Экстрахромосомная рибосомная ДНК у дрожжей тема диссертации и автореферата по ВАК РФ 03.00.04, кандидат биологических наук Гришин, Анатолий Викторович

• Гришин, Анатолий Викторович
• кандидат биологических наук
• 1983

Оглавление диссертации кандидат биологических наук Гришин, Анатолий Викторович

Введение

1. Дрожжи имеют типичную для эукариот организацию рибо-сомной ДНК (обзор литературы)

1.1. Молекулярная организация рДНК.

1.1.1. Избыточность генов рРНК

1.1.2. рДНК - тяжелая фракция дрожжевой ДНК.

1.1.3. Гены всех типов рРНК физически сцеплены.

1.1.4. Повторяющиеся единицы рДНК. Порядок расположения единиц.

1.1.5. Репликация рДНК

1.1.6. Изменение количества рДНК

1.1.7. Магнификация . I

1.1.8. Амплификация.

1.2. Генетические и цитологические аспекты рДНК

1.2.1. Ядрышко

1.2.2. Наследование рДНК.

1.2.3. Ректификация.

1.2.4. Рекомбинация внутри блока рДНК

2. Материалы и методы.

2.1. Штаммы микроорганизмов и условия культивирования

2.2. Выделение плазмидной ДНК из дрожжей.3£

2.3. Выделение хромосомной и митохондриальной ДНК дрожжей . зз

2.4. Выделение хромосомной рДНК дрожжей .

2.5. Нейтральные градиенты Csci

2.6. Выделение общей клеточной РНК дрожжей.

2.7. Введение радиоактивной метки в нуклеиновые кислоты in vitro

2.8. Синтез комплементарной радиоактивной РНК.

2.9. Гибридизация ДНК-РНК.

2.10. Расщепление ДНК эндонуклеазами рестрикции. Лиги- 36 рование фрагментов ДНК

2. II. Трансформация E.coli

2.12. Выделение плазмиц из E.coli .

2.13. Электрофорез в агарозном геле

2.14. Электронная микроскопия ДНК.

2.15. Трансформация дрожжей.

3. Результаты.

3.1. Выделение кольцевой ковалентно-замкнутой ДНК из штамма дрожжей 6-1Г-П

3.2. Плавучая плотность ковалентно-замкнутой ДНК из штамма 6-ПЧ1188.

3.3. Результаты электрофореза ковалентно-замкнутой ДНК из штамма 6-ПЧИ88.

3.4. Физическое картирование 3 мкм ДНК. Клонирование фрагментов 3 мкм ДНК.

3.5. Молекулярная гибридизация 3 мкм ДНК с различными последовательностями дрожжевого генома.

3.6. Электронная микроскопия препарата 3 мкм ДНК.

3.7. Выделение 3 мкм ДНК из штамма 1Г-П

3.8. Сравнение рестрикцаонных профилей хромосомной и экстрахромосомной рибосомной ДНК

3.9. Конструирование векторов на основе фрагментов

3 мкм ДНК и исследование их свойств

Обсуждение

Выводы.

Введение диссертации (часть автореферата) на тему «Экстрахромосомная рибосомная ДНК у дрожжей»

А к т у а л ь н о с т ь ВВЕДЕНИЕ Проблема организащ1и рибосомной ДЖ (рДШС) является существенной частью общей проблемы организации эзариотического генома. рД1Е состоит из одашаковых повторшощкся единиц, количество которых в геноме является видовьм призншсом, Б пределах ввда количество рДНК монет варьрфовать у особей и клеточных линий. Это варьирование наблюдается не толыю у ввдов,основная часть рД1Ж которых находится вне хромосомы, но и у ввдов с типич110й хршосо1\Шой организацией рД1Ж. BTopoii слт-чай представляет особый интерес с тошш зрения сочетания нестрюй (хромосомной) организации рДИ{ с одновременной нестабильностью числа повторяющихся единиц, Обнаружение у дро}жей-сахаромицетов экстрахромосомной части рДШС позволяет объяснить кажущееся противоречие ме:вду хромосомной локализацией рДЖ и ее потенциальной лабильностью. Экстрахромосомная рДЬК дрожкей происход11т от хромосомной рДШС, но относительно незаБИС1ша от нее благодаря способности к автономной репликацш! и наследованию в глитозе, и может вновь встраиваться в хромосог.ту путем гомологичной рекомбинации. Экстрахромосогжая рДНК, следовательно, может обеспечивать общее изГЛенение количества рДНК в клетке. Изучеьше экстрахромосомной рДЬК дрожикей дает B S OK O T глзбже по11ять эволюционирование хромосомного и экOM J H C b страхромосомного типа оргаш1зац1П1 рДНК. Цель и з а д а ч и Целью работы был поиск новых luiaccoB экстрахромосомных ДЖ дрожзлей и, в случае их обнаружения, конструирование новых дрожхевыс векторных молекул на их основе. Изучение новой плазмиды, обпарз}хенной на1ли, потребовало решения следующих част1шх задач: рата плазмидаи 1. Иолучжтъ достаточное для анализа количество чистого препа2. Изучить физико-химические характеристики плазмвды молекулярный размер, Ш1а.вуч.у1о плотность, располодение застков узнавания эндонуЕслеазаш! рестрикции. 3. Попытаться выяснить фпзиологическуо роль плазмиды в клетке. 4. Сконструировать на основе новой плазглгщы гибридные молекз"лы Д1Ж, содер}:гад1ие дрошкевой селект11вныи маркер, и изуч11ть BOSMOjitHOCTb трансформацт! дрошхей этими молекупаш!. Научная н о в и з н а Впервые доказано наличие у дрожжей сахарош-щетоБ экстрахромосомной рДН[{, Обнаружен шташл с повышенньш! содержанием экстрахромосомной рДЬЖ, что в сочетании с оптиг.Шзацпей метода выделения дало возможность препаративно выделить экстрахромосомную рДБК. Построена рестрикцию иная карта экстрахромосотшой ТЦЖ. Проведено сравнение хромосомной и экстрахромосомной р Ш по соотношению двух вариантов повторяющихся едиД С ниц, показавшее относительнпо автономность экстрахромосотлной рДН1{. Доказана способность кольцевых молекул рДШг к автономной репликацсш. Определено соотношение олз1гомерных форм новой плазмиды. Обнаружено несколько классов кольцевых молекул дрош?:евой ДШ{ неизвестной природы. П р а к т и ч е с к о е з н а ч е н и е Изучение свойств экстрахромосомной рДЖ .дрожкей позволило сконструировать новый класс дрожсевых векторов для создания штаг.флов-продуцентов биологически активных веществ методат/Ш генной инженерии. Используя способность экстрахромосомной рДНК к автономной репликации и интеграции в хромосому,на ее основе были сконструггроваиы векторы, трансформирующие дром-ai с высокой частотой и в то же время стабильно поддерживаемые при делениях кяеток. Высокая степень гомологии р Е С pasHLD-: видов предполагает возмогшость использования ДЕ этих векторов для трапсшормащш иных, чем сахаромицеты, цромышленно-в£?л"1щх шта1\.мов дролжей. Апробация р а б о т ы Результаты работы были доложены на и рабочем совещан1Ш по програг.ше ттПлазмида" (Тарту, 1980), на У рабочем совещании по програг.ме пПлазмвда" (Краснодар, IS8I), на международном сришозиут-ле по молекулярной биологии дрошкей (Колд Спринг Харбор, С А I98I) и онзбликованы в Ш, соответствующих материалах этих совещаний. Объем д и с с е р т а ц и и Работа представлена на 106 страницах тлашинописного текста, содержит 6 таблщ и 12 риcyincoB. Список литератзфы вшиочает 135 нашленований публикаций на русском (7) и иностранных (128) языках.I Д О В И Е Т Т П Ч У ДШ ЭУКАРИОТ 0РГАШ13АЦИЮ Р Ж И МЮ И И Н Ю РЖОСОШОЙ ДНК (обзор литературы) Всем эукариотам свойственен единый план строения рДНК*, на фоне которого отдельные представители этого царства могут иметь те или другие особенности. Так, гены рРНК у эукариот всегда избыточны, за редкими исключениями сблокированы генетически и цитологически, синтез больших рРНК идет через стадию общего предшественника и т д Высшие эукариоты могут иметь специфические черты организации рДНК, связанные с особенностями их жизненных циклов, как например, амплификацию рДНК. Низшие эукариоты дрожжи, как будет показано ниже, имея типичную эукариотическую организацию рДНК, проявляют в примитивной форме некоторые специфические черты организации, свойственные высшим эукариотам. I I Молекулярная организация рДНК I.I.I. И з б ы т о ч н о с т ь класса рРНК-* 25S, 18S, 5,8S и г е н о в рРНК. Четыре 5S в эквимолярном соотношении входящие в состав рибосом, вместе составляют преобладающую часть клеточной РНК. Каждое клеточное деление должно сопровождаться удвоением количества рРНК. Важнейшим приспособлением, обеспечивающим интенсивный синтез рРНК, является избыточность генов рРНК. Число генов рРНК в гаплоидном геноме дрожжей-сахаромицетов было определено методом насыщающей гибридизации. Определенное количество денатурированной дрожжевой ДНК смешивали с заведомым избытком меченой радиоактивным изотопом рРНК, и инкубировали смесь в условиях, благоцриятных для образования гибридов, после Сокращения рРНК рибосомная РНК; рДНК рибосомная ДНК, гены, кодирующие рРНК; тРНК транспортная РН1{.чего определяли радиоактивность гибридных молекул. При избытке рРНК все комплементарные ей участки Д вступают в гибридизацию. Ш Зная содержание Д К в гаплоидном геноме, размер структурного Н гена рРНК (он такой же, как и размер самой РНК) и процент ДНК, вошедшей в гибриды, можно рассчитать число генов рРБК. Оно оказалось равным 100-140 для различных штаммов дрожжей (39,98,104) (О штамгловых различиях количества рДНК на гаплоидный геном см. ниже). Избыточность генов рРНК свойственна всем эукариотам. Как правило, избыточность рДНК коррелирует положительно с размером гаплоидного генома. У дрозофилы доза генов рРНК равна 250 (116), у ксенопуса 450 (12). 1.1.2. рДНК т я ж е л а я вой фракция дрожжеДНК. Д К дрожжей-сахаромицетов состоит из трех фракций, Н различающихся по плавучей плотности в градиенте CsCi Кроме основного корлпонента, ы ,плотностью 1,699 г/см, представляющего хромосомную ДНК, присутствует два саттелитных компонента; /3 с плотностью 1,683 г/см, и I плотностью 1,705 г/см (28,72,112). -ДНК имеет митохондриальное происхождение (120). I -ДНК количественно содержит гены всех четырех рРНК, как это было показано по гибридизации (62); и, кроме того, возможно некоторые из генов тРНК. -ДНК составляет от 7 до 20 всей клеточной ДНК, Содержание }j -ДНК в том или ином штамме дрожжей пропорционально дозе генов рРНК в этом же штамме, определенной по насыщающей гибридизации с рРНК; таким образом, дозу генов рРНК можно определять не только по гибридизации,но и по количеству I -саттелита в препарате Д К (85), Н Препаративное получение -ДНК в нейтральных градиентах Csci затруднено из-за слабого разрешения полос, поэтому был предложен ряд методов, усиливающих

Заключение диссертации по теме «Биохимия», Гришин, Анатолий Викторович

I . Часть повторяющихся генов рибосомных РНК дрожжей может находиться в экстрахромосомном состоянии.2. Экстрахромосомная рибосомная ДНК у дрожжей существует в виде кольцевых ковалентно-замкнутых молекул с контурной длиной, равной или кратной 3 гшм.3 . Экстрахромосомная рибосомная ДНК, или 3 мкм ДНК. идентична по структуре с хромосо1Шой рибосоиной Ц-. 3 мкм ДНК представлена в клетке двумя формами молекул, отличающихся наличием или отсутствием одного из участков узнавания эндонуклеазой рестрикции

5. Кольцевые молекулы 3 мкм ДНК способны к автономной репликации.6. 3 1ЛКМ ДЕК выделяется совместно с фракцией цитоплазматических мембран. 7. На основе 3 гшм ДШ создана гибридная плазмида, сочетающая свойства высокой частоты трансфор^^ации и эффективной интеграции в дрожжевую хромосотлу. Автор выражает признательность В.Л.Ларионову за руководство работой и MHOsecTBO критических замечаний к рукописи, Ю.П.Зерову за постоянную поддержку работы и ее материальное обеспечение, и кроме того, ряд ценных советов по проведению экспериментов, М.Н.Трауготт за помощь в электронной микроскопии, А.А.Янулайтису за предоставление ферментов и К.Г.Скрябину за предоставление плазмвды pYrIA3.

Список литературы диссертационного исследования кандидат биологических наук Гришин, Анатолий Викторович, 1983 год

1. Джйлеспи Д. Получение и обнаружение гибридных комплексов ДНК-РНК. Б к н Методы исследования нуклеиновых кислот. Р е д А.Н.Белозерский.- М.:Шр, 1970, с. 147-170.

2. Инге-Вечтомов Г. Идентификация некоторых групп сцепления у Петергофских генетическр1х линий дрожлсей,- Генетика, I97I, т.7, C.II3-I2I. 3 Корнберг А. Синтез ДНК,- Ш,:Шр, 1977.- 359 с. 4 Ларионов Б.Л., Парсаданян А.Ш., Гришин А.В., Скрябин К.Г., Баев А. А. Анализ 2 шм ДНК штаммов дрояжей-сахаромицетов разного происхоздения. Генетика, 1980, т 16, с.1933-1941,

3. Лобашов М.Е. Генетика: Учеб. пособие для университетов.Л.:Ленингр..ун-т, 1967,- 751 с.

4. Шллер Дж. Эксперименты в молекулярной генетике.- М, :№р, 1 9 7 6 436 с.

5. Уотсон Д>к. Молекзшярная биология г е н а М. :Шр, 1 9 8 0 573 с.

6. Atwood К.С. Some aspects of the "ЪоЪЪей" ргоЪ1ет in brosopMla. Genetics(suppl.), 1969, v.61, p.319-387.

7. Beggs J.D. Transformation of yeast bj a replicating hybrid plasmid. -nature, 1978, T.S75, p.104-108. 10,Bell a.I., L.J.DeGennaro, B.H.Gelfand, R.J.Bishop, P.Valenzuela, Y/.J.Ruttsr. RiЪosomal R M genes of Saccharomyoes cerevisiae. I.Physical map of the repeating unit and location of the regions coding for the 5S, 5,8S, I8S and 25S ribosomal ТШАз. J.Biol.Chem,, 1977, v.25£, p.104-108.

8. Blanc H., Gerljaud C Slonimsbi P.P., Guerineau M. Stable yeast transformation v/ith chimaeric plasmid using a 2um circular DHA-less strain as a recipient. Mol.Gen.Genet., 1979, v.I76, p.335-344.

9. Botchan p., R.H.Reeder, I.B.David. Restriction analysis of the nontranscrited spacers of Xenopus laevis ribosomal DM., Cell, 1977, v.II, p599-607.

10. Boyer H.W., Roulland-Dussoux Б. A complementation analysis of the restriction and modification of ЪШ. inE.coli. J.Mol.Biol., V.4I, 1969, p.459-472.

13. Bush H., K.Smetana. THE MJCIEOLUS, H.Y., АсаД.Press, 1970, 626p.

14. Callan H.G. The organization of genetic units in chromosomes. J. Cell Sei., 1967, v.2, p.1-7.

15. Cameron J.R., Phillip sen P., R.V/.Davis. Analysis of chromoso-

18. Proc Hat.Acad.Sci, USA, 1972, v.69, p.2II0-2Il4.

19. Corneo G., Moore C D.R.Sanadi, L.I.Grossman, J.Marmur. Mitochondrial ЪШ in yeast and some mammalian species, Science, 1966, т,151, p.687-689.

20. Cramer J.H., F.W.Farelly, J.T.Bamitz, R.H.Rovmd, Restriction endonuclease analysis of rihosomal DHA from Saccharomyces cerevisiae. Mol,Gen,Genet., 1976, T,I48, p,233-241,

21. Cramer J.H., Bhargava M.M., Halvorson H.O. Isolation and

22. Cramer J.H., F.Y/.Farelly, J.T.Barnitz, R.H.Ro-md. Construction and restriction endonuclease mapping of hyЪrid plasmids containing Saccharomyces cerevisiae ritosomal DM.. Ivlol.Gen.Genet., 1977, Y.I5I, p.889-244.

23. Cryer D.R., R.Eccleshall, J.Marmnir. Isolation of yeast 1)Ш, Meth.Cell Biol., 1975, v.12, p.39-44,

24. David I.В., D,D.Bro\ra, R.H.Reeder. Composition and structure of chromosomal and amplified ribosomal DHA. of Xenopus laevis. J.Mol.Biol., 1970, T.5I, p.341-360.

25. Edelman J.M., J.A.Gaily. Gene conversion as a mechanism for rectification of the reiterated seguences. J.Cell Sci,, 1976, V.8, p.962-972.

26. Davis R.V/., M.Simon, U.Davidson. Electron microscope heteroduplez methods for mapping regions of Ъазе sequence homology in nucleic acids. Meth.Enzymol., I97I, v.21, p.4l4-428. 36. EngЪergP., J.Anderson, V.Leick, J.Collins. Free ritosomal D M molecules from Tetrachymena pyriformis GL are giaлt palindromes, J.Mol.Biol., 1976, V.I04, p.445-470.

27. Ferguson J. Quantitative electron microscopy of nucleic acids. PhD thesis, H.Y., 1980, 9Ip.

28. Finlcelstein D.B. J.Blamire, J.Marmur, bocation of rihosomal Rl cistrons in yeast. nature Hev; Biol., 1972, v.240, p.279-281. 39. FuJcuhara H. Informational role of mitochondrial DHA studied by hybridization with dufferent classes of ША in yeast. Proc.Hat.Acad.Sci.USA, 1967, v.58, p.I065-I072.

29. GilhertW., D.Dressier. DHA replication: the rolling circle model. Cold Spring Harh.Sympos.Quant .Biol., 1968, v.33, p.473484.

30. Goldberg S., T.B./Dyen, J.M.Idriss, H,O.Halvorson. Use of diDmic straiiis to study the arrangement of ribosomal cistrons in a,ccharomyces cerevisiae, Mol.Gen.Genet., 1972, v.116, p.139-157.

31. Graziani F., R.Caizzi, S.Gargano, Circular rihosomal DHA duing rihosomal magnification in Drosophila melanogaster. J.Mol.Biol., 1977, VII2, p.49-63.

32. Guerineau M., Grandchamp, C.Paoletti, P.Slonimski. Circu3r DHA of a yeast episome v/ith tv/o inverted repeats: structural aalysis by a restriction enzyme and electron microscopy. PrОС.Hat.Acad.Soi.USA, 1976, v.73, p.3030-3034.

33. Guerineau M., C.Grandchamp, C.Paoletti, P.Slonimski. Characsrization of a new class of circular DHA in yeast. Biophis.Biochim,Acta, I97I, v.42, p.550-561.

34. Halvorson H.O., Б.В.КаЪаок. The reutmuancy of rihosomal RHA. jenes in yeast. Exp.Cell Res., 1969, v.56, p.239-242.

35. Hicks J.B., A.Hinnen, G.R.FinJc. Properties of yeast transforaation. Cold Spring Harh.Sympos. Quant .Biol.,1979, v.43, p.I305-I3I3.

36. Hollenherg C.P., A.Degelmaim, B.Kusterman-Kuhn, H.D.Royer. Jharacterization of 2um DHA of Saccharomyces cerevisiae by restriction analysis and integration into an Escherichia coli plasmid. Proc.Uat.Acad.Sci.USA, 1976, v.73, p.2072-2076.

37. Hollenherg C.P., P.Borst, E.P.J.Van Bruggen. Mitochondrial )HA. Y. A 25 щц closed circular duplex B I in wild type yeast lA aitochondria. Biophis.Biochin.Acta, 1970, т.209, p.1-9.

38. Hourcade В., D.BRessler, J.Wolfson. The nucleolus and the ollimg circle. r Cold Spring Harh.Sympos.Quant.Biol., 1974, v.38, p.5137-5146. 55. НиЪегтап J.A., A.D.Riggs. On the mechanism of D M replicatii in mammalian chromosomes. n J.Mol.Biol., 1968, T.32, p.327-341.

39. Humphreus G.O., C.A.Willshaw, E.S.Anderson. A simple method or preparation of large quantities of pure plasmid DHA. Biophis.Biochim.Acta, 1975, v.383, p.457-463.

40. Jasvinski S.M., G.M.Edelman. Replication in ritro of the 2um I A plasmid of yeast. T Proc.Hat.Acad.Sci.USA., 1979, т.76, p.I223-I227.

41. KabaclcD.B., H.O.Halvorson. Magnification of genes coding or rihosomal RKA in Saccharomyces cerevisiae. Proc.Hat.Acad.Sci.USA, 1977, v.74, p.II77-II80.

42. Earijord 0., T.B.jDyen. Study of a haploid yeast strain with n unusually high rDlZA content. II. Fractionation of the DHA in repa rative Ag*"/Cs2S04 density gradients. Biophis. Biochim. Acta, 1975, v.383, p.255-265.

43. Kirlanan H.H. E.M.Southm. Clustering a nd interspersion Ъу ength variants of DHA for rihosomal RHA. Fed.Proc, 1978, v.37, p.1500.

44. Klein H.L., T.D.Petes. Intrachromosomal gene conversion in east. nature, I981, v.289, p.144-148.

45. Kramer R.A., J.R.Cameron, R.Y/.Davis. Isolation of hacteriophae lamЪda containing yeast rihosomal. RHA genes: screening Ъу in itu hyhridization to plaques. Cell, 1977, V.8, p.227-232.

46. Kriegsteln H.J., D.C.Hogness. Mechanism of DHA replication 1 Drosophila chromosomes: structure of replication forks and eviзпсе for bidirectionality, Proc.Hat.Acad.Sci.USA, 1974, v.71, p.135-139.

47. Molenaar I, Y/.V/.S.Smitt, J.M.Vlak, T.H.RoziJn. nucleolar ftmtion of the dense crescent in yeast nucleus. Exp.Cell Res., 1973, v.80, p.313-321.

50. Mortimer R.K., D.C.Hawthorne. Yeast genetics. In: The yeasts, I.M.Rose and J.S.Harrison, eds, 1968, London, Acad .Press, Y I ?.286-460.

51. Moustacchi E., D.H.Williamson. Physiological variations in satellite components of yeast ЪШ detected hy density gradient cen;rifugation, Biochem.Biophys.Res.Commmi., 1966, т.23, p.56-61.

52. Hath K,, A.P.Bollon. Generation of discrete yeast DHA. fraglents Ъу endonaclease RI. Hatxire, 1975, т.257, p.155-157.

53. Hath K., A.P.Bollon. Organization of yeast rihosomal BM. gene sluster via cloning and restriction analysis. J.Biol.Chem., 1977, v.252, p.6562-6571.

54. Aarstad A., T.B.jOyen. On the distrihution of 5S RHA cistrons n the genome of Saccharomyces cerevisiae. FilBS Lett., 1975, т.51, p.227-231.

55. Homnra M. 5S RHA derives from a common rihosomal RHA. precuror in Escherichia coli. Cell, 1976, V.9, p.633-639. 84. 0yen T.B. Chromosome I as a possible site for some rRHA cisrons in Saccharomyces cerevisiae. lEBSLett., 1973, v.30, p.53-56.

56. Petes T.D. Teast ribosomal DHA genes are located on chromoome XII. Proc.nat.Acad.Sci.USA, 1979, v.76, p.410-414.

57. Petes T.D. Unequal meiotic recomhination within ays of yeast rihosomal DHA genes. Cell, 1980, T.I9, p.765-774.

58. Petes T.D., T.J.Zamh. Characterization of function fragments 1 Saccharomyces. In: The molecular hiology of yeast. Cold Spring irhor ЬаЪoratory, И.У, 1979, p.173.

60. Ritossa F.l. Unstahle redundancy of genes for rihosomal DITA. Proc. Hat.Acad,Sci.USA, 1968, v.60, p,509-516.

61. Ritossa P.M. Procedure for magnification of lethal deletions genes for rihosomal RlIA. f nature ITew Biol., 1972, v.204, p.I09-III.

62. Ritossa F.M. Crossingover tetv/een X and Y chromosomes during ihosomal mik magnification in Brosophila melanogaster. Proc. Hat.Acad.Sсi.USA, 1973, v.70, p.I950-I954. 103. RuЪin G.M., J.E.Sulston. Physical linbage of the 5S cistrons о the I8S and 28S rihosomal RITA cistrons in Saccharomyces ceroviiae. J.Mol.iol., 1973, v.79, p.521-530.

63. Schv/eizer Е. С .MacKeshnie, E.O.Halvorson. The redundancy of ihosomal and transfer RITA genes in Sac char omyces cerevisiae. J.MoLBiol., 1969, T.40, p.26I-E77.

64. Seligy V.b., A.P.James. Multiplicity and distrihution of DITA cistrons among chromosome I and VII aneuploids of Saccharomyes cerevisiae. Exp.Cell Res., 1977, v.105, p.63-7E.

65. Sharp P.A., B.Sugden, J.SaлlЪroo]c. Detection of tv/o restrictin endonuclease activities in Haemophilus parainfluenzae using anaytical agarose ethidium hromide electrophoresis. Biochemistry, 1973, v.IE, p.3055-3063.

66. Sinclair J.H., B.J.Stevens, P.Sanghavi, M.RaЪinovitz. Mitocondrial satellite and circular DITA filaments in yeast. Science, 1967, v.156, p.IE34-IE4E.

67. Slcryahin K.Gr. Maxam A.M. T.D.Petes, L.M.Hereford. Location f the 5,8S r l A gene of Saccharomyces cerevisiar. Rl. J.Bacterid., 1978, v.134, p.306-309.

68. Smith G-.P, Unegual crossover and the evolution of multigene amilies. Cold Spring НагЪ.Зутроз.Quant.Biol., 1974, v.38, p.507-513.

69. Southern E.M. Detection of specific sequences among DITA ragments separated Ъу gel electrophoresis. J.Mol.Biol., 1975, V.98, p.503-517.

70. Spear B.B. Isolation and mapping of the rRHA. genes in the acronucleus of Oxytrichia fallax. Ghromosoma, 1980, v.77, p.I93-E0S. IIS. Stevens B.J., E.Moustacchi. Satellite ADIT gamma et circles orsadee a petite taille chez la levure Saccharomyces cerevisiae. Exp.Cell Res., I97I, v.64, p.S59-S66.

72. Tartof K.D., R.P.Perry. The 5S RHA genes of Drosophila melanogaster, J.Mol.Biol., 1970, Y.5I, p.171-183.

73. Tartof K.D., Unequal mitotic sister chromatid exchange as the mechanism of rihosomal RHA gene magnification. Proo.lTat.Acad.Sci.USA, 1974, v.71, p.I272-I276.

74. Tartof K.D. Unequal mitotic sister chromatid exchange and disproportionaJ. replication as mechanisms regulating rihosomal ЪШ gene ahundancy. Cold Spring Harh.Sympos.Quant .Biol., 1974, v.38, p.49I-500.

75. Surges R., J.Jendrisak. A procedure for the rapid, large scale purification of Escherichia coli DM-dependent RHA. polymerase imrolving Polymin P precipitation and DKA-cellulose. Biochemistry, 1975, т.14, p.4634-4638. 154. basov/ska J., P.P.Slonimski. Electron microscopy analysis of circular repetitive mitochondrial ШШ molecules from genetically characterized rho" mutants of Saccharomyces oerevisiae. Mol.Gen.Genet., 1977, v.146, p.61-78.

77. Wellauer Р.К., R.H.Reeder, I.B.DaTid, D.D.Brov/n. The arrangement and length heterigeneity in repeating nnits of amplified and chromosomal riЪosomal D M from Xenopus laevis. J.Mol.Biol., 1976, v.I05, p.487-505.

78. Walker Р.М.Б. Repetitive D M in higher organisms. In: Progr, Biophys. and Mol.Biol., I97I, v.23, p.145-190.

79. Wellauer P.K., I.B.Darid, K.D.Tartof. Z and Y chromosomal rihosomal D M of Drosophila: comparison of spacers and insertions. Cell, 1978, V.I4, p.269-278.

80. Procunier J.D., Tartof K.D. A genetic locus having trans m d contiguous cis functions that control the disproportionate replication of rihosomal R M genes in Drosophila melanogaster. Genetics, 1978, v.88, p.67-78.

81. Federoff 2J.V. On spacers. Cell, 1979, V.I6, p.697-710.