов на рентгенограммах актинсодержащих нитей. Докл. АН СССР,1975, т.225,с.1430-1433.

9. Леднев В.В. Некоторые аспекты регуляции мышечного сокращения. В сб. Структурные основы и регуляция биологической подвижности. - М.:Наука,1980,с.221-270.

10. Поглазов Б.Ф.,Левицкий Д.и. Миозин и биологическая подвижность. М.:Наука,1982,с.84-91.

11. Фром А.А.,Скобелев Л.И.,Русанов В.М.,Никитенко А,А. Белки плазмы и их фракционирование в производстве препаратов крови, -М.:Медицина,1974,с.48-50.

12. Энгельгардт В.А. Мышечные белки и функция мышцы. У конференция по высокомолекулярным соединениям. Совещание по белку. Москва,1947. М.Издательство АН СССР,1948,с.122-145.

13. Abbott R.H. An interpretation of effects of fiber length and calcium on the mechanical properties of insect flight muscle. -Cold.Spring Harbor Symp.Quant.Biol.,1973,v.37,p.647-654.

14. AbbottR.H. The effects of fibre length and calcium concentration on the dynamic response of glycerol extracted insect fibrillar muscle.-J.Physiol.,1973,v.231,p.195-208.

15. Abbott R.H.,Steiger G.J. Temperature and amplitude dependence of tension transients in dlycerinated sceletal and insect fibrillar muscle.-J.Physiol.,1977,v.266,p.13-42.

16. Adelstein R.S.,Eisenberg E. Regulation and kinetics of the actin-myosin-ATP interaction.-Ann.Rev.Biochem.,1980,v.49, p.921-956.

17. Bagshow C.R.,Trentham D.R. The characterisation of myosin-product complexes and prodyct release steps.-Biochem.J., 1974,v.141,p.331-349.

18. Beinbrech C.,Kuhn H.J.,Herzig J.W.,RueggJ.G. Evidence for two attached myosin cross-bridge states of different potential energy.-Cytobiologie,1976,v.12,p.38 5-396.

19. Borovikov Yu.S.,Levitskii D.I.,Kirillina V.P.,Poglasov B.F. Effect of Ca2+ binding to S,S'-dithiobis(2-nitrobenzoic acid) light chains on conformational changes of F-actin caused by myosin subfragment-1. Eur.J.Biochem.,1982,v.125» p.343-347.

20. Brandt P.W.,Cox R.K., Kawai M. Can the binding of Ca2+ to two regulatory sites on troponin-C determine the steep pCa/tension relation of skeletal muscle? Proc.Hatl.Acad. Sci.USA,1980,v.77,p.4717-4720.

21. Brandt P.W.,Cox R.N.,Kawai M.,Robinson !D. Regulation of tension in skinned muscle fibers.(Effect of Cross-bridge kinetics on apparent Ca2+ sensitivity). J.Gen.Physiol.,1982, v.79.p.997-1016.

22. Bremel R.D.,Weber A. Cooperative behaviour within the functional unit of the actin filament in vertebrate skeletal muscle. Nature New Biol.,1972,v.238,p.97-101.

23. Bremel R.D.,Weber A. Calcium binding to rabbit skeletal myosin under physiological conditions. Biochim.Biophys.Acta, 1975,v.376,p.366-374.2+

24. Brenner B. Effect of free sarcoplasmic Ca concentration on maximum unloaded shortening velocity. J.Huscle res.Cell Mot.,1980,v.1,p.409-428.

25. Brenner B.,Schoenberg M.,Chalovich J.,Greene L.,Eisenberg E. Characterization of the "rapid stiffness" of relaxed skinned rabbit psoas muscle fibers. Bioph.J.,1982,v.37,p.106a (Abstr.M-PM-D3).

26. Borejdo J.,Werber M.K. Binding of calcium and magnesium to myosin in skeletal muscle. Biochem.,1982,v.21,p.549-555»

27. Bucatina A.E.,Morosov Y.N. Effect of falloidin on the unsteady kinetics of muscle contraction. In Energy transport, protein synthesis, and hormonal control of heart metabolism. 1Ш Publication No80-2017,1980,p.137-145.

28. Chalovich J.M.,Chock P.B.,Eisenberg E, Mechanism of actionof troponin-tropomyosin, inhibition if actomyosjn ATP-ase activity without inhibition of myosin binding to actin. J. Biol.Ghem.,1981,v.256,p.575-578.

29. Deshcherevsky V.I. Kinetic model of regulation of muscle protein activity. J.Theor.Biol.,1977,v.64,p.517-534.

30. Be Vries J.X.,Schafer A.J.,Faulstich H.,Wieland Th. Protection of actin from heat denaturation by various phallotoxins.- "Hoppe-Seyler*s Z.Physiol.Chem.",1976,v.357,p.1139-1143.

31. Ebashi S. Calcium binding and relaxation in actomyosin system. J.Biochem.,1960,v.48,p.150-151.

32. Ebashi S.,Endo M.,Ohtsuki I. Control of muscle contraction.- Quart.Rev.Biophys., 19 69, v. 2, p.351-384.

33. Eisenberg E.,Green I.E. The relation on muscle biochemistry to muscle physiology. Aim.Rev.Physiol.,1980,v.42,p.293-309.

34. Eisenberg E.,Hill T.L.,Yi-der Chen. Cross-bridge model of muscle contraction. Quantitativy analysis. Biophys.J., 1980,v.29,p.195-227.

35. Eisenberg E.,ICielley W.Y/. Evidence for a refractory state of heavy meromyosin and subfragment-1 unable to bind to actin in the presence of ATP. Cold.Spring Harbor Symp.Quant. Biol.,1973,v.37,p.145-152.

36. Engelhardt V.A. ,I>ubimova M.H. Myisin and adenosine triphosphatase. Uature,1939,v.144,^3650,p.668-669.

37. Fabiato A.,Fabiato F. Calculator programme for computing the composition of solutions containing multiple metals and ligands used for experiment in skinned muscle cells,- J, Physiol.,Paris,1979,v.75,p.463-505.

38. Faulstich H.,Schafer A.J.,Wechauf H, She dissociation of the phalloidin-actin complex.-Hoppe-Seyler*s Z.physiol.Chem. 1977,v.358,p.181-184.

39. Haselgrove J.C. X-ray evidence for a conformational change in the actin containing filaments of vertebrate striated muscle. Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.,1973»v.37» p.341-352.

40. Herzig J.\Y.,Peterson J.W.,Ruegg J.C.,Solaro B.J. Vanadate and phosphate ions reduce tension and increase cross-bridge kinetics in chemically skinned heart muscle. Biochiia. Biophys.Acta,1981,v.672,p.191-196.

41. Huxley A.P. Muscle structure and theories of contraction. Prog.Biophys.Chem.,1957,v.7,p.225-318.

42. Huxley A.F.,Simmons R.M. Mechanical properties of the cross-bridges of frog striated muscle. J.Physiol.,1971, v.218,59P.

43. Huxley A.P.,Simmons R.M. Proposed mechanism of force generation in striated muscle. Hature,1971,v.233,p.533-538.

44. Huxley A.P.,Simmons R.LI. Mechanical transients and the origin of muscular force. Gold Spring.Harb.Symp.Quant, Biol.,1973,v.37,p.669-680.

45. Huxley H.E. Structural changes in the actin- and myosin--containing filament during contraction. Cold.Spring. Harbor Symp.Quant.Biol.,1973,v.37,p.361-376.

46. Jewell B.R.,Ruegg J.C. Oscillatory contraction of insect fibrillar muscle after glycerol extraction.- Proc.Roy.Soc. London,1966,v.B164,p.428-459.

47. Julian P.J. The effect of calcium on the force-velocity relation of brifely glycerinated frog muscle fibres. -J.Physiol.,1971,v.218,p.117-145.

48. Julian P.J.,Moss R.L. Effects of calcium and ionic strength on shortening velocity and tension development in frog skinned muscle fibres. J.Physiol.,1981,v.311,p.179-199.

49. Julian P.J.,Sollins K.R.,Sollins EUR. A model for muscle contraction in with cross-bridge attachment and force generation are distinct. Gold.Spring.Harbor Symp.Quant. Biol.,1973,v.37,p.685-690.

50. Kawai M. Head rotation or dissociation? A study of exponential rate processes in chemically skinned rabbit muscle fibers when MgATP concentration is changed. Biophys.J., 1978,v.22,p.97-103.

51. KawaiM.,Brandt P.W. Two rigor states in skinned crayfish single muscle fibers. J.Gen.Physiol.,1976,v.68,p.267-280.

52. Kawai M.,Brandt P.W.,Cornacchia III L.C. The effect of ionic strength on exponential processes a possible site of action in a cross-bridge cycle. - Biophys.J.,1982,v.37, p.106a (Abstr.M-PM-D1).

53. Kswai M.,Cox R.IT. Effect of Ca ion concentration on exponential rate processes in chemically skinned rabbit psoas fibers as measured in sinusoidal analysis. Fed.Proc., 1980,v.39,p.1733 (Abstr.688).

54. Kawai M.,Cox R.H.,Brandt P.W. Effect of Ga ion concentration on cross-bridge kinetics in rabbit psoas fibers. -Biophys.J.,1981,v.35 >P•375-384.

55. Kuhn H.J.,Guth K.,Ruegg I.C. Gross bridge strain effects ATP-binding to myosin heads. Pflugers Arch.,1981,v.389,

56. Lehman V/.H. Th L calcium regulation in vertebratestriated muscle. Nature,1978,v.274»p.80-81.tension and ADP production in segments of chemically skinned muscle fibers. Biochim.Biophys.Acta,1976,v.430, p.352-365.

57. Loscalzo J.,Reed G.H.,Weber A. Conformational change and cooperativity in actin filaments free of tropomyosin. -Proc.Hatl.Acad.Sci.USA,1975,v.72,p.3412-3415.

58. Low J.,Wieland Th. The interaction of phalloidin, some of its derivates, and of other cyclic peptides with muscle actin as studied by viscosimetry. PEBS Letters,1974, v.44,p.340-343.

59. Lymn R.W.,Taylor E.Y/. Mechanism of adenosine triphosphate hydrolysis by actomyosin. Biochemistry,1971,v.10,p.4617-4624.

60. Magid A.,Goodno C.C. Inhibition of cross-bridge force by vanadate ion. Biophys.J.,1982,v.37,p.107a (Abstr.1. M-PM-D5).1. P.R56.

61. Levy R.M.,Umazume Y. ,Kushmerick M.J. Ca dependence of2+75» Marston S.B. The nucleotide complexes of myosin in gly-cerol-extracted muscle fibres. Biochim.Biophys.Acta, 1973,v.305,p.397-412.

62. Marston S.B. ATPase cycle in insect flight muscle. -Insect flight muscle,1977,p.295.

63. Marston S.В.,Rodger C.D.,Tregear R.T. Changes in muscle cross-bridges when ^,^-imido-ATP binds to myosin. J. Mol.Biol.,1976,v.104,p.263-276.

64. Marston S.B.,Tregear R.T.,Rodger C.D.,Clarke M.L. Coupling between the enzymatic site of myosin and the mechanical output of muscle. J.Mol.Biol.,1979,v.128,p.111-126.

65. Miller A.,Tregear R.T. Structure of insect flight muscle in the presence and absence of ATP. -J.Mol.Biol.,1972, v.70,p.85-104.

66. Morimoto K.,Harrington W.P. Evidence for structural chanthick fibmuMtj ges in vertebrate induced by calcium. J.Mol.Biol.,1974,v.88,p.693-709»

67. Moss R.L. The effect of calcium on the maximum velocity of shortening in skinned skeletal muscle fibres of the rabbit. J.Muscle Res.Cell Mot.,1982,v.3,p.295-311.

68. Murray J.M.,Weber A. Cooperativity of the calcium switch of regulated rabbit actomyosin system. Mol.Cell Biochem., 1981,v.35,p.11-15.

69. Oosawa P. The flexibility of actin. Biophys.Chem.,1980, v.11,p.443-446.

70. Orentlicher M.,Gersho A. Quantitative model of actin myosin interaction. Biophys.J.,1977,v.18,p.141-159.

71. Pemrick S.M. The phosphorilated LCg light chain of skeletal myosin is a modifier of the actomyosin ATPase. J. Biol.Chem.,1980,v.255,P.8836-8841.

72. Potter J.D.,Gergely J. The calcium and magnesium binding sites on troponin and their role in regulation of myofibrillar adenosine triphosphatase.- J.Biol.Chem.,1975,v.250,p.4628-4633.

73. Rupp H. Modulation of tension generation at the myofibrillar 3'evel an analysis of the effect of magnesium adenosine triphosphate ,magnesium,pH, sarcomere length and state of phosphorilation.-Basic Res.Cardiol.,1980,v.75,p.295-317.

74. Reedy M.K.,Holmes K.C.,Tregear R.T. Indyced changes in orientation of cross-bridges of glycerinated insect flight muscle.-Nature ,1965,v.207,p.1276-1280.

75. Reuben J.P.,Brandt P.W.,Berman N. Regulation of tensionraufish,in the skinnecPrmuscle fiber. Contraction and regulation in the abcence of Ca. J. Gen. Physiology, 1971, v. 57, p. 385-407.

76. Ruegg J.C., Schadler M.,Steiger C.J.,Muller C. Effect of inorganic phosphate, on the contractile mechanism.-Pflugers Arch.,1971,v.325,p.359-364.

77. Sleep J.A.,Hutton R.L. Exchange between inorganic phosphate and adenosine 51 -triphosphate in the medium bu acto-myosin-subfragment-1. Biochemistry,1980,v.19,p. 1276 -1283.

78. Tawada Y.,0hara H.,0oi Т.,Tawada K. Hon polymerizable tropomyosin and control of the superprecipitation of actomyosin. J.Biochem.,1975,v.78,p.65-72.

79. Taylor E.W. Mechanism of actomyosin ATP-ase and the problem of muscle contraction. CRC Crit.Rev.Biochem.,1979, v.6,p.103-164.

80. Thomas D.D.,Seidel J.C.,Gergely J. Rotational dynamics of spin-labaled P-actin in the sub-millisecond time range. -J.Mol.Biol.,1979,v.132,p.257-273.

81. Thames M.D.,Teichholz L.E.,Podolclry R.J. Ionic strength and the contraction kinetics of skinned muscle fibers. -J.Gen.Physiol.,1974,v.63,p.509-530.

82. Trueblood C.E.,Walsh T.P.,Weber A. Steric model and digested tropomyosin. Biophys.J.,1982,v.37,p.47a (Abstr. М-АШ-Р«40).

83. Trybus K.M.,Taylor E.W. Kinetic studies of the cooperative binding of subfragment-1 to regulated actin. Proc.Natl. Acad.Sci.USA,1980,v.77,p.7209-7213.

84. White D.C.S. Rigor contraction and the effect of various phosphate compounds on glycerinated insect flight and vertebrate muscle, J.Physiol.,1970,v.208,p.583-605.

85. White D.C.S.,Thorson I, Phosphate starvation and nonlinear dynamics of insect fibrillar flight muscle. J.Gen.Physiol, 1972,v.60,p.307-336.

86. Wieland Th, Phallotoxins and microfilaments, Molec.basis of motility. - 1976,v.26,p.203-214.

87. Wieland Th.,Hollosi M,,Nassal M, $-aminophalloin, ein 7-analoges des Phalloidins und biochemisch nutzliche, auch fluoreszierende derivate. Liebigs Ann.Chem.,1983, p.1333-1540.

88. Wieland Th. Interaction of phallotoxins with actin. -Adv.enzyme regulation,1977,v.15,p.285-300.

89. Wieland Th.,Govindan V.M. Phallotoxins bind to actin. -PEBS Letters,1974,v.46,p.351-353.

90. Wise R.M.,Rondinone J.F.,Briggs P.N, Effect calcium on force-velocity characteristics of glycerinated skeletal muscle. Am.J.Phisiol.,1971,v.221,p.973-979.

91. Yates L.D.,Greaser М.Ъ. Myosin, actin and troponin content in rabbit skeletal muscle and myofibrils. Biophys. J.,1983,v.41,p»103a (Abstr.M-M-Pos 170).

92. Young M. The molecular basic of muscle contraction. Ann. Rev.Biochem.,1969,v.38,p.913-920.