Фармакогностическое исследование плодов пальмы Сабаля (Serenoa repens (W.Bartr.) Small., сем.пальмовые – Arecaceae) и разработка на их основе лекарственных препаратов тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 00.00.00, кандидат наук Ходакова Светлана Евгеньевна

• Ходакова Светлана Евгеньевна
• кандидат наук
• 2024

Оглавление диссертации кандидат наук Ходакова Светлана Евгеньевна

Список сокращений

Введение

Глава 1 - Плоды Serenoa repens - перспективное

лекарственное растительное сырье: ботанико-фармакогностическая характеристика производящего растения, лекарственные препараты (обзор

литературы)

1.1 Наукометрический анализ данных литературы

1.2 Ботаническая характеристика рода Serenoa

1.2.1 Химический состав плодов Serenoa repens и средств на их

основе

1.2.2 Методы анализа БАВ плодов Serenoa repens

1.2.3 Стандартизация плодов Serenoa repens и экстракта (Европейская фармакопея)

1.3 Фармакологическая активность БАВ плодов Serenoa repens

1.4 Лекарственные препараты и БАД, получаемые из плодов

Serenoa repens

Заключение к главе

Глава 2 Материалы и методы исследования

2.1 Объекты и материалы исследования

2.1.1 Объекты исследования

2.2 Методы исследования

2.2.1 Определение показателей подлинности и качества ЛРС

2.2.2 Химические методы анализа

2.2.3 Хроматографические методы анализа

2.2.4 Спектроскопические методы анализа

2.2.5 Статистическая обработка результатов экспериментов

2.2.6 Валидация методик количественного определения БАВ

Глава 3 Изучение внешних и микроскопических

диагностических признаков плодов Serenoa repens

3.1 Изучение внешних признаков плодов Serenoa repens

3.2 Изучение микроскопических диагностических признаков

плодов Serenoa repens

Заключение по главе

Глава 4 Фитохимическое изучение и стандартизация

плодов Serenoa repens

4.1 Качественный и количественный анализ БАВ плодов Serenoa

repens

4.1.1 Изучение стеринов плодов Serenoa repens

4.1.2 Изучение жирных кислот плодов Serenoa repens

4.1.3 Изучение фенольных соединений плодов Serenoa repens

4.1.4 Изучение эфирного масла плодов Serenoa repens

4.1.5 Изучение и полисахаридов в плодах Serenoa repens

4.1.6 Определение каротиноидов спектрофотометрическим методом

в плодах Serenoa repens

4.2 Обсуждение результатов фитохимического анализа плодов

Serenoa repens

4.3 Разработка проекта НД «Пальмы ползучей плоды»

Заключение по главе

Глава 5 Получение и изучение экстрактов Serenoa repens и

его лекарственной формы

5.1 Изучение лекарственных форм из плодов Serenoa repens

5.2 Разработка унифицированных методик анализа ЛП, полученных

из плодов Serenoa repens

5.2.1 Анализ тритерпеноидов и фитостеринов в лекарственных

формах

5.2.2 Анализ жирных кислот в лекарственных формах

5.2.3 Анализ жирных кислот в лекарственных формах методом

ГХ-МС

5.3 Валидация разработанных аналитических методик для проектов НД «Пальмы ползучей экстракт. Субстанция» и «Пальмы ползучей экстракт капсулы»

5.3.1 Валидация методик анализа экстракта

5.3.1.1 Определение подлинности методом ГХ

5.3.1.2 Определение подлинности методом ТСХ

5.3.1.3 Определение подлинности экстракта

спектрофотометрическим методом

5.3.1.4 Валидация методики количественного определения суммы тритерпеноидов и фитостеринов в экстракте

5.3.2 Валидация методик анализа капсул

5.3.2.1 Анализ подлинности капсул методом ГХ

5.3.2.2 Анализ подлинности капсул методом ТСХ

5.3.2.3 Анализ подлинности капсул методом спектрофотометрии

5.3.2.4 Определение специфичности метода

5.3.2.5 Валидация методики количественного определения суммы тритерпеноидов и фитостеринов ЛП «ПростатОфф» капсулы 160 мг

и 320 мг»

5.4 Фармакологические свойства разработанного экстракта

Заключение по главе

Общие выводы

Литература

Приложение №1 Акт внедрения

Приложение №2 Нормативная документация

Список сокращений

АФС - активная фармацевтическая субстанция;

БАВ - биологически активные вещества;

БАД - биологически активная добавка (к пище);

ВЭЖХ - высокоэффективная жидкостная хроматография;

ГЖХ - газо-жидкостная хроматография;

ГХ - газовая хроматография;

ГХ-МС - газовая хроматография с масс-спектральной детекцией;

ГФ РФ - государственная фармакопея Российской Федерации;

ЛП - лекарственный препарат;

ЛРС - лекарственное растительное сырье;

НД - нормативная документация;

СО - стандартный образец;

СТО - стандарт организации;

ТСХ - тонкослойная хроматография;

ФС - фармакопейная статья;

ФСП - фармакопейная статья предприятия

Введение

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Фармакогностическое исследование плодов пальмы Сабаля (Serenoa repens (W.Bartr.) Small., сем.пальмовые – Arecaceae) и разработка на их основе лекарственных препаратов»

Актуальность темы исследования

Современные исследования, проводимые в разных странах, свидетельствуют об ухудшении показателей репродуктивного здоровья мужчин, в частности, снижении уровня андрогенов, повышения частоты и степени развития аденомы простаты и др. [21]. В этой связи поиск новых эффективных средств, направленных на поддержание мужского здоровья, является актуальной научной проблемой.

Одним из перспективных природных источников лекарственных препаратов (ЛП) в терапии заболеваний предстательной железы являются плоды Serenoa repens - пальмы Сабаля или п. ползучей (Serenoa repens (Bartr.) Small., сем. Arecaceae). Имеются экспериментальные данные по влиянию лекарственных препаратов из плодов Serenoa repens на репродуктивную функцию. Однако ЛП, полученные из этого лекарственного растительного сырья (ЛРС), на отечественном фармацевтическом рынке представлены преимущественно зарубежными наименованиями. Подобного рода препараты входят в высокую ценовую категорию, что делает их малодоступными для широкого круга старшего возраста, преимущественно страдающих от нарушений функции предстательной железы.

Плоды Serenoa repens достаточно широко изучаются, однако преимущественно на предмет медицинского применения полученных из них ЛП. Актуальными направлениями исследований данного ЛРС являются фармакогностическое изучение с приложением современных возможностей аналитического оборудования и актуальных требований, дальнейшее изучение химического состава малополярной и фенольной фракций, совершенствование методик анализа и стандартизации ЛРС и ЛП.

Все изложенное определило цель и задачи нашего исследования.

Степень разработанности темы исследования

Плоды Serenoa repens - ЛРС, исследуемое на предмет химического состава липидного и стероидного комплексов [35, 36, 37, 41, 59, 95, 97, 100, 101], фармакологических свойств и клинических испытаний, полученных из него ЛП [1, 2, 12, 14, 61, 62, 84, 85, 93]. Монографии на это ЛРС включены в разные издания Европейской фармакопеи [57, 58]. Однако не в полной мере решен вопрос сквозной стандартизации, так как в доступных литературных источниках представлены достаточно сложные методики анализа основной группы биологически активных веществ (БАВ) - тритерпеновых соединений и фитостеринов в ЛРС и ЛП. Существующие методики анализа БАВ нуждаются в совершенствовании, в т.ч. в разработке новых подходов в рамках т.н. «сквозной» стандартизации в ряду ЛРС - субстанция - лекарственная форма.

Цель и задачи исследования

Цель исследования - фармакогностический анализ и нормирование качества лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов из плодов Serenoa repens в рамках «сквозной» стандартизации.

Задачи исследования

1. Провести анализ данных научной литературы и нормативной документации, отражающих современные сведения об исследуемых объектах -биологические особенности производящего растения Serenoa repens, общую характеристику лекарственного растительного сырья и лекарственных препаратов (обзор литературы).

2. Провести фармакогностическое исследование плодов Serenoa repens, в частности, изучить особенности морфологии и анатомического строения, выявить диагностические признаки, провести товароведческий анализ, определить нормы качества исследуемого сырья.

3. Провести качественный и количественный фитохимический анализ плодов Serenoa repens.

4. Провести качественный и количественный анализ извлечений, полученных различными способами и экстрагентами, воспроизвести технологию биологически активной фракции, а именно экстракта спиртового, входящего в состав лекарственных препаратов из плодов Serenoa repens.

5. Предложить методики определения подлинности и количественного содержания основных БАВ в субстанции и лекарственных препаратах на его основе в рамках «сквозной» стандартизации. Провести валидационную оценку разработанных методик.

6. Определить нормируемые показатели качества исходного ЛРС, субстанции и препаратов Serenoa repens. Обосновать спецификацию и разработать проекты нормативной документации.

Научная новизна исследования

В ходе исследования ЛРС с учетом современных требований впервые изучены анатомо-морфологические признаки микроскопии высушенных плодов Serenoa repens, что позволило актуализировать научные сведения по данному направлению и разработать новый проект ФС для ГФ РФ.

При изучении химического состава плодов Serenoa repens впервые охарактеризованы физико-химические свойства и компонентный состав эфирного масла, фенольного комплекса, липидного комплекса, установлено содержание каротиноидов и полисахаридов. В составе фенольной фракции впервые идентифицированы фенолокислоты: протокатеховая, 4-гидроксибензойная, пирокатеховая, сиреневая, вератровая, о-кумаровая, 3-гидроксибензойная, 3-метоксибензойная (м-анисовая), 3-гидрокси-4-метоксибензойная, 2-гидрокси-5-метоксибензойная, 3-метокси-4-

гидроксибензойная, п-кумаровая, феруловая и др.

Впервые исследованы товароведческие и технологические свойства высушенных плодов Serenoa repens, определена возможность извлечения целевой малополярной фракции различными экстрагентами, в т.ч. сжиженным СО2 (СКФ-СО2-экстракцией). Установлено, что в составе ранее разработанных ЛП основными классами БАВ являются малополярные соединения липидного

комплекса, в их составе преимущественно высшие жирные кислоты и их эфиры, компоненты эфирного масла, фитостерины, тритерпеноиды и др.

Впервые предложены и валидированы методики определения подлинности и количественного содержания суммы фитостеринов и тритерпеноидов в ЛРС, субстанции (АФС) и разработанных ЛП, позволяющие осуществлять т.н. «сквозную» стандартизацию и контроль качества на разных стадиях промышленного производства препаратов Serenoa repens.

Теоретическая и практическая значимость исследования

В результате проведённых исследований уточнены данные по химическому составу ЛРС. Разработана технология производства экстракта плодов Serenoa repens и капсул, его содержащих, которая позволила наладить промышленный выпуск ЛП - отечественного аналога импортируемого препарата. Разработанные унифицированные методики оценки подлинности и качества позволяют выполнять анализ на всех контрольных точках производства. Разработан и утвержден пакет нормативной документации, необходимой для промышленного производства, в частности проект фармакопейной статьи (ФС) на ЛРС «Пальмы ползучей плоды» (на рассмотрении уполномоченным органом при МЗ РФ), нормативная документация на субстанцию «Пальмы ползучей плодов экстракт» (получено регистрационное удостоверение (РУ) производителем - компанией ЗАО «ВИФИТЕХ») и на ЛП «Пальмы ползучей экстракт, капсулы» (получено РУ производителем - компанией ЗАО «ВИФИТЕХ»).

Основные положения, выносимые на защиту

1. Результаты морфолого-анатомического анализа позволяют полнее охарактеризовать диагностические признаки микроскопии исследуемого ЛРС, осуществлять идентификацию плодов Serenoa repens и, при необходимости, отличать их от возможных примесей плодов близкородственных видов производящего растения.

2. Результаты фитохимического анализа ЛРС позволяют заключить, что основными классами БАВ в зрелых плодах Serenoa repens являются компоненты эфирного масла, тритерпеноиды и фитостерины, сумма жирных кислот и их эфиров, полифенольный комплекс, каротиноиды, органические кислоты и полисахариды. В ходе анализов значительно расширены сведения о химическом составе эфирного масла и фенольных соединений, извлекаемых из зрелых высушенных плодов Serenoa repens.

3. Результаты фитохимического анализа фракций из ЛРС, состоящих преимущественно из малополярных БАВ, и извлекаемых экстрагентами, применяемыми в промышленном производстве, что явилось научным обоснованием для разработки основных этапов промышленного получения очищенного спиртового экстракта из плодов Serenoa repens в качестве АФС.

4. Результаты качественного и количественного фитохимического анализа спиртового экстракта из плодов Serenoa repens, которые позволяют заключить, что основными классами БАВ, определяющими химический профиль ЛП, являются терпеноиды, в частности тритерпены и фитостерины, а также высшие жирные кислоты. Обнаружение и определение данных классов БАВ составляет основу т.н. «сквозной» стандартизации в ряду ЛРС -субстанция - лекарственная форма.

5. Результаты сравнительного физико-химического анализа образцов спиртового экстракта очищенного, полученного из плодов Serenoa repens, и экстракта, импортируемого в составе ЛП зарубежного производства. Соответствие разработанных в ходе исследований методик фитохимического анализа и стандартизации валидационным критериям, предъявляемым ГФ РФ, послужило научно-практической основой для создания нормативной и технической документации, необходимой для внедрения в отечественное промышленное производство воспроизведенных ЛП, содержащих экстракт плодов Serenoa repens.

Методология и методы исследования

При проведении исследований использовали современные методы фармакогностического и фармакопейного анализа - товароведческий анализ ЛРС, макро- и микроскопический анализ ЛРС, химико-технологические методы (экстракция, концентрирование, осаждение, фильтрация и др.), хроматографические методы (ТСХ, ГХ, ГЖХ, ВЭЖХ), оптические (рефрактометрия, УФ-спектрофотометрия, ИК- и масс-спектроскопия) и др. Все полученные данные статистически обработаны. Разработанные в ходе исследования и впервые предлагаемые методики анализа валидированы.

Достоверность научных положений и выводов

При выполнении экспериментальной части диссертационной работы использовано современное сертифицированное аналитическое и производственное оборудование. Достоверность полученных аналитических данных подтверждена многократным повторением экспериментов, валидационной оценкой разработанных и усовершенствованных методик, экспертной оценкой и статистической обработкой результатов.

Работа выполнена на базе Федерального государственного бюджетного образовательного учреждения высшего образования «Майкопский государственный технологический университет» Министерства науки и высшего образования Российской Федерации (ФГБОУ ВО «МГТУ», г. Майкоп, Республика Адыгея).

Экспериментальные физико-химические и технологические исследования выполнялись также на лабораторной и производственной базе отечественной фармацевтической производственной компании ЗАО «ВИФИТЕХ» (Московская область).

Апробация результатов исследования

Основные положения диссертации представлены на:

- I Международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (15-16 ноября 2011 г., Москва);

- II Международном конгрессе «Физическое и духовное здоровье: традиции и инновации» (7-9 июня 2012 г., Москва);

- II Международной научно-практической конференции «Молодые учёные в решении актуальных проблем науки» (13-15 мая 2011 г., г. Владикавказ);

- XXI Российском национальном конгрессе «Человек и лекарство» (7-11 апреля 2014 г., г. Москва);

- 67 Межрегиональной конференции «Разработка, исследование и маркетинг новой фармацевтической продукции» (23-26 января 2012 г., г. Пятигорск);

- специализированной секции Ученого совета ФГБНУ ВИЛАР по поиску БАВ и разработке лекарственных растительных препаратов в форме научного доклада (23 сентября 2021 г., г. Москва).

Личный вклад автора

Автор лично осуществлял выбор научного направления, анализ зарубежной НД, отечественной и зарубежной научной литературы, подготовку и проведение экспериментов, интерпретацию полученных результатов и их статистическую обработку. Автору принадлежит ведущая роль в написании статей и проектов НД. Текст диссертации и автореферата написан автором лично.

Внедрение результатов исследования

На основании полученных экспериментальных результатов были разработаны методики стандартизации, показатели качества и НД на активную фармацевтическую субстанцию и ЛП; проект ФС на ЛРС «Плоды пальмы ползучей».

Практическая значимость подтверждена следующими материалами внедрения:

1. Стандарт организации на ЛРС «Пальмы Сабаля плоды» (СТО 17491338-004-2014). - ЗАО «ВИФИТЕХ». - 2014;

2. Нормативная документация на субстанцию «Пальмы Сабаля плодов экстракт» (ФСП 001267-111115). - ЗАО «ВИФИТЕХ». - 2015;

3. Нормативная документация на лекарственный препарат «ПростатОфф капсулы 160 мг и 320 мг» (ФСП ЗАО «ВИФИТЕХ» 004420-160817). -ЗАО «ВИФИТЕХ». - 2017;

4. Проект фармакопейной статьи (ФС) для ГФ РФ на ЛРС «Пальмы ползучей плоды». - ЗАО «ВИФИТЕХ». - 2024.

Внедренческие материалы, разработанные в ходе выполнения диссертации, легли в основу регистрационных досье на субстанцию и ЛП производства фармацевтической компании ЗАО «ВИФИТЕХ» и позволили наладить промышленный выпуск отечественного аналога ЛП из плодов Serenoa repens под торговым наименованием «ПростатОфф капсулы 160 мг и 320 мг».

Соответствие диссертации паспорту научной специальности

Научные положения соответствуют паспорту специальности 3.4.2 -фармацевтическая химия, фармакогнозия, а именно: пункту 2 -формулирование и развитие принципов стандартизации и установление нормативов качества, обеспечивающих терапевтическую активность и безопасность лекарственных средств, пункту 3 - разработка новых, совершенствование, унификация и валидация существующих методов контроля качества лекарственных средств на этапах их разработки, производства и потребления, пункту 6 - изучение химического состава лекарственного растительного сырья, установление строения, идентификация природных соединений, разработка методов выделения, стандартизации и контроля качества лекарственного растительного сырья и лекарственных форм на его основе.

Связь исследования с проблемным планом фармацевтических наук

Диссертация выполнена в соответствии с планом научных исследований ФГБОУ ВО «Майкопский государственный технологический университет»

(Республика Адыгея, г. Майкоп) в рамках НИОКТР на тему «Фармакогностическое и фармакотехнологическое изучение перспективного лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов».

Объем и структура диссертации

Диссертация изложена на 138 страницах основного текста компьютерного набора и состоит из раздела «Введение», глав «Обзор литературы» и «Объекты и методы исследования», 3 глав собственных исследований, содержит общие выводы, заключение, список сокращений и приложения. Список литературы включает 136 источников, из которых 102 иностранных. Работа иллюстрирована 41 рисунком и 49 таблицами.

Публикации

По материалам диссертации опубликовано 10 работ, в том числе 5 статей в журналах, рекомендованных ВАК РФ, в их числе 4 статьи в журналах, входящих в международные научные базы данных Scopus и Chemical Abstract.

Глава 1 - Плоды Serenoa repens - перспективное лекарственное

растительное сырье: ботанико-фармакогностическая характеристика производящего растения, лекарственные препараты (обзор литературы)

1.1 Наукометрический анализ данных литературы

Систематические литературные исследования проводились в следующих базах данных: PubMed [110], J-Stage [68], eLIBRARY.RU [16], ScienceDirect [99]. Поиск вели, используя русское, английское и латинское научное название растения, и синонимы «сереноа ползучая», «пальма Сабаля», «Serenoa repens», «Sabal serrulata», «Saw palmetto».

В выборке 553 работы, из них 90 обзорных статей, 461 оригинальная статья и 2 диссертации. Статьи опубликованы в 221 журнале на 15 языках, наибольшее число на английском (471), русском (61), немецком (13) и французском (5). В таблице представлены наименования журналов, в которых опубликовано 5 и более статей (табл. 1).

Таблица 1- Журналы, в которых опубликовано 5 и более статей, посвященных изучению Serenoa repens

Название журнала Статей, шт. Название журнала Статей, шт.

1 2 3 4

Journal of Urology 21 Current Urology Reports 9

Prostate 17 Journal of alternative and complementary medicine 9

Урология 21 Minerva Urologica e Nefrologica 7

Urology 21 Planta Medica 7

Archives of Italian Urology and Andrology 13 World Journal of Urology 10

British Journal of Urology international 8 Current opinion in urology 5

European Urology 10 Phytotherapy Research 5

Der Urologe. Ausg. A 8

При изучении распределения публикаций по годам отмечено повышение интереса исследователей к Serenoa repens (рис. 1).

Рисунок 1 - Распределение публикаций по годам (по данным PubMed) Распределение публикаций по отраслям знаний представлено на рисунке 2.

Биохимия и механизм действия 12,9'

Урология 15,5%

Фармакология и токсикология 15,5%

Фитотерапия и БАД 11,6%

Фитохимия 5,2%

отаника и экология Другой 2,6% 2,1%

Косметика 1,0%

Педиатрия 0,5%

Геронтология

0,3% Гомеопатия

0,3%

Онкология 34,6%

Рисунок 2 - Распределение публикаций по отраслям знаний

Как следует из данных, представленных на рисунке 2, наибольшее число публикаций посвящено вопросам доклинических исследований (фармакологии и токсикологии), изучению биохимии и механизма действия экстракта, клиническим исследованиям (урология, онкология, дерматология, геронтология), применению препаратов из плодов Serenoa repens в

фитотерапии и составе БАД к пище. Изучению химического состава и возможности стандартизации плодов Serenoa repens посвящено около 5% научных публикаций.

1.2 Ботаническая характеристика рода Serenoa

Serenoa (сереноя) - монотипный род семейства Arecaceae Bercht. & J.Presl, синоним Palmae Juss. (пальмовые). Систематическое положение представлено на рисунке 3 [107-109]:

Рисунок 3 - Систематическое положение Serenoa repens

Serenoa repens (W. Bartram) Small (сереноя ползучая) имеет синонимы: Corypha repens W. Bartram, Brahea serrulata (Michaux) H. Wendland, Chamaerops serrulata Michaux, Corypha obliqua W. Bartram, Diglossophyllum serrulatum (Michx.) H.Wendl. ex Salomon, Sabal serrulata (Michaux) Nuttallex Schultes&Schultesf, Serenoa serrulata (Michaux) G. Nicholson, пальма ползучая, пальма Сабаль [100].

Serenoa repens - вечнозеленый ветвистый кустарник, достигающий высоты 2 м (рис. 4). Стебли обычно стелющиеся, ветвящиеся, иногда восходящие, до 1-3 м длиной. Листья восходящие, крупные длинные шириной

до 1 м, разделенные на 18-30 сегментов (рис. 5). Листовая пластинка жёсткая, вееровидной формы. Черешки имеют длину до 1,5 м, покрыты острыми зубцами, твердыми и загнутыми. Цвет листьев желто-зелёный, зелёный, встречается форма с зеленовато-голубыми листьями (Serenoa repens f. glauca Moldenke). Цветки мелкие, белые или кремовые, 4-5 мм, собраны в метелки, на верхушке стебля (рис. 6, 7). Плод представлен костянкой длиной 2-3 см удлиненно-яйцевидной формы. Цвет до созревания зеленый или желтый, потом становится оранжевым, созревших плодов - синевато-черный (рис. 8). Цветёт весной, плоды созревают с августа по октябрь [100].

Рисунок 4 - Производящее растение Рисунок 5 - Лист Serenoa repens [11]

Serenoa repens (фотографии взяты из открытых источников) [11]

Рисунок 6 - Взрослое растение Serenoa Рисунок 7 - Цветки Serenoa repens. [11] repens. Цветение [11]

Рисунок 8 - Плоды Serenoa repens. [82].

Ареал Serenoa repens обычно простирается на юге и юго-востоке Северной Америки от Бофорта до Луизианы, иногда встречается на островах Карибского моря, полуострове Юкатан. Произрастает как в сосновых лесах, так и вдоль побережий [100]

Форма с зелёными листьями более распространена в пределах ареала, а с сизыми или серыми - в прибрежных участках юго-восточной Флориды [100]. Растение культивируется на Черноморском побережье Кавказа.

Проведено исследование, показавшее перспективность использования плодов Serenoa repens форма glauca (silver) (серебристая) в качестве возможной сырьевой замены дикорастущих популяций (форма с зелеными листьями) с целью сохранения последнего, т.к. эксплуатация дикорастущих зарослей в местах естественного обитания ставят их под угрозу вымирания. Результаты изучения продемонстрировали сходный состав метаболитов и количественного содержания липидов и фитостеролов в плодах [122]. Химический состав плодов Serenoa, вопросы стандартизации сырья и средств на их основе.

1.2.1 Химический состав плодов Serenoa repens и средств на их основе

Согласно данным литературы, химический состав плодов Serenoa repens представлен несколькими группами БАВ:

- жирное масло и жирные кислоты: триглицериды каприловой, каприновой, лауриновой, пальмитиновой, стеариновой, миристиновой, миристолеиновой, олеиновой и линолевой кислоты, моноацилглицериды (1-монолаурин, 1-мономиристин) [35, 37, 44, 59, 86, 101].

- стерины: холестерин, кампестерин, ß-ситостерин (59,4 % всех стеринов),

5 7 7

А -авенастерин, А -авенастерин, А -стигмастерин, ситостерин-3-O-ß-глюкозид, 3-О^-ацетилситостерин) [35, 49].

- сапонины тритерпеновые: лупеол, лупенон, циклоартенол, метилциклоартенол [37].

- эфирное масло: доминирующие компоненты ментол, транс-анетол, изоментон, анисальдегид, ментон, лимонен, фенхон [91, 95].

- витамины и провитамины: каротиноиды, токоферолы [97].

- фенольные соединения: бис-О-[(1-4')^(П-6')]-а-гидроксифлоретин-2'-О-ß-глюкозид, 4-гидроксибензойная кислота, протокатеховая кислота, метилгаллат [35].

- флавоноиды: апигенина 7-О-рамногликозид, изокверцетин, кемпферола 3-О-гликозид, рутин, (-)-эпикатехин, (-)-эпиафзелехин [35].

- дубильные вещества [95].

- полисахариды, содержащие арабинозу, галактозу, глюкозу, глюкуроновую кислоту, ксилозу, маннозу, рамнозу [95].

Экстракты Serenoa repens - это извлечения, полученные с помощью спирта этилового 96% (Простамол Уно, Простаплант), гексана (Пермиксон). Они содержат в основном свободные жирные кислоты (85%) или этерифицированные жирные кислоты (примерно 2% метилэтиловых эфиров и 5-6% триглицеридов). Основными свободными жирными кислотами являются лауриновая (30%), олеиновая (30%), миристиновая (10%) и пальмитиновая (10%). Помимо свободных или этерифицированных жирных кислот содержатся фитостеролы (кампестерол, стигмастерол, ß-ситостерин), тритерпены (1%) и жирные спирты (от 0,8 до 1,1%) [123].

Содержание основных (жирные кислоты, фитостеролы) и сопутствующих соединений зависит от используемого для экстракции растворителя. Имеются сведения, что этанольные экстракты дополнительно содержат фосфоглицериды и полифенолы. Гексановые экстракты отличаются большим содержанием свободных жирных кислот и меньшим содержанием триглицеридов. В то же время С02-экстракты и этанольные экстракты характеризуются большим количеством моно-, ди- и триглицеридов [124].

Различия в химическом составе используемого сырья и полупродуктов обуславливает и различие в качественном и количественном составе готовых препаратов на основе плодов Serenoa repens, которые могут содержать как экстракты, полученные различными растворителями, так и измельченное сырье. В исследовании Penugonda К. с соавт, 2013, выявлено, что БАД в форме мягких капсул, содержащие экстракты Serenoa repens (гексановый, СО2, спиртовой), характеризовались высокими концентрациями общих жирных кислот (до 908,5 мг/г), фитостеролов (до 2,04 мг/г) в сравнении с настойками (70% спирт этиловый), а также средствами, содержащими порошок плодов и средствами в твердых капсулах. В свою очередь, БАД в форме порошка в твердых капсулах содержали более высокие концентрации общих жирных кислот - 179,6 мг/г, чем настойки, содержание жирных кислот в которых составило 46,3 мг/г. Содержание жирных кислот в продуктах, содержащих порошок плодов, было 126,4 мг/г [125].

1.2.2 Методы анализа БАВ плодов Serenoa repens

В литературе описаны методики анализа в плодах Serenoa repens преимущественно двух групп БАВ: жирных кислот и фитостеринов, обуславливающих фармакологическую активность средств.

Для выделения свободных стеринов из сырья используют экстракцию гексаном, щелочной гидролиз, колоночную хроматографию и последующую кристаллизацию [17, 31, 33].

Качественный анализ стеринов проводят методом ТСХ с использованием веществ-свидетелей на пластинках с силикагелем в смесях растворителей:

- гексан - диэтиловый эфир - уксусная кислота (85:15:1) [8,9],

- гексан - этилацетат (9:1; 6:4) [17],

- бензол - этилацетат (8:2),

- хлороформ - ацетон (9:1) [33].

Описаны методики анализа жирных кислот и фитостеринов методом газовой хроматографии с пламенно-ионизационной детекцией (ГХ ПИД) в СО2-экстракте плодов Serenoa repens [59, 97, 105, 106].

Экстракты Serenoa repens традиционно анализируют с помощью газовой хроматографии-масс-спектрометрии (ГХ-МС), которая предусматривает предварительную модификацию веществ для облегчения их идентификации, включая повышение летучести жирных кислот и омыление стеринов и других этерифицированных соединений [124].

Проводились исследования эффективности применения метода спектроскопии 1H ядерного магнитного резонанса для метаболомного анализа продуктов на основе плодов Serenoa repens, позволяющего оценить комплекс БАВ, в сравнении газовой хроматографией, используемой преимущественно для количественного определения доминирующих жирных кислот. Результаты показали, что метод может быть рекомендован преимущественно для идентификации продуктов на основе плодов Serenoa repens, полученных различными растворителями [126].

1.2.3 Стандартизация плодов Serenoa repens и экстракта (Европейская фармакопея)

В Европейской фармакопее 8 и 9 издания представлено две монографии «Saw palmetto fruit (sabalis serrulatae fructus)», регламентирующая подлинность и качество плодов, и «Saw palmetto extract (sabalis serrulatae extractum)», регламентирующая подлинность и качество экстракта плодов [57, 58].

В монографии «Saw palmetto fruit» описана идентификация цельных плодов по морфологическим признакам и микроскопия порошка. Анализ стеринов проводят методом ТСХ на пластинках с силикагелем в смеси растворителей кислота уксусная - этилацетат - толуол (1:30:70). В качестве веществ-свидетелей используют ß-амирин и ß-ситостерин. Проявление зон адсорбции проводят опрыскиванием раствором анисового альдегида и высушиванием (100-105 °С, 5-10 минут).

Сумму жирных кислот качественно и количественно рекомендуют определять методом ГХ в извлечении из плодов диметилформамидом. В качестве стандартных образцов используют растворы метилпеларгоната и метилмаргарата в диметилформамиде. Основной пик обусловлен лауриновой кислотой. Используют колонку с силикагелем длинной от 25 м (для толщины слоя 1 мкм) до 60 м (для толщины слоя 0,2 мкм), диаметр 0,20-0,53 мм, неподвижная фаза поли(диметил)силоксан. Газ-носитель - гелий для хроматографии. Характеристические пики на хроматограмме исследуемого раствора аналогичны по времени удерживания с пиками на хроматограмме, полученной с контрольным раствором.

Список литературы диссертационного исследования кандидат наук Ходакова Светлана Евгеньевна, 2024 год

ЛИТЕРАТУРА

1. Аляев, Ю.Г. Эффективность и безопасность Простамола® Уно у больных хроническим бактериальным простатитом / Ю.Г Аляев, А.З. Винаров, К.Л. Локшин и др. // Урология. - 2006. - №1. - С. 47-50.

2. Аляев, Ю.Г. Экстракты Serenoarepens в лечении гиперплазии предстательной железы и хронического бактериального простатита -результаты краткосрочных курсов (3-месячных курсов) терапии. Обзор литературы / Ю.Г Аляев, А.З. Винаров, К.Л. Локшин и др. // Урология. - 2007 -№ 2. - С. 80-82.

3. Артюшенко, З.Т. Атлас по описательной морфологии высших растений. Плод / З.Т. Артюшенко, А.А. Федоров. - Л.: Наука, 1986. - 392 с.

4. Государственная фармакопея Российской Федерации. - 12 изд. - М.: Издательство «Научный центр экспертизы средств медицинского применения», 2008. - 704 с.

5. Государственная фармакопея Российской Федерации: в 4 т. - XIV изд. -М., 2018. - [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://femb.ru/record/pharmacopea14 (Дата обращения: 20.02.2024г).

6. Государственная фармакопея Российской Федерации - XV изд. - М., 2023. - [Электронный ресурс] - Режим доступа: https://minzdrav.gov.ru/ministry/61/10/gosudarstvennaya-farmakopeya-rossiyskoy-federatsii-xv-izdaniya (Дата обращения: 20.02.2024г).

7. Государственный реестр лекарственных средств http: // http://grls.rosminzdrav.ru/grls.aspx. (Дата обращения: 11.22.2023г).

8. Девятловская, А.Н. Содержание стеринов в тканях берёзы повислой и тополя дрожащего / А.Н. Девятловская, Л.Н. Журавлёва // Вестник КрасГАУ. -2013. - № 10. - С. 139-144.

9. Девятловская, А.Н. Изучение содержания фитостеринов в анатомических частях боярышника кроваво-красного / А.Н. Девятловская, Л.Н. Журавлёва, Ю.Д. Алашкевич // Химия растительного сырья. - 2014. - №2. - С. 195-198.

10. Зилфикаров, И.Н. Обработка лекарственного растительного сырья сжиженными газами и сверхкритическими флюидами / И.Н. Зилфикаров, В.А. Челомбитько, А.М. Алиев - Пятигорск, 2007. - 244 с

11. Изображения растений. Форум. Сереноа ползучая (Serenoarepens, Arecaceae/Palmae) [Электронный ресурс]. - Режим доступа: http://molbiol.ru/forums/index.php?showtopic=272836&hl=Serenoa++repens (Дата обращения: 11.03.2022г).

12. Лопаткин, Н.А. Результаты мультицентрового исследования экстракта Serenoarepens (Пермиксон®) у больных хроническим абактериальным простатитом / Н.А. Лопаткин, О.И. Аполихин, А.В. Сивков и др. // Урология. -2007 - №5. - С. 3-7.

13. Лоран, О.Б. Гентос в лечении хронического абактериального простатита / О.Б. Лоран, Д.Ю. Пушкарь, В.В. Тедеев и др. // Урология. - 2003. -№6. - С. 30-32.

14. Мазо, Е.Б., Применение фитостеролов в лечении хронического простатита / Е.Б. Мазо, Д.Г. Дмитриев // Консилиум медикум. - 2005. - Т. 7, № 7.- С.589-891.

15. Мазо, Е.Б. Простамол® уно в длительном непрерывном лечении больных доброкачественной гиперплазией предстательной железы и хроническим простатитом / Е.Б. Мазо, С.В. Попов // РМЖ. - 2007. - Т.15. -№ 12. - С. 1004-1008.

16. Научная электронная библиотека eLIBRARY.RU [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://elibrary.ru (Дата обращения: 20.02.2024г).

17. Новрузов, Э.Н. Каротиноиды и стерины некоторых форм Hippophae rhamnoides / Э.Н. Новрузов // Химия природ, соедин. - 1981. - №1. - С. 98-99.

18. Оленников, Д.Н. Фенольные соединения плодов Serenoa repens / Д.Н. Оленников, И.Н. Зилфикаров, С.Е. Ходакова // Химия природных соединений. -2013. - №3. - С. 448-450.

19. Орлова, С.Е. Технология и стандартизация липофильного экстракта из плодов Serenoa repens / С.Е. Орлова, И.Н. Зилфикаров // 2 Междунар. научно-практ. конф. «Молодые ученые в решении актуальных проблем науки»: сб. работ молодых ученых. - Ч. 1. - Владикавказ. - 2011. - С. 279-282.

20. Орлова, С.Е. Фитохимический анализ плодов Serenoa repens / С.Е. Орлова, И.Н. Зилфикаров // Традиц. медицина. - №5. - 2011. - С. 257-258.

21. Павлов, В.Н. Медико-биологические, социальные и культурно-образовательные аспекты охраны мужского здоровья / В.Н. Павлов, Э.Ф. Галимова, Г.Х. Ахмадуллина и др. // Профилактическая и клиническая медицина. - 2014. - № 2 (51). - С. 5-13.

22. Разумов, С.В. Простамол® Уно в лечении больных доброкачественной гиперплазией предстательной железы / С.В. Разумов, И.И. Деревянко, А.В. Сивков // Урология. - 2001. - №2. - С. 35-37.

23. Реестр продукции, прошедшей государственную регистрацию (выданные Федеральной службой по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, включая Управления) http://fp.crc.ru/gosregfr/ (Дата обращения: 10.02.2020г).

24. Ивашев, М.Н. Оценка состояния нервной системы при применении масляного экстракта плодов пальмы сабаль в условиях субхронического эксперимента / М.Н. Ивашев, А.В. Сергиенко, И.А. Савенко и др. // Успехи современного естествознания. - 2013. - №3. - С. 141-142.

25. Савенко, А.В. Результаты макроморфологического исследования состояния внутренних органов крыс при длительном применении масляного экстракта плодов пальмы сабаль / А.В. Савенко, И.А. Савенко, А.В. Сергиенко и др. // Международный журнал экспериментального образования. - 2013. -№3. - С. 14.

26. Савенко, А.В. Оценка биохимических показателей крови крыс при курсовом применении масляного экстракта плодов пальмы сабаль / А.В. Савенко, А.В. Сергиенко, Е.Е. Зацепина и др. // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2012. - №11. - С. 14-15.

27. Савенко, И.А. Оценка состояния нервной системы при однократном применении масляного экстракта плодов пальмы сабаль / И.А. Савенко, А.В.

Сергиенко, М.Н. Ивашев и др. // Международный журнал прикладных и фундаментальных исследований. - 2012. - №11. - С. 15.

28. Семенов, А.А. Основы химии природных соединений / А.А. Семенов, В.Г. Карцев. - М.: МБФНП. - 2009. - Т. 1. - 624 с.

29. Сивков, А.В. Морфологические изменения в ткани предстательной железы больных с доброкачественной гиперплазией предстательной железы при лечении Пермиксоном® / А.В. Сивков, Ю.В. Кудрявцев, А.А. Медведев и др. // Урология. - 2004. - №5. - С. 10-16.

30. Солихов, Д.Н. Сравнительная оценка современных методов лечения больных хроническим простатитом: автореф. дис. ... д.м.н. 14.01.23 / Солихов Дилшод Нигматович. - СПб., 2010. - 41 с.

31. Трофимов, А.Н. Технология получения бета-ситостерина из талловых продуктов / А.Н. Трофимов, В.А. Чупрова // Химия растительного сырья. -2002. - №2. - С. 129-132.

32. Федоровская, М.И. Разработка состава основы крем-маски для профилактики и терапии лиц с андрогенной алопецией / М.И. Федоровская // Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. -2014. -№2(15). - С. 4-7.

33. Шахова, М.Ф. Стерины мяты перечной / М.Ф. Шахова, А.Л. Деднева // Фармация. - 1972. -№ 5. - С. 19-21.

34. Ярема, И.А. Маркетинговые исследования рынка лекарственных и косметических средств, предназначенных для применения при различных формах алопеции / И.А. Ярема, М.И. Федоровская, Л.В. Соколова //

Актуальные вопросы фармацевтической и медицинской науки и практики. -2014. - №3(16). - С. 106-110.

35. Abdel Bar, F.M. New chalcanonol glycoside from the seeds of saw palmetto: antiproliferative and antioxidant effects / F.M. Abdel Bar // Nat Prod Res.: Formerly Natural Product Letters. - 2014. - V.29. - Iss. 10.

36. Abe, M. Pharmacologically relevant receptor binding characteristics and 5alpha-reductase inhibitory activity of free Fatty acids contained in saw palmetto extract / M. Abe, Y. Ito, L. Oyunzul et al. // Biol Pharm Bull. - 2009. - V.32. - Iss.4. - P. 646-650.

37. Agbabiaka, T.B. Serenoa repens (saw palmetto): a systematic review of adverse events / T.B. Agbabiaka, M.H. Pittler, B. Wider et al. // Drug Saf. - 2009. -V.32(8). - P. 637-647.

38. Altavilla, D. The combination of Serenoa repens, selenium and lycopene is more effective than serenoa repens alone to prevent hormone dependent prostatic growth / D. Altavilla, A. Bitto, F. Polito et al. // J Urol. - 2011. - V. 186. - Iss. 4. - P. 1524-1529.

39. Bardaweel, S.K. Alternative and antioxidant therapies used by a sample of infertile males in Jordan: a cross-sectional survey / S.K. Bardaweel// BMC Complement Altern Med. - 2014. - N. 14. - P. 244.

40. Bayne, C.W. The selectivity and specificity of the actions of the lipido-sterolic extract of Serenoa repens (Permixon) on the prostate / C.W. Bayne, M. Ross, F. Donnelly et al. // J. Urol. - 2000. - V. 164. - Iss. 3. - Pt 1. - P. 876-881.

41. Bedner, M. Development of liquid chromatographic methods for the determination of phytosterols in Standard Reference Materials containing saw palmetto / M. Bedner, M.M. Schantz, L.C. Sander et al. // J Chromatogr A. - 2008. -V. 1192. - Iss. 1. - P. 74-80.

42. Bernichtein, S. Anti-inflammatory properties of Lipidosterolic extract of Serenoa repens (Permixon®) in a mouse model of prostate hyperplasia / S. Bernichtein, N. Pigat, P. Camparo et al. // Prostate. - 2015. - V. 7. - Iss. 7. - P. 706722.

43. Bonvissuto, G. Effect of Serenoa repens, lycopene, and selenium on proinflammatory phenotype activation: an in vitro and in vivo comparison study / G. Bonvissuto, L. Minutoli, G. Morgia et al. // Urology. - 2011. - V. 77. - Iss. 1. - P. 248.e9-16

44. Booker, A. A phytochemical comparison of saw palmetto products using gas chromatography and (1) H nuclear magnetic resonance spectroscopy metabolomic profiling / A. Booker, A. Suter, A. Krnjic et al. // J Pharm Pharmacol. - 2014. - V. 66. - Iss. 6. - P. 811-822.

45. Busetto, G.M. Chronic bacterial prostatitis: efficacy of short-lasting antibiotic therapy with prulifloxacin (Unidrox®) in association with saw palmetto extract, lactobacillus sporogens and arbutin (Lactorepens®) / G.M. Busetto, R. Giovannone, M. Ferro et al. // BMC Urol. - 2014. - V. 14. - P. 53.

46. Cao, N. Saw palmetto is an indirectly acting sympathomimetic in the rat-isolated prostate gland / N. Cao, J.M. Haynes, S. Ventura // Prostate. - 2006. - V.66. - Iss. 2. - P. 115-123.

47. Che, Y. Serenoa repens induces growth arrest and apoptosis of human multiple myeloma cells via inactivation of STAT 3 signaling / Y. Che, S. Hou, Z. Kang et al. // Oncol Rep. - 2009. - V. 22. - Iss. 2. - P. 377-383.

48. Cheema, P. Intraoperative haemorrhage associated with the use of extract of Saw Palmetto herb: a case report and review of literature / P. Cheema, O. El-Mefty, A.R. Jazieh // J Intern Med. - 2001. - V. 250. - Iss. 2. - P. 167-169.

49. Chua, T. Pharmacological characterization and chemical fractionation of a liposterolic extract of saw palmetto (Serenoa repens): effects on rat prostate contractility / T. Chua, N.T. Eise, J.S. Simpson et al. // J Ethnopharmacol. - 2014. -V. 152. - Iss. 2. - P. 283-291.

50. De Combarieu, E. Metabolomics study of Saw palmetto extracts based on 1H NMR spectroscopy / E. De Combarieu, E.M. Martinelli, R. Pace et al. // Fitoterapia. - 2015. - V. 102. - P. 56-60.

51. De Monte, C. Modern extraction techniques and their impact on the pharmacological profile of Serenoa repens extracts for the treatment of lower urinary

tract symptoms / C. De Monte, S. Carradori, A. Granese et al. // BMC Urol. - 2014. -V. 14. - P. 63.

52. Debruyne, F. Evaluation of the clinical benefit of permixon and tamsulosin in severe BPH patients-PERMAL study subset analysis / F. Debruyne, P. Boyle, F. Calais da Silva et al. // Eur Urol. - 2004. - V. 45. - Iss. 6. - P. 773-779.

53. Djavan, B. Progression delay in men with mild symptoms of bladder outlet obstruction: a comparative study of phytotherapy and watchful waiting / B. Djavan, Y.K. Fong, A. Chaudry et al. // World J Urol. - 2005. - V. 23. - P. 253-256.

54. Dobrev, H. Clinical and instrumental study of the efficacy of a new sebum control cream / H. Dobrev // J Cosmet Dermatol. - 2007. - V. 6. - Iss. 2. - P. 113118.

55. Dreissig, I. Quantification of brain lipids by FTIR spectroscopy and partial least squales regression / I. Dreissig, S. Macill, R. Salzer et al. // Spectochimica Acta. A. - 2009. - V. 71. - P. 2069-2075.

56. Duborija-Kovacevic, N. Tolerability and toxicity of lipidosterolic extract of American dwarf palm Serenoa repens in Wistar rats: well-known extract, new insight / N. Duborija-Kovacevic, V. Jakovljevic, A. Sabo et al. // Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2011. - V. 15. - Iss. 11. - P. 1311-1317.

57. European Pharmacopoeia. - 2013. - 8th edition. - Online version http://www.edqm.eu. (Дата обращения: 10.02.2020г).

58. European Pharmacopoeia. - 2017. - 9th edition. - Online version http://www.edqm.eu. (Дата обращения: 10.02.2020г).

59. Ganzera, M. Determination of the Fatty Acid content of pumpkin seed, pygeum, and saw palmetto / M. Ganzera, E.M. Croom, I.A. Khan // J Med Food. -1999. - V. 2. - Iss. 1. - P. 21-27.

60. Geavlete, P. Serenoa repens extract in the treatment of benign prostatic hyperplasia / P. Geavlete, R. Multescu, B. Geavlete // Ther Adv Urol. - 2011. - V.3. - Iss. 4. - P. 193-198.

61. Gerber, G.S. Saw palmetto for the treatment of men with lower urinary tract symptoms / G.S. Gerber // J Urol. - 2000. - V. 163. - Iss. 5. - P. 1408-1412.

62. Gerber, G.S. The role of a lipido-sterolic extract of Serenoa repens in the management of lower urinary tract symptoms associated with benign prostatic hyperplasia / G.S. Gerber, J.M. Fitzpatrick // BJU Int. - 2004. - V. 94. - P. 338-344.

63. Giulianelli, R. Multicentre study on the efficacy and tolerability of an extract of Serenoa repens in patients with chronic benign prostate conditions associated with inflammation / R. Giulianelli, S. Pecoraro, G. Sepe et al. // Arch Ital Urol Androl. -2012. - V. 84. - Iss. 2. - P. 94-98.

64. Habib, F.K. Serenoa repens (Permixon) inhibits the 5alpha-reductase activity of human prostate cancer cell lines without interfering with PSA expression / F.K. Habib, M. Ross, C.K. Ho et al. // Int J Cancer. - 2005. - V. 114. - Iss. 2. - P. 190194.

65. Hanaka, M. A Case of Rhabdomyolysis Caused by Saw Palmetto of Healthy Foods / M. Hanaka, C. Yoshii, K. Yatera et al. // Journal of UOEH. - 2012. - V. 34. -N. 2. - P. 193-199.

66. Iacono, F. Observational study: daily treatment with a new compound "Tradamixina" plus serenoa repens for two months improved the lower urinary tract symptoms / F. Iacono, D. Prezioso, E. Illiano et al. // BMC Surg. - 2012. - V. 12 Suppl 1:S22.

67. Iglesias-Gato, D. Androgen-independent effects of Serenoa repens extract (Prostasan®) on prostatic epithelial cell proliferation and inflammation / D. Iglesias-Gato, T. Carsten, M. Vesterlund et al. // Phytother Res. - 2012. - V. 26, 2. - P. 259264.

68. Japan Science and Technology Corporation [Электронный ресурс]. -Режим доступа: www.jstage.jst.go.jp. (Дата обращения: 9.02.2020г).

69. Jibrin, I. Saw palmetto-induced pancreatitis / I. Jibrin, A. Erinle, A. Saidi et al. // South Med J. - 2006. - V. 99. - Iss. 6. - P. 611-612.

70. Kujawski, R. Effect of Epilobium angustifolium and Serenoa repens extracts on regulation of non-genomic signaling pathway of kinases / R. Kujawski, A. Bogacz, J. Bartkowiak-Wieczorek et al. // Ginekol Pol. - 2014. - V. 85. - Iss. 4. - P. 278-282.

71. Latil, A. Hexanic lipidosterolic extract of Serenoa repens inhibits the expression of two key inflammatory mediators, MCP-1/CCL2 and VCAM-1, in vitro / A. Latil., C. Libon, M. Templier et al. // BJU Int. - 2012. - V. 110 (6 Pt B): E301-7.

72. Lopatkin, N. Efficacy and safety of a combination of Sabal and Urtica extract in lower urinary tract symptoms--long-term follow-up of a placebo-controlled, double-blind, multicenter trial / N. Lopatkin, A. Sivkov, S. Schläfke et al. // Int Urol Nephrol. - 2007. - V. 39. - Iss. 4. - P. 1137-1146.

73. MacDonald, R. Serenoa repens monotherapy for benign prostatic hyperplasia (BPH): an updated Cochrane systematic review / R. MacDonald, J.W. Tacklind, I.

Rutks et al. // BJU Int. - 2012. - V. 109. - Iss. 12. - P. 1756-1761.

74. Magri, V. Activity of Serenoa repens, lycopene and selenium on prostatic disease: evidences and hypotheses / V. Magri, A. Trinchieri, G. Perletti et al. // Arch Ital Urol Androl. - 2008. - V. 80. - Iss. 2. - P. 65-78.

75. Marks, LS. Tissue effects of saw palmetto and finasteride: use of biopsy cores for in situ quantification of prostatic androgens / LS. Marks, DL. Hess, FJ. Dorey et al. //

Urology. - 2001. - V 57(5). - P. 999-1005.

76. Minutoli, L., Inhibitors of apoptosis proteins in experimental benign prostatic hyperplasia: effects of serenoa repens, selenium and lycopene / L. Minutoli, D. Altavilla, H. Marini et al. // J Biomed Sci. - 2014. - V. 21. - P. 19.

77. Minutoli, L. Serenoa Repens, lycopene and selenium: a triple therapeutic approach to manage benign prostatic hyperplasia / L. Minutoli, A. Bitto, F. Squadrito

et al. // Curr Med Chem. - 2013. - V. 20. - Iss. 10. - P. 1306-1312.

78. Miroddi, M. Hot flashes in a young girl: a wake-up call concerning Serenoa repens use in children / M. Miroddi, A. Carni, C. Mannucci et al. // Pediatrics. -2012. - V. 130. - Iss. 5. - P. 1374-1376.

79. Morgia, G. Serenoa repens, lycopene and selenium versus tamsulosin for the treatment of LUTS/BPH. An Italian multicenter double-blinded randomized study

between single or combination therapy (PROCOMB trial) / G. Morgia, GI. Russo, S. Voce et al. // Prostate. - 2014. - V. 74(15). - P. 1471-80.

80. Morgia, G. Effects of Serenoa repens, selenium and lycopene (Profluss®) on chronic inflammation associated with benign prostatic hyperplasia: results of "FLOG" (Flogosis and Profluss in Prostatic and Genital Disease), a multicentre Italian study / G. Morgia, S. Cimino, V. Favilla et al. // Int Braz J Urol. - 2013. - V. 39. - Iss. 2. - P. 214-221.

81. Morgia, G. Treatment of chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome category IIIA with Serenoa repens plus selenium and lycopene (Profluss) versus S. repens alone: an Italian randomized multicenter-controlled study / G. Morgia, G. Mucciardi, A. Gali et al. // Urol Int. - 2010. - V. 84(4). - P. 400-406.

82. Mulyono Wijaya P. Pembesaran Prostat Vs Saw Palmetto [Электронныйресурс]. - Режимдоступа: http://www.tanyadokteranda.com/artikel/2008/05/ pembesaran-prostat-vs-saw-palmetto (Дата обращения: 10.02.2021г).

83. Murugusundram, S. Serenoa Repens: Does It have Any Role in the Management of Androgenetic Alopecia / S. Murugusundram // J Cutan Aesthet Surg.

- 2009. - V. 2. - Iss. 1. - P.31-32.

84. Novara, G., Efficacy and safety of hexanic lipidosterolic extract of Serenoa repens (Permixon) in the treatment of lower urinary tract symptoms due to benign prostatic hyperplasia: systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials / G. Novara, G. Giannarini, A. Alcaraz et al. // Eur Urol Focus. - 2016. - V. 2. -Iss. 5. - P. 553-561.

85. Ooi, S.L. Serenoa repens for Lower Urinary Tract Symptoms/Benign Prostatic Hyperplasia: Current Evidence and Its Clinical Implications in Naturopathic Medicine / S.L. Ooi, S.C. Pak // J Altern Complement Med. - 2017. - V. 23. - Iss. 8.

- P. 599-606.

86. Penugonda, K. Fatty acid and phytosterol content of commercial saw palmetto supplements / K. Penugonda, BL. Lindshield // Nutrients. - 2013. - V 5(9).

- P. 3617-3633.

87. Petrangeli, E. Lipido-sterolic extract of Serenoa repens (LSESr, Permixon) treatment affects human prostate cancer cell membrane organization / E. Petrangeli, L. Lenti, B. Buchetti et al. // J Cell Physiol. - 2009. - V. 219. - Iss. 1. - P. 69-76.

88. Posadzki, P. Herb-drug interactions: an overview of systematic reviews / P. Posadzki, L. Watson, E. Ernst // Br J Clin Pharmacol. 2013. - V. 75(3). - P 603-618.

89. Quarto, G. Efficacy of a formulation containing Serenoa repens, Crocus sativus and Pinus massoniana extracts in men with concomitant LUTS and erectile dysfunction / G. Quarto, A. Cola, S. Perdona // Minerva Urol Nefrol. - 2017. - V. 69.

- Iss.3. - P. 300-306.

90. Raynaud, JP. Inhibition of type 1 and type 2 5alpha-reductase activity by free fatty acids, active ingredients of Permixon / JP. Raynaud, H. Cousse, PM. Martin // J Steroid Biochem Mol Biol. - 2002. - V. 82. - Iss. 2-3. - P. 233-239.

91. Rösler, TW. Analysis of the hydrodistillate from the fruits of Serenoa repens / TW. Rösler, R. Matusch, B Weber et al. // Planta Med. - 2009. - V. 75(2). - P. 184186.

92. Rossi, A. Comparitive effectiveness of finasteride vs Serenoa repens in male androgenetic alopecia: a two-year study / A. Rossi, E. Mari, M. Scarno et al. // Int J Immunopathol Pharmacol. - 2012. - V. 25(4). - P. 1167-1173.

93. Rowland, D. A review of plant-derived and herbal approaches to the treatment of sexual dysfunctions / D. Rowland, W. Tai // J Sex Marital Ther. - 2003.

- V. 29. - Iss.3. - P. 185-205.

94. Ryu, Y.W. Comparison of tamsulosin plus serenoa repens with tamsulosin in the treatment of benign prostatic hyperplasia in korean men: 1-year randomized open label study / Y.W. Ryu, S.W. Lim, J.H. Kim et al. // Urol Int. - 2015. - V. 94. - Iss. 2. - P. 187-193.

95. Saw palmetto // About The ABC Clinical Guide to Herbs Blumenthal M. et al., 2003. P. 309-319 http://abc.herbalgram.org (Дата обращения: 10.02.2021).

96. Scaglione, F. Comparison of the potency of different brands of Serenoa repens extract on 5alpha-reductase types I and II in prostatic co-cultured epithelial

and fibroblast cells / F. Scaglione, V. Lucini, M. Pannacci et al. // Pharmacology. -2008. - V. 82. - Iss. 4. - P. 270-275.

97. Schantz, MM, Development of saw palmetto (Serenoa repens) fruit and extract standard reference materials / MM. Schantz, M. Bedner, SE. Long et al. // Anal Bioanal Chem. - 2008. - V. 392(3). - P. 427-438.

98. Schleich, S. Extracts from Pygeum africanum and other ethnobotanical species with antiandrogenic activity / S. Schleich, M. Papaioannou, A. Baniahmad et al. // Planta Med. - 2006. - V. 72. - Iss.9. - P. 807-813.

99. ScienceDirect - full-text scientific database [Электронный ресурс]. -Режим доступа: www.sciencedirect.com. (Дата обращения: 10.02.2022).

100. Serenoa repens (W. Bartram) Small // Flora of North America. Oxford University Press. Online Date 21.05.2004 Volume 22 Page 105 http://www.efloras.org/ (Дата обращения: 10.12.2022).

101. Shimada, H. Biologically active acylglycerides from the berries of saw-palmetto (Serenoa repens) / H. Shimada, VE. Tyler, JL. McLaughlin // J Nat Prod. -1997 - V.60(4). - P. 417-418.

102. Sinclair, RD. Sensitization to saw palmetto and minoxidil in separate topical extemporaneous treatments for androgenetic alopecia / RD. Sinclair, RS. Mallari, B. Tate // Australas J Dermatol. - 2002. - V. 43. - Iss. 4. - P. 311-312.

103. Singh, Y.N. Hepatotoxicity potential of saw palmetto (Serenoa repens) in rats / Y.N. Singh, A.K. Devkota, D.C. Sneeden et al. // Phytomedicine. - 2007. - V. 14. - Iss. 2-3. - P. 204-208.

104. Sirab, N. Lipidosterolic extract of serenoa repens modulates the expression of inflammation related-genes in benign prostatic hyperplasia epithelial and stromal cells / N. Sirab, G. Robert, V. Fasolo et al. // Int J Mol Sci. - 2013. - V. 14. - Iss. 7. - P. 14301-14320

105. Sorenson, WR. Determination of campesterol, stigmasterol, and beta-sitosterol in saw palmetto raw materials and dietary supplements by gas chromatography: single-laboratory validation / WR. Sorenson, D. Sullivan // J AOAC Int. - 2006. - V. 89(1). - P. 22-34.

106. Sorenson, WR. Determination of campesterol, stigmasterol, and beta-sitosterol in saw palmetto raw materials and dietary supplements by gas chromatography: collaborative study / WR. Sorenson, D. Sullivan // J AOAC Int. -2007. - V. 90(3). - P. 670-678.

107. Chase, M.W. The Angiosperm Phylogeny Group. An update of the Angiosperm Phylogeny Group classification for the orders and families of flowering plants: APG IV / M.W. Chase, M.J.M. Christenhusz, M.F. Fay et al. // Botanical Journal of the Linnean Society. - 2016. - V.181. - No.1. - P.1-20.

108. The International Plant Names Index. [Электронный ресурс]. - Электрон. дан. - Режим доступа: http://www.ipni.org. (Дата обращения: 10.02.2022).

109. ThePlantList (2013). Version 1.1. [Электронный ресурс]. - Электрон. дан. - Режим доступа: http://www.theplantlist.org/ (Дата обращения: 10.02.2022).

110. US National Library of MedicineNational Institutes of Health. [Электронный ресурс]. - Режим доступа: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed. (Дата обращения: 10.02.2022).

111. Vacherot, F. Induction of apoptosis and inhibition of cell proliferation by the lipido-sterolic extract of Serenoa repens (LSESr, Permixon in benign prostatic hyperplasia / F. Vacherot, M. Azzouz, S. Gil-Diez-De-Medina et al. // Prostate. -2000. - V. 45. - Iss. 3. - P. 259-266.

112. Van Coppenolle, F. Pharmacological effects of the lipidosterolic extract of Serenoa repens (Permixon) on rat prostate hyperplasia induced by hyperprolactinemia: comparison with finasteride / F. Van Coppenolle, X. Le Bourhis, F. Carpentier et al. // Prostate. - 2000. - V. 43. - Iss. 1. - P. 49-58.

113. Vela Navarrete, R. BPH and inflammation: pharmacological effects of Permixon on histological and molecular inflammatory markers. Results of a double blind pilot clinical assay / R. Vela Navarrete, JV. Garcia Cardoso, A. Barat et al. // Eur Urol. -2003. - V.44(5). - P. 549-55

114. Vela-Navarrete, R. Serenoa repens treatment modifies bax/bcl-2 index expression and caspase-3 activity in prostatic tissue from patients with benign

prostatic hyperplasia / R. Vela Navarrete, M. Escribano-Burgos, AL. Farre et al. // Eur Urol. -2005. - V.173(2). - P. 507-10.

115. Villanueva, S. Coagulopathy induced by saw palmetto: a case report / S. Villanueva, J. González // Bol Asoc Med P R. - 2009. - V. 101. - Iss. 3. - P. 48-50.

116. Villaverde, N. Saw palmetto ethanol extract inhibits adipocyte differentiation /

N. Villaverde, A. Galvis, A. Marcano et al. // J Nat Med. - 2013. - V. 67. - Iss. 3. - P. 619-625.

117. Wargo, KA. A possible case of saw palmetto-induced pancreatitis / KA. Wargo, E. Allman, F. Ibrahim // South Med J. - 2010. - V. 103(7). - P. 683-5.

118. Wessagowit, V. Treatment of male androgenetic alopecia with topical products containing Serenoa repens extract / V. Wessagowit, C. Tangjaturonrusamee, T. Kootiratrakarn et al. // Australas J Dermatol. - 2016. - V. 57. - Iss. 3. - P. e76-82.

119. Yang, S. Saw palmetto extract enhances erectile responses by inhibition of phosphodiesterase 5 activity and increase in inducible nitric oxide synthase messenger ribonucleic acid expression in rat and rabbit corpus cavernosum / S. Yang, C. Chen, Y. Li et al. // Urology. - 2013. - V. 81. - Iss. 6. - P. 1380.e7-13.

120. Yang, Y. Effect of saw palmetto extract on PI3K cell signaling transduction in human glioma / Y. Yang, L. Hui, C. Yuqin et al. // Exp Ther Med. - 2014. - V. 8. - Iss. 2. - P. 563-566.

121. Zlotta, AR. Evaluation of male sexual function in patients with Lower Urinary Tract Symptoms (LUTS) associated with Benign Prostatic Hyperplasia (BPH) treated with a phytotherapeutic agent (Permixon), Tamsulosin or Finasteride / AR. Zlotta, P. Teillac, JP. Raynaud et al. // Eur Urol. - 2005. - V. 48. - Iss. 2. - P. 269-276.

122. Jaiswal, Y. A substitute variety for agronomically and medicinally important Serenoa repens (saw palmetto) / Y. Jaiswal, D. Weber, A. Yerke et al. //

Sci Rep. - 2019. - V. 9(1):4709.

123. Abe, M. Isolation and pharmacological characterization of fatty acids from Saw palmetto extract / M. Abe, Y. Ito, A. Suzuki et al. // Anal. Sci. - 2009. - V. 25(4). - P. 53-557.

124. Marti, G. Comparison of the phytochemical composition of Serenoa repens extracts by a multiplexed metabolomic approach / G. Marti, P. Joulia, A. Amiel et al. // Molecules. - 2019. - V. 24(12):2208

125. Penugonda, K. Fatty acid and phytosterol content of commercial saw palmetto supplements. Nutrients / K. Penugonda, BL. Lindshield // Nutrients. - 2013. - V. 5(9). - P. 3617-33.

126. Booker, A. A phytochemical comparison of saw palmetto products using gas chromatography and (1) H nuclear magnetic resonance spectroscopy metabolomic profiling / A. Booker, A. Suter, A. Krnjic et al. // J Pharm Pharmacol. -

2014. - V. 66(6). - P. 811-22

127. Latil, A. Hexanic lipidosterolic extract of Serenoa repens inhibits the expression of two key inflammatory mediators, MCP-1/CCL2 and VCAM-1, in vitro / A. Latil, C. Libon, M. Templier et al. // BJU Int. - 2012. - V. 110(6 Pt B ): E301-7

128. Abe, M. Pharmacologically relevant receptor binding characteristics and 5alpha-reductase inhibitory activity of free Fatty acids contained in saw palmetto extract / M. Abe, Y. Ito, L. Oyunzul et al. // Biol Pharm Bull. - 2009. - V. 32(4). - P. 646-50.

129. Scholtysek, C. Characterizing components of the Saw Palmetto Berry Extract (SPBE) on prostate cancer cell growth and traction / C. Scholtysek, A.A. Krukiewicz, J.L. Alonso et al. // Biochem Biophys Res Commun. - 2009. - V. 379. -P. 795-798.

130. Abdel Bar, F.M. New chalcanonol glycoside from the seeds of saw palmetto: antiproliferative and antioxidant effects / F.M. Abdel Bar // Nat Prod Res. -

2015. - V. 29(10). - P. 926-32.

131. Ishii, I. Effects of saw palmetto fruit extract intake on improving urination issues in Japanese men: A randomized, double-blind, parallel-group, placebo-

controlled study / I. Ishii, T. Wada, T. Takara // Food Sci Nutr. - 2020. - V. 8(8). - P. 4017-4026.

132. Samarinas, M. The Clinical Impact of Hexanic Extract of Serenoa repens in Men with Prostatic Inflammation: A Post Hoc Analysis of a Randomized Biopsy Study / M. Samarinas, A. Karatzas, V. Tzortzis et al. // J Clin Med. - 2020. - V. 9(4). - P. 957.

133. Zhang, K. The efficacy and safety of Serenoa repens extract for the treatment of patients with chronic prostatitis/chronic pelvic pain syndrome: a multicenter, randomized, double-blind, placebo-controlled trial / K. Zhang, R.Q. Guo, S.W. Chen et al. // World J Urol. - 2021. - V. 39(9). - P. 3489-3495.

134. Morgia, G. Serenoa repens + selenium + lycopene vs tadalafil 5 mg for the treatment of lower urinary tract symptoms secondary to benign prostatic obstruction: a Phase IV, non-inferiority, open-label, clinical study (SPRITE study) / G. Morgia, G. Vespasiani, R.M. Pareo et al. // BJU Int. - 2018. - V. 122(2). - P. 317-325.

135. Zhu, H.L. Serenoa repens extracts promote hair regeneration and repair of hair loss mouse models by activating TGF-ß and mitochondrial signaling pathway / H.L. Zhu, Y.H. Gao, J.Q. Yang et al. // Eur Rev Med Pharmacol Sci. - 2018. - V. 22(12). - P. 4000-4008.

136. Silvestri, I. Effect of Serenoa repens (Permixon®) on the expression of inflammation-related genes: analysis in primary cell cultures of human prostate carcinoma / I. Silvestri, S. Cattarino, A. Agliano et al. // J Inflamm (Lond). - 2013 Mar 14:10:11 - doi: 10.1186/1476-9255-10-11. PMID: 23497174; PMCID: PMC3653817

ПРИЛОЖЕНИЕ № 1 Акт внедрения

УТВЕРЖДАЮ И.о. директора Пятигорского ме^1ко-ф;ф^й^евтического института ф'и .иа.Ф1Ъ1УУ 'ШИкиг! МУ '■Минздрава России^,

з доктор медицин

1?» ¿'s ; j'• *

; наук

•M.Fi. Черников

АКТ

внедрения результатов научно-исследовательский работы в учебный процесс и

научную работу

Предмет внедрения: результаты диссертационного исследования Светланы Евгеньевны Ходаковой на тему «Фармакогностическое исследование плодов Serenoa repens (W. Bartram) Small».

Кем предложен: Светланой Евгеньевной Ходаковой - соискателем ученой степени кандидата фармацевтических наук по научной специальности 3.4.2. Фармацевтическая химия, фармакогнозия

Где внедрено: кафедра фармакогнозии, ботаники и технологии фитопрепаратов Пятигорского медико-фармацевтического института - филиала ФГБОУ ВО ВолгГМУ Минздрава России.

Цель внедрения: использование результатов диссертационного исследования СЕ. Ходаковой при чтении лекций и проведении практических занятий по теме «Лекарственное растителыюе сырьё, содержащее сапонины», а также в научных исследованиях, проводимых студентами, аспирантами и сотрудниками кафедры.

Результаты внедрения: приобретение студентами и аспирантами кафедры информации о химическом составе плодов Serenoa repens (W. Bartram) Small, методиках анализа стероидных сапонинов в соответвип с принципом сквозной стандартизации в цепи лекарственное растительное сырьё - лекарственный препарат, подходах к разработке отечественных лекарственных препаратов. Объект исследования включён в рабочую программу дисциплины «Фармакогнозия».

Эффективность внедрения: полученные результаты C.F. Ходаковой содержат важную информацию при изучении темы «Лекарственное растительное сырьё, содержащее сапонины» для студентов и аспирантов, а также при выполнении научных исследований сотрудниками кафедры.

Заведующий кафедрой фармакогнозии, ботаники и технологии фитопрепаратов, доктор фармацевтических наук, профессор

Профессор кафедры фармакогнозии, ботаники и технологии фитопрепаратов. ^

доктор фармацевтических наук /y^f jQ^¿¿^

Д.А. Коновалов

Ж Ii

.аиронас

ПРИЛОЖЕНИЕ № 2

Нормативная документация

МИНИСТЕРСТВО ЗДРАВООХРАНЕНИЯ РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ

ФАРМАКОПЕЙНАЯ СТАТЬЯ

Плоды пальмы ползучей ФС

Serenoae repensis fructus Вводится впервые

(Sabalis serrulatae fructus)

ОПРЕДЕЛЕНИЕ

Собранные в период созревания с августа по октябрь зрелые плоды (костянки) многолетнего дикорастущего или культивируемого растения пальма ползучая - Serenoa repens (W. Bartram) Small. (син.: пальма Сабаля, Sabal serrulata (Michaux) T. Nuttal ex Schultes & Schultes, Serenoa serrulata (Michaux) G. Nicholson.), сем. Арековые - Arecaceae Bercht. & J.Presl.

Содержат:

- липидной фракции (экстракта спиртового очищенного) - не менее 7% в пересчете на сухое сырье;

- суммы фитостеринов и тритерпеноидов - не менее 0,3% в пересчете на ß-амирин и сухое сырьё.

ИДЕНТИФИКАЦИЯ

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Плоды».

Цельное сырье. Плоды длиной 0,7 - 3см, диаметром 0,6-2 см вытянутые, яйцевидные, иногда зауженные с обоих концов. Поверхность плодов блестящая, иногда матовая, неравномерно морщинистая, темно-коричневая. У основания плода встречаются фрагменты плодоножки до 5 мм.

Семена яйцевидно-вытянутой формы, около 8-10 мм в диаметре. Поверхность твердая шероховатая, красновато-бурого цвета. Со стороны

микропиле семя имеет шов, закрытый тонкой мембраной. Семенная кожура тонкая, неотделимая от семени, отслаивающаяся только по шву семени.

Цвет плодов от жёлтого до коричневатого. Запах характерный.

Порошок плодов пальмы Сабаль при рассматривании невооруженным глазом представляет собой смесь частиц разной формы жёлто-коричневого или красно-коричневого цвета, иногда с зеленоватыми вкраплениями, проходящих сквозь сито с диаметром отверстий 2 мм.

Микроскопические признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Микроскопический и микрохимический анализ лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения».

Цельное сырье. Перикарпий плода состоит из трёх слоёв (рис. 1.1). Большая часть семени представлена плотным, монолитным, «роговым» серовато-белым эндоспермом. Зародыш маленький, конический, отодвинут в эндосперме в одну сторон. Клетки многослойного (2-3 слоя) экзокарпия уплощены (рис. 1.2). На поперечном сечении видно, что стенки клеток утолщены. Полость клеток заполнена содержимым с красно-коричневым пигментом. Поверхность клеток наружного слоя значительно кутинизирована, иногда кутикулярный слой отслаивается.

Поверхность плодов имеет характерный рисунок. Он образуется благодаря особому соединению клеток наружного слоя экзокарпия по четыре -пять в группу. Объединения клеток оформлены по периметру каждой группы значительно более утолщенными клеточными стенками, что и создаёт характерный узор поверхности (рис. 1.3, 1.4).

Ниже лежащие слои экзокарпия представлены крупными (до 100 мкм в поперечнике) клетками продолговато-округлой формы. Полости клеток заполнены красно-коричневым пигментом. Стенки клеток утолщены равномерно, но незначительно, в полостях клеток по периферии часто видна зернистость зеленого цвета. Изредка в массиве пигментированных клеток встречаются чаще одиночно, иногда группами, брахисклереиды. Полости

брахисклереид небольшие, оболочки лигнифицированные, значительно утолщенные, пронизаны сетью поровых каналов (рис. 1.5, 1.6).

Мезокарпий представлен крупноклеточной основной паренхимой. Полости клеток значительные, содержащие капли жирного масла и алейроновые зерна. Паренхима легко отделяется от наружных слоёв экзокарпия. Оболочки равномерно тонкие по периметру, но в углах значительно более утолщены по типу уголковой колленхимы (рис. 1.7).

Ткань мезокарпия пронизана закрытыми коллатеральными проводящими пучками, укрепленными по периферии толстостенными клетками паренхимы мезокарпа (рис. 1.8).

Эндокарпий плодов состоит из плотной ткани из монолитного слоя брахисклереид. В основной части эндокарпия клетки почти изодиаметричны, с точечными или щелевидными полостями. На поперечных сечениях оболочки клеток сильно утолщены и пронизаны многочисленными поровыми каналами. Последние 1-2 слоя клеток заметно уплотнены (рис. 1.9, 1.10). При рассмотрении внутренней поверхности эндокарпия видны клетки других очертаний, с широкопросветными полостями и заметно более тонкими пористыми оболочками.

Спермодерма сухого семени тонкая, аморфная, темно-коричневого цвета. Клетки эндосперма толстостенные, продолговато-вытянутой формы, с зауженными концами. На продольных срезах форма прозенхимная, на поперечных чаще паренхимная. Содержат алейроновые зерна и капли жирного масла. Стенки клеток с четковидным утолщением, с хорошо заметными порами (рис. 1.11-1.14).

Рисунок 1 - Микроскопические признаки плодов пальмы ползучей

1.1 - поперечный срез перикарпия плодов: а - экзокарпий; б - мезокарпий; в -эндокарпий;

1.2 - экзокарпий оболочки плода на поперечном срезе: а - эпидермис; б - колленхима; в- клетки паренхимы экзокарпия; г - паренхима мезокарпия;

1.3 - фрагмент эпидермиса плода: а - разрыв эпидермы; б - клетка эпидермы;

1.4 - эпидермис плода с поверхности;

1.5 - поперечный срез паренхимы экзокарпия плода (окраска раствором судана III);

1.6 - поперечный срез паренхимы экзокарпия плода (без окраски): а - склереида, б -пигмент в клетке экзокарпия, в - капля жирного масла;

1.7 - фрагмент поперечного срез мезокарпия околоплодника: а - паренхима мезокарпия; б - проводящий пучок; в - эндокарпий;

1.8 - проводящий пучок на поперечном срезе мезокарпия оболочки плода: а, г - флоэма пигментированные клетки; б, д - сосуды ксилемы; в - проводящий пучок;

1.9 - фрагмент поперечного среза эндокарпия оболочки плода: а - полость клетки; б -клетка паренхимы мезокарпия; в - клетка эндокарпия;

1.10 - фрагмент поперечного среза эндокарпия оболочки плода;

1.11 - фрагмент поперечного среза семени (х100);

1.12 - фрагмент поперечного среза семени (х400): а - пора; б - стенка клетки; в -полость клетки;

1.13 - фрагмент продольного среза семени (х100);

1.14 - фрагмент продольного среза семени (х 400): а - простая пора; б - полость клетки; в - стенка клетки.

Определение основных групп биологически активных веществ

1. Тонкослойная хроматография. Определение проводят методом ТСХ (ОФС «Тонкослойная хроматография»).

Пластинка. ТСХ пластинка со слоем силикагеля.

Подвижная фаза (ПФ): толуол - этилацетат - уксусная кислота (70 : 30 : 1).

Приготовление спиртового извлечения. Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 10 г измельченного сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл спирта 96 % и перемешивают на магнитной мешалке или взбалтывают на шейкере в течение 2 ч. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу для отгонки вместимостью 500 мл.

Экстракцию сырья повторяют 100 миллилитрами спирта 96 %, перемешивая или взбалтывая смесь в течение 30 мин.

Объединенные фильтраты упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани 80 °С до смолистого остатка.

Испытуемый раствор. 0,3 г спиртового извлечения растворяют в 10 мл спирта 96%.

Раствор СО ¡в-ситостерола. 0,01 г фармакопейного стандартного образца Р-ситостерола (син. Р-ситостерин, Р-фитостерол) растворяют в 10 мл спирта 96 %.

Срок годности раствора - 3 месяца при хранении в прохладном, защищенном от света месте.

Реактив для детектирования. Ванилина раствор 1% в серной кислоте.

На линию старта пластинки наносят по 0,03 мл испытуемого раствора и раствора СО Р-ситостерола в виде полос шириной около 10 мм на расстоянии около 20 мм друг от друга. Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе в течение 20 мин, затем помещают в предварительно насыщенную в течение 1 ч камеру с ПФ и хроматографируют восходящим способом. Когда фронт растворителей пройдёт около 90 % длины пластинки от линии старта, её вынимают из камеры, сушат на воздухе в течение 30 мин.

Высушенную пластинку обрабатывают реактивом для детектирования, нагревают в сушильном шкафу при температуре (100-105) °С в течение 5 мин и просматривают при дневном свете.

На хроматограмме испытуемого раствора должна обнаруживаться зона адсорбции от розовато-красного до красновато-фиолетового цвета с от 0,6 до 0,8 (Р-амирин). Допускается наличие других зон адсорбции сопутствующих фитостеринов и тритерпеноидов, в том числе на старте.

Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме раствора СО Р-ситостерола четко наблюдается зона адсорбции от светло-фиолетового с розоватым оттенком до красновато-фиолетового цвета с Яг от 0,4 до 0,6.

2. Газовая хроматография. Определение проводят методом ГХ (ОФС «Газовая хроматография»).

Испытуемый раствор. 0,05 г спиртового извлечения (см. раздел «Тонкослойная хроматография»), помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 2 мл метанола, 0,1 мл ацетилхлорида и нагревают с обратным холодильником на водяной бане при периодическом перемешивании в течение 1 ч. Затем холодильник отсоединяют, избыток метанола удаляют нагреванием колбы на водяной бане. Остаток охлаждают,

прибавляют 1 мл гексана и перемешивают. Полученный раствор переносят в виалу или пробирку со шлифом и укупоривают.

Хроматографические условия

Колонка

Детектор Температура

Газ-носитель

Расход газа-носителя, мл/мин

Деление потока

Расход водорода, мл/мин

Расход воздуха, мл/мин

Объем пробы, мкл

Время хроматографирования, мин

Капиллярная марки Сwax 20 М длиной 30 м с внутренним диаметром 0,53 мм и толщиной неподвижной фазы 1 мкм или аналогичная при условии соблюдения требований теста «Проверка пригодности хроматографической системы»; Пламенно-ионизационный;

Колонка Инжектор Детектор Гелий; 30; 1 : 1; 40; 400; 1; 30

180°С; 240 °С; 220 °С;

На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться пики, принадлежащие метиловым эфирам жирных кислот, в следующей последовательности: 1 - метиловый эфир миристиновой кислоты, 2 -метиловый эфир пальмитиновой кислоты, 3 - метиловый эфир пальмитолеиновой кислоты; 4 - метиловый эфир стеариновой кислоты; 5 -метиловый эфир олеиновой кислоты; 6 - метиловый эфир линолевой кислоты; 7 - метиловый эфир линоленовой кислоты (рисунок 2).

25000.00" \ 1 •• ! | 1 £ ? 5 |

_____________ \ : >-- г ......

1 ; г............ - | ; 2

У ПИД-1 IС706-23- |

7 | 1 ^ 1 3 е т 1 г г 1

7Л 32.784 I ........ | £ ......Г" 1 I i ........"8" | 3 * а \ ..й ......

27,450 а | * X ......I Г г 1 * 1 X / \1> 1 1 ! Л. .

оооо ' ' оап 01^5 пг'лв огзо оз'бз м.зе шоэ свап. «е. 54 о? г? оеоо

Рисунок 2 - Хроматограмма метиловых эфиров высших жирных кислот из

плодов пальмы ползучей

ИСПЫТАНИЯ

Влажность. Не более 12,0 % (ОФС «Определение влажности лекарственного растительного сырья и лекарственных средств растительного происхождения»).

Зола общая. Не более 5,0 % (ОФС «Зола общая»).

Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте. Не более 1,0 % (ОФС «Зола, нерастворимая в хлористоводородной кислоте»).

Допустимые примеси. Определение проводят в соответствии с ОФС «Определение подлинности, измельченности и содержания примесей в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Другие части растения. Не более 1,0 %.

Органическая примесь. Не более 1,0 %.

Минеральная примесь. Не более 0,5 %.

Тяжёлые металлы и мышьяк. В соответствии с ОФС «Определение содержания тяжёлых металлов и мышьяка в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Радионуклиды. В соответствии с ОФС «Определение содержания радионуклидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Остаточные количества пестицидов. В соответствии с ОФС «Определение содержания остаточных пестицидов в лекарственном растительном сырье и лекарственных растительных препаратах».

Зараженность вредителями запасов. В соответствии с ОФС «Определение степени зараженности лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов вредителями запасов».

Микробиологическая чистота. В соответствии с ОФС «Микробиологическая чистота».

КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ

1. Липидная фракция. Определяют гравиметрическим методом.

Аналитическую пробу сырья измельчают до размера частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями диаметром 1 мм.

Около 3,0 г (точная навеска) измельченного сырья помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 250 мл, прибавляют 150 мл спирта 96 % и перемешивают на магнитной мешалке или взбалтывают на шейкере в течение 2 ч. Извлечение фильтруют через бумажный фильтр в круглодонную колбу для отгонки вместимостью 500 мл. Фильтр с частицами сырья помещают в коническую колбу.

Экстракцию сырья повторяют 100 миллилитрами спирта 96 %, перемешивая или взбалтывая смесь в течение 30 мин.

Объединенные фильтраты упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани 80 °С до смолистого остатка.

Колбу с остатком промывают гексаном, трижды порциями по 50 мл.

Объединенные гексановые извлечения фильтруют через бумажный фильтр «синяя лента» в круглодонную колбу для отгонки вместимостью 250 мл, предварительно высушенную при (100-105) °С, охлажденную в эксикаторе и взвешенную с точностью до 0,001 г. Фильтр промывают 10 мл гексана, которые присоединяют к основному фильтрату.

Гексановые извлечения упаривают на роторном испарителе под вакуумом при температуре водяной бани (65-70) °С до полного удаления органического растворителя. Колбу взвешивают с точностью до 0,001 г.

Содержание липидной фракции в пересчете на сухое сырье (Х) в процентах рассчитывают по формуле:

_ (М-т) ■ 100-100 Х ~ а - (100-Ж) '

где М - масса колбы с липидной фракцией в граммах; т - масса пустой колбы в граммах; а - навеска сырья в граммах; Ж - влажность сырья в процентах.

2. Сумма фитостеринов и тритерпеноидов. Определяют спектрофотометрическим методом (ОФС «Спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях»).

Испытуемый раствор. Липидную фракцию (см. раздел «Количественное определение. 1. Липидная фракция») растворяют в 10 мл спирта 96% и количественно с помощью того же спирта переносят в коническую колбу со шлифом, которую затем помещают в водяную баню и упаривают при периодическом перемешивании до полного удаления спирта. К остатку в колбе прибавляют 40 мл раствора натрия карбоната 20 % и нагревают на водяной бане с обратным холодильником в течение 2 ч. Содержимое колбы охлаждают, прибавляют 200 мл воды, количественно переносят с помощью 50 мл хлороформа в делительную воронку вместимостью 250 мл и взбалтывают в течение 2 мин, избегая образования эмульсии. После разделения фаз нижний

хлороформный слой отделяют в другую делительную воронку вместимостью 250 мл, обработку водной фазы хлороформом повторяют еще 2 раза порциями по 30 мл, каждый раз взбалтывая смесь в течение 2 мин (эмульсию, при ее образовании, присоединяют к хлороформному слою).

К объединенному хлороформному извлечению прибавляют 40 мл воды и взбалтывают в течение 2 мин, избегая образования эмульсии. Водный слой отделяют и отбрасывают. Операцию повторяют еще 4 раза до рН промывных вод около 7 (по индикаторной бумаге).

Хлороформный слой сливают в коническую колбу вместимостью 250 мл, затем фильтруют через бумажный фильтр с 2 г натрия сульфата безводного в колбу для отгонки, коническую колбу и фильтр ополаскивают 10 мл хлороформа, которые присоединяют к основному фильтрату.

Фильтрат упаривают на роторном испарителе при температуре водяной бани (45-50) °С до полного удаления органического растворителя.

Остаток смешивают с 50 мл спирта 96 % при слабом нагревании на водяной бане и переносят в мерную колбу вместимостью 100 мл. Колбу для отгонки промывают тем же спиртом дважды порциями по 20 мл, которые присоединяют к основному раствору. Объем раствора в мерной колбе доводят спиртом 96 % до метки, перемешивают, затем порцию раствора фильтруют через бумажный фильтр.

1,0 мл фильтрата помещают в мерную колбу вместимостью 10 мл, доводят с осторожностью объем раствора до метки серной кислотой концентрированной, смесь выливают в сухой стакан и перемешивают (испытуемый раствор).

Через 5 мин измеряют оптическую плотность испытуемого раствора на спектрофотометре при длине волны 310 нм в кювете с толщиной слоя 10 мм.

В качестве раствора сравнения используют серную кислоту концентрированную.

Содержание суммы фитостеринов и тритерпеноидов в пересчете на

Р-амирин и сухое сырье (X) в процентах рассчитывают по формуле:

а ■ 100 • 10 ' ЮО а -100000

Х = 340-а-1-(ЮО-МО " 340 ■ а • (100 - Ш)'

где а - оптическая плотность испытуемого раствора;

340 - удельный показатель поглощения (А^) (3-амирина в условиях анализа; а - навеска сырья в граммах; IV - влажность сырья в процентах.

УПАКОВКА, МАРКИРОВКА И ТРАНСПОРТИРОВАНИЕ В соответствии с ОФС «Упаковка, маркировка и транспортирование лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных

препаратов».

ХРАНЕНИЕ

В соответствии с ОФС «Хранение лекарственного растительного сырья и лекарственных растительных препаратов».

Пояснительная записка к проекту фармакопейной статьи «Плоды пальмы ползучей» (Serenoae repensis fructus, Sabal is serrulatae fructus)

Настоящий проект фармакопейной статьи (ФС) на плоды пальмы ползучей разработан в ходе исследований, выполняемых в соответствии с планом научных исследований ФГБОУ ВО «Майкопский государственный технологический университет» (Республика Адыгея, г. Майкоп) в рамках НИОКТР на тему «Фармакогностическое и фармакотехнологическое изучение перспективного лекарственного растительного сырья и фитопрепаратов» и диссертационной работы Ходаковой С.Е. на тему «Фармакогностическое исследование плодов пальмы Сабаля (Serenoa repens (W.Bartr.) Small., сем. пальмовые - Arecaceae) и разработка на их основе лекарственных препаратов».

Оформление ФС проведено в соответствии с требованиями ОСТ 91500.05.001-00 от 01.11.01 «Стандарты качества лекарственных средств. Основные положения» [1].

Одним из перспективных природных источников в терапии заболеваний предстательной железы являются плоды Serenoa repens - пальмы Сабаля или п. ползучей (Serenoa repens (Bartr.) Small., сем. Arecaceae).

Собранные в период созревания с августа по октябрь зрелые плоды (костянки) многолетнего дикорастущего или культивируемого растения пальма ползучая - Serenoa repens (W. Bartram) Small, (син.: пальма Сабаля, Sabal serrulata (Michaux) Т. Nuttal ex Schultes & Schultes, Serenoa serrulata (Michaux) G. Nicholson.), сем. Арековые - Arecaceae Bercht. & J.Presl.

Содержат:

- липидной фракции (экстракта спиртового очищенного) - не менее 7% в пересчете на сухое сырье;

- суммы фитостеринов и тритерпеноидов - не менее 0,3% в пересчете на ß-амирин и сухое сырьё.

Внешние признаки. Определение проводят в соответствии с ОФС «Плоды».

УТВЕРЖДАЮ

Генеральный директор

СТАНДАРТ ОРГАНИЗАЦИИ

ЗАО «ВИФИТЕХ»

Пальмы Саба.зя плоды (ТО 17491338-004-2014

Ввслсн впервые

Дата введения Sf »¿¿¿¿гг/Дг014 г.

Настоящий стандарт организации распространяется на зрелые высушенные плоды дикорастущего или культивируемого вечнозеленого кустарника пальмы ползучей (пальма Сабаля, пальма карликовая) - Serenoa repens (Barlram) Small., (Sabal sernilaia (Michaux) Nichols. Saw palmetto], семейство пазьмовые -Arecaceae, которые являются исходным сырьем для изготовления фармацевтической субстанции «Пальмы Сабаля плодов экстракт».

Стандарт устанавливает технические требования, правила приемки, методы контроля, упаковку, маркировку, транспортирование и хранение Пальмы Сабаля плодов.

Утвержденная в МЗ РФ НД (2015 г.)

ФСП_С. 2

ь

СПЕЦИФИКАЦИЯ

Пальмы Сабаля плодов экстракт

Субстанция ЗАО «ВИФИТЕХ», Россия

ПОКАЗАТЕЛИ МЕТОДЫ НОРМЫ

1 2 3

Описание Оргаиолептический Маслянистая жидкость от темно-зеленого цвета с коричневатым оттенком ло темно-коричневого цвета с зеленоватым оттенком с характерным запахом

Растворимость ГФ XI! Растворим в спирте 96 %. практически нерастворим в воде

Подлинность жирные кислоты ["ЖХ На хромаю!рамме испытуемого раст вора должны наблюдаться пики, принадлежащие метиловым ¡фнрам жирных кислот, в следующей последовательности: 1 - мегнловый эфир миристиновой кислоты. 2 метиловый >фир пальм1пиновой кислоты. 3 - метиловый зфир пальми-толеиновой кислоты; 4 - метиловый тфир стеариновой кислоты: 5 -метиловый тфир олеиновой кислоты: 6 - метиловый |фир линолевой кислоты; 7 - метиловый эфир линоленовой кислоты

- р-ситостсрол - р-амирин тех На хромаю|-рамме раствора субстанции должна наблюдаться юна адсорбции от светло-фиолетового с розоватым оттенком ло красновато-фиолетового цвета с Я< от 0.4 до 0.7 на уровне юны адсорбции того же цвета на хрома-тограмме стандартного раствора [}-ситостсрола. Выше зоны адсорбции р-сигостерола должна наблюдаться зона адсорбции доминирующего вещества, имеющая окраску от розовато-красного до красновато-фиолетового цвета

ФСП_С. 3

1 2 3

Допускается наличие других зон адсорбции сопутствующих тритерпеиоидов и фитостсрннов. в том числе на старте

Спектрофотомсгричсскнй УФ-спсктр раствора Б в области от 260 до 360 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны (310± 5) нм

Потер* в массе при высушивании ГФ XI Не более 5,0 %

Тяжелые металлы ГФ XII Не более 0,01 %

Остаточные органические растворители - этанол ГХ % Не более 2,0%

Микробиологическая чистота ГФ XII Категория 3.2

Количественное определение содержание суммы тритерненоидов и фнтосгерииов в пересчете на 0-амирин и сухое вещество Спсктрофотомстрнческий Не менее 4.0 %

Упаковка По 18 или 27 кг в канистры полиэтиленовые По 40 или 54 кг в бочки полиэтиленовые

Маркировка В соо1ветс1ини с ФСП

Хранение В защищенном от света месте при температуре не выше 8 °С

Срок годности 2 года

ФСП_С. 4

Настоящая фармакопейная статья предприятия распространяется на Мальмы Сабаля плодов экстракт, получаемый из зрелых высушенных плодов дикорастущего или культивируемого вечнозеленого кустарника пальмы ползучей (пальма Сабаля, пальма карликовая) - Serenoa repens (Bartram) Small., [Sabal serrulata (Michaux) Nichols, Saw palmetto], семейство пальмовые - Arecaceae (СТО 17491338-004-2014) экстракцией спиртом 96 % при соотношении сырья и конечного продукта - ( 14,3-28,6) : 1 и применяемый для производства нестерильных лекарственных препаратов.

Описание. Маслянистая жидкость от темно-зеленого цвета с коричневатым оттенком до темно-коричневого цвета с зеленоватым оттенком с характерным запахом.

Примечание. При температуре от 2 до 8 °С маслянистая жидкость превращается в густую массу.

Растворимость. Растворим в спирте 96 %, практически нерастворим в воде (ГФ XII, ч. I.e. 92).

Подлинность. 0,05 г субстанции помещают в коническую колбу со шлифом вместимостью 100 мл, прибавляют 2 мл метанола, 0,1мл ацетилхлорида и нагревают с обратным холодильником на водяной бане при периодическом перемешивании в течение I ч. Затем холодильник отсоединяют, избыток-метанола удаляют нагреванием колбы на водяной бане. Остаток охлаждают, прибавляют 1 мл гексана и перемешивают. Полученный раствор переносят в виалу или пробирку со шлифом и укупоривают (испытуемый раствор).

1,0 мкл испытуемого раствора анализируют на газовом хроматографе с программными управлением и обработкой данных в следующих условиях:

- детектор пламенно-ионизационный;

ь

ФСП

С. 5

- колонка капиллярная марки Cwax 20 М длиной 30 м с внутренним диаметром 0,53 мм и толщиной неподвижной фазы 1 мкм или аналогичная при условии соблюдения требований теста «Проверка пригодности хроматографической системы»;

- температура колонки - 180 °С;

- температура детектора - 210 °С; температура инжектора - 230 °С;

- газ-носитель - гелий;

- расход газа-носителя - 30 мл/мин;

- деление потока -1:6;

- расход водорода - 40 мл/мин;

- расход воздуха - 400 мл/мин.

На хроматограмме испытуемого раствора должны наблюдаться пики, принадлежащие метиловым эфирам жирных кислот, в следующей последовательности: 1 - метиловый эфир миристиновой кислоты; 2-метиловый эфир пальмитиновой кислоты; 3-метиловый эфир пальмитолеиновой кислоты; 4 метиловый эфир стеариновой кислоты; 5 - метиловый эфир олеиновой кислоты; 6 - метиловый эфир линолевой кислоты; 7 - метиловый эфир линоленовой кислоты (рисунок I).

0,2 г субстанции помещают н мерную колбу вместимостью 10 мл, растворяют в 6 мл спирта 96 %, затем доводят тем же спиртом до метки н перемешивают (раствор субстанции).

На линию старта хроматографической пластинки марки Кизелыель 60 (силикагель 60) фирмы «Мерк» или аналогичной, при условии соблюдения требования теста «Проверка пригодности хромагофафической системы», размером 10 х 15 см наносят по 0,01 мл раствора субстанции и стандартного раствора Р-ситостерола в виде полос шириной около 10 мм на расстоянии около 20 мм друг от друга.

ФСП_С. 7

\> Пластинку с нанесенными пробами высушивают на воздухе

в течение 20 мин, затем помещают в хроматографическую камеру, предварительно насыщенную в течение 1 ч смесью растворителей: толуол этил ацетат - уксусная кислота (70 : 30 : 1), и хроматографнруют восходящим способом.

Когда фронт растворителей пройдет около 12 см, пластинку вынимают из камеры и высу шивают на воздухе в течение 30 мин. Затем пластинку опрыскивают ванилина раствором в серной кислоте, нагревают в сушильном шкафу при температуре (100-105) °С в течение 5 мин и просматривают ^ в видимом свете.

На хроматограмме раствора субстанции должна наблюдаться зона адсорбции от светло-фиолетового с розоватым оттенком до красновато-фиолетового цвета с R, от 0,4 до 0,7 на уровне зоны адсорбции того же цвета на хроматограмме стандартного раствора p-ситостерола. Выше зоны адсорбции (i-ситостерола должна наблюдаться зона адсорбции доминирующего вещества, имеющая окраску от розовато-красного до красновато-фиолетового цвета (Р-амнрин).

Допускается наличие других зон адсорбции сопутствующих тритерпеноидов и фитостеринов, в том числе на старте. ^ Результаты анализа считаются достоверными, если выполняется

гребованне теста «Проверка пригодности хроматографической системы».

УФ-спектр раствора Б (см. раздел «Количественное определение») в области от 260 до 360 нм должен иметь максимум поглощения при длине волны (310 ± 5) нм (тритерпеноиды и фитостерины).

Примечании. 1. Приготовление стандартного раствора р-ситостерола. 0,01 г Р-снтостерола (Р-ситостерин, Р-фнтостерол) [Sigma, кат. №85451]. помещают в мерную колбу вместимостью 10мл, растворяют в 6 мл спирта 96 %, доводят объем

ФСП_С. 8

t

раствора тем же спиртом до метки и перемешивают. Срок годности раствора - 3 мес. 2. Проверка пригодное!н хромаioiрафнческон системы. Хроматографическая система считается пригодной, если на хроматограмме стандартного раствора Р-сн тостерола четко видна тона адсорбции от светло-фиолетового с розоватым оттенком цвета до красновато-фиолетового цвета с R, от 0,4 до 0,7.

Потеря в массе при высушивании. Около 1 г (точная навеска) Л субстанции сушат при температуре (100-105) °С в течение 5 часов. Потеря в массе при высушивании не должна превышать 5,0 % (ГФ XI, вып. 2, с. 160).

Тяжелые металлы. Испытания проводят по ГФ XII, ч. 1, с. 121.

К 1 г субстанции прибавляют 1 мл серной кислоты концентрированной, осторожно сжигают и прокаливают. Остаток обрабатывают при нагревании 5 мл аммония ацетата насыщенного раствора. Полученную смесь фильтруют через пепельный фильтр в мерную колбу вместимостью 100 мл. Фильтр промывают 5 мл воды, доводят объем раствора водой до метки и перемешивают.

! 10 мл полученного раствора должны выдерживать испытание

на тяжелые металлы (не более 0,01 % в субстанции).

Остаточные органические растворители. Остаточное количество этанола в субстанции определяют методом газовой хроматографии (ГХ) в условиях I lead-Space.

Около 0.2 г (точная навеска) субстанции помещают во флакон Head-Space вместимостью 20 мл, прибавляют 2 мл раствора внутреннего стандарта, герметично укупоривают, перемешивают взбалтыванием в течение одной минуты, затем термостатируют в режиме вибрации при температуре 85 °С в течение 30 мин (испытуемый образен).

ФСП_С. 9

1,0 мл стандартного раствора этанола помещают во флакон Head-Space вместимостью 20 мл, прибаатяют 1 мл раствора внутреннего стандарта, герметично укупоривают, перемешивают взбатгыванием в течение одной минуты, затем термостатируют в режиме вибрации при температуре 85 °С в течение 30 мин (стандартный образец).

По 1,0 мл паровоздушной фазы, отобранной дозатором равновесного пара от испытуемого и стандартного образцов, последовательно хроматографируют на газовом хроматографе с программными управлением и обработкой данных в следующих условиях: • - детектор пламенно-ионизационный;

- колонка капиллярная с фатой OV-624 длиной 30 м с внутренним диаметром 0,53 мм и толщиной неподвижной фазы 3 мкм или аналогичная при условии соблюдения требований теста «Проверка пригодности хроматографической системы»;

- температура колонки - 45 °С;

- температура детектора - 150 °С;

- температу ра инжектора - 200 °С;

- газ-носитель - гелий;