Иммунохимические методы анализа пестицидов группы ДДТ в объектах окружающей среды тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.23, кандидат химических наук Бочкарева, Александра Евгеньевна

• Бочкарева, Александра Евгеньевна
• кандидат химических наук
• 2002

Оглавление диссертации кандидат химических наук Бочкарева, Александра Евгеньевна

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

ВВЕДЕНИЕ

ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

ГЛАВА 1. Иммунохимические методы анализа пестицидов

1.1. Основные этапы разработки иммунохимических методов анализа пестицидов

1.1.1. Дизайн и синтез гаптенов, конъюгирование гаптенов с белками

1.1.2. Получение антител

1.1.3. Тестирование антител; оптимизация иммуноанализа

1.2. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) 15 1.2.1. Хемшпоминесцентный ИФА

1.3. Твердофазный ИФА в проточных системах

1.3.1. Иммуносорбенты и методы иммобилизации

1.3.2. Неспецифическое связывание в проточных системах

1.3.3. Стабильность реагентов в условиях проточного иммуноанализа

1.3.4. Регенерация иммуносорбентов

1.4. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) 26 1.4.1. Влияние структуры трейсера на чувствительность ПФИА

ГЛАВА 2. Общая характеристика ДДТ, производных и метаболитов

2.1. Физико-химические свойства ДДТ и его основных производных

2.2. Метаболизм и транспорт ДДТ в окружающей среде

2.3. Метаболизм ДДТ и производных в живых организмах

2.4. Механизм инсектицидного действия ДДТ

2.5. Механизмы токсического действия ДДТ на живые организмы

ГЛАВА 3. Методы определения ДДТ в различных природных объектах

3.1. Физико-химические методы анализа ДДТ

3.2. Иммунохимические методы анализа ДДТ

ГЛАВА 4. Материалы и методы

4.1. Материалы и оборудование

4.2. Методы исследования

РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ

ГЛАВА 5. Поляризационный флуоресцентный иммуноанализ (ПФИА) ДДТ и производных

5.1. Получение меченых производных ДДТ

5.2. Тестирование моноклональных антител против ДДТ

5.3. Исследование специфичности ПФИА ДДТ

5.4. Аналитические характеристики ПФИА ДДТ

ГЛАВА 6. Твердофазный иммуноферментный анализ ДДТ

6.1. Оптимизация ИФА ДДТ

6.1.1. Изучение сорбционного поведения конъюгата на поверхности планшетов; исследование влияния температуры и времени проведения стадий на вид калибровочных кривых ИФА ДДТ

6.1.2. Исследование влияния физико-химических факторов на стадию конкуренции

6.1.3. Влияние органических растворителей на чувствительность твердофазного ИФА ДДТ и суммы производных ДДТ

6.1.4. Исследование специфичности твердофазного ИФА ДДТ

6.1.5. Стабильность ИФА ДДТ

6.2. Твердофазный ИФА ДДТ в водах различного происхождения

6.2.1. Твердофазный ИФА ДДТ в водопроводной и минеральной воде

6.2.2. Твердофазный ИФА ДДТ в поверхностных водах

6.3. Твердофазный ИФА ДДТ в почве и продуктах питания

ГЛАВА 7. Иммуноферментный анализ ДДТ в проточной системе

7.1. Получение и свойства носителей для ИФА ДДТ в проточной системе

7.2. Выбор схемы проведения иммуноферментного анализа ДДТ в проточной системе

7.2.1. Конкурентная схема ИФА ДДТ в проточной системе с использованием конъюгатов антивидовых антител с пероксидазой хрена

7.2.2. ИФА ДДТ в проточной системе с использованием конъюгатов моноклональных антител с пероксидазой хрена

7.2.2.1. Получение и тестирование конъюгатов моноклональных антител с пероксидазой хрена методом твердофазного ИФА на планшетах

7.2.2.2. Тестирование конъюгатов антител против ДДТ с пероксидазой в проточной системе

7.3. Оптимизация условий проведения ИФА ДДТ в проточной системе

ВЫВОДЫ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Иммунохимические методы анализа пестицидов группы ДДТ в объектах окружающей среды»

В настоящее время в результате хозяйственной деятельности человека в биосфере циркулирует большое число различных чужеродных для человека и животных соединений. Из органических соединений выделены приоритетные, так называемые стойкие органические загрязнители (СОЗ), которые представляют наибольшую опасность для окружающей среды. В группу СОЗ входит и хлорорганический инсектицид ДДТ, применение которого в развитых странах было запрещено в 70-ых годах прошлого века, а в развивающихся странах ДДТ до сих пор используют для борьбы с насекомыми - переносчиками болезней.

ДДТ и его производные характеризуются высокой кумулятивной способностью и устойчивостью в условиях окружающей среды. Вследствие этого возникает проблема загрязнения воды, почвы и продуктов питания остаточными количествами ДДТ и его метаболитов. Вместе с тем попадание в организм человека пестицидов группы ДДТ с пищевыми продуктами приводит к накоплению этих соединений в жировых тканях, что может представлять потенциальную опасность ввиду возможного проявления токсических эффектов пролонгированного действия. Данные факты свидетельствуют о необходимости контроля над содержанием пестицидов группы ДДТ, как в природных объектах, так и в биологических образцах.

Методы высокоэффективной капиллярной газовой хроматографии, в основном используемые для анализа пестицидов группы ДДТ, имеют ряд недостатков, в частности для них характерны трудоемкая и длительная пробоподготовка, использование дорогостоящей аппаратуры (тандем-приборов с несколькими детекторами), недостаточная надежность и специфичность, связанные с разложением ДДТ в ходе анализа и одинаковым временем удерживания пестицидов группы ДДТ и полихлорированных бифенилов. Вследствие высокой стоимости анализа такие методы неприменимы для массового скрининга реальных образцов. Поэтому актуальной является разработка специфичных, чувствительных, надежных, точных, относительно простых и экспрессных методов анализа пестицидов группы ДДТ, удовлетворяющих установленным гигиеническим нормам. Этим требованиям отвечают иммунохимические методы анализа, которые получили широкое распространение для осуществления мониторинга остаточных количеств пестицидов в объектах окружающей среды. В зависимости от конкретных прикладных задач используют различные варианты иммунохимических методов анализа. Гомогенный поляризационный флуоресцентный иммуноанализ позволяет быстро охарактеризовать иммунореагенты и провести первичный скрининг образцов. Твердофазный иммуноферментный анализ (ИФА) на планшетах позволяет определять концентрацию пестицидов в образцах с высокой точностью, в то время как ИФА в проточной системе используется для массового скрининга образцов, когда за короткое время необходимо установить факт наличия или отсутствия пестицидов в пробах. Применение высокочувствительной хемилюминесцентной системы детекции, основанной на реакции усиленной хемилюминесценции, позволяет сократить время анализа. Описанные в литературе иммунохимические методы анализа ДДТ основаны на принципах твердофазного ИФА на планшетах или пробирках со спектрофотометрической детекцией. Для них характерны недостаточная чувствительность, неоднородное перекрестное реагирование в группе пестицидов ДДТ, а также значительные перекрестные реакции с другими хлорорганическими пестицидами. Вопрос, касающийся оптимизации условий проведения анализа пестицидов группы ДДТ в зависимости от конкретного объекта, практически не изучен.

Целью работы является разработка иммунохимических методов анализа пестицидов группы ДДТ и оптимизация методов для определения этих пестицидов в природных объектах (воде, почве, продуктах питания и биологических образцах).

Для достижения поставленной цели необходимо решить следующие задачи:

- охарактеризовать иммунохимические реагенты - моноклональные антитела и антигены методом ПФИА, для чего получить меченые флуоресцентной меткой производные антигенов (трейсеры), подобрать сочетания иммунореагентов для разработки ИФА;

- исследовать влияние различных параметров и подобрать оптимальные условия проведения твердофазного ИФА ДДТ с хемилюминесцентной детекцией на планшетах и в проточной системе;

- определить аналитические характеристики разработанных методик и провести их апробацию на модельных системах и реальных образцах.

Заключение диссертации по теме «Биотехнология», Бочкарева, Александра Евгеньевна

выводы

1. Впервые синтезированы различные по структуре и составу конъюгаты производных ДДТ с флуоресцеином (трейсеры). Методом поляризационного флуоресцентного анализа (ПФИА) охарактеризованы моноклональные антитела против ДДТ и выбраны оптимальные комбинации иммунореагентов, позволяющие проводить как класс-специфический, так и ДДТ-специфический анализ. Наибольшая чувствительность ПФИА обеспечивается использованием гомологичных пар реагентов.

2. Разработаны и оптимизированы методики проведения ПФИА ДДТ и ПФИА группы производных ДДТ в воде, определены их аналитические характеристики. Методы позволяют определять пестициды в линейном диапазоне 6-1000 нг/мл. Пределы обнаружения составили 3 и 12 нг/мл для группового ПФИА ДДТ и ПФИА ДДТ. Показана принципиальная возможность применения метода ПФИА группы производных ДДТ для количественного определения пестицидов в экстрактах реальных образцов (сыворотка крови, грудное молоко, почва).

3. Разработаны и оптимизированы методики твердофазного ИФА с хемилюминесцентной детекцией для количественного определения ДДТ и группы производных ДДТ. Определены их аналитические характеристики. Предел обнаружения метода группового ИФА ДДТ составил 0.04 нг/мл, индивидуального ИФА ДДТ - 0.06 нг/мл; диапазоны определяемых концентраций 0.07-1 нг/мл и 0.1-2 нг/мл, соответственно.

4. Проведено изучение влияния матрикса различных образцов на результаты твердофазного ИФА ДДТ и группы производных ДДТ. Подобраны условия проведения иммуноферментного анализа ДДТ и его производных в воде (водопроводной, минеральной, поверхностной), почве и продуктах питания. Корреляционными испытаниями подтверждено, что предложенные методики позволяют надежно определять производные ДДТ в концентрациях, соответствующих ПДК.

5. Впервые разработан и оптимизирован иммуноферментный анализ ДДТ и производных с хемилюминесцентной детекцией в проточной системе. Синтезированы различные иммуносорбенты, которые были протестированы с использованием двух конструкций проточной ячейки. Пределы обнаружения (0.4 и 1.1 нг/мл для группового ИФА ДДТ и индивидуального ИФА ДДТ) соответствуют стандартным величинам для твердофазного ИФА на планшетах, общее время анализа в проточной системе составляет 15 минут.

Список литературы диссертационного исследования кандидат химических наук Бочкарева, Александра Евгеньевна, 2002 год

1. Егоров A.M., Осипов А.П., Дзантиев Б.Б., Гаврилова Е.М., Теория и практика иммуноферментного анализа. 1991, Москва: Высшая школа.

2. Goodrow М.Н., Hammock B.D., Hapten design for compound-selective antibodies: ELISA for environmentally deleterious small molecules. Anal.Chim.Acta, 1998. 376: p. 83-91.

3. Marco M.-P., Gee S.J., Hammock B.D., Immunochemical technique for environmental analysis. II. Antibody production and immunoassay development. Trends Anal.Chem., 1995. 14: p. 415-425.

4. Beier R.C., Stanker L.H., 4,4'-Dinitrocarbanilide hapten development utilizing molecular models. Anal.Chim.Acta, 1998. 376: p. 139-143.

5. Еремин С.А., Самсонова Ж.В., Егоров A.M., Иммунохимические методы анализа гербицидов группы сим-1,3,5-триазинов. Успехи химии, 1994. 63: с. 638-649.

6. Buiting A.M.J., Van Rooijen N., Claassen E. Liposomes as antigen carrier and adjuvants in vivo. 44th forum in Immunology. 1992, p. 541-548.

7. Bochr M., Gieersh Т., Schmid R.D., Dextran, a hapten carrier in immunoassays for s-triazines a comparison with ELISAs based on hapten/protein conjugates. J.Immunol.Methods, 1992. 151: p. 1-8.

8. Dankwardt A., Immunochemical assays in pesticide analysis, in Encyclopedia of Analytical Chemistry, Meyers R.A., Editor. 2001, John Wiley & Sons Ltd.: Chichester, p. 1-25.

9. Hock В., Antibodies for immunosensors. A review. Anal.Chim.Acta, 1997. 347: p. 177-186.

10. Hock В., Dankwardt A., Kramer K., Marx A., Immunochemical techniques: antibody production for pesticide analysis. A review. Anal.Chim.Acta, 1995. 311: p. 393-405.

11. Van Emon J.M., Gerlach C.L., Bowman K., Bioseparation and bioanalytical techniques in environmental monitoring. J.of Chromatography B, 1998. 715: p. 211-228.

12. Nunes G.S., Toscano I.A., Barcelo D., Analysis of pesticides in food and environmental samples by enzyme-linked immunosorbent assays. Trends Anal.Chem, 1998. 17: p. 79-87.

13. Herzog D.P. Immunoassays for envrionmental contaminants (pesticides) in food and water. 1997. p. 1-26.

14. Guidelines for single-laboratory validation of analytical methods for trace-level concentrations of organic chemicals. AO AC International web-site. 2001.

15. Meulenberg E.P., Stoks P.G., Water quality control in the production of drinking water from river water. The application of immunological techniques for the detection of chlorphenoxyacid herbicides (2,4-D). Anal.Chim.Acta, 1995. 311: p. 407-413.

16. Vanderlaan M., Watkins B.E., Stankler L., Environmental monitoring by immunoassay. Environ.Sci.Technol., 1988. 22(3): p. 247-253.

17. Jung F., Gee S.J., Harrison R.O., Goodrow M.H., Use of immunochemical techniques for the analysis of pesticide residues. Pestic.Sci., 1989. 26: p. 303-317.

18. Hall J.C., Deschamps R.J.A., McDermott M.R., Immunoassays to detect and quantitate herbicides in the environment. Weed Technol., 1990. 4(2): p. 226-234.

19. Nam K.S., King J.W., Supercritical fluid extraction enzyme immunoassay for pesticide detection in meat products. J.Agric.Food Chem., 1994. 42: p. 1469-1474.

20. Knopp D., Application of immunological methods for the determination of environmental pollutants in human biomonitoring: A review. Anal.Chim.Acta, 1995. 311: p. 383-392.

21. Lovgren U., Kronkvist K., Backstrom В., Edholm L.-E., Johansson G., Design of non-competitive flow injection enzyme immunoassays for determination of haptens: application to digoxigenin. J.Immunol.Methods, 1997. 208: p. 159-168.

22. Kramer P.M., Baumann B.A., Stoks P.G., Prototype of newly developed immunochemical detection system for the determination of pesticide residues in water. Anal.Chim.Acta, 1997. 347: p. 187-198.

23. Дзантиев Б.Б., Жердев A.B., Романенко О.Г., Титова Н.А., Трубачева Ж.Н., Чередникова Т.В., Еремин С.А., Твердофазные методы иммуноферментного анализа гербицидов симазина и атразина. Прикладная биохимия и микробиология, 1995. 31: с. 134-139.

24. Дзантиев Б.Б., Жердев А.В., Системы иммунодетекции пестицидов. Агрохимия, 1998. 10: с. 61-68.

25. Дзантиев Б.Б., Жердев А.В., Морева И.Ю., Романенко О.Г., Еремин С.А., Твердофазные методы иммуноферментного анализа гербицидов 2,4-дихлорфеноксиуксусной и 2,4,5-трихлорфеноскиуксусной кислот. Прикладная биохимия и микробиология, 1994. 30: с. 931-938.

26. Gubitz G., Schmid M.G., Silviaeh Н., Aboul-Enein H.Y., Chemi'luminescence flow-injection immunoassays. Crit.Rev.Anal.Chem., 2001. 31(2): p. 141-148.

27. Kricka L.J., Chemiluminescent and bioluminescent techniques. Clin.Chem., 1991. 37: p. 1472-1481.

28. Arefyev A.A., Vlasenko S.B., Eremin S.A., Osipov A.P., Egorov A.M., Flow-injection enzyme immunoassay of haptens with enhanced chemiluminescence detection. Anal.Chim.Acta, 1990. 237: p. 285-289.

29. Thorpe G.H.G., Kricka L.J., Phenols as enhancers of the chemiluminescent horseradish peroxidase-luminol-hydrogen peroxide reaction: application in luminescence monitored enzyme immunoassays. Clin.Chem., 1985. 31: p. 13351341.

30. Kricka L.J., Thorpe G.H.G., Enhanced chemiluminescent enzyme immunoassay. Parasitol.Today, 1986. 2: p. 123-124.

31. Thorpe G.H.G., Kricka L.J., Enhanced chemiluminescent assays for horseradish peroxidase: characteristics and applications, in Bioluminescence and

32. Chemiluminescence, New Perspectives, Scholmerich J., Editor. 1986, John Wiley & Sons: Chichester, p. 199-208.

33. Diaz N.A., Sanchez F.G., Phenol derivatives as enhancers and inhibitors of luminol-H202-horseradish peroxidase chemiluminescence. J.Biolum.Chemilum., 1998. 13: p. 75-84.

34. Wyne A.G., Enhanced luminescent immunoassays for environmental monitoring. Anal.Proced., 1990. 27: p. 100-101.

35. Samsonova J.V., Rubtsova M.Y., Kiseleva A.V., Ezhov A.A., Egorov A.M., Chemiluminescent multiassay of pesticides with horseradish peroxidase as a label. Biosens.Bioelectron., 1999. 14: p. 273-281.

36. Diaz N.A., Sanchez F.G., Enhanced chemiluminescence kinetic ELISA of dichloroprop methyl ester. Anal.Chim.Acta, 1996. 321: p. 219-224.

37. Dzgoev A., Mecklenburg M., Microformat imaging ELISA for pesticide determination. Anal.Chem., 1996. 68: p. 3364-3369.

38. Dzgoev A., Mecklenburg M., Optimisation of a charge coupled device imaging enzyme linked immunosorbent assay and supports for the simultaneous determination of multiple 2,4-D samples. Anal.Chim.Acta, 1997. 347: p. 87-93.

39. Rubtsova M.Y., Wittman C., Chemiluminescent immunoassay: application of a portable scanning luminometer for the determination of 2,4-dichlorphenoxyacetic acid in microtiter and membrane strip format. Food Agric.Immunol., 1997. 9: p. 235-247.

40. Erhard M.N., Jungling S.B., Development of a direct and indirect chemiluminescence immunoassay for detection of an organophosphorus compound. J.Immunoassay, 1992. 13: p. 273-287.

41. Fawaz K.M., Wynne A.G., Development and evaluation of a chemiluminescent immunoassay for chlortoluron using a camera luminometer. Analyst, 1996. 121: p. 329-332.

42. Ruzicka J., Hansen E.H., Flow injection analysis. 1981, Wiley-Interscience: New York.

43. Арефьев A.A., Осипов А.П., Проточно-инжекциоиный твердофазный иммуноферментный анализ биологически активных соединений, в Новые направления в развитии иммунологических методов анализа. 1990, Москва: ВИНИТИ, с. 4-83.

44. Gubitz G., Flow-injection immunoassays. Anal.Chim.Acta, 1993. 283: p. 421-428.

45. Bjarnson В., Chimuka L., Onnerfjord P., Eremin S.A., Jonsson J.-A., Johansson G., Emneus E., Enzyme flow immunoassay using a Protein G column for the screening of triazine herbicides in surface and waste water. Anal.Chim.Acta, 2001. 426: p. 197-207.

46. Onnerfjord P., Eremin S.A., Emneus E., Marco-Varga G., High sample throughput flow immunoassay utilising restricted access columns for the separation of bound andfree label. J.of Chromatography A, 1998. 800: p. 219-230.

47. Franek M., Deng A., Kolar V., Performance characteristics for flow injection immunoassay using monoclonal antibodies against s-triazine and 2,4-D herbicides. Anal.Chim.Acta, 2000. 412: p. 19-27.

48. Dietrich M., Kramer P.M., Continuous immunochemical determination of pesticides via flow injection immunoanalysis using monoclonal antibodies against terbutryne immobilised to solid supports. Food Agric.Immunol., 1995. 7: p. 203-220.

49. Nistor C., Qubina A., Marco M.-P., Barcelo D., Emneus E., Competitive flow immunoassay with fluorescence detection for determination of 4-nitrophenol. Anal.Chim.Acta, 2001. 426: p. 185-195.

50. Pulido-Tofino P., Barrero-Moreno J.M., Perez-Conde M.C., Flow-through fluoroimmunosensor for isoproturon determination in agricultural foodstuff Evaluation of antibody immobilisation on solid support. Anal.Chim.Acta, 2000. 417: p. 85-94.

51. Vianello F., Signor L., Pizzariello A., Paolo M.L., Scarpa M., Hock B., Giersh T., Rigo A., Continuous flow immunosensor for atrazine detection. Biosens.Bioelectron., 1998. 13: p. 45-53.

52. Kusterbeck A.W., Wemhoff G.A., A continuous flow immunoassay for rapid and senstitive detection of small molecules. J.Immunol.Methods, 1990. 135: p. 191-197.

53. Gonzalez-Martinez M.A., Puchades R., Maquieira A., On-line immunoanalysis for environmental pollutants: from batch assays to automated sensors. Trends Anal.Chem., 1999. 18: p. 204-218.

54. Kramer P.M., Franke A., Standfus-Gabish C., Flow injection immunoaffmity analysis (F1IAA) a screening technology for atrazine and diuron in water samples. Anal.Chim.Acta, 1999. 399: p. 89-97.

55. Reeves S.G., Rule G.S., Roberts M.A., Edwards A.J., Durst R.A., Flow-injection liposome immunoanalysis (FILIA) for alachlor. Talanta, 1994. 41: p. 1747-1753.

56. Rabbany S.Y., Marganski W.A., Kusterbeck A.W., Ligler F.S., A membrane-based displacement flow immunoassay. Biosens.Bioelectron., 1998. 13: p. 939-944.

57. Sheikheldin S.Y., Cardwell T.J., Cattrall R.W., Luque de Castro M.D., Kolev S.D., Determination of phenol in water by prevaporation-flow injection analysis. Anal.Chim.Acta, 2000. 419: p. 9-16.

58. Kramer P.M., Schmid R.D., Flow injection immunoanalysis (FIIA) a new immunoassay format for the determination of pesticides in water. Biosens.Bioelectron., 1991. 6: p. 239-243.

59. Roda A., Girotti S., Carrea G., Flow systems utilizing nylon-immobilised enzymes. Bioluminescence, 1986. 21: p. 238-248.

60. Graham A.L., Carlson C.A., Edmiston P.L., Development and characterization of molecularly imprinted sol-gel materials for the selective detection of DDT. Anal.Chem., 2002. 74: p. 458-467.

61. Morais S., Maquieira A., Puchades R., Selection and characterisation of membranes by means of an immunoflltration assay. Application to the rapid and sensitive determination of the insecticide carbaryl. J.Immunol.Methods, 1999, 224 (1-2): p. 101-109.

62. Emneus E., Marco-Varga G., Biospecific detection in liquid chromatography. J.of Chromatography A, 1995. 703: p. 191-243.

63. Gonzalez-Martinez M.A., Puchades R., Maquieira A., Reversibility in heterogeneous flow immunosensing and related techniques. A brief overview. Food Technol.Biotechnol., 1997. 35(3): p. 193-204.

64. Tijssen P., Practice and theory of enzyme immunoassays, in Laboratory techniques in biochemistry and molecular biology, Burdon R.H., Van Knippenberg P.H., Editors. 1985, Elsevier: Amsterdam, p. 21-31.

65. Wittman C., Schmid R.D., Bioaffinity sensors for environmental monitoring, in Handbook of biosensors and electronic noses. Medicine, food and the environment, Rress-Rogers E., Editor. 1997, CRC Press: Boca Raton, FL. p. 333-347.

66. Dandliker W.B., Dandliker J., Kelly K.J., Levin J., Fluorescence polarization immunoassay theory and experimental method. Immunochemistry, 1973. 10: p. 219-227.

67. Spenser R.D., Toledo F.B., Williams B.T., Yoss N.L., Design, constrction and two applications for an automated flow-cell polarization fluorimeter with digital readout. Clin.Chem., 1973. 19: p. 834-838.

68. Gutierrez M.C., Gomez-Hens A., Perez-Bendito D., Immunoassay methods based on fluorescence polarization. Talanta, 1989. 12: p. 1187-1201.

69. Williams A.T.R., Smith D.S., Fluorescence polarization immunoassay, in Methods of immunological analysis, Albert W.H.W., Staines N.A., Editors. 1991, VCH: Wolnheim.

70. Eremin S.A., Fluorescence polarisation immunoassays for determination of pesticides and biologically active compounds in food safety and environmental monitoring. Food Technol.Biotechnol., 1998. 36: p. 235-243.

71. Colbert D.L., Eremin S.A., Landon J., The effect of fluorescein labels on the affinity of antisera to small haptens. J.Immunol.Methods, 1991. 140: p. 227-233.

72. Еремин С.А., Лунская И.М., Егоров A.M., Влияние структуры трейсера на чувствительность и специфичность поляризационного флуорошшуноанализа 2,4-дихлорфеноксиуксусной кислоты. Биоорганическая химия, 1993. 19: с. 836-843.

73. Eremin S.A., Schiavetta D.E., Lotey Н., Smith D.S., Landon J., Design and development of a single-reagent polarization fluoroimmunoassay for methamphetamine. Ther.Drug Monit., 1988. 10: p. 327-332.

74. Sidki A.M., Al-Abdulla I.H., Rowell F.J., Quinine directly determined in serum or urine by separation fluoroimmunoassay. Clin.Chem., 1987. 33: p. 463-467.

75. Gallacher G., Ruth E., Landon J., Design of the immunogen and label for use in a fluoroimmunoassay for paracetamol. Ann.Clin.Biochem., 1987. 25: p. 42-48.

76. Еремин С.А., Иммунохимический анализ лекарств и органических соединений. ЖВХО, 1989. 34: с. 46-51.

77. Бобовникова Ц.И., Вирченко Е.П., Малахов С.Г., К вопросу о глобальном загрязнении природных сред хлорорганическими пестицидами, в Опыт и методы экотоксикологического мониторинга. 1978, Пущино-на-Оке: Наука, с. 201-208.

78. Roberts D.R., Laughlin L.L., Hsheih P., Legters L.J., DDT, global strategies, and a malaria control crisis in South America. Emerg.Infect.Dis., 1997. 3: p. 295-302.

79. Майстренко B.H., Хамитов P.3., Будников Г.К., Эколого-аналитический мониторинг суперэкотоксикантов. 1996, Москва: Химия.

80. Питьевая вода. Гигиенические требования к качеству воды централизованных систем питьевого водоснабжения. Контроль качества, в Санитарные правила и нормы (СанПиН 2.1.4.559-96). 1996, Госкомсанэпиднадзор России.

81. Беляев М.П., Гнеущев М.И., Глотов Я.К., Шамов О.И., Справочник предельно допустимых концентраций вредных веществ в пищевых продуктах и среде обитания, 1993. Москва: Гос. комитете санитарно-эпидемиологического надзора РФ. 142с.

82. Data profile on DDT, in International register on potentially toxic chemicals, 1990. Geneva: UNEP.

83. Будников Г.К., Диоксины и родственные соединения как экотоксиканты. 1997, Москва: Химия.

84. Metcalf R.L., Insect control technology, in Kirk-Othmer encyclopedia of chemical technology, Kroschwitz J., Howe-Grant M., Editors. 1995, NY: John Wiley and Sons, Inc.: New-York. p. 524-602.

85. Справочник no пестицидам: Гигиена применения и токсикология. 1986, Киев: Урожай.

86. Handbook of chemistry and physics. 1998, CRC Press, Inc.: Boca Raton, p. 3-65.

87. Bidleman Т., Atmospheric processes: Wet and dry deposition of organic compounds are controlled by their vapor-particle partitioning. Environ.Sci.Teclmol., 1988. 22: p. 361-367.

88. Bidleman Т., Christensen E., Billings W., Atmospheric transport of organochlorines in the North Atlantic gyre. J.Mar.Res., 1981. 39: p. 443-464.

89. Meylan W.M., Howard P.H., Computer estimation of the atmospheric gas-phase reaction rate of organic compounds with hydroxyI radicals and ozone. Chemoshpere, 1993. 26: p. 2293-2299.

90. Alexander M., Sequestration and bioavailability of organic compounds in soil, in Environmentally acceptable endpoints in soil, Linz D.G., Nakles D.U., Editors. 1997, American Academy of Environmental Engineers: Annapolis, MD. p. 43-136.

91. DDT, in Extoxnet, Pesticide Management Education Program Cornell University, 1994. http://ace.orst.edu/info/extoxnet/pips/ddt.html

92. Zook C., Feng J., l,l,l-Trichloro-2,2-bis-(4'-chlorophenyl)ethane (DDT) Pathway Map. 2002. The University of Minnesota Biocatalysis/Biodegradation Database. http://umbbd.ahc . umn. e du/ddt/ddtmap. html

93. Boul H.L., Effect of soil moisture on the fate of radiolabelled DDT and DDE in vitro. Chemoshpere, 1996. 32: p. 855-866.

94. Verma A., Pillai M.K., Bioavailability of soil-bound residues of DDT and HCH to certain plants. Soil Biol.Biochem., 1991. 23: p. 347-351.

95. Mitra J., Raghu K., Long-term DDT pollution in tropical soils: effect of DDT and degradation products on soil microbial activities leading to soil fertility. Bull.Environ.Contam.Toxicol., 1998. 60: p. 585-591.

96. Practical handbook of marine science. 1994, CRC Press: Boca Raton, FL. p. 1-220.

97. Iwata H., Tanabe S., Sakai N., Distribution of persistent organochlorines in the oceanic air and surface seawater and the role of ocean on their global transport and fate. Environ.Sci.Technol., 1993. 27: p. 1080-1098.

98. Kale S.P., Murthy N.B., Raghu K„ Sherkhane P.D., Carvalho F.P., Studies on degradation of 14C-DDT in the marine environment. Chemoshpere, 1999. 39: p. 959-968.

99. Water-related environmental fate of 129 priority pollutants, in Introduction and technical background, metals and inorganics, pesticides and PCBs, 1979, U.S.Environmental Protection Agency: Washington, p. 2-16.

100. Quensen J.F.3rd, Mueller S.A., Jain M.K., Tiedje J.M., Reductive dechlorination of DDE to DDMU in marine sediment microcosms. Science, 1998. 280: p. 722-724.

101. Le Blanc G., Trophic-level differences in the bioconcentration of chemicals: Implications in assessing environmental biomagnification. Environ.Sci.Technol., 1995. 29: p. 154-160.

102. Whitmore R.W., Immerman F.W., Non-occupational exposures to pesticides for residents of two U.S. cities. Arch.Environ.Contam.Toxicol., 1994. 26: p. 47-59.

103. Jan J., Vrecl M., Pogacnik A., Bavdek S.V., Tissue distribution of planar and non-planar chlorobiphenyls, 4,4'-DDE and hexachlorobenzene in sheep and lambs. Chemoshpere, 1999. 38: p. 2607-2612.

104. Compendium of Environmental Standards. 2001, Bundesministerium fur wirtschaftliche Zusammenarbeit und Entwicklung (BMZ).

105. Bouwman H., Becker P.J., Cooppan R.M., Transfer of DDT used in malaria control to infants via breast milk. Bull.World Health Organ., 1992. 70: p. 241-250.

106. Narahashi T., Nerve membrane Na+ channels as targets of insecticides. Trends Pharmacol.Sei, 1992. 13: p. 236-241.

107. Handbook of toxicity ofpesticides to wildlife. 1984, U.S. Fish and Wildlife Service, Department of the Interior.: Washington.

108. Eriksson P., Archer T., Fredriksson A., Altered behaviour in adult mice exposed to a single low dose of DDT and its fatty acid conjugate as neonates. Brain Res., 1990. 514: p. 141-142.

109. Mellanby K., The DDT story. 1992, British Crop Protection Council (BCPC): Farnham, Surrey, UK.

110. Grass O.P., Hinton R.H., Evidence for and possible mechanisms of non-genotoxic carcinogenesis in rodent liver. Mutat.Res., 1991. 248: p. 271-290.

111. Tomatis L., Turusov V., Charles R, Liver tumours in CF-1 mice exposed for limited periods to technical DDT. Cancer Res.Clin.Oncol., 1974. 82: p. 25-35.

112. Baris D., Zahm S.H., Cantor K.P., Blair A., Agricultural use of DDT and risk of non-Hodgkin's lymphoma: pooled analysis of three case-control studies in the United States. Occup.Environ.Medicine, 1998. 55: p. 522-527.

113. Cocco P., Blair A., Congia P., Saba G., Flore C„ Ecca M.R., Palmas C., Proportional mortality of dichloro-diphenyl-trichloroethane (DDT) workers: a preliminary report. Arch.Environ.Health, 1997. 52: p. 299-303.

114. Zheng T., Holford T.R., Mayne S.T., Ward B„ DDE and DDT in breast adipose tissue and risk of female breast cancer. Am. J.Epidemiol., 1999. 150: p. 453-458.

115. Van't Veer P., Lobbezoo I.E., Martin-Moreno J.M., Guallar E., DDT (dicophane) and postmenopausal breast cancer in Europe: case-control study. BMJ, 1997. 315: p. 81-85.

116. Porta M, Malats N. Jariod M., Grimalt J.O., Rifa J., Carrato A., Serum concentrations of organochlorine compounds and K-ras mutations in exocrine pancreatic cancer. Lancet, 1999. 354: p. 2125-2129.

117. Anwar W.A., Biomarkers of human exposure to pesticides. Environ.Health Perspect., 1997. 105(4): p. 801-806.

118. Grasman K.A., Fox G.A., Scanlon P.F., Ludwig J.P., Organochlorine-associated immunosuppression in prefledgling Caspian terns and herring gulls from the Great Lakes: an ecoepidemiological study. Environ.Health Perspect., 1996. 104: p. 829842.

119. Tebourbi O., Rhouma K.B., Sakly M., DDT induces apoptosis in rat thymocytes. Bull.Environ.Contam.Toxicol., 1998. 61: p. 216-223.

120. Dees C., Askari M., Foster J.S., Ahamed S., Wimalasena J., DDT mimics estradiol stimulation of breast cancer cells to enter the cell cycle. Mol.Carcin., 1997. 18: p. 107-114.

121. Field В., Selub M., Hughes C.L., Reproductive effects of environmental agents. Semin.Reprod.Endocrinol., 1990. 8: p. 44-54.

122. Kelce W.R., Stone C.R., Laws S.L., Persistent DDT metabolite p,p'-DDE is a potent androgen receptor antagonist. Nature, 1995. 375: p. 581-585.

123. Colborn Т., Vom Saal F., Soto A., Developmental effects of endocrine-disrupting chemicals in wildlife and humans. Environ.Health Perspect., 1993. 101: p. 378-384.

124. Grasman K.A., Scanlon P.F., Fox G.A., Reproductive and physiological effects of environmental contaminants in fish-eating birds of the Great Lakes: A review of historical trends. Environ.Monit.Assess., 1998. 53: p. 117-145.

125. Waliszewski S.M., Aguirre A.A., Infanzon R.M., Siliceo J., Carry-over of persistent organo chlorine pesticides through placenta to fetus. Salud Publica Мех., 2000. 42: p. 384-390.

126. Smith D., Worldwide trends in DDT levels in human breast milk. Int.J.Epidemiol., 1999. 28: p. 179-188.

127. Другов Ю.С., Родин A.A., Газохроматографическая идентификация загрязнений воздуха, воды и почвы. 1999.

128. Schulz J., GC/MS Analysis of organochloropesticides and PCB, in HP Application Letter, 1993.

129. Cooke M., Roberts D.J., Carbon skeleton capillary gas chromatography. J. Chromatogr., 1980. 193: p. 437-443.

130. Sistovaris N., Donges U., Gas chromatographic determination of total polychlorinated aromates and chloro-paraffms following catalytic reduction in the injection port. Fresenius Z.Anal.Chem., 1987. 326: p. 751-753.

131. MethodEPA508, in Supelco Chromat.Products, 1996. p. 680-687.

132. Hayteas D.L., Duffield D.A., Use of high-performance liquid chromatography for the estimation of polychlorinated biphenyls and p,p-DDE residues in marine mammals. J.of Chromatography B, 1998. 705: p. 362-366.

133. Cooke M., Khallef K.D., Nickless G., Roberts D.J., Rapid detemincition of DDT and related compounds in soils via carbon skeleton chromatography-mass spectrometry. J.Chromatogr., 1979. 178: p. 183-191.

134. Hwang B.H., Lee M.R., Solid-phase microextraction for organochlorine pesticide residues analysis in Chinese herbal formulations. J.of Chromatography A, 2000. 898: p. 245-256.

135. Ling Y.C., Teng H.C., Cartwright C., Supercritical fluid extraction and clean-up of organochlorine pesticides in Chinese herbal medicine. J.of Chromatography A, 1999. 835: p. 145-157.

136. Brady B.O., Kao C.P.C., Dooley K.M., Knopf F.C., Supercritical extraction of toxic organics from soils. Ind.Eng.Chem.Res., 1987. 26(2): p. 261-268.

137. France J.E., King J.W., Snyder J.M., Supercritical fluid-based cleanup technique for the separation of organochlorine pesticides from fat. J.Agric.Food Chem., 1991. 39: p. 1871.

138. Fiddler W., Pensabene J.W., Gates R.A., Donoghue D.J., Supercritical fluid extraction of organochlorine pesticides in eggs. J.Agric.Food Chem., 1999. 47: p. 206-211.

139. Hooper M.L., Analysis of organochlorine pesticide residues using simultaneous injection of two capillary columns with electron capture and electrolytic conductivity detectors. J.Assoc.Off.Anal.Chem., 1991. 74: p. 974-981.

140. Schantz M.M., Nichols J. J., Wise S.A., Evaluation of pressurized fluid extraction for the extraction of environmental matrix reference materials. Anal.Chem., 1997. 69: p. 4210-4219.

141. Fung Y.S., Мак J.L., Determination of pesticides in drinking water by micellar electrokinetic capillary chromatography. Electrophoresis, 2001. 22: p. 2260-2269.

142. Furusawa N., Normal-phase high-performance liquid chromatographic determination and identification of aldrin, dieldrin, and DDTs in eggs. J.Chromatogr.Sci., 2001. 39: p. 183-187.

143. Haas G.J., Gvardia E.J., Production of antibodies against insecticide-protein conjugates. Pros.Sec.Exptl.Biol. and Med., 1968. 129: p. 546-551.

144. Сперанский B.B., Будаева P.А., Хунданова JI.JI. Исследование иммунозащиты в организме при действии пестицидов, в Материалы XI научной конференции ВСТИ, 1973.

145. Banerjee B.D., Development of an enzyme-linked immunoasorbent assay for the quantification of DDA (2,2-bisp-chlorphenyl.acetic acid) in urine. Bull.Environ.Contam.Toxicol, 1987. 38: p. 798-804.

146. Banerjee B.D., Pasha S.T., Koner B.C., Hapten synthesis and production of rabbit antibodies with reactivity to DDT and its metabolites for the development of an immunoassay. Med.Sci.Res.(India), 1996. 24: p. 553-555.

147. Burgisser D., Frey S., Gutte B., Klauser S., Preparation and characterisation of polyclonal and monoclonal antibodies against the insecticide, DDT. Biochem.Biophys.Res.Commun., 1990. 166: p. 1228-1236.

148. Beasley H.L., Phongkham T., Daunt M.H., Guihot S.L., Skenitt J.H., Development of a panel of Immunoassays for monitoring DDT, its metabolites, and analogues in food and environmental matrices. J.Agric.Food Chem., 1998. 46: p. 3339-3352.

149. Abad A., Moreno M.J., Montoya A., Development of monoclonal antibody-based immunoassays to the N-Methylcarbamate Pesticide Carbofuran. J.Agric.Food Chem., 1999. 47: p. 2475-2485.

150. Bidleman T., Matthews J., Olney C., Separation of polychlorinated biphenyls, chlordane, andp,p'-DDD from toxaphene by silicic acid column chromatography. J.Assoc.Off.Anal.Chem., 1978. 61: p. 820-828.

151. NIOSH manual of analytical methods. 2001, U.S. Department of Health, Education, and Welfare: Washington, p. S274-1-S274-7.

152. EPA environmental monitoring methods index: Detail analyte. (.). 1997. Government Institutes: Rockland.

153. Kurtz D.A., Adsorption of PCB's and DDT's on membrane filters. A new analysis method. Bull.Environ.Contam.Toxicol., 1977. 17: p. 391-398.

154. Test Method-608: Organochlorine pesticides and PCB's. 1982. U.S. Environmental Protection Agency, Environmental Monitoring and Support Laboratory: Cincinnati.

155. Method 808IB: Organochlorine pesticides by GC with ECD or ELCD. 1998. U.S. Environmental Protection Agency.

156. Driscoll M.S., Hassett J.P., Fish C.L., Extraction efficiencies of organochlorine compounds from Niagara River water. Environ.Sci.Technol., 1991. 25: p. 14321439.

157. Behzadi H., Lalancette R.A., Extending of the use ofUSEPA method 1625 for the analysis of 4,4'-DDT, 4,4'-DDD, and 4,4'-DDE. Microchem.J., 1991. 44: p. 122129.

158. Pesticide and industrial chemical residues, in Official methods of analysis of the association of official analytical chemists, Helrich K., Editor. 1990, Association of Official Analytical Chemists, Inc.: Arlington, p. 274-284.

159. Williams S., Official methods of analysis. 1984, Association of Official Analytical Chemists, Inc.: Arlington.

160. Method 8270D: Semivolatile organic compounds by gas chromatography/mass spectrometry (GCYMS). 1998, U.S. Environmental Protection Agency: Washington.

161. Djordjevic M.V., Fan J., Hoffmann D., Assessment of chlorinated pesticide residues in cigarette tobacco based on supercritical fluid extraction and GC-ECD. Carcinogenesis, 1995. 16: p. 2627-2632.

162. Grab K., Kalin I., Attempt for an on-line size exclusion chromatography-gas chromatography method for analyzing pesticide residues in foods. J.Agric.Food Chem., 1991. 39: p. 1950-1953.

163. Rodriguez P., Permanyer J., Grases J.M., Confirmation methodfor the identification and determination of some organophosphorus and organochlorine pesticides in cocoa beans by gas chromatography-mass spectrometry. J.Chromatogr., 1991. 562: p. 547-553.

164. Gore R.C., Hannah R.W., Pattacini S.C., Infrared and ultraviolet spectra of seventy-six pesticides. J.Assoc.Off.Anal.Chem., 1971. 54: p. 1040-1082.

165. Semb S.I., Brevik E.M., Pedersen-Bjergaard S., Capillary gas chromatography combined with atomic emission detection for the analysis of DDT and metabolites. Chemoshpere, 1998. 36: p. 213-224.

166. Ford W.M., Hill E.P., Organochlorine pesticides in soil sediments and aquatic animals in the upper Steele bayou watershed of Mississippi. Arch.Environ.Contam.Toxicol., 1991. 20: p. 161-167.

167. Analysis of pesticide residues in human and environmental samples: A compilation of methods selected for use in pesticide monitoring programs. 1980, EPA 600/8-80038.

168. McKinney J., Moore L., Prokopetz A., Validated extraction and cleanup procedures for polychlorinated biphenyls and DDE in human body fluids and infant formula. J.Assoc.Off.Anal.Chem., 1984. 67(1): p. 122-129.

169. Kusakabe T., Saito T., Takeichi S., Solid-phase microextraction and gas chromatography/mass spectrometry analysis of p,p'-DDE in biological samples. J.of Chromatography B, 2001. 761: p. 93-98.

170. Andersen A., Kasperlik-Zaluska A.A., Warren D.J., Determination of mitotane (o,p-DDD) and its metabolites o,p-DDA and o,p-DDE in plasma by high-performance liquid chromatography. Ther.Drug Monit., 1999. 21: p. 355-359.

171. Opelanio L., Rack E., Blotcky A., Determination of chlorinated pesticides in urine by molecular neutron activation analysis. Anal.Chem., 1983. 55: p. 677-681.

172. Mtihlebach S., Wyss P., Bickel M., Comparative adipose tissue kinetics of thiopental, DDE and 2,4,5,2',4',5'-hexachlorobiphenyl in the rat. Xenobiotica, 1985. 15: p. 458-491.

173. Krauthacker B., Alebic-Kolbah T., Buntic A., DDT residues in samples of human milk, and in mothers' and cord blood serum, in a continental town in Croatia (Yugoslavia). Int.Arch.Occup.Environ.Health, 1980. 46: p. 267-273.

174. Waliszewski S., Szymczynski G., Determination of selected chlorinated pesticides, bound and free, in human semen. Arch.Environ.Contam.Toxicol., 1983. 12: p. 577580.

175. Noguchi T., Charman W., Stella V., Lymphatic appearance of DDT in thoracic or mesenteric lymph duct cannulated rats. Int.J.Pharm., 1985. 24: p. 185-192.

176. Sasaki К., Ishizaka Т., Suzuki Т., Organochlorine chemicals in skin lipids as an index of their accumulation in the human body. Arch. Environ. С ontam.Toxicol., 1991. 21: p. 190-194.

177. Noren K., Lunden A., Pettersson E., Methylsulfonyl metabolites ofPCBs and DDE in human milk in Sweden, 1972-1992. Environ.Health Perspect., 1996. 104: p. 766772.

178. Abad A., Moreno M.J., Montoya A., Development of monoclonal antibody-based immunoassays to the N-Methylcarbamate pesticide carbofuran. J.Agric.Food Chem., 1999. 47: p. 2475-2485.

179. Wilson M.B., Nakane P.K., Immunofluorescence and related staining techniques. 1978, Elsevier: Amsterdam, p. 215-224.

180. Massoom M., Townshend A., Determination of glucose in blood by flow-injection analysis and a immobilised glucose oxidase column. Anal.Chim.Acta, 1984. 166: p. 111-118.

181. Зайцева H.B. Изучение биоспецифических взаимодействий методом проточного хемилюминесцентного анализа. Диссертация канд. хим. наук, 1999. Москва: МГУ.

182. Miller J. J., Valdes R., Methods for calculating immunoreactivity in immunoassays. J.Clin.Immunoassay, 1992. 15: p. 97-107.

183. Abad A., Manclus J.J., Mojarra F., Mercader J.V., Miranda M.A., Primo J., Guardiola V., Montoya A., Hapten synthesis and production of monoclonal antibodies to DDT and related compounds. J.Agric.Food Chem., 1997. 45: p. 36943702.

184. Qubina A., Barcelo D., Marco M.-P., Effect of competitor design on immunoassay specificity: Development and evaluation of an enzyme-linked immunosorbent assay for 2,4-dinitrophenol. Anal.Chim.Acta, 1999. 387: p. 267-279.

185. Chemical Fact Sheet CAS #72559. Spectrum laboratories. 2002. http://www.speclab.com/compound/c72559.htm.

186. Hennion M.-C., Barcelo D., Strengths and limitations of immunoassays for effective and efficient use for pesticide analysis in water samples: A review. Anal.Chim.Acta,1998. 362: p. 3-34.

187. Mercader J.V., Montoya A., Development of monoclonal ELISAs for Azinophos-methyl. 2. Assay optimisation and water sample analysis. J.Agric.Food Chem.,1999. 47: p. 1285-1293.

188. Selby C., Interference in immunoassay. Ann.Clin.Biochem., 1999. 36: p. 704-721.

189. Quality Control of immunoassays for pesticide residues. 1997. Strategic Diagnostics Inc.: Newark, USA.

190. Knopp A., Knopp D., Niessner R., ELISA determination of the sulfonylurea herbicide metsulfuron-methyl in different water types. Environ.Sci.Technol., 1999. 33: p. 358-361.

191. Dankwardt A., Hock B., Simon R., Freitag D., Kettrup A., Determination of non-extractable triazine residues by enzyme immunoassay: Investigaton of model compounds and soil fulvic and humic acids. Environ.Sci.Technol., 1996. 30: p. 3493-3500.

192. Sullivan J.J., Goh K.S., Evaluation and validation of a commercial ELISA for diazinon in surface waters. J.Agric.Food Chem., 2000. 48: p. 4071-4078.

193. Fane M., Qubina A., Marco M.-P., Ginebreda A., Tirapu L., Barcelo D., Evaluation of 4-nitrophenol ELISA kit for assessing the origin of organic pollution in wastewater treatment works. Environ.Sci.Technol., 1999. 33: p. 3898-3904.

194. Cairoli S., Arnoldi A., Pagani S. Enzyme-linked immunosorbent assay for the quantification of the fungicide tetraconazole in fruits and fruit juices. J.Agric.Food Chem., 1996. 44: p. 3849-3854.

195. Pavon J.L.P., Rodriques-Gonzalo E., Christian G.D., Ruzicka J., Universal sandwich membrane cell and detector for optical flow injection analysis. Anal.Chem., 1992. 64: p. 923-929.

196. Liu H., Yu J.C., Bindra D.S., Givens R.S., Wilson G.S., Flow injection solid-phase chemiluminescent immunoassay using a membrane-based reactor. Anal.Chem., 1991. 63: p. 666-669.

197. Morais S., Gonzalez-Martinez M.A., Abad A., Montoya A., Maquieira A., Puchades R., A comparative study by the enzyme-linked immunofiltration assay of solid phases used in the development of flow immunosensors. J.Immunol.Methods, 1997. 208: p. 75-83.

198. Gonzalez-Martinez M.A., Morais S., Puchades R., Maquieira A., Abad A., Montoya A., Monoclonal antibody-based flow-through immunosensor for analysis of carbaryl. Anal.Chem., 1997. 69: p. 2812-2818.roer;' ' А л ГОСУД^1. BHBjíüwaEKA1. ГО 1<ПОЬ- & -02