Фармакотоксикологическая оценка экстремофильных дрожжей Yarrowia lipolytica и их использование в качестве средства доставки факторов роста тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 06.02.03, кандидат биологических наук Зылькова, Марина Валерьевна

• Зылькова, Марина Валерьевна
• кандидат биологических наук
• 2013

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Зылькова, Марина Валерьевна

1 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

2 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 10 2.1 Биохимические особенности Уаггоу^1а Иро1уйса и их 10 влияние на применимость этого биологического объекта в микробиологическом производстве

2.2. Адаптация У. Нро1уйса к росту при щелочных значениях рН 14 за счёт модификации системы транспорта метаболитов через внешнюю мембрану

2.3. Исследования физиологических реакций У Ыро1уНса при 20 росте в щелочных условиях методами протеомики

2.4. Универсальные механизмы ответа У. Иро1уПса на 30 различные виды стресса

2.4.1. Функционирование цепи переноса электронов У Иро1уйса при 36 стрессовых воздействиях

2.4.2. Альтернативная оксидаза дыхательной цепи, как фактор 39 адаптации У. Иро1уйса к стрессовым воздействиям

2.4.3. Изменения морфологии клеток У Нро1уйса при адаптации к 42 стрессовым воздействиям

2.4.4. Цитологические особенности У Иро1уНса при ответе на тепловой шок

2.4.5. Цитологические особенности У Нро1уЫса при ответе на химический стресс

3 МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

4 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ

4.1 Изучение острой и субхронической токсичности кормовых 57 добавок на основе рыбной муки и У. Ііроіуїіса

4.2 Изучение раздражающего и аллергизирующего действия 64 кормовой добавки на основе рыбной муки и У. Ііроіуйса

4.3 Биологические испытания на модели мышей опытного 67 образца кормовой добавки, полученной на основе К Ііроіуіїса путём культивирования на средах различного состава

4.4 Исследование активности промотора гена УЭАС методом 72 транскрипционных репортёров с использованием гена La.cZ

4.5 Создание рекомбинантных продуцентов вНЯН свиньи

5 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ

6 ВЫВОДЫ

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакотоксикологическая оценка экстремофильных дрожжей Yarrowia lipolytica и их использование в качестве средства доставки факторов роста»

1.1 Актуальность темы. Важной задачей ветеринарной фармакологии и токсикологии является разработка и изучение действия лекарственных веществ на организм животных, стимуляция продуктивности и воспроизводственной способности, профилактика и лечение животных (Иванов A.B. и др., 2006; Антипов В.А. и др., 2007; 2009; Дорожкин В.И., Смирнов A.M. 2008). Народнохозяйственное значение приобретает разработка теоретических основ и практических приемов безопасных и экономически оправданных методов стимуляции роста сельскохозяйственных и промысловых животных (Тремасов М.Я., Иванов A.B. и др., 2006; Тремасов М.Я., Папуниди К.Х. и др., 2012). В качестве средств стимуляторов роста в недавнем прошлом в нашей стране и за рубежом использовался паприн и его различные добавки в составе комбикормов, в виде автолизата в составе регенирированного молока и т.д. (Яцко H.A. и др., 1993; Кузнечик В.И., 1994).

Перспективным объектом, позволяющим добиться прогресса в решении этой задачи являются дрожжи Yarrowia lipolytica, что обусловлено сочетанием в этом организме нескольких уникальных биохимических особенностей (Barth G., Gaillardin С., 1997). За счет наличия пероксисом она способна расти на органических субстратах самого различного биогенного и абиогенного происхождения, включая парафины нефти, коммунальные и промышленные стоки. Обладая мощным аэробным метаболизмом, У. lipolytica устойчива ко многим агрессивным органическим соединениям, эффективно разрушает ксенобиотики и токсины. В отличие от других видов дрожжей, Y. lipolytica обладает высокой алкало - и галотолерантностью, с высокой эффективностью секретирует белки во внешнюю среду. В течение 10 лет Y. lipolytica использовалась в СССР в качестве биореактора для производства кормового белка для животноводства в качестве субстрата парафинов нефти (паприн или белково-витаминный концентрат, БВК) в результате чего накоплены данные, подтверждающие безопасность и высокую кормовую ценность ее биомассы (Выслоух В.А. и др., 1987; Ибрагимов Ф.Б., Сычев А.Е. и др., 1995). В 2000 г надзорный орган США -Food and Drug Administration включил Y. lipolytica в список заведомо безопасных видов (GRAS), без ограничений пригодных для производства кормовых и пищевых ингредиентов. По данным (Guerzoni М.Е. et al., 2001; Suzzi G. et al., 2001), живые клетки Y. lipolytica присутствуют в традиционных продуктах из регионов Италии. Для Y. lipolytica разработаны удобные генетические маркеры и методы трансформации, полностью определена последовательность генома типового штамма этого организма. В совокупности, все это позволяет применять для исследования Y. lipolytica современные методы транскриптомного и протеомного анализа, конструировать на ее основе рекомбинантные штаммы.

Одним из наиболее перспективных биоактивных пептидов для пероральной доставки является соматолиберин (GHRH), который оказывает положительное влияние на продуктивность сельскохозяйственных животных, в частности, способствует повышению скорости роста и при этом обладает высокой устойчивостью к протеолизу. До начала работы были получены данные о возможности достижения анаболического эффекта в отношении мышей и поросят соматолиберина свиньи, перорально доставляемого с помощью живых пробиотических штаммов мезофильных бацилл.

1.2 Цель и задачи исследований. Целью настоящей работы явилась разработка нового метода получения безопасной кормовой добавки на основе рекомбинантного штамма Y. lipolytica, служащей источником полноценного белка для кормления животных и обеспечивающей ускоренный рост животных за счет анаболического эффекта соматолиберина.

В соответствии с целью были поставлены следующие задачи: 1. Изучить метаболический потенциал Y. lipolytica для создания эффективной в питательном отношении, дешевой в производстве кормовой добавки, оценив ее способность к детоксикации ингредиентов комбикормов.

2. Изучить фармакологические и токсикологические свойства разработанной кормовой добавки на основе биомассы У. Ыро1уИса.

3. Разработать новую интегративную генетическую систему на основе впервые предложенного промотора стресс-индуцибельного белка УВАС, позволяющую экспрессировать в клетках У \ipolytica гетерологичные гены в условиях промышленного производства кормовой добавки.

4. Получить опытный образец кормовой добавки на основе рекомбинантного штамма К \ipolytica, несущего ген соматолиберина, и провести его испытания на животной модели.

1.3 Научная новизна работы. Впервые показана кормовая эффективность и отсутствие острой и субхронической токсичности, а также раздражающих и аллергизирующих свойств кормовой добавки на основе биомассы У Нро1уНса, выращенной в условиях активации аэробного метаболизма: метаболический потенциал У. Иро1уйса обеспечивает детоксикацию низкосортного сырья и повышение его биохимической полноценности. Разработана оригинальная система рекомбинантной экспрессии на основе промотора потенциал-зависимого митохондриального порина ЛПЭАС. Впервые получен продуцент соматолиберина свиньи на основе рекомбинантного штамма У. ИроЬуйса. На модели мышей впервые экспериментально показана возможность достижения анаболического эффекта при пероральном введении вегетативных цельных клеток У. Нро1уйса, содержащих зрелую форму СНКН. Доказано, что эти клетки могут рассматриваться в качестве эффективного микроконтейнера для пероральной доставки широкого круга белков и пептидов животным, обеспечивающих их сохранность в условиях высокой протеолитической активности дуоденального и кишечного химуса.

1.4 Практическая ценность работы. На примере У. Нро1уНса продемонстрирован универсальный принцип адаптации к стрессам, позволяющей ей эффективно распознавать и метаболизировать ксенобиотики и другие нежелательные компоненты кормовых ингредиентов.

Вновь обнаруженная особенность Y. lipolytica использована для решения практической задачи: конструирования новой системы доставки биологически активных пептидов животным. В результате проведенных исследований создана экономически эффективная и безопасная для человека альтернативная к синтетическим стероидным гормонам система на основе живых продуцентов белковых ростовых факторов на базе безопасных микроорганизмов Y. lipolytica. Дешевое производство биомассы этого вида дрожжей позволяет обеспечить доступность препарата для массового использования.

Результаты работы могут быть положены в основу новой технологии производства и применения кормовых добавок, обладающих анаболическим эффектом. Кроме того, разработанная технология может быть использована при создании продуцентов других биологически активных соединений на основе Y. lipolytica, в частности, антигенов вакцинного назначения для пероральной иммунизации сельскохозяйственных животных и для пероральной доставки в организм различных лекарственных средств.

1.5 Апробация материалов диссертации. Основные материалы диссертационной работы доложены, обсуждены и одобрены на следующих научных конференциях: Всероссийской конференции молодых ученых и II школы им. академика Н.М. Эммануэля «Окисление, окислительный стресс, антиоксиданты», 2006; II съезде микологов России с международным участием «Современная микология в России»; Bari Intern. Symposium on «Mitochondrial, physiology and pathology» IUDMB Sympos. SI Satellite events of the 33th FEBS Congress and 11th IUBMB Athens; научной конференции «Фундаментальные исследования» Пунта Кана 13-22 апреля 2012 гг.

1.6 Публикации. По результатам выполненных исследований опубликовано 10 научных работ, в том числе 3 статьи в изданиях, рекомендованных ВАК РФ.

1.7 Основные положения, выносимые на защиту:

- Результаты способности кормовой добавки на основе биомассы Y. lipolytica к детоксикации апитательных ингредиентов комбикормов.

- Фармакотоксикологическая оценка кормовой добавки на основе биомассы Y. lipolytica.

- Эффективность новой интегративной генетической системы на основе впервые предложенного промотора стресс-индуцибельного белка VDAC, позволяющего экспрессировать в клетках Y. lipolytica гетерологичные гены в условиях промышленного производства кормовой добавки.

Эффективность Y. lipolytica в качестве микроконтейнера для пероральной доставки соматолиберина животным.

1.8 Объем и структура работы. Материалы диссертации изложены на 127 страницах компьютерного текста и включают следующие разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований, результаты собственных исследований, обсуждение результатов исследований, выводы, практические предложения, список использованной литературы, приложения. Работа иллюстрирована 15 таблицами и 26 рисунками. Список использованной литературы содержит 170 библиографических источников, из них 125 иностранных.

Заключение диссертации по теме «Звероводство и охотоведение», Зылькова, Марина Валерьевна

6 выводы

1. Разработан метод получения кормовой биомассы У Нро1уИса, показана ее биологическая полноценность, отсутствие острой и субхронической токсичности, аллергизирующих и раздражающих свойств, а также высокая метаболическая активность дрожжей в отношении компонентов сырья, способствующая ускоренной детоксикации и биотрансформации кормовых ингредиентов.

2. Впервые показана высокая эффективность промотора митохондриального потенциал-зависимого порина \Т)АС для гетерологичной экспрессии в У. Иро1уНса в том числе, при культивировании штаммов на средах с использованием промышленного сырья.

3. С использованием новой экспрессионной системы впервые разработаны продуценты соматолиберина свиньи на основе У. Иро1уйса.

4. В доклинических испытаниях достигнут анаболический эффект соматолиберина свиньи в составе клеток У.Нро1уИса в отношении мышей, показана эффективность У Иро1уйса в качестве микроконтейнера для пероральной доставки соматолиберина животным.

7 ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ

1. Предлагается к применению после испытания на сельскохозяйственных животных кормовая добавка на основе рекомбинантного штамма У. Иро1уйса, несущего ген соматолиберина (новая интегративная система на основе промотора гена УЭАС), обладающая анаболическим эффектом, а также тест-система для иммунохимической детекции соматолиберина свиньи.

2. Теоретические и практические положения рекомендуется использовать в учебном процессе научно-исследовательских профильных ВУЗов, научно-исследовательских институтов и центров.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Зылькова, Марина Валерьевна, 2013 год

1. Антипов В.А. Микотоксикозы важная проблема животноводства // Ветеринария. - 2007. - № 11. - С. 7-9.

2. Антипов В.А., Васильев В.Ф. Система мероприятий по профилактике микотоксикозов животных и птиц // Ветеринария сельскохозяйственных животных. 2009. - № 9. - С. 18-21.

3. Бикташев Р.У., Шакиров Ш.К., Садриева P.P. Ускоренный метод определения лактазной активности // Нива Татарстана. 2004. - № 1. -С. 25-26.

4. Бирюкова E.H., Аринбасарова А.Ю., Сузина Н.Е., Сорокин В.В., Меденцев А.Г. Изменение ультраструктуры клеток Y. lipolytica в стрессовых условиях // Микробиология. 2011. - Т.80. - №3. - С.350-354.

5. Валиуллин Л.Р. Токсикологическая оценка сочетанного воздействия зеараленона и Т-2 токсина на организм животных и изыскание профилактических средств: Автореф. дис. .канд. биол. наук. -Казань, 2008. 17 с.

6. Выслоух В.А., Сидоренко Т.Е., Воробьева Г.И., Пинуев И.О. Способ получения белковой биомассы // Патент СССР № 1479509. 1989.

7. ГОСТ 28179-89. Дрожжи кормовые паприн. Технические условия. - М.: Издательство стандартов, 1989. - 10 с.

8. Гуськова Т.А., Мурашев А.Н., Хаитов P.M. Методические указания по доклиническому изучению безопасности лекарственных средств, полученных на основе биотехнологии. С. 209-217.

9. Ю.Дорожкин В.И. Смирнов A.M. Научно-методологические аспекты исследования токсических свойств фармакологических лекарственных средств для животных. М.: РАСХН., 2008. - 120 с.

10. Ибрагимов Ф.Б., Сайфуллин Ш.Ш. Способ получения биомассы // Патент России № 243 7931. 2011.

11. Ибрагимов Ф.Б., Сычев А.Е., Низамов P.A., Куватов Д.М., Захарычев А.П., Жучков В.Н. Способ получения биомассы // Патент России № 2041946. 1995.

12. Иванов A.B., Тремасов М.Я, Папуниди К.Х. Токсикологическая безопасность проблемы и пути решения // Второй съезд ветеринарных фармакологов и токсикологов России: Материалы съезда, Казань, 9-12 июня 2009. - Казань, 2009. - С. 5-10.

13. Кузнецов, А.Ф. Ветеринарная микология. Спб.: Лань, 2001. - 416 с.

14. Матросова Л.Е. Тарасова Е.Ю., Тремасов М.Я. Спектр применения пробиотика Энтероспорин в ветеринарии // Ученые записки КГАВМ. -Казань, 2009. Т. 197. - С.101-106.

15. Меденцев А.Г., Акименко В.К., Развитие и активация цианидрезистентного дыхания у дрожжей Yarrowia lipolytica II Биохимия. 1999. - Т.64. - №8. -С. 1123-1131.

16. Микотоксикозы животных (этиология, диагностика, лечение, профилактика) / A.B. Иванов, М.Я. Тремасов, К.Х. Папуниди, А.К. Чулков. М.: Колос, 2008. - 140 с.

17. Папуниди К.Х., Шкуратова И.А., Донник И.М., Шушарин А.Д. Патогенетические аспекты применения сорбентов в районахэкологического неблагополучия // Учёные записки КГАВМ. Казань,2005.-Т. 181. С. 174-180.

18. Папуниди Э.К. Ветеринарно-санитарная оценка мяса животных при сочетанной интоксикации тяжелыми металлами и применении цеолитов // Ветеринарный врач. 2008. - № 3. - С. 8-9.

19. Семенов Э.И. Поиск средств профилактики смешанных микотоксикозов животных: Автореф. дис. .канд. биол. наук. Казань,2006. 26 с.

20. Смирнов A.M. Достижения и актуальные проблемы ветеринарной фармакологии и токсикологии // Ветеринаринария. -2010. №2.-С.3-6.

21. Смирнов A.M., Таланов Г.А., Кононенко Г.П. Животноводству -безопасные корма // Ветеринария. 1999. - № 1. - С. 1-2.

22. Софронов П.В., Асланов P.M., Гайзатуллин P.P. Сочетанное влияние кадмия и Т-2 токсина на организм овец на фоне применения бентонита // Ветеринарный врач. 2008. - № 5. - С. 12-14.

23. Софронова С.А., Папуниди Э.К., Ахмерова Н.М., Конюхова В.А. Влияние цеолитов на биохимические показатели и содержание тяжелых металлов в органах овец при сочетанном воздействии на них свинца и кадмия // Ветеринарный врач. 2008. - № 2. - С. 4-6.

24. Тарасова Е.Ю., Тремасов М.Я., Иванов A.B. Использование углеродных энтеросорбентов при Т-2 микотоксикозе // Вопросы нормативно-правового регулирования в ветеринарии. Спб, 2009. -№4. - С. 53-54.

25. Тремасов М.Я., Иванов A.B., Семенов Э.И., Папуниди К.Х. Проблема микотоксикозов животных // Ветеринарный врач. № 5. - 2010. - С. 1619.

26. Тремасов М.Я., Матросова Л.Е., Тарасова Е.Ю. Опыт применения пробиотика при микотоксикозах // Вестник ветеринарии. 2009. - № 50.-С. 38-41.

27. Тремасов, М.Я., Семенов Э.И., Иванов A.B. Актуальные проблемы ветеринарной микотоксикологии // Иммунология, аллергология, инфектология. 2009. - № 2. - Т. 2. - С. 28-29.

28. Тутельян В.А. Природные токсины. Медицинские приоритеты // 1-й съезд токсикологов России: Тезисы докладов, Москва, 17-20 ноября 1998.-М.:, 1998.-С. 20.

29. Фетисов Л.Н., Солдатенко H.A., Русанов В.А. Анализ результатов мониторинга загрязнения кормов микотоксинами // Современная микология в России: Материалы 2-го Съезда микологов России. М.: Национальная академия микологии, 2008. - С. 267.

30. Шадрин A.M. Природные цеолиты Сибири в животноводстве и охране окружающей среды. Новосибирск, 1998. - 144 с.

31. Шакиров Ш.К. , Гимадеев М.М., Муллакаев О.Т. Влияние энергетических концентратов в рационах свиноматок на показателибелкового обмена их потомства // Нива Татарстана. 2009. - № 5-6. - С. 26-28.

32. Bankar A.V., Kumar A.R., Zinjarde S.S., Environmental, and industrial, applications of Yarrowia lipolytica II Appl Microbiol Biotechnol. 2009. -V. 84 (5). - P. 847-865.

33. Barnell H. R. Biology and the Food Industry // Studies in Biology. Edward Arnold Ltd, London. 1974.-N45.-P. 12-16.

34. Barth G. and Gaillardin C. Physiology and genetics of dimorphic fungus Yarrowia lipolytica //FEMS Microbiology Reviews. 1997. - V. 19. - P. 219-237.

35. Barth G., Gaillardin C. Yarrowia lipolytica genetic // In Biochemistry and Molecular Biology of Non Conventional. Yeasts in Biotechnology, Wolf WK (ed.). Springer: Berlin. 1996. - P.313-338.

36. Belazzi T. Negative regulation of transcription of the Saccharomyces cerevisiae catal.ase T (CTT1) gene by cAMP is mediated by a positive control element // EMBO J. 1991. - V.10. - P. 585-592.

37. Berhe A., Fristedt U., Persson B.L. Expression and purification of the high-affinity phosphate transporter of Saccharomyces cerevisiae II Eur. J. Biochem. 1995. - V. 227. - P. 566-572.

38. Bisson L.F., Coons D.M., Kruckeberg A.L., Lewis D.A. Yeast sugar transporters. // Crit. Rev. Biochem. Mol. Biol. 1993. - V. 28. - P. 259-308.

39. Borst-Pauwels G.W. Ion transport in yeast // Biochim. Biophys. Acta. -1981.-V. 650.-P. 88-127.

40. Borst-Pauwels G.W. Kinetical. parameters of monoval.ent cation uptake in yeast calculated on accounting for the mutual, interaction of cation uptake and membrane potential. // Biochim. Biophys. Acta. 1993. - V. 1152. - P. 201-206.

41. Braun B.R., Johnson A.D. Control of filament formation in Candida albicans by the transcriptional, repressor TUP1 // Science. 1997. - V. 277. -P. 105.

42. Brown L.A., Chaffm W.L. Differential, expression of cytoplasmic proteins during yeast bud and germ tube formation in Candida albicans II Canadian Journal, of Microbiology. 1981. - V. 27. - P. 580.

43. Bunker H. J. New Foods // 2nd Int. Congr. Food Sci. and Technol., Warsaw. In Biology and the Food Industry. N 45. - 1966. - P. 48.

44. Bun-Ya M., Harashima S., Oshima Y. Putative GTP-binding protein, Gtrl, associated with the function of the Pho84 inorganic phosphate transporter in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Cell. Biol. 1992. - V. 12. - P. 29582966.

45. Bun-Ya M., Nishimura M., Harashima S., Oshima Y., The PH084 gene of Saccharomyces cerevisiae encodes an inorganic phosphate transporter // Mol. Cell. Biol. 1991. - V. 11. - P. 3229-3238.

46. Bun-Ya M., Shikata K., Nakade S., Yompakdee C., Harashima S., Oshima Y. Two new genes, PH086 and PH087, involved in inorganic phosphate uptake in Saccharomyces cerevisiae II Curr. Genet. 1996. - V.29. - P. 344351.

47. Cal.derone R.A., Fonzi W.A. Virulence factors of Candida albicans II Trends in Microbiology. 2001. - V. 9. - P. 327.

48. Castrillo J.I., Ugal.de U.O. Patterns of energy metabolism and growth kinetics of Kluyveromyces marxianus in whey chemostat culture // Appl. Microbiol. Biotecnol. 1993. - V. 40. - №(2-3). - P. 386.

49. Chen S.L., Chinger M. Production of Baker's Yeast // In Comprehensive Biotechnology (H. W. Blanch, S. Drew and D. I. C. Wang Eds.). Pergamon, Oxford, 1985. V. 3. - P. 429.

50. Choi W., Yoo Y.J., Kim M., Shin D., Jeon H.B., Choi W. Identification of proteins highly expressed in the hyphae of Candida albicans by two-dimensional. electrophoresis // Yeast 2003. - V. 20. - P. 1053.

51. Cockburn M., Earnshaw P., Eddy A. A. The stoicheiometry of the absorption of protons with phosphate and L-glutamate by yeasts of the genus Saccharomyces II Biochem. J. 1975. - V. 46. - P. 705-712.

52. Collinson L.P. and Dawes L.W., Inducibility of the response of yeast cell to peroxide stress // J. Gen. Microbiol. 1992. - V. 138. - № 2. - P. 329-335.

53. Collinson L.P., Dawes L. W. Isolation characterization and overexpression of the yeast gene, GLRI, encoding glutathione reductase // J. Gen. Microbiol. 1992. -V. 138.-P. 329-335.

54. Coote P.J., Cole M.B., Jones M.V. Induction of increased thermotolerance in Saccharomyces cerevisiae may be triggered by a mechanism involving intracellular pH//J. Gen. Microbiology. 1991. - V. 137. - P. 1701-1708.

55. Davidson J.F., Whyte B., Bissinger P.H., Schiestl R.H. Oxidative stress is involved in heat-induced cell death in Saccharomyces cerevisiae II Proc. Natl. Sci. USA. 1996.-V. 93.-№ 10. - P. 5116-5121.

56. Duquesne S., Bordes F., Fudal.ej F., Nicaud J.M., Marty A. The yeast Yarrowia lipolytica as a generic tool for molecular evolution of enzymes // Methods Mol. Biol.-2012. -V. 861. P. 301-312.

57. Ebanks R.O., Chisholm K., McKinnon S., Whiteway M., Pinto D.M. Proteomic analysis of Candida al.bicans yeast and hyphal. cell wal.l and associated proteins // Proteomics. 2006. - V. 6. - P. 2147.

58. Fabre E., Nicaud J.M., Lopez M.C. and Gaillardin C. Role of the proregion in the production and secretion of the Yarrowia lipolytica al.kal.ine extracellular protease. //J. Biol. Chem. 1991. - V. 266. - P. 3782-3790.

59. Flattery-O'Brien J., Collinson L.P., Dawes I.W. Saccharomyces cerevisiae has an inducible response to menadione which differs from that to hydrogen peroxide//J. Gen. Microbial. 1993. - V. 139. - P. 501-507.

60. Forage A.J. and Righelato R.C., Biomass from Carbohydrates. In Microbial. Biomass // Economic Microbiology. Academic Press, London, New York. -1979.-V. 4.-P. 289.

61. Fridovich I. Superoxide radical, and superoxide dismutases // Annual. Review of Biochemistry. 1995. - V. 64. - P. 97.

62. Fristedt U., Berhe A., Ensler K., Norling, Persson B.L. Isolation and characterization of membrane vesicles of Saccharomyces cerevisiae harboring the high-affinity phosphate transporter // Arch. Biochem. Biophys. 1996. -V. 330. - P. 133-141.

63. Fristedt U., Weinander R., Martinsson H.S., Persson B.L. Characterization of purified and unidirectional.ly reconstituted Pho84 phosphate permease of Saccharomyces cerevisiae IIFEBS Lett. 1999. - V. 458. - P. 1-5.

64. Giaever G., Shoemaker D.D., Jones T.W., Liang H., Winzeler E.A., Astromoff A., Davis R.W. Genomic profiling of drug sensitivities via induced haploinsufficiency. //Nature Genetics. 1999. - V. 21. - P. 278.

65. Gimeno C.J., Ljungdahl P.O., Styles C.A., Fink G.R. Characterization of Saccharomyces cerevisiae pseudohyphal. growth // In Dimorphism Fungi in Biology and Medicine. 1993. - V. 83. - P. 25-28.

66. Gimeno C.J., Ljungdahl P.O., Styles C.A., Fink G.R. Unipolar cell divisions in the yeast S. cerevisiae lead to filamentous growth: regulation by starvation and RAS // Cell. 1992. - V. 68. - P. 1077.

67. Gow N.A., Brown A.J., Odds F.C. Fungal, morphogenesis and host invasion // Current Opinion in Microbiology. 2002. - V. 5. - P. 366.

68. Gunasekaran U., Yang R., Gunasekaran M. Regulation of superoxide dismutase synthesis in Candida al.bicans II Mycopathologia. 1998. - V. 141. - P. 59.

69. Habel D., Plesofsky-Vig N., Brambl R. The respiratory response to heat shock in Neurospora crassa // FEMS Microbiol. Letters. 1991. - V. 81. - P. 317322.

70. Hacking A.J. Economic aspects of Biotechnology // Cambridge Studies in Biotechnology 3 (A. J. Hacking Ed.). Cambridge University Press, Cambridge, 1987.-350 p.

71. Harris E.E. Food Yeast Production from Wood Processing By-Products // United States Department of Agriculture Forest Service. 1949. - № 1754. -P 122.

72. Hassanshahian M., Tebyanian H., Cappello S. Isolation and characterization of two crude oil-degrading yeast strains, Yarrowia lipolytica PG-20 and PG-32, from the Persian Gulf// Mar Pollut Bull. 2012. - V.64 (7). - P. 13861391.

73. Hayduck F.Z. Illustrierte Brauerei-Lexikon. 1913. - V. 36. - P. 233.

74. Henderson P.J. The 12-transmembrane helix transporters // Curr. Opin. Cell. Biol. 1993. - V. 5. - P. 708-721.

75. Hernandez R., Nombela C., Diez-Orejas R., Gil C. Two-dimensional, reference map of Candida al.bicans hyphal. forms // Proteomics. 2004. -V. 4.-P. 374.

76. Iida H. Multistress resistance of Saccharomyces cerevisiae is generated by insertion of retrotransposon Ty into the 5' coding region of the adenylate cyclasegene // Mo'i. Cell. Biol. 1988. - V. 8. - № 12. - P. 5555-5560.

77. Kelly M., Burke J., Smith M., Klar A., Beach D. Four mating-type genes control sexual differentiation in the fission yeast // The EMBO Journal -1988. -V. 7. P. 1537.

78. Koehler G.A., White T.C., Agabian N. Overexpression of a cloned IMP dehydrogenase gene of Candida albicans confers resistance to the specific inhibitor mycophenolic acid // Journal of Bacteriology. 1997. - V. 179. -P. 2331.

79. Lagerstedt J.O., Kruckenberg A.L., Berden J.A., Persson B.L. In Molecular Biology and Physiology of Water and Solute Transport // Fundamental Research and Applied Aspects 2000. - P. 405-414.

80. Lee K.H., Jun S., Hur H.S., Ryu J.J., Kim J. Candida albicans protein analysis during hyphal. differentiation using an integrative HA-tagging method // Biochemical and Biophysical Research Communications. 2005. -V. 337. - P. 784.

81. Lenaz G. Role of mitochondria in oxidative stress and ageing // Biochim. Biophys. Acta, 1998. V. 1366. - P. 53-67.

82. Lenburg M.E., O'Shea E.K. Signal.ing phosphate starvation // Trends Biochem. Sci. 1996. - V. 21. - P. 383-387.

83. Lloyd D., Morrell S., Carlsen H.N., Degn H., James P.E., Rowlands C.C. Effects of growth with ethanol on fermentation and membrane fluidity of Saccharomyces cerevisiae II Yeast. 1993. - V. 9. - P. 825-833.

84. MacCabe A.P., Van den Hombergh J.P., Tilburn J., Arst H.N., and Visser J. Identification, cloning and analysis of the Aspergillus niger gene pacC, a wide domain regulatory gene responsive to ambient pH // Mol. Gen. Genet. 1996. -V. 250. - P. 367-374.

85. Magee P.T. Which came first, the hypha or the yeast? // Science. -1997.-V. 277.-P. 52.

86. Manning M., Mitchell T.G. Morphogenesis of Candida albicans and cytoplasmic proteins associated with differences inmorphology, strain, or temperature // Journal, of Bacteriology. 1980. - V. 144. - P. 258.

87. Marchler G., Shuller C., Adam G., Ruis H.A. Saccharomyces cerevisiae UAS element controlled by protein kinase A activates transcription in response to a variety of stress conditions // EMBOJ. 1993. - V. 12. - № 5. - P. 19972003.

88. Martinez P., Persson B.L. Identification, cloning and characterization of a derepressible Na+-coupled phosphate transporter in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Gen. Genet. 1998. - V. 258. - P. 628-638.

89. Martinez P., Zvyagilskaya R., Al.lard P., Persson B.L. Physiological, regulation of the derepressible phosphate transporter in Saccharomyces cerevisiae II J. Bacteriol. 1998. - V. 180. - P. 2253-2256.

90. Matoba M., Fukayama J., Wing R.A., Ogrydziak D.M. Intracellular precursors and secretion of al.kal.ine extracellular protease of Yarrowia lipolytica II Mol. Cell. Biol. 1988. - V. 8. - P. 4904^1916.

91. Matoba S., Ogrydziak D.M. A novel location for dipeptidyl aminopeptidase processing sites in the al.kal.ine extracellular protease of Yarrowia lipolytica II J. Biol. Chem. 1989. - V. 264. - P. 6037-6043.

92. Michea-Hamzehpour M., Turian G. GMP-stimulation of the cyanide-insensitive mitochondrial, respiration in heat shocked conidia of Neurospora crassa II Experientia. - 1987. - V. 43. - P. 439-440.

93. Morin M., Monteoliva L., Insenser M., Gil C., Dominguez A. Proteomic anal.ysis reveal.s metabolic changes during yeast to hypha transition in Yarrowia lipolytica J. II Mass Spectrom. 2007. - V. 42. - P. 1453-1462.

94. Mutoh N., Nakagawa C.W., Hayashi Y. Adaptive response of Schizosaccharomyces pombe to hydrogen peroxide // FEMS Microbiol. Letters. 1995. - V. 132. - №(1-2). - P. 67-72.

95. Navarro-Garcia F., Sanchez M., Nombela C., Pla J. Virulence genes in the pathogenic yeast Candida albicans II FEMS Microbiology Reviews. -2001. -V. 25. P. 245.

96. Nieuwenhuis B.J., Borst-Pauwels G.W. Derepression of the high-affinity phosphate uptake in the yeast Saccharomyces cerevisiae II Biochim. Biophys. Acta. 1984. - V. 770. - P. 40-46.

97. Olbrich H. Biotin activity of molasses // Branntweinwirtschaft. -1973. -V. 113. P. 270.

98. Oshima Y. The phosphatase system in Saccharomyces cerevisiae II Gen. Genet. Syst. 1997. - V. 72. - P. 323-334.

99. Oura E. Biomass from Carbohydrates // In Biotechnology. 1983. -V. 3. - P. 3.

100. Perez-Campo F.M., Dominguez A. Factors affecting the morphogenetic switch in Yarrowia lipolytica II Current Microbiology. -2001.-V. 43.-P. 429.

101. Persson B.L., Lagerstedt J.O., Pratt J.R., Pattison-Granberg J., Lundh K., Shokrollahzadeh S., Lundh F. Regulation of phosphate acquisition in Saccharomyces cerevisiae II Curr. Genet. 2003. - V. 43. - P. 225-244.

102. Persson B.L., Petersson J., Fristedt U., Weinander R., Berhe A., Pattison J. Phosphate permeases of Saccharomyces cerevisiae: structure, function and regulation // Biochim. Biophys. Acta. 1999. - V. 142. - P. 255-272.

103. Peterson W.H., Snell E.E., Frazier W.C. Fodder yeasts from wood sugar. Ind. // Eng. Chem. 1945. - V. 37. - P. 30.

104. Petersson J., Pattison J., Kruckeberg A.L., Berden J.A., Persson B.L. Intracellular localization of an active green fluorescent protein-tagged Pho84 phosphate permease in Saccharomyces cerevisiae II FEBS Lett. -1999.-V. 462. P. 37-42.

105. Piper P.W. Molecular events associated with acquisition of heat tolerance by the yeast Saccharomyces cerevisiae II FEMS Microbiol. Rev. 1993. - V. 11.-P. 339-356.

106. Pirt S.J. Estimation of substrate affinities (Ks val.ues) of filamentous fungi from colony growth rates // J. Gen. Microbiol. 1973. - V. 75. - P. 245.

107. Pirt S.J., Kurowski W.M. Extension of the theory of the chemostat with feedback of organisms. Its experimental, real.ization with a yeast culture // J. Gen. Microbiol. 1970. - V. 63. - P. 357.

108. Pitarch A., Diez-Orejas R., Molero G., Pardo M., Sanchez M., Gil C., Nombela C. Analysis of the serologic response to systemic Candida albicans infection in a murine model // Proteomics. 2001. - V. 1. - P. 550.

109. Pitarch A., Sanchez M., Nombela C., Gil C. Sequential, fractionation and two-dimensional, gel analysis unravels the complexity of the dimorphic fungus Candida albicans cell wal.l proteome // Molecular and Cellular Proteomics. -2002. V. 1. - P. 967.

110. Plesofsky-Vig N., Brambl R. Gene sequence and analysis of hsp30, a small heat shock protein of Neurospora crassa which associates with mitochondria//J. Biol Chem. 1990. - V. 265. - P. 15432-15440.

111. Plesofsky-Vig N., Brambl R. Heat shock response of Neurospora crassa protein synthesis and induced thermotolerance // J. Bacterial 1985. - V. 162. -P. 1083-1091.

112. Rivière J. Microbial proteins. In Industrial Applications of Microbiology // Surrey University Press. 1977. - № 4. - P. 105.

113. Rodriguez C., Dominguez A. The growth characteristics of Saccharomycopsis lipolytica: morphology and induction of mycelium formation // Canadian Journal of Microbiology. 1984. - V. 30. - P. 605.

114. Roomans G.M., Borst-Pauwels G.W. Interaction of cations with phosphate uptake by Saccharomyces cerevisiae. Effects of surface potential // Biochem. J. 1979. - V. 178. - P. 521-527.

115. Ruis H., Schuller C. Stress signaling in yeast // Biol Chem. 1995. - V. 17.-P. 959-965.

116. Sak S. Yeast // Danish Patent. 1999. - V. 28. - P. 507.

117. Schuddemat de Boo J.R., Van Leeuwen C.C.M., Van den Broek P.J.A., Van Steveninck J. Polyphosphate synthesis in yeast // Biochem. Biophys. Acta. 1989. - V. 100. - P. 191-198.

118. Shepherd M.G. Morphogenetic transformation of fungi // Current Topics in Medical. Mycology. 1988. - V. 2. - P. 278.

119. Shevchenko A., Wilm M., Vorm O., Mann M. Mass spectrometric sequencing of proteins silver-stained polyacrylamide gels // Analytical. Chemistry. 1996. - V. 68. - P. 850-858.

120. Soumal.ainen H. and Oura E., Yeast nutrition and solute uptake // In The st. Yeasts 1 edn. (A. H. Rose and J. S. Harrison Eds.) Academic Press, London. 1971. -V. 2. - P. 3.

121. Staib P., Kretschmar M., Nichterlein T., Kohler G., Michel S., Hof H., Hacker J., Morschhauser J. Host-induced, stage-specific virulence gene activation in Candida albicans during infection // Molecular Microbiology. 1999. -V. 32.-P. 533.

122. Su S.Y., Mitchell A.P. Molecular characterization of the yeast meiotic regulatory gene RIM1II Nucleic Acids Res. 1993. - V. 21. - P. 3789-3797.

123. Suarez T., Penhal.va M.A. Characterization of a Penicillium chrysogenum gene encoding a PacC transcription factor and its binding sites in the divergent pcbAB-pcbC promoter of the biosynthetic cluster // Mol. Microbiol 1996. - V. 20. - P. 529-540.

124. Tamai Y., Toh-e A., Oshima Y. Regulation of inorganic phosphate transport systems in Saccharomyces cerevisiae II J. Bacteriol. 1985. - V. 164.-P. 964-968.

125. Thomas D.P., Pitarch A., Monteoliva L., Gil C., Lopez-Ribot J.L. Proteomics to study Candida al. bicans biology and pathogenicity // Current Drug Targets. Infectious Disorders. 2006. - V. 6. - P. 335.

126. Ton-That T.C., Michea-Hamzehpour M., Turian G. Respiratory response to heat shock in Neurospora crassa II Protoplasma. 1983. - V. 116. - P. 149154.

127. Torres-Guzman J.C., Dominguez A. HOY1, a homeo gene required for hyphal. formation in Yarrowia lipolytica II Molecular and Cellular Biology. 1997. - V. 17. - P. 6283.

128. Watson K. Microbial, stress proteins // Adv. Microbial. Physiol. 1990. -V. 31.-P. 183-223.

129. Weitzel G., Pilatus U., Rensing L. The cytoplasmic pH, ATP content and total, protein synthesis rate during heat-shock protein inducing treatments in yeast//Experimental. Cell Research. 1987. - V. 170. - P. 64-79.

130. Weitzel W., Winchel M. The Yeast, its Nutritive and Therapeutic Value // Verlag Rothgiese und Diesing, Berlin, 1932.

131. White J. Yeast Technology. Chapman & Hal.l, London, 1954.

132. Wykoff D.D., O'Shea E.K. Phosphate transport and sensing in Saccharomyces cerevisiae II Genetics. 2001. - V. 159. - P. 1491-1499.

133. Yano Y., Oikawa H., Satomi M. Reduction of lipids in fish meal, prepared from fish waste by a yeast Yarrowia lipolytica II International. Journal, of Food Microbiology. -2008. V. 121. - P. 302-307.

134. Yompakdee C., Bun-ya M., Shikata K., Ogawa N., Harashima S., Oshima Y. A putative new membrane protein, Pho86p, in the inorganic phosphate uptake system of Saccharomyces cerevisiae II Gene. 1996. - V. 171. - P. 41-47.

135. Yompakdee C., Ogawa N., Harashima S., Oshima Y. A putative membrane protein, Pho88p, involved in inorganic phosphate transport in Saccharomyces cerevisiae II Mol. Gen. Genet. 1996. - V. 251. - P. 580590.

136. Zvyagilskaya R., Al.lard P., Persson B.L. Two systems for phosphate uptake in Yarrowia lipolytica cells grown at acidic conditions // IUBMB Life. 2000. - V. 49. - P. 143-147.

137. Zvyagilskaya R., Parchomenko O., Persson B.L. Phosphate-uptake systems in Yarrowia lipolytica cells grown under al.kal.ine conditions // IUBMB Life. 2000. - V. 50. - P. 151-155.