Формирование, ультраморфология, биология и экология мирацидия Fasciola hepatica L., 1758 тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.19, доктор биологических наук Соколина, Флюра Мухаметгалеевна

• Соколина, Флюра Мухаметгалеевна
• доктор биологических наук
• 2005

Оглавление диссертации доктор биологических наук Соколина, Флюра Мухаметгалеевна

Введение.6

1. Историческая справка.9

2. Материал и методы экспериментальных исследований.16

3. Жизненный цикл Fasciola hepatica L., 1758.21

3.1. Марита - половозрелая фаза гермафродитного поколения.24

3.1.1. Формирование яйца фасциолы в половых протоках мариты.41

3.1.2. Зависимость развития яиц Fasciola hepatica от температуры и освещенности внешней среды.50

3.1.3. Способы массового выведения мирацидиев Fasciola hepatica из яиц.53

3.2. Мирацидий Fasciola hepatica.55

3.2.1. Морфология мирацидия Fasciola hepatica.58

3.2.1.1. Покровы и ткани мирацидия Fasciola hepatica.58

3.2.1.2. Железы внешней секреции мирацидия Fasciola hepatica.81

3.2.1.3. Нервная система мирацидия Fascioia hepatica.92

3.2.1.4. Половые элементы мирацидия Fascioia hepatica.99

3.2.1.5. Выделительная система мирацидия Fasciola hepatica.104

3.2.2. Биология мирацидия Fasciola hepatica.116

3.2.2.1. Энергетические запасы мирацидия Fasciola hepatica, их динамика и расходование.116

3.2.2.2. Поведенческие реакции мирацидия Fasciola hepatica.121

3.2.2.3. Продолжительность жизни мирацидия Fasciola hepatica.125

3.2.3. Экология мирацидия Fasciola hepatica.128

3.2.3.1. Результаты исследований моллюсков Татарстана.133

3.2.3.2. Эксперименты по заражению моллюсков мирацидиями печеночной двуустки.134

3.2.3.2.1. Аквариумное содержание и транспортировка моллюсков.134

3.2.3.2.2. Получение яиц моллюсков в экспериментальных условиях.136

3.2.3.3.3. Результаты лабораторного заражения видов моллюсков мирацидиями Fasciola hepatica.139

3.2.3.3.4. Строение эпителия, тканей моллюсков и причины, мешающие проникновению мирацидия Fasciola hepatica и развитию в неспецифических хозяевах - моллюсках.151

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Формирование, ультраморфология, биология и экология мирацидия Fasciola hepatica L., 1758»

Наука о паразитических червях - гельминтология - была основана в нашей стране академиком К.И.Скрябиным. Объекты исследования очень многочисленны и объединяют около 9 тысяч видов плоских червей (тип Plathelminthes), около 100 тысяч видов круглых червей (тип Nema-thelminthes) и около 500 видов скребней (тип Acanthocephala). Большинство из них эндопаразиты и по локализации часто узко специфичны."Несмотря на морфологические различия паразитические черви составляют единую экологическую группу. Они объединяются характером адаптаций к среде обитания - живому организму хозяина. Вот почему у червей разных экологических групп есть ряд общих особенностей и общее направление их эволюции" (Догель, 1962).

Поселяясь в органах и тканях, они вызывают патологические изменения, разрушая органы, отравляя организм продуктами жизнедеятельности.

Одним из представителей плоских паразитических червей является печеночная двуустка - Fasciola hepatica Linnaeus, 1758.

Тип Плоские черви представлен животными, у которых впервые появляется двусторонняя симметрия. Тело их бесполостное, с кожно-мус-кульным мешком, замкнутым кишечником (или он редуцирован), нервной системой типа ортогон (лестничного типа), выделительной системой про-тонефридиального типа, гермафродитной половой системой. Кровеносная и дыхательная системы отсутствуют.

Тип представлен 9 классами: Turbellaria, Xenoturbellida, Gnatho-stomulida, Trematoda, Aspidogastrida, Monogenea, Gyrocotylida, Amphilinida, Cestoda. Последние 6 классов объединяют животных, ведущих исключительно паразитический образ жизни.

Велика заслуга в исследовании вопросов, связанных с трематодами, наших соотечественников: К.И.Скрябина, В.А.Догеля, Е.И.Быховской, Т.А.Гинецинской, В.В.Горохова, А.М.Сазанова, К.В.Галактионова, А.А.Добровольского, О.Ю.Семенова и многих ученых нашей огромной страны.

Фасциола печеночная относится к классу трематод, который насчитывает около 4000 видов. Они эндопаразиты позвоночных животных, обитающих в полости тела, легких, почках, органах кровеносной и пищеварительной систем. Особенностью этой группы животных является наличие сложного жизненного цикла с чередованием поколений и сменой хозяев.

Уникальный жизненный цикл трематод уже многие годы привлекает внимание исследователей. Впервые J.Steenstrup (1842) предположил, что жизненный цикл трематод нужно рассматривать как метагенез, т.е. чередование полового и бесполого поколения. В литературе обсуждаются 4 группы гипотез: метагенез, гетерогония, педогенез, полиэмбриония. Наиболее обоснованными к настоящему моменту являются глубоко проанализированные взгляды Т.Гинецинской (1968,1988) и J.Pearson (1972). Таксономическое положение печеночного сосальщика:BilateriaРаздел: двусторонне-симметричныеPlathelminthes Schneider. 1873 Тип Плоские червиTrematoda Rudolphi, 1808 Prosostomata Skrjabin, 1937 Prosostomatoinei Skrjabin et Schuiz, 1937 Fascioliformes Skrjabin et Schuiz, 1937 Fasciolidida Skrjabin et Gusch, 1962 (Prosostomata Odhner, 1911; Fasciolata Skrjabin et Schuiz, 1937) Fasciolidae Skrjabin, 1937 (Fasciolopsidae Odhner, 1911; Fasciolinae Loos, 1885) Подотряд Fasciolata Skrjabin, 1937 Род Fasciola Skrjabin, 1937Вид Fasciola hepatica Linnaeus, 1758Долгие годы печеночная фасциола была бичом животноводства. Девастация оставалась задачей первостепенной важности. Тем не менее, широкое распространение фасциолеза продолжало оставаться угрозой для здоровья человека и приносить большой экономический ущерб в сельском хозяйстве.

В мировой практике много примеров резкого ухудшения качества продукции, рождения ослабленного молодняка и массовой гибели скота при данном заболевании. Это явилось причиной разносторонних и глубоких изучений фасциолеза по всем аспектам во многих странах мира. Исследования, проведенные не только ветеринарными и медицинскими специалистами, но и биологами, значительно расширили и углубили представления о фасциолезе человека и животных.

В области изучения самих возбудителей фасциолеза и его промежуточных хозяев проведены интересные исследования по морфологии,КлассПодклассПодподклассНадотрядОтрядСемействофизиологии и биохимии с приминением современных электронно-микроскопических, гистохимических и биохимических методик.

Многие годы основное внимание уделялось изучению половозрелой стадии гермафродитного поколения, паразитирующей в организме позвоночных животных и человека.

Публикации о строении первой личиночной стадии печеночного сосальщика - мирацидия появились в 80-х годах XIX в. С 60-х годов XX столетия начали появляться интересные работы по изучению мирацидия печеночной фасциолы с использованием современной техники. Хочется отметить работы североирландского ученого L.Threadgold (19621966 гг.) и ученых школы R.Wilson (1968-1974 гг.). Гельминтологические исследования в Казанском университете начались в 50-х годах прошлого века (Любарская, Голубев, Соколина, 1997,1999). Исследования и публикации по морфологии, биологии, экологии мирацидия печеночной фасциолы, изученных на световом, фазово-контрастном и электронном микроскопах, были обобщены в диссертации (Соколина, 1970).

1. ИСТОРИЧЕСКАЯ СПРАВКАFasciola hepatica L, 1758 - широко распространенный возбудитель фасциолеза млекопитающих, принадлежащий к тем сравнительно немногочисленным видам червей, которые приспособились паразитировать на широком круге хозяев (рис. 1). Фасциолез продолжает быть гельминтозом номер один в России и на всех континентах мира.

Известно, что в России при убое крупного рогатого скота в среднем 89% голов поражены фасциолезом. Подвергаются поражению и дикие животные. Паразитирование в организме фасциолы открывает путь для внедрения в ткани органов вирусам и бактериям. В комплексе они приводят к гибели животного.

Известны спородические случаи их паразитирования в печени и желчных протоках человека. В работе Н.Сорокиной, А.Москвина и В.Горохова (2003) отмечается фасциолез человека более чем в 42-х странах мира. По данным ВОЗ количество случаев заболевания человека фасциолезом достигло 2594. В 1965 г. был зарегистрирован 131 случай заболевания в Советском Союзе. Наиболее неблагополучными по фасциолезу человека странами признаны Франция (963 случая), Португалия (538), Испания (142), Великобритания (93). Диагностические ошибки были исключены. N.P.Ahrens и H.Berning (1968) отмечают 100 случаев на Кубе в 1948 г. и 45 случаев в Западной Германии. Совсем недавно (1989-1991 гг.) в Иране была вспышка фасциолеза: заболело более 10 тысяч человек, из которых 4 тысячи детей (Яхонтов, Яхонтова, 1965). Процесс заболевания протекал остро и крайне тяжело (Progres, 2002). Фасциола вызывает воспалительный процесс, являющийся следствием как механического действия, так и раздражения тканей токсинами, действует угнетающе на функции пищеварительной системы, подавляет защитные функции организма, что облегчает проникновение инфекций и способствует заболеваниям.

Печеночно-глистная болезнь известна с давних времен. Указания о ней относятся еще к 1379 г. Вначале фасциолу называли Distomum hepaticum- печеночная дистома, а заболевание, вызываемое ею, дисто-матозом. В народе названий этого заболевания очень много, что свидетельствует о распространенности и давней его известности (желчно-глистная болезнь, гнилостная болезнь, мотилица, лизовец и т.д.).

Появление паразитов глубоко внутри живого тела, где ожидали встретить только элементарные составные части организма, удивляло и возбуждало у людей необычный интерес к этим животным. Вопрос о происхождении гельминтов стал предметом усердных исследований представителей науки.

Происхождение эндопаразитов вначале рассматривалось или как самозарождение внутри органов, в которых их находили, или же как результат попадания туда извне, из оплодотворенных яиц.

В XVI в. впервые стали употребляться очки и увеличительные стекла. Примитивные комбинации последних привели к созданию микроскопа. Его усовершенствование зависело от искусства шлифования стекол, которым и владел один из первых микроскопистов Антоний Левенгук (Leeuwenhoek, 1632-1723), предположивший, что планарии, попадая в кишечник, превращаются во взрослую форму фасциолы.

Как же шла расшифровка сложного жизненного цикла трематод?Рис. 1. Жизненный цикл Fasciola hepatica L, 1758 (по Здун, 1960) Fig. 1. Of Fasciola hepatica L, 1758 the life cycleПервые сведения о трематодах мы встречаем в работе итальянского ученого Francesco Redi (1626-1698).

В1818 г. Л.Боянусом (Bojanus, 1776-1827) были обнаружены у Lymnaea stagnalis живые трубки (редии), которые содержали зародыши церкарий. Он назвал их "желтыми гельминтами". В 1819 г. он доказал, что редии есть не что иное, как зародыши трематод. Это открытие имело большое значение для последующего изучения биологии развития сосальщиков.

Первыми успехами в исследовании трематод мы обязаны В.Мелису (Mehlis), который в 1831 г. написал, что яйца некоторых дистом содержат инфузориоподобный эмбрион, снабженный мерцательным эпителием, иногда имеющий глазное пятно и плавающий по выходе из яйцевых оболочек, как инфузория. Речь шла о мирацидиях, развивающихся из яиц, отложенных в воду. По присутствию у них мерцательного эпителия и глазного пятна можно было предположить, что они предназначены жить некоторое время на свободе.

Эти открытия были подтверждены S.Siebold (1835), который обнаружил инфузориоподобный эмбрион у Monostomum mutabile подобный "желтому гельминту" Боянуса. Так были связаны два звена одной цепи.

Церкарии впервые описаны в 1738 г. L.Swammerdam (1637-1680). Несмотря на сходство между церкариями и дистомами, никто не сделал попытки выяснить характер их связи. Видимо, причиной было влияние господствовавшей тогда теории "самозарождения", тормозившей развитие научных знаний. Только в 1823 г. S.Ehrenberg (1795-1876) окончательно отнес их к дистомам (по Schwarze, 1885).

В1842 г. J.Steenstrup (1842) определил новое направление в изучении трематод - исследование смены поколений в их жизненном цикле. Ученым была высказана мысль, что спороцисты и редии происходят из ми-рацидиев трематод, а церкарии являются личинками сосальщиков. Это сочинение сделало доступным научному пониманию многие, до того времени известные неполно и отрывочно, факты из истории развития низших животных. "После открытий и сообщений J.Steenstrup нельзя было долго оставаться в сомнении, что есть виды животных, потомство которых только во втором и третьем поколениях возвращается к первоначальной форме полового животного и что к таким-то видам принадлежат и многочисленные глисты" (Leuckart,1881).

Указанием на то, что церкарии, которых считали до этого имеющими самостоятельное происхождение, представляют личиночные стадии сосальщиков, сразу была решена судьба целой большой группы паразитов.J.Steenstrup постарался полным описанием проведенных им наблюдений поставить свои взгляды вне сомнений. Он заметил, что церкариинередко проникают в тело улиток через покровы и, утратив хвост, превращаются в паразита, не отличающегося от бесполых сосальщиков.

Большая заслуга S.Siebold не только в том, что он выяснил ряд заблуждений J.Steenstrup, но и в полученных новых данных по развитию трематод. Им в 1842-1844 гг. был описан выход церкариев (Cercaria armata) из моллюска (Lymnaea stagnalis) и внедрение в личинки насекомых. Это подвело его к выводу, что данная трематода достигает половой зрелости лишь в другом хозяине.

Исследования J.Steenstrup указали направление и цель дальнейших работ в этой области; за немногими исключениями, все опубликованные с тех пор работы о юных формах дистом обнаруживают тенденцию установить их связи друг с другом и с животными, размножающимися половым путем. Сюда относятся исследования П.Бенедена (Beneden, 1858), Г.Вагнера (Wagener, 1866), Р.Пагенштехера (Pagenstecher, 1857), Р.Лей-карта (Leuckart, 1883), А.Томаса (Thomas, 1883), Е.Шварца (Schwarze, 1885).

Честь первого опыта принадлежит Г.Вагнеру (Wagner, 1866), который путем заражения Cyclas и Pisidium мирацидиями D.cygnoides получил зрелые спороцисты, производившие церкарий.

В 1815 г. Е.Вейнланд (Weinland, 1866) обнаруживает в печени Lymnaea truncatula церкарий и высказывает предположение, что это личинка фас-циолы, и, следовательно, малый прудовик является промежуточным хозяином фасциолы. С этого времени быстро накапливается материал по сравнительному изучению цикла развития трематод и, казалось, остается один шаг к полному выяснению биологии фасциолы. Этот шаг был сделан лишь после длительных исканий и, как это часто бывает, одновременно разными людьми и в разных местахВ 1883 г. появляются две капитальные работы: Р.Лейкарта (Leuckart) в Германии и молодого англичанина А.Томаса (Thomas), в которых детально расшифровывается цикл развития фасциолы и устанавливается промежуточный хозяин - Galba truncatula Muller (Lymnaea minuta Drap.).

Выяснение специфичного промежуточного хозяина не успокоило такого исследователя, как Р.Лейкарт. Он проследил все стадии развития печеночной двуустки в улитке (что ему удалось в совершенстве), как этого до сих пор не было сделано ни для одного сосальщика. Такое выяснение развития данного гельминта в улитке создало славу его зоологическим исследованиям, так как ход развития и размножения паразита очень запутан и едва ли удалось бы найти связь между различными стадиями развития двуустки, если бы путем тщательной экспериментальной работы Р.Лейкартом не была доказана связь между многообразными формами ее развития. Причем оказалось, что партеногенетическое поколение паразитирует тоже в печени промежуточного хозяина. Вслед за этим появилась работа H.Schaunsland (1883) с подробным гистологическим исследованием и описанием эмбриогенеза.

К настоящему времени имеется ряд прекрасно выполненных работ, посвященных исследованию различных стадий развития печеночной двуустки. Вопросам сперматогенеза, овогенеза, оплодотворения, образования яиц, эмбрионального развития фасциолы, а также цикла развития зародышевых клеток посвящены работы L.Henneguy (1902, 1906), W.Schubmann (1905), W.Ortmann (1908), A.Schellenberg (1911), A.Railliet, G.Moussu, A.Henry (1913), E.Weiland, T.Brand (1926), H.Lievre (1932), P.Kouri, R.Nauss (1939), H.Yosufzai (1953 a, b, c), S.Bednarz(1962).

Тщательное исследование печеночной двуустки провел в дореволюционной России Д.Синицын (1914). Ему удалось уточнить развитие фасциолы в дефинитивном хозяине, что не смогли сделать А.Томас и Р.Лейкарт. В 1939 г. W.Schumacher повторил исследования Д.Синицына по изучению путей перемещения фасциолы в окончательном хозяине.

Большой вклад в изучение проблем фасциолеза сделали российские ученые. Появился ряд фундаментальных работ, в которых рассматриваются отношения паразита с хозяином, обеспечивающим ему жизнь (Жадин, 1926, 1937; Панова, 1955; Скрябин, Шульц, 1935; Здун, 1955, 1956, 1960; Демидов, 1965; Гинецинская, 1968; Dobson, 1988; Theron, Gerard, Moneae, 1992).

Изучение трематод на различных стадиях развития имеет большое теоретическое и практическое значение. Научная мысль давно работает над вопросом борьбы с фасциолезом. Способы борьбы прежде всего определяются и вытекают из биологии паразита, цикл жизни которого состоит из большого количества звеньев, связанных как между собой, так и с окружающей средой (Горохов, 1978).

На международной конференции по фасциолезу, состоявшейся 1718 мая 1968 г. в Варшаве, Е.Жарновски (Zarnowski) отмечал, что за последние 20 лет лаборатории разных стран всесторонне изучали биологию возбудителя, эпизоотологию и эпидемиологию фасциолеза животных и человека. Однако остается актуальной необходимость дальнейших исследований особенностей фасциолы.

Нужны исследования по уточнению облигатных и факультативных промежуточных хозяев в различных климатических зонах. Но до сих пор фас-циола наиболее исследована на двух стадиях развития: на стадии половозрелой формы и на стадии церкарии.

В данной работе уделено большое внимание изучению мирацидия Fasciola hepatica L.,1758 на электронно-микроскопическом уровне.

Мирацидий - первая личиночная фаза в жизненном цикле сосальщиков. Его биологическая роль заключается в осуществлении заражения первого промежуточного хозяина. Нас интересовали условия развития мирацидия, строение, характер проникновения в моллюсков и возможность его развития в тканях неспецифичных хозяев. Это необходимо было выяснить в связи с распространенностью фасциолеза среди животных (крупный и мелкий рогатый скот, свиньи, птицы) и людей там, где малый прудовик-специфичный промежуточный хозяин фасциолы - очень редок или совсем отсутствует.

В опытах использовались самые распространенные в Татарстане моллюски из того же семейства, что и специфичный промежуточный хозяин: Lymnaea stagnalis L., Lymnaea ovata D., Lymnaea palustris (Mull), Lymnaea auricularia, Lymnaea pereger, Lymnaea turricula и Lymnaea truncatula. Перед нами ставилась следующая задача: если в перечисленных моллюсках партениты не будут развиваться, попытаться выяснить причины, препятствующие этому. Если развитие окажется возможным, то найти и определить те пути и способы, посредством которых происходит заражение неспецифичных промежуточных хозяев, узнать, как идет в моллюсках развитие многих стадий фасциолы.

Эта задача может быть удовлетворительным образом решена только в том случае, если ей будет предшествовать изучение таких тесно связанных с нею вопросов, как состояние мирацидия, выходящего из яйца, связь этого состояния с продолжительностью инкубации, с освещенностью, температурными факторами (Leuckart, 1883; Thomas, 1883; Mattes, 1926,1936; Griffiths, 1939; Dinnik, Dinnik, 1959; Rowan, 1956; Лутта, 1939; Соколина, 1969, 1970, 1976, 1978, 1979).

Для решения ряда неясных вопросов мы уделили большое внимание исследованию на электронно-микроскопическом уровне тонких структур мирацидиев.

До настоящего времени морфологические работы не утратили своего значения, тем более что исследования с электронным, поляризационным и фазово-контрастным микроскопами дают возможность глубже проникнуть в морфологические особенности организма (Сое, 1896; Kummel, 1969; Bednarz, 1962; Threadgold, Gallagher, 1966; Wilson, 1968,1969,1970,1971; Irwin, Thteadgold, 1972; Bennett, Threadgold, 1975; Соколина, 1969, 1970, 1976, 1978, 1979, 1983, 1986, 1987).

Наши работы ведутся в эволюционно-морфологическом направлении. В их основе стоит эколого-морфологический принцип диалектического2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙИсследовались мирацидии дигенетической трематоды Fasciola hepatica L, 1758 из семейства Fasciolopsidae Odhner (Fasciolidae Skr., Fasciolinae Loos) и моллюски Lymnaea stagnalis (Linnaeus, 1758) - большой прудовик, Lymnaea ovata (Draparnaud, 1805) - овальный прудовик, Lymnaea palustris (Muller, 1774) - болотный прудовик, Lymnaea truncatula (Muller,M7 A) - малый прудовик, L.auricularia (Linnaeus, 1758) - ушковый прудовик, L.pereger (Muller, 1774) - вытянутый прудовик, L.turricula (Hartmann, 1836) - башенковидный прудовик из семейства Lymnaeidae, Physa fontinalis (Draparnaud, 1805) и Aplexa hypnorum (Linnaeus, 1758) из семейства Physidae{j\o Жадину, 1952). Изучения велись с 1966 г.: исследовались стадии развития фасциолы, промежуточные хозяева трематод -моллюски, паразито-хозяинные отношения (фасциолы и моллюсков).

Мариты печеночной фасциолы собирали при вскрытии печени коров в убойном цехе Казанского мясокомбината и в лабораторных условиях получали от них яйца. Моллюски добывались из водоемов Алексеевского, Алькеевского и Высокогорского районов Республики Татарстан, из Волжских заливов в районе Биологической станции Казанского университета в Зеленодольском районе. Малый прудовик был собран в канавах и ручьях, расположенных на выпасах и скотоперегонных путях станицы Архон-ская в Северной Осетии и в Закарпатье. Моллюсков собирали для получения стерильного потомства и для вскрытий на зараженность.

Прежде всего были разработаны методики содержания мариты фасциолы, получения яиц, инкубации, продления жизни и проникающей способности мирацидиев (Соколина, 1969,1970,1976). Затем методика подготовки мирацидия для изучения в световом микроскопе (Соколина, 1969, 1970), в фазово-контрастном (Соколина, 1969 а), в электронном (Соколина, Голубев, 1971). Умеренное количество паразитов в печени коров уже вызывает резкие паталого-анатомические изменения желчных путей. При высокой зараженности протоки печени сильно утолщаются и покрываются известью. Е.Павловский (1935) объясняет эти изменения как механическим и химическим воздействием паразита на их стенку, так и влиянием микробной флоры желчных путей в комбинации с патогенным действием двуусток.

Благодаря сильному развитию соединительной ткани крупные желчные ходы просвечивают в виде бело-желтых тяжей. При разрезе констатируется большое сопротивление желчных протоков, в которых паразитируют или паразитировали мариты. Вскрытие печени поперечными разрезами на расстоянии 1 см друг от друга и легкое надавливание на желчные протоки перед линией разреза приводили к выскальзыванию фасци-ол из желчных протоков.

Большая часть зрелых яиц оставалась в желчном пузыре. Их взбалтывали и сливали в кристаллизатор, желчь сливали, яйца отмывали дистиллированной водой, обрабатывали в соответствии с методикой М.Жеппс (Jepps, 1933) и ставили в термостат.

Применяли метод иссечения половых протоков двуустки, рекомендованный доктором Илсоном. При этом в воде оставались кусочки ткани, что приводило к загниванию среды, размножению бактерий, которые мешали получить чистую культуру мирацидиев, необходимых при электронно-микроскопическом исследовании и изготовлении гистологических препаратов.

Выращенные из яиц мирацидии использовались для исследования их морфологии и биологии, для заражения моллюсков и получения партенит.

Измерения и исследования подвижных частей тела мирацидия (размера апикальной папиллы-хоботка, ресничного покрова, изучение "мерцательных" клеток протонефридиев) проводились с фазово-контрастным устройством микроскопа МБИ-6. На опыте мы убедились, что этот способ микроскопирования должен обязательно иметь место при изучении живых объектов.

Тонкая структура мирацидиев просматривалась на электронном микроскопе типа JEM-7A.

В электронной микроскопии существует отработанная схема последовательности операций, которая включает ряд этапов: фиксацию, обезвоживание, заливку в эпоксидные смолы, полимеризацию, получение ультратонких срезов, контрастирование срезов, просмотр срезов в электронном микроскопе, получение фотографий и их интерпретацию.

В качестве фиксаторов применяют различные высшие альдегиды, че-тырехокись осмия, перманганат калия и другие вещества, растворенные или разведенные в буферных смесях (Reynolds, 1963). Чаще всего в практике используются какодилатный и фосфатный буферы. Фиксирующие растворы имеют рН равный 7,2-7,4. Опытным путем установлено, что для морфологических исследований предпочтительнее сильно разветвленные альдегиды, поскольку они обеспечивают достаточно хорошую сохранность структуры.

Фиксация нуклеопротеидов осуществляется за счет взаимодействия альдегидов с пуриновыми и пиримидиновыми основаниями. С углеводами альдегиды не реагируют. Фиксация гликогена осуществляется, по-видимому, за счет стабилизации окружающих белков.

Сама по себе альдегидная фиксация придает срезам ткани лишь незначительный контраст, как впрочем и фиксация только в 0s04 или КМп04. Это затрудняет ориентацию, несмотря на наличие в срезах небольших количеств довольно контрастного электронно-плотного продукта реакции. При такой обработке для клетки характерно негативное изображение всех мембранных структур. Они выглядят как светлые линии, ограниченные прилежащим материалом. Хороший контраст при этом приобретает хроматин, несколько более слабый - ядрышко и рибосомы в цитоплазме. Частично высокую электронную плотность имеют и лизосомы. Умеренно контрастируются матрикс митохондрий и цитоплазмы. Липидные гранулы при этом вымываются.

Для гистохимических исследований важны температура, длительность фиксации, концентрация альдегидов. Чем дольше длится фиксация, тем сильнее выражена инактивация фермента и денатурация ткани. Поэтому в растворе альдегида следует фиксировать объект столько, сколько нужно, чтобы стабилизировать тканевые структуры, сохранив при этом хотя бы частичные свойства, выявляемые гистохимически.

Среди альдегидных фиксаторов хорошо себя зарекомендовал глюта-ральдегид, который предлагается Р.Гейером (1974) в концентрациях 2,56,5%, с временем фиксации от 0,5 до 2 часов.

По мнению ряда исследователей, занимающихся электронной микроскопией, наилучшими фиксаторами общего назначения для работы со всеми тканями являются осмиевые фиксаторы (Пиз, 1963). В последние годы (Уил ки, 1975) появился ряд работ с рекомендацией к использованию двойной фиксации - первичная фиксация в глютаральдегиде с последующей дополнительной фиксацией в четырехокиси осмия. Двойная фиксация обеспечивает более надежную стабилизацию материала, в том числе и низкомолекулярных соединений. Если фиксация в глютаральдегиде вызывает менее значительные конформационные изменения мембранных белков, чем 0s04, то постфиксация в четырехокиси осмия желательна для более полной стабилизации спиральных структур. Помимо этого, постфиксация в 0s04 уменьшает экстракцию липидов из ткани. После такой постфиксации липосомы и мембраны приобретают высокую электронную плотность. Одновременно обеспечивается и контрастирование матрикса цитоплазмы и митохондрий, которые приобретают более высокую плотность, чем после фиксации только в 0s04. Известно, что четырехокись осмия действует не только как фиксатор, но и как контрастирующее вещество, поскольку часть восстановленного осмия остается в ткани.

Для гистохимических исследований важна температура фиксаторов. Некоторые авторы считают, что фиксаторы, содержащие четырехокись осмия, будучи охлажденными, обеспечивают лучшую сохранность тонких структур ткани. Существует мнение, что толстые слои ткани при охлаждении фиксируются гораздо лучше, чем при других условиях (Пиз, 1963).

Применяя постфиксацию в 0s04, однако, не следует использовать смесь альдегида и 0s04, поскольку эти соединения вступают друг с другом в реакцию, в результате которой свойства такого раствора меняются неконтролируемым образом. Образование поперечных связей при такой фиксации протекает менее интенсивно, чем при использовании одного наиболее активного компонента (Голубев, Галкина, Дыганова, 1986).

Ультратонкие срезы для электронной микроскопии контрастировались (окрашивались).

В электронной микроскопии, говоря об окрашивании, подразумевают импрегнацию срезов атомами тяжелых элементов, которые интенсивно рассеивают электроны и тем самым увеличивают контрастность изображения. Больший контраст может быть достигнут путем повышения плотности структур. Для этой цели применяют контрастирующие вещества с высоким молекулярным весом, лучше всего тяжелые металлы и их соединения. При контрастировании биологического материала увеличение электронной плотности определяется общим числом захваченных тканью атомов или молекул контрастирующего вещества. Таким образом, окончательная электронная плотность зависит от массы молекул (атомов) контрастирующего вещества, от числа связывающих его групп в тка20Материал и методы экспериментальных исследованийни и от числа захваченных тканью молекул (атомов) этого вещества. Из этого следует, что интенсивность контрастирования находится в обратной зависимости от толщины среза.

Для фотографирования применялись диапозитивные особоконтраст-ные пластинки светочувствительностью 0,5 единиц.

При выполнении технических операций (заливке материала, заточке блоков, сборе срезов на сеточки и их хранении) нами учитывались все ценные советы, содержащиеся в работах J.Gaulfield (1957); В.Машан-ского, М.Винникова (I960); Л.Гольдина (1963); E.Reynolds (1963); В.Берюзовой и коллег (1963); А.Голубева, Л.Галкиной, Р.Дыгановой (1986).

При подготовке мирацидиев к исследованию в электронном микроскопе мы постоянно ориентировались по срокам проводки материала для заливки в парафин. В результате этого нам удалось разработать схему для электронно-микроскопического исследования мирацидия, удовлетворившую нас в техническом отношении.

Исследовались живые и фиксированные мирацидии. Тотальные препараты окрашивались по Фельгену, парафиновые срезы - гематоксилином по Гейденгайну и МаллориНа инвазию Fasciola hepatica исследовались природные моллюски 9 видов: L.truncatuia, L.stagnaiis, L.paiustris, L.ovata, L.auricuiaria, L.pereger, L.turricuia, Ph.fontinalis, Apiexa hypnorum, собранные в районах, неблагополучных в отношении фасциолеза.

Для заражения использовались стерильные моллюски этих же видов, выращенные в лабораторных условиях. Специфичный промежуточный хозяин малый прудовик (L. truncatula)служил контролем.

Гликоген выявляли с помощью йодной реакции и гистохимической реакции Шиффа. Количество жира определяли при окрасках Суданом III и черным Суданом.

Методики, применявшиеся при изучении развития эмбриона в зависимости от температуры и освещенности, получении одновозрастных мирацидиев и продлении срока их жизни, разработанные нами, изложены в соответствующих разделах.

3. ЖИЗНЕННЫЙ ЦИКЛ FASCIOLA HEPATICA L, 1758Многие особенности исходных представителей плоских червей сохранились в строении низших турбеллярий.

Трематоды произошли от довольно высоко организованных турбеллярий, но строение и жизненные циклы изменились в связи с эндопарази-тизмом и образовали самостоятельную эволюционную ветвь. "Жизненный цикл дигенетических трематод состоит из двух правильно сменяющих друг друга поколений: одного развивающегося из оплодотворенных яиц, и другого - из особых зачатковых клеток, которым можно приписать значение партеногенетических яиц. Эти поколения отличаются друг от друга не только способом размножения, но также и строением и образом жизни" (Синицын, 1914).

Эволюция трематод начинается с момента исчезновения свободно-живущего поколения. Появляется стадия трематод, паразитирующих в позвоночных животных.

Выясняется, что жизненные циклы идут с чередованием паразитизма парте-ногенетического поколения в организме моллюсков с паразитизмом герма-фродитного поколения в организме позвоночных животных и человека.

Д.Синицын (1905,1911,1914) считал, что мариты и партениты - самостоятельные половозрелые поколения, независимо друг от друга перешедшие к паразитическому образу жизни. Он предположил, что партениты, живущие в моллюсках, более древние паразиты, так как моллюски на земле появились задолго до позвоночных животных, в которых паразитируют гермафродитные поколения.

Жизненный цикл трематод полностью расшифровали в конце XIX в. Р.Лейкарт (1881, 1883) и А.Томас (1883) на примере Fasciola hepatica L., 1758 (рис.2).

В ходе жизненного цикла печеночной фасциолы неоднократно происходит смена среды их обитания и чередование паразитических и свобод-ноживущих стадий.

Взрослая фасциола - марита, спороцисты и редии ведут паразитическое существование. Мирацидии и церкарии - свободноплавающие в воде личинки. Такой образ жизни накладывает отпечаток на некоторые стороны их физиологии.

Жизнь мариты, спороцисты и редии проходит в тканях хозяина (марита - в печени позвоночных животных, спороцисты и редии - в пищеварительной железе моллюска). Эти стадии фасциолы попадают в условия кислородного голодания и переходят на анаэробный обмен. Источникомэнергии становится гликоген, отложенный в паренхиме, или гликоген, получаемый из организма хозяина.

Свободноплавающие стадии (мирацидии и церкарии) дышат всей поверхностью тела растворенным в воде кислородом.

Питание различных стадий фасциолы тоже отличается: мирацидии и церкарии живут за счет гликогена, накопленного в период эмбрионального развития, поэтому жизнь личинок этих двух стадий очень коротка.

Среди современных трематод наиболее примитивным считают жизненный цикл трематод подотряда Fasciolata Skijabin, поэтому их называют жизненным циклом фасциолидного типа и считают филогенетической древностью.

Ряд признаков, характерных трематодам этого подотряда, подтверждает их примитивность, так как взрослая фасциола, как и партениты, питается тканями хозяина, имеет большие яйца с запасами желтка.

Полностью сформированный мирацидий появляется в водной среде покрытым эпителиальными пластинками.

Зародышевые клетки партенит претерпевают редукционное деление. "С генетической точки зрения, - считают К.Галактионов и А.Добровольский (1998), - диплоидный (апомиктический) партеногенез функционально соответствует бесполому размножению, ибо обеспечивает тиражирование огромного количества генетических копий с наименьшими энергетическими затратами и в относительно короткий промежуток времени".

В1947 г. В.Догель создал картину разнообразия жизненных циклов в динамике, что стало основой классификации паразитических организмов, жизненные циклы которых проходят с одним, двумя, тремя и четырьмя хозяинами.

Печеночная фасциола имеетдиксенный жизненный цикл. КГалактионов и А.Добровольский (1998) относят семейство Fasciolidae к архаичным группам двуххозяинных циклов: "Таксоны трематод, для которых характерна первичная диксения, очень сильно различаются по степени специализации". Они отмечают, что для жизненного цикла этого типа паразитов "характерно отсутствие второго промежуточного хозяина, хотя соответствующая фаза развития в онтогенезе особей гермафродитного поколения имеется" (рис. 2).

Экзогенная аккумуляция в организме моллюска осуществляется активно (per cutis) плавающими мирацидиями. В дочерних спороцистах вырастают редии, способные при неблагоприятных условиях отрождать не цер-карий, а себе подобных. Церкарии аккумулируют на небольшом участке прибрежной зоны, инцистируются на растениях или поверхностной пленке. "Per os" попадают в кишечник человека или позвоночных животных и мигрируют по желчным протокам печени, разрушая ее, т.е. дефинитивный хозяин получает инвазионное начало по трофическим цепям.

Фасциолы способны осуществлять активное поступательное прямолинейное и винтовое движение in vitro. Относительная скорость поступательного движения обратно пропорциональна длине тела. Головные ганглии оказывают стимулирующее влияние на двигательную активность ииграют ведущую роль в осуществлении поступательного движения и сохранении равновесия тела. Фасциола двигается, изменяя форму тела -торзодромия. В то же время при движении она изменяет поперечное сечение тела (Зенкевич, 1944). Такое движение - основной способ движения для трематод (Русак, Папина, 1970).

3.1. МАРИТА - ПОЛОВОЗРЕЛАЯ ФАЗА ГЕРМАФРОДИТНОГОПОКОЛЕНИЯМарита печеночной двуустки - эндопаразит. Ее половозрелая фаза исследована достаточно основательно (Querner, 1929; Stephenson, 1947;Скрябин, Шульц, 1935; Brand, 1950; Mansour, 1959; Kummel, 1958; Резник, 1963; Threadgold, 1963,1966; Bennett, Wilson, Denison, 1972; Bennett, Threadgold, 1975; Buzzel, 1983; Wilson, Taylor, 1978; Moukrim, Rondelaud, 1992).

Тело фасциолы уплощено в дорзовентраль-ном направлении и имеет листовидную форму. Отмечено, что мариты, паразитирующие в желчных протоках печени небольших позвоночных животных, мельче, чем у крупного скота, где длина фасциолы достигает 5 см. В движении двуустка слегка изменяет свою форму (рис. 3).

Печеночная фасциола имеет две присоски. На дне передней бокаловидной присоски располагается ротовое отверстие. Брюшная присоска смещена к переднему концу тела и служит органом прикрепления. Передней располагается половое отверстие. У края тела несколько ближе к дорзальной стороне открывается выделительная пора.

Внутренний, или погруженный, тегумент состоит из цитоплазмы с ядрами и большим количеством митохондрий, плотно окружающих ядра. Тегумент самая чувствительная к внешним воздействиям система в организме фасциолы (Hanna, Threadgold, 1975). Он образует выросты, пронизывающие базальную мембрану и сливающиеся с наружным тегументом.

Рис. 5. Кутикулярные образования Fasciola hepatica Fig. 5. Formation in cuticulum Fasciola hepaticaПод базальной мембраной межклеточное вещество пронизывается наружными кольцевыми мышцами. Волокна этих мышц расположены поперек тела мариты. Под ними проходят продольные мышечные волокна. Третий слой состоит из диагональных и дорсовентральных пучков мышц из гладких волокон (рис. 7).

Цитоплазматический тегумент и мускульные волокна образуют "кож-но-мускульный" мешок. Он выполняет защитную и локомоторную функцию. Дорзовентральные пучки определяют сплюснутую форму тела сосальщика, делая спинную сторону слегка выпуклой, а брюшную - плоской. Все пространство между мышцами и органами мариты заполнено вакуолизированной паренхиматозной тканью, пронизанной фибриллами. Ее принято считать опорной тканью. Сокращение фибрилл обеспечивает движение мариты.

В.Н.Беклемишев дал определение первичной паренхиме как структуре, состоящей из большого числа одинаковых клеток, не слитых в синцитий, не разделенных промежуточным веществом и расположенных без каких-либо повторяющихся правильностей. Ни одно взрослое многоклеточное животное не обладает такой структурой.

Среди изученных трематод фасциола занимает первое место по количеству гликогена в тканях. Анаэробные условия жизни сопровождаются неполным распадом гликогена, поэтому крупной фасциоле необходимо большое количество гликогена и для жизнедеятельности яиц.

Паренхима фасциолы заполнена разнообразными гранулами гликогена. Особенно крупные гранулы в паренхиматозных клетках между петлями матки, кишечных ветвей и желточных протоков. В присосках, глотке и паренхиме стенок половой клоаки очень много мелких гранул. Почти отсутствует гликоген в кожно-мускульном мешке, эпителии кишечника, яичнике. Маленькие скопления иногда имеются в оболочке яичника. В железах Мелиса и стенках матки гликоген не обнаружен. Мужская половая система лишена гликогена, только мускульные стенки пениса забиты им.

Жир в теле фасциолы в малом количестве встречается в кишечном эпителии и присосках. Основная масса жира скапливается в мелких выделительных каналах. В выделительных стволах капельки жира как бы прилипли к стенкам. Есть предположение, что этот жир и жир в паренхиме тела -конечный продукт распада углеводов и как источник энергии не может быть использован (Weinland, Brand, 1926). Больше всего жира в желточных клетках на стадии формирования яйца - этот жир служит для питания развивающегося зародыша. В яичниках, в семенниках, стенках мужских и женских половых протоков, в совокупительном органе жир отсутствует (Лугга, 1939).

Рис. 8. Клетка паренхимы Fasciola hepatica.Fig. 8. Cell of parenchyma in Fasciola hepatica (x 20 000, Threadgold and Arme). N - ядро; NU - ядрышко; GER - гранулярный эндоплазматический ретикулюм; PL - первичная лизосома; М - митохондрии; G - гликогенТаким образом, в теле мариты имеется два вида жира: жир, используемый как запасное питательное вещество, и жир, являющийся конечным продуктом распада гликогена в анаэробных условиях.

В толще тканей отмечаются лакуны, заполненные жидкостью. Исследования L.Threadgold и S.Gallagher (1966) ультраструктуры тканей мариты печеночной фасциолы показали наличие выростов у паренхиматозных клеток в тегумент, в эпителий экскреторных сосудов и стенки кишечника, что наводит на мысль о связи паренхимы с внутренними органами. Видимо, сконцентрированные в клетках паренхимы питательные вещества в виде гликогена и жира принимают участие в обмене веществ.

Пищеварительная система (рис. 10) мариты печеночного сосальщика начинается ротовым отверстием в глубине передней присоски (рис. 11). Ротовая полость ограничивается дорзальной полулунной складкой. За ней располагается предглотка (praepharynx), а затем вытянутая глотка со сложной системой мускулатуры и узким просветом. Глоточная мускуРис. 9. Клетка паренхимы Fasciola hepatica.Fig. 9. Cell of parenchyma in Fasciola hepatica (x 40 000, Threadgold and Arme). M - митохондрии; MP - митохондриальный выступ; MB - митохондриальные тела; PL -первичная лизосома; SMC - гладкая мембранная цистерна; G2 - р-гликоген второго типалатура состоит в основном из радиальных волокон и небольшого слоя меридиональных, которые со стороны внутреннего просвета и внешней поверхности имеют не очень развитые кольцевые мышцы. Предглотка и глотка имеют свои специализированные мышцы: ретрактор глотки, протракторы глотки, мышцы ротовой присоски (рис. 12).

Пищевод мариты короткий, он раздваивается перед брюшной присоской в две ветви кишечника, тянущиеся вдоль всего тела и сближающиеся в его конце.

У фасциолы от главных ветвей кишечника отходят 16-19 боковых ветвей, которые образуют сложную систему, увеличивающую всасывающую поверхность кишечника.

Кишечный эпителий фасциолы представлен двумя типами клеток (Stephenson, 1947). Высокий цилиндрический эпителий покрыт на свободной поверхности щеточной каймой из микроворсинок (Gresson, Threadgold, 1959; Wotton, Sogandares-Bernal, 1963). Видимо, эти клетки секреторные и выделяют пищеварительные ферменты.

Низкий призматический эпителий тоже покрыт ворсинками, которыми адсорбирует расщепленные пищеварительными ферментами частицы. B.Dawes (1962) полагает, что функциональное состояние и секреция ферментов объясняет различие в форме клеток. На срезе можно видеть 2типа кишечного эпителия (рис. 13 А, В). Стенки мелких разветвлений кишечника имеют мускулатуру. Ротовая полость, предглотка, глотка и пищевод выстланы цитоплазматической пластинкой.

Нервная система. Одним из первых исследователей нервной системы трематод был A.Lang (1880). Он достаточно подробно описал нервную систему взрослых форм трематод, изучая их в световом микроскопе.

Взгляды на возникновение и первые этапы эволюции нервной системы червей были изложены в 1943 г. профессором Казанского университета Н.Ливановым. Его ученики продолжили исследования уровня организации и субмикроскопического строения нейронов червей, электронную микроскопию нервной системы мариты и церкарий трематод (Голубев, Фролова, 1981; Голубев, 1982).

На электронно-микроскопическом уровне мозг печеночной фасциолы был изучен R.Gresson и Z.Treadgold (1964). Результаты исследований позволили предположить о происхождении нейросекреторных клеток нервных отростков из обычных нервных клеток.

Нервная система печеночной фасциолы типа ортогон (рис. 14) представлена двумя узлами, соединенными широкой комиссурой. От узлов отходят 4 пары стволов (рис. 15).

Первая пара стволов от "мозга" идет к переднему отделу тела фасциолы. Они иннервируют ротовую присоску и передний конец тела. Разветвляясь, заходят в покровную цитоплазматическую пластинку (рис. 16).

Вторая пара стволов (вентральные) самая мощная. Они идут вдоль брюшной стенки тела рядом с кожно-мускульным мешком. До брюшной присоски эти стволы состоят из большого числа нервных клеток. После присоски стволы утоньшаются, но доходят до конечного отдела, приближаются друг к другу и соединяются.

А - кишечный эпителий с щеточной каемкой. В - клетки кишечного эпителия, ворсинками захватывающие красные кровяные тельцаЧетвертая пара стволов (дорсальные) идет вдоль спинной стороны фасциолы. На уровне брюшной присоски эти стволы становятся нитевидными.

Все последние три пары нервных стволов соединяются между собой кольцами и полукольцами комиссур. Они более сконцентрированы на двигательной передней части тела.

На задней половой части тела (Ошмарин, 1959) продольные стволы развиты слабо, комиссуры и разветвления немногочисленны. Подкожное нервное сплетение у фасциолы отсутствует.

Большая часть нервных волокон мозга и комиссур лежит в паренхиме и не имеет оболочки. Изоляция нервных клеток мозга от окружающих тканей весьма относительна. В пространстве между ними есть отростки паренхиматозных и мышечных клеток, отделенные от нейрилеммы межклеточного вещества.

Особенность нейронов трематод в изрезанности нейроплазмы инвагинациями. Рядом скапливаются митохондрии с короткими кристами и электронно-светлым матриксом, вакуоли и свободные рибосомы. А.Голубев (1982) отмечает повышенную электронную плотность матрикса клетки в местах инвагинации.

Ядра клеток имеют одно ядрышко. Нуклеоплазма светлее нейроплазмы. Хроматина немного (рис. 17).

Клетки А можно встретить в боковых стволах, в поперечных коммиссу-рах. Редко можно обнаружить в мозге и соседних с ним участках. Величина клеток 42x36 мкм. Ядра диаметром 15 мкм имеют ядрышко в центре. Для них характерно обилие вакуолярных образований в нейроплазме.

Клетки типа В встречены в боковых стволах, нервных ветвях глотки и присоски, в железах Мелиса. Размеры ее 30 х 18 мкм-33 х 27 мкм. Ядро в диаметре 12 мкм, нейроплазма бедна или лишена вакуолей.

Перикарион любых нейросекреторных клеток содержит рибосомы (одиночные или "розетками"), развитый гранулярный эндоплазматический ре-тикулум, комплекс Гольджи и секреторные гранулы (возможно, нейросек-реторные) с диаметром от 800 до 1000 А. Они окружены мембранами и, возможно, транспортируются по аксонам нервных клеток.

Рис. 16. Сагиттальный разрез переднего отдела тела Fasciola hepatica. Fig. 16. Sagittal section of forefront in Fasciola hepatica.

В 1975 г. K.Shya-masundari и K.Rao опубликовали работу по цитохимическому анализу. мозга фасциолы. Специфические красители плохо окрашивали ней-росекреторные клетки. Было выяснено, что в связи с образом жизни нервные клетки печеночного сосальщика полностью утрачивают способность менять свою активность под воздействием света.

Периферическая нервная система фасциолы представлена субэпителиальными и интраэпителиальными сплетениями, которые расположены под базальной мембраной, пронизывают ее и внедряются в межклеточное пространство эпителия. Здесь же располагаются чувствительные нейроны с эффекторными окончаниями. Органы чувств развиты слабо в связи с паразитизмом.

Экскреторная система печеночного сосальщика представлена выделительной системой и паранефридиальным плексусом.

Выделительная система состоит из густой сети собирательных каналов, входящих в непарный канал и заканчивающихся терминальным отверстием со сфинктором (рис. 19).

В исследованиях F.Querner (1929) и W.Stephenson (1947) отмечается, что мерцательные клетки выделительной системы для печеночного сосальщика не обнаружены. Поэтому делается предположение, что па-ранефридиальный плексус становится основным органом выделения (рис. 20).

Рис. 18. Перикарионы двух нейронов Fasciola hepatica (по Голубеву, Фроловой, 1981).Fig. 18. Pericarions of 2 Fasciola hepatica neurous.

Я - ядра; НП - нейроплазма; М - митохондрия; Р - рибосомы;В - вакуоль х 23 ОООПаранефридиальный плексус фасциолы представлен сетью сосудов, заполненных гранулами и каплями жира. Эти сосуды не имеют ничего общего с сосудами выделительной системы. Они образованы вакуолизиро-ванными и анастомозированными клетками, расположенными друг за другом. Границы между клетками исчезают и образуются внутриклеточные каналы. Эти каналы пронизывают паренхиму и в основном располагаются в дорзальной части тела мариты под кишечником.

Соединяясь, они образуют крупные каналы. В передней части тела капел-ляры объединяются в 4 боковых канала, два из которых расположены дор-запьно, два - вентрально и впадают в главный канал за брюшной присоской.

Главный канал паранефридиального плексуса располагается между главными ветвями кишечника фасциолы и приближен к дорзальной пленке тела. Ближе к конечному отделу канал плексуса сужается. Этот канал -общий для выделительной системы и паранефридиального плексуса.

Изучая тонкую структуру экскреторной системы мариты фасциолы E.Pantelouris и L.Threadgol (1963) обнаружили микроворсинки на стенках протоков, а в эпителии - пузырьки, что говорит о их секреторной функции.

Рис. 19. Выделительная система Fasciola hepatica. Fig. 19. Shematic structure the excretory system inFascioia hepatica (after Sommer, 1880). 1- вентральные передние каналы; 2 - главный ствол; 3 -боковые каналы; 4 - тончайшие канальцы; 5 - выводное отверстие; 6-дорзальный передний каналРис. 20. Схема паранефри-диального плексуса Fasciola hepatica Fig. 20. Shematic structure of paranephridial plexus in Fasciola hepatica (after Querner, 1929)В.Судариков (1959) называет паранефри-диальный плексус вторичной экскреторной системой и предполагает, что там происходит внеклеточное пищеварение и обмен веществ. В вакуолях клеток и в полости каналов были обнаружены гранулы и капли жира. Некоторые исследователи фасциолы печеночной (Brand, Weinland, 1924; Weinland, Brand, 1926; Stephenson, 1947) обратили внимание на взвешенные жировые капли в жидкости сосудов и предположили, что анаэробное расщепление гликогена происходит в паренхиматозной жидкости со слабощелочной реакцией в сосудах, в стенках которых обнаружена аскорбиновая кислота.

Половая система печеночного сосальщика гермафродитна. Она сходна со строением половой системы других трематод, но имеет отличие в строении отдельных органов (рис. 21).

Мужская половая система мариты представлена семенниками, семяпроводами, семенным пузырьком и совокупительным органом (рис.22 В).

Два семенника фасциолы расположены в центральных участках второй и третьей четверти длины тела. Один из семенников ближе к переднему отделу. Они сильно разветвлены и от каждого отходит семяпровод, которые на уровне брюшной присоски сливаются и образуют расширение в виде семенного пузырька. Далее он переходит в семяизвергательный канал, пронизывающий циррус, где в него открываются протоки одноклеточных желез (pars prostata). Выводные протоки мужской половой системы открываются на дне половой клоаки.

Женская половая система мариты представлена яичником, яйцеводом, парными желточными железами, их протоками, тельцем Мелиса, Ла-уреровым каналом и маткой (рис. 22 А).

Яичник расположен в правой части передней трети тела, ближе к вентральной стороне. Он имеет вид ветвящихся трубок, заканчивающихся слепо.

По бокам всего тела фасциолы широкой полосой тянутся парные желточники фолликулярного строения. По всей длине желточни-ков идет проток, к которому подходят тонкие каналы от фолликул.

На конце первой четверти тела мариты два главных протока соединяются и образуют небольшой желточный резервуар. От него вперед проходит желточный проток.

От яичника идет проток, в который впадают Лауреров канал и желточный проток. Образуется небольшое расширение, окруженное тельцем Мелиса (из одноклеточных желез), переходящее в матку (рис. 23).

У печеночной фасциолы проксимальный отдел матки отделен от ее дистальной части специальным клапаном и функционально соответствует оотипу, который у печеночного сосальщика отсутствует. Стенки матки имеют мускулистые волокна, которые и обеспечивают перистальтическое движение, проталкивая яйца к половому отверстию (рис. 24). Конечный участок матки (метратерм) имеет толстые мускульные стенки. Этот отдел матки выполняет роль влагалища. Половое отверстие открывается в половой клоаке рядом с мужским половым отверстием (рис. 25).

Нужно отметить, что в семенниках и яичниках гликоген не был обнаружен, а в желточниках и зрелых сперматозоидах он появляется.

Овогенез (ovum - яйцо, genesis - развитие) начинается с первичной женской половой клетки - оогонии. Они образуются в слепых трубочках яичника, ограниченных от тканей тела светлой оболочкой - проприумах (proprium), внутренняя сторона которой выстлана оогониями. Их клеточные границы устанавливаются с трудом (Schubmann, 1905). Относительно большие ядра исходных зародышевых клеток бывают круглыми или элипсоидными. Перед делением хроматин принимает вид толстых компактных петель, плотно прилегающих к ядерной мембране. Затем они перемещаются на экватор и происходит разъединение сестринских хромосом. Стадия анафазы оогонии хорошо просматривается: сильно укороченные хромосомы расходятся к полюсам клетки. Следовательно, оогонии фасциолы имеют 12 хромосом, которые трудно рассмотреть. Это число хромосом совпадает с исследованиями A.Schellenberg (1911), A.Sanderson (1953), C.Bednarz (1962). Центриолы оогоний фасциолы простые точечные со слабым излучением, нити веретена толстые. Весь хроматин в дочерних ядрах сбит в комочек.

Питание оогоний и молодых ооцитов, видимо, происходит через клеточные отростки, подходящие к стенкам трубочек яичника. После разрыва отростка оогонии перемещаются в яичник.

В яичнике фасциолы резко очерченная зародышевая зона отсутствует, поэтому трудно установить сколько делений претерпевают оогонии, превращающиеся в молодые ооциты. Они вытянутой грушевидной формы, так как их клеточные отростки только что отделились от стеноктрубочек.

Изменение хромосомных нитей (они становятся тонкими, бледными) говорит о вступлении ооцита в стадию роста. Хромосомы пока рассеяны в ядре, в диффузной стадии, очень часто парами, но уже расходящимися. Более зрелое ядро пронизывается на всем своем протяжении тонкой хроматической сетью. На этой стадии ооцит находится в начальном отделе матки, где начинается диакинез и завершается первое деление созревания. На этой фазе изменяется размер ядра (с диаметром от 8 до 11 мкм).

Зрелые ооциты имеют многоугольную форму, образующуюся плотно прилегающими поверхностями взаимного контакта. Ядро по форме похоже на ооциту.

В ооцитах печеночной фасциолы рост плазмы и образования желтка минимальны; видимо, морфологические сопутствующие явления выступают менее отчетливо (Schellenberg, 1911).

В период созревания происходят два деления: редукционное и экваци-онное. При первом делении образуется направительное или полярное тельце - полоцит (polokytos) и ооцит II порядка. При втором делении созревания образуется второе направительное тельце и зрелая яйцеклетка.

В ходе оогенеза в митотическом цикле происходит уменьшение содержания ДНК.

Сперматогенез (sperm - семя, genesis - развитие) начинается с первичной мужской половой клетки -сперматогонии, которая проходит период размножения, роста, созревания и формирования. Появившись в елепых трубочках семенников они представляют собой клетку с большим ядром, хроматин которого равномерно распределен в виде компактных глы-бок. До стадии сперматоцита I порядка развиваются сходно с женскими зрелыми ооцитами, интенсивно делясь митотическим путем. Оболочки сперматогоний легко проницаемы, и поступающие питательные вещества служат источником энергии для интенсивного деления клеток.

Сперматогонии, вступив в стадию роста (сперматодит I порядка), перестают делиться. Они всасывают питательные вещества, растут, в ядрах совершаются изменения, которые приводят к редукционному делению и образованию сперматоцитов II порядка. В результате эквационного деления появляются сперматиды, которые в период формирования превращаются в сперматозоид.

Желточные клетки начинают формироваться в концевых пузырьках желточного депо из зернистых питательных масс. Проходя по выводным протокам, они покрываются оболочкой и превращаются в желточные шары (Schellenberg, 1911).P.Kouri и R.Nauss (1939) показали в своих исследованиях, что желточные клетки имеют полигональные формы с округленными углами. Протоплазма клеток прозрачная, малоокрашенная, с большим количеством желтоватых гранул, сходных с частицами жира. При окраске гранулы, которые очень похожи на ядра клеток, как бы приклеиваются к четкой клеточной мембране и напоминают зубчатое колесо.

Ядра желточных клеток маленькие округлые с темным концентрированным хроматином без четких ядрышек.

Размеры желточных клеток относительно постоянны - от 28 до 34 мкм, ядер - от 4,9 до 5,4 мкм, гранул - от 3,5 до 4,5 мкм.

В проксимальном отделе матки желточные клетки начинают изменяться. Большое количество гранул выбрасывается из клеток и заполняет межклеточное пространство. Гранулы возле мембраны исчезают. Ядро почти не изменяется, но место его положения нестабильно. Клетки уменьшаются в размерах до 23 мкм в диаметре, ядра до 4,6 мкм.F.Sommer (1880) считает, что часть содержимого желточных клеток освобождается уже в желточных протоках. Исследования G.Fulloch и J.Shapiro (1957) при помощи электронного микроскопа подтвердили его наблюдения.

Ядра желточных клеток постепенно уменьшаются, а затем разрушаются. Этот процесс у печеночной фасциолы начинается сразу после формирования яйца. Оболочка желточных клеток разрушается и, так как яйцеклетка фасциолы не имеет запасных питательных веществ, то желточные клетки, богатые гликогеном и жиром, обеспечивают питание зародыша. Они перемещаются к заднему концу тела мирацидия (Лутта, 1939).

В желточных клетках при окраске по Бесту обнаруживается большое количество гликогена. Жир в виде крупных и мелких капель имеется во всех желточных клетках. Окраска по Шампи позволяет видеть динамику роста количества жира в желточных клетках по мере их движения по жел-точникам. Следовательно, эмбриональное развитие происходит за счет запасных веществ в желточных клетках.

Копуляция у печеночной двуустки происходит до наполнения матки яйцами. Это дает возможность сперматозоидам скапливаться в проксимальном отделе матки. Ооциты фасциолы движутся по яйцеводу. Их рост завершается с приближением к начальному отделу матки. Теперь ооцит готов к оплодотворению. На разных участках ооциты встречаются со сперматозоидами и крупными желточными клетками с базафильными зернышками. В проксимальном отделе происходит оплодотворение и формирование яйца.

По наблюдениям A.Schellenberg (1911) один из сперматозоидов примыкает к безоболочному ооциту и вскоре проникает в него, начинается период созревания, период особых преобразований в ядре. На стадии профазы до распада ядерной мембраны сперматозоид значительно изменяется: хвостовая часть исчезает, а головка увеличивается до толстого клиновидного образования. Оно не примыкает к ядерной мембране, а остается вблизи периферии яйца вне веретен до стадии предъядра.

После распада ядерной мембраны яйца сперматозоид принимают глиптическую форму.

Увидеть центросомы и явление излучения на ядрах сперматозоида очень сложно (Schubmann, 1905; Henneguy, 1906; Goldschmidt, 1909; Schellenberg, 1911). Трудно установить: возникают ли они из остаточной центросомы созревания или вновь образуются из ядра сперматозоида. В бластомерах форма центриол изменяется: они напоминают кольцо.

Оплодотворенная яйцеклетка подходит к тельцу Мелиса. Ее одноклеточные железы выделяют жидкость, которая заполняет матку. Желточные клетки, проходя через клапан матки, механически повреждаются. Возможно, играет роль и слабощелочная реакция жидкости матки (рис. 23). В результате этого из желточных клеток выпадают гранулы, формирующие первичную яйцевую оболочку.

Яйца фасциолы состоят из оплодотворенной клетки с 27-30 желточными клетками, содержащими гликоген и белок, которые необходимы для питания зародыша. Яйцеклетка свободна от гликогена и жира, она как бы лежит на желточных клетках, располагаясь ближе к оперкулярному полюсу (рис. 26, 27).

Оплодотворенная яйцеклетка выделяет 2 направительных тельца. Первое направительное тельце имеет относительно крупный размер. БлагодаРис. 26. Яйцо Fasciola hepatica Fig. 26. Egg of Fascioia hepaticaря необычному поведению цитоплазмы в телофазе образуется маленькая "почка" в области будущего анимального полюса яйца. Оно содержит большую массу хроматина, которая составляет 1/8 массы яйца. Скопление хроматина мигрирует вместе с центросомой к периферии яйца, образует выпячивание и от-шнуровывается. При удалении от яйца между желточными клетками в направительном тельце исчезает сначала центросома с ее излучением, затем хроматин и плазма сморщиваются и тельце распадается.

Второе направительное тельце отшнуровывается на том же месте. Следовательно, ось веретена не вращается (Schellenberg, 1911). В результате образуются два полярных (редукционных) тельца. Только в таком состоянии яйцо может считаться вполне зрелым (Токин, 1966). Образующийся женский пронуклеус сливается с мужским, который находился в цитоплазме развивающегося ооцита. Каждый ооцит я w дает только одно зрелое яйцо. Оплодотворенная яйцеклетка печеночного сосальщика имеет прозрачную цитоплазму. Она экзоле-цитального типа.

В дистальном отделе матки зрелое яйцо имеет мембрану темно-желтого цвета. На срезах видны желточные клетки меньших размеров с ярко окрашенной протоплазмой. Контуры клеток рассеяны, ядра без изменений, диаметр клеток 12-16 мкм, ядер - 5 мкм.

Рис. 27. Проксимальный отдел матки Fasciolahepatica. Формирование сложного яйца. Fig. 27. Proximal part of uterus Fascioia hepatica.Formation of complex ovum, я - яйцеклетка; жк - желточные клетки; сг - скорлупо-вые гранулы; ся - скорлупка яйцаЯйцеклетка имеет диаметр 20-23 мкм, ядро 14-16 мкм с эксцентрично расположенными ядрышками диаметром 4 мкм с ясной перинуклеарной зоной. Иногда можно наблюдать хромосомы в митозе (на стадиях профазы или метафазы).

В этом отделе матки состав оболочки яиц меняется и перестает окрашиваться красителями.P.Kouri и R.Nauss (1938) на основании гистологического изучения желез Мелиса и простатических желез фасциолы пришли к выводу, что эти железы прежде всего выделяют смазывающие вещества и уменьшают значение железы Мелиса как "оболочковой железы".

Исследования Н.Богомоловой и Л.Павловой (1961) показали, что желточные клетки фасциолы содержат глобулы, имеющие гранулярное строение. Они являются источником скорлупового материала яйцевой оболочки, которая формируется в начальном отделе матки, где из желточных клеток выделяются периферические глобулы. Разрушаясь, они освобождают гранулы. Образуется скопление скорлупового вещества вокруг яйцеклетки и желточных клеток. J.Smyth и J.CIegg (1959) считают, что содержимое глобул желточных клеток укрепляет оболочку яйца изнутри. Центральные глобулы остаются в желточных клетках. После выделения гранул в глобулах, являющихся белковыми матрицами, начинает синтезироваться РНК, которая используется при синтезе белка зародыша.

Гранулы, выброшенные в проксимальном отделе матки, образуют большие скопления, которые окружают оплодотворенную яйцеклетку с желточными клетками и формируют мембрану.

Яйца печеночной фасциолы имеют крышечку - operculum, который образуется после формирования оболочки. Желточная масса с заключенным в нее зародышем "одевается" мембраной, отстающей от нее на оперкулярном конце.

О механизме образования скорлупки яйца печеночной фасциолы нет единого мнения. В проксимальном отделе матки открываются многочисленные протоки тельца Мелиса. Оно имеет два типа клеток, которые называются серозными и мукоидными. О назначении серозных клеток существует очень много суждений. S.Irwin и L.Threadgold (1972) предполагают, что его секрет снижает поверхностное напряжение белковых гранул, выделяющихся из желточных клеток, и облегчает их слияние при формировании скорлупки яйца. Мукоидные клетки, по предположению A.CIegg (1965), T.Moczon, L.Swidersri и H.Huggtl (1992), выделяют секрет, окружающий ооцит и желточные клетки тонкой оболочкой, на внутренней поверхности которой собирается белковый секрет желточных клеток.

Исследования R.Leuckart (1886), L.Henneguy (1909), Р.Гольдшмидт (1909) показали, что яйцевая скорлупка строится из гранул желточныхклеток. M.Vialli (1933) в этих гранулах обнаружил протеины и хинон. W.Stefenson (1947) в скорлупке печеночного сосальщика обнаружил скле-ротин, в состав которого тоже входят хинон и протеины. Идентичность этих соединений в гранулах желточной клетки и в скорлупке сосальщика была подтверждена исследованиями Н.Богомоловой и Л.Павловой (1961).

Следовательно, можно предположить, что скорлупка яйца двуустки формируется из базофильных зернышек цитоплазмы желточных клеток, которые дают начало скорлуповым гранулам, выпадающим из желточных клеток в проксимальном отделе матки при механическом повреждении клапанами начального отдела матки. Гранулы концентрируются в основном на периферии желточных клеток. Сливаясь, они образует первичную тонкую бесцветную прозрачную оболочку яйца. Затем начинают подниматься к этой оболочке и утолщать ее гранулы, находившиеся в толще желточных клеток. После выхода из клеток всех гранул желточные клетки разрушаются и превращаются в полужидкую желточную массу, используемую для питания развивающегося зародыша. Оболочка постепенно начинает темнеть, мутнеть и становится золотисто-желтой. Это - второй слой оболочки яйца. Она не окрашивается красителями, т.е. ее состав под действием фенолазы, обнаруженной у печеночного сосальщика W.Stefenson (1947) и J.Smyth (1954), преобразовался всклеротин. В этот момент формируется крышечка яйца.

В 1967 г. были опубликованы результаты электронно-микроскопических исследований английского ученого R.Wilson. Он обнаружил, что скорлупо-вая оболочка яйца печеночной фасциолы состоит из нежной фибриллярной сеточки. Хроматографически в скорлуповой оболочке обнаружили глицин, аспарагиновую и глутаминовую кислоты, серин. В небольшом количестве определены аланин, гистидин, лизин, аргинин, следы лейцина, вали-на и предположительно цистина. Под скорлуповой оболочкой обнаружен бесструктурный слой, имеющий характер секрета, состоящий, по-видимому, из мукопротеида или мукополисахарида. Этот бесструктурный слой и лежащие под ним две оболочки составляют "желточную" оболочку.

Проницаемость оболочки яиц исследовали физическими и радиологическими методами с помощью изотопов. Скорлуповая оболочка оказалась легко проницаемой для мелких молекул. Комплекс желточной оболочки не обладает выраженной проницаемостью, хотя было зарегистрировано прохождение фосфатных ионов до 8% от общего количества фосфата.

По линии крышечки сохраняется протеиновая полоска, которая очень важна при выходе мирацидия. По Т.Гинецинской (1968), это вязкое зернистое вещество, расположенное под желточной мембраной. К.Галактионов и А.Добровольский (1998) присоединяются к ее мнению об образовании возле крышечки "подушечки" (cuschion), или "пробки" (micoid-plug). Исследования R.Wilson (1967) в электронном микроскопе показали, что "подушка" образована двумя мембранами, расположенными на расстоянии 30 нм друг от друга, и покрыта желточной оболочкой. Располагается она под крышечкой яйца между белковой и желточной оболочками.

Предполагают, что она может быть растворена только изнутри действием ферментов пепсина и трепсина. Опыты V.Rowan (1956, 1957) с яйцами, опущенными в эти ферменты, положительных результатов не дали. Гистохимическое исследование этой пробки в яйцах печеночной фасциолы показали, что она состоит из белков и физически представляет собой коллоид, легко переходящий из золя в гель и обратно. Он плотно прилегает к скорлупке яйца под крышечкой и перед выходом мирацидия увеличивается в объеме. После открытия крышки яйца "пробка" смещается и остается в скорлупке яйца (Rowan, 1957). Таким образом, крышечку может открыть сам мирацидий фасциолы, выделяя ферменты, видимо, при стимуляции светом.J.Smyth и D.Halton (1983) считают, что около будущего шва крышечки образуется "псевдоподия" яйцеклетки, которая плотно прилегает к ней. Она оказывает воздействие на шов крышечки яйца, утончает его и крышечка легко открывается при выходе мирацидия. Они предполагают, что "псевдоподия" выделяет ферменты, оказывающие воздействие на шов крышечки.

Величина яиц печеночной фасциолы в условиях Поволжья варьировала в пределах 0,115-0,145 млм (длина) и 0,060-0,071 млм (ширина).

Как известно, яйцевая продукция фасциолы очень велика. Поданным A.Thomas (1883), одна фасциола имеет в матке до 35 тысяч яиц, по подсчетам R.Leuckart (1881) их число достигает 45 тысяч. Такие большие значения репродуктивного материала у фасциолы свидетельствуют о проявлении приспособляемости этих организмов к сохранению вида.

В.Вагин (1950) отмечает, что у организмов, живущих в замкнутой среде, выход и проникновение в которую нередко бывают очень затруднены, увеличение числа зародышей является необходимым для поддержания нормальной численности вида. Это явление настолько характерно, что получило название "закона большого числа зародышей". Чем сильнее специализирован организм, сложнее характер паразитирования и инвазия хозяина, тем большее количество производимых зародышей гибнет, и тем большее их количество должен производить паразит. Организмы, не пошедшие по этому пути, окажутся элиминированными.

Яйца фасциолы выводятся из организма хозяина с содержимым кишечника. Завершается развитие эмбриона во внешней среде, поэтому в яйце должно быть большое количество запасных питательных веществ. Дальнейшее развитие возможно только в водной среде с определенной температурой, рН среды, насыщенностью кислородом.

3.1.2. Зависимость развития яиц Fasciola hepatica от температуры и освещенности внешней средыЭмбриональное развитие печеночной двуустки тесно связано с внешними факторами. Условия развития фасциолы можно встретить в работах M.Jepps (1933), А.Скворцова, В.Смирновой, Е.Сизяковой (1936), W.Rowan, (1956), И.Васильевой (1960), И.Жарикова (1962), Э.Геллер, И.Ба-усовой (1977), О.Семенова (1991) (рис. 28). По данным этих авторов, продолжительность эмбриогенеза фасциолы имеет обратную зависимость от температуры окружающей среды (табл. 1). Цифровые данные в их работах расходятся. Каждый из вышеупомянутых авторов подробно говорит о температуре содержания яиц, но обходит молчанием действие освещенности на скорость развития мирацидия в яйце. Только в работе А.Скворцова с соавторами (1936) упоминается о развитии яиц в темноте.

Результаты опытов в природных и лабораторных условиях при одинаковых физико-химических режимах на первый план выдвигают 2 фактора: температуру и освещенность.

Одна группа использовалась в опытах на природе при суточном колебании температуры и изменении освещенности. Они были перенесены вспециальные стеклянные квадратные рамы, углубленные в почву прибрежной зоны водоема.

Наблюдения проводились в различные периоды года (июль, сентябрь, ноябрь, январь, апрель, май). В лабораторных условиях какие-либо изменения в сроках эмбриогенеза в зависимости от времени года не были отмечены.

Таким образом, на скорость развития мирацидия в яйце немаловажное влияние оказывает наличие освещенности - при ней продолжительность эмбриогенеза укорачивается, что очень важно при получении мирацидиев для лабораторных исследований (Соколина, 1969).

Исследования И.Васильевой (1960) по перезимовке яиц фасциолы на разных стадиях развития в естественных условиях пастбища показали, что процент перезимовавших под снегом яиц со сформировавшимися мира-цидиями равен 55,06, а яиц с не дробящейся зародышевой клеткой - 82,1%.

Эмбрион в яйце очень чувствителен к соляной и карболовой кислотам. При концентрации 0,1-0,5% эмбрион теряет жизнеспособность в течение 1-3 мин, в 20-30%-м растворе поваренной соли он тоже погибает. Более устойчивы эмбрионы фасциолы к 5%-му формалину, в нем они могут оставаться живыми после 3-часовой экспозиции.

Развитие эмбриона печеночной фасциолы происходит и при низких величинах парциального давления кислорода. По мере развития эмбриона, по данным N.Humiczwska (1996), возрастает роль цитохром-С-окси-дазы как переносчика электронов дыхательной цепи на молекулярный кислород, что может отвечать подготовке зародыша к переходу в стадию свободноживущего мирацидия, обитающего при высоком уровне свободного кислорода в среде.

Таким образом, исследования показывают насколько зависимо развитие эмбриона в яйце от внешних факторов среды. На основании этих данных можно прогнозировать экстенсивность инвазии в возникших очагах и возможность вспышки в ближайшие 1-2 года (Соколина, 2003).

3.1.3. Способы массового выведения мирацидиев Fasciola hepatica из яицПо завершении формирования мирацидий начинает двигаться внутри яйца. В зависимости от внешних условий может вылупиться из яйца на 2-16 сутки.

В настоящее время процесс вылупления мирацидия печеночной фасциолы может рассматриваться по O.Mattes (1926) и R.Wilson (1968). Активация сформировавшегося мирацидия приводит к выделению ферментов из желез проникновения, которые, видимо, частично разрушают мембрану внутренней, вогнутой стороны "подушки", состоящей из сложного фибриллярного мукопротеинового комплекса, в состав которого входят кислые мукополисахариды.

Влага из яйца поступает в "подушку", фибриллярная основа мукопротеинового комплекса насыщается водой и увеличивается в объеме. Гидростатическое давление повышается, крышечка яйца открывается и за счет разницы осмотического давления "подушечка" и мирацидий, иногда в желточной мембране, выбрасываются в воду.

Таким образом, применяя описанную методику, можно вызвать единовременное вылупление мирацидиев из яиц и их концентрацию в небольшом объеме воды для фиксации и заключения в смолы, что очень важно при изготовлении срезов, исследуемых в электронном микроскопе.

Личиночные стадии Fasciola hepaticaПрирода личинок трематод была выяснена L.Bojanus (1818) при изучении зараженных спороцистами моллюсков, из которых выходили церкарии. В 1831 г. V.Mehleis увидел вылупление мирацидия из яйца. Анализ всех имевшихся к тому времени данных позволил J.Steenstrup (1842) доказать чередование поколения трематод.Трудно переоценить вклад в изучение морфологии стадий печеночной фасциолы R.Leuckart (1883), A.Thomas (1883), W.Coe (1896), O.Mattes (1949).

Личиночные стадии принято делить на:• поколение материнской спороцисты (мирацидий, материнская спороциста);• дочерние партеногенетические поколения (редия, дочерняя спороциста);• личиночные стадии гермафродитного поколения (церкарий, адолескарий).

Материнское партеногенетическое поколение Fasciola hepaticaЭто поколение печеночной фасциолы представлено мираци-дием (греч. meirakidion - юноша, ювенильная стадия) и материнской спо-роцистой (греч. spora - семя + kystos - мешок, мешковидная стадия).

3.2. МИРАЦИДИЙ FASCIOLA HEPATICAМирацидий-личинка материнской спороцисты, первая свободножи-вущая личиночная стадия в жизненном цикле трематод. Его биологическая роль заключается в осуществлении заражения промежуточного хозяина. Мирацидии разных видов трематод, попавших во внешнюю среду, бывают на разных стадиях развития. Fasciola hepatica откладывают яйца на стадии начального дробления оплодотворенной клетки. Зародыш завершает свое развитие в нормальном пресном водоеме в зависимости от температуры воды и выходит из скорлупы при дневном свете или ярком электрическом освещении в лабораторных условиях.

Мирацидий фасциолы еле различим невооруженным глазом на темном фоне в чашке Петри с водой. Тело его с ресничным покровом конусообразно (расширено спереди и сужено сзади). Длина тела мирацидия 150 мкм, ширина самой широкой передней части тела 40 мкм (рис. 29).

Узкая каудальная часть тела слегка изогнута. Такая форма тела свойственна всем мирацидиям, проникающим в промежуточного хозяина. Кроме этого, она обеспечивает наименьшее сопротивление воде при движении мирацидия вперед, так как струи воды плавно обтекают его, почти не образуя завихрений. Это форма тела активно плавающих организмов.

Для наблюдений за живыми мирацидиями мы использовали фазово-контрастный микроскоп (Соколина, 1969). Исследования Т.Гинецинской (1959) живых церкарий в фазово-контрастном микроскопе показали его преимущество перед исследованиями в световом микроскопе. Работы Е.Димитровой и Е.Логачева по изучению межпроглотидных желез цесто-ды Moniezia expansa также говорят в пользу данного метода (Логачев, Димитрова, 1961). Об этом свидетельствуют исследования трематод, нематод, внутренних органов животных и эпидермиса кожи человека, проведенные А.Базитовым (1963,1965,1967). Этот метод дает хорошие результаты при наблюдении ресничного покрова, апикальной папиллы, "мерцательного пламени" протонефридиев, а также при изучении изменения формы тела личинки во время плавания и в покое.

Многие детали строения различных стадий трематод изучены в световом микроскопе. В.Эврановой, Е.Логачевым и Г.Эврановой (1969) изучаРис. 29. Мирацидий Fasciola hepatica L,, 1758. Fig. 29. Structure of miracidia in Fasciola hepatica L„ 1758. 1 - по Сое, 1896; 2 - no Ortman; 1908; 3 - no Mattes, 1946; 4 - по Наумову, 1972Ф. М. Соколина 57лась половозрелая форма фасциолы, а в работах Т.Гинецинской (1968), V.Southgat (1970), А.Добровольского и В.Машанского (1965), Ф.Соколиной (1970), К.Галактионова и А.Добровольского (1987,1998), О.Семенова (1991) изложены ценные данные по строению личиночных стадий нескольких видов трематод.

Появление в 1932 г. электронного микроскопа произвело такую же революцию в ряде областей науки, в первую очередь в биологии и медицине, как и изобретение светового микроскопа в XVII в. Электронный микроскоп в трематодологии может быть использован очень плодотворно. Детальные изучения систем мирацидиев фасциолы на электронном уровне проводили B.Dawes (1960), L.Threadgold (1963), L.Threadgold, S.Gallagher (1966), R.Wilson (1969 a, 1970, 1971), S.Irwin (1970), S.Irwin, L.Threadgold (1972), Ф.Соколина (1970, 1971,1976, 1978, 1986,1987), G.Buzzel (1983).

3.2.1. МОРФОЛОГИЯ МИРАЦИДИЯ FASCIOLA НЕРА Т/САСложная и ответственная роль мирацидия в жизненном цикле трематоды находит полное отражение в его морфологических особенностях. Не зная строения мирацидия, трудно судить о морфогенезе паразита в промежуточном хозяине. Тем не менее, в отечественной литературе мало данных по этому вопросу.

Тело мирацидия, поданным многих исследователей, состоит приблизительно из 100 клеток, которые формируют, по S.Chia-tung Pan (1980), 8 систем. По нашим подсчетам тело мирацидия имеет не менее 184 клеток: эпителиальная система - 21, мускулатура - 58, паренхима - 20, железы - 24, выделительная система - 12, терминальные элементы - 9, нервная система больше 40, но не удалось пока подсчитать нервные клетки тела мирацидия (рис. 30).

Поверхность у основания хоботка, изгибающаяся при втягивании этого очень реактивного органа, лишена "шипиков". Так как, втягиваясь, хоботок расширяется, "шипики" оказываются на апикальной поверхности, а слой, свободный от них, изгибаясь, скользит по своей же поверхности. Наличие здесь "шипиков" мешало бы втягиванию хоботка до уровня первых эпителиальных пластинок.L.Threadgold, исследуя на электронно-микроскопическом уровне покровы мариты фасциолы, тоже отмечает мелкие "шипики". Он не обнаружил их только в конечном отделе тела. Видимо, эти "шипики" позволяют закрепляться взрослой особи на стенках желчных протоков, помогая противостоять току желчи. R.Wilson, изучая теребраториум, обнаружил "складки", расположенные на таких же расстояниях, как и наши "шипики". На его схемах они зафиксированы только на верхушке хоботка. Он приписывает им функцию закрепления на теле моллюска. Если так, "складки" окажутся внутри присасывательной воронки, где скапливается секрет желез, растворяющих межклеточное вещество эпителия моллюска. Судя по расположению "шипиков" на наших электронных фотографиях, мы считаем, что первичная прикрепительная функция отводится "присоске", а "шипики" позволяют мирацидию закрепиться между эпителиальными клетками и проникнуть в моллюска.

Синцитиапьная гиподерма у мирацидия Fasciola hepatica плотно прилегает к базальной мембране, которая лежит на кольцевых миоцитах хоботка.

Десмосомы (desmos - связь, soma - тело) пронизывают базальную мембрану и соединяют структуры синцитиальной гиподермы с клетками мышечных волокон. Длина десмосом около 992 А. Располагаются они на расстоянии от 472 до 1379 А.

Между клетками, вступающими в контакт, всегда остается некоторый промежуток, который может быть совсем узким, как на хоботке, или довольно широким, он часто встречается при соединении эпителиальных пластинок с гиподермальными гребнями. Эта связь эластичная. Такая динамичность связи представляет собой основную черту, характеризующую контакты между клетками на всех уровнях многоклеточной организации.

Кольцевые мускульные волокна теребраториума (рис. 33, 35). Первое кольцевое мышечное волокно имеет диаметр 1,42-0,9 мкм. Оно находится на верхушке хоботка с внутренней стороны от выхода протоков апикальной железы. По сравнению со следующими двумя кольцевыми миоци-тами оно почти в 2 раза крупнее. Это самый деятельный миоцит, который участвует в образовании воронки для секретов желез, растворяющих межклеточное вещество при проникновении в моллюска.

Третья миофибрилла почти такая же, как вторая (0,9 х 0,7 мкм), и окружает выводные поры акцессорных желез.

Эти три кольцевых миоцита играют роль сфинктера. В момент прикрепления к хозяину они находятся почти в одной плоскости и расположены концентрически, образуя воронку - "хоботковую присоску". Одновременное сокращение этих трех миоцитов закрывает протоки апикальной и акцессорных желез, и верхушка теребраториума становится пикообразной.

Следующие три кольцевых мышечных волокна расположены вдоль хоботка последовательно, плотно прилегая друг к другу. Они более развиты, их размеры в поперечнике:4 миоцит - 1,23x1,12 мкм,5 миоцит - 1,62 х 0,96 мкм,6 миоцит - 1,51 х 1,33 мкм.

Между 6 и 7 миофибриллами проходят протоки латеральных одноклеточных желез. 7 миоцит, имеющий размеры 1,51 х 1,26 мкм, частично уходит под первый ряд эпителиальных пластинок (Соколина, 1970, 1976).

Продольные мускульные волокна теребраториума мирацидияFasciola hepatica (рис. 33, 35) хоботка слабо выражены. Они идут под кольцевыми мускульными волокнами тела от середины эпителиальных пластинок. На электронных снимках четко просматриваются закрепления продольных мускульных волокон в гиподерме между 6-7 кольцевыми мускульными волокнами теребраториума (Соколина, 1970).

Специализированные мускульные волокна теребраториума Fasciola hepatica. Кроме кольцевых и продольных мускульных волокон в хоботке мирацидия фасциолы есть мышцы специального назначения. От ба-зальных выпячиваний эпителиальной пластинки первого ряда отходят ретракторы к верхушке хоботка. Они идут параллельно с продольными мускульными волокнами до уровня четвертого кольцевого мускульного волокна апикальной папиллы. На уровне четРис. 36. Места закрепленияретракторов на хоботке мирацидия F.hepatica (ориг.). Fig. 36. Places of retractors' fixation terebratorium in F. hepatica miracidium. 1-3 - кольцевые миоциты; 4-5 - места закрепления ретракторов; 6 - гиподермавертых кольцевых мышечных волокон каждый ретракгор распадается на две ветви, прикрепляющиеся путем простых контактов к базальной стороне синцитиальной гиподермы между третьим, вторым и первым кольцевыми мышечными волокнами (рис. 36).

Первая ветвь ретракторов подходит к гиподерме между первым и вторым миофибриллами возле наружных протоков апикальной железы.

Вторая ветвь ретракторов закрепляется между вторым и третьим кольцевыми миофибриллами, где открываются поры акцессорных желез.

Внутри первого кольца миоцитов можно рассмотреть пучки мускульных волокон, расположенные диаметрально. При первичном закреплении мирацидия на теле моллюска расслабляются диаметральные миоциты и сокращается первая ветвь ретракторов на верхушке хоботка Образуется углубление, которое играет роль присоски. Сюда через 4 поры стекает секрет апикальной железы. Сокращение двух следующих ветвей ретрактора увеличивает площадь присоски и открывает еще четыре протока акцессорных желез. Воздействие секрета длится 30-45 минут. Это время обеспечивает растворение межклеточного вещества эпителия моллюска. Расслабление ретракторов и резкое сокращение диаметральных миоцитов и всех семи кольцевых ми-офибрилл превращает хоботок мирацидия из уплощенного в копьевидный, который легко пробивает почти растворенное межклеточное вещество. Личинка закрепляется между эпителиальными клетками и вскоре проникает в тело моллюска (Соколина, 1970,1976).

Эпителиальные пластинки тела мирацидия Fasciola hepatica. Тело мирацидия Fasciola hepatica покрыто 21 эпителиальной пластинкой. В фазово-контрастном микроскопе видны одноклеточные эпителиальные пластинки неправильной формы. Они покрывают все тело мирацидия, кроме хоботка. Серебрение позволяет выявить границы эпителиальных пластинок (рис. 37).

Рис. 37. Расположение эпителиальных пластинок на теле мирацидия F. hepatica.Fig. 37. Epithelial cell in the miracidium of F.hepatica (Сое,1896).

Первый ряд эпителиальных пластинок состоит из небольших, почти треугольных пластинок, составляющих 1/9 часть длины тела мирацидия. Они имеют высоту около 16 мкм и ширину от 19,9 до 13,3 мкм у основания. В передней части этого ряда между эпителиальными пластинками и субэпителиальным слоем имеются полости.

Во втором ряду 6 крупных, почти прямоугольных пластинок длиной около 2/9 части тела личинки. Их размеры приблизительно 27 мкм высотой и 13,3 мкм шириной.

В третьем ряду 3 пластинки, расположенные перпендикулярно к клеткам второго ряда и занимающие 1/9 часть длины тела. Они имеют высоту около 18 мкм и ширину от 26,6 до 24 мкм у основания.

В четвертом ряду самые крупные 4 клетки длиной 3/9 части тела. Высота этих клеток около 44 мкм, ширина от 9,2 до 7,6 мкм у основания.

В пятом, последнем ряду располагаются 2 полукруглые крупные клетки, занимающие 2/9 части тела мирацидия. Эти клетки имеют высоту около 29 мкм, а их ширина от 15,2 мкм сужается почти до нуля.

Как и все клетки мягких тканей, эпителиальные пластинки могут изменять свою форму.

Эпителиальные пластинки тела мирацидия F. hepatica имеют неравномерную толщину, изменяющуюся в пределах от 0,4 до 3 мкм (рис. 38).

Апикальная поверхность эпителиальных пластинок тела мирацидия местами неровная. Иногда она образует впячивания, которые очень напоминают пиноцитозные впадины. На поверхности эпителиальных пластинок имеется множество ресничек и микроворсинок. Реснички выходят на поверхность из кинетосом, а в цитоплазму уходят корневые нити.

Базальная поверхность эпителиальных клеток тела мирацидия характеризуется небольшими выростами в субэпителиальный слой и, соответственно, последний вдается внутрь эпителиальных клеток.

Цитоплазматические мембраны клеток на всем протяжении имеют ровную толщину. Цитоплазма эпителиальных пластинок имеет мелко-гранулированную структуру. Ядра эпителиальных пластинок вытянутой формы и резко очерчены (рис. 39). В них эксцентрично расположены крупные ядрышки. Кариоплазма мелко гранулирована, иногда сконцентрированными участками лежат электронно-плотные гранулы. Нужно отРис. 38. Продольный срез эпителиальной пластинки тела мирацидия F. hepatica. Fig. 38. Longitudinal section through epithelial cell of F. hepatica miracidium(x 21 600, ориг.).

1 - неравномерная толщина пластинки; 2 - неровная апикальная поверхность;3 - базальная поверхность пластинки с выростами в субэпителий; 4 - митохондрии;5 - кольцевые мускульные волокнаметить обилие гранул гликогена в цитоплазме клеток, крупных овальных митохондрий с электронно-плотным матриксом и с небольшим количеством крист (рис. 40). В митохондриях клеток происходят окислительные процессы, и освобождающаяся при этом энергия используется для приведения в действие различных клеточных механизмов, в том числе и многочисленных ресничек (Соколина, 1970, 1976). H.Bjoruman и B.Thorsell (1962), Е.Хейсин и В.Тимофеев (1964) отмечают, что митохондрии с небольшим количеством крист свойственны некоторым паразитам, обитающим в условиях недостатка кислорода. Митохондрии чаще расположены ближе к базальной мембране. Их количественно большеРис.39. Поперечный срез эпителиальной пластинки тела мирацидия F. hepatica (х 23 540, ориг.).Fig. 39. Cross section through epithelial cell of F. hepatica miracidium.

Во втором ряду эпителиальных пластинок митохондрии очень крупные, плотно выстроены в ряд вдоль всей клетки (рис. 41). Наличие множественных митохондрий в первых трех рядах эпителиальных клеток связываем с большей их активностью в жизнедеятельности мирацидия (Соколина, 1976,1978).

Так как мы работали с мирацидиями в возрасте 4-9 часов, малое количество крист может быть связано с их большим возрастом и, следовательно, с пониженным уровнем обмена.

Соседние эпителиальные пластинки тела мирацидия Fascioia hepatica часто сближены друг с другом только своими основаниями. Большая часть боковых поверхностей эпителиальных пластинок оказывается свободной от взаимного соприкосновения и покрыта микроворсинками. ГиподермальРис.40. Митохондрии и гликоген в эпителиальных пластинах тела мирацидия F. hepatica (х 17 360, ориг.). Fig. 40. Mitochondria and glycogen of the epithelial cellof F. hepatica miracidium. 1 - митохондрии с электронно-плотным матриксом; 2 - гликоген; 3 — гиподермальный гребень; 4 - базальная пластинканые гребни могут быть ниже уровня эпителиальных пластинок, иногда выше (Соколина, 1970,1976).

На внешней поверхности эпителиальные пластинки имеют реснички и микроворсинки.

Реснички мирацидия напоминают таковые у простейших. Их субмикроскопическое строение весьма сложно и соответствует классической схеме (9+2). Внешне они имеют поперечную исчерченность, которая является отражением их спирального строения. Электронно-микроскопические исследования полностью подтвердили предположение, согласно которому реснички начинаются в цитоплазме и под небольшим углом выходят через клеточную мембрану. У основания ресничек в цитоплазме имеются базальные гранулы, расположенные в поверхностном слое эпителиальных пластинок. За счет триплета периферических фибрилл основание реснички расширяется (рис. 42, 43). От базальной гранулы под небольшим углом отходит корневая нить (Соколина, 1970,1976).

Рис. 42. Кинесома эпителиальной пластинки мирацидия Fasciola hepatica(х 100 ООО, ориг.).Fig. 42. Kinesome of the epithelial cell of Fascioia hepatica miracidiumМикроворсинки эпителиальных пластинок тела мирацидия Fasciola hepatica образованы выпячиваниями плазматических мембран и имеют высоту от 0,25 до 0,77 мкм (рис. 44). Расстояние между ними варьирует в пределах 0,2 - 1,62 - 3,7 мкм. Количество микроворсинок резко увеличивается в каудальном отделе тела мирацидия, где расстояние между ними уменьшается до 0,25 мкм. На поперечных срезах они имеют округлую или овальную форму. Диаметр микроворсинок варьирует в пределах от 1600 до 5000 А. На срезах ясно различаются два вида микроворсинок: вытянутые с заметно расширенным основанием и грибовидные. Задний конец тела мирацидия характеризуется присутствием микроворсинок только первого вида (диаметр до 1600 А, длина около 10000 А). Причем они очень часто расположены на выступах эпителиальной клетки. Эти выступы разнообразны по форме и размерам. Грибовидные микроворсинки, которые встречены наряду с первыми во всех остальных участках покрова тела мирацидия фасциолы, достигают высоты 3000 А при диаметре "шапки" до 5000 А. На поверхности микроворсинок иногда имеются многочисленные выросты, значительно увеличивающие их контактную площадь. На верхушке микроворсинок они часто парные и достигают длины до 1400 А. По своему внешнему виду они тоже разнообразны. На микроворсинках в переднейРис. 43 Корневые нити эпителиальной пластинки тела мирацидия F. hepatica(х 91 600, ориг.)Fig. 43. Root filaments of the epithelial cell of F. hepatica miracidiumчасти тела они имеют округленную форму диаметром до 0,116 мкм (рис. 45). В конечном отделе тела мирацидия они удлиненной формы и имеют вид волосков диаметром от 387 до 775 А.

Функция микроворсинок пока не выяснена. Можно лишь предполагать, что они имеют отношение к питанию в период эмбрионального развития в яйце или к дыханию в период жизни паразита фасциолы в водной среде (Соколина, 1970,1976).

Базальная пластинка тела мирацидия Fasciola hepatica. Базаль-ная мембрана эпителиальных пластинок лежит на хорошо выраженной базальной пластинке, местами соединена простыми контактами с продольными и кольцевыми мышечными волокнами. Тонкая базальная пластинка (от 400 до 950 А) состоит из электронно-плотных волокон.

Все ткани мирацидия - кольцевые и продольные мышечные волокна, гиподермальные клетки, отростки клеток паренхимы - связаны с базальной пластинкой (Соколина, 1976).

Миоциты состоят из двух видов протофиб-рилл. Различают тонкие и толстые протофиб-риллы диаметром 6 и 25 нм. Толстые протофиб-риллы находятся друг от друга на расстоянии 50-100 нм и окружены 6-10 тонкими протофиб-риллами. Толстые протофибриллы, видимо, представлены толстыми нитями белка миозина, тонкие протофибриллы - тонкими нитями белка актина. У мирацидия фасциолы между протофибриллами можно изредка увидеть темные тельца, считающиеся гомологами пластинок поперечно-полосатых мышц (Wilson, Denison, 1970).

Кольцевые мускульные волокна тела мирацидия Fasciola hepatica. Поперечные ми-офибриллы на теле мирацидия фасциолы образуют замкнутые кольца неправильной формы, расположенные параллельно и на различных расстояниях друг от друга. Они простыми контактами соединены через базальную мембрану с эпителиальными пластинками или гипо-дермальными гребнями. Наиболее сконцентрированы кольцевые мышечные волокна под первым и четвертым рядами эпителиальных пластинок (рис. 47). У мирацидия фасциолы нами обнаружены 25 кольцевых миоцитов. Кроме описанных 7 миоцитов, на теребраториуме обнаружены 6 миоцитов под передней половиной первого ряда эпителиальных пластинок. 3 миоцита обнаружены под вторым рядом эпителиальных пластинок: 1 возле гиподермальной складки, 2 в центре эпителиальной пластинки. Под третьим рядом эпителиальных пластинок4 миоцита: 2 возле гиподермальной складки и 2 в начале трети эпителиальных пластинок. В середине четвертого ряда эпителиальных пластинок плотно прилегают 6 миоцитов. Сокращение кольцевых мышц первого ряда эпителиальных плаРис. 47. Мускульные волокна тела мирацидия Fasciola hepatica (поперечный срез х 23 540, ориг.).Fig. 47. Muscle fibres of Fasciola hepatica miracidium body.

1 - кольцевые миоциты; 2 - продольные миоцитыстинок помогает мирацидию легче проникнуть в тело моллюска. Сокращение миоцитов четвертого ряда эпителиальных пластинок изменяет форму тела мирацидия в булавовидную и облегчает движение. Нужно отметить, что диаметр кольцевых миоцитов тела мирацидия меньше диаметра кольцевых миоцитов хоботка. Самыми мощными кольцевыми волокнами являются три первых мышцы под первым рядом эпителиальных пластинок. Обнаружить кольцевые миоциты под пятым рядом эпителиальных пластинок нам не удалось. Эта часть тела мирацидия никогда не изменяет свою форму и полностью подчинена работе "каудального" органа и ее мощных ретракторов. Мы думаем, что функционально она объединена с этим органом (Соколина, 1976).

Гиподермальный слой клеток тела мирацидия Fasciola hepatica. Под базаль-ной пластинкой находятся гиподермальные клетки. Они образуют гиподермальный, или субэпителиальный, слой (рис. 49). Обычно гиподермальные клетки располагаются под кольцевыми и продольными мышечными волокнами. В местах, где отсутствуют мышечные волокна, гиподермальные клетки плотно прилегают к базаль-ной пластинке.

Рис. 51. "Розеточный" орган тела мирацидия F. hepatica.Fig. 51. "Rosette" organ in F. hepatica miracidium.

1 - "розетка"органа (x 9 288); 2 - "бочонок" органа с 4 порами (х 7 740, ориг.)Рис. 52. "Каудальный" орган мирацидия F. hepatica.Fig. 52. "Caudal" organ in F. hepatica miracidium (x 25 000).

1 - внешний вид органа; 2 - ретракторы; 3 - полость железыВ центре органа хорошо видимы четыре крупных электронно-плотных ядра и полость с железистой структурой (рис. 53). Размеры органа невелики: длина достигает 4,2 мкм, а ширина самой утолщенной части при втянутом положении равна 1,09 мкм. И наружный, и внутренний концы органа заканчиваются раздвоением в виде округленных бугорков.

На наружных бугорках располагаются несколько чувствительных микроворсинок. Две эпителиальные пластинки, окружающие орган, имеют большое количество длинных ресничек.

Концентрация многочисленных митохондрий на границе двух эпителиальных пластинок, плотно окружающих "каудальный" орган, видимо, имеет энергетическое значение не только для ресничек и микроворсинок эпителия, но и для "каудального" органа.

К внутренним бугоркам подходят два пучка мускульных волокон и закрепляются на его раздвоенных концах. Противоположный конец ретрак-торов закрепляется в первой трети пятого ряда эпителиальных пластинок. Сокращение ретракторов приводит "каудальный" орган в движение.

На ультрамикрограммах "ка-удальный" орган зафиксирован в разных положениях: на уровне поверхности тела; выдвинут, как киль; втянут ниже уровня эпителиальных пластинок. До глубины 1,16 мкм хорошо виден просвет между органом и эпителиальной пластинкой, он равен 640 А. Глубже, на протяжении 1,74 мкм, стенки органа плотно прилегают к эпителиальной пластинке и, при выпячивании органа, последний скользит по боковой поверхности покровного эпителия. Вероятно,"каудальный" орган достаточно чувствителен.

Нужно отметить сочетание чувствительной, локомоторной и железистой функций в одном органе (Соколина, 1970).

Паренхиматозные клетки тела мирацидия Fasciola hepatica. Внутри эпителиально-мускульного мешка располагаются системы внутренних органов мирацидия, окруженные паренхиматозными клетками. Паренхима, состоящая из интерстициальных клеток, менее изучена, чем остальные системы мирацидия, так как в световом микроскопе структуру клеток рассмотреть невозможно. Паренхиматозные клетки располагаются по бокам тела мирацидия и в центре от ганглия до "каудального" органа. Паренхима состоит из очень крупных, рыхло расположенных клеток. Они неправильной формы с длинными цитоплазматическими выросРис. 53. "Каудальный" орган тела мирацидия F. hepatica (х 11 100, ориг.) Fig. 53. "Caudal" organ in F. hepatica miracidiumРис. 54. Клетки паренхимы тела мирацидия F. hepatica (х 5 ООО, ориг.)Fig. 54. Parenchymal cells in F. hepatica miracidiumтами, обвивающими все внутренние органы, обеспечивая им стабильность расположения. Цитоплазма клеток содержит шероховатый эндо-плазматический ретикулюм, рибосомы, лизосомы, богата митохондриями, жировыми каплями и неравномерно расположенными гранулами гликогена (рис. 54). Ядра клеток неопределенной формы, небольших размеров имеют крупные ядрышки. Между паренхиматозными клетками много протоков и лакун. Особенно рельефно сеть этих протоков просматривается в области протонефридиев (рис. 55). Тонкая структура срезов паренхиматозных клеток позволяет рассмотреть ее различные компоненты, пузыревидное строение полости, ограниченной многослойной миэлинопо-добной мембраной. Темные участки-это скопление л ипидов, мелкие гранулы между ними - скопление гликогена. Подробно структура клеток паренхимы описана в главе о марите фасциолы (Соколина, 1970,1986,1987).

В паренхиме мирацидия расположены тела желез внешней секреции, нервная система, выделительная и половая системы.

3.2.1.2. Железы внешней секреции мирацидия Fascioia hepaticaЖелезы внешней секреции мирацидия фасциолы в основном сосредоточены в переднем отделе тела. Их протоки открываются на анимальРис. 55. Сеть протоков и лакун между клетками паренхимы в областипротонефридия и ганглия в теле мирацидия F. hepatica (х 11 500, ориг.) Fig. 55. Ducts' and lacunas' net between the parenchymal cells reund hrotonephridium and ganglion in F. hepatica miracidiumном полюсе теребраториума и у переднего основания первого ряда эпителиальных пластинок (рис. 56).

Наши наблюдения за живыми и фиксированными мирацидиями показали, что форма апикальной железы непостоянна. При движении с вытянутым хоботком она принимает колбовидную форму. Втягивание хоботка изменяет ее, делая более округленной, грушевидной. Занимает она переднюю четверть тела. Нижняя граница железы - рядом с ганглием мирацидия (рис. 30). Размеры железы приблизительно равны 15,2х 14,1 мкм.

На окрашенных гемотоксилином препаратах в проксимальной части железы видны овальные ядра с ядрышками. Раствором Люголя хорошо выявляются контуры железы и ядер. В электронном микроскопе клеточных перегородок в апикальной железе нам обнаружить не удалось, ее структура синцитиальна. В цитоплазме можно рассмотреть рибосомы, митохондрии и шероховатую эндоплазматическую сеть, комплекс Гольджи, гранулы гликогена.

Для изучения в электронном микроскопе использовались мирацидии в возрасте 10 минут. Исследования показали, что апикальная железа имеет один общий проток, который при подходе к верхушке хоботка образует расширение, переходящее в 4 протока, открывающиеся терминально на теребраториуме. Стенка протока от колбы до разветвления укреплена микротрубочками. В начальном отделе протока у выхода из тела железы гранулы секрета мелкие, около 0,18 мкм в диаметре. В зоне расширения протока скапливается секрет железы в виде крупных гранул, перемежающихся с мелкими. Отсюда секрет поступает в четыре выводных протока, которые проходят между первым и вторым пучками кольцевых мышечных волокон и открываются выделительными порами на верхушке хоботка вокруг присасывательного углубления. Выделительные поры обычно закрыты, так как наблюдается скопление гранул около выводных пор. Запира-тельную функцию выводных пор вполне могут осуществлять первые два пучка кольцевых мышечных волокон, хотя, возможно, они прикрыты ци-топлазматической мембраной. Отдельные стадии накопления секрета в протоках апикальной железы, движение его по протокам хорошо просматриваются на ультраснимках. Это электронно-плотные гранулы разных размеров, ограниченные мембраной. Большое количество гранул секрета у мирацидиев в возрасте 10 минут наводит на мысль, что секрет синтезируется в этой железе на эмбриональной стадии развития (рис. 57).

Рис. 57. Продольный срез через теребраториум мирацидия F. hepatica(х 11 200, ориг.).Fig. 57. Longitudinal section of F. hepatica miracidium terebratorium.

На хоботке мирацидия открываются несколько одноклеточных желез. Эти железы имеют колбовидную форму с удлиненным протоколом. Иногда железы сильно удлиненно-колбовидные, а их протоки, образуя петли, тянутся к порам. О количестве желез нет единого мнения. В работе W.Ortmann (1908) упоминается о наличии пары "головных желез". O.Mattes (1949) описывает три пары желез, две из которых открываются на верхушке хоботка, две у его основания и две между первым и вторым рядами эпителиальных пластинок. А.Сазанов и Л.Тернопольская (1965) отмечают наличие двух пар одноклеточных желез, открывающихся у основания хоботка, и иногда четырех крупных одноядерных клеток, расположенных симметрично по бокам тела мирацидия.

Эти железы по расположению выводных протоков на хоботке делятся на акцессорные и латеральные.

Акцессорные железы переднего отдела тела мирацидия Fasciola hepatica. На электронных снимках нами обнаружены четыре железы удлиненной капельковидной формы. Они плотно прилегают друг к другу вокруг апикальной железы. Их нижняя граница на уровне соприкосновения первого и второго рядов эпителиальных пластинок. Их размеры равны 1,1 х 0,99 мкм. Выводные протоки желез расположены по кольцу самой верхушки хоботка и открываются между вторым и третьим пучками кольцевых мышц (рис. 30, 33, 58).

Размеры, компактность расположения тела и выводных протоков акцессорных и апикальных желез позволяют предположить, что по происхождению они однородны, но тела четырех клеток и часть их протоков слились и образовали апикальную четырехядерную железу, а остальные четыре существуют самостоятельно.

Латеральные железы переднего отдела тела мирацидия Fascioia hepatica. Обнаружены 4 одноклеточные железы 13удлиненной формы. Тела желез располагаются под первым и вторым рядом эпителиальных пластинок. Они имеют длину 11 мкм, а диаметр небольшой-1 мкм (рис.59). Протоки этих желез проходят между шестым и седьмым пучками кольцевых мышечных волокон и открываются порой перед первым рядом эпителиальных пластинок (рис. 33, 58, 60). Можно предположить, что секрет этих желез обеспечивает скольжение очень подвижного теребраториума и, возможно, они при-частны и к формированию покрова молодой спороцисты.

Теперь можно выстроить связь между функциями перечисленных желез мирацидия.

В литературе много дискутируют о назначениях всех желез на хоботке. О.Поляковой и А.Сазановым (1965) установлено, что в экстракте и гомоге-нате мирацидия содержится фермент гиалуронидаза, но в каких именно железах он находится пока определить не удалось. В исследованиях R.Wilson (1971) апикальная железа дает резко выраженную ШИК-положительную реакцию. Следовательно, их секрет содержит кислые мукопо-лисахариды. Позже были выявлены тирозинсодержащие белки. G.Buzzel (1983) предполагает, что эта железа содержит инактивированный лити-ческий фактор.

Считаем, что наличие гиалуронидазы в секрете этой железы, воздействующей на гиалуроновую кислоту, входящую в состав мукополисахари-дов межклеточного вещества эпителия моллюсков, тирозинсодержащих белков, инактивированноголитического фактора могут обеспечивать проникновение мирацидия в тело промежуточного хозяина. Так как секрет апикальной и акцессорных желез сливается в воронку на кончике хоботка, который образуется при прикреплении к эпителию моллюска, можно предположить, что они имеют отношение к растворению межклеточного вещества и проникновению мирацидия в тело промежуточного хозяина.

Можно предположить, что субэпителиальные железы имеют прямое отношение к пусковому моменту сбрасывания эпителиальных пластинок при проникновении личинки в тело промежуточного хозяина, так как посРис. 61. Субэпителиальная железа мирацидия Fasciola hepatica (х5 600, ориг.). Fig. 61. Gland subepidermal inF. hepatica miracidium. 1 - полость железы; 2 - проток железыле прикрепления моллюска начинают отделяться шесть эпителиальных пластинок первого ряда. Затем медленно начинает спадать второй ряд эпителиальных пластинок и т.д. Мы предполагаем, что секрет шести субэпителиальных желез разрушает контакт эпителиальных пластинок с ги-подермальными отростками и мышечными клетками.R.Wilson с коллегами (1971) предполагает, что слущивание происходит из-за активации энзимов в лизосомоподобных структурах эпителиальных пластинок. V.Southgate (1970) наблюдал образование полости между базапьной пластинкой и базальной мембраной эпителиальных пластинок, что может облегчить слущивание, но, к сожалению, автор не оговаривает возраст мирацидия.

Мы же получили подтверждение наблюдениям V.Southgate (1970). Ми-рацидии в возрасте 1,5-2 часов уже имеют полости под эпителиальной пластинкой. На некоторых участках эпителиальные пластинки остаются в контакте с базальной мембраной и гиподермальными выростами (рис. 62). Контакты сохраняются почти на одинаковом расстоянии друг от друга. Образовавшиеся отслоения эпителиальных пластинок говорят о том, чтоорганизм мирацидия заранее готовится к сбрасыванию эпителиальных пластинок при проникновении в моллюска.

Протоки латеральных желез открываются над первым рядом эпителиальных пластинок. P.Buzzel (1983) считает, что эти железы содержат секрет активирующий кофактор. Мы считаем, что секрет латеральных желез"обвалакивает" и "залечивает" тело личинки, сбросившей эпителиальные клетки, и содействует формированию покрова материнской спороци-сты.Рис. 62. Полости между эпителиальной пластинкой и гиподермальными выростами в теле мирацидия F. hepatica (х 15 600, ориг.).Fig. 62. Cavities between epithelial plate and hypodermal outgrowths in F. hepatica miracidium.

1 - полости под эпителиальными пластинками; 2 -контакт с базальной мембранойR.Wilson с коллегами (1971) наблюдал разрастание гиподермальных гребней по поверхности базальной пластинки сразу за слущивающейся эпителиальной пластинкой. V.Southgate (1970) предполагает, что, возможно, это связано с накоплением мембранного материала в цитоплазме гиподермы.

Дистальные железы у мирацидия Fasciola hepatica. С внутренней стороны ретракторов "каудального" органа на уровне "розеточных" органов мы обнаружили две одноклеточные железы (рис. 63). Они имеют ве-ретеновидную форму. Размер железы около 1,36 х 0,39 мкм.

При втянутом до уровня эпителиальных пластинок "каудальном" органе обнаружили проток железы, открывающийся на дне левой боковой складки. Логично предположить наличие четвертого протока, тем более, что в центре "каудального" органа четко вырисовываются четыре ядра (рис. 65). Учитывая очень большую подвижность "каудального" органа, расположение в нем этой железы, объяснима необходимость ее секрета, обеспечивающего легкое скольжение по боковым поверхностям эпителиальных пластинок локомоторного органа. Считаем, что этому содействует и секрет двух дистальных желез, открывающихся на дне боковой складки между "каудальным" органом и эпителиальной пластинкой.

В научной литературе (Галактионов, Добровольский, 1998; Гинецинская, 1968; Наумов, 1972; Семенов, 1991) распространено мнение, что эта железа без протоков с неизвестным назначением. На основании полученных нами данных трудно с этим согласиться. Учитывая сочетание чувствительной, локомоторной и железистой функций, можно говорить о многофункциональности этого органа и, следовательно, о примитивизме строения мирацидия фасциолы, ее филогенетической древности.

Таким образом, на сегодняшний день известны 6 видов желез внешней секреции. В их организации принимают участие 18 клеток, причем две из них четырехмерные. Если согласиться с мнением A.Looss (1892) и H.Guilford (1961) о формировании апикальной железы и нашим мнением о формировании "каудальной" железы, то в организации желез внешней секреции участвовали 24 клетки.

Рис. 65. "Каудальная" железа мирацидия F. hepatica(х 11 100, ориг.). Fig. 65. "Caudal" gland in F. hepatica miracidium. 1 - четыре ядра; 2 - железистая полость; 3 - ретрактор;3.2.1.3. Нервная система мирацидия Fasciola hepaticaНервная система мирацидия фасциолы мало изучена. Она ортогонального типа, состоит из ганглия, нервных стволов, пучков и отростков, имеющих разнообразные окончания. Нужно отметить, что у мирацидия фасциолы инвертированные глазки.

Ганглий мирацидия фасциолы имеет овальную форму. Расположен между эпителиальными пластинками второго ряда. Единое мнение о внешнем виде ганглия и его строении отсутствует. В имеющейся научной литературе отмечается разнообразие в изображении ганглия (рис. 66). Поданным R.Wilson (1970), этот ганглий - "мозг" составляет 8-10 % объема тела. Он расположен в паренхиме, лишен каких бы то ни было специальных оболочек (Gresson, Threadgold, 1964).

По нашим данным, ганглий расположен под апикальной железой, ограниченной спереди паренхиматозными клетками и их отростками. Латеральные участки "мозга" плотно прилегают к трубчатой части с мерцаРис. 66. Схема ганглия F. hepatica в работах авторов:1 - Сое, 1896; 2-Ortmann, 1908; 3 - Mattes, 1946; Наумов, 1972 Fig. 66. Schme of ganglion in F. hepatica miracidium, presented by: 1 - Сое, 1896; 2-Ortmann, 1908; 3 - Mattes, 1946; Наумов, 1972Рис. 67. Участок "мозга" мирацидия F. hepatica (х 11 ООО, ориг.) Fig. 67. The "braen" part of F. hepatica miracidiumтельным пламенем терминальной клетки. На электронных фотографиях можно рассмотреть участок "мозга", плотно прилегающий к протокам протонефридиальной клетки (рис. 67). Базаль-ный участок мозга находится на нижней линии второго ряда эпителиальных пластинок. Это хорошо видно на рис. 30 (плоскостная, графическая реконструкция по электроннограммам).

Этот ганглий имеет волокнистую структуру, состоит из густого сплетения нервных волокон и рыхло расположенных нейронов. Всю массу нервных клеток можно рассматривать как центральную нервную систему. В ней по периферии в 1-2 ряда расположены около 20 перикарио-нов (рис. 30, 68). Аксоны и дендриты нейронов уходят в глубь мозга, в нейропиль, т.е. ганглий имеет сферическую структуру (Pan, 1980).

Поверхность ганглия окружена отростками паренхиматозных клеток, нейроны как бы зажаты между ними. Видимо, отростки клеток паренхимы осуществляют механическую защиту мозга. Некоторые его отростки уходят в глубь мозга, в нейропиль.

Нейроны, образующие ганглий, имеют размеры 3-6 мкм. Ядра этих клеток многоугольны. В цитоплазме нейронов отмечают наличие зернистости, гранул а- и р-гликогена, митохондрий, рибосом, аппарата Гольджи, гладкой и шероховатой ЭПР, липидных включений и нейросекреторных пузырьков разных типов. В работах R.Wilson (1970) и S.Pan (1980) отмечается, что в периферических нервных клетках, подходящих к мускульным клеткам, к специализированным нервным окончаниям, особенно много нейросекреторных пузырьков.

Нервные тяжиу мирацидия фасциолы образованы выходящими из ней-ропиля отростками нервных клеток. Они объединяются и образуют латеральные, дорсальные и вентральные тяжи. Два самых крупных тяжа подходят к латеральным папиллам. Два тонких тяжа (дорсальный и вентральный) отходят от ганглия в каудальном направлении, где один закрепляется на клетках мышц, другой - на чувствительных органах.

Нервные пучки у мирацидия фасциолы состоят из нервных волокон, тоже выходящих из нейропиля. Эти пучки подходят к чувствительным органам переднего отдела тела и теребраториума (рис. 69).

По наблюдениям R.Wilson (1970), нервные тяжи и нервные пучки соединяются односторонними синапсами. Они содержат электронно-плотные структуры с одной из противоположных мембран контакта.

Одиночные отростки нервных клеток ганглия у мирацидия фасциолы, по наблюдениям W.Coe (1896), подходят к 6 сенсиллам у оснований эпителиальных пластинок первого ряда и к четырем очень маленьким сенсиллам на двух латеральных папиллах (рис. 69). R.Wilson (1970) считает, что одиночные отростки нервных клеток ганглия подходят и к 5 чувствительМногочисленные одиночные нервные отростки в цитоплазме имеют такие же включения, как и нейроны. Иногда в цитоплазме нервных отростков встречаются микротрубочки. Содержание нейросекреторных пузырьков в отростках больше, чем в теле нервной клетки, и расположены они в его терминальных участках.

Нейросекреторные пузырьки в отростках у мирацидия фасциолы неоднородны, их размеры в диаметре от 300 до 1650 А. Они трех типов, но в каждой группе нервных тяжей можно встретить только один тип нейросекреторных пузырьков. Каждый тип пузырьков характеризуется постоянным размером, местом расположения и электронной плотностью (Wilson, 1970).

Окончания нервных волокон у мирацидия фасциолы тоже разнообразны. У мирацидия фасциолы выделяют 4 типа специализироным клеткам глаз.

Чувствительные окончания у мирацидия Fasciola hepatica представлены одиночными сенсиллами (совокупность сосочков сенсорного волоска), латеральными папиллами, внутренними булавовидными окончаниями, глазами.

Одиночные сенсиллы у мирацидия фасциолы располагаются вокруг пор протоков апикальной и акцессорных желез, на верхушке теребраториума (рис.69). Расположение сенсилл на переднем отделе тела, на присосках у свободно живущего мирацидия можно рассматривать как дополнительное доказательство сенсорной функции сенсилл.

Следующая группа одиночных сенсилл располагается на гиподерме между первым и вторым рядами эпителиальных пластинок. В середине основания каждой эпителиальной пластинки первого ряда имеется специальная выемка, в которую входит гиподерма. Их 6 и в каждой из них размещается одиночная сенсилла (рис. 69). Исследования И.Тихомирова (1980) показали, что эти небольшие сосочки несут на верхушке ресничку, закрепленную в базальной грануле в опорном кольце, и имеют корневую нить (рис. 70).

Латеральные папиллы располагаются по бокам мирацидия на гипо-дермальном гребне в выемке эпителиальной пластинки под одиночной сенсиллой. Латеральная папилла - гомогенное образование, имеет сложное строение и носит название сенсорного комплекса. Папилла образована элипсоидным окончанием нервного отростка, покрытого гиподермальным чехлом с порой и двумя очень маленькими сенсиллами. А.Добровольский, «.Галактионов и Г.Мухамедов (1983) показали, что эти сенсиллы представляют собой ригидные реснички без центральных микротрубочек (рис. 71).

Ресничные поля у мирацидия фасциолы образованы скоплением ригидных ресничек. Их корневые нити сближаются в нервных окончаниях. Покрывающая гиподерма образует поры для выхода ресничек.

Булавовидными сенсиллами^ мирацидия заканчиваются два нервных тяжа под эпителиальной пластинкой. Они не имеют ресничек и, возможно, это -артефакт (рис. 68).

Органы зрения мирацидия - "глаза". Органы зрения трематод и их личинок представляют собой инвертированные глазки. В световом микроскопе можно рассмотреть два полукруга сближенных в средней части (рис. 30). Это два пигментных бокала, т.е. два простых рабдомерных глаза. Они расположены в непосредственной близости от мозгового ганглия на дорсальной стороне подтелом апикальной железы. Первые указания на то, что хрусталики "глаз" мирацидия фасциолы образованы совокупностью зрительных клеток, принадлежат О.Mattes (1949).

При исследовании в электронном микроскопе можно видеть "глаза", состоящие из двух чашеобразных пигментных клеток, прикасающихся друг к другу (рис.

К правой пигментной клетке подходят две чувствительные (ретикулиновые) клетки, к левой - три чувствительные клетки, поэтому левый "глаз" по размерам больше правого.

Чувствительные клетки идут параллельно, плотно прилегая друг к другу. К пигментной клетке они прикасаются своими рабдомерами, но между ними проходит перегородка пигментной клетки. Две чувствительные клетки левого "глаза"зеркально отображают чувствительные клетки правого. Пятая чувствительная клетка как бы вклинивается между двумя пигментными дугами, но входит она в левую пигментную клетку. Рабдомеры двух чувствительных клеток "глаза" мирацидия фасциолы располагаются параллельно пигментным дугам. Непарная чувствительная клетка левого глаза имеет рабдомер в виде треугольника с закругленными боковыми сторонами. Он расположен перпендикулярно к телу чувствительной клетки.

В дистальном отделе матки яйцо уже зрелое и иногда начинает дробиться неравномерно.

От оплодотворенной клетки отшнуровываются 3 небольшие клетки. От-шнуровывание этих клеток можно считать созреванием и приравнять их к направительным тельцам. Следовательно, зародышевые клетки печеночной фасциолы подлинные, партеногенетически развивающиеся яйца и процесс развития ее следует называть гетерогонией. Эти 4 клетки неодинаковы: 2 клетки имеют круглые небольшие крупнозернистые ядра, 2 других - продолговатые мелкозернистые ядра. Со временем 3 клетки исчезают и остаются большой и малый бластомер (рис. 75 2). Они отличаются по структуре (рис. 75 2). На 5-6-клеточной стадии мы наблюдаем 1 большую клетку и 4-5 меньших, окружающих первую (рис. 75 4).

Большой бластомер в развитии фасциолы имеет светлую пузырчатую гомогенную прозрачную цитоплазму с резко ограниченным ядерным тельцем. Y.lshii (1934) предложил эту клетку эмбриона трематод называть эктодермальной (ectoderm-cell), или соматической. Этот бластомер начинает делиться и образует разнородные клетки с не очень ясными границами. У фасциолы на пятый день деления эмбриона, состоящего из приблизительно 20 клеток, на апикальном полюсе появляется клетка с уплощенным ядром. Ее цитоплазма как бы начинает "обтекать" зародыш, образуя вокруг эмбриона мембрану. Через некоторое время ядро рассасывается, а пропагаторный бластомер начинает делиться и формирует генеративные клетки (рис. 75 6). Из потомков большого бластоме-ра несколько клеток поднимаются на поверхность и образуют эмбриональную оболочку вокруг зародыша и желточных клеток (Schauinsland, 1883). С этого момента начинается быстрое деление клеток и их рост до определенного размера, характерного для клеток мирацидия фасциолы. О.Семенов (1991) считает, что по "достижении эмбрионом 70-80-кпеточ-ной стадии пролиферация клеток замедляется и начинаются морфогене-тические процессы", сопровождающиеся "специализацией клеток и дегенерацией значительной их части". Желточная масса, по мнению R.Wilson (1967), участвует в формировании "вязкой пробки", играющей большую роль при выходе мирацидия из яйца. Она образуется между желточноймембраной и яйцевой оболочкой. Исследования в электронном микроскопе показали, что "подушка" образована двумя мембранами, расположенными на расстоянии 30 нм. В дальнейшем за счет потомков соматической клетки формируются покровы мирацидия, нервная система, про-тонефридии и паренхима.

Малый бластомер в развитии фасциолы было предложено Y.lshii (1934) называть пропагаторной клеткой (propagatory-cell). Из них формируются генеративные клетки мирацидия. Этот бластомер имеет цитоплазму с базальной зернистостью и ядро особой структуры (рис. 75 2, 3). Он медленно увеличивается внутри формирующегося мирацидия. На стадии 7 клеток малый бластомер резко выделяется. Его ядро отличается по своей форме и величине от ядер других клеток (рис. 75 4). Гомогенный пузырчатый характер напоминает первоначальную зародышевую клетку. Эта клетка растет, но не делится (рис. 75 5).H.Reuss (1903) отмечает, что в его наблюдениях даже на стадии 25 клеток пропагаторная клетка оставалась в покое. Остальные клетки делились и окружали малый бластомер (рис. 75 6).

Рис. 76. Терминальная клетка в теле мирацидия F. hepatica (х 7 740, ориг.) Fig. 76. Germinal cell of F. hepatica miracidiumНа стадии 26-30 клеток появляются слабо окрашивающиеся карпус-кулы с компактным хроматином, веществом опалестирующим в искусственном свете, почти отсутствующим в цитоплазме. Эти тела выбрасываются яйцеклетками. W.Schubmann (1905) и R.Goldschmidt (1909) считают их липидным материалом. A.Van derWoude (1954) приписывает им роль пикнотических ядер, которые изменяют свою гранулярную структуру и могут быть резорбированы во время дифференцировки тканей. В соответствии с исследованиями данных авторов эти "тела" и клетки могут также функционировать и образовывать отдельные ткани мирацидия.

Несколько первых делений пропагаторного бластомера не равномерны, не синхронны. При этом появляются мелкие клетки, которые дифференцируются в мышцы и железы мирацидия. Последние несколько делений проходят равномерно и приводят к образованию зародышевых клеток. Эти терминальные клетки имеют крупное ядро с ядрышком и гомогенную пузырчатую цитоплазму, богатую органоидами (рис. 76,77). В результате деления этих клеток у мирацидия фасциолы начинают форРис. 77. Ложе для терминальных клеток мирацидия Fasciolahepatica (х 8 ООО, ориг.) Fig. 77. Germinal cells' bed in F. hepatica miracidiumмироваться 6-9 зародышевых шаров - эмбрионов дочернего поколения - редий (рис. 75 8). Следовательно, количество второго партеногене-тического поколения определяется в теле мирацидия.

Этот процесс очень сходен с процессом образования эмбриона у других дигенетических сосальщиков, исследованных N.Ortmann (1908), Y.lshii (1934), H.Bennet (1936), P.Chen (1937), F.Rees (1940), A.Van der Woude (1954), M.Dunn (1959). Что же касается печеночной фасциолы, то ей, по данным ряда авторов (Сое, 1896; Сагу, 1909; Reuss, 1903), вообще не свойственна полиэмбриония.

К.Галактионов и А.Добровольский (1998) считают сомнительным приложимость гипотезы непрерывности зачаткового пути к трематодам. Поэтому крупную клетку, которую мы называем большим бластомером, соматической клеткой, или эктодермальной (ectoderm-cell), они называют макромером, а маленькую пропагаторную клетку (propagatory-cell)- первичным мезомером и предлагают следующее обсуждение.

Макромер дважды делится и образует вторичные мезомеры, часть из них, продолжая делиться, образуют микромеры. Несколько поверхностно расположенных производных макромеров иммигрируют к скорлупке, уплощаются и образуют желточную мембрану с "пробкой" возле крышечки.

Первичный мезомер (пропагаторная клетка) некоторое время не делится и на стадии 15-20-клеточного зародыша его трудно отличить от вторичных мезомеров. Но происходит поляризация эмбриона и макромеры с ме-зомерами оказываются на одном полюсе яйца, а микромеры - на другом.

Постепенно, дифференцируясь, формируются органы мирацидия. Зародышевые листки при этом не выражены (Йванова-Казас, 1975). Название "пропагаторный бластомер" условное, так как он дает начало как зародышевым клеткам, так и соматическим.

3.2.1.5. Выделительная система мирацидия Fasciola hepaticaВпервые сообщение о строении выделительной системы печеночной фасциолы было опубликовано в 1896 г. (W.Coe). Затем появилась работа W.Ortman (1908), наброски O.Mattes (1949). В 1940 г. была опубликована работа I.Kawana о строении выделительной системы всех стадий развития фасциолы.

Первая работа на электронно-микроскопическом уровне была сделана G.Kummel (1958). Затем появились работы R.Wilson (1967), R.Wilson, L.Webster (1974), Ф.Соколиной (1969,1970, 1986,1987).

Выделительная система мирацидия фасциолы протонефридиального типа. Она представлена парой звездчатых клеток, расположенных по бокам тела личинки (рис. 78).

Как видим, на рис. 78 терминальные клетки с протоками топографически не определены. У W.Coe они расположены на апикальном уровне третьего ряда эпителиальных пластинок и параллельны им. Протоки сразу поворачиваются к латеральной поверхности, плотно прилегают к мускульным волокнам и гиподерме под эпителиальными пластинками мирацидия.

В работе W.Ortmann терминальная клетка расположена почти на границе третьего и четвертого рядов эпителиальных пластинок.

У O.Mattes терминальные клетки расположены на уровне второго ряда эпителиальных пластинок. Их протоки с "мерцательным пламенем" наклонены к эпителиальной пластинке.

Поданным А.Наумова (1972), протонефридиальные клетки плотно прилегают к базальной пластинке четвертого ряда эпителиальных пластинок, трубка с "мерцательным пламенем" наклонена в сторону эпителиальной пластинки, а протоки уходят в паренхиму в сторону ганглия.

Терминальная клетка, которая образует полость с пучком колеблющихся ресничек, напоминающих мерцание свечи, получила название мерцательных, или пламенных. На наших электроннограммах эта клетка расположена в паренхиме на уровне второго ряда эпителиальных пластинок и от наружной поверхности тела находится на расстоянии всего 1,21 мкм (Соколина,1969).

Электронно-микроскопические исследования поперечных и продольных срезов позволили нам установить, что терминальная клетка у мирацидия Fasciola hepatica не совсем обычна. Ее размеры в диаметре около 6 мкм. Она неправильной формы с волнообразной поверхностью. Ядро этой клетки довольно крупное с волнистыми краями диаметром около 3,4 мкм. В его центре располагается крупное ядрышко с электронно-плотным содержимым диаметром около 0,8 мкм. Ядро протонефридиальной клетки смещено на край цитоплазмы в сторону зародышевых шаров. Создается впечатление, что в терминальной клетке два ядра, плотно прилегающие друг к другу (Соколина, 1970, 1986,1987).

Рис. 80. Мерцательное пламя протонефридиальной клетки мирацидияF. hepatica(х 25 300, ориг.). Fig. 80. "Ciliary" flame of F. hepatica miracidium protonephridial cell. 1 - реснички; 2 - "мерцательное пламя"R.Howells (1969), изучая нефридиальную систему цестоды Moniezia expansa (Rud, 1805), предположил, что пламенные клетки могут представлять сложную структуру из двух клеток. R.Wilson (1968) поддержал это предположение.

Цитоплазма терминальной клетки мирацидия Fasciola hepatica по объему невелика и содержит небольшое количество гранулярных вакуолей, мелких митохондрий возле основания ресничек, много удлиненных митохондрий на противоположной от ресничек стороне цитоплазмы. Цитоплазма терминальной клетки формирует два очень важных компонента выделительной системы: "ресничное пламя" и выделительный канал.

На продольных срезах в электронном микроскопе можно увидеть, что от клетки под небольшим углом отходит плотный пучок ресничек (рис. 80)."Мерцательное пламд' у мирацидия фасциолы формируется в толстом слое цитоплазмы, который появился из-за смещения ядра. Корневые нити, отходящие от базальной гранулы каждой реснички, лежат в цитоплазме плотным пучком. Они тонкие, длинные, шило-видно заостренные и на концах дают тончайшие протоплазмати-ческие структуры в виде нитей, подходящих почти вплотную к 0,5м ядерной мембране. G.Kummel (1958) считает, что ультраструктура ресничек "мерцательного пламени" соответствует структуре ресничек инфузорий (рис. 81). На наших электронных фотографиях корневая нить очень тонкая, нитевидная (рис. 82). При выходе из терминальной клетки стенка протока, окружающая ресничное пламя, плотно прилегает к нему.

Рис. 81. Схема строения ресничек "пламени" протонефридиальной клетки мирацидия F. hepatica (Kummel.1958) Fig. ё81. Scheme of the "flame" cilia structure of the protonephridial cell in F. hepatica miracidium^ л:/ Oms^m*Рис. 82. Корневые нити ресничек в цитоплазме протонефридиальной клетки (х 25 300, ориг.). Fig. 82. Ciliary root filaments in the protonephridial cell cytoplasm.

Приблизительно на расстоянии 1-1,2 мкм от терминальной клетки стенки протока резко отходят от "мерцательного пламени" и образуют свободное пространство вокруг него (рис. 84). В конечном отделе "мерцательного пламени" остаются около 20 ресничек, проток сужается и микроворсинки отсутствуют (рис. 85).

Я Т'/ * 1 ^ : в ПОЛОСТИ выделительного ка• нала Реснички плотно прилегают" " ^друг к другу и синхронно изгибаются при работе. "Мерцательное пламя" в поперечном разрезе имеет эллипсоидную форму (рис. 84). Оно образовано 130-140 ресничками, расположенными в шахматном порядке, почти всегда в 17 рядов с количеством ресничек, отличающимся от ряда к ряду на единицу. Средние 5-8 рядов количественно равны между собой и состоят из 10 или 11 ресничек. Часто формула ресничек такова: 3, 4, 5,6, 7, 8,9,10,10,10,10,10,9, 8, 7, 6, 5, 4, 3.

Рис.83. Срез на границе цитоплазмы и протока терминальной клетки (х 15 000, ориг.) Fig. 83. Frontier-section net batween the cytoplasm cell and its ducts of excretory systemРис. 84. Поперечный (х 15 400) итанген-тальный (х 14 700) срез через "ресничное пламя" протонефридиальной клетки мирацидия F. hepatica (ориг.)./V- - '•:• \ts'^'H-^ г1* =-"Fig. 84. Cross and tangentai sections of "ciliary flame" ofpro-tonephridial cell in F. hepatica miracidium. 1 - "мерцательное пламя"; 2 - реснички; 3 -внутренние микроворсинки; 4 - наружные микроворсинкиИногда количество ресничек в рядах бывает меньше. Видимо, реснички, расположенные по краю "мерцательного пламени", обламываются. Это можно видеть на электронных снимках.

Выделительный канал протонефридия мирацидия фасциолы формируется из части поверхностной цитоплазмы. Она уплощается, сворачивается в трубочку и скрепляется септальными дисмосомами. Внутри этой трубочки работает "мерцательное пламя". В начальном отделе образовавшегося выводного протока стенки состоят из двух продольных рядов уплотненных цитоплазматических тяжей (рис. 86). Следовательно, просвет протока внутриклеточный. Эти выводы согласуются с мнением R.Wilson (1969). Поверхность канала ребристая, так как тяжи располагаются в шахматном порядке. На поперечных срезах видно, что они образованы цитоплазмой, с электронно-плотным слоем пограничной мембраны. Соединяются тяжи дисРис.85. Конечный отдел "ресничного пламени" протонефридия (х 17 000, ориг.) Fig. 85. Terminal part "ciliary flame" of protonephridium in F. hepatica miracidiumмосомами. Тончайшие щелевидные просветы между ними позволяют просачиваться жидкости из паренхимы. Видимо, на этом участке выделительной системы осуществляется осмотическая регуляция. Этот отдел протока G.Kummel (1959) предложил считать местом фильтрации. Цитоплазма этих тяжей гра-нулярна, поэтому E.Reisinger(1923) предполагает, что сами клетки имеют железистый характер.

Терминальная клетка и начальный отдел выводного протока окружены лакунами, заполненными межклеточной жццкостью. Просвет вокруг соленоцита очень невелик, всего 0,36 - 0,45 -1,19 мкм. Вдоль выводного протока этот просвет тянется около 6-7 мкм. Внутренняя поверхность протока, куда не доходит "мерцательное пламя", ровная, гладкая. Цитоплазма тяжа тонкая гранулярная. Далее стенки протока плотно прилегают к клеткам паренхимы. Выводные протоки, извиваясь, тянутся вдоль боковых линий тела мираццция. В этой части канала стенки выводного протока образуют множество складок, содержат митохоццрии и гранулярные вакуоли, что говорит об их секреторной деятельное™ (Pantelouris, Threadgold, 1963).

Дистальные участки канальцев на уровне выводных пор между 4 и 5 рядами эпителиальных пластинок образуют шарообразные расширения диаметром от 0,9 до 2 мкм, которые являются местом скопления экскреторной жидкости и выполняют роль "мочевого пузыря" (рис. 88).

Механизм работы протонефридиальной системы можно представить следующим образом: жидкость из просветов и лакун в паренхиме вокруг "мерцательной клетки" поступает в ее цитоплазму, собирается в виде вакуоли и выбрасывается в полость канала. Часть тканевой жидкости просачивается через слизистую пленку на щелевидных просветах между тяжами выводного протока. Работа ресничек препятствует застою жидкости, и она движется по выделительным каналами в силу законов капиллярности. Отток жидкости создает гидростатическое давление в трубочке-это осмотическая работа выделительной системы.

Необходимо попытаться объяснить роль выростов на тяжах. Мы предполагаем, что микровыросты служат для сохранения просвета внутри протока и вокруг соленоцита.

Внутренние микроворсинки не допускают трения "мерцательного пламени" о стенки канала, амортизируют его удары во время колебания, обеспечивают просвет при оттоке его содержимого и способствуют поступлению накопившейся жидкости из терминальной клетки и полостей вокруг начального отдела выводных протоков в просвет канала. Наружные выросты обеспечивают просвет вокруг терминальной клетки и выводного протока, необходимый для притока жидкости и экскреторных продуктов всего организма мирацидия. За счет снижения давления в просвете канала из терминальной клетки осмотически накопившаяся жидкость устремляется в просвет протока, а в складках выводного протока усиливается фильтрация экскреторной жидкости и это снижает давление вокруг соленоцита, что обеспечивает приток туда новой порции жидкости (Соколина, 1986,1987).

На микроснимках видно, что выросты вплотную подходят к клеткам паренхимы, но нам не удалось обнаружить места их соединения. Однако не исключено, что они вступают в контакт с клетками паренхимы. Выростырасположены параллельно друг к другу. На рис. 84 и 87 видно, что со стороны вогнутости "мерцательного пламени" срез прошел почти через всю длину выроста. Можно предположить, что они в этом месте находились в состоянии тургора, а внутренние выросты свободно свисали в просвет канала. С выпуклой стороны "пламени" наружные выросты, видимо, были изогнуты волнообразно, так как срезаны они в виде "тире". Причем, на снимках ясно видна изогнутость. Тем не менее, они расположены параллельно и подходят вплотную к клеткам паренхимы. Это убеждает нас в необходимости изучения мест контакта наружных выростов с паренхимой.

Существующее мнение, что протонефридиальная система выполняет только осмотическую роль, нам кажется ошибочным, несмотря на то, что есть примеры в его поддержку (у морских примитивных турбеллярий про-тонефридии отсутствуют и экскреты удаляются амебоцитами).

Отмеченные нами выше микроворсинки на стенках тяжей, железистый характер цитоплазмы клеток их образующих, наличие вакуолей служат доказательством секреторной деятельности протонефридиальной системы. Огромное количество складок на выводных протоках позволяет предположить их местом ультрафильтрации. На основании вышеизложенного можно сделать вывод, что деятельность протонефридиальной системы - процесс активный.

Мы провели наблюдение в фазово-контрастном микроскопе за деятельностью "ресничного пламени" протонефридия мирацидия, не проникшего в промежуточного хозяина - моллюска Lymuneae truncatula (Соколина, 1969). Выяснилось, что колебание "мерцательного пламени" в про-тонефридиях прекращается за 2-3 часа до гибели мирацидия. Остановке "мерцательного пламени" предшествуют частые судорожные сокращения всего тела. Видимо, начинается самоотравление организма из-за ослабления деятельности протонефридиальной системы. Затем судороги повторяются реже (через 10 -15 - 22 - 65 -135 секунд), иногда с перебоями. В момент остановки протонефридиев сокращения тела местные, захватывающие небольшие участки. Эти сокращения сопровождаются изменением формы тела. При выходе из яйца мирацидий имеет конусовидную форму, но вскоре, в результате очень оживленного плавания, становится булавовидным. Внутреннее содержимое как бы перемещается к переднему отделу личинки. Видимо, это вызывается сокращением кольцевых мышц в области 4 ряда эпителиальных пластинок. Нами было отмечено изменение формы тела в связи с нарушением деятельности "мерцательного пламени". Если отношение между округлой передней и удлиненной задней частями тела составляло во время плавания и в момент оседания на дно сосуда 2:3 (рис. 89), то к моменту отключения протонефридиев оно становится 1:1. После остановки "пламени" форма тела мирацидия продолжает изменяться. Местные перистальтические сокращения приводят к медленному перемещению частей тела по отношению друг к другу, сопровождающемуся изменением соотношений между расширенной и вытянутой частями тела (2,4:1,6; 2, 5:1,5 и т.д.). В результате мирацидий вновь принимает первоначальную форму, а затем он начинает уплощаться и становится очень похожим на половозрелую форму фасциолы, что, видимо, является следствием ослабления кольцевых мышц (Соколина, 1970).

Рис.89. Изменение формы тела мирацидия F. hepat/ca в последниетри часа жизни (ориг.) Fig. 89. Transformation of F. hepatica miracidium body shape over the last three hours of life3.2.2. БИОЛОГИЯ МИРАЦИДИЯ FASCIOLA HEPATICAМарита фасциолы - эндопаразит. Ее яйца выводятся из организма хозяина с содержимым кишечника. Дальнейшее развитие становится возможным только в водной среде при благоприятном соотношении очень многих факторов: температуры, рН среды, кислорода, освещенности, энергетических запасов и т.д.

3.2.2.1. Энергетические запасы мирацидия Fasciola hepatica. их динамика и расходованиеПаразитические черви занимают особое место в связи с их образом жизни, который обусловил морфологические адаптации и связанные с ними физиологические особенности организма. Метаболизм у этой группы животных чаще происходит в анаэробных условиях и, следовательно, отличается характером химических реакций, что сказывается и на запасных питательных веществах. Исследования показали, что энергетическим источником паразитических червей на разных стадиях развития являются гликоген и жир.

В литературе есть ряд работ, посвященных этому вопросу, но в основном они касаются половозрелых форм (Гликина, Березенцева, 1957; Ме-лех, 1963; Гинецинская, Беседина, 1965; Пальм, 1968). Есть работы по динамике запасных питательных веществ в онтогенезе сосальщиков (Лут-та, 1939; Гинецинская, 1960; Гинецинская, Добровольский, 1962,1963; Пе-реверзева,1966).

Разные стадии жизненного цикла печеночной двуустки Fascioia hepatica проходят в различных кислородных условиях. Поэтому запасные питательные вещества тоже используются с различным коэффициентом "полезного действия". В основном эти реакции идут в бескислородных условиях в организме хозяина. Только что сформированное яйцо в половых протоках мариты окружено желточными клетками. Как только начинается дробление яйцеклетки, оболочка желточных клеток разрушается и образуется питательная масса для зародыша. Исследования показали, что яйцевая клетка свободна от гликогена и жира, а желточная масса состоит из слившихся гранул гликогена и капелек жира различных размеров.

Гликоген в виде черных глыбок густо наполняет желточные клетки яйца, но в яйцевой клетке он не обнаружен. Жир также в большом количестве обнаруживается в желточных клетках, а в яйцеклетке он может встречаться в виде мельчайших капелек в очень незначительном количестве или совсем отсутствовать (Лутта, 1939). В начальной стадии развития мирацидия в яйце идет накопление в его теле гликогена и жира из желточных клеток (рис. 90). По мере формирования мирацидия количество гликогена в его теле увеличивается. Жир, который сосредоточен в желточни-ках, в оотипе окружает яйцевую клетку и входит в состав сложного яйца. Этот жир может быть использован мирацидием при развитии в яйце, находящемся в водной среде.

В период развития яйца в теле мариты в анаэробных условиях, видимо, происходит неполное окисление углеводов в результате ферментативного расщепления гликогена. При этом, по T.Brand (1950), образуется С02, ряд сложных органических соединений, в том числе жирных кислот, выделяется 6-12% энергии. Неполное расщепление в анаэробных условиях образует экскреторный жир, который не может быть использован личинкой. Исследование мирацидия в яйце показывает самый большой процент содержания гликогена и жира в теле мирацидия. Так как коэффициент использования запаса энергии мал, то в процессе жизнедеятельности паразиту приходится расходовать значительное количество гликогена, с чем, видимо, и связано накопление большого количества его на всех стадиях развития трематод, кроме стадии свободноплавающей личинки - мирацидия. Жир в условиях кислородного голодания не может быть источником энергии.T.Brand и T.Mercado (1961) отмечают, что жир в теле каждой фазы развития трематоды различается по своему происхождению. НаблюдаетсяРис. 90. Содержание гликогена и жира в желточных клетках яйца F. hepatica(Лутта, 1939).Fig. 90. Glycogen and fat content in the "yolk" cells of F. hepatica ovum.

1 - гликоген; 2 - жирзависимость динамики жира от динамики гликогена (Лутта, 1939), на основании чего делается заключение, что жир может образоваться за счет распада гликогена. Следовательно, в теле мирацидия имеются два вида жира: жир, полученный из желточных клеток, и экскреторный жир (жир, который может быть использован как источник энергии, и жир, который может выполнять гидростатическую роль при плавании мирацидия).

К выходу из яйца в теле мирацидия количество запасных веществ падает. Это вполне объяснимо, так как мирацидий в яйце при ярком освещении становится очень активным, затрачивает энергию, расходует запасные питательные вещества. Исследовалась динамика гликогена и жира у мирацидиев фасциолы на стадии проникновения в промежуточного хозяина, т.е. на третьем часу свободноплавающей жизни, и на стадии планирования незадолго до гибели. Эти стадии интересны тем, что личинка, выходящая из яйца, до проникновения в промежуточного хозяина находится в аэробных условиях, не питается и ведет активный образ жизни, расходуя накопленные в процессе эмбриогенеза питательные вещества.

При выходе мирацидия из яйца запасы питательных веществ невелики, но вполне обеспечивают энергией для проникновения в промежуточного хозяина. В первую очередь свободноплавающая личинка расходует запасы гликогена. Его распад идет до конца и, следовательно, выход энергии максимальный. Являясь оксибиотическим организмом, мирацидий может с успехом использовать жир в качестве источника энергии. Возможно, малое количество запасных питательных веществ связано с небольшой продолжительностью жизни в воде.

Интересно состояние гликогена в теле мирацидия в период его проникновения в промежуточного хозяина и гибели. Гранулы гликогена неравномерно распределяются по всему телу личинки в виде мелких гранул. Его наибольшая локализация наблюдалась в эпителиальных пластинках и субэпителиальном слое. В эпителиальных пластинках гликоген скапливается в такомбольшом количестве, что покров мирацидия выглядит пластинкой, интенсивно окрашенной в красно-фиолетовый цвет. Видимо, это накопление связано с необходимостью большого запаса энергии для нормального функционирования ресничек, обеспечивающих движение личинки и поиск промежуточного хозяина - моллюска (Соколина, 1978).

Отложение гликогена в указанных слоях можно связать с возможным осмотическим типом питания через апикальную поверхность эпителиальной пластинки мирацидия в период эмбрионального развития, в пользу которого говорят большое количество желтка в яйце и многочисленные микроворсинки на эпителиальных пластинках мирацидия. Причем, окраска эпителиальных пластинок более интенсивна со стороны базальной мембраны. Это объясняется тем, что, вследствие внедрения химических фиксирующих жидкостей изменяется внутриклеточное распределение гликогена. Зернышки гликогена отодвигаются внедряющейся фиксирующей жидкостью и скапливаются в комочки на противоположной направлению жидкости стороне клеточной мембраны (Кисели, 1962).

В большом количестве гликоген сосредоточен в паренхиме вокруг зародышевых клеток в виде глы-бок разной формы и зернышек, что вполне объясняется особым положением зародышевых клеток в организме.

Заключение диссертации по теме «Паразитология», Соколина, Флюра Мухаметгалеевна

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

Изучать представителей паразитических червей в Казанском университете начали в 50-х годах прошлого столетия. Тематика исследований разнообразна.

В монографии рассмотрены особенности ультраморфологических, биологических и экологических характеристик физиологии мирацидия Fasciola hepatica L, 1758.

Фасциолез является гельминтозом номер один в России и на остальных континентах мира. В России более 8% забиваемого крупного рогатого скота поражены этим гельминтом. В виде спорадических случаев, а иногда и вспышек, им достаточно часто болеют люди. В 1989-1991 гг. в Иране (в провинции Шираз) заболело более 10 тысяч человек. Процесс заболевания протекал остро и крайне тяжело.

Жизненный цикл фасциолы сложен. Вероятность найти хозяина, прижиться у него, кажется, невелика. Скорость же размножения, наоборот, очень большая, что привело бы к потенциальной угрозе существования промежуточного хозяина, который представляет ему такие важнейшие ресурсы, как пища и жизненное пространство. Одним из регуляторов, одерживающих рост численности паразитов, являются факторы внешней среды. Они оказывают ясно выраженное влияние на экстенсивность инвазии в популяции хозяина, тогда как иммунные реакции хозяина регулируют интенсивность инвазии на уровне особи и способствуют стабилизации паразитарной системы: "фасциола-моллюск-дефинитивный хозяин".

В монографии сделана попытка объяснить интимные процессы во взаимоотношениях паразита и хозяина. Зависимость проникновения мирацидия от строения эпителия и тканей моллюсков позволяет в геранти-ческих условиях быстро определить виды моллюсков-возможных промежуточных хозяев трематод для организации борьбы в очагах вспышек фасциолеза. Описаны этапы взаимодействия мирацидия и эпителиальных клеток, тканей моллюска, его проникновение в промежуточного хозяина и дальнейшая судьба.

В работе изучение морфологии мирацидия построено по той же схеме, что и морфология мариты, чтобы более реально были видны при сравнении различия в организации.

Особо освещена роль тонких структур в строении мирацидия Fasciola hepatica. Представлены данные по электронной микроскопии систем органов, по его микроанатомии и физиологии.

Впервые обнаружены и описаны 2 дистальные железы, 4-ядерная "каудальная" железа с 4 протоками, 6 субэпителиальных желез внешней сек-

реции, "розеточные" органы, разветвления ретракторов, 8 видов микроворсинок, приуроченных к определенным эпителиальным пластинкам. Получены снимки генеративных клеток и их "ложа", уточнено место расположения "мозга" мирацидия и разобрана его структура, определено расположение терминальной клетки и ее протоков. Получены электронные фотографии корневых нитей ресничек "мерцательного пламени", отличающиеся от корневых нитей эпителиальных пластинок. Определено количество клеток, составляющих мирацидий, -184 (в литературе известны около 100). Проанализирована связь различных факторов как в эксперименте, так и в естественных условиях.

Учитывая нашу попытку обобщить разрозненный материал, в книге неизбежны недостатки, поэтому все указания на них, замечания и предложения автор примет с глубокой признательностью.

Я чрезвычайно благодарна всем обстоятельствам моей сложной судьбы, которые позволили мне узнать и полюбить многих людей, тех, кто прямо или косвенно помог мне, кто дарил свой энтузиазм и любовь, написав самые увлекательные книги, заставляющие думать и ощущать вкус к работе.

Свято чту память моего учителя профессора В.Л.Вагина. Безгранично благодарна моему второму учителю профессору Санкт-Петербургского университета Т.А.Гинецинской, помогавшей делать первые шаги в науке.

Невозможно не быть благодарной и забыть экспедиции по сбору материала в водоемах Закарпатья и предгорьях Кавказа, на которые меня приглашали профессор Львовского университета В.И.Здун и мои друзья по аспирантуре профессора А.П.Стадниченко и М.М.Бочарова.

Глубоко благодарна моим рецензентам профессорам В.В.Горохову (ВИГИС, Москва) и А.Б.Халидову (КГУ, Казань), взявших на себя труд оценить мою работу.

Душевно благодарю за повседневную дружескую поддержку моих коллег-друзей профессоров А.В.Аганова и А.И.Голубева.

Выражаю сердечную благодарность друзьям по университету и моей семье за горячую поддержку и веру в меня, которую я всегда ощущала.

164 Заключение

The study of parasitic worms, in Kasan University began in the 1950-s of the 20 century.

This monograph deals with peculiarities of morphological, biological, and ecological characteristics of the Fasciola hepatica L., 1758 miracidium.

The life cycle of Fasciola hepaticais very complicated. Chances to find the host and to settie down seem not to be very good. In contrast, the rate of reproduction is rather high and it could have led to the potential threat to life of the intermediate host, which supplies him with such most important resources as food and space for living.

One of the regulators, restraining the increase in the number of parasites, is the environmental factor. The environment exerts a distinct influence on the extensiveness of invasion in host population, whereas the hostys immune reactions regulate the intensity of invasion at the individual level and provide the system stabilization.

Stages of interaction of miracidium in the epithelial cells and mollusk tissues as well as the future of miracidium have been described.

The electron microscopy data are presented. The role of fine structures of the miracidium texture has been discussed.

We have also analyzed the relation of factors both in the experiment and in life.

Список литературы диссертационного исследования доктор биологических наук Соколина, Флюра Мухаметгалеевна, 2005 год

1. Акрамовский Я.Н. Фауна Армянской ССР. Моллюски. - Ереван, 1976.

2. Базитов А.А. Исследование покровной кутикулы и субкутикулярного слоя у трематодыParamphistomumcerviвфазово-контрастноммикроскопе//Докл. науч. конф. - Кемерово, 1963.

3. Базитов А.А. Исследование морфологии яиц бычьего цепня в фазово-контрастном микроскопе //Докл. 1-й науч. конф. - Кемерово, 1965.

4. Базитов А.А. Некоторые данные о применении фазово-контрастной и трехмерной микроскопии в сравнительноцитологических и гельминтологических исследованиях//Докл. 2-й науч. конф. - Кемерово, 1967.

5. Бешевли Л.Е. Гельминты печени крупного и мелкого рогатого скота в южных районах Украины и задачи борьбы с ними: Автореф. дисс. канд. биол. наук. -Одесса,1965.

6. Беэр С.А., Герман С.М. Гетерогенность популяций промежуточного хозяина описторхоса по степени совместимости с ларвальными формами трематод // Тез. докл. IV Всесоюзн. симпозиума. - М., 1986.

7. Бирюзова В.И. и др. Электронно-микроскопические методы исследования биологических объектов / АН СССР. - М., 1963.

8. Богомолова Н.А. Radix ovata как один из промежуточных хозяев Fasciola hepatica II Зоологич. журн. - М., 1961. - Т.40. - Вып. 5.

9. Богомолова Н.А., Павлова Л.И. Желточные клетки Fasciola hepatica и Diphyllobotrium latum и их роль в образовании оболочки и питания зародыша. -М„ 1961.

10. Бочарова М.М. Зональное распределение очагов трематодозов на северных склонах Центрального Кавказа //Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями. - М., 2003.

11. Быховская-Павловская И.Е. К вопросу о специфичности сосальщиков // Тр. общ. естеств. - Л.,1957. - Т.73. - Вып.4.

12. Вагин В.Л. Очерки по эволюционной морфологии и систематике паразитических ракообразных (сем. Дендрогастерид): Дисс. докт. биол. наук. - Л., 1950.

13. Васильева И.Н. К изучению онтогенеза трематоды F. hepatica в Московской области // Зоологич. журнал. - М., 1960. -Т.39. - Вып. 10.

14. Владимиров В.Л. Морфология и биология мирацидия Posthodtplostomum cuticola (Horman, 1832) Dubois, 1936 - возбудителя чернопятнистой болезни рыб//Докл. АН СССР.-М„ 1961. - Т. 140. - Вып.6.

15. Вольфсон В. Эмбриональное развитие L. stagnalis. - СПб., 1879.

16. Галактионов К.В., Добровольский А.А. Гермафродитное поколение трематод. -Л.: Наука, 1987.

17. Галактионов К.В., Добровольский А.А. Происхождение и эволюция жизненных циклов трематод. — СПб.: Наука, 1998.

18. Геллер Э.Р., Баусов И.А. Механизм вылупления мирацидия Fasciola hepatica // Фауна, систематика, биология и экология гельминтов и их промежуточных хозяев. - Горький, 1977.

19. Гинецинская Т.А. К фауне церкарий моллюсков Рыбинского водохранилища. 4.2: Влияние экологических факторов и зараженность моллюсков партени-тами трематод // Вестн. Ленингр. ун-та. - 1959. - №21.

20. Гинецинская Т.А. Гликоген в теле церкариев и зависимость его распределения от особенностей его паразита //Докл. АН СССР. -1960. - Т. 135. - Вып.4.

21. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А. Гликоген и жир на разных фазах жизненного цикла сосальщиков. 4.1: Морфология распределения гликогена и жира // Вестн. Ленингр. ун-та. - 1962. - №9. Серия биологии. - Вып.2.

22. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А. Гликоген и жир на разных фазах жизненного цикла сосальщиков. 4.2: Биологическое значение гликогена и жира // Вестн. Ленингр. ун-та. - 1963. - №3.

23. Гинецинская Т.А., Добровольский А.А., Машанский В.Ф. Об ультраструктуре тканей партенит и личинок трематод// Мат. науч. конф. ВОГ. -1965. - 4.1.

24. Гинецинская Т.А., Беседина В.В. Гликоген у тремагод и цестод // Мат. науч. конф. ВОГ.-1965,-4.2.

25. Гинецинская Т.А., Машанский В.Ф., Добровольский А.А. Ультраструктура покровов и способ питания редий и спороцист // Докл. АН СССР. - 1966. -Т.166. - Вып. 4.

26. Гинецинская Т.А. Трематоды, их жизненные циклы, биология и эволюция. -Л.: Наука,1968.

27. Гликина Э.Л., Березенцева Г.Ф. К вопросу о накоплении и распределении гликогена у власоглава Trichocephalus vulpis (Frolich, 1789) // Тез. докл. ВОГ. -М„ 1957. - 4.1.

28. Глузман И.Я. Паразито-хозяинные отношения между моллюсками-физида-ми и личинками некоторых трематод // Тез. докл. II Всесоюзн. симпозиума по болезням и паразитам водных беспозвоночных. - Л.: Наука, 1976.

29. Годердзишвили Г.Н. Роль некоторых видов пресноводных моллюсков в эпи-зотологии фасциолеза в условиях Ленинградской области и испытания на них минеральных удобрений: Автореф. дисс. канд. биол. наук. - Л., 1953.

30. Голубев А.И., Фролова М.М. К вопросу о ультраструктуре нейронов трематод.-Казань, 1981.-Деп. ВИНИТИ. №4159-81.

31. Голубев А.И. Электронная микроскопия нервной системы червей. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1982.

32. Голубев А.И., Галкина Л.А., Дыганова Р.Я. Электронная микроскопия (методические указания). - Казань: КГУ, 1986.

33. Голубев Н.Ф. К фауне моллюсков - промежуточных хозяев Fasciola hepatica L. и Muellerius capillaris (Mull) в Ленинградской области //Тез. 9-го сов. по пара-зитол. проблемам. - М., 1957.

34. Гольдин Л.С. Основы гистологической техники электронной микроскопии. -М.: Медгиз, 1963.

35. Горохов В.В., Осетров B.C. Моллюскоциды и их применение в сельском хозяйстве. - М.: Колос, 1978.

36. Горохов В.В. Методические рекомендации по изучению патологии моллюсков. - М„ 1980.

37. Горохов В.В. Анализ эпизоотического процесса при фасциолезе // Тез. докл. Всесоюзной конф. "Профилактика и борьба с трематодозами животных в зонах мелиорации земель". - Баку, 1983.

38. Горохов В.В. Общие проблемы эпизоотологии гельминтозов // Материалы докл. научн. конф. "Теория и практика борьбы с паразитарными болезнями". -М., 2003. - Вып.4.

39. Демидов Н.В. Фасиолез животных. - М.: Колос, 1965.

40. Догель В.А. Курс общей паразитологии. - Л., 1962.

41. Добровольский А.А., Галактионов К.В., Мухамедов Г. и др. Партеногенетичес-кие поколения трематод // Тр. Ленингр. о-ва естествоисп. -1983. - Т. 82. - Вып. 4.

42. Жадин В.И. О биологии моллюсков пересыхающих водоемов в связи с вопросом об изучении распространителя фасциолеза // Тр. 2-й конф. по изуч. произвол. сил Владимирской губ. - Владимир, 1926.

43. Жадин В.И., Панкратова В.Я. Исследования по биологии моллюсков-передатчиков фасциолеза и выработка мер борьбы сними// Раб. Окской ст. -1931. -Т.6. — Вып.1-3.

44. Жадин В.И. Полевые и экспериментальные наблюдения над передатчиками фасциодеза L. truncatula//Тр. Зоол. ин-та АН СССР.-Л., 1937. -Т.4.-Вып. 3-4.

45. Жадин В.И. Жизнь пресных вод СССР. - М.; Л.: Изд-во АН СССР, 1940.

46. Жариков И.О. Опыт профилактики фасциолеза домашних животных в условиях Белоруссии путем обеззараживания фасциолезных очагов // Инст. зоол. АН УССР: Автореф. дисс. канд. биол. наук. - Киев, 1962.

47. Заблоцкий В.И. Биология и морфология мирацидия Gastrodiscoides homihis Lewis et McConnal, 1876 (Treinatoda, Paramphistomatate) // Тез. науч. конф. Все-союзн. о-ва гельминтологов. - М„ 1962. - 4.2.

48. Заварзин А.А., Румянцев А.В. Курс гистологии. - М.: Медгиз, 1946.

49. Здун В.И. Малый прудовик G. truncatula - передатчик фасциолеза в Карпатских высокогорных водоемах // Тез. докл. 3-й эколог, конф. - Киев, 1954. - 4.1.

50. Здун В.И. Малий ставковик - передавач фасциольозу в умовах Карпатских високогорних водойм // Наук. зап. прир. Музею АН СССР. - Киев, 1955. - Т.4.

51. Здун В.И. Личинки печеночного сосальщика Fasciola hepatica, их специфичный хозяин - малый прудовик Galba truncatula в условиях западных областей УССР // Проблемы паразитологии. Тр. 2-й науч. конф. паразит. УССР. - Киев, 1956.

52. Здун В.И. Биотопы малого прудовика Galba truncatula (Muller, 1774) на территории Восточных Карпат // Ужгородский гос. ун-т. Научные записки. - 1954. -Т.40.

53. Здун В.И. Джерела i шляхи Ывай тварин збудником фасциольозу та бороть-ба з ним. Видавн // Укр. Акад. сельхоз. наук. - KniB, 1960.

54. Здун В.И. Сбор, хранение и исследование паразитов сельскохозяйственных животных (включая паразитов промежуточных хозяев) II Методы изучения пара-зитологической ситуации. - Киев, 1961.

55. Здун В.И. Специфичность личиночных форм дигенетических трематод II Проблемы паразитологии. - Киев: Изд-во АН УССР, 1963.

56. Иванов И.Ф., Ковальский П.А. Цитология, гистология, эмбриология. - М.: Колос, 1962.

57. Киршенблат А.Д. Происхождение явления промежуточных хозяев паразитов // Пробл. общей паразитол. Уч. зап. Ленингр. ун-та. - 1937. - Т.13. Серия биологии. Вып. III. - №4.

58. Кисели Д. Практическая микротехника и гистохимия. - Будапешт, 1962.

59. Куприянова-Шахматова Ф.А. К изучению партеногенетического поколения трематод // Тр. общ. естествоисп. при Казанск.ун-те. - 1958. -Т.123. - Вып.11.

60. Ливанов Н.А. Возникновение и первые этапы эволюции нервной системы // Проблемы совр. биол. - 1943. -Т.16. - №4.

61. Ливанов Н.А. Пути эволюции животного мира. - М.: Сов. наука, 1955.

62. Логачев Е.Д., Димитрова Е. К вопросу о морфологии и гистогенеза меж-проглоттидных желез цестоды Moniezia expansa (Rud.,1810) // Helmintologia. -1961. -T.3.- №1-4.

63. Лутта A.C. Динамика запасных питательных веществ у паразитических червей в зависимости от цикла их развития //Уч. зап. Ленингр. ун-та. -1939. -Т.43. Серия биологии. - Вып.11.

64. Машанский В.Ф., Винников М.Я. Измерение толщины ультратонких срезов расчетным методом // Цитология. - 1960. -Т.2. - № 1.

65. Мелех Д.А. Сравнительное изучение запасов гликогена у некоторых экто и эндопаразитических червей // Вестн. Ленингр. ун-та. - 1963. - №9.

66. Меликов Ю.Ф. К выявлению промежуточных хозяев фасциол (F. hepatica ) в Азербайджане // Изв. АН Азерб. ССР. - Баку, 1968. - Сер. биол. науки. - №1.

67. Мереминский А.И. Ущерб при фасциолезе //Докл. АН СССР. - М., 1963. -Т.117.-Вып.2. Экономический.

68. Меркулов Г.А. Курс патологогистологической техники. - Л.: Медгиз, 1961.

69. Морев Ю.Б. Некоторые данные по гистохимии тканей моллюсков-промежу-точных хозяев протостронгилид // Моллюски и их роль в экосистемах. - М.: Наука, 1968.

70. Наумов А.Д. Некоторые особенности тонкого и ультратонкого строения мирацидия печеночной двуустки // Паразиты водных беспозвоночных. - Львов, 1972.

71. Некрасов А.Д. Наблюдение над кладками пресноводных моллюсков: IV. Кладки рода Limnaea // Русский зоологич. журн. — М., 1928. - Т. 1.

72. Никишина Е.Ф. О приспособлении прудовика обыкновенного к высыханию водоема // Зоологич. журн. -1957. - Т.36. - Вып.12.

73. Ошмарин П.Г. К изучению специфичной экологии гельминтов. - Владивосток: ДВ фил. АН СССР, 1959.

74. Павловский Е.Н. Практикум медицинской паразитологии. - М.: ОГИЗ, 1935.

75. Палимпсестов М.А. Печеночно-глистная болезнь (фасциолез) домашних животных и меры борьбы с нею. - Астрахань: Изд-во Агрорыбпохода, 1930.

76. Пальм В. Сравнительное изучение запасных питательных веществ-жира и гликогена - у трех видов трематод ужей //Тр. Астраханск. заповедника. -1968 - Вып.Х!.

77. Панова Д.Г. Влияние некоторых физических и химических факторов на жизнеспособность яиц Fasciola hepatica // Сб. тр. Ленингр. научн.-иссл. вет. ин-та. -1951. -Вып.4.

78. Панова Л.Г. Фасциолез сельскохозяйственных животных. - М.: Сельхозгиз, 1955.

79. Переверзева Э.В. Содержание гликогена на разных стадиях развития и инкапсуляции у мышечных трихинелл // Матер, к науч. конф. ВОГ. - 1966. - 4.2.

80. Пиз Д. Гистологическая техника в электронной микроскопии. - М.: Изд-во иностр. лит-ры. -1963.

81. Пирс Э. Гистохимия. - М.: Изд-во иностр. лит-ры, 1962.

82. Полякова О.Я., Сазанов A.M. Гиалуронидаза как средство проникновения мирацидиев F. hepatica в промежуточного хозяина // Матер, к науч. конф. ВОГ. -1965.-4.1.

83. Потафеев Н.Е. К выяснению причин, обусловливавших встречу мирацидия Fasciola hepatica с моллюском Lymnaea truncatula // Учен. зап. Курск, пед. ин-та. -1971.-Т. 90.

84. Резник Г.К. Сравнительное гистологическое и гистохимическое исследование кишечника у половозрелых форм Fasciola hepatiea L., 1758 и Dicrocoelium lanceatum Stiles et Hassale, 1896 // Тр. ВИГИС. - M., 1963. - T.X.

85. Резник Г.К. К вопросу нормальной гистологии и гистохимии выделительной системы половозрелых форм Fasciola hepatica L., 1758 // Там же.

86. Роскин Г.И., Левинсон Л.Б. Микроскопическая техника. - М.: Сов.наука, 1957.

87. Русак Л.В., Папина Р.И. Двигательная активность F. hepatica in vitro // Зоологич. журн. - 1970. - Т.49. - Вып.9.

88. Савчук Н.А., Савчук О.Е., Цукман Н. и др. О зараженности печеночной двуусткой обыкновенной Fasciola hepatica крупного рогатого скота в Одесской области //Докл. АН СССР. - 1966. - Т. 167. - Вып.2.

89. Сазанов A.M. Некоторые данные о биологии личиночных форм F. hepatica // Тр. Ростовск. обл. научн.-иссл. вет. опытной станции. - 1955. - №11.

90. Сазанов A.M. Пресноводные моллюски Limnaea stagnalis и Galba palustris как возможные промежуточные хозяева F. hepatica // Там же.

91. Сазанов A.M. К вопросу диагностики зараженности моллюсков личиночными формами F. hepatica // Там же.

92. Сазанов A.M. Эпизоотология фасциолеза овец в условиях дельты р.Дон II Тез. докл. науч. конф. ВОГ. -1957. - 4.2.

93. Сазанов A.M., Тернопольская Л.Д. Опыт изучения морфологии мирацидия F. hepatica И Матер, к науч. конф. ВОГ. - 1965. - 4.1.

94. Сваджян П.К. Динамика зараженности моллюсков L. limosa и G. truncatula фасциолезом в условиях Араратской долины и на кочевках Агмагана // Изв. АН Арм. ССР.-Баку, 1950.-Т.З.-№10.

95. Семенов О.Ю. Мирацидии (строение, биология, взаимоотношения с моллюсками). -Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1991.

96. Синицын Д.Ф. Новые данные о биологии печеночной листвяницы // Тр. 3-го Всеросс. съезда ветврачей в Харькове. - 1914. - Т.1.

97. Скворцов А.А., Смирнова В.Д., Сизякова Е.Н. Исследования по морфологии и биологии яйца и по циклу развития F.hepatica // Мед. паразитол. и паразитарные болезни. -1936. -Т.5. - Вып.2.

98. Скрябин К.И., Шульц P.O. Фасциолезы животных и меры борьбы с ними // Уч. комб. НКЗ СССР.-М., 1935.

99. Соколина Ф.М. Применение фазово-контрастного микроскопа в изучении мирацидия Fasciola hepatica, 1758 // Сб. аспирантских работ. - Казань: Изд-во Ка-занск. ун-та, 1969.

100. Соколина Ф.М. Эксперименты по заражению димнеид мирацидиями печеночной двуустки // Вопросы малокологии Сибири. - Томск: Изд-во Томск, ун-та, 1969.

101. Соколина Ф.М., Патрушева.О.И. Некоторые особенности аквариумного содержания и разведения лимнеид // Там же.

102. Соколина Ф.М. К методике выращивания мирацидиев трематод // Вопросы эволюционной морфологии и биогеографии. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1970.

103. Соколина Ф.М. О ранней стадии развития спороцисты F.hepatica // Вопросы эволюционной морфологии и биогеографии. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1970.

104. Соколина Ф.М. Ультратонкое строение покровов и тканей мирацидия F. hepatica L., 1758// Материалы II Междунар. гельминтологич. симпозиума. Чехословацкая ССР. -1970.

105. Соколина Ф.М. Морфология, биология и экология: Дисс. канд. биол. наук. - Казань, 1970.

106. Соколина Ф.М., Голубева А.И. Подготовка личиночных стадий трематод к изучению в электронном микроскопе II Вопросы морфологии и экологии беспозвоночных. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1971.

107. Соколина Ф.М., Любарская О.Д., Вагин В.Л. К изучению паразитов беспозвоночных в ТАССР // Проблемы паразитологии. - Киев: Наукова думка, 1972. -Т.1.

108. Соколина Ф.М. Зависимость развития партенит от строения соединительной ткани моллюсков // Проблемы паразитологии. - Киев: Наукова думка, 1972. -Т.2.

109. Соколина Ф.М., Вагин В.Л. Некоторые адаптации мирацидия фасциолы к проникновению в организм промежуточного хозяина II Материалы II Всесоюзн. симпозиума по болезням и паразитам водных беспозвоночных. - Л.: Наука, 1976.

110. Соколина Ф.М. Исследование мышечной системы мирацидия F. hepatica // Эколого-морфологические исследования беспозвоночных. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1976.

111. Соколина Ф.М. Исследование покрова мирацидия F. hepatica // Эколого-морфологические исследования беспозвоночных. - Казань: Изд-во Казанск. ун-та, 1976.

112. Соколина Ф.М. К вопросу о строении мирацидия F. hepatica // Методы профилактики и борьбы с фасциолезом. - М.: ВАСХНИЛ, 1977.

113. Соколина Ф.М. Зависимость проникающей способности мирацидия F. hepatica от энергетических запасов // Материалы 1 съезда паразитологов. - Киев: Наукова думка, 1978.

114. Соколина Ф.М., Любарская О.Д. Роль беспозвоночных в распространении трематод и предпосылки формирования очагов трематодозов // Тез. докл. конференции "Биологические основы борьбы с гельминтами". - М.: Изд-во АН СССР, 1983.

115. Соколина Ф.М. Изменение эпителия моллюсков в онтогенезе // Материалы 7 Всесоюзн. совещания по изучению моллюсков. - Л.: Наука, 1983.

116. Соколина Ф.М. Эпизоотологическое состояние водоемов комплексного назначения колхоза им. М.Вахитова ТАССР // Проблемы охраны вод и рыбных рес-сурсов. - Казань: КГПИ, 1983.

117. Соколина Ф.М. К вопросу о промежуточном хозяине F. hepatica // Сб.трудов Северо-Осетинск. ун-та. - Орджоникидзе, 1983.

118. Соколина Ф.М. К вопросу об экологии партенит F. hepatica // Региональные проблемы экологии. - Казань, 1985.

119. Соколина Ф.М. Об ультраструктуре выделительной системы мирацидия Fasciola hepatica // Паразиты водных беспозвоночных. - М.: Изд-во Моск. ун-та, 1986.

120. Соколина Ф.М. Математическое обоснование экспериментальных данных (вариационная статистика клеток эпителия моллюсков) // Материалы X конф. Украинского общества паразитологов. - Киев: Наукова думка, 1986.

121. Соколина Ф.М. Ультраструктура протонефридиальной системы мирацидия Facciola hepatica //Фауна и экология животных Кавказа. - Орджоникидзе: РИО СОГУ, 1987.

122. Соколина Ф.М., Захарова Н.Г., Алимова Ф.К. и др. Антропогенное воздействие на состояние организмов почвы и водоемов // Тез. докл. II Всесоюзн. конференции по рыбохозяйственной токсикологии. - Л.: Изд-во Ленингр. ун-та, 1991.

123. Соколина Ф.М., Любарская О.Д. О роли беспозвоночных в распростране-V нии трематод и предпосылки формирования очагов трематодозов // Биологическая наука. — М., 1993.

124. Соколина Ф.М. Изменение состава гемоцитов моллюсков, инвазированных трематодами//Докл. VII съезда ГБО РАН.-Казань, 1996.-Т.2.

125. Соколина Ф.М. Экология и патология - основа формирования экологической культуры личности // Там же.

126. Соколина Ф.М., Любарская О.Д., Голубев А.И. Гельминтологические иссле-\Г дования в Казанском университете (1962-1997 гг.). -Деп. ВИНИТИ, №34.-В 99. -1999.

127. Соколина Ф.М., Лещинская И.Б. Экология и пчелиный яд // Труды VI Между-V наР- конференции "Окружающая среда для нас и будущих поколений".—Самара, 2001.

128. Соколина Ф.М., Шайхутдинова P.M. Влияние фенольных соединений на беспозвоночных животных // Труды VIII Рос. конференции "Окружающая среда для нас и будущих поколений". - Самара, 2003.

129. Соколина Ф.М., Кибардин В.М. Влияние нефти, нефтепродуктов и детергентов на гидро- и педобионтов II Там же.

130. Соколина Ф.М. Связь экстенсивности инвазии Fasciola hepatica L.,1758 с условиями окружающей среды // Там же.

131. Сорокина А.А. Фауна партеногенетического поколения трематод в моллюсках окрестностей г.Казани // Вопросы паразитологии. Уч. зап. Казанск. ун-та. -1968. — Т.126. - Кн.З.

132. Сорокина Н.П., Москвин А.С., Горохов В.В. Фасциолез человека, вызываемый F. hepatica // Медицинская паразитология и паразитарные болезни. - М., 2003.-№1.

133. Стадниченко А.П. Гликоген в пищеварительной железе пресноводных брюхоногих моллюсков, инвазированных личинками трематод //Матер, науч. конф. ВОГ.-1968.-4.2.

134. Стадниченко А.П. О некоторых нарушениях обмена веществ у пресноводных брюхоногих моллюсков, инвазированных личинками трематод //Моллюски и их роль в экосистемах. - Л.: Наука, 1968. - Сб.З.

135. Стадниченко А.П., Иваненко Л.Д., Литвинчук Р.И. и др. Роль антропогенных загрязнений в нарушении гомеостаза у пресноводных моллюсков, инвазированных трематодами II Мат. X конф. Украинского о-ва паразитологов. - Киев, 1986,-4.2.

136. Стадниченко А.П. и др. Влияние сульфата меди на содержание каротинои-дов в гемолимфе прудовика озерного в норме и при инвазии его партенитами трематод // Вестник Житом. ПУ. - Житомир, 2002. - Вып. 10.

137. Судариков В.Е. Фауна гельминтов позвоночных Среднего Поволжья. - М., 1950.

138. Судариков В.Е. Строение экскреторной системы метацеркарий стригеат и его таксономическое значение II Тез. докл. I к. коорд. сов. по параз. пробл. -Вильнюс, 1957.

139. Тарноградский Д.А., Попов К.К. К биологии и распространению передатчиков фасциолеза Lymnaea truncatula на Северном Кавказе // Раб. краев, гидроб. ст. - 1932-1933. - Т. 1. - Вып. 1.

140. Тимофеев В.А. Электронно-микроскопическое изучение известковых телец плероцеркоида и половозрелой фазы Schistocephalus pungitii //Докл. АН СССР. -1964.-Т. 156.-№5.

141. Тихомиров И.А. Жизненный цикл Philophthalmus rhionica sp. nov. (Trematoda, Philophthalmidae): Автореф. дисс. канд. биол. наук. - Л., 1980.

142. Хейсин Е.М., Тимофеев В.А. Электронно-микроскопическое изучение Lamblia duodenalis//Докл. АН СССР. - 1964. - Т. 159.

143. Шахматова Р.А. Личинки трематод пресноводных моллюсков Среднего Поволжья и экспериментальное изучение их биологии: Дисс. канд. биол. наук. -1959.

144. Шуклина Е.М. Некоторые лабораторные наблюдения над формированием и вылуплением мирацидия // Сб. тр. работников фак. естествозн. Курского лед. ин-та. -1956. -Вып. 1.

145. Эвранова В.Г., Логачев Е.Д., Эвранова Г.Б. Субмикроскопическое строение кутикулы Fasciola hepatica L., 1756 // Уч. зап. Казанск. вет. ин-та. - 1969. -Т. 105.

146. Яворський 1.П. Малий ставковик - пром1жний живитель личинок трематод фасцюли звичайно1 пасовищ Передкарпаття // B'ichhk Житомирського педагопчного ужверситету. - Житомир, 2002. - Вып.10.

147. Яхонтов Б.В., Яхонтова Л.М. // Материалы докл. науч. конф. Всесоюзн. о-ва гельминтологов. - М., 1965. -Ч. 2.

148. Ahrens HP., Berning Н. Parazitarer Befall der heber und Gallenwege mit dem groben heberegel F. hepatica // Miinch. med. Wochenscher. -1968. - Vol.110. - №48.

149. Barlow C.H. The life of the human intestinal fluke Fasciolopsis buski // Amer: J. Hyg., Monogr. ser. - 1925. - №4.

150. Bednarz S. The development cycle of germ-cells in Fasciota hepatica L. 1758 Trematodes, Digenea //Zool. Polon. - 1962. - Vol.12. - №4.

151. Beneden P.J. van. Pe'ne'tration des spermatozoides dans 1' ocuf observee sur un Distome // Compt cend. Ac. Paris. - 1858. - Vol.46.

152. Bennett H.J. The life history of Cotylophoron cotylophorum a trematode from ruminants // lllinoie Biol. MONOGR. - 1936. - Vol.14.

153. Bennett C.E., Wilson R.A., Denison J. An investigation of the molecular characteristic important in stimulation of an attachment response by the miracidium of Fasciola hepatica // Сотр. Biochem. Physiol. - 1972. - Vol. 41- A.

154. Bennett С. E., Threadgold L.T. Fasciola hepatica: development of the tegument during migration in the mouse // Exp. Parasitol. - 1975. - Vol. 38.

155. Bjoruman K., Thorsell W. The fine morphology cells in the liner fluce (Fasciola hepatica) // Exper. cell res. - 1962. - Vol.27. - № 2.

156. Bojanus R. Notice sur les Cercaires Oken's Isis. - 1818.

157. Brand Th. The carbohydrata metabolism of parasites // J. Parasitol. -1950. - Vol.36.

158. Brand Th., Weinland E. Uber tropfchenformige Auscheidungen bei Fasciola hepalica //Zeitschr. vergl. Physiol. - 1924. - №2.

159. Brand Т., Mercado T. Histochemical glycogen studies on F. hepatica // Journ. Parasitol. -1961.-Vol.47. - №3.

160. Buzzel.G.R. Composition, secretion, and fate of the glands in the miracidium and sporocyst of Fasciola hepatica L. // J. Heiminthol. - 1983. - Vol. 57.

161. Cadel S., Barbier D. A propos de 18 cas de fasciolose humaine recenses en Basse-Nornandia, Annes 1994-1995 // Bull Soc parasitol. - 1996. - Vol.4. - №1.

162. Capron A. Apport de la distomatose experimental a la counaissanse de la distomatose humaine a Fasciola hepatica //Aspects immunologiques Rev. d* immu-nol.-1965.-Vol.29.

163. Сагу L. B.The life history of Diplodiscus temporatus Stafford, with especial reference to the development of the parthenogenetic eggs //Zool. Jahrb. A-bt: Anat. Ont.-1909.-Vol.28.

164. CaulfiBid J.R. Effects of varying the vehicle for 0s04 in tissue fixation // J. Biophysic. and Biochem. Cytol. - 1957. - Vol.3. - №5.

165. Czapski Z. The snail Galba occulta Jackiewiez, 1959-Another Intermediate Host of Fasciola hepatica L. // Zeitschrift fiir Tropenmedizin und Parositologie. - 1962. -Vol.13.-Vol.3.

166. Czapski Z. Lbadan'nod biologia Galba occulta Jackiewiez, 1959 - novego zywiciela posredniego Fasciola hepatica L.//Wiadomosci parazytologiczne. - 1965. - Т. XI. -№1-2.

167. Czapski Z. Uwagi о potencjale inwazyjnym Galba truncatula Mull, i Galba occulta Jack, wodniesieniu do larw Fasciola hepatica L.// Wiadom. parazytol. - 1968. -Vol.14.-№5-6.

168. Chen P.D. The cell cycle in the trematode, Paragonimus kellicotti // Ward. Trans. Amer. germ Micr.Soc. - 1937. - Vol.56.

169. Cheng Th.C. Further studies on the parenchymal cells of digenetic Tremato-des // Proc. Pennsylvania Acad. Sci. - 1960. - Vol.34.

170. Cheng T.C., James H.A. Studies on the germ cell cycle, morphogenesis and development of the cercarial stage of Crepidostomum cornutum.(0sborn.1903 ) // Trans. Amer. Microsc. Soc. - 1960. - Vol. 79.

171. Chernin E. Behavior of Biomphalaria glabrata and of other snails in a thermal gradient // J. Parasitol. - 1967. - Vol.53.

172. Clegg A. Secretion of lipoproteins by Mehlis' gland in Fasciola hepatica // Ann.N. Y.Acad. Sci.-1965.-Vol. 118.

173. Сое W.K. Bau des Embryos von Distomum hepaticum // Zool. Jahrb. Abt. Anat., -1896. - №9.

174. Coil W.H. The penetration of Fascioloides magna miracidia into the snail host Fossaria bulimoides H Z. Parasitenk. - 1977. - Bd. 52.

175. Converse V.N. Investigations jn the relationship of Fasciola hepatica miracidia to its molluscan host // Wiadom.parazytol. - 1968. - Vol.14. - №5-6.

176. Dawes B. A study of the miracidium of Fasciola hepatica and account of the mode of penetration of the sporocyst into Lymnaea truncatula // Sobretiro del Libra Homenajeal Dr.Eduardo Caballero у Caballero. - Mexico, 1960.

177. Dawes B. A histological study of the caecal epithelium of Fasciola hepatica II L. Parasitology. - 1962. - 52.

178. Dixon K.E. The structure and hystochemistry of the cystwall of the metacercaria of F. hepatica // J. Parasitol. - 1965. - Vol.55.

179. Dinnik J.A., Dinnik N.N. Effect of the seasonal variations of temperature on the development of Fasciola gigantica eggs in the Kenya Highlands // Bull, Epizoot. Diseases Africa. - 1959. - Vol.7. - №4.

180. Dobson A.P. The population biology of parasitic-induced changes in host behaviour II Quart. Rev. Biol. - 1988.-Vol. 63.

181. Dunn M.C. Studies on the germ cell cycle of Neorenifer wardi (Byrd, 1936) // Trans.Amer. Micr.Soc. - 1959. - Vol.78. - №4.

182. Dreyfuss G., Abrous M., Rondeland D. Fasciola hepatica L.,1758: La charge redienne et les emissions cercariennes cher les juveniles de L. pereger peregra Mul-ler// Rev. med. Vet (Fr.). - 1997. - Vol.148, - №7.

183. Dwaronat A. Untorsuchungen uber ektogene Helminthenstadien. 3. Experimentelle Untersuchung uber die Lebensdauer der Miracidien von Fasciola hepatica unter Beruc-ksichtigung verschidener aussere Einflusse // Angew.Parasi-tol.- 1966.-Bd. 7.

184. Erasmus D.A. Ultrastructural observations on the reserve bladder system of bushiensis Khan, 1962 (Strigeoidea) with speciel reference to lipid excretion Cyathocotyle // J.Parasit. - 1967. - Vol.53.

185. Fulloch G.S., Shapiro J.E. The ultrastructure of the vitelline cells of Haematoloechus // Jbid. - 1957. - Vol.43. - №6.

186. Furmaga S., Gundlach J.L. Lymnaea stagnalis L. as one more intermediate host of Fasctola hepatica // Acta parasitol. polon. - 1967. - Vol.15. - №22-39.

187. Glauert A. M., Glauert R.H. Azaldite as an embedding medium for electron microscopy // J. Biophysic and Biochem, Cytol. - 1958. - Vol.4. - №2.

188. Goldschmidt R.B. Eischale, Schalendruse und Dotterzellen der Trematoda//Zool. Anz.-1909.-Vol.34.

189. Grasso M. Prim indinisulla presenza die cellula neurosecreticca in F.hepatica // Naz. Zincei. - 1967. - Vol.42.

190. Grasso M., Quaglia A. Electron microscope jbservations of neurosecretion in Fasciola hepatica // Atti Accad. Naz. Lincei. Rend.cl.sci. fis.,mat.e.natur. - 1974. -Vol.56 (4).

191. Gresson R.A., Theadgold L.T. A light and electron microscop study of the epithelial cells of the gut of F. hepatica // J. Biophys., Biochem., Cytol. -1959. - Vol.6.

192. Gresson R.A., Theadgold L.T. Thelarge neurons and interstitial material of Fasciola hepatica II Proc.Ray.Soc.Edinburgh. - 1964. - Bd.68 (4).

193. Griffiths H.J. Observations on the bionomics of ova and miracidia о Fusciola hepatica Linn, in eastern Canada // Can. Journ. Research. - 1939. - Vol.17.

194. Guilford H.G. Gametogenesis, egg-capsule foraation, and early miracidial development in the digenetic trematode Helipegus eccentricus // Th. Joum. Parasitol. - 1961.- Vol.47. - №5.

195. Hanna R.B., Threadgold L.T. Development of an in vitro technique for cytological investigations of slices of Fasciola hepatica: evaluation by morphological criteria // Parasitol.-1975.-Vol.5.

196. Haswell R.A. On two remarkable sporocysts occuring in Mytilus edulis on the coast of New Zealand // Proc. Linn. Soc. N. S. W. - 1903. - Vol.27.

197. Henneguy L.F. Sur la Formation de lyacuf la maturation et la fe'condation de 1y oocyte chez le Distomum hepaticum // Paris C.R.Acad. Sci. — 1902. — Vol.34.

198. Henneguy L.F. Recherches sur le mode de formation de 1'ocuf ectolecithe du Distomum hepaticum // Archi. Anat. Micr. - 1906. - Vol.9. - №1.

199. Jepps M.W. Miracidia of the liver fluke for laboratory vonc // Ka'ture. - 1933. -Vol.132.

200. Kawana H. Study on the development of excretory system of Fasciola hepatica with special host in central China //J.Shanghai Sci.lnst. - 1940. - (Sect.4)-5.

201. Kouri P. Nauss R.W. Formation of the egg shell in Fasciola hepatica as demonstrated by histological methods.// J. Parasitol. - 1939. - Vol.24. - №4.

202. Kummel G. Terminalorgan der Protonephridien. Feinstruktur und Deutung der Funktion //Z.Naturf. - 1958. - Bd.13.

203. Kummel G. Feinstruktur der Wimperflamme in den Protonephridien // Protoplas-ma. — 1959. - L1. — №3.

204. Maclnnis A.J. Responses of Schistosoma mansoni miracidia to chemical attractants // J. Parasitol. - 1965. - Vol.51.

205. Mansour Т.Е. Studies on the carbohydrate metabolism of the liver fluke Fasciola hepatica // Biochem. Biophys. Acta. - 1959. - Vol.34.

206. Mattes O. Zur Biologic der Larvenentwicklung von Fasciola hepatica, lesonders uber den Einfluss der Wasserstoffionenkonzentration auf das Ausschliipfen der Miracidion // Zoll. Anz. - 1926. - Vol.69.

207. Mattes O. Zur Frage der Wirtsauffindung der Parasiten auf Grund experimentaller Untersuchungen an Leberegel Miractdien // 38 Verhandl. Deutsch. Zool. Gesellsch.-Leipzig, 1936.

208. Mattes 0. Wirtsfindung und Virtssperifitat beim Fasciola - miracidium // Zeitschrift Parasitenrunde. - 1949. - Vol.14. - №4.

209. Mehlis V.V. Notice sur les ocufs. Oken's Isis. - 1831.

210. Mitterer K.S. Ubtersuchungen zum Schlupfen der Miracidien des Kleinea Leberegels Dicrocoeliumm dendriticum // Z. Parasitenk. - 1975. - Bd. 48.

211. Moczon Т., Swiderski Z.,Heggel Н. Schistosoma mansoni: the chemical nature of the secretions prjduced by the Mehlis gland and ootype as revealed by cytochemical studies // Int. J. Parasitol. - 1992. - Vol.22.

212. Moukrim A., Rondelaud D. Vertical spatial behaviour patterns of Lymnaea truncatula in relation with origin of snails, infection with Fasciola hepatica, and experimental environment //Ann. parasitol. hum. ct сотр. - 1992. - Т. 67. - №6.

213. Neuhaus W. Beitrage zur Frage der Wirtsfindung des Miracidien von Fasciola hepatica // Z. Vergl. Physiol. - 1941. - Bd.28.

214. Neuhaus W. Uber den chemischen Sinn der Miracidien von Fasciola hepatica // Z. Parasitenk. - 1953. - Bd. 15.

215. Neuhaus W. Neuere Untersuchungen uber den Leberegel // Probl. Parasitol. -Berlin, 1956.

216. Ortmann W. Zur Eabxyonalentwicklung des Leberegels (Fasciola hepatica) //Zool. Jahrb. Abt. Anat. Ontogen. - 1908. - Vol.26.

217. Pagenstecher H.A. Trematodenlarven und Trematoden Heidelberg. - 1857.

218. Pantelouris E.M., Threadgold L.G. The excretory system of the adulf Fascola hepatica cellule. - 1963. - Vol.64.

219. Pan S.C. The fine structure of the miracidium of Schistosoma mansoni // J. Invert. Pathoi.-1980.-Vol.36.

220. Patzer H.E. Beitrage zur Biologic der Leboregelschnecke Galba (Limnaea) truncatula Muller // Zool. Jahrb. Abt. Syst. - 1926. - Vol.53.

221. Pearson J.C. Observation on the morphology and life cycle of Neodiplostomum intermedium (Trematoda: Diplostomatidae) // Parasitology. -1961, - Vol.51. - №1-2.

222. Pearson J.C. A phytogeny of life-cycle patterns of the Digenea //Adv. Parasitol. -1972,-Vol.10.

223. Progress in Assessment of Morbidity Due to F. hepatica Infection: A Review of Resent Literature. — Geneva, 2002.

224. Querner F.R. Zur Histoiogie des Exkretionsgefassystem Digenetischer Trematoden //1 Teil. Zeitschr. Parasitenk. - 1929. - Vol.1. - №4/5.

225. Railliet A., Moussu G., Henry A. Recherches experimentaies sur le developponent de la Douve hepatique (Fasciola hepatica L.) // Recueil de medecine veterinaire. -1913.-Vol.40.-№1.

226. Rahko T. On the infection procedures in experimental fascioliasis //Norw.J. Zool. (formerly:"Nytt mag.zool."). - 1971. - Vol.19. - №1.

227. Ramisz A., Szankowska Z. Studies jn the nervous system of Fasciola hepatica fnd Dicrocoelium dendriticum by means of histochemical method for active acetylcholinesterase II Acta harasitol. Pol. - 1970. - Vol.17.

228. Read C.P. The carbohydrate metabolism of worms, in: Martin A.W. ed Comparative physiology carbogidrate metabolism in heterothermic animals /I Univ. Wash.Press. -1961.-Vol.3.-№35.

229. Reuss H. Die Cerkaria und Sporozyste des Distomum duplicatum II Zeitschr.wiss.Zool. -1903. - Vol.74.

230. Rees F. Studies on the germ cell cycle of the digenetic trematode Parorchis acanthus Nicoll. 2. Structure of the miracidium and gerainal development in the larval stages II Parasitology. - 1940. - Vol. 32.

231. Reissinger Е. Die Emunktorion des Mirazidium von Schistosoma hamatobium Bilharz, nebst einigen Beitragen zu dessen Anatonie und Histologic // Zool. Anz. -1923. - Bd. 57.

232. Reynolds E.S. The use of lead citrate at hign pH as an electron-opaque stain in electron microscopy// J. Cell Biol.-1963. - Vol.17. -№1.

233. Roberts E.W. Studies on the life cycle of Fasciola hepatica (Linnaeus) and of its snail host, Lymnaea (Galba) truncatula (Muller), in the field an under controlled conditions in the laboratory// Ann. Trop. Med. Parasitol. - 1950. - Vol. 44.

234. Rondelaud D., Dreyfuss G., Vareille-Morelc., Moukrim A. Lymnaea truncatula a.Fasciola hepatica //Rev.med. vet.(Fr). - 1997. - Vol.148. - №4.

235. Rowan W.B. The mode of hatching of the egg of Fasciola hepatica. 2. Colloidal nature of the viscous cushion // Exp. Parasitol. - 1957. - Vol.6. - №2.

236. Rowan W.B. The mode of hatching the egg of Fasciola hepatica // Exper. Parasitol. - 1956. -Vol.5.-№2.

237. Sanderson A.N. Maturation fnd probable gynogenesis in the liver fluke Fasciola hepatica L„ 1758//Nature. - 1953. -Vol.172. -№4368.

238. Schaunsland H. Beitrage zur Kenntniss der Embryonal-Entwicrlung der Trematoden // Jen. Zettsehr. f. Naturwiss. - 1883. - Bd. XVI.

239. Schellenberg A. Ovogenese, Eireifung ung Betrichtung von Fasciola hepatica // Arch. f. Zellforsch. -1911,- Vol.6. - №3.

240. Schubmann W. Uber die Eibildung und Embryonalentwicklung von Fasiola hepatica L. (Distomum hepaticum Retz) II Zool. Jahrb. Abt. f. Anat. - 1905. -Vol.21.-№1.

241. Schumacher W. Untersuchungen uber den Vandermays veg und die Entwicklung von Fasciola hepatica L. in Endwirt // Zeitschrift fur Parasitenkunde. - 1939. - №10.

242. Schwarze E. Die postembryonale Entvicklng der Treaatoden // Zeitschrift fur wiss Zool.-1885.-Vol.43.

243. Shyamasundari K., Rao K. The structure and cytochemistry of the neurosecretory cells of F.gigantica Cobbold and F. hepatica L., 1758 // Z. Parasitenk., - 1975. -Vol.47 (2).

244. Siebold C.T. Helminthologtsche Beitrage, in Archiv f.Naturgsch. Jahrg.1. -1835.-Bd. I.

245. Siebold C.T. Berichte uber die Zeistungen im Gebiete der Helminthologie fur 1842, 1843/44//Arch. f. Naturgesch. - 1842-1844. - Jg. 10/11.

246. Smyth J. D. A technique for the histochemical demonstration of polyphenol oxidase and its-application in helminths and byssus formation on Mytilus // Quart. Journ.Micr. Sci. -1954. -Vol.95.

247. Smyth J.D., Clegg J.A. Egg-shell formation in Trematodes and Cestodes // Exp.Parasitol. - 1959. - №8.

248. Smyth J. D., Halton D.W. The physiology of trematodes. - Cambridge, 1983.

249. Sommer F. Die Anatomie des Leberegels D. hepaticum L., 1758IIZ. wiss Zool. -1880.-Vol.34.

250. Southgate V.R. Observations on the epidermis of the miracidium and on the formation of the sporocyst of Fasciola hepatica // Parasitology. - 1970. - Vol. 61.

251. Steenstrup J.J.S. Uber den Generattonsvechsel. - Copenhagen, 1842.

252. Stephenson W. Physiological and histochemical observations on the adult liver fluke Fasciola hepatica //Parasitology 38. - 1947. - I.Survival in vitro: 116-122, II Feeding: 123-127; III. Egg-shell formation: 128-139; IV. The excretory system.: 140144.

253. Stiegler L. Untersuchungen uber die Lwise enwirtssperifitat von Fasciola hepatica im Raume Nordbayern // Z.Parasitenkunde. - 1954. - Vol.16. - №4.

254. Sudds R.H.J. Observations of chistosome miracidial behavior of the presence of normal and abnormal snail host and subsequent tissue studies of the host // Elisha Sci. Soc.-I960.-Vol. 76.

255. Swammerdam J. Библия природы. - Амстердам, 1737.

256. Tayler E.L. and Mozley A. A culture method of Limnaea truncatula // Nature. -1948. -Vol.161. -№4101.

257. Tennent D. A study of the life history of Bucephalius hamianus, a parasite of the Oyster // Quart. Journ. Micr. Sci. - 1906. - Vol.49. - №4.

258. Theron A" Gerard С., Moneae H. Early enhanced growth of the digestive gland of Biomphalaria glabrata infected with Schistosoma mansoni: side effect or parasite manipulation? //Parasitol.RES. - 1992. - Vol.78.

259. Thomas A. The life history of the liver fluke: Fasciola hepatica// Quart. Journ. mierose. Sc. (N.S). - 1883. -Tol. 23.

260. Threadgold L.T. Gallagher S. S. Ё. Electron microscope studies of Fasciola hepatica. 1. The ultrastructure and interrelationship of the parenchimal cells II Parasilogy. - 1966. - Vol. 56.

261. Threadgold L.T. The teguaent and associated structures of Fasciola hepatica // Quart. Journ. Micr. Sci. - 1963. - Vol.104 (4)

262. Threadgold L.T. a. Hanna B. Development of an in vitro technique for cytological investigations of slices of Fasciola hepatica: evaluation by phesiological criteria II Hfrfsitol.- 1975.-Vol.5.

263. Timmenmans Lucy P.M. Stimulation of oviposition in some land - and freshwater snails // Proc. Koninkl. nederl. akad. wet. - 1959. - C. 62. - №4.

264. Viali M. Recerche istochimiche sui vitellogeni dei platelminti // Boll. Zool. - 1933. -№4.

265. Van der Woude, A. Germ. Cell Cycle of Megalodiscus temperature (Stafford, 1905) Horwood,1932 (Paramphistomidae: Trematoda) //Amer. Midland Naturalist, -1954.-51 G.R.-№1.

266. Wagener G.R. Uber Redien und Sporocysten Filippi // Arch. f. Anat. Physiol, viss. Med.-1866,-№6.

267. Weinland E., Brand Th. Beobachtungen an Fasciola hepatica // Zeitschr. vergl. Phisiol.-1926.-№4.

268. Wilson R.A. The structure and permeability of the egg shell and vitelline membrane of the egg of Fasciola hepatica // Parasitology. - 1967. - Vol. 57.

269. Wilson R.A. An investigation into the mucus produced by Lymnaea truncatula, the snail of Fasciola hepatica // Сотр. Biochem. Physiol. - 1968. - Vol. 24.

270. Wilson R.A. The hatching mechanism of the egg of Fasciola hepalica L. II Parasitology. - 1968. - Vol.58.1801. Литература

271. Wilson R.A. An investigation into the mucus produced by Lymnaea truncatula, the snail host of Fasciola hepatica//Compar. Biochem. and. Physiol.-1968.-Vol.24. -№2.

272. Wilson R.A. Fine structure of the tegument of the miracidium of Fasciola hepatica L // J. Parasitol. - 1969. - Vol.55.

273. Wilson R.A. Fine structure of the protonephridial system in the miracidium of Fasciola hepatica // Parasitology. - 1969. - Vol. 59.

274. Wilson K.A. Fine structure and organisation of the musculature in the miracidium of Fasciola hepatica // J. Parasitol. - 1969. - Vol. 55.

275. Wilson E.O. Chemical communication within animal species // Chemical ecology.-1970,-N.Y.

276. Wilson B.A. Fine structure of the nervous system and specialized nervo endings in the miracidium of Fasciola hepatica // Parasitology. - 1970. - Vol. 60.

277. Wilson R.A. Denison J. Short-chain fatty acids as stimulants of turning activity by the miracidium of Fasciola hepatica // Сотр. Biochem. Physiol. - 1970. - Vol.32.

278. Wilson R.A. Denison J. Studies on the activity of the miracidium of the common liver fluke Fasciola hepatica // Сотр. Biochem. Physiol. - 1970. - Vol.32.

279. Wilson H.A. Gland cells ans secretions in the miracidium of Fasciola hepatica// Parasitology. - 1971. - Vol. 63.

280. Wilson R., Webster L. Protonephridia // Parasitol. - 1978. - Vol.76.

281. Wilson R.A., Taylor S.L. The effect of variations in host and parasite densyty on the level of parasitization of L. truncatula by F. hepatica // Parasitol. -1978. - Vol.76.

282. Wotton R.M., Sogandares-Bernal A. A report on the occurence of microvillus like structures in the caeca of certain trematodes // Parasitol. - 1963. - Vol.53. - №2.

283. Yasuraoka K. Ecology of the miracidium. I. On the perpendiculr distribution and rheotaxis of the miracidium of Fasciola hepatica in water // Jap. J. Med. Sci. Biol. -1953. - Vol. 6.

284. Yosufzai H.K. Cytological studies on the spermatogenesis of Fasciola hepatica // Cellule. - 1953. - Vol.55. - №2.

285. Yosufzai H.K. Cytological studies on the oogenesis of Fasciota hepatica. Cellule. - 1953. - Vol.55. - №2.

286. Yosufzai H.K. Fertilization in Fasciola hepatica L. Cellule. - 1953. - Vol.55. -№2.

287. Zarnowski E. Introductory remarks to the Liverflukeconflerence // Wiadom. parazytoi. - 1968. - Vol.14. - №5-6.