Фармакогностическое изучение Манжетки мягкой (ALCHEMILLA MOLLIS (BUSER) ROTHM.) культивируемой в Пермском крае тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Бояршинов Виталий Дмитриевич

• Бояршинов Виталий Дмитриевич
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Бояршинов Виталий Дмитриевич

1.3. Биологически активные вещества, накапливающиеся в растениях рода Alchemilla L

1.4. Биологическая активность и фармакологические свойства субстанций,

получаемых из растений рода Alchemilla L

Заключение по обзору литературы

ГЛАВА 2 ОБЪЕКТЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1 Объекты исследования

2.2. Оборудование и реактивы

2.3 Методы анализа

2.3.1. Методы изучения культуры манжетки мягкой

2.3.2. Методы обнаружения и количественного определения биологически активных веществ

2.3.4 Фармакологические методы исследования

2.3.5 Методы определения показателей стандартизации травы манжетки мягкой и настоя травы манжетки мягкой

2.3.6 Статистические методы

ГЛАВА 3. ОЦЕНКА ВОЗМОЖНОСТИ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ КУЛЬТИВИРУЕМОЙ МАНЖЕТКИ МЯГКОЙ ДЛЯ РАСШИРЕНИЯ СЫРЬЕВОЙ БАЗЫ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ

3.1. Изучение биологических особенностей манжетки мягкой в условиях культуры

3.2. Изучение онтогенеза манжетки мягкой в условиях культуры

3.3. Изучение кратности заготовки травы манжетки мягкой

3.4. Влияние метеоусловий на накопление биологически активных веществ в

траве манжетки мягкой

Заключение по главе

ГЛАВА 4. СРАВНИТЕЛЬНОЕ ФИТОХИМИЧЕСКОЕ И ФАРМАКОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ КУЛЬТИВИРУЕМОЙ МАНЖЕТКИ МЯГКОЙ И ДИКОРАСТУЩЕЙ МАНЖЕТКИ ОБЫКНОВЕННОЙ

4.1. Сравнительный фитохимический анализ компонентного состава биологически активных соединений надземной части культивируемой манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) и дикорастущей манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.s.I)

4.2. Сравнительный фитохимический анализ компонентного состава биологически активных соединений настоев травы культивируемой манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) и дикорастущей манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.s.I)

4.3. Сравнительное фармакологическое исследование настоев травы культивируемой манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) и дикорастущей манжетки обыкновенной (Alchemilla vulgaris L.s.I)

Заключение по главе

ГЛАВА 5. СТАНДАРТИЗАЦИЯ ТРАВЫ МАНЖЕТКИ МЯГКОЙ

5.1. Определение морфолого-анатомических параметров травы манжетки мягкой

5.2. Определение основных групп биологически активных веществ в траве манжетки мягкой

5.3. Разработка методики количественного определения суммы флавоноидов в траве манжетки мягкой

5.4. Определение показателей доброкачественности травы манжетки мягкой

Заключение по главе

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

Список Литературы

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение Манжетки мягкой (ALCHEMILLA MOLLIS (BUSER) ROTHM.) культивируемой в Пермском крае»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Развитие доказательной медицины привело к формированию концепций комбинированной и мультитаргетной фармакотерапии, которые раскрывают потенциал фитопрепаратов. В соответствии с принципами комбинированной фармакотерпии лечение рекомендуется проводить с использованием нескольких лекарственных препаратов взаимодействие которых усиливает терапевтическую эффективность за счет суммации или потенцирования эффектов [1, 2]. Концепция мультитаргетной фармакотерапии предполагает использование лекарственных средств, способных одновременно решать ряд терапевтических задач и воздействовать на несколько мишеней, снижая тем самым риск побочных явлений [3, 4]. Фитопрепараты представляют совокупность биологически активных соединений, каждое из которых является мультитаргетной молекулой, результатом взаимодействия которых является наличие терапевтических эффектов при минимальных рисках побочных явлений.

Перспективным источником лекарственного растительного сырья является манжетка обыкновенная, так как трава этого растения широко применяется в народной медицине и включена в европейскую фармакопею. В России трава манжетки не официнальна, однако предложена для включения в государственную фармакопею как сырьевой источник получения фитопрепаратов с приоритетными видами фармакологической активности: антидиабетической, иммунокорригирующей,

гемореологической, противовирусной, нейропротекторной [5, 6, 7, 8, 9].

Манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.s.l.) представляет собой агамно-половой комплекс растений, включающий множество видов, имеющих различия в морфологических признаках и накоплении биологически активных веществ, что осложняет получение стандартизированных субстанций. Внедрение культивируемых растений в качестве источника лекарственного растительного сырья обеспечивает

меньшую вариабельностью химического состава, стандартность сырья, возможность использования механизированной заготовки. Манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm) произрастает на территории юга Европы и является представителем комплекса манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.s.l.). В России манжетка мягкая используется в ландшафтном дизайне, как декоративный вид, имеющий большой габитус. Фармакогностическое изучение манжетки мягкой позволит использовать данное растение в качестве источника доброкачественного лекарственного растительного сырья.

Степень разработанности темы исследования. Трава манжетки включена в ряд международных фармакопей, в частности Европейскую фармакопею [10]. В Российской Федерации трава манжетки не официнальна, однако, ведутся исследования по её изучению и созданию нормативной документации [11, 12, 13, 14, 15].

Дикорастущая манжетка мягкая используется в составе комплекса Alchemilla vulgaris L.s.l., в фармацевтической практике стран Европы. Культура манжетки мягкой имеет широкий ареал распространения в качестве декоративного, но сведения по изучению химического состава и урожайности единичны [16, 17, 18].

Работ по фармакогностическому изучению манжетки мягкой, культивируемой в России, в литературе не обнаружено.

Цели и задачи исследования. Цель работы фармакогностическое изучение манжетки мягкой, культивируемой в Пермском крае для обоснования перспективности использования в качестве сырьевого источника для получения отечественных фитопрепаратов. 1. Проанализировать литературные данные о химическом составе надземной части растений рода манжетка и путях её использования в фармацевтической практике.

2. Изучить адаптированность, фенологический цикл, онтогенетическое развитие манжетки мягкой, культивируемой в Пермском крае. Провести ресурсную оценку сырья манжетки мягкой.

3. Провести фитохимическое исследование травы манжетки мягкой в сравнении с травой дикорастущей манжетки обыкновенной.

4. Осуществить фитохимическое исследование, изучение острой токсичности и фармакологической активности настоев травы манжетки мягкой в сравнении с настоем травы манжетки обыкновенной.

5. Провести изучение внешних и анатомических признаков травы манжетки мягкой, разработать методики определения основных групп биологически активных веществ и установить основные показатели подлинности сырья.

6. Разработать методику количественного определения основных групп биологически активных веществ травы манжетки мягкой и определить нормы параметров качества сырья.

Научная новизна. Впервые проведено комплексное фармакогностическое изучение манжетки мягкой, культивируемой в Пермском крае. Определены особенности фенологического цикла и онтогенеза растения в условиях культуры. Установлена возможность повышения урожайности за счёт ежегодной двукратной заготовки травы манжетки мягкой. Выявлены зависимости между накоплением БАВ и погодными факторами.

В результате изучения химического состава травы манжетки мягкой определён лютеолин-7-глюкозид как маркерное вещество и выявлено количественное преобладание конденсированных дубильных веществ, в сравнении с травой манжетки обыкновенной.

Настой травы манжетки мягкой отнесен к малотоксичным веществам и выявлены антирадикальная, антидиабетическая, иммунокорригирующая активности, и эффект повышения биодоступности магния.

Для стандартизации травы манжетки мягкой обоснованы показатели подлинности, включающие морфолого-анатомические диагностические

признаки и идентификацию конденсированных дубильных веществ и лютеолин-7-глюкозида.

Разработаны методика тонкослойной хроматографии идентификации лютеолин-7-глюкозида и методика количественного определения суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-гликозид методом спектрофотометри.

Теоретическая и практическая значимость работы. Полученные экспериментальные данные морфолого-анатомических признаков, химического состава, биологических свойств травы манжетки мягкой расширяют представления о растениях рода манжетка в целом.

Практическая значимость исследования заключается в обосновании использования культивируемого в Пермском крае вида манжетки мягкой в качестве сырьевого источника для получения отечественных фитопрепаратов. Использование культуры манжетки мягкой позволит получать стандартизованное сырье с низкой вариабельностью биологически активных веществ.

Разработанный режим заготовки сырья позволяет увеличить урожайность манжетки мягкой при выращивании в Пермском крае, способ апробирован в процессе работы фермерского хозяйства (Глава КФХ Лещев А.В.).

Разработанные параметры оценки подлинности сырья по внешним и микроскопическим признакам, основным группам биологически активных веществ методом ТСХ и качественной реакции включены в проект фармакопейной статьи «Манжетки мягкой трава». Для оценки качества сырья разработана методика количественного определения суммы флавоноидов методом дифференциальной спектрофотометрии в траве манжетки мягкой, предложены нормы показателей доброкачественности. Методики апробированы в процессе работы предприятий по производству биологически активных добавок к пище (ИП Иванов, НПК «Миламед»).

Результаты диссертационного исследования внедрены в учебный процесс ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России, АНО ДПО «Перм ИПК РЗ», ФГБОУ ВО Пермский ГАТУ, ФГАОУ ВО ПГНИУ.

Методология и методы исследования. В работе проведена систематизация литературных данных по фармакогностическому исследованию растений рода манжетка для обоснования целесообразности использования в фармацевтической практике культивируемого вида манжетка мягкая.

Объект диссертационного исследования - трава манжетки мягкой, полученная от растений, культивируемых на территории Пермского края.

Оценку возможности использования манжетки мягкой, культивируемой в Пермском крае в качестве производящего растения, осуществляли с использованием фенологических, морфометрических, химических и физико-химических методов.

Изучение химического состава травы манжетки мягкой и настоев из данного сырья осуществляли химическими и физико-химическими методами анализа. Для определения особенностей манжетки мягкой проводили изучение травы и настоя манжетки мягкой в сравнении с травой и настоем манжеткой обыкновенной. Сравнение биологической активности настоев осуществляли методиками оценки острой токсичности и фармакологической активности.

Параметры стандартизации травы манжетки мягкой разрабатывали фармакопейными методами анализа.

Данные, полученные в эксперименте, обрабатывали статистическими методами.

Степень достоверности и апробация результатов. Достоверность полученных результатов подтверждена объемом экспериментальных данных, полученных с использованием валидированных методик и обработанных статистическими методами.

Основные результаты работы были представлены на научно -практической конференции с международным участием «Создание конкурентоспособных лекарственных средств - приоритетное направление развития фармацевтической науки» (Пермь, 2018); научной конференции с международным участием «Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения» (Москва, 2019); международной научной конференции «Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения» (Москва, 2020); научно-практической конференции с международным участием «Создание новых лекарств - от идеи до производства» (Пермь, 2021); международной научной конференции «90 лет - от растения до лекарственного препарата: достижения и перспективы» (Москва, 2021).

Основные положения, выносимые на защиту.

1. Результаты изучения фенологических фаз и онтогенетического развития манжетки мягкой в условиях культуры в Пермском крае и ресурсной оценки сырья.

2. Результаты сравнительного фитохимического исследования травы манжетки мягкой и манжетки обыкновенной и настоев, получаемых из данного сырья.

3. Результаты сравнительного изучения острой токсичности и фармакологической активности настоев травы манжетки мягкой и манжетки обыкновенной.

4. Результаты морфолого-анатомического изучения травы манжетки и обоснование показателей подлинности сырья.

5. Разработка методики количественного определения флавоноидов в траве манжетки мягкой и нормы параметров стандартизации сырья.

Связь задач исследования с проблемных планом фармацевтических наук. Диссертация выполнена в соответствии с тематическим планом научно-исследовательских работ федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Пермская государственная фармацевтическая академия»

Министерства здравоохранения Российской Федерации (государственная регистрация 01.9.50007426).

Личный вклад автора в проведенное исследование и получение научных результатов. Личный вклад заключается в непосредственном участии в формулировании цели и задач исследования; анализе и систематизации литературных источников по теме диссертации. Вклад автора является определяющим в проведении экспериментальной работы, статистической обработке данных, анализе и обсуждении результатов исследования.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности.

Диссертация соответствует паспорту специальности 3.4.2 фармацевтическая химия, фармакогнозия, 3 пункту «Разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства, потребления»; 5 пункту «Изучение вопросов рационального использования ресурсов лекарственного растительного сырья с учетом влияния различных факторов на накопление биологически активных веществ в сырье»; 6 пункту «Изучение химического состава лекарственного растительного сырья, установление строения, идентификация природных соединений, разработка методов выделения, стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на его основе».

Публикации. По материалам работы опубликовано 9 работ из них 4 статьи в журналах Перечня ВАК, в том числе 2 статьи в изданиях, включенных в Перечень международных баз цитирования.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 252 страницах машинописного текста, содержит 51 таблицы, 38 рисунка, состоит из оглавления, введения, пяти глав, выводов, списка сокращений и условных обозначений, списка литературы, включающего 267 источников и приложения.

ГЛАВА 1. СОВРЕМЕННОЕ СОСТОЯНИЕ ИЗУЧЕНОСТИ И ПЕРСПЕКТИВЫ ИССЛЕДОВАНИЯ МАНЖЕТКИ МЯГКОЙ ALCHEMILLA MOLLIS (BUSER) ROTHM. (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)

Для поиска информации о растениях рода манжетка осуществляли мониторинг литературных данных и интернет-ресурсов (eLibrary, Cyberleninka, PubMed, Google Scholar). Поиск проводили по таким ключевым словам, как «манжетка», «манжетка мягкая», «Alchemilla», «Alchemilla mollis», «Lady's mantle». В результате поиска было обнаружено 27 000 публикаций, в результате первичной фильтрации отобрано около 600 статей, которые были подвергнуты дальнейшему анализу.

1.1. Ботаническая характеристика и распространение рода манжетка

(Alchemilla L.)

Род манжетка (Alchemilla L.) включен в семейство розоцветные (Rosaceae) и имеет сложную таксономическую структуру, которая обусловлена характерным факультативным апомиксисом, гетеробластной пластичностью, изменчивостью в признаках цветков, морфологии листьев и опушенности растения [19, 20]. Трудности, связанные с интерпретацией такого рода вариаций, привели к описанию многих микровидов и комплексов видов [20, 21, 22]. Согласно данным «Plants of the World Online» (POWO), род манжетка включает 743 вида [23]. Во флоре Пермского края выявлено 79 видов рода Alchemilla [24]. Для однородных групп представителей рода Alchemilla, имеющих незначительные морфологические отличия, применяют термин «микровид» [25, 26, 27]. Так, всех представителей рода манжетка, произрастающих в пределах Восточной Европы, предложено относить к агамно-половому комплексу Alchemilla vulgaris L.s.l. [27, 28].

Микровиды комплекса Alchemilla vulgaris L.s.l. не различаются жизненной формой, структурой многолетних органов и генеративных побегов [25, 27, 29, 30]. Манжетки - многолетние моноподиально-

розеточные, короткокорневищные травянистые поликарпики с плагиотропным эпигеогенным корневищем, гемикриптофиты [29, 31].

Многолетние вегетативные побеги розеточные, они длительно нарастают моноподиально за счет верхушечной почки и представлены эпигеогенным корневищем. Корневище горизонтально распростертое, располагается на глубине 0,5-1 см, редко - немного глубже. Его терминальная часть, несущая листья, приподнята над землей. По мере отмирания листьев благодаря контрактильной способности корней надземная часть побега слегка углубляется в почву. Розеточные листья длинночерешковые, с вытянутым, замкнутым в виде влагалища основанием, охватывающим верхушечную почку. Влагалище разрывается у листьев, закончивших свой рост, в результате увеличения диаметра стебля. Листовые пластинки розеточных листьев в очертании почковидные, округло-почковидные или округлые, пальчато-лопастные, с 7-11 лопастями. Лопасти по краю зубчатые. Жилкование пальчато-краевое. Из пазушных почек, формирующихся на корневище, образуются боковые побеги различных типов: вегетативные, повторяющие в своем развитии главный побег, и монокарпические генеративные побеги [23, 25, 29, 32, 33].

Пазушные генеративные побеги удлиненные, олиственные, представлены фрондозным закрытым тирсом. Листья цветоносного побега короткочерешковые, с крупными зелеными прилистниками и слаборазвитым влагалищем. Верхние листья имеют вид крупнозубчатых по краю прицветников. Соцветия удлиненные, олиственные, с 8-13 узлами до терминального цветка. Оси I и II порядков цветоносов заканчиваются терминальными цветками. Под терминальными цветками, завершающими оси I и II порядков цветоносного побега, обычно развиваются по две ветви, которые представляют собой дихазии с резко неравными по силе и дальнейшему характеру ветвления веточками. В каждом порядке ветвления такого дихазия под терминальным цветком образуются две веточки. Одна из них - компактный монохазий, а другая, более мощная, ветвится

по принципу дихазия. Общее число порядков ветвления у наиболее широко распространенных видов варьирует от 8 до 14. Строение цветка одинаково у всех представителей комплекса A. vulgaris. Цветок четырехчленный, четырехкруговой, чашечка с подчашием, венчик не развит. Характерно наличие колокольчатого или обратнояйцевидного гипантия. В верхней части гипантия формируется плоский широкий железистый диск, по краям которого развиваются четыре чашелистика и четыре листочка подчашия. Чашелистики яйцевидные или треугольные, листочки подчашия ланцетные иди яйцевидно-ланцетные, расположены между чашелистиками, чуть ниже последних. Тычинок четыре, они прикрепляются к наружной части диска и располагаются между чашелистиками напротив листочков подчашия. Гинецей апокарпный, обычно мономерный. Плодолистик развивается внутри гипантия и занимает центральное положение на цветоложе. Он имеет короткую ножку. Завязь яйцевидной формы. Рыльце шаровидное. В нижней части плодолистика заметен короткий брюшной шов. В полости завязи расположен один крупный семезачаток [19, 23, 25, 30, 34, 35, 36, 37, 38].

Определение видовой принадлежности возможно, как правило, только в генеративном периоде у особей, собранных в июне, во время первого цветения [39]. Виды различаются характером и степенью опушения листьев, цветков, генеративных побегов, размерами и формой листовой пластинки, лопастей и их зубцов [25, 29, 40].

Морфологическая характеристика вида Alchemilla mollis (Buser) Rothm.

Согласно «The World Flora Online» (WFO), вид манжетка мягкая Alchemilla mollis (Buser) Rothm. относится к роду манжетка Alchemilla. Синонимичными названиями являются Alchemilla acutiloba Steven, Alchemilla acutiloba subsp. catillaris Buser, Alchemilla acutiloba subsp. mollis (Buser) Buser, Alchemilla acutiloba var. mollis Buser, Alchemilla glareosa hort., Alchemilla mollis f. catillaris (Buser) Rothm., Alchemilla montana Schur, Alchemilla vulgaris subsp. acutiloba (Steven) Nyman, Alchemilla vulgaris var.

major Boiss. & Buhse, Alchemilla vulgaris var. pilosissima Schur, p.p.970, Potentilla alchemollis Christenh. & Väre [34].

Манжетка мягкая не имеет существенных отличий от других представителей рода Alchemilla. Растения крупные, в высоту 20-100 см, желтовато-зеленые, густо опушенные, бархатисто мягкие. Розеточные листья шириной 8-22 см, округлые или почковидно-округлые с перекрывающимися краевыми лопастями, количество лопастей - 9-11, разрезы между лопастями составляют 5-25 % радиуса. Зубцы лопастей слегка выступающие, симметричные, заостренные. Поверхность листа густо опушена, бархатистая. Волоски на черешках расположены горизонтально 90-120°. Соцветия густо опушены. Цветки четырехмерные, чашелистики и листочки подчашия имеют одинаковую длину, тупые, голые. Гипантий обычно густо опушен [34].

В природе Болгарии A. mollis произрастают как многолетние травянистые растения со стелющимися корневищами и прямостоячими облиственными стеблями длиной 10-50 см с кистевидными соцветиями, прикорневые листья образуют пучок. Растения имеют продолжительный вегетационный период с зимним покоем [16].

Во флоре Турции приводится следующее описание A. mollis: розеточные листья округлые или округло-почковидные, размером до 13*15 см, узкие или угловатые, густо опушенные с обеих сторон, 9-11-лопастные, лопасти дугообразные или полукруглые, округлые. Стебель 25-80 см, густо опушен, прямостоячий. Стеблевые листья крупные, черешки голые, соцветия крупные. Цветки 3-6 мм шириной, гипантий опушенный, чашелистики и листочки подчашия яйцевидные или яйцевидно-ланцетные, обычно с одним мелким волоском [41]. Распространение рода манжетка (Alchemilla L.)

Род Alchemilla имеет широкое географическое распространение в основном в Голарктике, но встречается также в горах Восточной и Южной Африки, а также на Мадагаскаре, в Южной Индии, в Шри-Ланке и на Яве (рисунок 1.1) [42].

Рисунок 1.1 - Карта распространения дикорастущих (Native) и интродуцированных (Introduced) представителей рода манжетка согласно «Plants of the World Online»

В России представители манжеток обычно встречаются на лугах разной степени увлажнения, в степях, на полянах, в светлых лесах, на выгонах, у дорог, на лесосеках, опушках, среди кустарников; в состав фитоценоза обычно входит по несколько видов (до 10 видов на учетной площадке размером 1 м2) [41, 43, 44, 45]. На некоторых типах лугов манжетки играют значительную фитоценотическую роль [35, 46].

Максимальная плотность манжеток характерна для ненарушенных, открытых, большую часть дня хорошо освещенных местообитаний, склонов северной или западной экспозиций с достаточно увлажненными, довольно богатыми почвами [40].

Экологические условия в разной степени влияют на представителей рода Alchemilla, высокогорные виды произрастают преимущественно на известняках и песчаниках, что ограничивает ареал их распространения. Для видов, произрастающих на лугах, характерны пластичность

относительно различных условий (почва, влажность, освещенность) и широкий ареал распространения [40, 42].

Распространение вида манжетка мягкая Alchemilla mollis (Buser) Rothm.

Вид Alchemilla mollis распространен на юге Европы: в Румынии, Болгарии, Греции, а также в Турции (северной Анатолии), северной части Ирана и на Кавказе [41, 47, 48]. Культура A. mollis широко распространена по всей Европе и Азии с умеренным климатом и в некоторых частях Северной Америки [17, 23].

Манжетка мягкая имеет широкое географическое и экологическое распространение и обычно входит в состав луговых сообществ [42].

1.2. Интродукционные исследования рода Alchemilla и влияние экологических факторов на накопление БАВ

Для сохранения биоразнообразия популяций манжеток и обеспечения сырьевой базы ведутся исследования по введению в культуру представителей данного рода [49, 51]. Кроме того, культура видов рода Alchemilla используется в парках и садах в качестве декоративного растения.

В целом большинство видов манжеток характеризуются высокой устойчивостью к большинству экологических факторов, что делает их перспективными для введения в культуру [40, 42].

Образцы A. vulgaris высокогорной популяции Алтая при интродукции в лесостепную зону Западной Сибири проявляют устойчивость к климатическим факторам и накапливают достаточное количество фенольных веществ. При использовании культуры заготовку сырья (надземной части) рекомендуется проводить на третий год [49].

Исследования по введению в культуру A. mollis показали высокую экологическую пластичность данного вида. Растения хорошо развивались на экспериментальных участках в болгарских горах Витоша (1500 м над уровнем моря) и Родопы (1500 м над уровнем моря), а также в г. София (500 м над уровнем моря), что свидетельствует о способности

приспосабливаться к различным высотам [48]. Кроме того, содержание флавоноидов и дубильных веществ в растениях, собранных из местностей, расположенных на разных высотах в Румынии - между 800 и 1800 м над уровнем моря, - было одинаковым [50].

Для изучения культуры A. mollis, A. achtarowii, A. jumrukczalica корневища с неповрежденными надземными частями были перенесены из естественных популяций (Балканские горы) на экспериментальные участки, расположенные на высоте 1404 м (горы Родопы) и 1500 м (горы Витоша). После первой зимы выживаемость растений составляла от 70 (для A. jumrukczalica) до 100 % (для A. mollis); на второй год вегетации в генеративную фазу вошло от 30 (для A. jumrukczalica и A. achtarowii) до 50 % (для A. mollis) растений с образованием от одного до трех цветоносных побегов. Растения всех трех видов были более крупными на участках с меньшим содержанием гумуса и азота и большим содержанием фосфора и калия в почве. Культивируемые растения A. mollis и A. jumrukczalica имели большие размеры по сравнению с представителями естественной среды обитания, а для образцов A. achtarowii наблюдалась обратная ситуация. Концентрация флавоноидов и дубильных веществ в культивируемых растениях была ниже по сравнению с содержанием в образцах, произрастающих в естественной среде обитания [16].

В сравнительном исследовании, выполненном в ботаническом саду Чикаго, проведено культивирование 18 коммерчески доступных видов манжеток (A. mollis, A. mollis «Auslese», A. mollis «Improved Form», A. mollis «Robusta», A. mollis «Senior», A. mollis «Thriller», A. caucasica, A. pubescens, A. alpina, A. bulgarica, A. conjuncta, A. epipsala, A. erythropoda, A. glabellata, A. glaucescens, A. rigida, A. saxatilis, A. vulgaris), выявлена их высокая устойчивость к вредителям и инфекциям, а также зимостойкость. Отмечено, что сорта манжетки мягкой характеризовались большими размерами (высота -более 30 см, ширина - более 70 см) и большими размерами соцветий [51].

При изучении культуры манжеток коммерческие образцы семян A. mollis (производство Финляндии и Германии) и A. xanthochlora «Aper» (производство Швейцарии) проращивали и высаживали на экспериментальные участники в южной, юго-восточной и северной частях Финляндии. При наблюдении в течение трех лет отмечена зимостойкость изученных сортов и достаточное накопление флавоноидов и дубильных веществ [18].

Генеративное размножение манжеток ограничено вследствие низкой фертильности пыльцы, низкой всхожести семян [48, 52], поэтому в ряде работ проводится оценка возможности размножения методами in vitro. В работе [52] прорастание семян A. mollis, A. achtarowii, A. jumrukczalica и A. bundericensis стимулировали гибберелловой кислотой, в дальнейшем образцы культивировали на питательных средах, укоренившиеся саженцы после предварительной ex vitro адаптации высаживали в естественные условия горы Витоша (Болгария), при этом выживаемость составила 100 %. В последующем исследовании [53] при изучении влияния компонентов питательной среды на скорость размножения и последующее содержание биологически активных веществ (БАВ) в растении выявлено, что использование регуляторов роста способствовало увеличению коэффициента размножения и содержания дубильных веществ и уменьшению концентрации флавоноидов.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Бояршинов Виталий Дмитриевич, 2024 год

- 32 с.

201. Шретер, А. И. Методика определения запасов лекарственных растений / А.И. Шретер, И. Л. Крылова, Н. А. Борисова [и др.] // Москва : 1986. - 52 с.

202. Кашин А. С. Методы изучения ценопопуляций цветковых растений : учебно-метод. пособие для магистров биологического факультета / А. С. Кашин, Т. А. Крицкая, Н. А. Петрова[и др.] ; Министерство образования и науки Российской Федерации, Саратовский государственный университет им. Н.Г. Чернышевского. - Саратов : 2015. - 127с.

203. On-line справочник, раздел архивы погоды. // Погода и Климат: [сайт]. -2023. - URL: http://www.pogodaiklimat.ru (Дата обращения: 22.02.2023).

204. Бердимуратова, Г. Д. Биологически активные вещества растений: выделение, разделение, анализ / Г. Д. Бердимуратова, Р. А. Музычкина, Д. Ю. Корулькин // Казахский национальный университет им. аль-Фараби - [2-е изд., перераб. и доп.]. - Алматы: Атам^ра, 2006. - 438 с. Библиогр.: С. 430437.

205. Корулькин, Д. Ю. Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин, Ж.А. Абилов, Р.А. Музычкина [и др.] ; Российская акад. наук, Сибирское отд-ние, Новосибирский ин-т органической химии. - Новосибирск : ГЕО, 2007. - 229 с.

206. Ладыгина, Е. Я. Химический анализ лекарственных растений: [Учеб. пособие для фармац. вузов и фак.] / Е.Я. Ладыгина ; под ред. Н.И. Гринкевич.

- Москва : Высш. шк., 1983. - 176 с.

207. Bryant, E. T. A note of the differentiation between flavonoid glycosides and their aglycones / E. T. Bryant // J. Amer. Pharm. Assoc. - 1950. - Vol. 39. № 8. -P. 480-488.

208. Бандюкова, В.А. Тонкослойная хроматография флавоноидов / В.А. Бандюкова, А. А Шинкаренко // Химия природ. соединений. - 1983. - № 1. -С. 20-24.

209. Бубенчикова, В. Н. Изучение веществ первичного биосинтеза травы тимьяна блошиного (Thymuspulegioides L.) / В.Н. Бубенчикова, Ю.А. Старчак // Современные проблемы науки и образования. - 2012. - № 3. - С. 362-362.

210. Waksmundzka-Hajnos, M. Thin Layer Chromatography in Phytochemistry / M. Waksmundzka-Hajnos, J. Sherma, T. Kowalska. - London; New York: CRC Press Taylor & Francis Group, 2008. - 874 p.

211. Волынец, А. П. Фенольные соединения в жизнедеятельности растений / А. П. Волынец. - Минск : Беларус. навука, 2013. - 283 с.

212. Запрометов, М.Н. Основы биохимии фенольных соединений / М.Н. Запрометов - Москва: Высшая школа, 1974. - 214 с.

213. Корулькин, Д.Ю. Природные флавоноиды / Д.Ю. Корулькин, Ж.А. Абилов, Р.А. Музычкина [и др.]. - Новосибирск : Академическое изд-во 'Тео", 2007. -232 с.

214. Spangenberg, B. Quantitative Thin-Layer Chromatography. / B. Spangenberg, C. F. Poole, C. Weins DOI 10.1007/978-3-642-10729-0 // Berlin : Springer. -2011. - P. 388.

215. Рудаков, О. Б. Спутник хроматографиста : методы жидкост. хроматографии / О.Б. Рудаков // Воронеж : ФГУП ИПФ «Воронеж». - 2004. -526 с.

216. Зорина, Е. В. Количественное определение суммы флавоноидов в траве манжетки / Е. В. Зорина, Г. И. Олешко, А. Б. Седова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии. - 2007. - № 2. - С. 234.

217. Миронов, А.М. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств ; Ч. 1. / А.М. Миронов - Москва: Гриф и К, 2012. - 944 с.

218. Экспериментальные модели для изучения сахарного диабета часть i. аллоксановый диабет Можейко Л.А Журнал Гродненского государственного медицинского университета № 3 2013 г. С 26. - 29

219. Carrol, N. The determination of glycogen in liver and muscle by use of antrone reagent. / N. Carrol, R. Longley, J. Roe // Biol. Chem. - 1956. - Vol. 220. - № 2. - P. 583-593.

220. Доспехов, Б.А. Методика полевого опыта (с основами статистической обработки результатов исследований). / Доспехов Б.А. - Москва, 1985. - 351 с.

221. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта ; 2-е изд. / Беленький М.Л. - Ленинград: Медгиз, 1963. - С. 81 - 106.

222. Гублер, Е. В. Применение непараметрических критериев статистики в медико-биологических исследованиях / Е. В. Гублер, А. А. Генкин -Ленинград.: Медицина, 1973. - 144 с.

223. Баврина, А. П. Современные правила применения параметрических и непараметрических критериев в статистическом анализе медико-биологических данных. / А. П. Баврина // Медицинский альманах. - 2021. -№ 1 (66). - С. 64-73.

224. Минкевич, И.И. Видовое разнообразие мучнисторосяных грибов на парковых растениях / И.И. Минкевич, А.Е. Холмогорская. // Защита и карантин растений. - 2010. - №6. - С.57-58.

225. Рахимова, Е.В. Краткий иллюстрированный определитель мучнисторосяных грибов Казахстана и приграничных территорий / Е.В. Рахимова, Г.А. Нам, Б.Д. Ермекова. - Новосибирск : Издательство ЦРНС, 2014. - 129 с.

226. Tuka, L. Determination of tannins in the plants of Alchemilla mollis (Buser) Rthm. and A. vulgaris L. / L. Tuka, H. Popescu // Clujul Medical. - 1979. - Vol. 52(1). - P. 78-83.

227. Зорина Е. В. Первичная интродукция манжетки мягкой Alchemilla mollis / Е. В. Зорина, В. Д. Бояршинов // Вестник пермской государственной

фармацевтической академии : материалы научно-практической конференции с международным участием, посвященной 100-летию кафедр фармакогнозии, фармацевтической технологии, фармацевтической химии / Главный редактор А.Ю. Турышев. - Пермь : 2018. - С. 143 - 146.

228. Бояршинов В. Д. Исследование влияния кратности заготовки манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) на накопление биологически активных веществ и биометрические показатели / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина, А. Ю. Турышев // Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения : сборник трудов седьмой научной конференции с международным участием / 2019. - С. 19 - 25.

229. Dumanovic J. The significance of reactive oxygen species and antioxidant defense system in plants: a concise overview. / J. Dumanovic, E. Nepovimova, M. Natic [et al.]. - DOI 10.3389/fpls.2020.552969 // Front. Plant Sci. - 2021. -Vol. 11. - P. 552-969.

230. Тяпкина, Д. Ю. Накопление витамина С в сочных плодах: биосинтез и рециркуляция, гены и ферменты / Д. Ю. Тяпкина, Е. З. Кочиева, М. А. Слугина - DOI 10.18699/VJ19.492 // Вавиловский журнал генетики и селекции. - 2019. - №23(3). - С. 270-280

231. Бояршинов В. Д. Влияние метеоусловий на накопление биологически активных веществ в траве манжетки мягкой (Alchemilla mollis) / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина // 90 лет - от растения до лекарственного препарата: достижения и перспективы : сборник материалов юбилейной международной научной конференции / - Москва : 2021. - С. 126 - 130.

232. Бояршинов В. Д. Сравнительный анализ химического состава травы культивированного вида манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) и дикорастущего манжетка обыкновенная (Alchemilla vulgaris L.S.I) / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина // Химия растительного сырья. - 2022. - № 1. - С. 115-122.

233. Георгиевский В. П. Биологически активные вещества лекарственных растений / В.П. Георгевский, И.Ф. Комиссаренко, С Е. Дмитрук. -Новосибирск : Наука, 1990. - 333 с.

234. Клышев Л.К. Флавоноиды растений / Л.К. Клышев, В.А. Бандюкова, Л.С. Алюкина. - Алма-Ата: Наука, 1978. - 220 с.

235. Бриттон, Г.Б. Биохимия природных пигментов / Г.Б. Бриттон ; [Перевод с английского В. Д. Цыдендамбаева]. - Москва.: Мир, 1986. - 422 с.

236. Дымова, О. В. Фотосинтетические пигменты в растениях природной флоры таежной зоны европейского северо-востока России. / О. В. Дымова, Т. К. Головко. // Физиология растений. - 2019. - Т. 66. - № 3. - С. 198-206.

237. Бабаян, М.С. Определение суммы флавоноидов в траве манжетки твердой (Alchemilla dura Buser.). / М.С. Бабаян, В.Н. Леонова, Э.Э. Айрапетян // Современные проблемы науки и образования. - 2015. - № 1 (1).

238. Cindric, I. J. Elemental characterisation of the medical plant Alchemilla velebitica / I. J. Cindric, M. Zeiner, M. Pozgaj [et al.] - DOI 10.1016/j.jtemb.2014.09.008. // Journal of trace elements in medicine and biology. - 2014. - Vol. 31. - P. 274-278.

239. Бубенчикова, В. Н. Сравнительная оценка макро- и микроэлементного состава некоторых видов растений семейств Asteraceae и Rosaceae / В. Н. Бубенчикова, С. В. Логутев, Ю. А. Сухомлинов [и др.] // Вестник воронежского государственного университета. серия: химия. биология. фармация. - 2011. - №2. - С. 181-184.

240. Краснов. Е. А. Исследование содержания доминирующих групп БАВ и биоэлементов в некоторых растениях семейства Rosaceae. / Е. А. Краснов, Е. Е. Савельева, Н. К. Рыжакова [и др.] - DOI 10.14258/jcprm.2017041934 // Химия растительного сырья. 2017. - №4. - С. 145-151.

241. Афанасьева, Л. В. Особенности накопления и распределения микроэлементов в растениях Rosa acicularis, Rosa davurica и Rosa rugosa / Л. В. Афанасьева, Т. А. Аюшина - DOI 10.14258/jcprm.2021027440. // Химия растительного сырья. - 2021. - №2. - С. 209-216.

242. Ловкова, М. Я. Лекарственные растения - концентраторы и сверхконцентраторы меди и ее роль в метаболизме этих видов / М. Я. Ловкова, Г. Н. Бузук // Прикладная биохимия и микробиология. - 2011. -Т.47. - №2. - С. 209-216.

243. Бояршинов В. Д. Сравнительный фитохимический анализ настоев травы манжетки обыкновенной и травы манжетки мягкой / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина // Человек и его здоровье. - 2022. - Т. 25, № 4. - С. 112 - 117.

244. M. Yussif, N. Vitamin C. / M. Yussif, N. DOI 10.5772/intechopen.81783. -2018. - 28 p.

245. Гравель, И. В. Региональные проблемы экологической оценки лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов на примере Алтайского края : специальность 15.00.02 «Фармацевтическая химия и фармакогнозия» : диссертация на соискание ученой степени доктора фармацевтических наук. / И. В. Гравель ; ГОУВПО «Московская медицинская академия». - Москва, 2005. - 363 с.

246. Радыщ, И. В. Основы медицинской элементологии. / И. В. Радыщ, В. В. Скальный, Т. Н. Умнова. - Москва: 2021. - 250 с.

247. Безель, В. С. Роль травянистых растительных сообществ в формировании биогенных циклов химических элементов / Безель В. С., Жуйкова Т. В. // Поволжский экологический журнал. - 2010. - №3. - С. 219229.

248. Варданян, Р. Антиоксидантное и прооксидантное действие аскорбиновой кислоты / Р. Варданян, Л. Варданян, С. Айрапетян [и др.] // Химия растительного сырья. - 2015. - № 1. - С. 113-119.

249. Аликина, Е.С. Антиоксидантные и антирадикальные свойства эфирных масел in vivo и in vitro : 03.01.02 «биофизика» : Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук. / Е.С. Аликина ; Ин-т биохим. физики им. Н.М. Эмануэля РАН Москва. - 2013. - 2с.

250. Лукинова К. Е. Изучение антирадикальной активности настоев манжетки мягкой и манжетки обыкновенной / К. Е. Лукинова, В. Д.

Бояршинов, Е. В. Зорина // Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения : сборник научных трудов Международной научной конференции / - Москва. : 2020. - С. 416 - 422.

251. ГОСТ Р 32644-2014. Методы испытания по воздействию химической продукции на организм человека. Острая пероральная токсичность - метод определения класса острой токсичности = OECD guidelines for the testing of chemicals Acute Oral Toxicity - Acute Toxic Class Method : издание официальное : утвержден и введен в действие Приказом Федерального агентства по техническому регулированию и метрологии от 24 сентября 2014 г. № 1214-ст : введен впервые : дата введения 2015-06-01 / подготовлен Федеральным государственным унитарным предприятием «Всероссийский научно-исследовательский центр стандартизации, информации и сертификации сырья, материалов и веществ» (ФГУП «ВНИЦСМВ»). -Москва : Стандартинформ, 2015. - 12 с.

252. Бояршинов В. Д. Оценка противодиабетической активности настоя травы культивируемого микровида Alchemilla mollis / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина, Т. А. Юшкова // Традиционная медицина. - 2022. - № 1 (67). - С. 4246.

253. Petersen, M. C. Regulation of hepatic glucose metabolism in health and disease. / M. C. Petersen, D. F. Vatner, G. I. Shulman. - DOI 10.1038/nrendo.2017.80 // Nature reviews. Endocrinology. - 2017. - Vol. 13(10). - P. 572-587.

254. Finstad, E. W. The effects of magnesium supplementation on exercise performance. / E. W. Finstad, I.J. Newhouse, H. C. Lukaski [et al.] // Med. Sci. Sport. Exerc. - 2001. - Vol. 33. - P. 493 - 498.

255. Welch, A. A. Dietary magnesium is positively associated with skeletal muscle power and indices of muscle mass and may attenuate the association between circulating C-reactive protein and muscle mass in women. / A. A. Welch, E. Kelaiditi, A. Jennings[et al.] // Bone Miner. Res. - 2016. - Vol. 31. - P. 317 - 325.

256. Lukaski, H. Magnesium, zinc, and chromium nutriture and physical activity. / H. Lukaski, J. Am. // Clin. Nutr. - 2000. - Vol. 72. - P. 585 - 593.

257. Luecker, P. W. Determination of the therapeutic utilization of magnesium and potassium based on renal elimination. / P. W. Luecker, N. Wetzelsberger, G. Guernzig // Magnesium. - 1983. - Vol. 2, - P. 144 - 55.

258. Gegenheimer, L. Bioaequivalenz von Magnesium aus Kautabletten und Granulat. / L. Gegenheimer, H. Koegler, S. Ehret // Magnes Bull. - 1994. - Vol. -16. - P. 6-8.

259. Walker, A. F. Mg citrate found more bioavailable than other Mg preparations in a randomised, double-blind study. / A. F. Walker, G. Marakis, S. Christie[et al.] // Magnes Res. - 2003. - Vol.16. - P. 183 - 191.

260. Luecker, P. W. Zur therapeutischen Verwertbarkeit von Magnesiumzubereitungen. / P. W. Luecker, T. Nestler // Magnes Bull. - 1985. -Vol. 2. - P. 62 - 65.

261. Бояршинов В. Д. Изучение биодоступности магния настоев манжетки обыкновенной и манжетки мягкой / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина, Т. А. Юшкова // Вестник Пермской государственной фармацевтической академии : сборник материалов научно-практической конференции с международным участием / - Пермь : 2021. - С. 13 - 17.

262. Зорина, Е.В. Исследования по разработке нормативной документации на траву манжетки / Е.В. Зорина, Г.И. Олешко, А.Б. Седова // Фармация. - 2009.

- №1. - С. 11-15.

263. Карпов, А.П. Микроскопическое исследование листьев манжетки обыкновенной // Вестник ПГФА / Под ред. В.Г. Лужанина. - Пермь. ПГФА,.

- 2021. - С.165.

264. Артемьева В.В. Морфо-анатомический анализ манжетки прямоволосой (Alchemilla orthotricha Rothm.) / В.В. Артемьева, И.Н. Дьякова, И.И. Бочкарева // Вестник АГУ. - 2016. - Т.1. - №176. - С. 94-98.

265. Zhu, Y. Pharmacognostical identification of Alchemilla japonica Nakai et Hara / Y. Zhu, N. Zhang, P. Li. // Journal of Pharmacy & Pharmacognosy Research. - 2015. - Vol.3. - №3. - P. 59-68.

266. Тринеева О. В. Разработка теоретических подходов к определению основных групп биологически активных веществ лекарственного растительного сырья методом ТСХ. / О. В. Тринеева - D0I:10.33380/2305-2066-2021-10-2-69-79 // Разработка и регистрация лекарственных средств. -2021. - №10(2). - С. 69-79.

267. Бояршинов В. Д. Разработка параметров стандартизации травы культивируемого вида манжетка мягкая (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) / В. Д. Бояршинов, Е. В. Зорина // Разработка и регистрация лекарственных средств. - 2022. - Т. 11, № S4. - С. 85 - 90.

ПРИЛОЖЕНИЕ

Собранная в фазу массового цветения и высушенная трава многолетнего культивируемого травянистого растения манжетки мягкой -Alchemilla mollis (Buser.) Rothm. семейства розоцветные - Rosaceae.

СПЕЦИФИКАЦИЯ

Показатели Методы анализа Нормы

1 2 3

Внешние признаки ОФС. 1.5.1.0002.15 ГФ XIV (т.2), соответствие проекту ФС

Микроскопические признаки ОФС.1.5.3.0003.15 ГФ XIV (т.2) соответствие проекту ФС

Определение основных групп биологически активных веществ Качественная реакция с железа (III) аммония сульфата раствором 1 %. черно-зелёное окрашивание (конденсированные дубильные вещества)

тех этилацетат - уксусная кислота (85 : 15), раствор для детектирования -алюминия хлорида раствор 2 %, стандартный образец - лютеолин-7-O-глюкозид соответствие проекту ФС

Влажность ОФС.1.5.3.0007.15 ГФ XIV (т.2) не более 10 %

Золы общей ОФС.1.2.2.2.0013.15 ГФ XIV (т. 1) не более 10,0 %

Золы, нерастворимой в хлористоводородной кислоте ОФС.1.5.3.0005.15 ГФ XIV (т.2) не более 2,5 %

Измельченность: частиц, не проходящих сквозь сито с1=3 мм частиц, проходящих сквозь сито с!=0,5 мм ОФС.1.5.3.0004.15 ГФ-XIV (т.2) не более 1,0 % не более 4,0 %

Сырье, изменившее окраску (побуревшее, пожелтевшее и почерневшее) соответствие проекту ФС

Органическая примесь ОФС.1.5.3.0004.15 ГФ-XIV (т.2) не более 1,0 %

Минеральная примесь ОФС.1.5.3.0004.15 ГФ-XIV (т.2) не более 1,0 %

Тяжелые металлы и мышьяк ОФС.1.5.3.0009.15 ГФ XIV (т.2) соответствие ОФС

Р адионуклиды ОФС.1.5.3.0001.15 ГФ XIV (т.2) соответствие ОФС

Остаточные количества пестицидов соответствие ОФС

Микробиологическая чистота ОФС. 1.2.4.0002.18 ГФ XIV (т. 1) категория 4А

Количественное определение Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолин-7-О-глюкозид Дифференциальная спектрофотометрия не менее 3,0 %

Содержание суммы дубильных веществ в пересчёте на танин ОФС.1.5.3.0008.18 ГФ XIV (т.2) Метод 1 не менее 15 %

Упаковка, маркировка и транспортирование ОФС 1.1.0019.15 ГФ XIV (т. 1) соответствие ОФС

Хранение ОФС.1.1.0011.15 ГФ XIV (т. 1) соответствие ОФС

подлиность

Внешние признаки. Цельное сырье'. Смесь цельных или частично измельченных генеративных побегов и прикорневых листьев. Стебель генеративного побега цилиндрический слегка ребристый, полый, густоопушенный от светло-зелёного до светло-коричневого цвета, до 50 см длиной. На стебле листорасположение - очередное, листья с воронковидными или колокольчатыми прилистниками сросшимися основаниями. Стеблевые листья простые, черешковые и сидячие, почковидные, пальчатолопастные. Лопасти широко-полуяйцевидной и полукруглой формы с коротким V-образным надрезом между лопастями и пильчатым краем. Зубцы лопастей коротко треугольно-полукруглой пли треугольно-полуяйцевндной формы. Листовые пластинки с густым мягким опушением, светло-зелёного цвета с обеих сторон. Жилкование пальчатое. Количество лопастей - 7, количество зубцов на лопасти 8-10. Черешок густо опушен мягкими волосками, от светло-зелёного до светло-коричневого цвета. Соцветие - фрондозный закрытый тирс. Цветки мелкие диаметром 0,35 ± 0,05 см на густо опушенных цветоносах, актиноморфные, четырехмерные, желтой или желто-зелёной окраски. Чашелистики и листочки подчашня яйцевидной или треугольной формы одинаковой длины, голые или с единичными волосками. Лепестки отсутствуют. Характерно наличие густоопушенного гипантия коротко-обратноконической формы. В верхней части гипантия плоский широкий железистый диск. Тычинок четыре, прикрепляются к наружной части диска и расположены между чашелистиками напротив листочков подчашия. Плод - орешек, сплюснуто-яйцевидной формы. Запах слабый. Вкус водного извлечения горьковато-вяжущий.

Измельченное сырье: Смесь опушенных кусочков стеблей и черешков светло-зеленого цвета, листьев серовато-зеленого или зеленого цвета, цветков желтого цвета, проходящих сквозь сито с отверстиями 3 мм. Запах слабый. Вкус водного извлечения горьковато-вяжущий.

Микроскопические признаки.

Цельное, измельченное сырье, в препарате листа с поверхности клетки верхнего эпидермиса крупные, многоугольные, с прямыми пли слегка извилистыми стенками, клетки нижнего эпидермиса с сильно извилистыми стенками. Кутикула слегка морщинистая. Устьичный аппарат аномоцитного типа, устьица овальные, погружённые. На эпидермисе листа одноклеточные трихомы изогнуты у основания с неравномерным поперечнополосатым утолщением, погруженные основанием в слой эпидермы, окруженные 4-8

приподнимающимися клетками. В мезофилле листа расположены друзы оксалата кальция вдоль главных и мелких жилок единично или группами.

В препарате цветка пшантнй коротко-обратно-конической формы, опушён по жилкам. На чашелистиках и листочках подчашия одиночные волоски по жилке или пучки волосков по 2-3 на верхушках листочков. Клетки эпидермиса снаружи со слабоизвилистыми, внутри цветка с сильноизвилистыми стенками. В мезофилле околоцветника массово расположены друзы, большая нх часть сосредоточена в гнпантии. Чашелистики и листочки подчашия имеют хорошо выраженную центральную жилку, уходящую в верхушку, и две боковые жилки петлевидно-замыкающиеся на центральную. По краю гипантня расположен нектароносный диск почти округлый, который прерывается 4 тычинками.

Рисунок - манжетки мягкой трава

1 - листовая пластинка, клетки верхнего эпидермиса (10x40); 2 - листовая пластинка, клетки нижнего эпидермиса, аномоцитный околоустьичный аппарат (10><10); 3 - листовая пластинка, трихомы на поверхности и друзы оксалата кальция вдоль жилок (10x10); 4 - цветок, опушение гнпантия (10x4); 5 - цветок, одиночные трихомы на листочках чашечки и подчашия (10x4); 6 - цветок, нектароносный диск, пестик, тычинки (10x4); 7 - стебель, поперечный срез (10x4); 8 - стебель, трихомы, погруженные в эпидермис (10х 10); 9 - черешок, поперечный срез (10x10).

В препарате поперечного среза стебля эпидерма покрыта гладкой кутикулой. Трихомы толстостенные, одноклеточные, изогнуты у основания. Проводящая система непучкового типа.

На поперечном срезе черешок полукруглой формы. Проводящая система состоит из трех пучков: крупный медиальный и два, чуть меньше, латеральные.

Определение основных групп биологически активных веществ

Качественные реакции. К 1 мл извлечения, полученного, согласно методике, описанной в разделе "Количественное определение", прибавляют 2 - 3 капли железа (III) аммония сульфата раствора 1 % должно наблюдаться черно - зелёное окрашивание (конденсированные дубильные вещества).

Тонкослойная хроматография.

Приготовление растворов.

Раствор СО лютеолин-7-О-глюкозида. Около 0,05 г (точная навеска) лютеолин-7-О-глюкозида, предварительно высушенного при 130-135 °С в течение 3 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют при нагревании на водяной бане в 85 мл спирта 96 %, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО лютеолин-7-О-глюкозида). Срок годности раствора не более 30 суток при хранении в прохладном, защищенном от света месте

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 3 мм. Около 1,0 г помещают в коническую колбу на 100 мл, прибавляют 30 мл воды очищенной, и нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 30 минут. После охлаждения до комнатной температуры полученное извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

На линию старта аналитической хроматографической пластинки со слоем силикагеля на полимерной подложке размером 10 х 10 см наносят 10 мкл испытуемого раствора и рядом 5 мкл раствора СО лютеолин-7-O-глюкозида. Пластинку с нанесенными пробами сушат при комнатной температуре, помещают в камеру, предварительно насыщенную в течение не менее 60 мин смесью растворителей этнлацетат - уксусная кислота (85 : 15) и хроматографируют восходящим способом. После прохождения фронтом растворителей не менее 80 - 90 % длины пластинки от линии старта, ее вынимают из камеры, сушат до удаления следов растворителей. Пластинку обрабатывают алюминия хлорида спиртовым раствором 2 %, выдерживают в

сушильном шкафу при температуре 105 °С в течение 3-5 мин и просматривают в видимом свете и в УФ-свете при длине волны 365 нм.

На хроматограмме раствора СО лютеолин-7-О-глюкозида должна обнаруживаться зона адсорбции желто-зеленого цвета в видимом свете и флуоресценцией желтого цвета в УФ-свете. На хроматограмме испытуемого раствора должны обнаруживаться: одна зона адсорбции желто-зеленого цвета в водимом свете и флуоресценцией желтого цвета в УФ-свете на уровне зоны СО лютеолин-7-О-глюкозвда; две зоны адсорбции желто-зеленого цвета в видимом свете и флуоресценцией коричневого цвета в УФ-свете ниже зоны лютеолин-7-О-глюкозида, зона адсорбции коричневого цвета в водимом свете и флуоресценцией желтого цвета в УФ-свете выше зоны лютеолин-7-О-глюкозвда допускается обнаружение других зон адсорбции (флавоноиды).

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10 %.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10 %.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельчённое сырье - не более 2, 5 %.

Измельченность сырья. Для цельного сырья - частиц, проходящих сквозь сито отверстиями размером 5 мм, не более 5 %. Измельченное сырье. Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями размером 3 мм, - не более 5 %.

Посторонние примеси.

Сырье, изменившее окраску (побуревшее, пожелтевшее и почерневшее). Цельное сырье - не более 2,5 %.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1%.

Тяжелые металлы и мышьяк. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье, измельченное: сумма флавоноидов в пересчете на лютеолин-7-О-глюкозид, не менее 3,0%; дубильные вещества в пересчёте на таннн, не менее 15 %.

Сумма флавоноидов.

Приготовление растворов

Приготовление растворов.

Раствор СО лютеолин-7 -О-глюкозида. Около 0,05 г (точная навеска) лютеолин-7-О-глюкозида, предварительно высушенного при 130-135 °С в течение 3 ч, помещают в мерную колбу вместимостью 100 мл и растворяют при нагревании на водяной бане в 85 мл спирта 96 %, охлаждают, доводят объем раствора тем же спиртом до метки и перемешивают (раствор А СО лютеолин-7-О-глюкозида). Срок годности раствора не более 30 суток при хранении в прохладном, защищенном от света месте

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 2 мм. Около 1 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 100 мл воды очищенной и нагревают, поддерживая слабое кипение в течение 60 минут. Горячее извлечение фильтруют через бумажный складчатый фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. После охлаждения объем извлечения доводят до метки растворителем (раствор А).

1,0 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 0,5 мл уксусной кислоты разведённой 30 %, 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 2 % доводят объем раствора до метки водой очищенной и перемешивают (раствор Б).

Через 40 минут измеряют оптическую плотность раствора Б на спектрофотометре прн длине волны 398 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1,0 мл раствора А, 0,5 мл уксусной кислоты разведённой 30 % доведённый водой очищенной до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора Б СО лютеолин-7-О-глюкозида состоящего 1,0 мл раствора А СО лютеолин-7-О-глюкозида, 0,5 мл уксусной кислоты разведённой 30 %, 2 мл алюминия

хлорида спиртового раствора 2 %, помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл и доводят спиртом 96 % до метки. В качестве раствора сравнения используют раствор, состоящий из 1,0 мл раствора А СО лютеолин-7-О-глюкозида, 0,5 мл уксусной кислоты разведённой 30 % доведённый водой очищенной до метки в мерной колбе вместимостью 25 мл.

Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на лютеолии-7-О-глюкозид абсолютно, сухое сырье в процентах (X) вычисляют по формуле:

А * а0 * 1 * 100 * 25 * 100 * Р

X =---* 100%

А0 * 100 * 25 * а * 1 * (100 - Ш) * 100

где А - оптическая плотность раствора Б испытуемого раствора;

А0 - оптическая плотность раствора Б СО лютеолнн-7-О-глюкозида;

а — навеска сырья, г;

ао - навеска СО лютеолин-7-О-глюкозида Р - содержание основного вещества в СО рутина, %; \У-влажность сырья, %.

Дубильные вещества.

Определение дубильных веществ в пересчете на танин проводят в соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания дубильных веществ в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах» (метод 1).

Упаковка, маркировка и транспортирование. В соответствии с требованиями ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Хранение. В соответствии с требованиями ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ФГБОУ ВО ГТГФА Минздрава России) Юридический адрес: ул. Екатерининская, д.101, г. Пермь, 614990 Почтовый адрес: ул. Полевая, д.2, г. Пермь, 614990 Тел/факс [phone]; E-mail: [e-mail]; http://www.pfa.ru ИНН 5902291011; КПП 590201001; ОГРН 1025900536760

Утверждаю

Ректор фббоу во пгфа Минздрава Рос сии

- • т

В.Г. Лужанин

'UJ>~ 2023 г.

акт

о внедрении результатов диссертационной работы Бояршинова Виталия Дмитриевича, на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае» на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Комиссия в составе сотрудников кафедры фармакогнозии: зав. кафедрой, д. фарм. н., профессора Белоноговой В.Д., доцента кафедры фармакогнозии, к. фарм. н., доцента Турышева А.Ю.; доцента кафедры фармакогнозии, к. фарм. н., доцента Курицына A.B. подтверждает использование материалов диссертационного исследования Бояршинова В.Д., посвященного изучению вопросов фитохимической и морфолого-анатомической диагностики, обоснованию подходов к стандартизации лекарственного сырья и препаратов на основе манжетки мягкой {Alchemilla mollis) в учебном процессе при проведении практических занятий со студентами 3 и 4 курсов фармацевтического факультета, специальность 33.05.01 Фармация, по дисциплине «Фармакогнозия», а также в научно-исследовательской работе.

Члены комиссии:

Зав. кафедрой фармакогнозии д. фарм. и., профессор В-Д- Белоногова

Ж-

Доцент кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцент * У//Х',,-! А.Ю. Турышев

Доцент кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцент

A.B. Курицын

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ФГБОУ ВО ПГФЛ Минздрава России) Юридический адрес: ул. Екатерининская, д.101, г. Пермь, 614990 Почтовый адрес: ул. Полевая, д.2, г. Пермь, 614990 Тел/факс [phone]; E-mail: [e-mail]; http://www.pfa.ru _ИНН 5902291011; КПП 590201001; ОГРН 1025900536760_

;:(^фЕРЖЛД10 f Ректор Ф1 bOV ВО ПГФА Минздрава России

к

й-Р

"Г5

Ы: ¡1 л

1 •; « /У

$ : л1' ^ • Лужанин

2023

АКТ4'"

о внедрении результатов диссертационной работы Бояршинова Виталия Дмитриевича, на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае» па соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Комиссия в составе сотрудников кафедры фармакогнозии: зав. кафедрой, д.фарм.н., профессора Белоноговой В.Д., доцента кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцента Гилевой A.A.; доцента кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцента Курицына A.B. подтверждает использование материалов диссертационного исследования Бояршинова В.Д., посвященного изучению вопросов морфолого-анатомической и фотохимической диагностики, обоснованию подходов к разработке и валидации методов количественного определения биологически активных веществ лекарственного сырья манжетки мягкой {Alchemilla mollis) в учебном процессе при проведении практических занятий с ординаторами, обучающимися по специальности 33.08.03. «Фармацевтическая химия и фармакогнозия».

Члены комиссии:

Зав. кафедрой фармакогнозии д. фарм. и., профессор ^T^t^ В.Д. Белоногова

Доцент кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцент A.A. Гилева

Доцент кафедры фармакогнозии, к. фарм. н. доцент A.B. Курицын

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

(ФГБОУ ВО ПГФА Минздрава России) Юридический адрес: ул. Екатерининская, д. 101, г. Пермь, 614990 Почтовый адрес: ул. Полевая, д.2, г. Пермь, 614990 Тел/факс [phone]; E-mail: [e-mail]; http://www.pfa.ru

ИНН 5902291011; КПП 590201001; ОГРН 1025900536760_

УТВЕРЖДАЮ

рвдрф»»*;?

рт • * ъш

¡эй *

Ректор ФГБОУ ВО ПГФА России

В.Г. Лужанин

т;

-2023 г.

АКТ ВНЕДРЕНИЯ

результатов диссертационной работы Бояршинова Виталия Дмитриевича на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой (ALchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае» представленой на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2 - Фармацевтическая химия, фармакогнозия в работу кафедры фармакологии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Пермская государственная фармацевтическая академия» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Комиссия в составе: заведующего кафедрой фармакологии, доцента, доктора биологических наук Зыковой С.С., профессора кафедры фармакологии, доцента, доктора медицинских наук Диановой Д.Г. подтверждает использование материалов диссертационного исследования Бояршинова В.Д. в курсе дисциплины «Б1.0.28 Клиническая фармакология с основами фармакотерапии» при обучении студентов 4 курса, специальность 33.05.01 Фармация.

заведующего кафедрой фармакологии, доцента, доктора биологических наук

профессора кафедры фармакологии, доцента, доктора медицинских наук

Зыковой С.С.

Диановой Д.Г.

МИНИСТЕРСТВО НАУКИ И ВЫСШЕГО ОБРАЗОВАНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования «Пермский государственный аграрно-технологический университет имени академика Д.Н. Прянишникова» (ФГБОУ ВО Пермский Г АТУ)

О внедрении результатов диссертации Бояршинова Виталия Дмитриевича

В учебный процесс кафедры ботаники и физиологии растений факультета агротехнологий и лесного хозяйства ФГБОУ ВО Пермский 1 АТУ

Мы, нижеподписавшиеся, подтверждаем, что основные результаты исследований, выводы и рекомендации кандидатской диссертационной работы Бояршинова Виталия Дмитриевича на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае» внедрены в учебный процесс кафедры ботаники и физиологии растений при изучении дисциплин «Ботаника», «Антэкология», «Лекарственные и ядовитые растения» читаемых студентам по направлениям подготовки: 35.03.04 Агрономия, направленность (профиль) «Цифровые технологии в АПК»; 35.04.04 Агрономия, направленность (профиль) «Селекция и семеноводство полевых культур»; 36.05.01 Ветеринария, направленность (профиль) «Болезни мелких домашних животных».

Заведующий кафедрой ботаники и физиологии растений ФГБОУ ВО Пермский ГАТУ

УТВЕРЖДАЮ

Зйю. проректора по учебной и

АКТ

Декан факультета агротехнологий и лесного хозяйства

канд.с.-х.наук, доцент

М.В. Серёгин

ФГБОУ ВО Пермский ГАТУ канд.с.-х.наук, доцент

А.П. Чиркова

Автономная некоммерческая организация дополнительного профессионального образования «Пермский институт повышения квалификации работников здравоохранения»

Мы, нижеподписавшиеся, подтверждаем, что основные научные положения, выводы и рекомендации кандидатской диссертации Бояршинова Виталия Дмитриевича на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой (Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае» внедрены в образовательный процесс по программам повышения квалификации и программам профессиональной переподготовки фармацевтических работников по системе

УТВЕРЖДАЮ

Ректор АНО ДПО «Перм ИПК РЗ»

АКТ

О внедрении результатов диссертации Бояршинова Виталия Дмитриевича

НМФО.

Проректор по учебной работе_ Руководитель учебного отдела

Жданкова Ю А.

Макарова Е.Л.

УТВЕРЖДАЮ

Глава КФХ Лещев А.В.

Лещев Антон Викторович

01.02.2023 г.

АКТ

о внедрении результатов диссертационной работы

Бояршинова Виталия Дмитриевича, на тему «Фармакогностическое изучение манжетки мягкой

(Alchemilla mollis (Buser) Rothm.) культивируемой в Пермском крае»

Предложение для внедрения: способ заготовки сырья с увеличением урожайности.

В результате использования результатов диссертационной работы Бояршинова Виталия Дмитриевича в условиях фермерского хозяйства, было установлено, что в условиях культурного выращивания манжетки мягкой в Пермском крае возможна двукратная заготовка сырья. Данный способ позволяет увеличить урожайность надземной массы манжетки мягкой в среднем до 150% за вегетационный период.

Ответственные за внедрение: Глава КФХ, кандидат

сельскохозяйственных наук Лещев Антон Викторович