Фармакогностическое изучение травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Низамова Альфина Ансафовна

• Низамова Альфина Ансафовна
• кандидат наук
• 2022

Оглавление диссертации кандидат наук Низамова Альфина Ансафовна

ВВЕДЕНИЕ

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Актуальные исследования Оупв81втта рвМаркуНит как перспективного

источника адаптогенов

1.1. Характеристика рода Оупв81втта ТИидЬ

1.2. Ботаническое описание вида О. рвМаркуНит

1.3. Ареал распространения рода Оупв81втта ТИидЬ., вида О. рвМаркуНит и 17 оптимальные условия произрастания

1.4. Химический состав О. рвМаркуНит

1.5. Фармакологический спектр О. рвМаркуНит, применение в восточной

медицине

Заключение по главе

ГЛАВА 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ

2.1. Объекты исследования

2.2. Методы исследования

2.2.1. Определение подлинности

2.2.2. Определение показателей качества

2.2.3. Методы фитохимического анализа

2.2.3.1. Методы качественного анализа

2.2.3.2. Методы количественного анализа

2.2.4. Биологические методы исследования

2.2.4.1. Исследование острой токсичности

2.2.4.2. Исследование антиоксидантной активности

2.2.4.3. Исследование антигипоксической активности

2.2.4.4. Исследование адаптогенной активности

2.2.5. Методы статистической обработки результатов

ГЛАВА 3. МОРФОЛОГИЧЕСКОЕ И АНАТОМИЧЕСКОЕ

ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ вУМОЗТЕММЛ РЕМТЛРИУЬЬиМ

3.1. Изучение морфолого-диагностических признаков травы О. рвМаркуПиш

3.2. Изучение анатомо-диагностических признаков травы О. рвМаркуНиш

Выводы к главе

ГЛАВА 4. ФИТОХИМИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ТРАВЫ 56 вУМОЗТЕММЛ РЕМТЛРИУЬЬиМ

4.1. Качественный анализ основных биологически активных веществ травы 56 О. рвМаркуНиш

4.2. Количественный анализ основных биологически активных веществ

травы О. рвМаркуПиш

Выводы к главе

ГЛАВА 5. РАЗРАБОТКА МЕТОДОВ СТАНДАРТИЗАЦИИ ТРАВЫ 92 вУМОЗТЕММЛ РЕМТЛРИУЬЬиМ

5.1. Определение показателей подлинности и качества, коэффициента 92 водопоглощения травы О. рвМаркуПиш

5.2. Разработка критериев подлинности и количественного содержания 101 суммы флавоноидов

5.3. Разработка критериев подлинности и количественного содержания 110 сапонинов

Выводы к главе

ГЛАВА 6. ИЗУЧЕНИЕ БИОЛОГИЧЕСКИХ СВОЙСТВ вУМОЗТЕММЛ

РЕМТЛРИУЬЬиМ

6.1. Определение острой токсичности О. рвМаркуНиш

6.2. Определение антиоксидантной активности О. рвМаркуНиш

6.3. Определение антигипоксической активности О. рвМаркуПиш

6.4. Определение адаптогенной активности О. рвМаркуНиш

Выводы к главе

ЗАКЛЮЧЕНИЕ

ОБЩИЕ ВЫВОДЫ

СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И УСЛОВНЫХ ОБОЗНАЧЕНИЙ

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

ПРИЛОЖЕНИЯ

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое изучение травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum Thunb.)»

ВВЕДЕНИЕ

Актуальность темы исследования. Поиск новых эффективных лекарственных средств - одна из основных задач фармации. Для решения этой задачи необходимо изучение новых видов лекарственных растений и внедрение их в медицинскую практику [60].

Развитие различных патологических процессов во многом связано с ослаблением иммунитета, повышением восприимчивости к болезням, нарушением физического и психосоматического состояний, возникающих из-за воздействия ксенобиотиков, различных видов излучения, ухудшения экологии, обширного распространения социально-значимых заболеваний, непрерывного стресса и т. д. [51, 53, 56, 60].

Коррекция общего состояния организма, а именно повышение резистентности, возможны при применении в качестве лечебно-профилактических средств - фитоадаптогенов [1, 2, 54]. Они занимают определенную нишу среди всего множества лекарственных препаратов на фармацевтическом рынке, которым необходимо уделить особое внимание.

Основная доля растений-адаптогенов представлена эндемичными видами (Дальний Восток, Алтайский край) [46, 48]. В связи с этим стоит вопрос расширения ассортимента лекарственных средств и внедрения в практику ранее малоизученных видов лекарственного растительного сырья за счёт поиска новых терапевтически эффективных источников. Одной из таких перспективных культур, адаптированных к условиям Республики Башкортостан, является гиностемма пятилистная (Оупв81втта рвМаркуНит (ТИипЬ.)) из семейства тыквенные (СисшМасеае).

В восточных странах Оупв81втта рвМаркуНит широко используется из-за способности повышать иммунитет (гуморальный и клеточный), защищать Р-клетки поджелудочной железы, регулировать функции мозга и нервной системы, уменьшать содержание супероксид-аниона и пероксида водорода в нейтрофилах, снижать развитие онкозаболеваний (рака легких, шейки матки, печени) и др. [65, 75, 91, 95, 97, 110, 111, 112]. Несмотря на исследования зарубежными авторами

биологических свойств и химического состава G. pentaphyllum, фармакопейная статья на сырье гиностеммы пятилистной не разработана. В настоящее время в Российской Федерации гиностемма пятилистная практически не изучена. Поэтому фармакогностическое исследование гиностеммы пятилистной как перспективного источника адаптогенов является актуальным.

Степень ее разработанности. С 50-70 гг. прошлого столетия и по настоящее время основные исследования проводят зарубежные учёные. Результаты изучения химического состава сапонинов, флавоноидов, полисахаридов, аминокислот и каротиноидов опубликованы в работах Chi A. (2012), Huang S.C. (2008), Kim S.H. (1988), Tsai Y.C. (2010) и др. [73, 84, 116, 150]. Вопросам изучения фармакологических свойств и применения гиностеммы пятилистной посвящены исследования зарубежных авторов Chen W.C. (1996), Gao D. (2016), Chen L. (2016), Wang T.X. (2018), Chen J.-C. (2009), Lu H.F. (2008) и др., подтверждающие антиоксидантное, гиполипидемическое, противодиабетическое, противовоспалительное, цитотоксическое, нейропротективное,

иммуномодулирующее, цитопротективное, бронхопротективное,

гепатопротекторное, противоязвенное, нефропротективное действия [108, 109, 111, 135, 149, 152].

В Российской Федерации Душкиным А.В. и соавторами разработана фитокомпозиция с повышенной фармакологической активностью с гиностеммой (патент № 2013114221/15, 28.03.2013) [41]. Беленовской Л.М. и соавторами проведен обзор мировой литературы по компонентному составу и биологической активности G. pentaphyllum [5]. Автором Огай М.А. защищена диссертационная работа на тему «Разработка, исследование и стандартизация гипогликемических фитокомпозиций и их лекарственных форм, содержащих женьшень и гиностемму» (2000 г.) [40].

Цель и задачи исследования. Целью исследования является фармакогностическое изучение травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) как перспективного лекарственного растительного сырья адаптогенного действия для внедрения в медицинскую практику.

Для реализации данной цели необходимо решить следующие задачи:

1) провести информационно-литературный анализ изученности Оупв81втта рвМаркуПит ТИипЬ.;

2) провести морфолого-анатомическое исследование травы Оупв81втта рвМаркуПит;

3) провести изучение химического состава основных групп биологически активных веществ травы Оупв81втта рвМаркуПит и определить их количественное содержание;

4) определить подлинность и показатели качества травы Оупв81втта рвМаркуПит, разработать методики качественного и количественного анализа флавоноидов и сапонинов;

5) изучить токсичность и фармакологические свойства Оупв81втта рвМаркуНит;

6) разработать проект фармакопейной статьи «Гиностеммы пятилистной трава».

Научная новизна. Впервые проведены морфологическое и анатомическое исследования травы Оупв81втта рвМаркуНит, интродуцированной в Республике Башкортостан, и установлены ее диагностически значимые признаки.

С помощью современных методов анализа изучено присутствие основных групп биологически активных веществ (БАВ) (полисахаридов, флавоноидов, аскорбиновой кислоты, свободных органических кислот, дубильных веществ, сапонинов) травы гиностеммы пятилистной и определено их количественное содержание.

Впервые с помощью хроматографических методов (тонкослойная хроматография - ТСХ, хроматоденситометрия, газовая хроматография масс-спектрометрия - ГХ/МС, высокоэффективная жидкостная хроматография масс-спектрометрия - ВЭЖХ/МС) изучен качественный состав флавоноидов и сапонинов, идентифицированы 24 соединения. Впервые обнаружено присутствие тритерпенового сапонина - Р-эсцина, который является преобладающим.

Разработаны и валидированы методы количественного определения сапонинов и флавоноидов в траве гиностеммы пятилистной с целью стандартизации сырья.

Методом рентгеновской флуоресцентной спектрометрией идентифицировано 14 аминокислот в траве гиностеммы пятилистной, среди которых мажорной аминокислотой является пролин.

Экспериментально изучены антиоксидантная, антигипоксическая и адаптогенная активности, определена острая токсичность в водных и водно-спиртовых извлечениях из травы гиностеммы пятилистной.

Теоретическая значимость результатов исследования. С применением современных физико-химических методов анализа (спектрофотометрия в ультрафиолетовой (УФ) и видимой областях, спектрометрия в инфракрасной (ИК) области, ТСХ, ГХ/МС, ВЭЖХ/МС и т.д.) получены новые данные о химическом составе травы гиностеммы пятилистной и количественном содержании БАВ, которые могут быть применены для стандартизации и контроля качества сырья. Результаты по изучению антиоксидантных и антигипоксических свойств могут быть использованы для расширения ассортимента препаратов адаптогенного действия.

Практическая значимость результатов исследования. На основании полученных данных по морфолого-анатомическому изучению травы гиностеммы пятилистной, показателей качества и содержанию БАВ (флавоноидов и сапонинов) разработан проект фармакопейной статьи (ФС) «Гиностеммы пятилистной трава». Экспериментальные данные, полученные в результате изучения фармакологических свойств травы гиностеммы пятилистной, могут служить основой для разработки лекарственных средств адаптогенного действия.

Методология и методы исследования. Методология диссертационной работы основана на анализе литературных данных (зарубежных и отечественных), оценке степени изученности и актуальности темы исследования. В процессе выполнения работы нами использовались макро- и микроскопический, хроматографические (ТСХ, хроматоденситометрия, ГХ/МС, ВЭЖХ/МС), спектрофотометрический, титриметрический, гравиметрический методы; спектрофотометрия в УФ и видимой областях; спектрометрия в ИК области; рентгеновская флуоресцентная спектрометрия.

Положения, выносимые на защиту:

1) результаты морфологического и анатомического исследований травы гиностеммы пятилистной;

2) результаты фитохимического изучения травы гиностеммы пятилистной;

3) результаты разработки методик стандартизации травы гиностеммы пятилистной;

4) результаты исследований биологической активности травы гиностеммы пятилистной.

Степень достоверности. Степень достоверности полученных данных исследования определяется достаточным объемом статистически обработанных экспериментальных данных. Обработку результатов исследования проводили с применением методов статистической обработки согласно Государственной Фармакопее XIV (ГФ XIV) с применением компьютерных программ «Microsoft Excel 10», Statistica 10 (StatSoft). Для оценки достоверности межгрупповых различий применяли критерий Тьюки при неравных объемах и критерий Манна-Уитни. Достоверность различий между экспериментальными величинами определялось по критерию Стьюдента. Валидацию разработанных методик количественного определения проводили согласно общей фармакопейной статье (ОФС) ГФ XIV «Валидация аналитических методик». Выводы, сформулированные в диссертации, аргументированы и логически вытекают из результатов выполненных фармакогностических и фармакологических исследований [16, 60].

Апробация результатов. Основные положения диссертационной работы диссертанта обсуждены и доложены на VII Всероссийской научной конференции студентов и аспирантов с международным участием «Молодая фармация -потенциал будущего» (г. Санкт-Петербург, СПХФА, 2017 г.), XXV Российском Национальном конгрессе «Человек и лекарство» (Москва, 2018 г.), 2-ой международной конференции Pharmacy Updates (Тегеран (Иран), 2019 г.), VII научной конференции с международным участием «Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения» (Москва, ВИЛАР, 2020 г.), XVIII

Санкт-Петербурских фитотерапевтических чтениях «Фитотерапия в период пандемии» (Санкт-Петербург, Санкт-петербурское общество терапевтов им С.П. Боткина, 2020 г.), 1-м Китайско-Российском международном фармацевтическом форуме выпускников (Харбин, 2020 г.), 3-ем ежегодном конгрессе ТРИагтБ (Тегеран (Иран), 2021 г.).

Личный вклад автора. Автор диссертационной работы лично участвовал в выборе цели и задач, экспериментально-исследовательской работе, статистической обработке результатов и анализе полученных данных. Ключевые этапы исследования по теме диссертации автором отражены в докладах на российских, зарубежных конференциях и публикациях. Диссертация и автореферат написаны лично автором.

Внедрение результатов исследования. Результаты исследований диссертационной работы введены в учебный процесс кафедр фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России; в работу ООО «Травы Башкирии». Разработан проект ФС «Гиностеммы пятилистной трава», который принят к рассмотрению в ФГБУ «НЦЭСМП» Минздрава России.

Соответствие диссертации паспорту научной специальности. Научные положения диссертационной работы соответствуют паспорту специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия, пунктам 3 и 6 паспорта специальности фармацевтическая химия, фармакогнозия.

Связь задач исследования с проблемами фармацевтических наук. Диссертационная работа выполнена в соответствии с планом научно-исследовательских работ ФГБОУ ВО «Башкирский государственный медицинский университет» Минздрава России, номер государственной регистрации АААА-А20-120011090030-9.

Объем и структура диссертации. Диссертационная работа представлена на 168 страницах компьютерного текста и включает в себя введение, обзор литературы, описание материалов и методов исследований, четыре

экспериментальные главы, выводы, список литературы и приложения. Библиография состоит из 160 источников, 99 из которых иностранных авторов. Иллюстрация в работе представлена 41 таблицей и 45 рисунками.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 19 научных работ, в том числе 4 статьи в изданиях, рекомендуемых Высшей аттестационной комиссией при Минобрнауки России; 1 статья, индексированная в международной базе данных Scopus; 1 патент (регистрационный № 2021120922, 13.07.2021).

ГЛАВА 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ

Актуальные исследования Gynostemma pentaphyllum как перспективного

источника адаптогенов

Впервые данное растение было описано в 1406 году во времена династии Мин Чжу Сяо в книге «Лекарственные травы против голода». Первое западное описание растения было опубликовано в 1784 году шведским естествоиспытателем Карлом Петером Тунбергом под названием Vitis pentaphylla (Флора Японии). Позднее в 1825 году немецко-голландский ботаник Карл Людвиг Блюм перевел данный вид в другой род Gynostemma (G. simplicifolium). Японский ботаник Макино Томитаро (1902 г.) сохранил специфический эпитет из первого описания Тунберга и таким образом, создал таксон Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino, действующий по сей день [144, 146].

Имеются сведения, о том, что Gynostemma pentaphyllum в Китае используется свыше 500 лет. В книге «Травы от голода», опубликованной во времена династии Мин (1368-1644 гг. н.э.), описывается использование травы в качестве пищи. Известный травник Ли Ши-Чжэнь (1578 г.р.) позже в своей книге «Compendium of Materia Medica» описал Gynostemma pentaphyllum как средство для лечения гематурии, отеков и болей в глотке и шеи, опухолей и травм [85, 117, 156].

Согласно принципам традиционной китайской медицины, вкус Gynostemma pentaphyllum слегка горьковатый, нейтральный, теплый, усиливает «Инь» и поддерживает «Янь», что предполагает использование этого растения для повышения устойчивости организма к инфекциям и как противовоспалительное средство [70, 155].

Китайские медики, начиная с восьмидесятых годов прошлого века, применяли гиностемму пятилистную при лечении отеков, опухолей, гематурии, травм [75]. Современные учёные рекомендуют ее для диабетиков как заменитель сахара. Gynostemma pentaphyllum - южный женьшень имеет антиоксидантные свойства, снижает рост опухолей, регулирует в крови уровень холестерина,

давление, повышает выносливость, иммунитет, оказывает адаптогенное воздействие [75, 97, 111, 125, 133, 145]. Применение гиностеммы рекомендовано спортсменам и людям с большой физической нагрузкой. В Японии это растение показано как мочегонное, жаропонижающее, противовоспалительное и тонизирующее средство.

В России в 2013 году получена композиция, обладающая выраженным гиполипидемическим, гипотензивным, гепатопротекторным и

гипогликемическим действием, содержащая высушенные стебли, листья, побеги, усики гиностеммы пятилистной и полисахарид арабиногалактан из лиственницы сибирской или Гмелина. Фитокомпозицию получали методом механохимии с добавлением арабиногалактана с целью повышения растворимости и биоусвояемости биологически активных веществ, содержащихся в гиностемме пятилистной [41].

1.1. Характеристика рода Суио81втта ТИипЬ.

Гиностемма (ОупвяХвтта) (рис. 1) - это трава в традиционной китайской гербологии, которая использовалась в течении многих веков, представительница одного из самых распространенных семейства тыквенные (СисигЬйасеае) [69].

Рисунок 1 - Гиностемма пятилистная в природе

Род Gynostemma - многолетние ползучие травы, голые или опушенные. Листья с тремя-девятью листочками, чередующиеся, редко простые, листовая

пластинка - яйцевидно-ланцетная, усики раздвоенные.

Растения двудомные, редко однодомные. Цветки актиноморфные, однополые с базальными прицветниками, собранные в пазушные соцветия, в кисти или метелки. Околоцветник вместе с основанием тычиночных нитей образует трубку, которая сращена с нижней завязью.

Мужской цветок: трубка чашечки короткая, 5-лопастная, чашелистики узколанцетные. Венчик зеленоватый или белый, глубоко 5-лопастной, лепестки ланцетные или яйцевидно-ланцетные. Тычинок 5, тычиночные нити короткие и вставлены в основание околоцветника. Пыльники прямые, яйцевидные, из двух теков, продольно раскрывающиеся. Пыльцевые зерна шаровидные или эллиптические, продольно-полосатые или гладкие, рудиментарный пестик отсутствует.

Женский цветок. Чашечка и венчик схожи с мужским цветком: трубка чашечки короткая, 5-лопастная, чашелистики узколанцетные. Венчик зеленоватый или белый, глубоко 5-лопастной, лепестки ланцетные или яйцевидно-ланцетные. Пестик шаровидный, состоящий из трёх, реже пяти плодолистиков. Рыльца 1-2, серповидные или нерегулярно надрезанно-зубчатые.

Плод - шаровидная ягода 5-8 мм, которая при созревании становится от темно-зеленого до черного цвета с 2-3 широкояйцевидными семенами (рис. 2) [69, 92, 115, 154].

Рисунок 2 - Зрелые плоды Gynostemma ре^арНуНит

1.2. Ботаническое описание вида G. pentaphyllum

Таксономия:

Царство: Plantae - Растения Отдел: Magnoliophyta - Цветковые Класс: Magnoliopsida - Двудольные Порядок: Cucurbitales - Тыквенные Семейство: Cucurbitaceae - Тыквенные Род: Gynostemma - Гиностемма

Вид: Gynostemma pentaphyllum - Гиностемма пятилистная [124]. Согласно систематическому положению деревянистых лиан российского Дальнего Востока по А.Л. Тахтаджяну (1980 г.) гиностемма пятилистная занесена в порядок Violales - Фиалкоцветные [18].

Гиностемма пятилистная (Gynostemma pentaphyllum) - многолетняя травянистая или субдревесная листопадная лиана длиной 2-8 м с ползучим корневищем. Основной стебель до 1 см толщиной, вьющийся, олиственный, в узлах с беловатым опушением. Листья простые, округлые или яйцевидные, с 3-5 яйцевидными или узкоэллиптическими заостренными зубчатыми долями, тонкие, щетинисто-опушенные. Жилки слабые или слегка заметные. Верхняя поверхность волосистая или голая (кроме жилок), нижняя поверхность относительно голая. Диаметр листа 4-10 см, черешок длиной 2-7 см. Имеются ветвящиеся усики.

Гиностемма пятилистная имеет раздельнополые цветки, собранные в соцветия, растение двудомное.

Мужские соцветия: многоцветковые, мелкие или крупные, собранные в широкие метелки длиной 5-30 см, боковые ветви до 10 см длиной, волосистые или голые, в конце с 1 -5 цветками в пучках (или в сгущенных кистях), мелко опушенные. Цветоножка длиной 1-7 см, прицветники длиной 1-5 мм.

Мужские цветки: цветоножка нитевидная длиной 1-7 мм. Околоцветник 2,5-8 мм в диаметре с неглубоким цветоложем шириной 0,5 мм. Чашелистики узкоэллиптические, линейные длиной 0,5-1 мм; лепестки венчика треугольные,

узкоэллиптические 1-3,5 на 0,5-1 мм, верхушечно-заостренные, с адаксиальной стороны - волосистые или бугорчатые. Тычинки с тычиночными нитями длиной 0,5-1 мм, с шаровидным пыльником диаметром 0,5-1 мм без или с очень коротким надсвязником (рис. 3) [115, 120, 151, 154, 155].

Формула цветка: * $ Са(5) Со(5) А(5)

Рисунок 3 - Мужской цветок: b - мужское соцветие; c - мужской бутон;

d, e - мужские цветки; f - андроцей (заимствован из открытого доступа The International Plant Names Index)

Женские соцветия: строение как у мужских соцветий, но меньшего размера.

Женские цветки: почти шаровидный околоцветник, двойной, диаметром 2-4 мм. Гинецей ценокарпный диаметром 1 мм, голый или редко волосатый, цветоножка длиной 2-4 мм (рис. 4) [115, 120, 151, 154, 155].

Формула цветка: * ^ Ca(5) CO(5) A0 G(3)

Рисунок 4 - Женский цветок: a - секционная ветвь с женскими соцветиями; b - женское соцветие; c - женский цветок; d - гинецей; e - узел с нарушением

целостности; f - плод; g - семя (заимствован из открытого доступа The International Plant Names Index)

Размножение гиностеммы пятилистной происходит стеблевыми черенками или семенами.

Вредитель гиностеммы пятилистной - листоед Paridea angulicollis, впервые обнаруженный в Приморском крае. Основная зона распространения - Южная Азия (Китай, Тайвань, Япония, Корея) [130].

1.3. Ареал распространения рода Gynostemma Thunb., вида G. pentaphyllum и оптимальные условия произрастания

Род Gynostemma включает 17 видов, обитающие от тропической Азии до Восточной Азии, от Гималаев до Японии, Малайзии и Новой Гвинеи, 14 - в Китае

(Gynostemma pentagynum, Gynostemma yixingense, Gynostemma cardiospermum, Gynostemma microspermum, Gynostemma aggregatum, Gynostemma laxiflorum, Gynostemma simplicifolium, Gynostemma laxum, Gynostemma burmanicum, Gynostemma pentaphyllum, Gynostemma guangxiense, Gynostemma compressum, Gynostemma longipes, Gynostemma caulopterum) из них 9 видов являются

эндемиками (рис. 5) [81, 92].

Рисунок 5 - Географическое распространение рода Gynostemma (заимствован из открытого доступа The International Plant Names Index)

Вид Gynostemma ре^аркуНит наиболее распространен в Индии, Непале, Бангладеш, Шри-Ланка, Лаосе, Мьянме, Корее и Японии [58, 59, 128]. Типичные места обитания этого вида - заросли кустарников, леса, обочины дорог, низины, а также встречается на горных склонах на высоте 300-3200 м над уровнем моря [160]. Gynostemma pentapкyllum предпочитает расти в теплой и влажной среде. Температура воздуха составляет 15-41,5°С, оптимальная температура воздуха -15-30°С. Для выращивания важен световой фактор Gynostemma pentapкyllum [131]. Растение предпочитает тенистые участки с относительным освещением 4080% и оптимальным относительным освещением 65-75%. Многолетняя лиана является морозостойким растением с предварительным укрытием грунта листвой или нетканым материалом [94, 153, 160].

В Российской Федерации встречается гиностемма пятилистная на территории острова Кунашир (Дальний Восток) (рис. 6), где произрастает на северо-восточной границе ареала в хвойно-широколиственных лесах среди кустарников и по долинам рек [3, 45].

Гиностемма пятилистная внесена в «Список объектов растительного мира, занесенных в Красную книгу Сахалинской области» [20]. Данное растение имеет

статус - уязвимый вид. Лимитирующими факторами являются: малочисленность островной популяции и редкая встречаемость. Растение рекомендовано к охране на Дальнем Востоке России, охраняется в природном заповеднике «Курильский», ему необходим постоянный контроль за состоянием популяции [3, 4].

Рисунок 6 - Ареал распространения вида Gynostemma pentaphyllum (заимствован из открытого доступа The International Plant Names Index)

1.4. Химический состав G. pentaphyllum

Гиностемма пятилистная содержит целый комплекс различных классов веществ, о котором можно судить по зарубежным исследованиям.

Гиностемму пятилистную называют «вторым женьшенем» из-за схожести химического состава с женьшенем настоящим. Несмотря на то, что они принадлежат к разным семействам и биологически активные компоненты содержатся в разных органах растении (Gynostemma pentaphyllum - надземная часть, Panax ginseng - подземная часть), их химический состав схожий [5].

Из гиностеммы пятилистной выделены сапонины - гипенозиды, сходные по структуре со стероидными гормонами человека [47].

В наземных частях растения зарубежными авторами выявлены следующие группы соединении:

А) тритерпеноиды: гинозиды А, B, C, D, E; фанозид; гинзенозиды Rb, Rbi, Rb3, Rd, F2; гиносапонины TN-1, TN-2; гипенозиды I-LXXVIII; гилонгипозид I; 6 -

малонилгинзенозид Rb1; 6"- малонилгинзенозид ЯЬ; 6"- малонилгинзенозид V [5, 47, 74, 75, 82, 84, 140, 148].

Структура гипенозида (синонимы: гинзенозиды, гинсенозиды, панаксозиды) представлена гипеносапогенином и гинсенозидом, присоединёнными к сахарам. В таком виде они являются гликозидами гипеносапогенинов или гинсенозидов (табл. 1).

Таблица 1 - Структуры активных компонентов Gynostemma pentaphyllum

Структуры соединений

Гипенозиды

Я1

Я2

Я3

Гипенозиды

Я1

Я2

Я3

Я4

Гипенозиды

Я1

Я2

I

-ё1с-(ё1с)-гИаш

-ё1с-ё1с

Н

XXII

-ё1с-ё1с

СН2ОН

-ё1с-ху1

Н

XXVII

-ё1с-ё1с

СН2ОН

II

ё1с-(ё1с)-гЬаш

-ё1с-ё1с

Н

XXIII

-ё1с-ё1с

СН2ОН

Н

ё1с

XXVIII

-ё1с-ё1с

СНО

III

-ё1с-ё1с

-ё1с-ё1с

Н

XXIV

-ё1с-ё1с

СНО

Н

ё1с

XXIX

-ага-ё1с

СНО

IV

-§1с-в1с

-ё1с-ху1

Н

XXV

-ага-ё1с

СНО

Н

ё1с

V

-§1с-в1с

-§1с-гЬаш

Н

XXVI

-ага-ё1с

СНО

ё1с

Н

Гипенозиды

Я1

Я2

VI

_§1с-(£1с)-гНат_

Н

XXX

ё1с

СН2ОН

Н

Н

А

-ё1с-(гЬаш)- ё1с

-ё1с-ё1с

VII

-ё1с-гЬаш

-ё1с-гЬаш

Н

XXXI

-ё1с-ё1с

СН2ОН

Н

Н

в

-ё1с-(гЬаш)- ё1с

-ё1с-гЬаш

VIII

-ё1с-ё1с

ё1с

Н

XXXII

ё1с

СН2ОН

Н

-ё1с-

ё1с

Е

-ё1с-ё1с

-ё1с-гЬаш

IX

ас

-ё1с-ху1

Н

XXXIII

-ё1с-ё1с

СНО

Н

Н

Б

-ё1с-(гЬаш)- ё1с

-ё1с

X

ас

-ё1с-гЬаш

Н

XXXIV

-ё1с-ё1с

СНО

-ё1с-гЬаш

Н

О

-ё1с-гЬаш

-ё1с-гЬаш

XI

XII

XIII

-ё1с-гЬаш

ё1с

Н

XXXV

-ё1с-ё1с

СНО

-ё1с-ху1

Н

-ё1с

-ё1с-ху1

О1с

ё1с

Н

-ё1с

-ё1с-гЬаш

Н

-ё1с-ху1

Н

К

-ё1с-гЬаш

-ё1с

I

3

Структуры соединений

XIV Н -§1с-гЬаш Н

XV -§1с-ху1 -§1с-ху1 Н

XVI -§1с- -§1с-гЬаш Н

XVII ас -81с-я1с Н

XVIII -§1с-(§1с)-гЬаш -§1с-гЬаш ОН

XIX -ё1с-ё1с -§1с-гЬаш ОН

XX -§1с-(§1с)-гЬаш ^с^с ОН

XXI Н -§1с-ху1 ОН

си.

М

N

Н

Н

-^с

^1с-гИаш

Гипенозиды Я2 Яэ Я4 Гипенозиды Я1 Я2 Яэ Я4 Я5 Я6 Я7

XXXVI -ага-§1с СНО Н -§1с-гЬаш XLII ^с^с ОН СНэ ОН -0§1с-§1с СНэ Н

XXXVII -ага-§1с СНО Н -§1с-ху1 XLIII ^с^с ОН СНэ ОН -0§1с-гЬаш СНэ Н

XXXVIII ^с^с СН2ОН Н Н XLIV Б1с ОН СНэ ОН -0§1с-§1с СНэ Н

XXXIX ^с^с СН2ОН ОН Н (20Я) XLV Б1с ОН СНэ ОН -0§1с-гЬаш СНэ Н

XL ^с^с СНО ОН Н (20Я) XLVI ^с^с ОН СНэ ОН -0§1с СНэ Н

XLI ^с^с СН2ОН Н Н (20Я) XLVII ^с^с ОН СНэ ОН -0§1с-гЬаш СНэ ОН

XLVIII -ага-(§1с)-гЬаш Н СНО Н ОН СН2-0§1с Н

XLIX -ага-( ху1)-гЬаш Н СНО Н ОН СН2-0§1с Н

Примечание. glc - глюкоза, rham - рамноза, xyl - ксилоза, ara - арабинопираноза.

Б) стероиды: 24,24-диметил-5а-холест-7-ен-3р-ол; (24E)- 24,24-диметил-5а-холест-7,22-диен-3р-ол; 24,24-диметил-5а-холеста-7,25-диен-3р-ол; (22E,24R)-5a-стигмаста-7,22-диен-3р-ол; 14а-метил-5а-эргоста-9(11),24(28)-диен-3р-ол; 24,24-диметил-5а-холестан-3р-ол; 24а-этил-5а-холестан-3р-ол; 24,24-диметил-5а-холест-8-ен-3р-ол; (24К)-14а-метил-5а-эргост-9(11)-ен-3р-ол; (24S)- 14а-метил-5а-эргост-9(11)-ен-3р-ол; (24R)- 5а-стигмаст-7-ен-22-ин-3р-ол; 24,24-диметил-5а-холест-7-ен-22-ин-3р-ол; 24,24-диметил-5а-холеста-7,25-диен-22-ин-3р-ол;

4а,14а-диметил-5а-эргоста-7,9(11),24(28)-триен-3р-ол; спинастерин;

обтусифолиол; грамистерин; циклоэукаленин; 24р-этил-25-дегидролофенол; цитростадиенол; Р-ситостерин; изофукостерин [5, 47, 75].

В) полисахариды: полисахарид гиностеммы пятилистной 1a (GPP1a), полисахарид гиностеммы пятилистной 2b (GPP2b), полисахарид гиностеммы пятилистной 3a (GPP3a), водорастворимый полисахарид (PGSP) [72, 73, 112];

Г) флавоноиды: рутин, кверцетин, омбуозид, омбуин, изорамнетин-3-О-рутинозид, изорамнетин, кверцетин-ди-(рамно)-гексозид, кверцетин-рамно-гексозид, кемферол-рамно-гексозид, кемферол-3-О-рутинозид, бензил-О-P-d-глюкопиранозид, витексин [5, 75, 76, 79, 84, 90, 157].

Кроме того, было установлено, что гиностемма пятилистная содержит: 18 аминокислот (включая 8 незаменимых) [64, 116]; каротиноиды (а-каротин и Р-каротин, цис-неоксантин, виолаксантин, ауксантин, лютеоксантин, лютеин), хлорофиллы [83, 150]; органические кислоты (малоновая кислота) [90]; фенолкарбоновые кислоты (кофейная кислота) [64]; микроэлементы (Cu, Fe, Zn, Mn, Co, Ni, Se, Mo, Sr) [75, 78]; жирные кислоты (пальмитиновая и линоленовая кислоты) [79, 129, 157]; азотсодержащие соединения (аллантоин), витамины, белки [75].

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Низамова Альфина Ансафовна, 2022 год

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1. Адаптогены и родственные группы лекарственных препаратов - 50 лет поисков / Е.П. Студенцов, С.М. Рамш, Н.Г. Казурова [и др.] // Обзоры по клинической фармакологии и лекарственной терапии. - 2013. - Т. 11, № 4. - С. 3-43.

2. Арушанян, Э.Б. Адаптогены растительного происхождения: учебное пособие для студентов / Э.Б. Арушанян, Э.В. Бейер. - Ставрополь: СтГМУ, 2017. - 149 с.

3. Баркалов, В.Ю. Флора Курильских островов / В.Ю. Баркалов. - Владивосток: Дальнаука, 2009. - 468 с.

4. Баркалов, В.Ю. Флора природного заповедника «Курильский» и заказника «Малые Курилы» (Сахалинская область) / В.Ю. Баркалов, Н.А. Еременко. -Владивосток: Дальнаука, 2003. - 285 с.

5. Беленовская, Л.М. Gynostemma pentaphyllum (Cucurbitaceae): компонентный состав и биологическая активность / Л.М. Беленовская, А.Л. Буданцев, Н.В. Битюкова // Растительные ресурсы. - 2018. - Т. 54, № 4. - C. 443-495.

6. Беленький, М.Л. Элементы количественной оценки фармакологического эффекта / М.Л. Беленький. - 2-е изд., перераб. и доп. - Ленинград: Медгиз, 1963. - 146 с.

7. Беликов, В.Г. Фармацевтическая химия: в двух частях. Часть 1. Общая фармацевтическая химия / В.Г. Беликов. - 3 изд., перераб. и доп. - Пятигорск, 2003. - 720 с.

8. Беляков, К.В. Методологические подходы к определению биологически активных веществ в лекарственном растительном сырье спектрофотометрическим методом / К.В. Беляков. - М., 2004. - 188 с.

9. Биологические свойства новых производных урацила / И.В. Петрова, В.А. Катаев, С.А. Мещерякова [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана. - 2013. - Т. 8, № 6. - С. 163-165.

10. Биомедицинское (доклиническое) изучение лекарственных средств, влияющих на работоспособность: методические рекомендации / Н.Н.

Каркищенко, В.Н. Каркищенко, Е.Б. Шустов [и др.]. М.: Научный центр биомедицинских технологий ФМБА, 2017. - 134 с.

11. Булгаков, Т.В. Фармакогностическое изучение болиголова пятнистого (Conium maculatum L.): дис...канд. фарм. наук: 14.04.02 / Булгаков Тимур Вилюрович. - Москва, 2019. - 171 с.

12. Влияние некоторых видов лекарственного растительного сырья на систему гемостаза in vitro / Н.В. Кудашкина, Э.Х. Галиахметова, Л.И. Баширова [и др.] // Традиционная медицина. - 2021. - № 1 (64). - С. 38-42.

13. Высокоэффективная тонкослойная хроматография при анализе тритерпеновых сапонинов Gynostemmapentaphyllum / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина, [и др.] // Медицинский вестник Башкортостана. - 2021. - Т. 16, № 5. - С. 21-26.

14. Галиахметова, Э.Х. Исследование содержания кверцетина в листьях лимонника китайского / Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова // Сеченовский вестник. - 2018. - № 2. - С. 58-62.

15. ГОСТ 12.1.007-76 Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности. - М.: Стандартинформ, 2007. - 7 c.

16. Государственная фармакопея Российской Федерации XIV изд. [Электронный ресурс] // Федеральная электронная медицинская библиотека, 2018. - Режим доступа: http ://www. femb.ru/

17. Государственная фармакопея СССР: Вып. 1: Общие методы анализа / МЗ СССР. - 11-е изд., доп. - М.: Медицина, 1987. - 336 с.

18. Денисов, Н.И. К систематическому обзору деревянистых лиан российского Дальнего Востока / Н.И. Денисов // Бюллетень Ботанического сада-института ДВО РАН. - 2007. - № 1. - С. 45-50.

19. Доан, Т.Н. Гиностемма пятилистная - ценное лекарственное растение Вьетнама / Т.Н. Доан // Актуальные вопросы в лесном хозяйстве: материалы III международной научно-практической конференции молодых ученых. -Махачкала, 2019. - С. 71-72.

20. Еремин, В.М. Красная книга Сахалинской области: Растения и грибы / В.М. Еремин. - Кемерово: Технопринт, 2019. - 354 с.

21. Кочетков, Н.К. Химия биологически активных природных соединений / Н.К. Кочетков. - М.: Химия, 1970. - 378 с.

22. Кроткова, О.А. Сравнительное изучение липофильных веществ растений рода Euphrasia L / О.А. Кроткова, Т.В. Бомбела, В.М. Петриченко // Химия растительного сырья. - 2014. - № 1. - С. 147-151.

23. Кудашкина, Н.В. Фитохимический анализ: учебное пособие по фармакогнозии для студентов. / Н.В. Кудашкина, С.Р. Хасанова, С.А. Мещерякова. - Уфа: ФГБОУ ВО БГМУ Минздрава России, 2019. - 193 с.

24. Куркин, В.А. Определение сапонинов в корнях женьшеня / В.А. Куркин, А.С. Акушская // Фармация. - 2012. - № 3. - С. 18-20.

25. Куркин, В.А. Фармакогнозия: учебник для студентов фармацевтических вузов.

- Изд. 2-ое, перераб. и доп. / В.А. Куркин. - Самара: Офорт, 2007. - 1239 с.

26. Миронов, А.Н. Руководство по проведению доклинических исследований лекарственных средств / А.Н. Миронов, Н.Д. Бунатян. - Тула: Гриф и К, 2012.

- 944 с.

27. Морфолого-анатомическое изучение листьев гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)) / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина, Н.В. Кудашкин // Фармацевтическое образование, наука и практика: горизонты развития: материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием, посвященной 50-летию фармацевтического факультета КГМУ. - Курск, 2016. - С. 505-507.

28. Низамова, А.А. Изучение аминокислотного и элементного состава листьев гиностеммы пятилистной / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина // Фармацевтическое образование, современные аспекты науки и практики: материалы всероссийской научно-практической конференции с международным участием. - Уфа, 2016. - С. 171-173.

29. Низамова, А.А. Изучение антиоксидантной активности листьев гиностеммы пятилистной / А.А. Низамова, М.В. Свирская, Д.Р. Сулейманова // Вестник Южно-Казахстанской медицинской академии. - 2017. - Т. 81, № 4- С. 134-136.

30. Низамова, А.А. Изучение биологической активности листьев гиностеммы пятилистной, инродуцированной на территории Республики Башкортостан / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина // Материалы шестой международной научно-практической конференции. - Полтава, 2018. - С. 177178.

31. Низамова, А.А. Изучение дубильных веществ листьев гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)) / А.А. Низамова // Вопросы теоретической и практической медицины: сборник материалов 82-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых. - Уфа, 2017. - С. 718-723.

32. Низамова, А.А. Исследование флавоноидов травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)) / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина // Современные тенденции развития технологий здоровьесбережения: сборник седьмой научной конференции с международным участием. - М., 2019. С. 268-272.

33. Низамова, А.А. Определение аскорбиновой кислоты спектрофотометрическим методом в листьях гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)) / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина // III Гаммермановские чтения: сборник научных трудов научно-методической конференции. - СПб., 2017. - С. 98-100.

34. Низамова, А.А. Определение содержания экстрактивных веществ в листьях гиностеммы пятилистной, инродуцированной в Республике Башкортостан / А.А. Низамова, М.В. Свирская, Д.Р. Сулейманова // Вестник ЮжноКазахстанской медицинской академии. - 2017. - Т. 81, № 4. - С. 136-138.

35. Низамова, А.А. Применение спектрофотометрического анализа в изучении некоторых групп биологически активных веществ гиностеммы пятилистной

(Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)) / А.А. Низамова // Вестник Башкирского государственного медицинского университета. - 2019. - № S1. - С. 1176-1179.

36. Низамова, А.А. Стандартизация листьев гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum (Thunb.)), интродуцированной на территории Республики Башкортостан, с использованием микроскопического метода исследования / А.А Низамова // Фармация. - 2017. - № S. - С. 726-729.

37. Низамова, А.А. Товароведческие показатели сырья гиностеммы пятилистной / А.А Низамова // Материалы XII научно-практической конференции молодых ученых и студентов ТГМУ им.Абуали ибни Сино с медждунар. участием, посвященной «Году молодежи». - Душанбе, 2017. - С. 310.

38. Низамова, А.А. Тонкослойная хроматография в анализе Gynostemmae pentaphylli / А.А. Низамова // Сборник тезисов международной научно-практической конференции студентов и молодых учёных. - Минск, 2020. - С. 1200.

39. Низамова, А.А. Фенольные соединения листьев гиностеммы пятилистной / А.А. Низамова, Э.Х. Галиахметова, Н.В. Кудашкина // Фенольные соединения: свойства, активность, инновация: сборник научных статей по материалам X Международного симпозиума «Фенольные соединения: фундаментальные и прикладные аспекты» / отв. ред. Н.В. Загоскина - М.: ИФР РАН., 2018. - С. 491-494.

40. Огай, М.А. Разработка, исследование и стандартизация гипогликемических фитокомпозиций и их лекарственных форм, содержащих женьшень и гиностемму: автореф. дис. ... канд. фарм. наук: / Огай Марина Алексеевна. -Пятигорск, 2000. - 23 с.

41. Пат. RU 2 568 883 C2 Российская Федерация, МПК А61К 36/424, А61К 31/715, А6 Р 1/16, А61Р 3/00, А61Р 9/02. Композиция с повышенной фармакологической активностью на основе гиностеммы пятилистной / А.В. Душкин, Е.И. Верещагин, М.И. Душкин [и др.]; заявитель и патентообладатель ООО «Вита эст про». - № 2013114221/15; заявл. 28.03.2013; опубл. 20.11.2015, Бюл. № 32. - 10 с. : ил.

42. Пат. SU 1 507 394 A1 СССР, МПК А 61 К 35/78. Способ количественного определения флавоноидов в растительном сырье / В.В. Беликов, Н.Т. Колесник; заявитель и патентообладатель Всесоюзный научно-исследовательский институт химии и технологии лекарственных средств - № 4301201/28-14; заявл. 25.08.1987; опубл. 15.09.1989, Бюл. № 34.

43. Пашкова, Г.В. Ренгенофлуоресцентный анализ молока и основанных на нем продуктов / Г.В. Пашкова // Аналитика и контроль. - 2010. - Т.14, № 1. - С. 4-15.

44. Полисахариды травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum Thunb.) / А.А. Низамова, З.И. Игзакова, Э.Х. Галиахметова [и др.] // Традиционная медицина. - 2020. - № 2 (61). - С. 36-39.

45. Пробатова, Н.С. Род Гиностема - Gynostemma // Сосудистые растения советского Дальнего Востока. - СПб: Наука, 1987. - С. 136-137.

46. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / А.Л. Буданцев, Л.М. Беленовская, Н.А. Медведева [и др.]. - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2008. - Т. 1. - 424 с.

47. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / А.Л. Буданцев, Л.М. Беленовская, Н.А. Медведева [и др.]. - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2009. - Т. 2. - 520 с.

48. Растительные ресурсы России: Дикорастущие цветковые растения, их компонентный состав и биологическая активность / А.Л. Буданцев, Л.М. Беленовская, Н.А. Медведева [и др.]. - СПб.; М.: Товарищество научных изданий КМК, 2010. - Т. 3. - 560 с.

49. Самылина, И.А. Фармакогнозия: Атлас: учебное пособие / И.А. Самылина, О. Г. Аносова. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2010. - Т. 1. - 188 с.

50. Самылина, И.А. Фармакогнозия: учебник / И.А. Самылина, Г.П. Яковлев. -М.: ГЭОТАР-Медиа, 2013. - 976 с.

51. Синяков, А.Ф. Жизнь без рака. Природные средства против онкологии. - М.: Эксмо, 2013. - 259 с.

52. Сирота, Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы / Т.В. Сирота // Вопросы медицинской химии. - 1999. -Т. 45, № 3. - С. 263-272.

53. Сравнение химико-аналитических методов определения танидов и антиоксидантной активности растительного сырья / Е.И. Рябинина, Е.Е. Зотова, Е.Н. Ветрова, Н.И. Пономарева // Аналитика и контроль. - 2011. - Т. 15, № 2. - С. 202-208.

54. Стандартизация сырья и препаратов женьшеня / А.С. Акушская, В.А. Куркин, М.В. Шнытко, Л.А. Клейн // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. - 2012. - Т. 14, № 5-3. - С. 691-695.

55. Фархутдинов, Р.Р. Методики исследования хемилюминесценции биологического материала на хемилюминометре ХЛ-003 / Р.Р. Фархутдинов, С.И. Тевдорадзе // Методы оценки антиоксидантной активности биологически активных веществ лечебного и профилактического назначения: сборник тезисов докладов научно-практического семинара. - М.: РУДН, 2005. - С. 147154.

56. Федин, А.И. Клинические рекомендации по лечению и профилактике ишемического инсульта / А.И. Федин, К.Р. Бадалян // Журнал неврологии и психиатрии им. С.С. Корсакова. - 2019. - Т. 119, № 8. - С. 91-96.

57. Халиуллин, Ф.А. Инфракрасная спектроскопия в фармацевтическом анализе: учебное пособие / Ф.А. Халиуллин, А.Р. Валиева, В.А. Катаев. - М.: ГЭОТАР-Медиа, 2017. - 160 с.

58. Харкевич, С.С. Редкие виды растений советского Дальнего Востока и их охрана / С.С. Харкевич, Н.Н. Качура. - М.: Наука, 1981. - 232 с.

59. Харкевич, С.С. Сосудистые растения советского Дальнего Востока / С.С. Харкевич. - Л.: Наука, 1996. - Т. 8. - 383 с.

60. Хасанова, С.Р. Экспериментально-теоретическое обоснование создания и стандартизации лекарственных растительных препаратов с антиоксидантной активностью: дис ... доктора фарм. наук: 14.04.02 / Хасанова Светлана Рашитовна - Самара, 2016. - 362 с.

61. Экспериментальное моделирование и лабораторная оценка адаптивных реакций организма / И.А. Волчегорский, И.И. Долгушин, О.Л. Колесников, В.Э. Цейликман. - Челябинск: ЧГПУ, 2000. - 167 с.

62. A method for measuring catalase activity / M.A. Korolyuk, L.I. Ivanova, I.G. Maiorova, V.E. Tokarev // Laboratornoe delo. - 1988. - № 1. - P. 16-19.

63. A novel Gynostemma pentaphyllum saponin and its adipogenesis inhibitory effect through modulating Wnt/beta-catenin pathway and cell cycle in mitotic clonal expansion / J. Liu, P. Yang, H. Shi [et al.] // Functional foods. - 2015. - Vol. 17. -P. 552-562.

64. Analysis of amino acids, vitamins and chemical elements in Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / S. Deng, X. Li, B. Chen [et al.] // Hunan Yike Daxue Xuebao. - 1994. - Vol. 19, № 6. - P. 487-490.

65. Anticancer and immunoregulatory activity of Gynostemma pentaphyllum polysaccharides in H22 tumorbearing mice / J. Liu, L. Zhang, Y. Ren [et al.] // Biological macromolecules. - 2014. - Vol. 69. - P. 1-4.

66. Anti-cancer effect and the underlying mechanisms of gypenosides on human colorectal cancer SW-480 cells / H. Yan, X. Wang, J. Niu [et al.] // PLoS one. -2014. - Vol. 9, № 4. - P. e95609.

67. Anticancer effects of Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino (Jiaogulan) / Y. Li, W. Lin, J. Huang [et al.] // Chinese medicine. - 2016. - Vol. 11, № 43. - P. 4358.

68. Apoptosis of human hepatoma cells induced by Gynostemma pentaphyllum Makino / G. Yuan, J. Wei, J. Zhou [et al.] // Clinical Oncology. - 2006. - Vol. 5, № 3. - P. 173-177.

69. Backer, C.A. Flora of Java / C.A. Backer, R.C. Bakhuizen van den Brink. - 1963. -Vol. 1. - 305-306 p.

70. Blumert, M. Jiaogulan: China's «Immortality Herb» / M. Blumert, J. Liu // Natural Products. - 2000. - Vol. 63, № 3. - P. 431.

71. Bronchodilatory effects of the aqueous extract of Gynostemma pentaphyllum and gypenosides III and VIII in anaesthetized guinea-pigs / C. Circosta, R. De Pasquale, D. R Palumbo, F. Occhiuto // Pharmacy and pharmacology. - 2005. -Vol. 57, № 8. - P. 1053-1058.

72. Characterization and antioxidant activities of acidic polysaccharides from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / B. Li, X. Zhang, M. Wang, L. Jiao // Carbohydrate polymers. - 2015. - Vol. 127. - P. 209-214.

73. Chemical composition of three polysaccharides from Gynostemma pentaphyllum and their antioxidant activity in skeletal muscle of exercised mice / A. Chi, L. Tang, J. Zhang, K. Zhang // Sport nutrition and exercise metabolism. - 2012. - Vol. 22, № 6. - P. 487-490.

74. Chemical specification of Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / W. Jirawattanapong, J. Bansiddhi, Y. Techadamrongsin, D. Pattamadilok // Phytochemistry Reviews. - 2007. - P. 168-179.

75. Chemistry and pharmacology of Gynostemma pentaphyllum / V. Razmovski-Naumovski, T.H. Huang, V.H. Tran [et al.] // Phytochemistry Reviews. - 2005. -Vol. 4, № 3. - P. 197-219.

76. Chen, Y-G. Isolation and characterization of benzyl-o-P-D-glucopyranoside from Gynostemma pentaphyllum / Y-G. Chen, Y. Zhang // Yunnan Normal University. -2001. - Vol. 21. - P. 58-59.

77. Circosta, C. Cardiovascular effects of the aqueous extract of Gynostemma pentaphyllum Makino / C. Circosta, R. De Pasquale, F. Occhiuto // Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology. - 2005. - Vol. 12, № 9. - P. 638-643.

78. Concentrations of trace elements in organic fertilizers and animal manures and feeds and cadmium contamination in herbal tea (Gynostemma pentaphyllum Makino) / N. Rangkadilok, J. Satayavivad, S. Nookabkaew, N. Prachoom // Agricultural and food chemistry. - 2016. - Vol. 64, № 16. - P. 3119-3126.

79. Conjugated linolenic acids and nutraceutical components in Jiaogulan (Gynostemma pentaphyllum) seeds / C. Zou, H. Shi, X. Liu [et al.] // LWT Food Science and Technology. - 2013. - Vol. 68. - P. 111-118.

80. Cour, B.la. Traditional chinese medicine in treatment of hyperlipidaemia / B.la. Cour, P. Molgaard, Z. Yi // Ethnopharmacology. - 1995. - Vol. 46, № 2. - P. 125129.

81. Craib, W.G. Cucurbitaceae. Florae Siamensis Enumeratio 1 / W.G. Craib. - 1931. -Vol.1. - P. 750-770.

82. Dammarane-type glycosides from Gynostemma pentaphyllum / F. Yin, L. Hu, F. Lou, R. Pan // Natural products. - 2004. - Vol. 67, № 6. - P. 942-952.

83. Determination of chlorophylls and their derivatives in Gynostemma pentaphyllum Makino by liquid chromatography-mass spectrometry / S.C. Huang, C.F. Hung, W.B. Wu, B.H. Chen // Pharmaceutical and biomedical analysis. - 2008. -Vol. 48, № 1. - P. 105-112.

84. Determination of flavonoids and saponins in Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino by liquid chromatography-mass spectrometry / T.H. Kao, S.C. Huang, B. Stephen Inbaraj, B.H. Che // Analytica chimica acta. - 2008. - Vol. 626, № 2. - P. 200-211.

85. Dictionary of Chinese materia Medica Vol 2 / Y.G. Wu [et al.] // Shanghai Science and Technological Publishing House, Shanghai - 1st. ed, - Chinese, 1998. - 1088 p.

86. Effects of Gynostemma pentaphyllum Makino on the immunological function of cancer patients / J. Hou, S. Liu, Z. Ma [et al.] // Traditional Chinese medicine. -1991. - Vol. 11, № 1. - P. 47-52.

87. Evaluation of antidiabetic effects of the traditional medicinal plant Gynostemma pentaphyllum and the possible mechanisms of insulin release / E.F. Lokman, H. F. Gu, W.N.W. Mohamud, C.-G. Ostenson // Evidence-based complementary and alternative medicine. - 2015. - Vol. 2. - P. 7.

88. Evaluation of the anti-inflammatory and liver-protective effects of Anoectochilus formosanus, Ganoderma lucidum and Gynostemma pentaphyllum in rats / J.M. Lin,

C.C. Lin, H.F. Chiu [et al.] // The American journal of Chinese medicine. - 1993. -Vol. 21, № 1. - P. 59-69.

89. Extract of Gynostemma pentaphyllum enhanced the production of antibodies and cytokines in mice / W.C. Huang, M.-L. Kuo, M.-L. Li [et al.] // Yakugaku zasshi: Journal of the Pharmaceutical Society of Japan. - 2007. - Vol. 127, № 5. - P. 889896.

90. Fang, Z.P. Isolation and identification of flavonoid glycosides and organic acid from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / Z.P. Fang, X.Y. Zeng // China journal of Chinese materia medica. - 1989. - Vol. 14, № 11. - P. 676-678.

91. Flavonoids from Gynostemma pentaphyllum exhibit differential induction of cell cycle arrest in H460 and A549 cancer cells / K.-C. Tsui, T.-H. Chiang, J.-S. Wang [et al.] // Molecules. - 2014. - Vol. 19, № 11. - P. 17663-17681.

92. Flora of China [Электронный ресурс] // Family List, 2011. - Режим доступа: http: //www.efloras .org/

93. Goth, L. A simple method for determination of serum catalase activity and revision of reference range / L. Goth // Clinics chimica acta. - 1991. - Vol. 196, № 2-3. - P. 143-152.

94. Guo, W.Y. Cultivation and utilisation of Gynostemma pentaphyllum / W.Y. Guo, W.X. Wang // Publishing House of Electronics, Science and Technology University, 1993. - 261 p.

95. Gynostemma pentaphyllum decreases allergic reactions in a murine asthmatic model / W.C. Huang, M.-L. Kuo, M.-L. Li [et al.] // The American journal of Chinese medicine. - 2008. - Vol. 36, № 3. - P. 579-592.

96. Gynostemma pentaphyllum and Carica papaya: sources of biologically active substances / A.A. Nizamova, E.Kh. Galiakhmetova, R.I. Nugumanova, N.V. Kudashkina // Medical Bulletin of Bashkortostan. - 2021. - Vol. 16, № 2 (92). -P. 52-57.

97. Gynostemma pentaphyllum exhibits anti-inflammatory properties and modulates antimicrobial peptide expression in the urinary bladder / P. Lüthje, E. F. Lokman, C. Sandstrom [et al.] // Functional foods. - 2015. - Vol. 17. - P. 283-292.

98. Gypenoside attenuates hepatic ischemia/reperfusion injury in mice via anti-oxidative and anti-apoptotic bioactivities / J. Zhao, Y. Ming, Q. Wan [et al.] // Experimental and therapeutic medicine. - 2014. - Vol. 7, № 5. - P. 1388-1392.

99. Gypenoside L inhibits autophagic flux and induces cell death in human esophageal cancer cells through endoplasm reticulum stress-mediated Ca2+ release / C. Liao, K. Zheng, Y. Li [et al.] // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7, № 30. - P. 47387-47402.

100. Gypenoside L, isolated from Gynostemma pentaphyllum, induces cytoplasmic vacuolation death in hepatocellular carcinoma cells through reactive-oxygen-species-mediated unfolded protein response / K. Zheng, C. Liao, Y. Li [et al.] // Agricultural and food chemistry. - 2016. - Vol.64, № 8. - P. 1702-1711.

101. Gypenoside XLIX, a naturally occurring gynosaponin, PPAR-alpha dependently inhibits LPS-induced tissue factor expression and activity in human THP-1 monocytic cells / T.H. Huang, V.H. Tran, B.D. Roufogalis, Y. Li // Toxicology and applied pharmacolo. - 2007. - Vol. 218, № 1. - P. 30-36.

102. Gypenosides alleviate myocardial ischemia-reperfusion injury via attenuation of oxidative stress and preservation of mitochondrial function in rat heart / H. Yu, Q. Guan, L. Guo [et al.] // Cell stress and chaperones. - 2016. - Vol. 21, № 3. - P. 429437.

103. Gypenosides ameliorate carbon tetrachloride-induced liver fibrosis by inhibiting the differentiation of hepatic progenitor cells into myofibroblasts / J. Chen, X. Li, Y. Hu [et al.] // The American journal of Chinese medicine. - 2017. - Vol. 45, № 5. -P. 1061-1074.

104. Gypenosides derived from Gynostemma pentaphyllum suppress NO synthesis in murine macrophages by inhibiting iNOS enzymatic activity and attenuating NF-kB-mediated iNOS protein expression / F. Aktan, S. Henness, B.D. Roufogalis, A.J. Ammit // Nitric Oxide: biology and chemistry. - 2003. - Vol. 8, № 4. - P. 235-242.

105. Gypenosides induce apoptosis by Ca2+ overload mediated by endoplasmic-reticulum and store-operated Ca2+ channels in human hepatoma cells / D.P. Sun, X.-X. Li, X.-L. Liu [et al.] // Cancer biotherapy and radiopharmaceuticals. - 2013. -Vol. 28, № 4. - P. 320-326.

106. Gypenosides induce apoptosis in human hepatoma Huh-7 cells through a calcium/reactive oxygen species-dependent mitochondrial pathway / Q.-F. Wang, C.-W. Chiang, C.-C. Wu [et al.] // Planta medica. - 2007. - Vol. 73, № 6. - P. 535544.

107. Gypenosides induce cell death and alter gene expression in human oral cancer HSC-3 cells / K.-W. Lu, Y.-S. Ma, F.-S. Yu [et al.] // Experimental and therapeutic medicine. - 2017. - Vol. 14, № 3. - P. 2469-2476.

108. Gypenosides induced G0/G1 arrest via CHk2 and apoptosis through endoplasmic reticulum stress and mitochondria-dependent pathways in human tongue cancer SCC-4 cells / J.-C. Chen, K.-W. Lu, M.-L. Tsai [et al.] // Oral oncology. - 2009. -Vol. 45, № 3. - P. 273-283.

109. Gypenosides induced G0/G1 arrest via inhibition of cyclin E and induction of apoptosis via activation of caspases-3 and -9 in human lung cancer A-549 cells / H.-F. Lu, Y.-S. Chen, J.-S. Yang [et al.] // In vivo. - 2008. - Vol. 22, № 2. - P. 215221.

110. Gypenosides suppress growth of human oral cancer SAS cells in vitro and in a murine xenograft model: the role of apoptosis mediated by caspase-dependent and caspase-independent pathways / K.W. Lu, J.-C. Chen, T.-Y. Lai [et al.] // Integrative cancer therapies. - 2012. - Vol. 11, № 2. - P. 129-140.

111. Hypoglycemic effect of Gynostemma pentaphyllum saponins by enhancing the Nrf2 signaling pathway in STZ-inducing diabetic rats / D. Gao, M. Zhao, X. Qi [et al.] // Archivers of pharmacal research. - 2016. - Vol. 39, № 2. - P. 221-230.

112. Immunomodulatory and antioxidant effects of polysaccharides from Gynostemma pentaphyllum Makino in immunosuppressed mice / X. Shang, Y. Chao, Y. Zhang [et al.] // Molecules. - 2016. - Vol. 21, № 8. - P. 1085.

113. Immunomodulatory effects of Gynostemma pentaphyllum Makino on human immune cells / B. Sriwanthana, W. Threesangsri, W. Wanavichet [et al.] // Traditional Medicine and Nutraceuticals. - 2005. - Vol. 680, № 25. - P. 165-169.

114. Isolation and characterization of immunostimulatory polysaccharide from an herb tea, Gynostemma pentaphyllum Makino / X.B. Yang, Y. Zhao, Y. Yang, Y. Ruan // Agricultural and food chemistry. - 2008. - Vol. 56, № 16. - P. 6905-6909.

115. Keraudren-Aymonin, M. Cucurbitaceae. Flora du Cambodge du Laos et du VietNam / M.K. Keraudren-Aymonin. - 1975. - Vol. 15. - P. 1-114.

116. Kim, S.H. Studies on the amino acid constituents of Gynostemma pentaphyllum Makino / S.H. Kim, W.K. Park // The Korean Society of Food Science and Nutrition. - 1988. - Vol. 17. - P. 7-11.

117. Li, SZ. Compendium of Materia Medica (Ben Chao Gangu Mu) / S. Li. -Beijing, China, 1985. - 1326 p.

118. Lipid-lowering, hepatoprotective, and atheroprotective effects of the mixture Hong-Qu and gypenosides in hyperlipidemia with NAFLD rats / S. Gou, H.-F. Huang, X.-Y. Chen [et al.] // Chinese Medical Association. - 2016. - Vol. 79, № 3. - P. 111-121.

119. Liu, X. Study on gypenosides inhibiting neoplasm growth and elevating immunological function in Lewis lung cancer of mice / X. Liu, P.-J. Wang, F.-X. Xu // Anhui Traditional Chinese Medical College. - 2001. - Vol. 1. - P. 21.

120. Liu, X. Tissue culture and plantlet regeneration of Gynostemma pentaphyllum / X. Liu // Chinese Medicinal Materials. - 1989. - Vol. 12, № 6. - P. 8-10.

121. Mechanism of action of gypenosides on type 2 diabetes and non-alcoholic fatty liver disease in rats / Q. He, J.-K. Li, F. Li [et al.] // World journal of gastroenterology. - 2015. - Vol. 21, № 7. - P. 2058-2066.

122. Megalli, S. Anti-hyperlipidemic and hypoglycemic effects of Gynostemma pentaphyllum in the zucker fatty rat / S. Megalli, N.M. Davies, B.D. Roufogalis // Pharmacy and pharmaceutical sciences. - 2006. - Vol. 9. - P. 281-291.

123. Metabonomics study of the therapeutic mechanism of Gynostemma pentaphyllum and atorvastatin for hyperlipidemia in rats / M. Wang, F. Wang, Y. Wang [et al.] // PLoS one. - 2013. - Vol. 8, № 11. - P. e78731.

124. Mishra, R.N. Jiao Gu Lan (Gynostemma pentaphyllum): The Chinese rasayan-current research scenario / R.N. Mishra, D. Joshi // Pharmaceutical and biomedical sciences. - 2011. - Vol. 4, № 2. - P. 1503-1519.

125. Molecular evidence of anti-leukemia activity of gypenosides on human myeloid leukemia HL-60 cells in vitro and in vivo using a HL-60 cells murine xenograft model / J.-J. Lin, H.-Y. Hsu, J.-S. Yang [et al.] // Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology. - 2011. - Vol. 18, № 12. - P. 1075-1085.

126. Neuroprotective effects of the polyphenolic antioxidant agent, Curcumin, against homocysteine-induced cognitive impairment and oxidative stress / A. Ataie, M. Sabetkasaei, A. Haghparast [et al.] // Pharmacology, biochemistry and behavior. -2010. - Vol. 96, № 4. - P. 378-385.

127. NOX2-mediated TFEB activation and vacuolization regulate lysosome-associated cell death induced by gypenoside L, a saponin isolated from Gynostemma pentaphyllum / K. Zheng, Y. Jiang, C. Liao [et al.] // Agricultural and food chemistry. - 2017. - Vol. 65, № 31. - P. 6625-6637.

128. Ohwi, J. Flora of Japan / J. Ohwi // Washington: Smitsonian Institution, 1965. -1081 p.

129. Optimization of supercritical carbon dioxide extraction, physicochemical and cytotoxicity properties of Gynostemma pentaphyllum seed oil: a potential source of conjugated linolenic acids / L. Wang, X. Wang, P. Wang [et al.] // Separation and Purification Technology. - 2016. - Vol. 159. - P. 147-156.

130. Orlova-Bienkowskaja, M.Ja. Paridea angulicollis (motschulsky, 1854) (coleoptera: chrysomelidae: galerucinae) is a new genus and species for Russia / M.JA. Orlova-Bienkowskaja, A.O. Bienkowski // Caucasian Entomological Bull -2014. - Vol. 10, № 1. - P. 85-87.

131. Photosynthetic characteristics of Gynostemma pentaphyllum under shade / C. Huang, Z. Wu, Y. Yao, X. Xu // The Journal of applied ecology. - 2004. - Vol. 15, № 11 - P. 2099-2103.

132. Phytopreventative effects of Gynostemma pentaphyllum against acute indomethacin-induced gastrointestinal and renal toxicity in rats / C. Hesse, V. Razmovski-Naumovski, C. C Duke [et al.] // Phytotherapy research. - 2007. - Vol. 11, № 6. - P. 523-530.

133. Preconditioning of brain slices against hypoxia induced injury by a Gynostemma pentaphyllum extract-stimulation of anti-oxidative enzyme expression / L. Schild, T. Cotte, G. Keilhoff, R. Brodemann // Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology. - 2012. - Vol. 19. - P. 812-818.

134. Prevention of free fatty acid-induced lipid accumulation, oxidative stress, and cell death in primary hepatocyte cultures by a Gynostemma pentaphyllum extract / C. Muller, A. Gardemann, G. Keilhoff [et al.] // Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology. - 2012. - Vol. 19, № 5. - P. 395-401.

135. Protective effects of Gynostemma pentaphyllum in gammairradiated mice / W.C. Chen, D.M. Hau, K.T. Chen [et al.] // The American journal of Chinese medicine. -1996. - Vol. 24, № 1. - P. 83-92.

136. Protective effects of gypenosides against fatty liver disease induced by high fat and cholesterol diet and alcohol in rats / R. Qin, J. Zhang, C. Li [et al.] // Archives of pharmacal research. - 2012. - Vol. 35. - P. 1241-1250.

137. Protein tyrosine phosphatase 1B inhibitory effect by dammarane-type triterpenes from hydrolyzate of total Gynostemma pentaphyllum saponins / X.-S. Zhang, X.-L. Bi, W.-Xiao [et al.] // Bioorganic and medicinal chemistry letters. - 2012. - Vol. 23, № 1. - P. 297-300.

138. Regulation of Bcl-2 family molecules and activation of caspase cascade involved in gypenosides-induced apoptosis in human hepatoma cells / Q.F. Wang, J. C. Chen, S. J. Hsieh [et al.] // Cancer letters. - 2002. - Vol. 183, № 2. - P. 169-78.

139. Rujjanawate, C. The anti-gastric ulcer effect of Gynostemma pentaphyllum Makino / C. Rujjanawate, D. Kanjanapothi, D. Amornlerdpison // Phytomedicine: international journal of phytotherapy and phytopharmacology. - 2004. - Vol. 11, № 5. - P. 431-435.

140. Studies on the chemical constituents of Gynostemma pentaphyllum / X. Liu, W.-C. Ye, H.W.W. Hsiao [et al.] // China Pharmaceutical University. - 2003. - Vol. 34, № 1. - P. 21-23.

141. Suppressive effect of gypenosides on murine leukemia L1210 cell lines / L. Yang, P. Wang, X.-X. Cheng [et al.] // Chinese medicinal materials. - 2010. - Vol. 33. - P. 1588-1592.

142. The determination of antioxidant activity of ethanol extracts of Gynostemma pentaphyllum / A.A. Nizamova, E.Kh. Galiakhmetova, K.S. Mochalov, N.V. Kudashkina // Iranian Journal of Pharmaceutical Sciences. - 2021. - Vol. 17, № 1. -P. 91-98.

143. The direct release of nitric oxide by gypenosides derived from the herb Gynostemma pentaphyllum / M.A. Tanner, X. Bu, J.A. Steimle, P.R. Myers // Nitric Oxide: biology and chemistry. - 1999. - Vol. 3, № 5. - P. 359-365.

144. The International Plant Names Index. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://www.ipni.org (дата обращения 08.07.2020).

145. The molecular mechanism of gypenosides-induced G1 growth arrest of rat hepatic stellate cells / M.-H. Chen, S.-H. Chen, Q.-F. Wang [et al.] // Ethnopharmacology. - 2008. - Vol. 117, № 2. - P. 309-317.

146. The Plant List. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://www.theplantlist.org (дата обращения 08.07.2020)

147. Therapeutic effect of gypenoside on chronic liver injury and fibrosis induced by CCl4 in rats / J.C. Chen, C.C. Tsai, L.D. Chen [et al.] // The American journal of Chinese medicine. - 2000. - Vol. 28, № 2. - P. 175-185.

148. Triterpenes possessing an unprecedented skeleton isolated from hydrolyzate of total saponins from Gynostemma pentaphyllum / N. Li, C.-F. Wu, X.-Y. Xu [et al.] // European journal of medicinal chemistry. - 2012. - Vol. 50. - P. 173-178.

149. Triterpenoid herbal saponins enhance beneficial bacteria, decrease sulfate-reducing bacteria, modulate inflammatory intestinal microenvironment and exert cancer preventive effects in ApcMin/+ mice / L. Chen, M.S. Brar, F.C. Leung, W.L. Hsiao // Oncotarget. - 2016. - Vol. 7, № 21. - P. 31226-31242.

150. Tsai, Y.C. Preparation of carotenoids and chlorophylls from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino and their antiproliferation effect on hepatoma cell / Y.C. Tsai, W.B. Wu, B.H. Chen // Journal of medicinal food. - 2010. - Vol. 13, № 6. - P. 1431-1442.

151. Wilde de W.J.J.O. Gynostemma (Cucurbitaceae) in Thailand and Malesia / W.J.J.O. de Wilde, B.E.E. Duyfjes // Blumea Journal of Plant Taxonomy and Plant Geography. - 2007. - Vol. 52, № 2. - P. 263-280.

152. Wang, T-X. Bioassay-guided isolation and identification of anticancer and antioxidant compounds from Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / T-X. Wang, M-M. Shi, J-G. Jiang // RSC Advances. - 2018. - Vol. 8, № 21. - P. 2318123190.

153. Wang, W.X. Effect of ecological factor on the total gynosaponin content of Gynostemma pentaphyllum (Thunb.) Makino / W.X. Wang // Traditional Herbal Drugs. - 1996. - Vol. 27, № 9 - P. 559-561.

154. Wu, C.Y. A Study on the Genus Gynostemma Bl. (Cucurbitaceae) from China / C.Y. Wu, S.K. Chen // Systematics and Evolution. - 1983. - Vol. 21. - P. 355-369.

155. Wu, M. Pharmacognosy of Gynostemma pentaphyllum and Cayratia japonica / M. Wu, R. Jiang // China journal of Chinese materia medica. - 1987. - № 9 - P. 2225.

156. Wu, Q.J. Textual Investigation of Herbal Plants / Q.J. Wu. - China: Shang Wu Publishing House, 1957. - 559 p.

157. Xu, Z.l. Chemical constituents of Gynostemma pentaphyllum / Z-l. Xu, F-q Yang, Z-n Xia // Natural Product Research and Development. - 2013. - Vol. 8. - P. 10671069.

158. Yagi, K. Assay for blood plasma or serum / K. Yagi // Methods in enzymology. -1984. - № 105. - P. 328-331.

159. Zhang, C. Immunomodulatory action of the total saponin of Gynostemma pentaphylla / C. Zhang, X. Yang, L. Xu // Chinese journal of modern developments in traditional medicine. - 1990. - Vol. 10, № 2. - P. 69-70.

160. Zhou, J. Encyclopedia of Chinese Herbs Vol 2 / J. Zhou, G. Xic, X. Yan. - China, 1996. - P. 1878-1882.

ПРИЛОЖЕНИЯ

ООО «ТРАВЫ БАШКИРИИ»

Яуаплылыгы сиклэнгэн йэмкгиэтэ 450095 Башкортостан Республика!™, вфо к Глазов ур.,1/3 Тел. [phone] e-mail: [e-mail]. wwvv.urafito.ru

Общество с ограниченной ответственностью 450095, Республика Башкортостан, г.Уфа ул.Глазовская,1/3 Тел. [phone] e-mail: [e-mail]. www.ufafito.ru

ИНН 0275000936 КПП 027201001 ОКПО 26795008 ОГРН 1020202359649

эектор

JöüVlpaiw. Башкирии <\ '» \ а 2р 21 г.

АКТ

О внедрении результатов диссертационной работы Низамовбй'Альфины Ансафовны «Фармакогностическое изучение травы гиностеммы пятилистной (Gynostemma pentaphyllum Thund.)» на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук но специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия в работу

ООО «Травы Башкирии»

Комиссия в составе главного технолога Елеминой Натальи Евгеньевны заведующего производством Цаплиной Людмилы Александровны, заведующегс лабораторией Веселовой Оксаны Михайловны подтверждает использование материалов диссертационного исследования Низамовой A.A., посвященного изучении: возможности использования гиностеммы пятилистной в качестве сырья для полученш травы гиностеммы в работе ООО «Травы Башкирии».

Полученные автором результаты качественного и количественного анализг используются с целью определения качества лекарственного растительного сырья Методики являются экспрессными, точными, нетрудоемкими и достоверными.

Внедрение результатов диссертационных исследований Низамовой А.А способствует повышению объективности анализа лекарственного растительного сырь? и лекарственных растительных препаратов.

Члены комиссии:

1. Главный технолог ООО «Травы Башкирии»

2. Заведующий производством ООО «Травы Башкирии»

3. Заведующий лабораторией ООО «Травы Башкирии»

Елемина Н.Е.

Цаплина Л.А. Веселова О.М.

« A-^-lj/i'/7гС- 2021 г.

УТВЕРЖДАЮ

Ректор ФГБОУ ВО БГМУ

[инздрава России

члеы-корр. РАН, професср & ---В Н. Павлов

.Н. Павлов

« 30 » 2021 г.

АКТ ВНЕДРЕНИЯ

результатов диссертационной работы Низамовой Альфины Ансафовны «Фармакогностическое изучение травы гиноетеммы пятилистной (Су/ию/етя/яа реШарИуПит ТИипс!.)», представленной на соискание ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия в учебную работу кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации

Комиссия в составе: председатель — заведующий кафедрой фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, д.фарм.н., профессор Кудашкина Н.В.

член комиссии: профессор кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, д.фарм.н. Хасанова С.Р., профессор кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии, д.фарм.н. Пупыкина К.А.

составили настоящий акт о том, что результаты диссертационной работы Низамовой Альфины Ансафовны «Фармакогностическое изучение травы гиноетеммы пятилистной (Сужм/е/шиа реШарИуПит Т1шпс1.)» внедрены в учебный и научно-исследовательский процесс кафедры фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3) и применяются на практических занятиях у обучающихся 3, 4 и 5 курсов фармацевтического факультета при изучении вопросов качественного и количественного анализа лекарственного растительного сырья, содержащего сапонины, флавоноиды и при разработке методов стандартизации лекарственного растительного ого

происхождения.

Члены комиссии:

Председатель комиссии

К.А. Пупыкина

УТВЕРЖДАЮ

Ректор ФГБОУ ВО БГМУ

[нздрава России--^"

члегккорр. РАН, професср

В.Н. Павлов

« 30 » 2021 г.

результатов диссертационной работы Низамовой Альфины Ансафовны «Фармакогностическос изучение травы гиноетеммы пятилистной (Супо«1етта регЦарЬуПит ТЬипс!.)», представленной на соискаиие ученой степени кандидата фармацевтических наук по специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия в учебную работу кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения

Российской Федерации

Комиссия в составе: председатель - профессор кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, д.фарм.н. Халиуллин Ф.А.

член комиссии: профессор кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, д.фарм.н. Клен Е.Э., доцент кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии, к.фарм.н. Шарипов И.М.

составили настоящий акт о том, что результаты диссертационной работы Низамовой Альфины Ансафовны «Фармакогностическое изучение травы гиноетеммы пятилистной (<Эупо$1етта репШркуПит ТЬипс!.)» внедрены в учебный процесс кафедры фармацевтической химии с курсами аналитической и токсикологической химии федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации (450008, г. Уфа, ул. Ленина, 3) и применяются при изучении вопросов качественного и количественного анализа лекарственных препаратов растительного происхождения у обучающихся 3, 4 и 5 курсов фармацевтического факультета.

/

Председатель комиссии

Ф.А. Халиуллин

Члены комиссии:

Е.Э. Клен

¡^ И.М. Шарипов

ОВРЛ'ЛША'11ЛЫ .оу ЖЛПИ.-»ЫС111ШОО|,1»А1<)»Л ИЯ

БАШК111Ч1С11|ПЧ)СУДЛ1' »ЬШ1Ь1Й

МКЛШШИСКИП У1НН1Е1 СИ ГЕТ

1чк гиНской Ф1-дкглции (ФГБОУ 1Н) НГМУ минзш'лил РОССИИ) 4,0008.г. у!!уя Я,............ (.147)272.41.7.1. Ф»« 272-37-51

|шр:// \у\у\у.ЬпхЬцт>Ш1 Е-тт1: [e-mail] 0Кц0,11%1597 ОИ'Н 11120202561136 ИМИ 0274023088 КПП 027101001

¿л и ¿¿¿и* ¿4 м'-р/-

Генеральному директору учреждения ФГБУ «Научный Центр Экспертизы средств медицинского применения»

Министерства здравоохранения

Российской Федерации, Косенко В. В.

127051, Россия, г. Москва, Петровский бульвар, д.8,стр.2

Уважаемая Валентина Владимировна!

Направляем Вам проект фармакопейной статьи «Гиноетеммы пятилистной трава», разработанный на кафедре фармакогнозии с курсом ботаники и основ фитотерапии Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Башкирский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения

Российской Федерации. Приложение:

- проект ФС с пояснительной запиской - 2 экземпляра

Проректор по научной и цифровой трансфор:

Исп.: Кудашкина Н.В. 8(347) 273-41-67

А.В. Самородов

КАНЦЕЛЯРИЯ

ФГЕУ «НИЭСМПч Мшпагам Росс»»

2 8 ДЕК 2021

В,* с^//

Приложение 5

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

УТВЕРЖДАЮ Ф.И.О.

« »

20 г.

Государственный стандарт качества лекарственного средства

ПРОЕКТ ФАРМАКОПЕЙНОЙ СТАТЬИ

Башкирский государственный медицинский университет Минздрава России

Гиностеммы пятилистной трава Супо81вттав рвМаркуШ ИегЬа

ФС 42-ХХХХ-ХХ Вводится впервые

Срок введения установлен с «_»_20 года

Срок действия до «_»_

20 года

ИЗДАНИЕ ОФИЦИАЛЬНОЕ ПЕРЕПЕЧАТКА ВОСПРЕЩЕНА

ФС 42- с.2

Показатели

Методы анализа

Нормы

Внешние признаки

ГФ XIV, визуально с помощью лупы или стереомикроскопа

Соответствует ФС

Микроскопия

ГФ XIV

Соответствует ФС

ДЗП, %

Не менее 65%

Качественные реакции

Цветная реакция с серной кислотой

концентрированной при нагревании

Снятие спектра при длине волны 322 нм ТСХ: Хлороформ -метанол - вода (26:14:3)

Соответствует ФС

Цветная реакция с алюминия хлорида спиртовым раствором 5% Снятие спектра при длине волны 412 нм

Числовые показатели: Содержание суммы тритерпеновых сапонинов в пересчёте на ß-эсцин Содержание суммы флавоноидов в пересчёте на рутин Влажность Золы общей

Золы, нерастворимой в 10% растворе кислоты HCL Частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями 7 мм

Частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм Органической примеси Минеральной примеси

Спектрофотометрия

Спектрофотометрия

ГФ XIV ГФ XIV ГФ XIV

ГФ XIV

ГФ XIV

ГФ XIV ГФ XIV

Не менее 15%

Не менее 2%

Не более 10% Не более 5% Не более 3%

Не более 5%

Не более 5%

Не более 1% Не более 1%

ФС 42- с.3

Показатели Методы анализа Нормы

Микробиологическая чистота ГФ XIV Соответствует категории 4А

Упаковка Цельное сырье упаковывается по 15 кг в мешки бумажные многослойные; в мешки полипропиленовые из пропилена окрашенного; по 20 кг в мешки тканевые продуктовые.

Маркировка Соответствует ФС

Транспортирование

Хранение В сухом, защищенном от света месте, при температуре не выше 25°С

Срок годности 3 года

ПОДЛИННОСТЬ

Внешние признаки. Цельное сырье. Травянистая лиана с длинным олиственным ветвистым бороздчатым стеблем длиной 1-2,5 м и толщиной 1-3 мм. Листья простые, тонкие, глубоко пальчато-рассеченные с 5 (реже 3, 7) долями, листовая пластинка щетинисто-опушенная с обеих сторон и по её краю. Размер верхних листьев составляет 1,3-2,8 см, нижних - 5,0-7,5 см. Размер отдельных сегментов верхних листьев составляет 0,3-0,8 см, нижних - 1-3 см. Форма листовой пластики - округлая (форма отдельной доли - ланцетная, эллиптическая); верхушка - острая; основание - клиновидное, местами неравнобокое; края - зубчатые. Жилкование - пальчато-краевое; жилки с нижней стороны сильно выступающие. По характеру прикрепления к стеблю -длинночерешковые, листорасположение очередное. Черешки тонкие с бороздой на верхней стороне, в длину 1,2-4,8 см, диаметром 0,5 мм. В узлах распологаются от 1 до 5 беловатые бугорки, из которых развиваются разветвления побега, соцветия и в количестве 3-8 светлых волосков, которые видны невооруженным глазом, достигающие до 2 мм. На стеблях насчитывается 30-45 метамеров, междоузлия длиной от 3 см (верхние) до 10-12 см (нижние). Начиная со 2-3 нижнего листа, в пазухах появляются усики (0,8-2,2 см), раздвоенные на верхушке. Цветки мелкие, раздельнополые, 1-2 см в диаметре, собраны в кистевидные соцветия. Околоцветник двойной: венчик (0,5-1,0 см в диаметре) состоит из 5 зеленовато-белых лепестков треугольно-вытянутой формы, чашечка состоит из 5 узколанцетных зеленых чашелистиков, 5 свободных тычинок. Гинецей - ценокарпный состоит из 3 плодолистиков, завязь полунижняя.

Цвет стеблей - светло-зеленый; цвет листьев - с верхней стороны зеленый и серо-зеленый - с нижней. Запах травы слабый травянистый, усиливающийся при растирании. Вкус горький, переходящий в сладковатый.

Измельченное сырье. Части стеблей и листьев гиностеммы пятилистной различной формы, цельные отдельные цветки, проходящие сквозь сито отверстиями 0,5 мм. Запах слабый. Вкус горьковатый со сладким послевкусием.

Порошок. Смесь измельченных частиц надземной части (листьев, стеблей,

усиков, черешков), проходящие сквозь сито с отверстиями 0,18 мм, однородно-зеленого цвета. Запах слабый. Вкус горький, затем сладковатый.

Вкус водного извлечения из цельного, измельченного материала и порошка пряно-горьковатый со сладким послевкусием.

Микроскопия. При рассмотрении листа с поверхности видны: извилистые клетки верхнего эпидермиса с четко видной утолщенностью стенок (рис. 1), менее извилистые клетки нижнего эпидермиса (рис. 2). Устьичный аппарат аномоцитного типа: замыкающие клетки овальной формы, окруженные побочными клетками в количестве 4-5. Устьица расположены с обеих сторон листовой пластинки (амфистоматического типа). По всей поверхности, а также по жилкам и краям листа (переходящие в зубцы) видны простые, крупные, многоклеточные (4-10), толстостенные, часто изогнутые волоски, которые обусловливают опушение листовой пластинки. В местах прикрепления к эпидермису простые волоски образуют розетку с круглым валиком в центре (рис. 3, 4). По всей поверхности присутствуют в большом количестве мелкие головчатые волоски, состоящие из короткой двуклеточной ножки и одно-, реже двухклеточной шарообразной или овальной головки (рис. 5). В местах прикрепления к эпидермису волоски могут образовывать розетку. С нижней стороны листа головчатые волоски встречаются чаще.

Черешок листа на поперечном срезе с адаксиальной стороны имеет характерную выемку. Под эпидермой в несколько слоев расположена колленхима. Проводящая система пучкового типа, количество проводящих коллатеральных пучков варьирует от 3 крупных и до 2 мелких. Флоэма ориентирована к наружной стороне, ксилема - к внутренней зоне черешка. Все проводящие пучки армированы со стороны флоэмы. Вокруг проводящего пучка расположена паренхимная обкладка, представленная мелкими паренхимными клетками. В субэпидермальном слое наблюдаются крупные паренхимные клетки (рис. 6).

При рассмотрении микроскопии черешка с поверхности видны эпидермальные многоугольные клетки с равномерным утолщением клеточной стенки (рис. 7).

Стебель в поперечном сечении имеет бороздчатую структуру. Под эпидермисом в несколько слоев, особенности по ребрам, расположена колленхима, затем - склеренхима, формирующая кольцо в несколько слоев клеток, варьирующих от 2 до 4. Центральную часть стебля занимают паренхимные клетки. Сосудисто-волокнистые пучки коллатерального типа, расположены по кругу 4 крупных и 4-5 мелких по ребрам. Сосуды ксилемы спиральные, кольцевые и сетчатые представлены небольшими тяжами (рис. 8). Эпидермис стебля с поверхности представлен прямоугольными клетками, вытянутыми вдоль стебля с равномерной кутикулой. Встречаются редкие устьица округлой формы, тип устьичного аппарата аномоцитный (рис. 9).

Клетки эпидермиса усика с поверхности прямоугольно-вытянутой формы (рис. 10). В поперечном сечении микроскопия усика напоминает структуру стебля, коллатеральные пучки в количестве 4 расположены по углам (рис. 11).

Эпидермис цветоножки с поверхности имеет полигональные (прямоугольные и комбинированные) клетки с прямыми стенками и ровной кутикулой. Волоски простые, многоклеточные со слегка изогнутой верхушкой и расширенным основанием; головчатые с одноклеточной короткой ножкой и двухклеточной головкой (рис. 12).

При рассмотрении препарата цветка с поверхности видны: клетки эпидермиса разной формы, от округлых, полигональных до вытянутых с прямыми стенками; устьица редкие, овальной формы (устьичный аппарат аномоцитного типа); волоски двух типов: простые многоклеточные (5-9 клеток) и головчатые состоящие из короткой одно-, трехклеточной ножки и одно-, реже двухклеточной овальной головки. Пыльца округло-овальной формы, гладкая (рис. 13).

Рисунок 1 - Фрагменты (ув. 10/0,25; Б 40/0,65) верхнего эпидермиса листа гиностеммы пятилистной: 1 - клетки эпидермиса; 2 - устьица

Рисунок 2 - Фрагмент (ув. 10/0,25) нижнего эпидермис листа гиностеммы пятилистной:

1 - клетки эпидермиса;

2 - устьичный аппарат

Рисунок 3 - Фрагмент эпидермиса (ув. 10/0,25): 1 - кроющие трихомы

«ж

шшЩ

- ■ У.!

'Мц'ШяяГ'. ' ш Vjl>?fS К

I

Ж?:'

5v>,

■■ . .. * «¿г

;«■'■' • *M><> fw#J

Щ. lift,

«.V'

»Щ

: • «■

Рисунок 4 - Фрагмент (ув. 10/0,25) Рисунок 5 - Фрагмент (ув. Б 40/0,65) эпидермиса: 1 - место прикрепления нижнего эпидермиса: 1 - головчатый волосок

к эпидермису простого волоска

Рисунок 6 - Поперечный срез (ув. 10/0,25) Рисунок 7 - Фрагмент (ув. S 40/0,65) черешка: 1 - эпидермис; 2 - колленхима; поверхности черешка: 1 - многоугольные 3 - паренхимные клетки; 4 - флоэма; клетки

5 - ксилема; 6 - адаксиальная сторона; 7 - абаксиальная сторона

Рисунок 8 - Поперечный срез (ув. 10/0,25) стебля: 1 - эпидермис; 2 - колленхима; 3 - паренхима; 4 - склеренхима; 5 -сосудисто-волокнистый пучок

Рисунок 10 - Фрагмент (ув. Б 40/0,65) поверхности усика: 1 - прямоугольно-вытянутые клетки

Рисунок 12 - Фрагмент (ув. 10/0,25) поверхности цветоножки G. pentaphyllum: 1 - эпидермис; 2 - простые волоски; 3 - головчатый волосок

Рисунок 9 - Фрагмент (ув. Б 40/0,65) поверхности стебля: 1 - устьице; 2 - эпидермис

Рисунок 11 - Поперечный срез (ув. 10/0,25) усика: 1 - эпидермис; 2 - колленхима; 3 - паренхима; 4 - склеренхима; 5 -сосудисто-волокнистый пучок

Рисунок 13 - Фрагмент (ув. 10/0,25; Б 40/0,65) поверхности цветка G. pentaphyllum: 1 - эпидермис; 2 - устьица; 3 - пыльцевые зерна; 4 - волоски простые; 5 - волоски головчатые

Определение основных групп биологически активных веществ

1,0 г сырья, измельченного до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм, помещают в колбу вместимостью 50 мл, заливают 30 мл 95% спирта этилового и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 30 мин. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр (испытуемый раствор).

Сапонины

Качественная реакция. К 1 мл испытуемого раствора добавляют 5 мл серной кислоты концентрированной. При нагревании образуется красно-оранжевое окрашивание.

Спектрофотометрия. Спектр испытуемого раствора после качественной реакции в области длин волн от 220 до 500 нм имеет максимум поглощения при 322±2 нм (рис. 14).

Рисунок 14 - Спектр извлечения из травы гиностеммы пятилистной с добавлением серной кислоты концентрированной

Тонкослойная хроматография. На хроматографическую пластинку с фракционированным сорбентом на алюминиевой подложке марки «ЗогЬШ-ПТСХ-АФ-А-УФ» на линию старта капилляром наносят 0,025 мл испытуемого раствора и 0,05% растворов СО гинсенозид и СО Р-эсцин. Пластинку с нанесенными веществами высушивали на воздухе несколько минут, затем помещали в предварительно насыщенную камеру парами смеси растворителей: хлороформ -

метанол - вода (26:14:3), и хроматографировали восходящим способом при температуре 18-20°С. Когда фронт растворителей пройдет около 10 см, пластинку вынимают из камеры и сушат в течение 20 минут при комнатной температуре. Хроматограмму проявляют специфическим реагентом - раствором серной кислоты 20 %, нанесенным пульверизатором, нагревают в термостате при 105°С на протяжении 5 минут и детектируют просмотром в видимом и ультрафиолетовом свете при длине волны 254 и 365 нм, для обозначения зон свечения, разделенных соединений. На хроматографической пластинке испытуемого раствора в ультрафиолетовом свете при Х=365 проявлялось 11 зон адсорбции, из которых обнаруживаются не менее 7-8 зон адсорбции от светло-розового до темно-фиолетового цвета; при этом доминирующим пятном на уровне СО Р-эсцина с величиной Rf 0,45. Допускается обнаружение дополнительных зон. Примечание:

1. Подготовка пластинок. Пластинки разрезают поперек на 2 части 10*10 см и предварительно активируют в сушильном лабораторном шкафу при температуре 105°С в течение 60 минут.

2. Приготовление системы растворителей для хроматографирования. Для проведения ТСХ-анализа рекомендуется система растворителей: хлороформ - метанол - вода (26:14:3). Система используется свежеприготовленная. Насыщение камеры для хроматографирования системой растворителей не менее 1 часа при температуре 18-20°С.

3. Приготовление растворов сравнения.

Раствор СО гинсенозида Б^: около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца гинзенозида помещают в мерную колбу на 25 мл, доводят объем раствора спиртом 95% до метки, перемешивают. Срок годности раствора 1 месяц.

Раствор СО Р-эсцина: около 0,05 г (точная навеска) стандартного образца Р-эсцина помещают в мерную колбу на 100 мл, доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 95%, перемешивают. Срок годности раствора 1 месяц.

Флавоноиды

Качественная реакция. К 1 мл испытуемого раствора добавляют 2 мл алюминия хлорида спиртового раствора 5%. Образуется окрашенное соединение желтого цвета, имеющее желто-зеленую флуоресценцию при длине волны 365 нм.

Спектрофотометрия. Спектр испытуемого раствора после качественной реакции в области длин волн от 220 до 500 нм имеет максимум поглощения при 412±2 нм (батохромный сдвиг) (рис. 15).

о.ео |-■-1-■-1-1-1-1-1-■-

-О.^Ю

220,00 зео.оо 600,00

Рисунок 1 5 - Спектр извлечения травы из гиностеммы пятилистной с добавлением алюминия хлорида

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 10%.

Зола общая. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 5%.

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 3%.

Измельченность сырья. Измельченное сырье - частиц, не проходящих сквозь сито с отверстиями 7 мм не более 5%, частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями размером 0,5 мм не более 5%.

Посторонние примеси.

Органическая примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1,0%.

Минеральная примесь. Цельное сырье, измельченное сырье - не более 1,0%.

Тяжелые металлы. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания тяжелых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с требованиями ОФС «Определение

содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с требованиями ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС

«Микробиологическая чистота».

Количественное определение. Цельное сырье: сумма сапонинов в пересчёте на Р-эсцин - не менее 15%; сумма флавоноидов в пересчёте на рутин -не менее 2%.

Сумма сапонинов

Приготовление раствора СО в-эсцина. Около 0,05 г (точная навеска) Р-эсцина помещают в мерную колбу на 100 мл и доводят объем раствора до метки спиртом этиловым 95% (раствор АРСО). 1 мл раствора А помещают в мерную колбу вместимостью на 10 мл и доводят объём раствора тем же растворителем (раствор Брсо). Срок годности раствора 1 месяц.

Аналитическую пробу сырья около 1,0 г (точная навеска), измельченного и просеянного до размера частиц 3 мм, помещают в колбу со шлифом вместимостью 500 мл, наливают 200 мл спирта этилового 70%. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и экстрагируют на кипящей водяной бане 90 мин. Затем колбу охлаждают и извлечение фильтруют, отбрасывая первые порции, в колбу вместимостью 500 мл. Полученное извлечение количественно 5 мл переносят в выпарительную чашку и упаривают на водяной бане досуха. Затем сухой остаток охлаждают, растворяют в 5 мл воды (протирая стеклянной палочкой) и количественно переносят на слой силикагеля (размер частиц 40/100) на стеклянном фильтре. Осадок повторно элюируют 10 мл воды. Водный элюат полностью отбрасывают. Затем элюируют спиртом этиловым 95% в мерную колбу вместимостью 10 мл до метки, перемешивают (раствор А). Далее 1 мл раствора А вносят в мерную колбу вместимостью на 10 мл и доводят объём раствора тем же растворителем (раствор Б).

1 мл раствора Б вносят в мерную колбу вместимостью на 25 мл, прибавляют 5 мл серной кислоты концентрированной и нагревают на кипящей водяной бане 10 мин. После охлаждения измеряют оптическую плотность раствора на спектрофотометре при длине волны 322±2нм в кювете с толщиной слоя 10 мм. В качестве раствора сравнения используют спирт этиловый 95%.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО Р-эсцина: 1 мл раствора БРСО помещают в мерную колбу вместимостью 25 мл, прибавляют 5 мл серной кислоты концентрированной и нагревают на кипящей водяной бане 1 0 мин. Измерения проводят аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы сапонинов (X) в пересчёте на Р-эсцин в % рассчитывают по формуле:

„ Л1*ао*200*10*(5+Уо)*100*100*1*10

л =-, где

Ло*100*(5+У1)*а1*5*(100-Ж)*1*10 '

А1 - оптическая плотность испытуемого раствора;

А0 - оптическая плотность раствора СО Р-эсцина;

а1 - масса сырья, г;

ас - масса РСО Р-эсцина;

У0 - объем аликвоты раствора СО Р-эсцина, мл;

У1 - объем аликвоты испытуемого раствора, мл;

W - влажность, %.

Сумма флавоноидов

Приготовление раствора СО рутина. 0,1 г стандартного образца рутина (точная навеска) предварительно высушенного при температуре 130-140°С в течение часа, растворяют при нагревании на водяной бане в 80 мл спирта этилового 95% в мерной колбе вместимостью 100 мл и доводят объём раствора тем же растворителем после охлаждения до метки. Срок годности раствора 1 месяц.

Приготовление раствора алюминия хлорида 5%. 5 г алюминия хлорида 6-водного (ГОСТ 3759-75) растворяют в спирте этиловом 95% в мерной колбе

вместимостью 100 мл, доводят объем раствора этим же растворителем до метки. Срок годности раствора 1 месяц при хранении в хорошо укупоренной таре.

Аналитическую пробу сырья около 1,0 г (точная навеска) сырья, измельченного и просеянного до размера частиц 3,0 мм, помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 200 мл, прибавляют 100 мл спирта этилового 70%, закрывают и взвешивают с погрешностью ± 0,01 г. Колбу присоединяют к обратному холодильнику и однократно экстрагируют на кипящей водяной бане в течение 50 минут. Затем колбу охлаждают, массу доводят до первоначальной спиртом 70% и извлечение фильтруют, отбрасывая первые порции, в колбу вместимостью 200 мл (раствор А испытуемого раствора).

В две мерные колбы вместимостью 25 мл помещают раствора А по 2 мл, в одну прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 5% в спирте этиловом 95% (раствор Б), а в другую колбу - 0,1 мл уксусной кислоты разведенной 30% (раствор сравнения), доводят объем в колбах до метки спиртом этиловым 70%, перемешивают и через 30 минут измеряют оптическую плотность раствора с алюминия хлорида на спектрофотометре в кювете с толщиной слоя 10 мм при длине волны 412±2 нм на фоне раствора сравнения.

Параллельно измеряют оптическую плотность раствора СО рутина: по 1 мл 0,1% спиртового раствора СО рутина помещают в две мерные колбы вместимостью 25 мл, в одну прибавляют 2 мл алюминия хлорида раствора 5% в 95% спирте этиловом, а в другую колбу - 0,1 мл уксусной кислоты разведенной 30%, доводят объем раствора этиловым спиртом 70% до метки и перемешивают. Измерения проводят аналогично испытуемому раствору.

Содержание суммы флавоноидов (X) в пересчёте на рутин в % рассчитывают по формуле: