Фармакогностическое изучение цветков и травы трехреберника продырявленного Tripleurospermuminodorum (L.) Sch. Bip. тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Елапов Александр Александрович

• Елапов Александр Александрович
• кандидат наук
• 2025

Оглавление диссертации кандидат наук Елапов Александр Александрович

ВВЕДЕНИЕ

Глава I. Обзор литературы

1.1. Разновидности растений рода трехреберник и их применение в народной медицине

1.2 . Ботаническое описание и распространение трехреберника продырявленного. Микроскопическое изучение различных частей

растения Трехреберник продырявленный

1.3. Химический состав и фармакологическая активность растений рода трехреберник

1.4. Технологии повышения интенсивности извлечения биологически

активных соединений из растительного сырья

Глава II. Объекты и методы исследования

2.1 Объекты исследования

2.2. Методы исследования

2.3. Морфолого-анатомическое исследование цветков и травы трехреберника продырявленного

2.4. Числовые показатели цветков и травы трехреберника продырявленного

2.5. Общие методики стандартизации сырья

2.6. Методика приготовления извлечения для проведения качественного анализа биологически активных соединений

2.7. Качественный анализ биологически активных соединений

2.8. Количественное определение биологически активных соединений

2.9. Определение антимикробной и антимикотической активности

2.10. Изучение противовоспалительной активности

2.11. Изучение антиагрегационной, антикоагуляционной и антиоксидантной/прооксидантной активности извлечений из

трехреберника продырявленного

Глава III. Морфолого-анатомическое исследование сырья трехреберника продырявленного

3.1. Изучение морфологических особенностей травы и цветков трехреберника продырявленного

3.2. Микроскопическое исследование

Глава IV. Качественный анализ травы и цветков трехреберника продырявленного и установление числовых показателей

4.1. Качественные реакции

4.2. Изучение состава некоторых БАС трехреберника продырявленного методом ТСХ

4.3. Идентификация фенольных соединений цветков Т. продырявленного методом ЬС/МБ

4.4. Идентификация фенольных соединений травы Т. продырявленного методом ЬС/МБ..................................................................... ^

4.5. Показатель- влажность сырья

4.6. Показатель- зола общая

4.7. Показатель- зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте

4.8. Показатель - измельченность травы и цветков трехреберника продырявленного

4.9. Показатель - посторонние примеси травы и цветков трехреберника

продырявленного

Глава V. Количественный анализ основных БАС травы и цветков

трехреберника продырявленного

5.1. Определение флавоноидов (суммарное содержание) в сырье трехреберника продырявленного

5.1.1. Разработка методики анализа суммы флавоноидов в цветках

трехреберника продырявленного

5.1.2. Разработка методики определения суммы флавоноидов в траве трехреберника продырявленного

5.1.3. Изучение влияния ультразвука, инфразвука и звука на экстракцию флавоноидов из травы трехреберника продырявленного

5.1.3.1. Изучение влияния ультразвука на экстракцию флавоноидов

из травы трехреберника продырявленного

5.1.3.2. Изучение влияния инфразвука на экстракцию флавоноидов

из травы трехреберника продырявленного

5.1.3.3. Изучение влияния звуковых колебаний на эффективность экстракции флавоноидов из травы трехреберника продырявленного

5.1.3.4. Комплексная экстракция флавоноидов из травы трехреберника продырявленного под действием инфразвука/ультразвука и температуры

5.1.4. Определение полисахаридов в сырье трехреберника продырявленного

5.1.5. Определение содержания углеводов в траве и цветках трехреберника

5.1.6. Количественное определение свободных органических кислот в цветках и траве трехреберника продырявленного

5.1.7. Определение содержания дубильных веществ в цветках и траве трехреберника продырявленного

5.1.8. Определение элементного состава цветков и травы трехреберника продырявленного

Глава VI. Изучение фармакологических свойств травы

трехреберника

6.1. Изучение антимикробной и антимикотической активности травы

трехреберника продырявленного

6.2. Изучение антиагрегационной, антикоагуляционной и антиоксидантной активности травы трехреберника продырявленного

6.3. Изучение противовоспалительной активности

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

Список литературы

Приложение

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ

Т. продырявленный - трехреберник продырявленный

ТСХ - тонкослойная хроматография

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография

УЗ - ультразвук

СО - стандартный образец

БАС - биологически активные соединения

ФС - фармакопейная статья

НД- нормативная дрокументация

УФ - ультрафиолетовый

АПТВ - активированное частичное (парциальное) тромбопластиновое время ПВ - парциальное время СФМ - спектрофотометрия ПО -предел обнаружения ФЛ - флавоноиды

ВВЕДЕНИЕ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение цветков и травы трехреберника продырявленного Tripleurospermuminodorum (L.) Sch. Bip.»

Актуальность темы исследования.

Лекарственные препараты растительного происхождения набирают популярность с 2000-х годов, что связано с более мягким и безопасным действием, широким спектром применения как в педиатрической, так и в геронтологической практике [Афанасьева, Т. Г., 2006].

Растительные препараты могут использоваться для продолжительного лечения хронических заболеваний. Комплексное действие биологически активных соединений (БАС) обуславливает их эффективность, минимальное проявление побочных эффектов и привыкания к препарату [Т.В. Самбукова, Б.В. Овчинников, В.П. Ганапольский, А.Н. Ятманов, П.Д. Шабанов, 2017].

Перечень лекарственных средств растительного происхождения постоянно пополняется в связи с научным обоснованием взаимосвязи фармакологической активности и содержания БАС в растительном сырье. Однако в народной медицине известно множество видов растений, используемых для профилактики и лечения различных заболеваний, но не входящих в число официальных. Одним из таких растений является трехреберник продырявленный (Tripleurospermum inodorum (L.) Sch.Bip.), сем Asteraceae.

В официнальной медицине России и Польши цветки трехреберника продырявленного считаются примесью к ромашке аптечной (Chamomilla recutita L.) [Tiezzi A., Karpinski T.M., eds, 2017; Woo S. L., Harms V. L., Thomas A. G., et al.., 1997]. В Великобритании, Канаде и других странах, трехреберник продырявленный относят к сорным растениям [Bond W., Davies G., Turner R, 2007; Горячкина Е.Г., Гордеева В.В., Мазунова О.И., 2012].

Экстракты трехреберника находят применение в народной медицине как противовоспалительные, антимикробные, антимикотические средства [Махлаюк В.П., 1991]. Отмечено также применение сырья трехреберника в качестве мягчительного, обезболивающего и спазмолитического средства

[Servi, H., Yücel, Y.Y., Polatoglu, K, 2018]. Некоторые виды фармакологической активности цветков трехреберника продырявленного доказаны экспериментально: противовоспалительная активность, антимикотическое действие, а также ингибирующая активность эфирного масла в отношении ацетилхолинэстеразы [Горячкина Е.Г., Цыренжапов А.В., Мазунова О.И. и др., 2021; Велиханова З.Р., Сорокина А.А., Сачивкина Н.П. и др., 2018 г.].

Согласно литературным данным, фармакологические свойства растения могут быть обусловлены преимущественно присутствием в химическом составе растения фенольных соединений (фенолкарбоновых кислот, флавоноидов, дубильных веществ и др.) [Куркин В.А., 2022 г.]. В литературе имеются отдельные данные, подтверждающие содержание флавоноидов, аскорбиновой кислоты, дубильных веществ и органических кислот в цветках трехреберника, однако системного изучения этого вида сырья не проводилось [Велиханова В.Р., Марахова А.И., Сорокина А.А., 2017; Блинова О.Л., Гилева А.А., Хлебников А.В., Белоногова В.Д., Турышев А.Ю., 2021; Servi, H., Yücel, Y.Y., Polatoglu, K. , 2018 и др.]. Данных по исследованию травы трехреберника, заготовленной до цветения, в литературе не представлено.

В связи с тем, что трехреберник продырявленный имеет достаточную сырьевую базу в РФ [Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. — Трехреберник непахучий. БИНРАН. Дата обращения: 7 октября 2023.], а его сырье обладает рядом важных фармакологических свойств, актуальным является проведение фармакогностического изучения цветков и травы трехреберника продырявленного для разработки проектов нормативной документации и введения трехреберника продырявленного в официнальную медицину.

Степень разработанности темы исследования.

В настоящее время публикации по изучению трехреберника продырявленного носят ограниченный и отрывочный характер. Так,

например, имеются некоторые данные по установлению характеристик подлинности цветков трехреберника продырявленного и анализу некоторых биологически активных соединений преимущественно гидрофильной фракции водно-спиртового экстракта [Велиханова З.Р. и др., 2016, 2017 гг.; Блинова О.Л. и др., 2021 г.]. Зарубежными авторами проведен анализ эфирного масла цветков трехреберника [Sibul, F. и др., 2020 г.]. Также представлен ряд публикаций по фармакологическим свойствам цветков трехреберника [Tiezzi, Antonio и др., 2017 г; Bond W и др., 2007 г.; Zeljkovic S.C., 2015 г.; Горячкина Е.Г. и др., 2012 г.]., не носящих систематического характера. Сведений по исследованию травы трехреберника продырявленного, заготовленной до цветения и бутонизации, в литературе не представлено.

Цель исследования - фармакогностическое изучение травы и цветков трехреберника продырявленного для последующей разработки нормативной документации.

Для решения поставленной цели необходимо было выполнить следующие задачи:

1. Провести информационно - аналитические исследования по морфологии, проблемам стандартизации, применению в медицине цветков и травы трехреберника продырявленного.

2. Установить макро- и микроскопические признаки травы и цветков трехреберника продырявленного.

3. Определить основные показатели сырья трехреберника продырявленного, такие как влажность, зола общая, зола, нерастворимая в кислоте хлористоводородной, посторонние примеси, измельченность.

4. Идентифицировать основные биологически активные соединения с помощью качественных реакций, тонкослойной хроматографии (ТСХ), высокоэффективной жидкостной хроматографии (ВЭЖХ) с масс-

спектрометрическим детектором (ВЭЖХ-МС), обращенно-фазовой ВЭЖХ с рефрактометрическим детектором.

5. Разработать и валидировать методику определения суммы флавоноидов в цветках и траве трехреберника продырявленного; установить зависимость содержания суммы флавоноидов от фазы вегетации растения; исследовать влияние физических факторов: звука, ультразвука и инфразвука на экстракцию флавоноидов.

6. Определить содержание БАС: флавоноидов, свободных органических кислот, полисахаридов, моно- и дисахаров, дубильных веществ, микро-и макроэлементов в цветках и траве трехреберника продырявленного.

7. Установить фармакологическую активность экстрактов травы трехреберника продырявленного: противовоспалительную, антиагрегационную, антикоагуляционную, антиоксидантную, антимикотическую, антимикробную.

8. Представить проекты фармакопейных статей «Трехреберника продырявленного трава» и «Трехреберника продырявленного цветки».

Научная новизна.

Установлены макро- и микроскопические диагностические признаки цветков и травы трехреберника продырявленного; установлено содержание ряда групп БАС с помощью качественных реакций и тонкослойной хроматографии (ТСХ): флавоноидов, дубильных веществ, органических кислот, аскорбиновой кислоты (для травы впервые). Изучен качественный состав фенольных соединений цветков и травы трехреберника продырявленного; разработана методика количественного анализа суммы флавоноидов и установлена норма содержания «суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 7%» для травы и «суммы флавоноидов в пересчете на рутин не менее 4%» для цветков. Изучено количественное содержание суммы полисахаридов, моно- и дисахаров, а также элементный состав цветков и травы трехреберника. Впервые установлены основные

показатели качества для травы и цветков трехреберника продырявленного: влажность, зола общая, зола, нерастворимая в кислоте хлористоводородной, примеси, измельченность для цельного, измельченного сырья и порошка. Показана антиагрегационная, антиоксидантная, противовоспалительная, антикоагуляционная, антимикробная и антимикотическая активность экстракта травы трехреберника продырявленного. Изучено влияние ультразвука, инфразвука и звука на эффективность экстракции флавоноидов из сырья трехреберника продырявленного. Научная новизна подтверждается заявками на патенты на изобретения: Патент №2807894 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/28, В0Ю 11/02, А61Р 29/00, А61Р 39/06, Средство, обладающее антиоксидантным и противовоспалительным действием и способ его получения: № 2023107274: заявл. 27.03.2023: опубл. 21.11.2023 / А.А. Елапов, А.И. Марахова, К.А. Пупыкина [и др.]; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы"; Патент №2808110 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/28, В0Ш 11/02, А61Р 7/02, Средство, обладающее антиагрегационным и антикоагулянтным действием, и способ его получения: № 2023107277: заявл. 27.03.2023: опубл. 23.11.2023 / А.А. Елапов, А.И. Марахова, К.А. Пупыкина [и др.]; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов имени Патриса Лумумбы".

Практическая и теоретическая значимость работы.

Практическая значимость заключается в разработке проектов фармакопейных статей на новые виды лекарственного сырья: «Трехреберника продырявленного трава», «Трехреберника продырявленного цветки».

Установлена возможность оптимизации методики количественного определения суммы флавоноидов с применением ультразвука.

Доказана фармакологическая активность травы трехреберника продырявленного и возможность ее использования для получения лекарственных препаратов с противовоспалительной антиагрегационой, антиоксидантной, антимикробной и антимикотической активностью. Зарегистрирована база данных «Антимикробные средства растительного происхождения», в которую вошли в том числе данные настоящего исследования (Свидетельство о государственной регистрации базы данных № 2023620070 Российская Федерация. Антимикробные средства растительного происхождения: № 2022623918 : заявл. 23.12.2022 : опубл. 10.01.2023 / А. А. Елапов, А. И. Марахова, В. Ю. Жилкина, А. А. Вечер; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов»).

Результаты проведенных исследований расширяют представление о химическом составе, морфолого-анатомических признаках, фармакологической активности цветков и травы трехреберника продырявленного. Теоретическая значимость заключается в расширении представлений о химическом составе и фармакологической активности цветков и травы трехреберника продырявленного, заготавливаемой до цветения, а также в новых подходах к извлечению флавоноидов при помощи ультразвука для оптимизации методики их анализа в лекарственном растительном сырье, которые могут быть использованы на других объектах исследования.

Методология и методы исследований. Методология построена на изучении и обобщении данных отечественных и зарубежных авторов по химическому составу и фармакологическим свойствам трехреберника продырявленного. Алгоритмы разработки методик для стандартизации новых видов растительного сырья базируются на подходах ученых - основателей научных фармакогностических школ: чл.-корр. РАН, профессора И.А.

Самылиной, профессора В.А. Куркина, профессора В.Д. Белоноговой, профессора Н.В. Кудашкиной и др.

В качестве объектов исследования служили воздушно-сухие цветки трехреберника продырявленного, заготовленные в МО в 2019-2022 гг. в июне-июле и воздушно-сухая трава трехреберника продырявленного, заготовленная в МО в 2019-2022 гг. в мае - начале июня.

В исследовании применяли такие методы, как гравиметрия, тонкослойная хроматография, высокоэффективная жидкостная хроматография с масс-спектрометрическим детектором, обращенной-фазовая высокоэффективная жидкостная хроматография с рефрактометрическим детектированием, спектрофотометрия, титриметрия, рентгено-флюоресцентный анализ. Определение антимикробной и антимикотической активности проводили согласно методическим указаниям МУК 4.2.1890-04.

Изучение антиагрегационной, антикоагуляционной и

антиоксидантной/прооксидантной, противовоспалительной активности извлечений из трехреберника обыкновенного осуществляли в соответствии с рекомендациями "Руководства по доклиническому изучению новых фармакологических веществ" (Часть.1. М.: Гриф и К, 2012). Стандартизацию сырья проводили в соответствии с требованиями ГФ РФ XV издания. Статистическую обработку данных проводили с применением стандартных методов, согласно ГФ XV издания.

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты микроскопического исследования травы и цветков трехреберника продырявленного;

2. Изучение основных показателей качества цветков и травы трехреберника: влажности, золы общей, золы, нерастворимой в кислоте хлористоводородной, примеси, измельченность;

3. Результаты качественного анализа БАС трехреберника продырявленного;

4. Разработка и валидация методики спектрофотометрического анализа флавоноидов в сырье трехреберника продырявленного;

5. Данные исследований по количественному определению БАС травы и цветков трехреберника: полисахаридов, моно- и дисахаров, дубильных веществ, органических кислот, кислоты аскорбиновой, а также микро-и макроэлементов.

6. Данные фармакологических и микробиологических исследований сырья трехреберника продырявленного на установление антимикробной, антимикотической, антиоксидантной, противовоспалительной, антиагрегационной, антикоагулянтной активности.

Степень достоверности результатов:

Достоверность результатов подтверждается достаточным объемом экспериментальных данных, полученных на образцах сырья, заготовленного в период с 2019 по 2022 гг., с применением современных физико-химических методов исследования, позволяющих получать достоверные и воспроизводимые результаты.

Результаты исследований подвергнуты статистической обработке.

Апробация результатов.

Результаты исследования апробированы на конференциях: Международной научно-практической конференции «Гармонизация подходов к фармацевтической разработке», г. Москва, 2020., Всероссийской научно-практической конференции «Международная интеграция в сфере фармацевтической и химической промышленности», г. Москва, 2020, 2021, 2022 гг.; Международной научно-практической конференции «Фармацевтическая наука XXI века: актуальные проблемы и перспективы их решений», Уфа, 2022 г; VIII международной научной конференции «Фундаментальные и прикладные задачи механики», г. Москва, 2022 г.

Внедрение результатов исследования.

Результаты диссертационного исследования внедрены в учебный процессы кафедры фармакогнозии ПГФА, института биохимической технологии и нанотехнологии РУДН. Результаты по установлению антимикробного и антимикотического действия апробированы в ЛЦ «БИОХИМ» РУДН, методики количественного определения суммы флавоноидов в траве и цветках трехреберника продырявленного протестированы в ООО «ЦККЛС «ЦЕНТР ЭКОФАРМ». Разработан проект фармакопейной статьи «Трехреберника продырявленного трава».

Публикации по теме диссертации.

Результаты исследований изложены в 14 публикациях, из них 3 статьи в изданиях из перечня, рекомендованного ВАК, 2 статьи, входящие в журналы перечня Scopus, в т.ч. 1 статья журнале Q1, зарегистрирована 1 база данных, получено 3 патента на изобретение.

Личный вклад автора.

Автор лично участвовал в выполнении исследований по изучению морфологических, анатомических особенностей строения цветков и травы трехреберника продырявленного, исследованиях химического состава, в разработке методик анализа и подготовке проектов нормативной документации.

Автором подготовлены статьи, заявки на патенты, доклады на конференции, автореферат и диссертация. Вклад автора составляет 80%.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Диссертационная работа соответствует паспорту научной специальности 3.4.2. «Фармацевтическая химия, фармакогнозия», а именно пунктам:

2. Формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств;

3. Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления.

6. Изучение химического состава лекарственного растительного сырья, установление строения, идентификация природных соединений, разработка методов выделения, стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на его основе.

Структура и объем диссертации.

Диссертационная работа изложена на 199 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, 4 глав экспериментальной части, списка литературы и приложений. Работа иллюстрирована 52 таблицами и 40 рисунками. Список литературы включает 123 источника, из них 60 на иностранных языках.

Во введении сформулированы актуальность исследования, цель и задачи исследования, научная новизна, практическая значимость работы, положения, выносимые на защиту.

Глава 1 посвящена обзору литературы по исследованию сырья трехреберника продырявленного. Изложены данные по ботанической характеристике, ареалу обитания, химическому составу, применению трехреберника продырявленного в научной и народной медицине, интенсификации процессов экстракции БАС с помощью ультразвука.

В главе 2 описаны материалы и методы исследования.

В главе 3 приводятся результаты морфолого-анатомического изучения объектов исследования.

В главе 4 представлены результаты качественного анализа БАС цветков и травы трехреберника продырявленного с помощью качественных реакций, ТСХ, ВЭЖХ. Приведены данные по определению числовых показателей цветков и травы трехреберника продырявленного.

Глава 5 посвящена количественному анализу основных БАС объектов исследования.

В главе 6 приводятся результаты определения антимикробных и антимикотических свойств травы и цветков трехреберника продырявленного, а также фармакологической активности.

Диссертация завершается заключением и списком литературы.

В приложении представлены проекты фармакопейных статей (ФС) «Трехреберника продырявленного трава», «Трехреберника продырявленного цветки», акты внедрения.

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

1.1. Разновидности растений рода трехреберник и их применение в народной медицине

Род Tripleurospermum относится к трибе Anthemideae (Пупавковые) семейства сложноцветных (сложноцветных) [2, 6, 10, 11, 60]. Существует около 38 видов рода Tripleurospermum, распространенных в основном в Европе и Азии с умеренным климатом [60, 64, 65]. Некоторые виды Tripleurospermum, например папатья, широко используется в пищу в Турции [102,121]. Отвар и настой, приготовленные из Tripleurospermumparviflorum и Tripleurospermum monticolum, применяют для лечения кашля, болей в животе и в качестве жаропонижающего средства [11].

Tripleurospermum limosum (Maxim.) Pobed, встречающийся в трех провинциях Северо-Восточного Китая и провинции Хэбэй, а также в Японии, Северной Корее, Монголии и на Дальнем Востоке России, используется в народной медицине для лечения гастрита [8, 28].

Трехреберник имеет широкое распространение: от Скандинавии на

севере и до северной Африки, Рисунок 1. Внешний вид растения

трехреберник продырявленный.

встречается на территории стран СНГ, г г г г г

в Западной Европе, Северной Америке. При этом основным местообитанием растения служит европейская часть России, Сибирь и Дальний Восток, где в благоприятный сезон местами оно может образовывать довольно обширные заросли [8, 26, 73, 86]. На территории Российской Федерации ареал

произрастания трехреберника - от субтропических зон Краснодарского края до Северного полярного круга. Произрастает на возделываемых землях (как сорное растение), пустырях, солончаках [56, 60].

Три вида Tripleurospermum Sch. Bip., распространены в республике Иран, включая T. conoclinium (Boiss. & Balansa) Hayek в провинции Ардебиль на северо-западе Ирана. T. rosellum var. album (Boiss. & Orph.) Hayek и T. callosum (Boiss. & Heldr.) E. Hossain произрастает в Западном Азербайджане [69, 90, 112]. В ряде стран трехреберник продырявленный (Т. продырявленный) считается сорным растением [89, 92, 101, 114, 115, 119].

1.2. Ботаническое описание и распространение трехреберника продырявленного. Микроскопическое изучение различных частей растения Трехреберник продырявленный.

Трехреберник продырявленный Tripleurospermum inodorum (L.) Sch.

Bip., другое наименование данного растения трёхреберник непахучий или ромашник непахучий, - травянистое растение семейства Астровые (Asteraceae), вид трёхрёберник, или трёхрёбросемянник [92].

Трехреберник продырявленный — это однолетнее или двулетнее травянистое растение высотой от 25 до 100 см. Корень растения веретенообразный, тонкий. Стебель прямой или восходящий, олиственный, внутри полый, голый. Листья очерёдные, продолговатые в очертании, дважды или трижды перисторассечённые на узкие нитевидные доли. Цветки собраны в корзинки диаметром 2,0-2,5 см, на длинных цветоносах. Ложноязычковые цветки белые, середина корзинки - жёлтая. Цветоложе тупо-коническое, не полое - это характерный признак, отличающий растение от ромашки аптечной (Matricaria chamomilla); кроме того, цветки не обладают характерным «ромашковым» запахом. Плод — тёмно-бурая трёхгранная семянка [3, 10, 107, 108, 114].

Трехреберник продырявленный в России известен как примесь к цветкам ромашки аптечной из-за схожести во внешних признаках [3, 7, 29, 60].

Для выявления различий между видами Tripleuspermum (Трехреберник) и Matricaria (Ромашка) семейства Астровых (Asteraceae) авторами [4, 10, 64, 71, 73, 92] было проведено сравнительное исследование морфологии образцов семян, цветков и травы (форма цветоложа, строение соцветия, способ группировки соцветий в капитулы), хранящихся в британском и ирландском гербариях. Идентификация Трехреберников и Ромашек, а также других видов флоры в значительной степени основана на многолетнем опыте, морфологии листьев, окраске язычков, наличии или отсутствии сосудистых чешуек и строении семянки. Исследования показали значительные различия между родами Трехреберник и Ромашка [76, 92].

Лопасти венчика диска цветка всех исследованных видов Tripleurospermum (T. maritimum, T. inodorum, T. decipiens и T. disciforme) обычно несут на каждой эфиромасличные железки, который в гербарных образцах представляет собой видимое красноватое пятно. Это пятно не так легко заметить на свежем сырье, но оно все же присутствует при внимательном рассмотрении. Эти эфиромасличные железки, а также строение лепестков венчика являются надежным средством идентификации видов Tripleurospermum среди трехреберников и ромашек [76]. Лучевые семянки как у T. maritimum, так и у T. inodorum описываются как женские и часто выглядят пустыми и неразвитыми у экземпляров со зрелыми дисковыми семянками, иногда они кажутся развитыми. Чашелистник как T. maritimum, так и T. inodorum представляет собой корону с волнистым контуром, на вид состоящего их нескольких сросшихся чашуек [73].

Семянки Т. maritimum и Т. inodorum обычно имеют три адаксиальных ребра, два латеральных и одно медиальное. Околоплодник на ребрах довольно гладкий, но морщинистый абаксиально и между ребрами. Семянки T. maritimum также часто заметно крупнее, чем у T. inodorum, примерно от 1,8 до 3,5 мм в длину для первых и от 1,3 до 2,2 мм для вторых [4, 10, 92].

Семянки Tripleurospermum обычно имеют 2 (иногда от 1 до 4 или 5) абаксиально-апикальных эфиромасличных железок [10]. Эфиромасличные железки имеют коричневый или красный цвет в гербарных образцах, а у свежих, незрелых семянок они зеленые. При исследовании свежего сырья, T. inodorum и T. maritimum (подвиды тагШтит и subsp. vinicaule), было замечено, что очень незрелые семянки обоих видов беловато-прозрачные с ярко-зелеными железками. Когда они полностью созреют, то имеют выраженный темно-коричневый околоплодник и красные или почти черные эфиромасличные железки. Железки темного цвета обнаруживаются только в наиболее зрелых головках, и часто выраженная окраска проявляется в момент, когда семянки начинают отделяться, что позволяет предположить, что эти изменения цвета происходят в течение нескольких дней после отделения от цветоложа. Было отмечено, что окраска обусловлена не содержащимся внутри маслом, которое окрашивает белую фильтровальную бумагу в ярко-желтый цвет, а отражает изменения в клетках стенки околоплодника, покрывающей масло [85]. Стенка семянки обычно темнеет во время созревания, причем наиболее зрелые семянки часто становятся очень темно-коричневыми, что иногда затрудняет различение эфиромасличных железок только по цвету [73, 92].

Таблица 1 - Сравнительные морфологические признаки ромашки

аптечной и трехреберника продырявленного [4, 10, 64, 70, 71, 73, 76, 85, 92, 104]

Виды/ признаки Ромашка аптечная Трёхреберник продырявленный

Габитус/ Продолж. жизни 10 - 30 см/ 1 год 35 - 75 см/ 1 -2 года

Стебли Часто ветвистые от основания Ветвистые в верхней половине

Продолжение таблицы 1

Виды/ признаки

Ромашка аптечная

Трехреберник продырявленный

Листья

Перисто- или дваждыперисто-рассечённые на узкие линейные доли шиловиднозаострённые, с коротким мягким остриём на верхушке

Дважды - или триждыперисто-рассеченные на линейно-нитевидные дольки, из которых конечные 4-10 мм длиной, с коротким заострением на верхушке. Дольки листьев более широкие, чем у р. аптечной

Ложноязычковые цветки

Женские, 8 - 14 мм длиной

Женские, 20-50 мм длиной

Трубчатые цветки

Обоеполые, пятилопастные

Обоеполые, пятилопастные, в верхней половине расширенные, часто лопасти с яркокрасными железками на верхушке_

Цветоложе

Удлинённо-коническое полое внутри_

Тупо-коническое, не полое

Обёртка

Черепитчатые, мелкие, продолговатые, тупые, желтовато-зелёные, по краям буроватоплёнчатые; внешние листочки уже и немного короче внутренних

Продолговатые, при основании немного расширенные, по краям узко-пленчатые, белые или светло-бурые, внешние иногда ланцетные, бледно-зеленые, без перепончатых краев_

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Елапов Александр Александрович, 2025 год

Список литературы

1. Бакин И.А. Совершенствование технологии экстрагирования ягодного сырья с использованием ультразвуковой обработки. Вестник КрасГАУ / И. А. Бакин, А. С. Мустафина, П. Н. Лунин. - КрасГАУ, 2015. -URL: https://cyberleninka.ru/article/n/sovershenstvovanie-tehnologii-ekstragirovaniya-yagodnogo-syrya-s-ispolzovaniem-ultrazvukovoy-obrabotki (дата обращения: 15.02.2020).

2. Блинова О.Л., Гилева А.А., Хлебников А.В., Белоногова В.Д., Турышев А.Ю. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в трехребернике непахучем цветках // Здоровье и образование в XXI веке. 2021. №6. URL: https://cyberlemnka.ru/artide/n/razrabotka-metodiki-kolichestvennogo-opredeleniya-summy-flavonoidov-v-trehrebernike-nepahuchem-tsvetkah (дата обращения: 29.03.2023).

3. Бобкова И.В., Самылина И.А., Ермакова В.А., Аносова О.Г. Фармакогнозия. Атлас. Том 3 [Электронный ресурс] / - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. C. 457-489 - URL: http://www.studentlibrary.ru/book/ISBN9785970415801 .html

4. Бойко Э. В. Папиллы на поверхности семянок видов Asteraceae // Turczaninowia, 1. Т. 16. № 3. С. 86-95. URL: http: //turczaninowia.asu.ru/article/view/699.

5. Бубенчикова В. Н. Разработка методик качественного и количественного определения флавоноидов в сырье ромашки аптечной / В. Н. Бубенчикова, Ю. А. Кондратова // Кубанский научный медицинский вестник. - № 10. - С. 19-21.

6. Велиханова З. Р. Содержание биологически активных веществ в цветках трехреберника продырявленного / З. Р. Велиханова, А. И. Марахова, А. А. Сорокина // Фармация. - Т. 66. - № 8. - С. 9-12.

7. Велиханова З. Р., Сорокина А. А. Разработка характеристик подлинности трехреберника продырявленного. Материалы VI Международной научно-методологической конференции «Фармобразование-2016. Пути и формы совершенствования фармацевтического образования. Создание новых физиологически активных веществ». Под ред. А.С. Беленовой. Воронеж: ВГУ, 2016; 208-11.

8. Горячкина Е.Г., Цыренжапов А.В., Мазунова О.И., Федосеева Г.М. Экспериментальная оценка противовоспалительной активности растений семейства астровых флоры Восточной Сибири. Вестник Бурятского государственного университета, 2012 (SC), pp. 63-67. (дата обращения: 09.02.2023).

9. Грабов Л. Н. Интенсификация тепломасообменных процессов получения галеновых препаратов. Одеська нащональна академiя харчових технологш Науковi пращ / Л. Н. Грабов, Д. В. Посунько Вып. 45, Т. 3, с. 66-69. - Институт технической теплофизики НАН Украины г. Киев, . - URL: (дата обращения: 15.02.2020). - Текст : электронный.

10. Губанов И.А., Киселева К.В. Иллюстрированный определитель растений Средней России. Том 3: Покрытосеменные (двудольные, раздельнолепестные). - М.: Т-во научных изданий КМК, Ин-т технологических исследований, 2004 - 520 с.

11. Дрибноход Ю.Ю. Косметика и косметология: все растительные средства по уходу за кожей. / Ю.Ю. Дрибноход. - СПб: Весь, 2006. - 314 с.

12. Дубашинская Н. В., Хишова О. М., Шимко О. М. Характеристика способов получения экстрактов и их стандартизация (часть II) // Вестник фармации. 2007. №2 (36). URL: https://cyberlemnka.ru/article/n/harakteristika-sposobov-polucheniya-ekstraktov-i-ih-standartizatsiya-chast-ii (дата обращения: 23.11.2022).

13. Евдокимова О.В. Разработка методологии стандартизации и контроля качества средств растительного происхождения (гармонизация,

унификация, валидация): дис. на соиск. ст. докт. фарм. наук. - М., 2012 - 338 с.

14. Елапов А.А. Подходы к определению основных показателей качества растительного сырья трехреберника продырявленного / А. А. Елапов, А. И. Марахова, З. Р. Велиханова // Гармонизация подходов к фармацевтической разработке. сборник тезисов II Международной научно-практической конференции. - Российский университет дружбы народов (РУДН), 2019. - С. 114-116.

15. Elapov, A. A. Requirements for medicinal herbal products in the current pharmacopoeia of the Russian Federation / A. A. Elapov. — Текст : электронный // 2021.febscongress.org:[сайт]. URL: https://2021 .febscongress.org/abstract_preview.aspx?idAbstractEnc=44241700950 91094092091424170 (дата обращения: 02.12.2021).

16. Elapov, A. A. P-02.2-009 Antimicrobial and antimycotic activity of Tripleurospermum perforatum (Merat.) M. Lainz / V. Y. Zhilkina, A. I. Marakhova, A. A. Elapov [и др.]. // FEBS Open Bio. 2022. №12(S1). P. 170-170. URL: febs.onlinelibrary.wiley. com/doi/epdf/10.1002/2211 -5463.13440.

17. Елапов, А. А. Подходы к определению основных показателей качества растительного сырья трехреберника продырявленного / А. А. Елапов, А. И. Марахова, З. Р. Велиханова // Гармонизация подходов к фармацевтической разработке: сборник тезисов II Международной научно-практической конференции, Москва, 14 ноября 2019 года. - Москва: Российский университет дружбы народов (РУДН), 2019. - С. 114-116.

18. Елапов, А. А. Особенности экстракции флавоноидов из трехреберника продырявленного (Tripleurospermum inodorum (l.) SCH.BIP.) в поле ультразвука / А. А. Елапов, И. А. Терехова, Н. Н. Кузнецов, А. И. Марахова // Гармонизация подходов к фармацевтической разработке : сборник тезисов III Международной научно-практической конференции, Москва, 25

ноября 2020 года / Российский университет дружбы народов. - Москва: Российский университет дружбы народов (РУДН), 2020. - С. 158-160.

19. Елапов, А. А. Применение ультразвука в экстракции биологически активных соединений из растительного сырья, применяемого или перспективного для применения в медицине (обзор) / А.А. Елапов, Н.Н. Кузнецов, А.И. Марахова // Разработка и регистрация лекарственных средств. 2021. Т. 10. № 4. С. 96-116. - DOI 10.33380/2305-2066-2021-10-4-96-116. DOI: 10.33380/2305-2066-2021-10-4-96-116.

20. Еремеева Н.Б. Использование ультразвукового излучения для экстракции антиоксидантов из ягод / Н. Б. Еремеева, Макарова // Пищевая промышленность. - № 5. - С. 63-65.

21. Живописцев В.С. Установка для экстракции биологического сырья сжиженными газами / В. С. Живописцев. - Российская Федерация, 2010.

22. Идентификация органических кислот методом ТСХ в извлечениях из растительных объектов / О. В. Тринеева, И. И. Сафонова, Е. Ф. Сафонова, А. И. Сливкин // Сорбционные и хроматографические процессы. - 2013. - Т. 13, № 6. - С. 896-901.

23. Коняева Е.А. Морфолого-анатомические признаки некоторых новых видов лекарственного растительного сырья: Атлас / Е.А. Коняева, О.Г. Алентьева, О.Л. Сайбель, Т.Д. Даргаева, О.Г. Потанина, П.Г. Мизина, Н.И. Сидельников - ФГБНУ ВИЛАР, 2020. - 211 с.

24. Коренская И.М. Фитохимический анализ лекарственного растительного сырья. / Коренская И.М., Ивановская Н.П., Измалкова И.Е. и др. - Воронеж: Издательско-полиграфический центр Воронежского государственного университета, 2012 - 77 с.

25. Кудашина Н.В. Фитохимический анализ: учеб. пособие / Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова, С.А. Мещерякова. — Уфа: ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России, 2019 — 193 с.

26. К синтаксономии сегетальной растительности среднего Урала / Хасанова, Г. Р., Ямалов, С. М., Лебедева, М. В., Третьякова, А. С., Кондратков, П. В., Груданов, Н. Ю. // Растительность России. - 2021.- (40). - С. 95107. https://doi.org/10.31111/vegrus/2021.40.95

27. Марахова, А. И. Установление содержания сахаров в цветках и траве трехреберника продырявленного (Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip.) / А. И. Марахова, В. Ю. Жилкина, А. А. Елапов // Фармацевтическое дело и технология лекарств. - 2022. - № 5. - С. 21-25. - DOI 10.33920/med-13-2210-02.

28. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. /В.П. Махлаюк. - Саратов, Приволжское книжное изд., 1991. - с.328-329

29. Морфолого-анатомические признаки некоторых новых видов лекарственного растительного сырья. Атлас / Е.А. Коняева, О.Г. Алентьева, О.Л. Сайбель, Т.Д. Даргаева, О.Г. Потанина, П.Г. Мизина, Н.И. Сидельников - ФГБНУ ВИЛАР, 2020. - 211 с.

30. Ловчиновский Ю.О., Сенчило В.И., Морфологическая микроскопическая диагностика цветков ромашки непахучей. - Вестник фармации, 1998. - №4, С.31 - 34.

31. Майер В.В. Звук и ультразвук в учебных исследованиях / В. В. Майер, Е. И. Вараксина, В. В. Майер, Е. И. Вараксина. - Долгопрудный: Интеллект, 2011. - 335 с.

32. Макарова М.П., Сыроешкин А.В., Максимова Т.В., Матвеева И.С., Плетенёва Т.В. Особенности экспресс-определения микроэлементов в лекарственных и неофицинальных растениях // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2019. - №8(2). - С. 93-97.

33. Маняк В.А. Технологические исследования по разработке экстракта сухого трехреберника непахучего / Маняк В.А., Горячкина Е.Г., Гордеева В.В., Мазунова О.И., Федосеева Г.М. // Вестник БГУ. - 2012. -Т. Спецвыпуск. - № С. - С. 59-63.

34. Маргулис М.А. Основы звукохимии (химические реакции в акустических полях). М.: «Высшая школа», 1984. — 272 с.

35. Миназова Г. И. Тонкослойная хроматография в анализе природного сырья // Баш. хим. ж. 2010. №5. URL: https://cyberleninka.ru/article/n/tonkosloynaya-hromatografiya-v-analize-prirodnogo-syrya (дата обращения: 23.11.2022).

36. Негров Д.А. Ультразвуковые колебательные системы для синтеза полимерных композиционных материалов: монография/ Д.А. Негров, Е.Н. Еремин, А.А. Новиков, Л.А. Шестель. - Омск: Изд-во ОмГТУ, 2012. - 128 с.

37. Общая фармакопейная статья "Техника микроскопического и микрохимического исследования лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов" ОФС.1.5.3.0003.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2327-2348 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/513/ (дата обращения 20.11.2022)

38. Общая фармакопейная статья "Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратов" ОФС.1.5.3.0001.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2303-2323 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/513/ (дата обращения 20.11.2022)

39. Общая фармакопейная статья "Лекарственное растительное сырье. Фармацевтические субстанции растительного происхождения" ОФС.1.5.1.0001.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2213-2219 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/399/ (дата обращения 20.11.2022)

40. Общая фармакопейная статья "Определение влажности лекарственного растительного сырья" ОФС.1.5.3.0007.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2361 -2364.

[электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/513/ (дата обращения 20.11.2022)

41. Общая фармакопейная статья "Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах" 0ФС.1.5.3.0004.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2349-2354 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/535/ (дата обращения 20.11.2022)

42. Общая фармакопейная статья "Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте" 0ФС.1.5.3.0005.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2355 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/541/ (дата обращения 20.11.2022)

43. Общая фармакопейная статья "Листья" 0ФС.1.5.1.0003.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2228-2237 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/414/ (дата обращения 20.11.2022)

44. Общая фармакопейная статья "Зола общая" 0ФС.1.2.2.2.0013.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 1. С. 981-982 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol1/981/ (дата обращения 20.11.2022)

45. Общая фармакопейная статья "Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах " ОФС.1.5.3.0008.18 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV издания. Т. 2. С. 2365-2369 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol2/551/ (дата обращения 20.11.2022)

46. Определение чувствительности микроорганизмов к антибактериальным препаратам: Методические указания.—М.: Федераль-ный центр Госсанэпиднадзора Минздрава России, 2004.—91 с.

47. Особенности экстракции флавоноидов из трехреберника продырявленного (Тпркшшрегтит inodorum SCH.BIP.) в поле ультразвука / А. А. Елапов, И. А. Терехова, Н. Н. Кузнецов, А. И. Марахова // Гармонизация подходов к фармацевтической разработке. сборник тезисов III Международной научно-практической конференции. - Российский университет дружбы народов (РУДН), 2020. - С. 158-160.

48. Патент № 2758906 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/28, А61К 127/00, В0Ш 11/02. Средство для профилактики осложнений респираторных заболеваний и способ его получения : № 2021107846 : заявл. 24.03.2021 : опубл. 02.11.2021 / А. А. Елапов, А. И. Марахова, Н. Н. Кузнецов [и др.] ; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов".

49. Патент № 2669931 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/28, В0Ш 11/02, А61Р 31/10. Средство, обладающее антимикотической активностью на основе цветков трехреберника продырявленного: № 2017146561: заявл. 28.12.2017 : опубл. 17.10.2018 / З. Р. Велиханова, А. А. Сорокина, Н. П. Сачивкина [и др.] ; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН).

50. Патент № 2522227 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/00, В0Ш 11/02. Способ раздельного выделения дубильных веществ и флавоноидов из лекарственного растительного сырья : № 2013113899/15 : заявл. 28.03.2013 : опубл. 10.07.2014 / А. И. Марахова, Н. Н. Федоровский, И. А. Самылина [и др.] ; заявитель Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский

государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России).

51. Патент на полезную модель № 142485 Ш Российская Федерация, МПК В0Ш 11/00. Установка для холодной водной экстракции флавоноидов и дубильных веществ из лекарственного растительного сырья : № 2014100054/05 : заявл. 10.01.2014 : опубл. 27.06.2014 / А. И. Марахова, Н. Н. Федоровский, А. А. Сорокина, И. А. Самылина ; заявитель Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России).

52. Патент № 2453322 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/00, В0Ш 11/02. Способ холодной водной экстракции флавоноидов из лекарственного растительного сырья : № 2010149462/15 : заявл. 03.12.2010 : опубл. 20.06.2012 / Н. Н. Федоровский, А. И. Марахова, А. А. Сорокина; заявитель Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования Первый Московский государственный медицинский университет им. И.М. Сеченова Министерства здравоохранения и социального развития Российской Федерации (ГБОУ ВПО Первый МГМУ им. И.М. Сеченова Минздравсоцразвития России).

53. Патент № 2674334 С1 Российская Федерация, МПК А61К 36/738, А61Р 31/04, А61Р 31/10. Средство, обладающее антимикробным и антимикотическим действием : № 2017146560 : заявл. 28.12.2017 : опубл. 07.12.2018 / В. Ю. Жилкина, Н. П. Сачивкина, А. И. Марахова [и др.]; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования "Российский университет дружбы народов" (РУДН).

54. Патент № 2104733 С1 Российская Федерация, МПК В0Ю 11/02, В0Ы 19/10. Способ экстракции из твердого растительного сырья : № 96121651/25 : заявл. 06.11.1996 : опубл. 20.02.1998 / М. Г. Сульман, Т. В. Анкудинова, Д. Н. Пирог [и др.].

55. Приказ Минздрава РФ от 01.11.2001 N 388 "О государственных стандартах качества лекарственных средств" (вместе с "ОСТ 91500.05.001-00. Отраслевой стандарт. Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения") (Зарегистрировано в Минюсте РФ 16.11.2001 N 3041)

56. Раднаева Л.Д. Фармакогностический анализ лекарственного растительного сырья. - Улан-Удэ: Изд-во БГУ, 2015 - 119 с.

57. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / Научный центр экспертизы средств медицинского применения Минздравсоцразвития России. Том Часть 1. - Москва : Гриф и К, 2012. - 944 с.

58. Свидетельство о государственной регистрации базы данных № 2023620070 Российская Федерация. Антимикробные средства растительного происхождения : № 2022623918 : заявл. 23.12.2022 : опубл. 10.01.2023 / А. А. Елапов, А. И. Марахова, В. Ю. Жилкина, А. А. Вечер ; заявитель Федеральное государственное автономное образовательное учреждение высшего образования «Российский университет дружбы народов».

59. Способы экстрагирования биологически активных веществ из лекарственных растений на примере компонентов зверобоя / В. В. Милевская, М. А. Статкус, З. А. Темердашев [и др.] // Журнал аналитической химии. -2015. - Т. 70. - № 12. - С. 1255-1263.

60. Трухачев В. И. Сорные, лекарственные и ядовитые растения (альбом антропофитов) / В. И. Трухачев, Г. Р. Дорожко, Ю. А. Дударь; В. М. Пенчуков ред. . - МААО, АГРУС, 2006. - 1-264 с.

61. Фармакопейная статья "Подорожника большого листья" ФС.2.5.0032.15 Государственная фармакопея Российской Федерации XIV

издания. Т. 4. С. 6336-6342 [электронный ресурс] URL: https://docs.rucml.ru/feml/pharma/v14/vol4/1154/ (дата обращения 20.11.2022)

62. Химический анализ лекарственных растений : учеб. пособие для фармацевтических вузов / под ред. Н.И. Гринкевича, Л.Н. Сафронович. - М. : Высш. школа, 1983 - 176 с.

63. Хорошутин П. П. Способ производства сухих экстрактов из сырья растительного происхождения / П. П. Хорошутин, е. В. Белоусова. -Российская Федерация, 2019.

64. Achene morphology of British and Irish mayweeds and chamomiles : implications for taxonomy and identification / C. A. Skilbeck, I. Lynch, M. Ellenby, M. A. Spencer. - 2019. - Т. 1. - № 2. - С. 128-166.

65. Adamczewski K. Biotypes of scentless chamomile Matricaria maritima (L) ssp. inodora (L) Dostal and common poppy Papaver rhoeas (L) resistant to tribenuron methyl, in Poland / K. Adamczewski, R. Kierzek, K. Matysiak // Journal of Plant Protection Research. - 2014. - Т. 54. - № 4. - С. 401-406.

66. Antiherpetic and antipoliomyelitic properties of Matricaria inodora L. / A. G. Suganda, M. Amoros, B. Fauconnier, L. Girre // Plantes Medicinales et Phytotherapie. - 1984. - Т. 18. - Actions antiherpetique et antipoliomyelitique du matricaria inodora L. - № 4. - С. 215-225.

67. Antibacterial activity of flavonoids and their structure-activity relationship: An update review / F. Farhadi, B. Khameneh, M. Iranshahi, M. Iranshahy // Phytotherapy Research. - 2019. - Vol. 33. - Antibacterial activity of flavonoids and their structure-activity relationship. - № 1. - P. 13-40.

68. Antimicrobial Activities of Three Medicinal Plants and Investigation of Flavonoids of Tripleurospermum disciforme / Z. Tofighi, M. Molazem, B. Doostdar [и др.]. - Текст: электронный // Iranian Journal of Pharmaceutical Research. -2015. - Т. 14. - № 1. - URL: https://doi.org/10.22037/ijpr.2015.1631 (дата обращения: 06.11.2022).

69. Antioxidant properties of different black tea samples and some Iranian native plants. / S. Abbasian, F. Karimi, G. Moghaddam [h gp.] // Pharmacie Globale.

- 2013. - T. 4. - № 2. - pp. 1-5

70. Arora O. P. Nature of Tetraploidy in Matricaria inodora L / O. P. Arora, K. J. Madhusoodanan // Cytologia. - 1981. - T. 46. - № 4. - C. 773-779.

71. Bremer K., Humphries C.J. Generic monograph of the Asteraceae-Anthemideae // Bulletin of The Natural History Museum. Botany Series. - 1993. -№23. - C. 71-177.

72. Balicevic R. Allelopathic Effect of Aromatic and Medicinal Plants on Tripleurospermum Inodorum (L.) C.H. Schultz / R. Balicevic, M. Ravlic, I. Ravlic // Herbologia an International Journal on Weed Research and Control. - 2015. -T. 15. - № 2.

73. Brouillet L. Tripleurospermum Schultz-Bipontinus, Tanaceteen. 31. 1844. // flora of north america editorial committee. - New York and Oxford: Oxford University Press, 2006. - P. 31, 488, 541, 548, 550.

74. Chemical composition and antibacterial activity of essential oils of Tripleurospermum disciforme in three developmental stages / A. Chehregani, F. Mohsenzadeh, N. Mirazi [et al.] // Pharmaceutical Biology. - 2010. - Vol. 48. -№ 11. - P. 1280-1284.

75. Comparison of pressurised fluid and ultrasonic extraction methods for analysis of plant antioxidants and their antioxidant capacity / P. Dobias, P. Pavlikova, M. Adam [et al.]. - Text: electronic // Open Chemistry. - 2010. - Vol. 8.

- № 1. - URL: http://www.degruyter.com/view/j/chem.2010.8.issue-1/s11532-009-0125-9/s11532-009-0125-9.xml (date accessed: 15.02.2020).

76. Crossley J. Sea Mayweed Tripleurospermum maritimum and Scentless Mayweed T. inodorum (Asteraceae) intermediates in Orkney / J. Crossley, C. A. Skilbeck // British & Irish Botany. - 2021. - T. 3. - № 3.

77. Cushnie T. P. T. Antimicrobial activity of flavonoids / T. P. T. Cushnie, A. J. Lamb // International Journal of Antimicrobial Agents. - 2005. - Vol. 26. -№ 5. - P. 343-356.

78. Crystal Structure and Biological Activity of Matricaria Ester Isolated from Tripleurospermum Inodorum (L.) Sch. Bip. / Y. Suleimen, K. V. Hecke, Z. A. Ibatayev [h gp.] // Journal of Structural Chemistry. - 2018. - T. 59. - №№ 4. - C. 988991. DOI: 10.1134/S0022476618040352

79. Department of Food Processing, Ya§ar University, Izmir, Turkey. Impact of Ultrasound-Assisted Extraction on Supercritical Recovery of Valuable Compounds from Dry Pine Needles / Department of Food Processing, Ya§ar University, Izmir, Turkey, R. A. Uzel // ETP International Journal of Food Engineering. - 2018. - P. 8-13.

80. Effect of solvents and extraction methods on total anthocyanins, phenolic compounds and antioxidant capacity of Renealmia alpinia (Rottb.) Maas peel / A. Javier David Vega, R.-E. Hector, L.-G. Juan Jose [et al.] // Czech Journal of Food Sciences. - 2017. - Vol. 35. - № No. 5. - P. 456-465.

81. Emerging technologies for the extraction of polyphenols from natural sources / R. G. Maroun, H. N. Rajha, N. El Darra [et al.]. - Text: electronic // Polyphenols: Properties, Recovery, and Applications. - Elsevier, 2018. - P. 265293. - URL: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/B9780128135723000087 (date accessed: 15.02.2020).

82. Evaluation of chemical profile and antioxidant activity of Tripleurospermum insularum, a new species from Turkey / S. C. Zeljkovic, F. A. Ayaz, H. Inceer [h gp.] // Natural Product Research. - 2015. - T. 29. - № 3. -C. 293-296.

83. Ghavam M. Tripleurospermum disciforme (C.A.Mey.) Sch.Bip., Tanacetum parthenium (L.) Sch.Bip, and Achillea biebersteinii Afan.: efficiency, chemical profile, and biological properties of essential oil / M. Ghavam // Chemical and Biological Technologies in Agriculture. - 2021. - T. 8. - № 1.

84. Gorniak I. Comprehensive review of antimicrobial activities of plant flavonoids / I. Gorniak, R. Bartoszewski, J. Kroliczewski // Phytochemistry Reviews. - 2019. - Vol. 18. - № 1. - P. 241-272.

85. Greger H. Laubblatt-Flavonoide und Systematik bei Matricaria und Tripleurospermum (Asteraceae-Anthemideae) / H. Greger // Plant Systematics and Evolution. - 1975. - Т. 124. - № 1.

86. Hartmann K. Erratum to «Phytochrome-mediated photocontrol of the germination of the scentless mayweed, Matricaria inodora L., and its sensitization by nitrate and temperature» [Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology 40 (1997) (p240-p252)] / K. Hartmann, C. Krooss, A. Mollwo // Journal of Photochemistry and Photobiology B: Biology. - 1997. - Т. 41. - Erratum to «Phytochrome-mediated photocontrol of the germination of the scentless mayweed, Matricaria inodora L., and its sensitization by nitrate and temperature» [Journal of Photochemistry and Photobiology B. - № 3. - С. 255.

87. Hosseini M. Anti-inflammatory, analgesic activity of Tripleurospermum disciforme extract in rats / M. Hosseini, S. Parvini, A. Bakhtiarian // Toxicology Letters. - 2007. - Vol. 172. - P. S47.

88. HPLC-MS/MS profiling of wild-growing scentless chamomile / F. Sibul, D. Orcic, S. Berezni [и др.] // Acta Chromatographica. - 2019. - С. 1-9.

89. Ievinsh G., Andersone U., Karlsons A., Osvalde A. Tripleurospermum maritimum from a coastal shingle beach: nitrophilic status, tolerance to salinity and heavy metals. // Environmental and Experimental Biology. - 2021. - №19. - С. 265273. DOI: 10.22364/eeb.19.25.

90. Isman M. Medicinal and Aromatic Crops: Production, Phytochemistry, and Utilization : ACS Symposium Series. Т. 1218 / M. Isman; V. D. Jeliazkov (Zheljazkov), C. L. Cantrell ред. . - Washington, DC : American Chemical Society, 2016.

91. Journal B. S. Chemical and Biological Study of Iraqi Kurdistan Chamomile Flower (Matricaria recutita L) / B. S. Journal // Baghdad Science Journal. - 2011. - T. 8. - № 3. - C. 736-740.

92. Kay Q. O. N. Tripleurospermum Inodorum (L.) Schultz Bip. / Q. O. N. Kay // Journal of Ecology. - 1994. - T. 82. - № 3. - C. 681-697.

93. Lavilla I. Fundamentals of Ultrasound-Assisted Extraction / I. Lavilla, C. Bendicho. - Text: electronic // Water Extraction of Bioactive Compounds. -Elsevier, 2017. - P. 291-316. - URL: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/B9780128093801000115 (date accessed: 15.02.2020).

94. Mortazaei S. Phytochemical properties of some Iranian medicinal plants / S. Mortazaei, H. Mahmoudvand, R. Rafieian // Journal of Chemical and Pharmaceutical Sciences. - 2016. - T. 9. - № 4.

95. New aspects in medicinal plants and pharmacognosy / Tiezzi, Antonio, Karpinski, Tomasz M., Miranda, M., Bustamante, K. E., Viteri, R., Carrillo, G., et al.// Poznan, Poland: JBBooks, Joanna Brodka; 2017. DOI: 10.5281/zenodo.833147

96. New technology for preparation of herbal extracts and soft halal capsules on its base / A. N. Shikov, O. N. Pozharitskaya, V. G. Makarov, M. N. Makarova // American-Eurasian Journal of Sustainable Agriculture. - 2009.

97. Optimization of the Ultrasonic-Assisted Extraction of Phenolic Compounds from Oryza Sativa L. 'Violet Nori' and Determination of the Antioxidant Properties of its Caryopses and Leaves / F. Turrini, R. Boggia, R. Leardi [et al.] // Molecules. - 2018. - Vol. 23. - № 4. - P. 844.

98. Ordonez S. L. E. Evaluation of the effect of different factors on the ultrasound assisted extraction of phenolic compounds of the pea pod / L. E. Ordonez S., O. Osorio Mora, Y. A. Pinchao P. // DYNA. - 2019. - Vol. 86. - №№ 210. - P. 211215.

99. Phytochemical analysis and bioactivity screening of three medicinal plants of Saudi Arabia / L. H. Al-Wahaibi, A. Mahmood, M. Khan, H. Z. Alkhathlan // Tropical Journal of Pharmaceutical Research. - 2020. - T. 19. - № 2. - C. 371376.

100. Phytochemical analysis, UPLC-ESI-Orbitrap-MS analysis, biological activity, and toxicity of extracts from Tripleurospermum limosum (Maxim.) Pobed / M. Chen, X. He, H. Sun [et al.] // Arabian Journal of Chemistry. - 2022. - Vol. 15.

- № 5. - P. 103797.

101. Phytochemical standardization and biological activities of certain desert plants growing in Saudi Arabia / M. S. Al-Saleem, A. S. Awaad, M. R. Alothman, S. I. Alqasoumi // Saudi Pharmaceutical Journal. - 2018. - T. 26. - № 2.

- C. 198-204.

102. Remediation potential of early successional pioneer species Chenopodium album and Tripleurospermum inodorum / D. Tozser, B. Tothmeresz, S. Harangi [h gp.] // Nature Conservation. - 2019. - T. 36. - C. 47-69.

103. Review of Alternative Solvents for Green Extraction of Food and Natural Products: Panorama, Principles, Applications and Prospects / Chemat, Abert Vian, Ravi [et al.] // Molecules. - 2019. - Vol. 24. - Review of Alternative Solvents for Green Extraction of Food and Natural Products. - № 16. - P. 3007.

104. Rychlova M. The study of morphological and histological changes in tissue cultures of matricaria inodora L / M. Rychlova, E. Cellarova, R. Honcariv // Biologia Plantarum. - 1984. - T. 26. - № 3. - C. 197-201.

105. Servi H. Composition and Acetylcholinesterase inhibition properties of Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. Essential Oil from Istanbul. T. 1 / H. Servi, Y. Y. Yucel, K. Polatoglu. - 2018.

106. Sharples G. P. Gc-Fid and Gc-Ms Analyses , and Bioactivity Assessment Matrix Metalloproteinase Inhibitor Activity Antimicrobial Activity of Selected Iraqi Medicinal Plants Assessed By the Microtitre Plate-Based Assay Incorporating Resazurin / G. P. Sharples, S. D. Sarker. - 2018. - T. 16. - C. 8-119.

107. Stace C. New Flora of the British Isles. - 3rd edn. - Cambridge, UK.: Cambridge University Press, 2010. - 1266 c.

108. Stace C. New Flora of the British Isles. - 4 edn. - Cambridge, UK.: Cambridge University Press, 2019. - 1266 c.

109. Studies on the use of power ultrasound in solid-liquid myrobalan extraction process / V. Sivakumar, V. Ravi Verma, P. G. Rao, G. Swaminathan // Journal of Cleaner Production. - 2007. - Vol. 15. - № 18. - P. 1813-1818.

110. Stefan M. Memoirs of the Scientific Sections of the Romanian

5

Academy Tome XLII, 2019 Chemistry flavonoids-an amazing group of compounds with potent antimicrobial properties / M. Stefan, M. L. Birsa.

111. Subcritical water extraction as a cutting edge technology for the extraction of bioactive compounds from chamomile: Influence of pressure on chemical composition and bioactivity of extracts / A. Cvetanovic, J. Svarc-Gajic, Z. Zekovic [h gp.] // Food Chemistry. - 2018. - T. 266. - C. 389-396.

112. Three new records of tripleurospermum (Asteraceae) for the flora of Iran / M. R. Aliakbar, M. Pakravan, A. Sonboli, M. Khayati // Iranian Journal of Botany. - 2021. - T. 27. - № 1. - C. 32-41.

113. Tiwari B. K. Ultrasound: A clean, green extraction technology / B. K. Tiwari // TrAC Trends in Analytical Chemistry. - 2015. - Vol. 71. - Ultrasound. -P. 100-109.

114. Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip., scentless chamomile (Asteraceae). / A. S. McClay, G. Peng, K. L. Bailey [h gp.] // Biological control programmes in Canada 2001-2012. - Wallingford : CABI, 2013. - C. 391-401.

115. Tripleurospermum maritimum from a coastal shingle beach: nitrophilic status, tolerance to salinity and heavy metals / G. Ievinsh, U. Andersone-Ozola, A. Karlsons, A. Osvalde // Environmental and Experimental Biology. - 2021. - T. 19. - № 4.

116. Ultrasonic Technology and Its Applications in Quality Control, Processing and Preservation of Food: A Review / B. Madhu, M. S. Srinivas, G.

Srinivas, S. K. Jain // Current Journal of Applied Science and Technology. - 2019. - Vol. 32. - Ultrasonic Technology and Its Applications in Quality Control, Processing and Preservation of Food. - № 5. - P. 1-11.

117. Ultrasound Assisted Extraction of Phenolic Compounds from Peaches and Pumpkins / A. Altemimi, DG Watson, R. Choudhary [и др.]. — Текст : непосредственный // PLOS ONE. — 2016. — № 11(2). — e0148758. DOI: 10.1371/journal.pone.0148758

118. Ultrasound assisted extraction of food and natural products. Mechanisms, techniques, combinations, protocols and applications. A review / F. Chemat, N. Rombaut, A.-G. Sicaire [et al.] // Ultrasonics Sonochemistry. - 2017. -Vol. 34. - P. 540-560.

119. Variability in macronutrient composition of weed seeds / Lehoczky, T. Filep, N. Mazsu [и др.] // Applied Ecology and Environmental Research. - 2016. -Т. 14. - № 3. - С. 451-462.

120. Vernes L. Ultrasound and Microwave as Green Tools for Solid-Liquid Extraction / L. Vernes, M. Vian, F. Chemat. - Text: electronic // Liquid-Phase Extraction. - Elsevier, 2020. - P. 355-374. - URL: https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/B9780128169117000128 (date accessed: 15.02.2020).

121. Volatile Compounds of Tripleurospermum decipiens from Two Natural Populations in Turkey / M. Kurkcuoglu, F. Tosun, H. Inceer, K. H. C. Baser // Chemistry of Natural Compounds. - 2019. - Т. 55. - № 3. - С. 565-567.

122. Volatiles and fatty acid analyzes of Tripleurospermum decipiens (Fisch & C. A. Mey) Bornm and investigation of the extracts for antimicrobial and enzyme inhibitory activities / G. Goger, i. Yava§, S. Yur [и др.] // Journal of Research in Pharmacy. - 2021. - Т. 25(4). - № 25(4). - С. 429-440.

123. Yang X., Li Yu., Li S., Oladejo A.O., Ruan S., Wang Yu., Huang Sh., Ma H. Effects of ultrasound pretreatment with different fre-quencies and working modes on the enzymolysis and the structure characterization of rice protein.

Ultrasonics Sonochemistry. 2 017; 3 8 :19 -2 8 . DOI: 10.1016/j.ultsonch.2017.02.026.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Акты внедрения

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ АВТОНОМНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ

Российский университеп дружбы народов (рудН)

университет

ул. Миклухо-Маклая, д. 6, Москва, Россия, 117198 ОГРН 1027739189323; ОКПО 02066463; ИНН 7728073720

Телефон: »7495 434 53 00. факс: '7495 433 15 11 www.rudn.ru;[e-mail]

20_

ФГ

окоы народов» .^ЖС^Шицинских наук,

«УТВЕРЖДАЮ» Первый проректор - проректор по научной работе ^^^Е^^цспйскпй университет

профессор A.A. Костин 2022 г.

АКТ ВНЕДРЕНИЯ в учебный процесс Института биохимической технологии и нанотехнологии ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов» результатов диссертационного исследования Елапова Александра Александровича

Настоящий акт удостоверяет факт внедрения результатов диссертационного исследования Елапова Александра Александровича по теме «Фармакогностическое исследование трехреберника продырявленного Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip.» в учебный процесс Института биохимической технологии и нанотехнологии ФГАОУ ВО «Российский университет дружбы народов». Результаты проведенных исследований расширяют представление о химическом составе, морфолого-анатомических признаках, и фармакологической активности цветков и травы трехреберника продырявленного и используются при обучении студентов в магистратуре в лекционно-практическом курсе дисциплины «Основы фитохимии и технологии фитопрепаратов».

Доцент ИБХТН РУДН, к. фарм. н.

Ассистент ИБХТН РУДН,

Директор ИБХТН РУДН, профессор, д.х.н.

к.х.н.

УТВЕРЖДАЮ Проректор

по научно-исследомггельской рабсил ФГ 1ххул<1рс1 пен ная

шттт«™ ахздеми">>

1 цодрава России .В. Дозморова 2022 г.

L *>"V

АКТ ВНЕДРЕНИЯ в учебный процесс кафедры фармакогнозии ФГЬОУ ВО «Пермская государственная фармице&тичсская академия» результатов днссерглинонной работы Елалова Александра Александровича на тему: «Фармакогностическое изучение цветков и 1равы трехребериика продырявленного Tripieunapermum Sch Bip».

Данным акт удостоверит факт внедрения результатов научной работы Панова Александра Александровича I» учебный процесс кафедры фармакогнозии ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России, Разработанные методики анализа травы и цветков трехребериика используются при обучении сту дентов интернатуры и при выполнении студентами квалификационных работ.

Заведующий кафедрой фармакогнозии ФГБОУ ВО «Пермская государственная фармацевтическая академия» Минздрава России, доктор фармацевтических наук, профессор

В.Д. Белоногова

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

(ПРОЕКТ)

Трехреберника продырявленного ФС

трава

Tripleurospermum inodorum herba

Собранная в фазу бутонизации высушенная трава дикорастущего однолетнего растения трехреберника продырявленного (ромашника непахучего) - Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. сем. астровых -Asteraceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельная трава:

Сырье представляет собой высушенную надземную часть трехреберника продырявленного, собранную в фазу отрастания до начала цветения.

Цельные или в кусках олиственные стебли, без соцветий. Стебель округлый, полый, слегка ребристый, голый, в верхней части ветвящийся, диаметром до 3 мм. Листья очередные, сидячие или короткочерешковые, в очертании яйцевидные, длиной от 2 до 15 см, дважды или трижды перисто-рассечённые на нитевидные сегменты с острыми верхушками.

Цвет стеблей - светло-зеленый, листьев - зеленый. Запах слабый. Вкус водного извлечения травянистый, слегка горьковатый.

-Измельченная трава:

Кусочки стеблей и листьев, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 7 мм. Цвет стеблей от зеленого темно-зеленого; листьев -зеленый, темно-зеленый. Запах слабый, вкус водного извлечения травянистый, слегка горьковатый (Рис. 2). - Порошок травы:

Кусочки стеблей, листьев, проходящие сквозь сито с отверстиями размером 2 мм. При рассмотрении порошка под лупой (10*) видны кусочки стеблей, чаще в продольном сечении, беловатые в изломе, снаружи - от зеленого до темно-зеленого цвета; узкие кусочки листьев. Цвет порошка от зеленого до темно-зеленого. Запах слабый, своеобразный, вкус водного извлечения травянистый, слегка горьковатый.

Микроскопические признаки

Цельная, измельченная трава.

При рассмотрении микропрепарата листа с поверхности должны быть видны следующие анатомо- диагностические признаки: овальные, крупные устьица, расположенные с двух сторон, окруженные 3-6 эпидермальными клетками, аномоцитный тип устьичного аппарата, удлиненные клетки эпидермиса, с извилистыми стенками, продольная складчатость кутикулы. Верхушка доли листа заканчивается заостренным многоклеточным клювовидным выростом. По краю доли листа находятся папиллы -сосочковидные выросты эпидермиса с морщинистой складчатостью кутикулы. Лист с обеих сторон опушен простыми волосками, имеющими характерное «бичевидное» строение. В основании волоска располагаются 3-6 коротких клеток с тонкими стенками, иногда, первая из них, базальная (ближняя к эпидермису) - несколько больше остальных. Заканчивается волосок терминальной - длинной остроконечной клеткой с заметно утолщенными стенками. Часто конечная терминальная клетка обламывается и на эпидермисе видна только группа базальных клеток . На эпидермисе листьев

наблюдаются головчатые железистые волоски. Они состоят из двурядной короткой ножки и двуклеточной головки, иногда наклоненной к эпидермису. В мезофилле листа присутствуют септированные, прерывающиеся с маслянисто-аморфным буро-оранжевым содержимым секреторные ходы.

7 8

Лист трехреберника продырявленного 1-Эпидермис листа. Устьица. Основание простого волоска. (40х). 2- Папиллы по краю листа. Секреторный ход в мезофилле (40х). 3,4- Эпидермис листа. Простой "бичевидный" волосок. Устьица. (40х) 5- Эпидермис листа. Основание простого волоска. Железистый волосок. (40х). 6-Эпидермис листа. Железистый волосок. (40х). 7- Верхушка доли листа.

Клювовидный вырост (40х). 8- Секреторный ход в мезофилле (40х).

При рассмотрении давленного препарата стебля видны следующие анатомо-диагностические признаки: эпидермис стебля, состоящий из удлиненных прямостенных клеток; сосуды ксилемы, имеющие кольчатую, спиральную и лестничную вторичную утолщенность клеточных стенок, присутствуют механические волокна с малоутолщенными, редкопористыми стенками; в некоторых фрагментах стебля видны септированные секреторные ходы с буро-оранжевым содержимым.

Стебель трехреберника продырявленного

9- Сосуды ксилемы (40х), 10- Секреторный ход (40х).

Порошок травы.

При рассмотрении микропрепарата порошка видны участки эпидермиса листьев с железистыми волосками и остатками «бичевидных» волосков, фрагменты долек листа с характерными клювовидными выростами верхушек, обрывки проводящих и механических тканей стебля, секреторные ходы стеблей и листьев с оранжевым маслянистым содержимым.

Определение основных групп биологически активных веществ.

Приготовление растворов.

Раствор алюминия хлорида раствора 5%: Приготовление 5% спиртового раствора алюминия хлорида: 5 г алюминия хлорида (ГОСТ 3759-75) растворяют в 40 мл спирта 95% в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора спиртом 95% до метки.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,05 г (точная навеска) СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют в 85 мл спирта 70 % и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Раствор стандарта образца (СО) кверцетина. Около 0,05 г (точная навеска) СО кверцетина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют в 85 мл спирта 70 % и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Тонкослойная хроматография

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером 10 х 15 см наносят 20 мкл испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение. Сумма флавоноидов» приготовление раствора А), рядом - по 5 мкл растворов СО рутина и кверцетина. Пластинку с нанесенными пробами сушат, помещают в камеру со смесью растворителей (без предварительного насыщения) бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают алюминия хлорида раствором 5%, сушат и сразу просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. На хроматограмме СО рутина и кверцетина должны обнаруживаться желтые зоны. На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны адсорбции с флуоресценцией желтого цвета на уровне зоны адсорбции СО кверцетина и рутина; допускается обнаружение других зон адсорбции (флавоноиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 14 %.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 8 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2,0 %.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм - не более 5 %. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм - не более 5%.

Посторонние примеси

Сырье, изменившее окраску (пожелтевшее и почерневшее). Цельное сырье - не более 5%;

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более

3%;

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%. Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: Содержание суммы флавоноидов пересчёте на рутин - не менее 7%, суммы полисахаридов - не менее 1%.

Сумма флавоноидов

Алюминия хлорида раствора 2 % в спирте 70 %. 2,0 г алюминия хлорида растворяют в 40 мл спирта 70 % в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Методика. Навеску сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, массой около 1 г (точная навеска) помещают в круглодонную колбу вместимостью 200-250 мл, заливают 100 мл спирта 70%, присоединяют колбу к обратному холодильнику

и экстрагируют на плитке с закрытой спиралью в течение 30 мин после закипания. Полученное извлечение декантируют, фильтруют через ватно-марлевый фильтр в мерную колбу вместимостью 250 мл. Экстракцию повторяют дважды. Полученные извлечения объединяют и доводят до метки спиртом 70% (раствор А). Аликвоту раствора А равную 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,2 мл кислоты уксусной 30%, 4 мл раствора алюминия хлорида 2%, доводят спиртом 70% до метки, перемешивают. Через 30 мин определяют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 410 нм на фоне раствора сравнения. Раствор сравнения получают следующими образом: аликвоту раствора А равную 2 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,2 мл кислоты уксусной 30%, доводят спиртом 70% до метки, перемешивают.

Параллельно определяют оптическую плотность раствора комплекса стандартного образца рутина с алюминия хлоридом. Около 0,05 г рутина (точная навеска) предварительно высушенного до постоянной массы при температуре 100-105°С растворяют в спирте 70% в мерной колбе вместимостью 100 мл (раствор А). Аликвоту раствора А объемом 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида, 0,2 мл уксусной кислоты 30%, доводят до метки спиртом и перемешивают. Через 40 мин снимают спектр поглощения в диапазоне длин волн 350-450 нм на фоне раствора сравнения.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле:

_ А-т0-250-25-100-100 X —

А0-100-25-1 -т-(100-Ж)'

Где А - оптическая плотность испытуемого раствора; А0 - оптическая плотность комплекса стандартного образца рутина с алюминия хлоридом; т0

- масса навески стандартного образца рутина, г ; т - масса навески сырья, г; Ш- потеря массы сырья при высушивании, %.

Содержание восстанавливающих моносахаров

Около 0,5 г (точная навеска) измельченной травы трехреберника продырявленного помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл 10% хлористоводородной кислоты и кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа.

Колбу с содержимым охлаждают, полученное извлечение фильтруют, и в фильтрат прибавляют по каплям 30%-ый раствор натрия гидроксида до рН=6. Извлечение переносят количественно в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают.

В три мерные колбы вместимостью 50 мл помещают пипеткой 1 мл 1%-го раствора пикриновой кислоты и 3 мл 20%-го раствора натрия карбоната.

В первую колбу прибавляют 2 мл полученного извлечения, во вторую

- 2 мл раствора СО глюкозы, в третью - 2 мл воды (раствор сравнения).

Колбы погружают на 10 мин в кипящую водяную баню, а затем охлаждают до комнатной температуры, доводят объем растворов водой до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора СО глюкозы на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 465 ± 10 нм, против раствора сравнения.

Приготовление раствора стандартного образца глюкозы. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 0,05 г (точная навеска) стандартного образца глюкозы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Содержание восстанавливающих моносахаров в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле:

_ А1 • а0 • У1 • 100 • 50-100-100 Х = А0 • а1 • У0 • 250 • 50 • (100 — Ш)'где

А1 - оптическая плотность испытуемого образца;

Ао - оптическая плотность раствора СО глюкозы;

ао - навеска глюкозы, взятая для приготовления СО в граммах;

а1 - навеска образца в граммах;

У1 - объем извлечения, взятого для испытания в мл;

У0 - объем СО глюкозы, взятого для испытания в мл.

Примечание. Определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин проводят в сырье, предназначенном для производства экстрактов, суммы полисахаридов для лекарственных растительных препаратов (пачки, фильтрпакеты).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

(ПРОЕКТ)

Трехреберника продырявленного ФС

цветки

Tripleurospermum inodorum flores

Собранные в фазу цветения высушеннные цветки дикорастущего однолетнего растения трехреберника продырявленного (ромашника непахучего) - Tripleurospermum inodorum (L.) Sch. Bip. сем. астровых -Asteraceae.

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. соцветие корзинка, до 4 см в диаметре, трубчатые цветки жёлтые, ложноязычковые, краевые цветки однорядные, белые, в центре множество желтых трубчатых цветков с расширенной в верхней части трубкой и красными железками по краям лопастей. Цветоложе тупо-коническое, не полое. Обвертка корзинки черепитчатая, многорядная, состоящая из многочисленных продолговатых, с тупыми верхушками и широкими пленчатыми краями листочков. Листочки цветоложа зеленые, коричневатые по бокам и вверху. Запах слабый, ароматный. Вкус водного извлечения слабо - пряный, слегка слизистый.

Измельченные цветки: Кусочки цветочных корзинок и их частей, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 5 мм.

При кусочки цветочных корзинок полушаровидной формы с черепитчатой многорядной обверткой, отдельные листочки обвертки или коричневато-зеленого цвета, продолговатой формы с тупыми верхушками коричневатого цвета; кусочки голого, цветоложа - зеленого или коричневато-

зеленого цвета; ложноязычковые цветки цельные пестичные или их части с белым или желтовато-белым лопатчатым трехзубчатым отгибом; трубчатые цветки цельные, или их части с желтым пятизубчатым венчиком с длинной трубкой; кусочки коричневато-зеленых стеблей.

Цвет измельченного сырья коричневато- или зеленовато-желтый с белыми, желтовато-белыми, желтыми, зелеными, зеленовато-коричневыми или коричневыми вкраплениями.

Порошок цветков: При рассмотрении под лупой (10*) видны цельные трубчатые обоеполые цветки с желтым пятизубчатым венчиком с длинной трубкой и их кусочки; желтые трубчатые цветки с расширенной в верхней части трубкой и красными железками по краям лопастей и их кусочки; кусочки полушаровидного цветоложа, отдельные кусочки обвертки продолговато-яйцевидной формы темно-зеленого цвета, как правило, с коричневой каемкой кусочки стеблей зеленого до коричнево-зеленого цвета; фрагменты отгиба язычковых цветков белого или желтовато-белого цвета.

Микроскопические признаки

При рассмотрении микропрепарата язычкового цветка видны следующие диагностические признаки: удлиненные вдоль оси цветка клетки нижнего эпидермиса с сильно извилистыми стенками и продольной складчатостью кутикулы; клетки верхнего эпидермиса изодиаметричные, каждая из которых образует папиллу - сосочковидный вырост. На нижнем эпидермисе язычкового цветка наблюдаются немногочисленные железистые волоски (сходные по строению с железистыми волосками листьев), состоящие из многоклеточной двурядной ножки и двуклеточной одноярусной головки. Однако размер указанных волосков несколько крупнее - 80-90 мкм.

При рассмотрении микропрепарата трубчатого цветка виден эпидермис, состоящий из клеток с извилистыми стенками. Изредка на эпидермисе встречаются головчатые железистые волоски, аналогичные трихомам язычкового цветка - с двурядной ножкой и двуклеточной одноярусной

головкой. В мезофилле цветка ближе к снованию наблюдаются мелкие друзы оксалата кальция (размером около 2-5 мкм), а в зубчиках отгиба венчика -оранжевые капли каротиноидов. В трубчатых цветках присутствуют секреторные ходы с буро-оранжевым маслянистым содержимым.

При рассмотрении микропрепарата листочка обвертки видны удлиненные клетки нижнего эпидермиса с извилистыми боковыми стенками и крупными устьицами аномоцитного типа, механические элементы центра листочка веретеновидной формы с многочисленными порами. Клетки эпидермиса пленчатого края удлиненные, прямостенные. В основании видны секреторные ходы с оранжевым содержимым.

I I : 1Г - Т Я

№_

5

Трехреберника продырявленного цветки

1 - Ложноязычковый цветок. Папиллы верхнего эпидермиса. Объектив (х40). 2 - Эпидермис язычкового цветка. Железистый волосок. Объектив (х40). 3 - Трубчатый цветок. Железистый волосок. Объектив(х40). 4- Трубчатый цветок. Друзы оксалата кальция. Объектив (х40). 5- Листочек обвертки. Нижний эпидермис. Объектив х40.

6- Листочек обвертки. Верхушка. Объектив х10.

7- Листочек обвертки. Основание. Объектив х10.

Порошок цветков.

Определение основных групп биологически активных веществ.

Приготовление растворов.

Раствор алюминия хлорида раствора 5%: Приготовление 5% спиртового раствора алюминия хлорида: 5 г алюминия хлорида (ГОСТ 3759-75) растворяют в 40 мл спирта 95% в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объем раствора спиртом 95% до метки.

Раствор стандартного образца (СО) рутина. Около 0,05 г (точная навеска) СО рутина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют в 85 мл спирта 70 % и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Раствор стандарта образца (СО) кверцетина. Около 0,05 г (точная навеска) СО кверцетина помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл, прибавляют в 85 мл спирта 70 % и нагревают на водяной бане до полного растворения. Затем охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Тонкослойная хроматография

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на алюминиевой подложке размером 10 * 15 см наносят 20 мкл испытуемого раствора (см. раздел «Количественное определение. Сумма флавоноидов» приготовление раствора А), рядом - по 5 мкл растворов СО рутина и кверцетина. Пластинку с нанесенными пробами сушат, помещают в камеру со смесью растворителей (без предварительного насыщения) бутанол - уксусная кислота - вода (4:1:5) и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдет около 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей, обрабатывают алюминия хлорида раствором 5%, сушат и сразу просматривают в УФ-свете при длине волны 365 нм. На хроматограмме СО

рутина и кверцетина должны обнаруживаться желтые зоны. На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться зоны адсорбции с флуоресценцией желтого цвета на уровне зоны адсорбции СО кверцетина и рутина; допускается обнаружение других зон адсорбции (флавоноиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 14 %.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 8 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 2,0 %.

Измельченность сырья. Цельное сырье: частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 1 мм - не более 5 %. Измельченное сырье: частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 7 мм - не более 5%; частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм - не более 5%.

Посторонние примеси Сырье, изменившее окраску (пожелтевшее и почерневшее). Цельное сырье - не более 5%;

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 3%; Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с требованиями ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное сырье: Содержание суммы флавоноидов пересчёте на рутин - не менее 7%, суммы полисахаридов - не менее 1%.

Сумма флавоноидов

Алюминия хлорида раствора 2 % в спирте 70 %. 2,0 г алюминия хлорида растворяют в 40 мл спирта 70 % в мерной колбе вместимостью 100 мл, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора 3 мес.

Навеску сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 1 мм, массой около 1 г (точная навеска) помещают в круглодонную колбу вместимостью 200-250 мл, заливают 50 мл спирта 40%, присоединяют колбу к обратному холодильнику и экстрагируют на плитке с закрытой спиралью в течение 20 мин после закипания. Полученное извлечение декантируют, фильтруют через ватно-марлевый фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Экстракцию повторяют дважды. Полученные извлечения объединяют и доводят до метки спиртом 40% (раствор А). Аликвоту раствора А равную 2 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,2 мл кислоты уксусной 30%, 2 мл раствора алюминия хлорида 2%, доводят спиртом 40% до метки, перемешивают. Через 20 мин определяют оптическую плотность полученного раствора при длине волны 410 нм на фоне раствора сравнения. Раствор сравнения получают следующими образом: аликвоту раствора А, равную 2 мл, переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, добавляют 0,2 мл кислоты уксусной 30%, доводят спиртом 40% до метки, перемешивают.

Параллельно определяют оптическую плотность раствора комплекса стандартного образца рутина с алюминия хлоридом. Около 0,05 г рутина (точная навеска) предварительно высушенного до постоянной массы при

температуре 100-1050С растворяют в спирте 70% в мерной колбе вместимостью 100 мл (раствор А). Аликвоту раствора А объемом 1 мл переносят в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 2 мл 2% раствора алюминия хлорида, 0,2 мл уксусной кислоты 30%, доводят до метки спиртом и перемешивают. Через 40 мин снимают спектр поглощения в диапазоне длин волн 350-450 нм на фоне раствора сравнения.

Содержание суммы флавоноидов в пересчете на рутин и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле:

^ _ Л-то-100-25-100-100 Ао-100-25-2-т-(100-Ш)'

Где А - оптическая плотность испытуемого раствора; А0 - оптическая плотность комплекса стандартного образца рутина с алюминия хлоридом; т0

- масса навески стандартного образца рутина, г ; т - масса навески сырья, г; Ш- потеря массы сырья при высушивании, %.

Содержание восстанавливающих моносахаров

Около 0,5 г (точная навеска) измельченных цветков трехреберника продырявленного помещают в коническую колбу вместимостью 50 мл, прибавляют 10 мл 10% хлористоводородной кислоты и кипятят с обратным холодильником в течение 1 часа.

Колбу с содержимым охлаждают, полученное извлечение фильтруют, и в фильтрат прибавляют по каплям 30%-ый раствор натрия гидроксида до рН=6. Извлечение переносят количественно в мерную колбу вместимостью 100 мл и доводят объем раствора водой до метки, перемешивают.

В три мерные колбы вместимостью 50 мл помещают пипеткой 1 мл 1%-го раствора пикриновой кислоты и 3 мл 20%-го раствора натрия карбоната.

В первую колбу прибавляют 2 мл полученного извлечения, во вторую

- 2 мл раствора РСО глюкозы, в третью - 2 мл воды (раствор сравнения).

Колбы погружают на 10 мин в кипящую водяную баню, а затем охлаждают до комнатной температуры, доводят объем растворов водой до метки.

Измеряют оптическую плотность испытуемого раствора и раствора РСО глюкозы на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 465 ± 10 нм, против раствора сравнения.

Приготовление раствора стандартного образца глюкозы. В мерную колбу вместимостью 250 мл помещают 0,05 г (точная навеска) стандартного образца глюкозы, растворяют в воде и доводят объём раствора водой до метки.

Содержание восстанавливающих моносахаров в пересчете на глюкозу и абсолютно сухое сырье рассчитывают по формуле:

_ А1 • а0 • У1 • 100 • 50-100-100 Х = А0 • а1 • У0 • 250 • 50 • (100 — Ш)'где

А1 - оптическая плотность испытуемого образца;

А0 - оптическая плотность раствора РСО глюкозы;

а0 - навеска глюкозы, взятая для приготовления РСО в граммах;

а1 - навеска образца в граммах;

У1 - объем извлечения, взятого для испытания в мл;

У0 - объем РСО глюкозы, взятого для испытания в мл.

Примечание. Определение суммы флавоноидов в пересчете на рутин проводят в сырье, предназначенном для производства экстрактов, суммы полисахаридов для лекарственных растительных препаратов (пачки, фильтрпакеты).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».